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Helminths, Nutrition and Allergy: epidemiological associations in Cuban families and control strategies,
2014-2016. View project
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Cultivo y crecimiento
de los microorganismos
INTRODUCCIN
Se denomina cultivo al proceso de propagar los microorganismos, proporcionndoles
las condiciones ambientales adecuadas.
Los microorganismos en fase de crecimiento realizan rplicas de s mismos y requieren
de los elementos que se encuentran en su composicin qumica. Se le deben brindar los
elementos nutritivos en una forma accesible desde el punto de vista metablico. Adems, los
microorganismos requieren energa metablica con el objetivo de sintetizar macromolculas
y conservar los gradientes qumicos esenciales a travs de sus membranas.
Durante el crecimiento se deben regular los factores nutricionales (carbono, nitrgeno,
azufre y fsforo, elementos trazas y vitaminas) y los factores fsicos (pH, temperatura, oxge-
no, humedad, presin hidrosttica, presin osmtica y radiacin).
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Microbiologa y Parasitologa Mdicas
NUTRICIN
La nutricin es la provisin de nutrientes para el crecimiento de un organismo. Los
nutrientes de los medios de cultivo deben contener todos los elementos necesarios para la
sntesis biolgica de los microorganismos e incluyen carbono, nitrgeno, azufre, fsforo,
elementos trazas y vitaminas.
FACTORES NUTRICIONALES
FUENTE DE CARBONO
La mayora de las bacterias utilizan compuestos de carbono como fuente de energa y
otras, para la sntesis de elementos celulares. Los organismos fotosintticos reducen el
dixido de carbono (CO2) a glucosa y otras molculas orgnicas. Los organismos auttrofos
emplean nutrientes completamente inorgnicos; mientras que los hetertrofos requieren
nutrientes orgnicos. Ambos organismos, auttrofos y hetertrofos, obtienen la energa a
partir de la glucosa por gliclisis, fermentacin y el ciclo de Krebs. Ellos, adems, sintetizan
algunos componentes celulares a partir de intermediarios formados por medio de estas vas.
FUENTE DE NITRGENO
Todos los organismos, incluyendo los microorganismos, necesitan nitrgeno para sin-
tetizar enzimas, protenas y cidos nucleicos. Algunos microorganismos obtienen el nitrge-
no a partir de fuentes inorgnicas y otros adquieren la energa mediante el metabolismo de
sustancias que contienen nitrgeno inorgnico. Los procesos por los cuales las protenas y
los cidos nucleicos son sintetizados, estn directamente relacionados con la informacin
gentica contenida en la clula. El producto final de todas las vas de asimilacin del nitrge-
no es la forma ms reducida del elemento, el ion amonio (NH4+).
Muchos microorganismos poseen capacidad para asimilar el nitrato (NO3) y el nitrito
(NO2) de manera reductiva al convertir a estos iones en amonaco (NH3). Estas vas de
asimilacin difieren de las vas empleadas para la desasimilacin de nitrato y nitrito. Emplean
las vas desasimilatorias los microorganismos que recurren a los iones como aceptores
finales de electrones en la respiracin; este proceso se llama desnitrificacin y su producto
es el gas nitrgeno (N2) que vuelve a la atmsfera.
La capacidad para asimilar N2 de manera reductiva por medio del NH3 se nombra fijacin
del nitrgeno, y es una propiedad nica de los procariotas, siendo pocas las bacterias que
poseen esta capacidad metablica. El proceso requiere gran cantidad de energa metablica
y se inactiva con facilidad por accin del oxgeno.
La mayor parte de los microorganismos pueden recurrir al NH4+ como nica fuente de
nitrgeno, y muchos otros poseen capacidad para producir este ion a partir de las aminas
(R- NH2).
