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PARAMETROS DE IRRADIACIN
LSER
PARA PRODUCIR EFECTOS DE ESTIMULACIN
EN SEMILLAS DE MAZ
(Zea mays L.)
TESIS
DOCTOR EN CIENCIAS
EN
COMUNICACIONES Y ELECTRNICA
Mxico, D.F.
Diciembre del 2004
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3
PARMETROS DE IRRADIACIN LSER PARA PRODUCIR
EFECTOS DE ESTIMULACIN EN SEMILLAS DE MAZ
(Zea mays L.)
CONTENIDO
ndice de Cuadros .. (iii)
ndice de Figuras . (iv)
Resumen General .. (v)
General Summary
I. Introduccin General
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3.8 Conclusiones (38)
3.9 Bibliografa (39)
7. Discusin General
7.1 La luz lser y el vigor de las semillas de maz (80)
7.2 La luz lser y la clorofila (85)
7.3 La luz lser y la calidad sanitaria de la semilla (88)
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8.2 Parmetros de irradiacin y su factibilidad de uso en la Agricultura. .. (94)
8.3 Orientacin para futuras investigaciones (95)
X Anexos (106)
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INDICE DE CUADROS
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NDICE DE FIGURAS
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RESUMEN GENERAL
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un hbrido de cruza simple, el cual antes de ser tratado con la luz lser se colore
con rojo metil. Los resultados fueron, que a determinada combinacin de tiempo e
intensidad de irradiacin lser en la semilla se increment significativamente la
velocidad de emergencia de plntulas, peso seco y emergencia. En este estudio,
la combinacin con la cual se obtuvo el mejor resultado fue a una intensidad de
20 mW/cm2 durante un tiempo de 1 minuto; ya que el incremento fue altamente
significativo a una (P0.01) en velocidad de emergencia de plntulas (42.89%), en
peso seco (63.24%) y en emergencia (48.07%) con relacin a la muestra de
control (no radiada). Debido a la bsqueda de condiciones de semilla que
requieran menos sustancias adicionales, como lo fue el colorante en el anterior
resultado, se sigui investigando hasta que, se plane el establecimiento de otro
experimento, empleando semilla sin sustancias adicionales, este experimento se
llevo a cabo a nivel de invernadero, se aplicaron 16 tratamientos de luz lser en
las semillas de maz. El experimento fue conducido en el invernadero del rea de
Mejoramiento y Control de la Calidad Gentica del Programa de Semillas del
Colegio de Postgraduados, Montecillo, Texcoco (Edo de Mxico). Un factorial de
4 intensidades y 4 tiempos de irradiacin emitidas por un lser de AsAlGa en una
longitud de onda de 660nm fueron aplicados a la semilla antes de la siembra de
un maz hbrido de cruza simple. La radiacin lser increment significativamente
la velocidad de emergencia, peso seco y emergencia de plntulas. Los resultados
de nuestro estudio puntualizan que la combinacin que obtuvo una mejor
respuesta fue a una intensidad de 10 mW/cm2 durante un minuto; este tratamiento
origin incrementos significativos (P 0.05) en velocidad de emergencia
(33.19%), en peso seco (14.45%) y emergencia (25%) con relacin al control
(muestras de semillas no irradiadas). Al interactuar la luz lser con la semilla de
maz tambin produce efectos de fotoactivacin en los genes responsables del
contenido de pigmento en las hojas, ya que a travs del establecimiento de un
experimento cuyo inters fue investigar el efecto producido en el contenido de
clorofilas en hojas de plntulas de maz, cuya semilla fue tratada con luz lser
emitida por un lser semiconductor de AsAlGa, pre-siembra. El experimento fue
establecido en el invernadero del rea de Mejoramiento y Control de la Calidad
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Gentica. El espectro de absorcin ptico de una porcin de las hojas de las
plntulas fue obtenido mediante la tcnica de espectroscopia fotoacstica. El
espectro de absorcin de una porcin de las hojas fue obtenido para evaluar las
diferencias cualitativas en los picos de absorcin de las clorofilas as y clorofilas
bs. Los resultados para ambas clorofilas revelaron diferencias significativas en los
tratamientos a una P0.05. Por ltimo, al conocer que las semillas de maz
normalmente tienen el problema de la existencia de hongos y que estos
microorganismos deterioran la calidad de la semilla, se dispuso el conocer que
esta pasando con la micoflora asociada a la semilla de maz. La investigacin que
revel resultados de afectacin de esta micoflora fue al emplear un diodo lser
semiconductor de 660 nm y P = 27.4 mW. aplicando cuatro tiempos de irradiacin
(30, 60, 180, 300 y 600 segundos) y dos niveles de intensidad de irradiacin ( I1 =
16.31 e I2 = 4.65 mW/cm2) con un diodo lser de = 660 nm, potencia 27.4 mW).
Posterior a la irradiacin a las semillas le fueron llevadas a cabo la prueba de
germinacin y de sanidad de la semilla. La irradiacin lser en la semilla
disminuy significativamente la cantidad de semilla infestada con el hongo
fusarium s.p.. En este estudio, la combinacin de I1 e I2 a un tiempo de irradiacin
de 5 minutos hubo una reduccin en la cantidad de semilla infestada con el hongo
significativamente a una (P0.05) en un 66.66%, con relacin al control (no
radiada).
De este conjunto de resultados se desprende que la aplicacin de la luz
emitida por lseres semiconductores o diodos lser puede potencialmente
convertirse en una alternativa para el manejo de la calidad de la semilla de maz,
as como en futuras investigaciones en semillas de otras especies.
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GENERAL SUMMARY
On the other hand a factorial of four intensities and four times of AsAIGa laser
radiation at a wavelength of 660 nm was applied in pre-sowing to seeds from a
single cross hybrid. The laser seed irradiation significantly increased seedling
emergence rate, seedling dry weight and emergence in soil. The results of our
study point to that, the optimum combination was an intensity of 9.7 mW/cm2
during 1 minute; this treatment originated highly significant (p 0.05) increases in
seedling emergence rate (33.19%), in dry weight (14.45%) and emergence (25%)
with relation to the control (without irradiation). Other experiment was when the
seeds were exposed to different laser intensities and radiation times . The optical
absorption spectra of their seedling leaves was obtained, by using photoacoustic
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spectroscopy, in order to obtain qualitative differences in the chrolorophyll a and b
absorption peaks. A randomized complete block experimental design with 3
replications was utilized. The experimental unit was 10 seeds, from which we
randomly choose three seedlings. Data were subjected to variance analysis
(anova) using the SAS GLM procedures (SAS, 1998 version) The least significant
difference test (LSD) at the 5% probability level was studied for comparing
treatments (3). The anova for both chlorophylls revealed highly significant (p
0.05) differences among treatments. In chlorophylls a and b at 30 seconds of
irradiation time and 27.3 mW/cm2 of laser intensity, the PA signal decreases
22.75% and 16.2% respectively, when compared with the PA signal amplitude of
control sample. In other study we investigated about the effects of the low intensity
laser irradiation on the Mycoflora content in corn seeds. Also the effects on the
germination, grown and morphology of the seedlings, under controled confitions,
were studied. Five irradiation times were applied (30, 60, 180, 300 and 600
seconds and two intensity levels (( I1 = 16.31 e I2 = 4.65 mW/cm2) by using a diode
laser ( = 660nm and power of 27.4 mW). After of the seed irradiation studies of
germination and seed healthy were developed. Laser irradiation significantly
diminish the quality of seeds infested with Fusarium s.p. fungi. The combination of
I1 and I2 , at five minutes of irradiation time, diminish (p 0.05) the quantity of
infested seeds with the fungi up to 38.88% when compared with the control seed
(no irradiated)
From these results the laser irradiation seed enhancement technology deserves
further investigation in maize.
