Gua de prcticas de Microbiologa y Parasitologa Farmacia y Bioqumica - UPLA

PRCTICA N1:

BIOSEGURIDAD

I. OBJETIVOS.-
Conocer las Normas de Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiologa
Reconocer la importancia de la aplicacin permanente de la Bioseguridad en el trabajo de laboratorio

II. INTRODUCCIN.-
La Bioseguridad es el conjunto de todos aquellos mecanismos, medidas y protocolos que previenen y protegen al
trabajador, ambiente y al personal de su entorno ante cualquier tipo de peligro o riesgo para la salud. En el laboratorio de
Microbiologa el estudiante, docentes y dems personas que permanezcan en el siempre estarn frente a un riesgo
potencial de contraer algn tipo de infeccin, dao o injuria debido a la manipulacin de agentes infecciosos, reactivos y
equipos empleados en determinado trabajo. Es por ello que se hace imprescindible el conocimiento y sobre todo la
aplicacin de todas y cada una de las Normas de Bioseguridad, las cuales sin duda permitirn realizar cualquier tipo de
procedimiento disminuyendo sustancialmente los riesgos ya mencionados.

III. MATERIALES.-
Manual de Normas de Bioseguridad y Disposicin de Residuos Contaminantes

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Realizar lecturas previas acerca de las Normas de Bioseguridad en el laboratorio de Microbiologa, as como la
terminologa empleada en dicho contexto.
2. El docente mencionar las principales Normas de Bioseguridad a tener en cuenta.
3. Para el respectivo informe se anotarn las Normas de Bioseguridad, las cuales debern ponerse en prctica a lo largo
de todas las prcticas e laboratorio.

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PRCTICA N2:

RECONOCIMIENTO DE MATERIALES, INSTRUMENTOS Y EQUIPOS USADOS EN MICROBIOLOGA

I. OBJETIVOS.-
Reconocer los principales materiales, instrumentos y equipos usados en un laboratorio de Microbiologa
Adiestrarse en los criterios para su correcto empleo, limpieza y conservacin

II. INTRODUCCIN.-
Todo trabajo de laboratorio implica necesariamente el empleo de herramientas que ayuden a ejecutar los procedimientos
establecidos, as como tambin alcanzar de manera ptima los objetivos trazados. Ello determina fundamentalmente que
existan utensilios destinados para llevar a cabo tareas especficas como medicin de volmenes, pesado de masas,
calentamientos, esterilizaciones, incubaciones, etc. Por tanto, resulta muy necesario conocer cules son aquellos utensilios
que caen en la categora de materiales, cules en la categora de instrumentos y aquellos que son denominados equipos ya
que cada uno de ellos tiene diferentes condiciones de empleo, mantenimiento y limpieza. Por otro lado, las Normas de
Bioseguridad constituyen un conjunto de lineamientos que permiten garantizar la integridad del laboratorista, del personal de
su entorno y de la infraestructura que emplee.

III. MATERIALES.-
Materiales de Laboratorio
Instrumentos de Laboratorio
Equipos de Laboratorio

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Realizar lecturas previas acerca de los criterios y terminologa empleada en estas situaciones.
2. El docente describir de manera detallada las caractersticas de cada uno de los materiales, instrumentos y equipos
de uso en Microbiologa disponibles
3. Los alumnos graficarn o esquematizarn los materiales, instrumentos y equipos reconocidos, as como anotarn las
caractersticas de su correcto empleo, limpieza y conservacin
4. Para el respectivo informe se anotarn las Normas de Bioseguridad, las cuales debern ponerse en prctica a lo largo
de todas las prcticas e laboratorio.

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PRCTICA N3:

ASEPSIA, DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN

I. OBJETIVOS.-
Aplicar correctamente los procedimientos de asepsia, desinfeccin y esterilizacin.
Conocer y aplicar correctamente la terminologa aplicada.

II. INTRODUCCIN.-
El trabajo de laboratorio en microbiologa mdica implica fundamentalmente el aislamiento e identificacin del microbio
causante de alguna enfermedad, por lo tanto resulta imprescindible que se adopten las condiciones que limiten la
contaminacin por grmenes extraos o que puedan causar algn sesgo en los resultados. Los microbios indeseables
pueden provenir de la misma persona que manipula la muestra, del medio ambiente donde se trabaje o de los materiales
que se empleen para su anlisis; por lo que debern aplicarse correctamente los procedimientos de asepsia, desinfeccin y
esterilizacin adecuados.