AZUFRE Y FSFORO
Adems del carbono y el nitrgeno, los microorganismos necesitan un suministro de
ciertos minerales, especialmente azufre y fsforo, los cuales son componentes celulares
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Cultivo y crecimiento de los microorganismos
importantes. Ellos obtienen el azufre a partir de las sales inorgnicas de sulfato y de los
aminocidos que contienen azufre, y lo utilizan en la elaboracin de protenas, coenzimas y
otros componentes celulares. El fsforo es adquirido, principalmente, mediante iones fosfato
inorgnico (PO43) y lo emplean para sintetizar ATP, fosfolpidos y cidos nucleicos.
ELEMENTOS TRAZAS
Muchos microorganismos requieren una variedad de elementos trazas, usualmente en la
forma de iones. Todos los organismos necesitan cierta cantidad de sodio y cloro, y los
halfilos lo requieren en grandes cantidades. Potasio, zinc y manganeso son usados para
activar ciertas enzimas. El cobalto es necesario a los organismos que sintetizan vitamina B12.
El hierro es importante para la sntesis de compuestos que contienen el ncleo heme y para
ciertas enzimas. Las bacterias grampositivas requieren calcio para la sntesis de las paredes
celulares y los organismos formadores de esporas, para la sntesis de las paredes de la
espora.
VITAMINAS
Las vitaminas necesarias para algunos microorganismos incluyen inositol, cido flico,
vitamina B12 y vitamina K. Los microorganismos patgenos humanos requieren a menudo
una variedad de vitaminas y por esta razn son capaces de crecer solamente cuando pueden
obtener esas sustancias a partir del organismo hospedero. El desarrollo de tales organismos
en el laboratorio necesita un medio complejo el cual contenga todos los nutrientes que
normalmente obtiene de sus hospederos.
FACTORES NUTRICIONALES
En las pginas anteriores se describieron los nutrientes necesarios para el cultivo de los
microorganismos.
Para realizar estudios sobre metabolismo microbiano, por lo general es necesario prepa-
rar medios completamente sintticos en los cuales las caractersticas y la concentracin de
cada ingrediente sean exactamente conocidas.
La mayora de los microorganismos de vida libre crecen bien en extracto de levaduras,
mientras que las formas parsitas pueden requerir sustancias especiales que se encuentran
nicamente en la sangre o en extractos de tejidos animales.
Para muchos organismos, un solo compuesto (como un aminocido) puede servir como
fuente de energa, de carbono y de nitrgeno; otros requieren un compuesto diferente para
cada una de ellas.
FACTORES FSICOS
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Microbiologa y Parasitologa Mdicas
Temperatura
La mayora de las bacterias se desarrollan a un rango de temperatura por encima de 30 C,
pero las temperaturas mnimas y mximas varan considerablemente para las diferentes espe-
cies. Las bacterias pueden ser clasificadas, de acuerdo con el rango de temperatura al cual se
desarrollan, en psicrfilas, mesfilas y termfilas; y a su vez subclasificadas como obligadas
o facultativas. Obligada significa que el organismo debe tener las condiciones ambientales
especficas, y facultativa que el organismo es capaz de tolerar las condiciones ambientales,
pero puede desarrollarse, adems, en otro ambiente.
Las bacterias psicrfilas se desarrollan mejor entre 15 y 20 C, y pueden ser subdividi-
das en psicrfilas obligadas cuando no crecen por encima de 20 C y psicrfilas facultativas
cuando son capaces de crecer por debajo y por encima de 20 C.
Las bacterias mesfilas incluyen a la mayora de las bacterias y se desarrollan en un
rango de temperatura entre 30 y 37 C. Las bacterias patgenas al hombre estn incluidas en
esta categora y la mayora de ellas crecen mejor a una temperatura cercana al cuerpo humano
(37 C).
Las bacterias termfilas se desarrollan mejor a temperaturas entre 50 y 60 C.