Keywords:
Zea mays L., laser irradiation, laser semiconductor, diode laser, seed
vigour, seed enhancement, seedling emergence. Chrolorophylls, fungi, fusarium.
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I. INTRODUCCIN GENERAL
14
productos que nos sirven de alimentacin. Los cientficos del mundo deben
encaminar los esfuerzos hacia el desarrollo de mtodos que protejan las
cosechas y el ambiente, buscando fuentes bioenergticas y bioestimuladores,
indicar nuevos mtodos en la produccin agrcola que no produzcan el deterioro
de la Naturaleza y en consecuencia de nuestra vida.
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Wilde et al., (1969) expusieron 4 diferentes tipos de semilla a la radiacin lser
antes de sembrar, empleando dos lseres de rub. Las semillas fueron
sembradas inmediatamente despus del tratamiento y los resultados mostraron
una tendencia al incremento de la velocidad de germinacin.
Paleg y Aspinall (1970) reportan el empleo del lseres de He- Ne para activar los
procesos controlados por el fitocromo incluyendo la germinacin de semillas.
En 1979 empleando un lser de He-Ne en Canad reportan la activacin del
fitocromo que controla la germinacin de la semilla de Pinus Banksiana, por lo
que recomiendan emplearla ya que podra ser una herramienta til para tener
eventos metablicos asociados a la germinacin ms tempranamente (Campbell y
Donald, 1979).
En la India otro grupo de investigadores proponen el empleo del lser de
Nitrgeno pulsado (337.1 nm) ya que encontraron que a 30 minutos se
incrementaron los brotes de la planta, la longitud de las races, y el peso fresco y
seco de las plntulas (Sudha Rani et al., 1985). Posteriormente, ese mismo grupo
de investigadores experimentan combinando dos lseres distintos: el lser de
Nitrgeno y el lser de Argn (514.5nm), de esta combinacin reportan tambin
un incremento de brotes de la planta, longitud de races y peso fresco y seco de
las plntulas, empleando 30 minutos de irradiacin con el lser de Nitrgeno y 5
minutos con el lser de Argn.
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510nm la actividad de la amilasa fue ms baja que para las muestras de control ,
en tanto que para la longitud de 632.8 nm no hubo diferencias concernientes a
esta actividad de la amilasa.
La influencia de la bioestimulacin lser a la semilla antes de la siembra ha
probado efectos positivos usando como bioestimulador un lser de He-Ne (R.
Koper, 1994); que muestran efectos positivos, como un incremento en la
productividad y el contenido de azcar con respecto al control (Koper et al., 1996).
Drozd y Szajsner, (1999) empleando radiacin antes de la siembra, con una
fuente lser de He-Ne en la semilla de trigo, con dosis del orden de 4 x 10-3 J/cm2
y 4 x 10-5 J/cm2, con varios regmenes de irradiacin (simple, doble y tripe
irradiacin) reportan variaciones en la longitud de las espigas; para la dosis mayor
la longitud de la espiga aumenta, (produciendo las espigas ms grande cuando se
irradian tres veces) y para la dosis ms pequea la longitud de las espigas
disminuye.
En Macedonia, Vasilevski y Bosev, (1997) concluyen que dentro del campo de
produccin de vegetales existen reacciones positivas al tratar semillas y plantas
con luz lser; la productividad se increment en un 20-24 % en tomates, 13% en
pimienta, 15% en pepino, 15.5 % en cebolla y 27% en haba. El perodo de
vegetacin del tomate fue reducido en 8 das, no especifican cules resultados
corresponden a qu niveles de irradiacin en plantas y cules corresponden a
radiacin de semilla antes de la siembra o en la planta. Lo que s indican es que
la estimulacin en plantas causa efectos visuales positivos y adems cambios en
la calidad de los productos como en contenido de vitaminas, clorofila y peso seco.
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soya fue teida; el nmero de ndulos y peso seco fue mayor para las semillas
irradiadas entre 1 y tres minutos en relacin con las de control. En este reporte
recomiendan el tratamiento de la semilla con luz lser en combinacin con el
empleo de fotosensitizadores para tratar la semilla como tratamientos fungicidas
(Ouf y Abdel, 1999).
En China realizaron experimentos en donde emplearon una combinacin de
lseres de He-Ne y CO2. El lser de He-Ne de 5.43 mW/mm2 y el de CO2 de 20.1
mW/mm2 para pre-tratar la semilla de Vicia faba L. Los resultados que
encontraron fue que los pre-tratamientos con la radiacin lser increment la
resistencia al estrs de luz UV ya que protegen las clulas de las plntulas
provenientes de semilla irradiada (Zhi Qi et al.,2000).
En la cuarta conferencia Internacional de Ecofisiologa del proceso de produccin
de plantas en condiciones de estrs, reportan efectos de la bioestimulacin en
crecimiento de plntulas de semillas de haba reportando diferencias a distintas
condiciones de temperatura, as como ante diferentes condiciones de humedad
(Conferencia, 2000).
Estudios para evaluar algunos cambios qumicos y fisiolgicos en las semillas de
haba reportan que la irradiacin de las semillas influy en una mayor velocidad de
germinacin y adems modific el curso de los estados de desarrollo influyendo
en la madurez de las plantas (Podlesney, 2002).
La irradiacin de semillas con lseres de baja intensidad da lugar a incremento en
la biomasa de las plantas (Ivanova y Stoyanova, 2000), en la produccin de frutos
(Gladyszewska et al., 1998a y Gladyszewska et al., 1998b) en las propiedades
mecnicas de las semillas de la siguiente generacin (Koper et al., 1999) o bien en
la tolerancia a bajas temperaturas de las plntulas despus de la germinacin de
las semillas irradiadas (Podlena y Podleny, 2001).
La mayora de los autores coinciden que la luz lser de He-Ne brinda resultados
positivos haciendo que el crecimiento y desarrollo del sistema radical sea ms
rpido, as como una mejor adaptacin a los cambios ambientales, ms alta
resistencia a las enfermedades e incremento en la productividad. En los ltimos
aos se le da mayor importancia ya que el siglo pasado la incorporacin de
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sustancias qumicas provoc un deterioro ambiental a nivel mundial y ahora los
mtodos que se incorporen en el sector agrcola no deben daar el ambiente y en
consecuencia la salud de las personas (Vasilevski, 2004). Por las razones
anteriores algunos cientficos creen que este siglo ser de aplicacin de mtodos
biofsicos en la agricultura en donde hay todo un camino por desarrollar e
investigar.
Polonia es otro de los pases donde ms fuertemente trabajan investigando sobre
este tema. Y es ah donde se han llevado a cabo dos conferencias internacionales
tituladas, Influencia del Campo Electromagntico en el Ambiente Agrcola (2001 y
2003). En estas conferencias internacionales se han presentado resultados de
investigaciones que se indican a continuacin:
Danila et al., (2003) expusieron los resultados encontrados al emplear un par de
lseres de He-Ne de 5mW de potencia en la respuesta en germinacin de
semillas de plantas de maz, habiendo empleado tres diferentes valores de dosis
de irradiacin y cambiando el tamao del ancho del haz de luz mediante un
arreglo ptico; los niveles de dosis de irradiacin fueron 1 J/cm2, 2 J/cm2 , and
3J/cm2 ; los resultados que reportan son: Las plntulas que son crecidas de las
semillas irradiadas presentaron un crecimiento significativo en la longitud del
coleoptilo en comparacin con las semillas no irradiadas, adems la elongacin
de los tallos tambin es ms rpida para las muestras irradiadas. Los mejores
resultados que obtuvieron fueron a las dosis de irradiacin ms pequeas. Otros
resultados reportan una estimulacin en la velocidad de germinacin de plntulas
cuya semilla fue irradiada con luz lser (Konstanty , 2003).