III. MATERIALES.-
Placas petri
Pipetas
Tubos de ensayo
Matraces Erlenmeyer o balones de fondo plano
Papel Kraft
Algodn
Pabilo
Tijeras o cuchillas
Jabn antisptico
Alcohol yodado
Solucin de Fenol al 5%

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Realizar comentarios previos acerca de los criterios y terminologa empleada en estas situaciones.
2. Se seguirn los procedimientos explicados primero por el docente y luego realizados por los alumnos en grupos de
trabajo.
3. La asepsia se realizar mediante el correcto lavado de manos con jabn antisptico y complementando con alcohol
yodado.
4. La desinfeccin consistir en el uso de algodn y solucin de fenol al 5% para la limpieza de las mesas de trabajo.
5. Para la esterilizacin se proceder a la envoltura y acondicionado de los materiales de vidrio seleccionados, utilizando
para ello el algodn, papel Kraft y el pabilo; para luego emplear el horno o el Autoclave.

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PRCTICA N4:

MICROSCOPA

I. OBJETIVOS.-
Identificar las partes del microscopio ptico y relacionarlas con su correcto manejo
Realizar observaciones microscpicas en fresco

II. INTRODUCCIN.-
Uno de los objetivos fundamentales en microbiologa es la observacin de microorganismos; para ello es necesario conocer
y manipular correctamente cada una de las partes del microscopio ptico. El microscopio es un instrumento que consta
esencialmente de tres partes: mecnica, ptica y sistema de iluminacin y con el se pueden realizar dos tipos de
observaciones: en fresco y en seco.

III. MATERIALES.-
Microscopio ptico
Lminas portaobjeto y cubreobjeto
Asas bacteriolgicas
Goteros
Mecheros Bunsen
Agua estancada
Material de asepsia, desinfeccin y esterilizacin

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Proceder a identificar las partes del microscopio ptico:
a) Parte mecnica:
Pie o base.-
Botn de encendido
Regulador de intensidad luminosa
Cable de alimentacin
Asa o mango.-
Tornillo macromtrico
Tornillo micromtrico
Platina
Pinza
Charriot o Vernier
Diagragma
Condensador

b) Parte ptica:
Oculares.-
Objetivos
Objetivos en fresco (4, 10 y 40X)
Objetivo en seco (100X)

c) Sistema de iluminacin:
Lmpara (ubicada en el pie o base)
Condensador (ubicado en la platina)
Diafragma (ubicado en la platina)

2. Realizar observaciones en fresco de agua estancada, procediendo de la siguiente manera:

a) Con ayuda de un gotero coger una gota del agua estancada y depositarla en la parte central de una lmina
portaobjeto.
b) A continuacin cubrir con una laminilla (cubreobjeto) y observar al microscopio
c) Realizar las anotaciones y grficos de los elementos reconocidos: algas, protozoarios, etc.

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PRCTICA N5:

TCNICA DE COLORACIN GRAM

I. OBJETIVOS.-
Reconocer la importancia de las tcnicas de coloracin o tincin bacteriana
Realizar la coloracin de Gram
Identificar las caractersticas morfolgicas y tintoriales de las bacterias

II. INTRODUCCIN.-
La observacin de bacterias es un procedimiento importante para su posterior identificacin, en bacteriologa existen
diferentes procedimientos que imparten color a su estructura (cpsulas, paredes celulares, ADN, citoplasma, esporas,
flagelos, etc.); pero dos de ellos sobresalen por su mayor facilidad de realizacin y empleo: coloracin de Gram y de Ziehl-
Neelsen. La coloracin de Gram tie completamente toda la pared celular bacteriana y las clasifica en Gram positivas (azul
violeta) y Gram negativas (rosadas grosella).