Concentracin de oxgeno
Las bacterias, especialmente las hetertrofas, pueden ser divididas en aerobias, que
requieren oxgeno para crecer, y anaerobias, las cuales no lo requieren. Los microorganismos
aerobios obligados, tales como Pseudomonas, que causa muchas infecciones adquiridas en
el hospital, se desarrollan en presencia de oxgeno libre; mientras que los anaerobios obliga-
dos, tales como Bacteroides, mueren en presencia de oxgeno libre. Entre estos extremos se
encuentran los microorganismos microaeroflicos que se desarrollan mejor en presencia de
una pequea cantidad de oxgeno libre. Los microorganismos anaerobios facultativos son
capaces de desarrollarse en ausencia y en presencia de oxgeno. Bacillus y Staphylococcus
son anaerobios facultativos y se encuentran en el tracto intestinal y urinario donde slo est
disponible una pequea cantidad de oxgeno.
Humedad
Generalmente todas las clulas con un metabolismo activo requieren agua del ambiente.
A diferencia de los organismos superiores, los organismos unicelulares estn expuestos
directamente a su ambiente. La mayora de las clulas vegetativas slo pueden vivir pocas
horas sin humedad; slo las esporas y los organismos formadores de esporas pueden existir
en un ambiente seco.
Presin hidrosttica
Las bacterias que viven a altas presiones mueren si son mantenidas en el laboratorio
pocas horas en condiciones de presin atmosfrica estndar.
Presin osmtica
La mayora de las bacterias pueden tolerar un rango amplio de concentraciones de
sustancias disueltas. Su membrana celular contiene un sistema enzimtico llamado permeasas
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Cultivo y crecimiento de los microorganismos
Radiacin
La energa radiante, particularmente la luz ultravioleta, puede causar mutaciones y even-
tualmente ocasionar la muerte de los organismos. Sin embargo, algunos microorganismos
tienen pigmentos que los protegen de la radiacin y ayudan a prevenir el dao del ADN.
Otros poseen sistemas enzimticos que pueden reparar algunos tipos de daos del ADN.
MTODOS DE CULTIVO
Debido al pequeo tamao de los microorganismos, la informacin que puede obtenerse
acerca de sus propiedades a partir del examen de los individuos es limitada; en la mayora de
los casos se estudian poblaciones que contienen millones o miles de millones de individuos.
Estas poblaciones se obtienen al hacer crecer los microorganismos bajo condiciones ms o
menos bien definidas, como cultivos.
Un cultivo que contiene solamente una clase de microorganismo se conoce como culti-
vo puro; el que comprende ms de una clase de microorganismo se denomina cultivo mixto.
En el estudio de los microorganismos es importante tener presente dos aspectos funda-
mentales: el cultivo, procedimiento mediante el cual se promueve el crecimiento de los
microorganismos al brindarles las condiciones ambientales adecuadas, y el aislamiento de
un organismo en cultivo puro, mediante la aplicacin de tcnicas de laboratorio para separar-
lo de las poblaciones mixtas.
Estas dos operaciones son bsicamente iguales para el estudio de los virus, las bacte-
rias, los hongos, los helmintos y los protozoos.
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CULTIVO DE VIRUS
Muchos virus pueden desarrollarse en cultivos celulares o en huevos frtiles en condi-
ciones estrictamente controladas. La disponibilidad de clulas desarrolladas in vitro ha
facilitado la identificacin y el cultivo de virus recin aislados y la caracterizacin de los que
ya se conocan. Hay tres tipos bsicos de cultivo celular:
El tipo de cultivo celular que se use para cultivar virus depende de la sensibilidad de las
clulas a un virus particular.
CULTIVO DE HONGOS
CRECIMIENTO MICROBIANO
Se define como crecimiento al aumento ordenado de todos los componentes qumicos
de un organismo. El aumento de masa (tamao) no resulta un crecimiento verdadero, ya que
las clulas pueden estar incrementando sus reservas, captando agua, etctera.
Las bacterias que se adaptan a un medio adecuado se encuentran en un estado de
crecimiento equilibrado donde la duplicacin de la biomasa representa la duplicacin de
todas las dems propiedades medibles como son el ARN, ADN, protenas y el agua intracelular.