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diferentes de semilla de trigo en donde reportan que mejor la calidad de siembra
(Laszkiewicz, 2001), as como tambin indican la eficiencia de la bioestimulacin
lser en semillas de maz en diferentes condiciones de humedad reportaron una
aceleracin significativa de la emergencia de plntulas a un rgimen de
irradiacin de cinco dosis (Lipski, 2001a). En todas estas investigaciones
emplearon lseres de He-Ne.
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En los ltimos aos cuando se le ha dado un mayor auge a este tipo de
investigaciones (Benavides et al., 2003; Vasilevski, 2004), por la necesidad que
se vive a nivel mundial por mantener una agricultura sustentable.
21
de la interaccin de luz con la materia ( Karu, 2003; Karu 1989b). Estos procesos
que ocurren bajo el efecto de la luz encuentran diversas aplicaciones prcticas.
Para lo cual la luz lser presenta propiedades nicas como lo son:
monocromaticidad, coherencia y polarizacin (Fenyo, 1984).
1.1.2 Fitocromos
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(Arturas Zukauskas et al., 2002). El pionero en este tipo de investigaciones S.
Henricks, H. Borthwick y colegas propusieron la hiptesis central de la accin de
los fitocromos: Estos fotorreceptores existen en dos formas fotoconvertibles Pr y
Pfr. Pr es biolgicamente inactiva y hasta la absorcin de fotones rojos es
convertida a Pfr, la forma activa. Pfr es convertida de regreso a Pr por fotones
infrarrojos (Smith, 2000).
Los fitocromos son capaces de regular casi todas las fases de desarrollo de las
plantas: germinacin, establecimiento de plntulas, arquitectura de la madurez de
las plantas y floracin (Smith, 2000).
Bajo la base terica y prctica, la luz lser roja tiene efectos en las plantas,
en sus diferentes etapas fenomenolgicas.
A partir de la incorporacin del uso del lser en la ciencia de la agricultura se han
empleado en diferentes regiones del espectro electromagntico, y en diferentes
etapas de la produccin de las plantas. La luz lser se ha empleado para tratar la
semilla, las plntulas, las plantas y el agua de irrigacin (Vasilevski, e-mail), y es
el lser de He-Ne, el que ha resultado ser el ms empleado por la mayora de
investigadores en el mundo.
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Resumiendo, existen evidencias suficientes, terica y prctica, que permiten
afirmar que el tratamiento de semillas con luz lser tiene efectos en las plantas.
24
emergencia, es uno de los primeros conceptos de vigor y se citan a Maguire
quin sugiri la siguiente frmula para obtener su clculo (Maguire,1959):
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que est en contacto con la cmara de gas (generalmente el aire). La cmara
fotoacstica, generalmente sellada con una ventana de cuarzo, tiene acoplado un
micrfono que detecta las variaciones de presin en el gas. En el modelo RG se
considera que una luz monocromtica modulada incide sobre la muestra de una
cmara fotoacstica, este modelo considera que solo hay relajacin trmica, o sea
que toda la luz absorbida es convertida en calor.
1.4 Patgenos
Los hongos se dividen en dos grupos ecolgicos: hongos de campo, los cuales
son ms o menos parasticos y afectan las semillas antes de la cosecha y hongos
de almacenamiento, los cuales generalmente son parsitos facultativos que se
desarrollan despus de la cosecha (Castao-Zapata y Zepeda, 1987). Los de
campo invaden las semillas cuando stas poseen humedad an alta (por encima
de 20%). Cuando la humedad baja a niveles apropiados para almacenamiento, los
hongos de campo desaparecen y los hongos de almacenamiento empiezan a
invadir las semillas (Pacheco, 1989). Semillas enfermas tienen ms bajo nivel de
germinacin y de velocidad de emergencia que semillas saludables (Wen, 2001).
La desinfeccin de la semilla es el nico procedimiento del tipo preventivo
relativamente eficaz para combatir estas enfermedades (Llanos, 1984) y hasta el
da de hoy se buscan mtodos para combatirlas, debido a que los hongos pueden
causar grandes prdidas en la agricultura (Prez, 2000). Neergaard, citado por
Pacheco (1989), reporta que el 90% de los cultivos destinados a la produccin de
alimentos, pueden sufrir algn tipo de enfermedad y sus agentes en gran mayora
pueden ser transmitidos por la semilla. Pacheco (1989), cita prdidas de 135
millones de toneladas de cereales.
26
En el caso de la semilla de maz, se considera a dos especies de hongo
Fusarium responsables del deterioro de la raz de la planta: el Fusarium
moniliforme y Fusarium graminearum.
1.5 Justificacin
27
1.6 Objetivos
Determinar los tiempos y las intensidades para los cuales se mejore el vigor
de la semilla de maz (Zea mays L.): con colorante.
1.7 Hiptesis
28
. El vigor de las semillas de maz puede ser mejorado al ser irradiadas las
semillas de maz: sin colorante a determinada combinacin de parmetros
de irradiacin lser de baja intensidad.
Para cubrir el objetivo y demostrar las hiptesis planteadas en este trabajo, fueron
realizados diversos ensayos experimentales empleando la metodologa que
seala la Asociacin Internacional de Pruebas de Semilla (ISTA, 1993). La
semilla de maz hbrida empleada fue proporcionada por el rea de Mejoramiento
y Control de la Calidad Gentica del Programa de Semillas del Instituto de
Recursos Genticos y Productividad del Colegio de Postgraduados.
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2. LASERES EN LA AGRICULTURA Y LA ELECCION DEL
LSER
El lser, acrnimo de las iniciales inglesas que significan amplificacin de luz por
emisin estimulada de radiacin, es una fuente de luz con unas caractersticas de
monocromaticidad, coherencia y direccionalidad que la hacen completamente
diferente de otras fuentes luminosas (el Sol, las bombillas incandescentes, tubos
fluorescentes., etc.).
30
bajar al estado fundamental. Cuando esta desexcitacin est desencadenada por
un fotn incidente, el nuevo fotn es exactamente igual (en frecuencia, direccin y
fase) al fotn incidente. A este proceso, conocido como emisin estimulada (para
diferenciarlo de la emisin espontnea, que es la desexcitacin producida sin la
necesidad del fotn incidente) se le puede considerar como el fundamento fsico
del lser.
31
de rub. En 1960, Mainman mostr orgullosamente al mundo el primer lser en
operacin; posteriormente, aunque tambin en 1960, el investigador de los
Laboratorios Bell , Ali Javan, puso a funcionar el primer lser de gas en el mundo,
utilizando una mezcla de helio y nen.
. Un elemento de bombeo para excitar a los tomos del medio lser a un nivel de
energa ms alto. Algunos tomos excitados pasan posteriormente a un estado
intermedio de energa que es metaestable; es decir, la probabilidad de transicin
al estado fundamental es muy baja. Pero para que la accin lser ocurra no slo
debe producirse la excitacin de tomos sino la condicin de inversin de
poblacin , en la cual hay una cantidad de tomos en el nivel metaestable de
energa que los que se encuentran en un nivel ms bajo en el medio lser. La
radiacin de frecuencia estimular transiciones del estado metaestable al estado
fundamental, produciendo una amplificacin coherente.
32
del rub). En otros casos el medio activo es un gas, como en el caso de los lseres
de helio-neon o de argon. La energa necesaria se proporciona a travs de un
mecanismo de BOMBEO.