III. MATERIALES.-
Microscopio ptico
Lminas portaobjeto
Asas bacteriolgicas
Hisopos estriles
Set de coloracin Gram
Mecheros Bunsen
Muestras de sarro dental, saliva y mucosa oral
Material de asepsia, desinfeccin y esterilizacin

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Realizar la correcta asepsia de los estudiantes y la desinfeccin de la mesa de trabajo.
2. Tomar las muestras de la cavidad oral (con hisopo o asa bacteriolgica) de sus compaeros de trabajo.
3. Realizar el procedimiento de coloracin Gram:
Extensin: mediante movimientos circulares sobre el tercio central de una lmina portaobjetos limpia, hasta que se
forme una pelcula uniforme y delgada.
Fijacin: Acercar la lmina al calor de la llama del mechero hasta que est totalmente seca.
Coloracin:
Cubrir con Hucker (Cristal violeta Violeta de genciana) 60 segundos
Lavar con agua
Cubrir con Lugol 60 segundos
Lavar con agua
Decolorar con Etanol acetona (50:50)
Lavar con agua
Cubrir con Safranina 30 segundos
Lavar con agua
Secar al calor del mechero
Observacin: Colocar en el microscopio y observar primero a menor aumento y finalmente con objetivo de
inmersin.
4. Hacer las observaciones de la morfologa y naturaleza tintorial de las bacterias presentes en la muestra
5. Proseguir de acuerdo al siguiente esquema de trabajo:

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ESQUEMA DE TRABAJO PARA REALIZAR EL PROCEDIMIENTO DE LA COLORACIN GRAM

8
1 4

Hucker (60 seg.)

Alcohol - acetona
Toma de muestra 12

5
9

Lavar Lavar

Extensin 6 10
Secar

Lugol (60 seg.) Safranina (30 seg.)

11
3
7

Lavar Lavar
Fijacin

Coloracin

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PRCTICA N6:

TCNICA DE COLORACIN ZIEHL-NEELSEN

I. OBJETIVOS.-
Reconocer la importancia de las tcnicas de coloracin o tincin bacteriana
Realizar la coloracin de Ziehl-Neelsen
Identificar las caractersticas morfolgicas y tintoriales de las bacterias

II. INTRODUCCIN.-
La observacin de bacterias es un procedimiento importante para su posterior identificacin, en bacteriologa existen
diferentes procedimientos que imparten color a su estructura (cpsulas, paredes celulares, ADN, citoplasma, esporas,
flagelos, etc.); pero dos de ellos sobresalen por su mayor facilidad de realizacin y empleo: coloracin de Gram y de Ziehl-
Neelsen.). La coloracin de Ziehl-Neelsen es empleada para visualizar aquellas bacterias con pared celular atpica, tales
como los bacilos alcohol-cido resistentes (BAAR), los cuales no se pueden reconocer con la tincin de Gram.

III. MATERIALES.-
Microscopio ptico
Lminas portaobjeto
Asas bacteriolgicas
Hisopos estriles
Set de coloracin Ziehl-Neelsen
Mecheros Bunsen
Muestras de sarro dental, saliva y mucosa oral
Material de asepsia, desinfeccin y esterilizacin

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Realizar la correcta asepsia de los estudiantes y la desinfeccin de la mesa de trabajo.
2. Tomar las muestras de la cavidad oral (con hisopo o asa bacteriolgica) de sus compaeros de trabajo.
3. Realizar el procedimiento de coloracin Ziehl-Neelsen:
Extensin: mediante movimientos circulares sobre el tercio central de una lmina portaobjetos limpia, hasta que se
forme una pelcula uniforme y delgada.
Fijacin: Acercar la lmina al calor de la llama del mechero hasta que est totalmente seca.
Coloracin:
Cubrir con Fucsina fenicada (Colorante de Ziehl)
Calentar (por debajo de la lmina) con un mechero de alcohol hasta que aparezca vapor (repetir 2 veces)
Lavar con agua
Decolorar con Alcohol etlico cido clorhdrico (97:3)
Lavar con agua
Cubrir con Azul de metileno 3 minutos
Lavar con agua
Secar al calor del mechero
Observacin: Colocar en el microscopio y observar primero a menor aumento y finalmente con objetivo de
inmersin.
4. Hacer las observaciones de la morfologa y naturaleza tintorial de las bacterias presentes en la muestra
5. Proseguir de acuerdo al siguiente esquema de trabajo:

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ESQUEMA DE TRABAJO PARA REALIZAR EL PROCEDIMIENTO DE LA COLORACIN ZIEHL-NEELSEN

7
1 4

Fucsina fenica
Toma de muestra Alcohol - cido
11

5
Lavar

2
Calentar 3 veces

Extensin 9

Secar

Azul de metileno (3 min.)

