Cintica enzimtica y el efecto de la concentracin de sustrato y la

temperatura sobre la actividad cataltica

INTRODUCCIN
En la siguiente prctica se determin la actividad enzimtica y sus reacciones
al modificar la temperatura, pH, concentracin de sustratos entre otros.
Para llevar a cabo esta prctica tuvimos que conocer cierta informacin
importante.
Los enzimas son sustancias qumicas conocidas como catalizadores que
encuentran otra forma en que la reaccin ocurra, haciendo que la energa de
activacin necesaria, sea menor y alcanzable.
La cintica enzimtica es el estudio de la velocidad de reacciones catalizadas
enzimticamente.
La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima depende de
1. la concentracin de molculas de sustrato [S]
2. la temperatura
3. la presencia de inhibidores
4. pH del medio, que afecta a la conformacin (estructura espacial) de la
molcula enzimtica
La concentracin de sustrato determina la actividad enzimtica medida como
la velocidad de la catlisis enzimtica. Si la concentracin de la enzima se
mantiene saturada, la produccin de producto ser a una velocidad mxima.
(Valdivia, 2013)
Grfica Michaelis-Menten: Ecuacin Michaelis-Menten
Grfica Lineweaver-Burk: Ecuacin Lineweaver-Burk
Grfica Eadie-Hofstee: Ecuacin Eadie-Hofstee:
Grfica Hanes-Woolf: Ecuacin Hanes-Woolf

Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica

Vara al aumentar la temperatura de acuerdo a una tpica curva de actividad
enzimtica/temperatura.
Tal dependencia refleja un doble efecto de la temperatura: positivo a bajos
valores, debido al incremento general que experimenta la velocidad de
cualquier reaccin qumica al hacerlo la temperatura, y negativo a valores
altos, debido a la desnaturalizacin trmica del enzima. Esto es, la velocidad de
una reaccin enzimtica se incrementa al aumentar la temperatura dentro de
un determinado rango, alcanzando un valor mximo a la denominada
temperatura ptima. A valores superiores la actividad disminuye debido a que
el enzima, como cualquier otra protena, sufre procesos de desnaturalizacin y,
por lo tanto, de inactivacin.
Durante la fase de incremento de la velocidad, la relacin entre sta y la
temperatura viene determinada por la ecuacin de Arrhenius:
v = k e -Ea/RT ln v = ln k - Ea/RT
(UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA, 2006)
Otro parmetro que se utiliza para cuantificar el efecto de la temperatura es el
coeficiente de temperatura (Q10), que se define, para una temperatura dada
(p. ej. 25 C), como el factor de incremento de la velocidad de reaccin cuando
la temperatura se incrementa 10C.
(Q10)t = vt+10/vt

Efecto de la concentracin de sustrato en la actividad de la enzima

En las reacciones no catalizadas por enzimas la formacin de producto
depende linealmente de la concentracin de sustrato aadido. (fig. A)

Mientras que en las reacciones catalizadas por enzimas, generalmente se

obtiene una dependencia hiperblica de la velocidad respecto a la
concentracin de sustrato, distinguindose 3 partes distintas en la curva. (Fig.
B)
A bajas concentraciones de sustrato, la velocidad es proporcional a la
concentracin de sustrato, de tal manera que si se duplica la concentracin de
sustrato, se duplica la velocidad (reaccin de primer orden). La segunda parte
de la curva, a concentraciones intermedias de sustrato, la velocidad se
incrementa menos que en la primera parte con el incremento de la
concentracin, iniciando alrededor de la de la Vmax.
La ltima parte de la curva, a altas concentraciones de sustrato, la velocidad
es independiente de la concentracin de sustrato (reaccin de orden cero), as
la velocidad alcanzada es cercana a la mxima. (Departamento de Bioqumica
y Biologa Molecular, 2007)
Efecto del pH en la actividad enzimtica
La actividad de un enzima se ve afectada por el pH al cual se lleva a cabo la
reaccin. La curva actividad-pH puede ser diferente para cada tipo de enzima.
En el caso ms general la curva tiene forma de campana.
El valor de pH al cual la actividad es mxima se denomina pH ptimo; dicho pH
no tiene porqu coincidir con el pH intracelular. La relacin entre el pH y la
actividad depende del comportamiento cido-base del enzima y del propio
sustrato. Sustrato y enzima (centro activo) pueden contener grupos funcionales
cidos y bsicos, siendo su grado de disociacin dependiente del pH, lo que
determinar, entre otros aspectos, la conformacin de la protena, la capacidad
de unin del sustrato al centro activo del enzima (Km) y la capacidad de
transformacin del sustrato (kcat). Los estudios cinticos a diferentes valores
de pH nos proporcionan informacin sobre el mecanismo cataltico de los
enzimas y la naturaleza de los aminocidos ms directamente implicados en la
catlisis. (Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, 2007)
La inhibicin es la disminucin de la actividad enzimtica por algn agente
qumico, un ligando, a diferencia de la desnaturalizacin, que es el cese
permanente de la actividad enzimtica por un agente fsico o qumico.

Referencias
Comit asesor de publicaciones. Facultad de Medicina, UNAM. (2003). Ecuacin
de Michaelis-Menten. Mxico: UNAM.
Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular. (2007). Estudio cintico de
la actividad invertasa delevadura de panadera. Crdoba .
UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA. (2006). Manual de prcticas. Guadalajara: FB.
Valdivia, C. M. (2013). Cintica enzimatica. Facultad de Ciencias dep. de
Biologa.
corresponde a la concentracin de sustrato con la cual la velocidad de reaccin enzimtica
alcanza un valor igual a la mitad de la velocidad mxima.

En medios con condiciones definidas de pH y temperatura, la constante tiene un valor fijo para
cada enzima y sirve para caracterizarla.

describe como vara la velocidad de reaccin con la concentracin de

sustrato:

(2)

en donde: v0 es la velocidad inicial de la reaccin

Vmax es la velocidad mxima

Km es la constante de Michaelis y Menten=

S es la concentracin de sustrato
(Comit asesor de publicaciones. Facultad de Medicina, UNAM, 2003)