Existen muy diversos tipos de lseres, dependiendo del medio activo empleado y
de las caractersticas de la luz emitida. Una primera clasificacin podemos hacerla
segn su longitud de onda. Existen lseres desde el infrarrojo hasta el ultravioleta,
cubriendo todo el intervalo visible. Actualmente se estn desarrollando lseres en
la regin de los rayos X. Como se indico en el captulo anterior, la aplicacin de
la irradiacin lser antes de la siembra en algunas semillas se ha llevado a cabo
manejando diferentes tipos de lseres (Figura 2.3):
33
Fig. (2.3 ) Longitud de onda de los lseres empleados para irradiar semilla antes
de la siembra.
El lser de Rub fu el primer lser hecho por el hombre, que fue construido
por Theodore Maiman en 1960. El Rub es un cristal sinttico de xido de
Aluminio (Al2 O3), y es ms familiar en la vida cotidiana como una piedra preciosa
para joyera. La estructura qumica del Rub est compuesta de Al2O3 (que es
llamado Zafiro), impurificada con alrededor del 0.05% (en peso) de iones Cromo
(Cr+3). El in activo es el Cr+3, el cul reemplaza tomos de Al en el cristal. Este
in es la causa el color rojo del cristal. La impureza del in Cr+3 es responsable de
los niveles de energa que participan.
34
Los tomos (o iones o molculas) del medio activo presentan una estructura de
niveles cunticos similar a la del in cromo en un cristal de rub. El bombeo sube
los electrones a un estado (o banda de estados) de energa elevada. De ah los
electrones caen rpidamente a otro nivel (el estado excitado). El estado excitado
tiene una vida media relativamente grande para las escalas atmicas (estado
metastable), que suele ser del orden del microsegundo o menor. Cuando los
electrones bajan de nuevo al estado fundamental, emiten un nuevo fotn
coherente por emisin estimulada y se completa el ciclo.
35
El efecto lser contina en tanto sea posible mantener la inversin de poblaciones
y sea emitido un haz continuo con potencias en el intervalo de 0.5 a 50 mW. La
ganancia del lser de He-Ne a esta longitud de onda es baja , los anchos de lnea
en los lseres gaseosos son mucho ms bajos que en cualquier otro tipo de
sistema lser. En particular, para el lser He-Ne los anchos de lnea suelen ser del
orden de unos cuantos picometros.
El lser de Argn fue inventado en 1964 por William Bridges en Hughes. El lser
de in Argn contiene un tubo lleno con Argn gas que se transforma en plasma
en un estado excitado.
El lser de argn tiene varias lneas de emisin, Como hemos visto, en este lser
el bombeo se realiza por una descarga elctrica cuya corriente tpica es entre 15 y
50 amperes, que al pasar por el tubo de descarga puede producir densidades de
36
corriente del orden de 1 000 amperes/ cm. Para evitar que los electrones de
excitacin pierdan energa al colisionar con las paredes del tubo de descarga se
utiliza una bobina que produce un campo magntico para limitar el movimiento de
los electrones en la direccin lon
La accin lser en una molcula de CO2 fue descubierta por Patel en 1964.
El transmiti un pulso de descarga elctrica a travs del gas de CO2 puro en un
tubo lser, y obtuvo una pequea salida lser.
El CO2 es el gas en el que se produce la accin lser, pero agregando otros gases
en el tubo lser se aumenta la eficiencia total del lser.
El lser estndar de CO2 incluye en el medio activo una mezcla de CO2 con N2 y
He. La proporcin ptima de estos tres gases en la mezcla depende del sistema
lser y del mecanismo de excitacin.
El CO2 es una molcula lineal, y los tres tomos estn situados en una lnea recta,
con el tomo de carbono en el centro.
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muy corto y que el bombeo deba realizarse en pulsos de muy corta duracin
(Aboites, 1991).
Un buen conductor como la plata tiene una conductividad de 6 x 107 mohs/ metro,
mientras que un buen aislante como el cuarzo fundido tiene una conductividad de
2 x 10-17 mohs/ metro. Es decir que hay 24 rdenes de magnitud de diferencia en
su conductividad. Un semiconductor tiene una conductividad tpica de 7 a 14
rdenes de magnitud menor que un buen conductor. Ejemplos de materiales
semiconductores son el germanio (Ge), el silicio (Si) y algunos compuestos como
el arsenuro de galio (GaAs) y el sulfuro de plomo (PbS).
38
valencia en lugar de slo cuatro. La introduccin de tomos contaminantes con
tres electrones de valencia como por ejemplo el bario (Ba), el galio (Ga) o el indio
(In), da lugar a una estructura cristalina imperfecta en la cual han quedado
"huecos positivos" que aumentan la conductividad del material. Este tipo de
materiales se conocen como semiconductores tipo P . De manera similar, la
introduccin de tomos contaminantes con cinco electrones de valencia, como por
ejemplo el fsforo (P), el arsnico (As), el bismuto (B) o el antimonio (Sb), da
origen a una estructura cristalina imperfecta en la cual han quedado electrones en
exceso qu incrementan la conductividad del material. Estos materiales
contaminados con tomos con cinco electrones de valencia son llamados
semiconductores tipo N.
Diseando una unin P-N de forma adecuada, podemos formar una cavidad lser,
cuya regin activa est formada por la regin de unin de los materiales P y N.
Existen dos formas fundamentales de lseres semiconductores a) por bombeo de
haz electrnico y b) por bombeo por inyeccin de portadores de carga, ms
conocidos como diodos lser.
Los diodos lser pueden tener estructura homounin o heterounin. Los diodos
lser homounin se caracterizan porque las zonas N y P se hacen de un mismo
material con diferentes tipos de impurezas. Los diodos lser heterounin se
distinguen porque las zonas N y P se hacen de diferentes materiales, por ejemplo
de Ga As y AlGaAs. Los diodos lser ms difundidos son los de Arseniuro de
Ga/Aluminio-Galio-Arsnico (GaAs/AlGaAs). En donde la longitud de onda
depende de la concentracin de aluminio. Estos diodos lser pueden trabajar en
rgimen contnuo o pulsado (Mart y Altamirano, 1997).
39
Figura 2.4 Estructura del diodo lser a) Homounin, b) Heterounin
diferentes alternativas de lser a emplear, en base a los que han sido manejados
40
Eleccin de lser
Para aplicarse en la
Eleccin irradiacin de semilla
pre-siembra
Parmetros Parmetros
Tcnicos Econmicos
Y Dimensiones
Costo
Longitud de Eficiencia Monocromaticidad Tamao Factibilidad lser
Onda De uso en la
Agricultura
Para los objetivos de esta aplicacin, en donde se manejan las Hiptesis de que la
irradiacin lser produce efectos de estimulacin en la semilla tratada antes de la
siembra, planteando la afectacin en parmetros cuyos efectos tienen que ver con
los fitocromos. De acuerdo a la Figura 1.1 se observa que la mayor absorcin
corresponde a la porcin espectral que corresponde a la luz roja e infrarroja.
De los lseres que han sido empleados en la Agricultura los que tendramos
entonces como opcin seran:
Lser LASER
HE-NE Rub
LASER
Diodo
Parmetros
Tcnicos Parmetros
Y Dimensiones Econmicos
Figura 2.5 Estructura jerrquica para la eleccin del lser con las relevancias relativas
3.1 RESUMEN
La alta calidad de la semilla es absolutamente necesaria en el contexto de
con bajo vigor, el desarrollo de una tcnica que lo mejore es muy importante en
lser de baja intensidad en la semilla de maz (Zea mays L.) como tratamiento
plntulas, peso seco y emergencia total. Debido a que la irradiacin lser origin
Palabras clave:
3.2 SUMMARY
46
From these results the laser irradiation seed enhancement technology deserves
further investigation in maize.
Keywords:
Zea mays L., laser irradiation, seed vigour, seed enhancement,
seedling emergence.
3.3 INTRODUCCIN
Estudios fotobiolgicos y genticos revelan que los fitocromos son una familia de
fotoreceptores absorbedores de luz, roja e infrarroja (Fankhauser, 2002).