3
10
Lavar

Lavar
Fijacin

Coloracin

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PRCTICA N7:

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

I. OBJETIVOS.-
Conocer el fundamento, importancia y aplicaciones de los Medios de Cultivo
Preparar y esterilizar distintos tipos de Medios de Cultivo

II. INTRODUCCIN.-
Uno de los grandes objetivos que se persigue en todo trabajo de prctica de Microbiologa es la manipulacin de
microorganismos, los cuales necesariamente deben ser cultivados in vitro en sustratos especficamente diseados de tal
manera que les proporcionen los nutrientes, pH y sales necesarios para su ptimo desarrollo. Los medios de cultivo se
caracterizan porque se clasifican de acuerdo a su consistencia y al empleo que se les d, lo cual tambin est en relacin
con la forma correcta de prepararlos y someterlos a esterilizacin.

III. MATERIALES.-
Frascos de Medios de Cultivo indicados por el docente
Balanzas
Esptulas
Matraces Erlenmeyer (125 y 250 mL)
Placas Petri estndares (normales)
Tubos de ensayo (13x100mm y 20x150mm)
Baguetas
Hornillas elctricas
Horno
Autoclave
Mechero Bunsen
Material de asepsia, desinfeccin y esterilizacin

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Proceder a preparar los tipos de medios de cultivo segn las indicaciones del docente.
2. Las placas petri estndares o normales tienen una capacidad para 17 mL aproximadamente; esto significa que con 50
mL alcanza para 3 placas. Por su parte, las placas petri de antibiograma tienen una capacidad para 25 mL.
3. Los tubos de ensayo tienen capacidades diferentes, as: los de 13x100 mm trabajan con 3.5 mL; los de 15x150mm
con 8.0 mL y los de 20x150 mm con 10.0 mL.
4. Una vez preparados someterlos a esterilizacin en autoclave.
5. Una vez esterilizados acondicionarlos segn sea necesario.
6. Seguir cuidadosamente las indicaciones que se presentan en el Anexo.

V. ANEXO.-
Gua para la preparacin y esterilizacin de Medios de Cultivo

Con Agar (agares medios) Sin Agar (caldos)

Actividad a realizar
En Placas Petri En tubos de ensayo En tubos de ensayo
Esterilizar las Placas Petri
Medir el agua destilada en probeta
Pesar el Medio de cultivo en balanza
Mezclar en ... Matraz Erlenmeyer Matraz Erlenmeyer Baln de fondo plano
Calentar en hornilla elctrica
Repartir en los tubos de ensayo
Esterilizar el Medio de cultivo en Autoclave
Servir en Placas (asepsia y desinfeccin)
Acondicionar el Medio de cultivo (inclinar tubos)

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PRCTICA N8:

TCNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO MICROBIANO

I. OBJETIVOS.-
Conocer el fundamento, importancia y aplicaciones de las diferentes Tcnicas de siembra y aislamiento
Realizar correctamente los diferentes tipos de siembra

II. INTRODUCCIN.-
Para cumplir con el objetivo de manipular microbios in vitro, luego de haber preparado convenientemente los medios de
cultivo necesarios, deben realizarse a continuacin los procedimientos de siembra con la finalidad de lograr el aislamiento
de colonias que puedan ser fcilmente identificadas. Para ello existen diferentes tipos de siembras, las cuales varan segn
el tipo de medio de cultivo empleado y el propsito especfico que se persiga.

