Se conoce que las vitaminas son de gran importancia para el adecuado
crecimiento y funcionamiento del metabolismo, en especial la vitamina A tiene distintos derivados que efectan mecanismos funcionales diferentes en el organismo: El retinol es una forma de transporte y un intermediario metablico. El retinal es un componente esencial necesario para la visin. El cido retinoico en su forma cis-trans y sus metabolitos polares ejercen efectos en la proliferacin y la diferenciacin de varios tejidos, adems, inhiben a un conjunto de promotores tumorales. Los steres retinilo son las formas de almacenamiento de esta vitamina. En su mayor parte estn representados por retinilpalmitato, pero tambin pueden hallarse retinilestearato, retiniloleato y otros. Se almacenan en hgado y en otros rganos que dependen de las funciones de la vitamina A como la retina, los testculos y los pulmones.
La DVA es causante de muchos problemas, entre ellos la ceguera; la FAO
(Food and Agriculture Organization) considera que hay alrededor de 14 millones de nios con deficiencia de vitamina A y que cada ao quedan ciegos hasta 500 000 nios, 60% de los cuales mueren pocos meses despus. Tambin su carencia es la principal causa de ceguera en personas mayores de 65 aos (Biesalski, H. y Grimm, P. 2007). La xeroftalma (C), un sntoma tpico de la deficiencia avanzada, se caracteriza por el cambio en la crnea a opaca y necrtica, si no se trata a tiempo este trastorno conduce a la ceguera (Figura 5). Adems pueden observarse cambios en la piel y en las membranas mucosas que provoca un aumento de la susceptibilidad a las infecciones, en especial en el aparato respiratorio. La Figura 5. Xeroftama. deficiencia tambin provoca una mayor sensibilidad a la diarrea y el sarampin. A nivel mundial, el alimento principal en la dieta es el arroz, este cereal es responsable del 20% de la fuente de energa alimenticia de la poblacin (Barata TS. 2005); por lo tanto es un alimento que se encuentra en investigaciones relacionadas con la mejora de su calidad nutricional ya que ste no contiene vitamina A o sus precursores inmediatos. El proyecto Arroz Dorado o Golden rice (GR) fue el resultado de una iniciativa de la Fundacin Rockefeller, esta iniciativa reuni a los profesores Ingo Potrykus (ETH Zurich) y Peter Beyer (Univ. de Freiburg), quien en colaboracin crearon el GR para ayudar a mitigar el problema de la deficiencia de vitamina A en el mundo (DVA). El objetivo principal fue expresar un alto contenido de carotenoides, que adems de ser precursores de la vitamina A tambin son compuestos antioxidantes y fotoprotectores. Este arroz contiene dos genes extras, el gen psy (phytoene synthase) proveniente de la planta narciso y otro fitoeno desaturasa (ctrl) de la bacteria Erwinia uredovora, al ser insertados en el arroz se produjeron granos amarillos con altos niveles de -caroteno (Figura 6), que es convertido en vitamina A en el organismo (Dos Santos, D. et al. 2012). La tecnologa utilizada se basa en el principio de que las plantas de arroz Figura 6. Comparacin sintetizan -caroteno en tejidos del arroz normal y el vegetativos, pero no en el grano, sin arroz dorado. embargo, la mayora de las enzimas de la ruta biosinttica estn presentes en el grano, por lo que la adicin de slo dos genes fue suficiente para reconstituir la va ya que stos realizan las cuatro etapas necesarias para la produccin de -caroteno y as se acumula en el endosperma (Figura 7). Figura 7. Composicin del grano de arroz.
Se puede observar la ruta de biosntesis de carotenoides, donde se
empieza con dos molculas de geranilgeranil pirofosfato (GGPP), se forma fitoeno por la fitoeno sintasa (PSY), luego -caroteno y licopeno, La ciclacin del licopeno lineal da como resultado - o -caroteno; estas reacciones son catalizadas por dos enzimas distintas llamadas licopeno - y -ciclasas, respectivamente. La fitoeno desaturasa (PDS) de las bacterias trabaja diferente a la PDS de las plantas; la primera puede introducir cuatro dobles enlaces dando licopeno rojo, mientras que las segundas utilizan dos desaturasas para producir este mismo compuesto, es decir, la fitoeno desaturasa (PDS) cataliza las dos primeras desaturaciones (de fitoeno a fitoflueno a -caroteno). Se han realizado varios prototipos con el fin de mejorar la produccin de - caroteno, el primero que se realiz fue pB19hcp (Figura 10), el cual contena los genes psy y crtI. Este prototipo del Golden Rice contena arriba de 1.6 g/g de catorenoides y contena el gen aph IV como marcador selectivo.
Figura 8. RutaFigura 9. Enzimas de
de biosntesis del narciso los que catalizan a GGPP y Licopeno; carotenoides, - y -caroteno y sus enzima de la bacteria derivados. Erwinia uredovora que cataliza a fitoeno. Figura 10. Prototipo del gen para Golden Rice. Las secuencias codificantes estn en color y las secuencias reguladoras en gris. Abreviaciones: aph, aminoglucsido- fosfotransferasa; crtI, caroteno-desaturase de Erwinia uredovora; Gt1p, promotor de glutelin1; LB/RB, izquierda/derecha secuencias frontera; nos!, nos-terminador; NpPSY, fitoeno sintasa de Narcissus pseudonarcissus; npt, neomicin-fosfotransferasa; tp, pptido de trnsito de ribulosa-bisfosfato barboxilasa de la subunidad pequea del guisante; 35S!, 35S-terminador; 35Sp, 35S-promotor del CaMV.
Al realizarse pruebas con otros psy de plantas, se identific un psy de maz
que aument sustancialmente la acumulacin de carotenoides (Figura 11). Se lleg a otra version del Golden Rice usando zmPSY (Figura 13), con ste se logr un incremento de carotenos, arriba de 37 mg/g. Esta mejora puede apreciarse en la Figura 14.
Figura 11. Histograma que muestra los colores
obtenidos de carotenoides de transformaciones con Arabidopsis thaliana (At), Daucus carota (Dc), Narcissus pseudonarcissus (Np), Zea mays (Zm), Capsicum annuum (Ca), Oryza sativa (Os) y Lycopersicon esculentum (Le). Figura 12. Colores del Golden Rice. (a) Arroz tipo salvaje; (b) GR1, expresa el pitoeno sintasa (PSY) del narciso con CRTI; (c) GR2 expresa el pitoeno sintasa del maz (zmPSY) con CRTI.
Figura 13. Prototipo del gen para Golden Rice con PSY del maz. Abrevaciones: ZmPSY, fitoeno sintasa del maz; ubi1, ubiquitin-promotor del maz.