Estas molculas son cromoprotenas que regulan el crecimiento y desarrollo de las
plantas en respuesta a las seales de luz. Las cromoprotenas tienen dos formas
que son reversiblemente intercambiables por la luz. La forma biolgica inactiva Pr
que absorbe la luz roja, y la forma biolgicamente activa Pfr que absorbe la luz
infrarroja (Quail, 2002). Pulsos cortos de luz maximiza la conversin de molculas
fitocromos a la forma activa Pfr (Shimizu-Sato et al., 2002).
Diferentes tipos de luz lser han sido empleados dentro del rango de la luz visible
y ultravioleta (Ouf y Abdel-Hady, 1999). La irradiacin con lser de nitrgeno
(337.1nm) en Vigna radiata L. origin incrementos en peso seco de raz y tallo
(Govil et al., 1985). La combinacin del lser de Nitrgeno (337.1 nm) y Argn
(514.5 nm) produjo un incremento en el contenido de protena de semillas de
Vigna radiata L. (Govil at al., 1991). La irradiacin de semillas kenaf (Hibiscus
cannabinus L.) con lser de He-Ne (632.8 nm) increment la produccin de
semillas y redujo el periodo de crecimiento (Son, 1990). La influencia de la
irradiacin lser de He-Ne fue estudiado por Ouf y Abdel-Hady (1999) en la
47
micoflora, crecimiento, nodulacn y mayor resistencia al hongo Fusarium solani en
las semillas de soya (Glycine max L. MERRILL). En semillas de pepino la
irradiacin lser antes de la siembra estimul el crecimiento de las races
embrinicas, el nivel de fotosntesis, la actividad de la peroxidasa y redujo el
contenido de pigmentos en las hojas (Shaban et al., 1988). Efectos relacionados
con la luz lser de baja intensidad puntualizan la importancia de las caractersticas
de la irradiacin como: longitud de onda (, nm), tiempo de irradiacin (t, s) y dosis
de irradiacin (D, J/cm2) para producir efectos favorables (Michtchenko et al.,
2001).
El desarrollo de una tcnica que pueda ser aplicada como un tratamiento pre-
siembra para mejorar el vigor de la semilla podra ser de gran utilidad.
La tecnologa de lseres semiconductores ha experimentado un decremento en
los precios (Steele, 2002); debido a los cambios en la industria de procesos
manufactureros. Esto hace que los lseres semiconductores sean una opcin
potencialmente vlida en el rea de semillas; por lo cual el presente trabajo de
investigacin se plante con el objetivo de estudiar los efectos de la radiacin
lser de baja intensidad en el vigor de las semillas de maz.
48
3.4 OBJETIVO
3.5 HIPTESIS
MATERIALES Y MTODOS
49
Cuadro 3.1 Dosis de irradiacin lser aplicados a la semilla de maz.
Dosis = mJ/cm
50
emergencia de plntulas, estimada de acuerdo a Maguire (1962) y peso seco de
las mismas. Las evaluaciones de la emergencia de las plntulas fueron
efectuadas diariamente durante 9 das consecutivos contndose a partir del
dcimo en que inici la emergencia de plntulas. Slo plntulas normales fueron
registradas de acuerdo con las reglas de la ISTA (ISTA, 1993). Al final del
experimento se determin la materia seca de las plntulas separando su parte
area de la raz para introducirlas por separado en bolsas de papel perforado y
despus colocarlas en una estufa a una temperatura de 70 C por 72 horas,
tiempo despus del cual fue evaluado el peso seco.
En el Cuadro 2.2 se presentan los resultados del anlisis de varianza para las tres
variables de vigor de semilla estudiadas.
51
Cuadro 3.2. Anlisis de varianza para velocidad de emergencia, plntulas
emergidas (%) y peso seco de plntulas (g).
52
2,0 2
3.2 mW/cm
ED 2
1,9 t = 1 minuto 5.5 mW/cm
E 2
BA A I = 20 mW/cm2 20 mW/cm
1,8 BC
Velocidad de Emergencia
BCD ECD
1,7 BCD BC
ED ECD
1,6 ECD
ECD
ED ED
1,5 ED
ECD
ECD
1,4
1,3
1,2
1,1
ECD
1,0
DMS = 0.2641
0,9
0 100 200 300 400 500 600
Control
Tiempo (s)
FHEG H
0,9 FEGD FHG
FHG
0,8
0,7
0,6 FHEG
0,5
0,4
54
100 t = 1 minuto 2
I = 20 mW/cm2 3.2 mW/cm
% de Emergencia de Plntulas
2
EGDF 5.5 mW/cm
2
90 G 20 mW/cm
BA A
BDAC EGDFC
EBDFC BAC
80 EBDAC EGDFC EGDFC
EGDFC EGDFC
EGDF EGF
70 EGDFC EGDFC
EGDFC
60
50
GF
40 DMS = 12.181 %
El tratamiento de la semilla de maz (Zea mays L.) con luz lser emitida por un
lser semiconductor dio lugar a bioestimulaciones que incrementaron
significativamente los tres parmetros de vigor estudiados, y por ende la calidad
fisiolgica de las semillas.
Considerando la definicin de la AOSA (1983) para el vigor: son aquellas
propiedades de las semillas, las cuales determinan el potencial para una rpida y
uniforme emergencia de plntulas y desarrollo de plntulas normales bajo un
amplio rango de condiciones de campo; los resultados obtenidos confirman que la
irradiacin lser es un mtodo viable para mejorar el vigor de la semilla, porque
hubo un incremento de tres parmetros de vigor: velocidad de emergencia
(emergencia rpida), peso seco (rpido desarrollo), y emergencia de plntulas
(potencial superior).
58
90
80
70
N de plntulas emergidas
60
50
40
30
20
10
Testigo Mejor com binacin
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Figura 3.4. Emergencia diaria de plntulas del testigo y del mejor tratamiento
3.8 CONCLUSIONES
59
Debido a que las respuestas a la irradiacin lser dieron origen a
bioestimulaciones tanto benficas como negativas en vigor de semilla, es muy
importante definir dosis especficas de irradiacin para cada genotipo estudiado.
AGRADECIMIENTOS
Expreso mi profundo agradecimiento por la cooperacin y apoyo brindado en el
rea de Mejoramiento y Control de la Calidad Gentica del Programa de Semillas
del Colegio de Postgraduados.
3.9 BIBLIOGRAFA
Hampton, J. G. (2002) What is seed quality ? Seed Science & Technology 30, 1-
10.
60
Hernndez, A. C., Michtchenko, A. and Dominguez, J. (2001) Biostimulation
effects of low-intensity laser light on cucumbers seeds. 6to Sexto Congreso
Nacional de Ingeniera Electromecnica y de Sistemas, ESIME, IPN, D.F
(Mxico).
Steele, R. (2002) Review and Forecast of the laser markets, part II: Diode Laser.
Laser Focus, 61-80
Van de Venter, A. (2000) What is seed vigour? ISTA Vigour Test Committee. ISTA
News Bulletin 121, 13-14.
61
EFECTOS DE LA LUZ LSER EN EL VIGOR DE LA SEMILLA DE
MAZ (Zea mays. L): Semilla sin colorante
4.1 RESUMEN
62
4.2 SUMMARY
laser light treatment on Zea mays L. seed with single irradiation. The experiment
graduated College (Mexico). A factorial of four intensities and four times of AsAIGa
a single cross hybrid. The laser seed irradiation significantly increased seedling
emergence rate, seedling dry weight and emergence in soil. The results of our
study point to that, the optimum combination was an intensity of 9.7 mW/cm2
seedling emergence rate (33.19%), in dry weight (14.45%) and emergence (25%)
with relation to the control (without irradiation). From these results the laser
irradiation of the seeds increases the seedling emergence in the second and third
day.