III. MATERIALES.-
Medios de Cultivo slidos y lquidos (en placas Petri y tubos de ensayo)
Inculos
Asas bacteriolgicas
Mecheros Bunsen
Autoclave
Material de asepsia, desinfeccin y esterilizacin

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Proceder a preparar el inculo segn las indicaciones del docente, para ello colocar 5,0 gr. de tierra en un vaso de
precipitacin (Beacker) de 250 mL y aadirle 100 mL de agua de cao, someter a ebullicin por 5 minutos y luego
dejar enfriar.
2. Realizar la correcta asepsia de los estudiantes, la desinfeccin de la mesa de trabajo y esterilizacin del asa
bacteriolgica.
3. Sembrar en cada uno de los medios de cultivo disponibles.
4. Rotular con plumn indeleble sobre las placas -y tambin sobre el papel- datos como: muestra, medio de cultivo,
nmero de grupo, fecha, escuela profesional y curso.
5. Llevar las placas a incubacin en posicin invertida- en Estufa a 37C durante 48 horas.
6. Transcurrido el tiempo de incubacin recoger las placas y conservarlas en refrigeracin a 8C hasta la siguiente
sesin de prctica.
7. Seguir las indicaciones que se muestran en el siguiente esquema de trabajo:

1 2

Flameado del asa Toma de inculo

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ESQUEMA DE TRABAJO PARA REALIZAR DISTINTOS TIPOS DE SIEMBRAS

a) Siembra en Medios slidos servidos en placas Petri

1. Estra simple: Realizar los pasos 1 y 2

Sembrado Resultado final

2. Estra por agotamiento: Realizar los pasos 1 y 2

Sembrado
Resultado final

3. Puntura: Realizar los pasos 1 y 2

Sembrado Resultado final

b) Siembra en Medios slidos servidos en tubos de ensayo

1. Estra: Repetir los pasos 1 y 2

3 4

Flameado del tubo antes de la siembra Sembrado

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5
5

Flameado del tubo despus de la siembra Resultado final

2. Picadura profunda : Realizar los pasos del 1 al 5

Resultado final

3. Estra y picadura profunda: Realizar los pasos del 1 al 5

Resultado final

c) Siembra en Medios lquidos servidos en tubos de ensayo

1. Homogenizacin con asa bacteriolgica: Repetir los pasos del 1 al 5

Resultado final

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2. Homogenizacin con hisopo: Repetir los pasos del 1 al 5

Resultado final

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PRCTICA N9:

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE BACTERIAS PATGENAS

I. OBJETIVOS.-
Aislar bacterias patgenas a partir de muestras clnicas mediante el uso de medios de cultivo
Identificar las bacterias aisladas mediante sus caractersticas morfolgicas, tintoriales y bioqumicas

II. INTRODUCCIN.-
El cultivo de microorganismos constituye uno de los avances ms importantes en microbiologa, puesto que permite junto
con otras tcnicas- identificar plenamente a los microbios. Es conveniente tener en cuenta que en cada caso los
requerimientos nutricionales bacterianos determinan que existan diversos tipos de preparaciones de medios de cultivo, los
cuales permiten su ptimo crecimiento y posterior identificacin de sus caractersticas.

III. MATERIALES.-
Microscopio ptico
Lminas portaobjeto
Asas bacteriolgicas
Pipeta de 1 mL
Beacker de 100 mL
Varilla de vidrio
Set de coloracin Gram
Mecheros Bunsen
Material de asepsia, desinfeccin y esterilizacin
Muestras clnicas (secrecin purulenta, orina y heces diarreicas/disentricas)
Agar Manitol salado
Agar sangre (a base del agar Thayer Martin)
Agar Mac Conkey
Agar SS