La existencia de este crecimiento equilibrado es de gran ayuda a la hora de medir el crecimien-
to bacteriano pues, como todos los componentes poseen la misma velocidad de crecimiento,
basta medir uno solo de ellos para determinar la misma.
La multiplicacin celular es una consecuencia del crecimiento, esta conduce al aumento
en nmero de individuos originando una poblacin o cultivo.
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Cultivo y crecimiento de los microorganismos
Por lo que:
= constante de velocidad de crecimiento
Pero tambin:
dN
N= donde:
dt N = # de clulas mL
dX
X= donde:
dt X = masa celular mL
dZ
Z= donde:
dt Z = cantidad de cualquier componente celular mL
CURVA DE CRECIMIENTO
# de clulas
Xo
V
VI
IV
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CRECIMIENTO SINCRNICO
Hasta ahora se ha descrito el modelo de crecimiento poblacional. Para lograr informa-
cin sobre el crecimiento de bacterias individuales debe recurrirse a los cultivos sincrnicos,
clulas que se encuentren todas en la misma etapa del ciclo de multiplicacin. Estos cultivos
pueden lograrse mediante tcnicas:
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Cultivo y crecimiento de los microorganismos
Aplicacin
1. Son una fuente constante de clulas en fase exponencial de crecimiento.
2. Permiten el crecimiento continuo con una concentracin muy baja del sustrato.
Esto ha permitido, entre otros, estudios tales como: la medida precisa de la frecuencia de
mutaciones en las bacterias, cambios evolutivos en las poblaciones bacterianas y cintica de
induccin de una enzima inducible a concentraciones muy bajas del inductor.
RESUMEN
El cultivo es el procedimiento mediante el cual se promueve el crecimiento de los
microorganismos, al proporcionarles las condiciones ambientales adecuadas: nutrientes,
pH, temperatura, aereacin, humedad, presin hidrosttica, presin osmtica y radiacin.
La provisin de nutrientes para el crecimiento de un organismo se denomina nutricin y
los nutrientes, de acuerdo con su papel en el metabolismo, se clasifican de la siguiente forma:
fuente de carbono, fuente de nitrgeno, azufre y fsforo, elementos trazas y vitaminas.
El crecimiento de los microorganismos puede estar influido por diferentes factores,
tanto nutricionales como fsicos. Adems, debe haber una fuente de energa que establezca
la fuerza motriz protnica y que permita la sntesis macromolecular. Los modos principales de
generar energa metablica son: fermentacin, respiracin y fotosntesis.
Para estudiar los microorganismos hay que tener presente dos aspectos fundamentales:
el cultivo y el aislamiento del organismo en cultivo puro. Ambos aspectos son bsicamente
iguales para el estudio de los virus, las bacterias, los hongos, los helmintos y los protozoos.
El crecimiento se describe como el aumento ordenado de todos los componentes qumi-
cos de un organismo, puede representarse mediante una expresin matemtica y se expresa
mediante una curva, la curva de crecimiento, que consta de los siguientes pasos:
Fase I Vc = 0
Fase II Vc creciente
Fase III Vc constante
Fase IV Vc decreciente
Fase V Vc = 0
Fase VI Vc negativa
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BIBLIOGRAFA
Creager JG, Black JG, Davison VE. Instructors Edition. Microbiology. Principles and Applications. USA:
Prentice-Hall Inc, 1990.
Frobischer M. Microbiologa. Madrid: Salvat Editores SA, 1969.
Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. Microbiologa mdica de Jawetz, Melnick y Adelberg. 15ta ed. Mxico
D.F.: Ed. El Manual Moderno, 1996.
Pelczar MJ, Reid RD. Microbiologa. Madrid: Ediciones del Castillo SA, 1966.
Prescoh LM, Harley JP, Klein DP. Microbiology. 2nd ed. USA: Wmc. Brown Publishers, 1993.
Stanier RY, Adelberg EA, Ingraham JL. Microbiologa. 4ta ed. Barcelona: Editorial Revert SA, 1984.
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