Keywords:
Zea mays L., laser irradiation, seed vigour, seed enhancement,
seedling emergence.
63
4.3 INTRODUCCIN.
64
resultar efectiva la aplicacin de la irradiacin en semillas, este tipo de lseres
pueden convertirse en una alternativa para mejorar el vigor inicial en diferentes
especies.
4.4 OBJETIVOS
4.5 HIPTESIS
Semillas de maz (Zea mays L.) del hbrido de cruza simple CL1 x CL4, producida
en 1999; proporcionada por el rea de Mejoramiento y Control de Calidad
Gentica del Programa en Produccin de Semillas del Colegio de Postgraduados.
El tamao de la semilla fue uniformizado usando cribas redonda y oblonga de
6.5mm y 5.5 mm respectivamente, siendo de 189.5 g el peso promedio de 1000
semillas.
65
4.6.2 Luz lser
Se emple un lser semiconductor de AsAlGa con una potencia de 30 mW y =
660nm, como medidor de potencia se utiliz el modelo 45-545 de la compaa
Metrologic Instruments, Inc.
Intensidades
mW/cm2 0 30 60 120 300
0 0*
4.9 0.1471 0.294 0.588 1.47
9.7 0.291 0.582 1.164 2.91
19.8 0.594 1.188 2.376 5.94
27.3 0.819 1.638 3.276 8.19
* Control
Dosis = J/cm2
66
4.6.4 Prueba de Vigor
emple un suelo del tipo franco arcilloso. Cada semilla fue ubicada a 1 cm de
corona; luego se cubri con una capa de sustrato y se reg diariamente. Los
Las plntulas se extrajeron a los 11 das y fueron ubicadas en una estufa a 70C
durante 72 horas para determinar su peso seco (g). Esta prueba ha sido validada y
67
4.7 RESULTADOS Y DISCUSIN
El ANOVA para las tres variables revelan diferencias significativas (p < 0.05) en
+ = Significancias al 5% de probabilidad
LSD (0.05) = Diferencias significativas mnimas al 5% de probabilidad.
C.V. = Coeficiente de variacin
68
BAC
t = 1 minuto
A
BA I = 9.7 mW/cm2 4.9 mW/cm
2
3,4 DE
BDEC
DE DE DE
DE BDEC
3,2 BDEC E
DE BDEC
3,0 DE
2,8
2,6
2,4
DMS = 0.5366 %
1,2 DC
Peso seco (g)
1,1
1,0
0,9
DMS = 0.1481 ( g )
0,8
2
BDAC 19.8 mW/cm
90 EBDC EDC 2
EBDC
ED 27.3 mW/cm
85 ED
80
75
70
65
60
55
DMS = 13..508 %
50
45
40
0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300
Tiempo
Figura 4.3. Efectos de la irradiacin (s)
lser en la emergencia de plntulas
60
No. de plntulas emergidas
50
40
El mejor
tratamiento
30 Control
20
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7
Tiempo (das desde el inicio de la emergencia)
74
4.8 CONCLUSIONES
1. La luz lser a determinados parmetros de irradiacin increment el vigor
de las semillas de maz.
75
4.9 BIBLIOGRAFA
Artola, A., Carrillo-Castaeda, G. and Garcia de los Santos, G. (2003)
Hydropriming: A strategy to increase Lotus corniculatus L. seed vigour. Seed
Science & Technology 31(2): 455-463.
Danila C. Ristici M., and Ristici E. (2003) : He-Ne Laser Beam Irradiation Effect
on Germination response of Corn Plant Seeds. II International Conference of
Influence of electromagnetic field on agricultural environment. Lublin, Poland.
Hampton, J.G. (2002) What is seed quality? Seed Science & Technology 30 (1):
1-10.
Hernndez, A. C., Michtchenko, A. and Dominguez, J. (2001) Biostimulation
effects of low-intensity laser light on cucumbers seeds. 6to Sexto Congreso
Nacional de Ingeniera Electromecnica y de Sistemas, , ESIME-IPN, D.F
(Mxico).
76
Ouf, S. A. and Abdel-Hady, N. F. (1999) Influence of He-Ne Laser Irradiation of
Soybean seeds on seed myclofora, growth, nodulation, and resistance to Fusarium
solani. Folia Microbiol . 44 (4): 388-396
Steele, R. (2002) Review and Forecast of the laser markets, part II: Diode Laser.
Laser Focus: 61-80
Van de Venter, A. (2000) What is seed vigour? ISTA Vigour Test Committee. ISTA
News Bulletin 121: 13-14.
Vasilevski, G. and Bosev, D. (1997). laser light as a biostimulator into the potato
production. Acta Hort. (ISHS) 462:325-328
Vasilevski, G. and Bosev, D. (1999). Results of the effect of the laser light on
some vegetables. Acta Hort. (ISHS) 462:473-476
77
Wilde W. H. A., Parr W.H., and McPeak D. W. (1969) Seeds bask in laser light.
Laser Focus, 5, 23: 41-42
AGRADECIMIENTOS
78
5. CONTENIDO DE CLOROFILAS EN HOJAS DE PLNTULAS
PROVENIENTES DE SEMILLA IRRADIADA CON LUZ LSER
5.1 RESUMEN
El objetivo en este estudio fue evaluar el efecto producido en el contenido de
clorofilas en hojas de plntulas de maz, a partir de semilla tratada con luz lser
emitida por un lser semiconductor de AsAlGa, en pre-siembra. Se utilizaron
semillas del hbrido de cruza simple CL1 x CL4, las cuales fueron expuestas a
diferentes intensidades y tiempos de irradiacin. El experimento se condujo en
condiciones de invernadero; bajo un diseo de bloques completos al azar con tres
repeticiones. La unidad experimental consisti de 10 semillas. El espectro de
absorcin ptico de una porcin de las hojas de las plntulas se obtuvo mediante
la tcnica de espectroscopia fotoacstica. El espectro de absorcin de una porcin
de las hojas fue obtenido para evaluar las diferencias cualitativas en los picos de
absorcin de las clorofilas as y clorofilas bs. Los datos fueron sujetos al anlisis
de varianza (ANOVA) usando el procedimiento del SAS (SAS, Versin 1998). Para
la comparacin de los tratamientos se emple la prueba de diferencias mnimas
significativas (DMS) al nivel del 5% de probabilidad. El ANOVA para ambas
clorofilas revelan diferencias significativas en los tratamientos (P 0.05).
decrementando hasta un 22.731% el nivel de la seal fotoacstica a un tiempo
de 30 segundos, e intensidad de 27.3 mW/cm2 el nivel de clorofila a y aumentando
9.96%, para un tiempo de 5 minutos y un nivel de Intensidad de I1 = 4.9 mW/cm2,
la clorofila b.
Palabras clave:
79
5.2 SUMMARY
Keywords: Zea mays L., corn seeds, laser irradiation, chlorophyll , photoacoustic
spectroscopy
80
5.3 INTRODUCCIN
5.4 OBJETIVOS
Estudiar el efecto de diferentes intensidades y tiempos de radiacin lser de baja
intensidad en el espectro de absorcin de hojas de plntulas de maz ,
provenientes de semillas tratada con luz lser.
5.5 HIPTESIS
81
5.6 MATERIALES Y MTODOS
Se utiliz semilla del hbrido de cruza simple (CL1 x CL4) proporcionada por el
Area de Mejoramiento y Control de la Calidad Gentica del IREGEP, y producido
en 1999. El tamao de la semilla fue uniformizado usando cribas redonda y
oblonga de 6.5mm y 5.5 mm respectivamente, siendo el peso promedio de 1000
semillas de 189.5 g.