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Preparar por mesa- los medios de cultivo segn las indicaciones del docente:
a) Cultivo de secreciones:
Preparar 2 placas petri con agar Manitol salado.- para ello seguir las indicaciones de la prctica N7
Preparar 2 placas petri con agar Sangre.- para ello seguir las indicaciones de la prctica N7, pero tener en
cuenta que cuando el agar Thayer-Martin sale del autoclave se le debe aadir aproximadamente el 10% del
volumen de sangre desfibrinada (de carnero o humana), dejar enfriar y servir en las placas.
b) Cultivo de orina (Urocultivo):
Preparar 2 placas petri con agar Manitol salado.- para ello seguir las indicaciones de la prctica N7
Preparar 2 placas petri con agar Sangre.- para ello seguir las indicaciones de la prctica N7, pero tener en
cuenta que cuando el agar Thayer-Martin sale del autoclave se le debe aadir aproximadamente el 10% del
volumen de sangre desfibrinada (de carnero o humana), dejar enfriar y servir en las placas.
Preparar 2 placas petri con agar Mac Conkey.- para ello seguir las indicaciones de la prctica N7
c) Cultivo de heces (Coprocultivo):
Preparar 2 placas petri con agar Mac Conkey.- para ello seguir las indicaciones de la prctica N7.
Preparar 2 placas petri con agar SS.- para ello seguir las indicaciones de la prctica N7, teniendo en cuenta
que ste medio de cultivo NO se autoclava.
2. Preparar las muestras segn las indicaciones del docente:
a) Colectar una muestra de secrecin purulenta (pus) de cualquier tipo de herida, absceso, fornculo, etc.
b) Colectar una muestra de orina proveniente de una persona con infeccin urinaria.
c) Colectar una muestra de heces diarreicas (heces lquidas) o disentricas (heces lquidas acompaadas de
mucosidad y sangre).
3. Realizar las siembras tal como se indica en el respectivo esquema de trabajo.
4. Rotular con plumn indeleble sobre las placas -y tambin sobre el papel- datos como: muestra, medio de cultivo,
nmero de grupo, fecha, escuela profesional y curso.
5. Llevar las placas a incubacin en posicin invertida- en Estufa a 37C durante 48 horas.
6. Transcurrido el tiempo de incubacin recoger las placas y conservarlas en refrigeracin a 8C hasta la siguiente
sesin de prctica.

Mblgo. Jaime Wester Campos Pgina 14

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ESQUEMA DE TRABAJO PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE BACTERIAS PATGENAS

a) Cultivo de secreciones:

AMS
Observacin de colonias
Secrecin
purulenta Observacin de hemlisis
Tincin Gram
AS

Incubacin: 37C x 48 h

b) Urocultivo:

AMS
Observacin de colonias
Observacin de hemlisis
Orina Tincin Gram
AS
Recuento de colonias
Siembra por
1,0 mL incorporacin

AMS

Incubacin: 37C x 48 h

c) Coprocultivo:

Heces AMC
Observacin de colonias
diarreicas/
Tincin Gram
disentricas

ASS

Incubacin: 37C x 48 h

Mblgo. Jaime Wester Campos Pgina 15

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PRCTICA N10:

ANTIBIOGRAMA

I. OBJETIVOS.-
Evaluar la sensibilidad de una cepa bacteriana frente a diversos tipos de antibiticos
Realizar antibiograma mediante la tcnica de Kirby-Bauer

II. INTRODUCCIN.-
Uno de los objetivos fundamentales del trabajo en microbiologa clnica est orientado hacia la identificacin de las especies
bacterianas causantes de una determinada enfermedad; luego de lo cual es necesario realizar un tratamiento especfico de
la misma. Para ello es necesario evaluar el comportamiento de los microbios frente a los distintos antibacterianos; para ello
se debe realizar una prueba denominada antibiograma, que consiste en enfrentar a un microbio previamente aislado e
identificado- contra distintos antibiticos en un procedimiento que permitir estableces si la bacteria es sensible, resistente o
medianamente sensible a los frmacos probados.

III. MATERIALES.-
Pipeta de 1 ml
Tubos de ensayo de 13x100
Agua destilada
Mecheros Bunsen
Material de asepsia, desinfeccin y esterilizacin
Cultivo patgeno aislado e identificado (de la prctica N7)
Placas de antibiograma con Agar Mueller-Hinton
Esptulas de Drigalsky
Discos de sensibilidad
Pinzas de metal

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Preparar por mesa- una placa de antibiograma con Agar Mueller-Hinton (tener en cuenta que cada placa de ste tipo
tiene una capacidad para 25 ml).
2. Preparar una suspensin del cultivo patgeno (aislado e identificado de la prctica N8) en un tubo de ensayo
(13x100) con 2 ml de agua destilada estril.
3. Transferir 1 ml de la suspensin bacteriana en la placa con agar Mueller-Hinton con ayuda de la pipeta de 1 ml estril
y luego realizar una siembra por diseminacin- con una esptula Drigalsky (desinfectarla con alcohol y flamearla
ligeramente al mechero).
4. Dejar en reposo la placa por 5 minutos.
5. Proceder a colocar 8 discos de sensibilidad indicados por el docente con ayuda de una pinza.
6. Rotular debidamente, envolverla y llevar a incubacin posicin invertida- en estufa a 37C por 24 horas.
7. Luego de la incubacin hacer la medicin de los halos y comparacin con las tablas de antibiograma.
8. Proceder de acuerdo al siguiente esquema de trabajo:

Mblgo. Jaime Wester Campos Pgina 16

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ESQUEMA DE TRABAJO PARA REALIZAR ANTIBIOGRAMA SEGN LA TCNICA DE KIRBY-BAUER

A.D.E.
2 mL

Siembra por
Cepa aislada e
Suspensin diseminacin
identificada
bacteriana

Colocacin de los discos de

sensibilidad Agar Mueller-Hinton

Incubacin: 37C x 24h

Medicin de halos y comparacin

con tablas

Mblgo. Jaime Wester Campos Pgina 17

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PRCTICA N11:

OBSERVACIN DE HONGOS AMBIENTALES

I. OBJETIVOS.-
Observar e identificar hongos unicelulares y pluricelulares ambientales
Reconocer la morfologa y estructuras tpicas de los hongos

II. INTRODUCCIN.-
Las especies fngicas estn ampliamente distribuidas en la naturaleza, razn por la cual son denominadas cosmopolitas y
con capacidad para adaptarse a cualquier tipo de hbitat. Dentro de los principales grupo de hongos sobresalen aquellos
que contaminan los vegetales y materia orgnica en descomposicin (saprofticos) y tambin aquellos que son capaces de
realizar procesos fermentativos tiles para la humanidad.

III. MATERIALES.-
Microscopios pticos
Lminas porta y cubreobjeto
Goteros
Pipetas Pasteur
Azul de metileno
Levadura de panificacin
Sedimento de bebidas fermentadas de elaboracin casera
Frutas y verduras contaminadas con hongos
Material de asepsia y desinfeccin
Asas bacteriolgicas
Mecheros Bunsen
Gorras, mascarillas y guantes de ltex

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Realizar la observacin macroscpica de las frutas y vegetales contaminados por hongos, teniendo especial cuidado
en anotar las caractersticas de la forma, color y apariencia de los micelios.
2. Proceder a la observacin microscpica en fresco, colectando pequeas porciones de los micelios y coloreando con
azul de metileno. Seguir el mismo procedimiento para observar las levaduras de panificacin y el sedimento de las
bebidas fermentadas
3. Anotar las caractersticas de lo observado.

Mblgo. Jaime Wester Campos Pgina 18

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PRCTICA N12:

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE HONGOS PATGENOS

I. OBJETIVOS.-
Aislar hongos causantes de enfermedades mediante el uso de medios selectivos
Identificar las especies fngicas aisladas a travs de observaciones macroscpicas y microscpicas

II. INTRODUCCIN.-
Si bien es cierto que muchos de los hongos conocidos son inocuos o benficos para el hombre, algunos de ellos se
convierten en agentes causales de enfermedades tanto para el hombre como tambin para los animales. Por tanto,
conviene conocer cules de estas especies lo son, ya que de ello depender tambin la eleccin de los tratamientos
especficos para combatir dichas enfermedades.

III. MATERIALES.-
Microscopios pticos
Lminas porta y cubreobjeto
Goteros
Azul de metileno
Muestras de hongos patgenos
Muestras de lesiones (piel, cabellos y uas) de origen mictico
Material de asepsia y desinfeccin
Gorras, mascarillas y guantes de ltex
Asas bacteriolgicas
Hisopos estriles
Placas con agar Sabouraud
Tubos (126x150 con Caldo Sabouraud)
Tubos (16x150) con Agar Sabouraud inclinado
Mecheros Bunsen

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Preparar las placas y tubos con Agar y Caldo Sabouraud segn las indicaciones del docente, para ello tener en cuenta
lo trabajado en la prctica N6.
2. Colectar muestras de lesiones causadas por hongos: onicomicosis (uas), tias (cabello), pitiriasis (piel), candidiasis
(mucosa oral o vaginal), etc. con ayuda de los hisopos estriles y sembrar por homogenizacin en los tubos con Caldo
Sabouraud; llevar a incubacin en estufa a 37C por 72 horas.
3. Sembrar de los tubos con caldo a las placas y tubos segn lo indique el docente; rotular, envolver y llevar a incubacin
en estufa a 37c por 72 horas.
4. Realizar la observacin macroscpica y microscpica del crecimiento segn lo efectuado en la prctica N10.
5. Anotar los resultados.