* Control
Dosis = J/cm2
82
5.6.3 Establecimiento de la prueba
Los datos registrados fueron sometidos a una anlisis de varianza usando los
procedimientos del SAS GLM (SAS, versin1998). La prueba de diferencias
mnimas significativas (DMS) al nivel de 5% de probabilidad fue aplicado para la
comparacin de los tratamientos (Steel and Torrie, 1980).
83
un fibra ptica hacia la ventana de una celda fotoacstica cerrada
hermticamente, de tal forma que incide sobre la muestra que se est analizando.
La seal generada en la celda fotoacstica , se detecta mediante un amplificador
lock in que est conectado a una terminal de datos que mediante un programa va
registrando los resultados de las mediciones obtenidas La configuracin
experimental usada en este estudio se muestra en la Figura 4.1.
84
5.7 RESULTADOS Y DISCUSIN
Las amplitudes de la seales fotoacsticas que corresponden a las clorofilas a (en
680 nm) y b (en 650 nm) fueron introducidas en el programa SAS, considerando
los 8 tratamientos ms el control (semillas sin radiacin) en sus tres repeticiones.
El ANOVA para los dos parmetros revelaron diferencias significativas (p < 0.05)
en los tratamientos (Cuadro 4.2).
Del Cuadro 5.2 se desprende que los tratamientos aplicados presentaron una
respuesta diferente por el efecto de irradiacin lser; esto es, que existieron
diferencias significativas (p 0.05) entre tratamientos para las variables
estudiadas.
En la Figura 5.2 se muestran los efectos de la irradiacin lser en los espectros
promedios de absorcin ptico de las hojas de plntulas, obtenidos de las tres
repeticiones.
85
1.35
1.3
I1 , t =30 s
1.25
I1, t =60 s
Amplitud de la seal PA
1.2 I1 , t = 120 s
I1 , t = 300 s
1.15 I4, t = 30 s
1.1 I4, t =60 s
I4, t =120 s
1.05 I4, t =300 s
control
1
0.95
0.9
600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
Longitud de onda (nm)
Figura 5.2 Espectros de absorcin promedios del nivel de clorofila en la primera hoja ligulada de plntulas de maz (Zea
mays L.) a). A una Intensidad de I1 = 27.3 mW/cm2 b) A una Intensidad de I2= 4.9 mW/cm2 y c ). Control
2
27.3 mW/cm
1,4 A 4.9 mW/cm
2
C
BAC
1,3 BA
BA
BC
Seal FA
1,2
A
1,1
1,0
BAC
A
0,9 DMS = 0.1756
Figura 5.3 Influencia de los tiempos de irradiacin en el contenido de clorofila a, para I1 = 27.3 mW/cm2
e I2 = 4.9 mW/cm2 .
2
27.3 mW/cm
1,4 4.9 mW/cm
2
DC
A
1,3 D
BA
BDC
Seal FA
1,2 DC
BDC
BAC
1,1
BAC
1,0
Figura 5.4 Influencia de los tiempos de irradiacin en el contenido de clorofila b, para I1 = 27.3 mW/cm2
e I2 = 4.9 mW/cm2
88
En la Fig
ura 5.2 se puede observar que existen diferencias entre las curvas resultantes del
espectro de absorcin ptico de cada tratamiento y el control; as mismo existen
diferencias en los puntos picos del nivel de clorofila a (680nm) y clorofila b (650
nm).
Se puede observar que la clorofila a, bajo las condiciones en que fue llevado a
cabo el experimento y con los tiempos e intensidades de irradiacin manejados
, se ve afectada, con una reduccin de hasta un 22.731% en el nivel de la seal
FA a un tiempo de 30 segundos, e intensidad de 27.3 mW/cm2; aumentando para
un tiempo de 30 s , slo un 0.59%, a una intensidad de 4.9 mW/cm2. Para el caso
de la clorofila b, se tiene, para igualmente una reduccin en su nivel para un
tiempo de 30 s, pero el decremento es de un 16.185%, con I = 27.3 mW/cm2 en
cambio, el aumento de la clorofila es del, 9.96%, para un tiempo de 5 minutos y un
nivel de Intensidad de I = 4.9 mW/cm2. La interaccin de la luz lser con la semilla
produce una afectacin menor en la clorofila a, para producir el aumento de sta,
a una intensidad menor; en cambio la afectacin para disminuir el nivel del
espectro se presenta al nivel de intensidad mayor y un tiempo de 30 s. Para el
caso de la clorofila b, se presenta mayor aumento que la clorofila a, al nivel mas
bajo de intensidad aplicado y en relacin al decremento, ste es menor que el
producido en la clorofila a
Shaban et al. (1988) reportan modificaciones en algunos procesos fisiolgicos
mediante la irradiacin lser antes de la siembra en semillas de pepino como lo
es en el nivel de clororofila a y b; en ambos los contenidos de pigmentos
disminuyeron y la intensidad de la fotosntesis aument. Ouf et al. (1999) indican
que con un lser de He-Ne la clorofila a fue menos afectada que la clorofila b. La
Protochlorophyllide es una sustancia clave en la biosntesis de la clorofila en las
angiospermas. Las reacciones a travs de las cuales la clorofila es formada son
catalizados por la fotoencima NADP: photochlorophyllide oxidoreductase, la cual
es controlada por un gen definido. Esto sugiere que la irradiacin lser interacta
con el gen responsable para la sntesis de la clorofila, de acuerdo a estos
resultados y los resultados reportados por OUF et al. (1999).
En otros estudios realizados en donde se establecieron los niveles de intensidad
similares a stos, pero en condiciones de la semilla sin colorante, no se
encontraron diferencias significativas.
5.8 CONCLUSIONES
Los resultados experimentales muestran que hay una bioestimulacin por la
interaccin de la luz lser en los fotorreceptores de las semillas de maz. Se
encontraron diferencias significativas en la amplitud de la seal PA, para las
semillas tratadas en los picos correspondientes en las clorofilas a y b.
Para las clorofila a (680 nm) y b (650 nm) a 30 segundos de irradiacin y 27.3
mW /cm2 de intensidad lser, la seal fotoacstica tuvo una reduccin del 22.75%
y del 16.2 % respectivamente, cuando se compararon con la muestra de control.
y b respectivamente.
AGRADECIMIENTOS
5.9 BIBLIOGRAFA
1. Vasilevski, G. (2003) Perspectives of the application of biophysical
methods in sustainable agriculture. Bulgarian Journal Plant Physiology.,
Special Issue,179-186
2 Vasilevski, G. and Bosev, D. (1999). Results of the effect of the laser light
on some vegetables. Acta Hort. (ISHS) 462:473-476
92
4. Hernndez, Aguilar C., Michtchenko, A. and Dominguez, J. (2001)
Biostimulation effects of low-intensity laser light on cucumbers seeds. 6to
Sexto Congreso Nacional de Ingeniera Electromecnica y de Sistemas,
ESIME-IPN, D.F (Mxico).
7 Zhi Qi, Ming Yue, Xun-Ling Wang. (2000) Laser pretreatment protects
cells of broad bean from UV-B radiation damage. Journal of Photochemistry
and photobiology B: 59, 33-37
93
15. Ouf, S. A. and Abdel-Hady, N. F. (1999) Influence of He-Ne Laser
Irradiation of Soybean seeds on seed myclofora, growth, nodulation, and
resistance to Fusarium solani. Folia Microbiologica 44, 388-396.
17. Harry Smith. (2000) Phytochromes and light signal perception by plants-an
merging synthesis. Nature 407, 585-589.
18. Ouf, S. A. and Abdel-Hady, N. F. (1999) Influence of He-Ne Laser
Irradiation of Soybean seeds on seed myclofora, growth, nodulation, and
resistance to Fusarium solani. Folia Microbiologica 44, 388-396.