Mblgo. Jaime Wester Campos Pgina 19

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PRCTICA N13:

OBSERVACIN DE PROTOZOARIOS PARSITOS

I. OBJETIVOS.-
Identificar morfolgicamente ejemplares de protozoarios enteroparsitos
Realizar examen coproparasitoscpico (examen directo) de heces

II. INTRODUCCIN.-
El diagnstico de la infeccin por protozoarios enteroparsitos debe realizarse cuidadosamente, pues cualquier error en el
mismo determinar un sesgo en los resultados, con la consecuente repercusin en el respectivo tratamiento. Es por ello que
debe realizarse el examen coproparasitoscpico seriado observando las formas parasitarias presentes (quistes o
trofozoitos) que permitan la identificacin de los enteroparsitos.

III. MATERIALES.-
Microscopios pticos
Lminas porta y cubreobjeto
Goteros
Lugol
Ejemplares de protozoarios parsitos
Material de asepsia y desinfeccin
Gorras, mascarillas y guantes de ltex
Palillos mondadientes
Heces diarreicas
Mecheros Bunsen

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Colectar muestras de heces diarreicas de personas que padezcan sospechosamente de enteroparasitosis.
2. Realizar una observacin en fresco, tal como se hizo en la prctica N4, con ayuda de Lugol.
3. Identificar la presencia de formas parasitarias (quistes o trofozoitos) con ayuda del docente.
4. Realizar observaciones microscpicas de las lminas preparadas con protozoarios parsitos.
5. Esquematizar y/o graficar las observaciones.

Mblgo. Jaime Wester Campos Pgina 20

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PRCTICA N14:

OBSERVACIN DE HELMINTOS PARSITOS

I. OBJETIVOS.-
Identificar morfolgicamente ejemplares de helmintos enteroparsitos
Realizar examen coproparasitoscpico (examen directo) de heces

II. INTRODUCCIN.-
El diagnstico de la infeccin por helmintos enteroparsitos debe realizarse cuidadosamente, pues cualquier error en el
mismo determinar un sesgo en los resultados, con la consecuente repercusin en el respectivo tratamiento. Es por ello que
debe realizarse el examen coproparasitoscpico seriado observando las formas parasitarias presentes (huevos o
progltidos) que permitan la identificacin de los enteroparsitos.

III. MATERIALES.-
Microscopios pticos
Lminas porta y cubreobjeto
Goteros
Lugol
Ejemplares de helmintos parsitos
Material de asepsia y desinfeccin
Gorras, mascarillas y guantes de ltex
Palillos mondadientes
Heces diarreicas
Mecheros Bunsen

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Colectar muestras de heces diarreicas de personas que padezcan sospechosamente de enteroparasitosis.
2. Realizar una observacin en fresco, tal como se hizo en la prctica N4, con ayuda de Lugol.
3. Identificar la presencia de formas parasitarias (huevos o progltidos) con ayuda del docente.
4. Realizar observaciones macro y microscpicas de los ejemplares de helmintos (platelmintos y nematodos)
enteroparsitos.
5. Esquematizar y/o graficar las observaciones.

Mblgo. Jaime Wester Campos Pgina 21

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PRCTICA N15:

OBSERVACIN DE ARTRPODOS PARSITOS

I. OBJETIVOS.-
Identificar morfolgicamente ejemplares de artrpodos enteroparsitos

II. INTRODUCCIN.-
El diagnstico de infestacin por ectoparsitos consiste principalmente en reconocer la morfologa de los individuos adultos
o sus formas intermedias (huevos o liendres), para ello es necesario diferenciar las caractersticas de los insectos y de los
arcnidos, as como tambin las que determinan su infeccin en relacin a su respectivo ciclo biolgico.

III. MATERIALES.-
Microscopios pticos
Ejemplares de artrpodos parsitos
Material de asepsia y desinfeccin
Gorras, mascarillas y guantes de ltex

IV. PROCEDIMIENTO.-
1. Realizar observaciones microscpicas de las lminas preparadas con artrpodos parsitos.
2. Esquematizar y/o graficar las observaciones.

Mblgo. Jaime Wester Campos Pgina 22