6.1 RESUMEN
94
En el presente estudio se plante el objetivo de determinar si la irradiacin
de las semillas de maz con un diodo lser de baja intensidad modifica la cantidad
de semilla que contiene micoflora, as como la germinacin, crecimiento y
morfologa de las plntulas bajo condiciones controladas. Se aplicaron cinco
tiempos de irradiacin (30, 60, 180, 300 y 600 segundos) y dos niveles de
intensidad de irradiacin ( I1 = 16.31 e I2 = 4.65 mW/cm2) con un diodo lser de
= 660 nm, potencia 27.4 mW). Posterior a la irradiacin de las semillas, se llevaron
a cabo las pruebas de germinacin y de sanidad de la semilla. La irradiacin lser
disminuy significativamente la cantidad de semilla infestada con el hongo
fusarium s.p. La combinacin de I1 e I2 a un tiempo de irradiacin de 5 minutos
disminuy significativamente (p 0.05) la cantidad de semilla infestada con el
hongo en un 61.11%, con relacin al control (no radiada). De estos resultados se
desprende que la tecnologa lser puede potencialmente convertirse en una
alternativa para el control de la sanidad en semillas de diferentes especies, as
como en futuras investigaciones de las semillas de maz.
6.2 SUMMARY
In the present study we investigated about the effects of the low intensity laser
irradiation on the Mycoflora content in corn seeds. Also the effects on the
germination, grown and morphology of the seedlings, under controled confitions,
95
were studied. Five irradiation times were applied (30, 60, 180, 300 and 600
seconds and two intensity levels (( I1 = 16.31 e I2 = 4.65 mW/cm2) by using a diode
laser ( = 660nm and power of 27.4 mW). After of the seed irradiation studies of
germination and seed healthy were developed. Laser irradiation significantly
diminish the quality of seeds infested with Fusarium s.p. fungi. The combination of
I1 and I2 , at five minutes of irradiation time, diminish (p 0.05) the quantity of
infested seeds with the fungi up to 61.11% when compared with the control seed
(no irradiated). From these results we conclude that low intensity laser irradiation
could be an alternative method to control the pathogenicity of seed in different
species.
Keywords:
Zea mays L., laser irradiation, fungi, fusarium spt, diode laser.
6.3 INTRODUCCIN
96
El empleo de lseres de baja intensidad es una tcnica aplicada para
modificar el comportamiento celular y molecular de diferentes tejidos vivos. Su
aplicacin ms amplia es de carcter mdico (Giavelli et al., 1998; Harazaki y
Isshiki, 1997) y aunque algunos reportes indican que su aplicacin en plantas y
plntulas aumenta el crecimiento y la tolerancia a ciertas enfermedades (Ouf y
Abdel-Hady, 1999); no se han desarrollado suficientes experimentos para analizar
los efectos producidos en semilla infestada.
Entre los factores que limitan la produccin del cultivo del maz, se
considera a la pudricin radical y del tallo como las ms importantes y destructivas
de este cultivo en el mundo, siendo el Fusarium moniliforme y el Fusarium
graminearum algunos de los hongos asociados con ms frecuencia (De Len,
1984; Agrios, 1985). En Mxico, esta enfermedad se encuentra presente en las
zonas maiceras, asociadas a especies de Fusarium y la magnitud de los daos
es mayor al causado por cualquier otra enfermedad de este cultivo (Revelo Morn,
1993). Adems que las enfermedades se pueden transmitir de un cultivo al
siguiente, a travs de la semilla, la infestacin de semillas o granos con hongos
genera una reduccin en la germinacin, reduccin de salud y de longevidad,
prdidas en masa y cambios bioqumicos (Ouf et al., 1999), adems de que
producen micotoxinas que son txicas para el hombre y el ganado cuando se
consume grano muy infectado (CIMMYT, 2000)
Hasta el momento no se dispone de informacin acerca de si la irradiacin
con un diodo lser de 660 nm, modifica la cantidad de semilla de maz con
patgenos. Por ello se plante esta investigacin, con los objetivos e hiptesis
siguientes.
6.4 OBJETIVOS
97
6.5 HIPTESIS
La irradiacin lser a determinada combinacin de tiempo e intensidad de
irradiacin puede afectar a los patgenos asociados en la semilla de maz ( Zea
mays L.
98
Dosis = mJ/cm
La semilla fue teida con rojo metil en un concentrado de 1gr por 1 litro de agua,
para lo cual se humedecieron en el colorante antes de ser expuestas a la
irradiacin. El medidor empleado para determinar la potencia del lser fue el
modelo 45-545 de la compaa Metrologic Instruments, Inc.
99
la radcula apuntando hacia la parte inferior de la toalla y el lado del embrin
hacia arriba; una vez colocadas las semillas se taparon con papel hmedo y se
enrollaron, para luego colocarlas en bolsas de plstico abiertas en la parte
superior. Se introdujeron las bolsas de plstico; en una cmara de germinacin a
25 C, ponindolas en posicin vertical; para al sptimo da de haber sido
sembradas se determinaron las cantidades de plntulas normales y anormales, y
semillas no germinadas en cada repeticin. El conteo de las semillas germinadas
se realiz al sptimo da tal y como lo dicta la ISTA.
En el Cuadro 6.2 se presentan los resultados del anlisis de varianza para las
variables estudiadas: Cantidad de semilla con algn tipo de patgeno y cantidad
de semilla que contiene el hongo Fusarium sp, en dos situaciones: semilla
desinfectada para realizar la prueba y semilla no desinfestada
100
Variables de respuesta Media Prueba F C.V. DMS (0.05)
Semilla Desinfestada
Semilla No Desinfestada
Del Cuadro 6.2 se desprende que la semilla de maz CL1 X CL4 (producida en
1999), present una respuesta diferente en la cantidad de semilla infestada por
efecto de irradiacin, con los tratamientos que se aplicaron al combinar 2
intensidades y 5 tiempos de irradiacin. Para las variables estudiadas: cantidad de
semilla con patgenos asociados, desinfectada y no desinfectada, as como
tambin la cantidad de semilla infestada con el hongo Fusarium sp, igualmente
para condiciones de semilla infestada y no desinfectada,
En la Figura 6.1 se muestran los efectos de la irradiacin lser en las variables
estudiadas, graficando el porcentaje de la cantidad de semilla infestada por
cualquier tipo de hongo a los dos niveles de intensidad aplicados I1 e I2, as como
tambin se presenta el porcentaje de semilla infestada con el hongo Fusarium sp.;
igualmente para los dos niveles de intensidad I1 e I2. La condicin de esta semilla
es la de desinfectada antes de establecer la prueba (D=Semilla desinfestada).
Se observa que las respuestas dependiendo del tiempo de irradiacin fueron en
todos los tiempos para disminuir la cantidad de semilla infestada, tanto de
cualquier tipo de patgeno como en especfico de Fusarium sp. al comparar los
101
resultados con las muestras del control ( t = 0, I = 0). Como se puede observar, la
mejor respuesta cuando para el tiempo de 5 minutos, existiendo slo una pequea
diferencia al aplicar distinto nivel de intensidad; aunque para todos los tiempos
aplicados, bajo las condiciones en que se llevo a cabo este experimento hubo
disminucin de patgenos en la semilla de maz.
Para el caso de la semilla no desinfectada (ND), se observa la grfica de la Figura
5.2, en la cual se distingue que slo al tiempo de irradiacin de 5 minutos, en el
caso de la semilla infestada con el hongo Fusarium sp hubo un decremento en el
porcentaje de la cantidad de semilla infestada.
Del anlisis de las Figuras 6.1 y 6.2 es posible afirmar que con tratamientos de
la semilla antes de la siembra, empleando un diodo lser de 660 nm y P = 27.4
mW, se puede disminuir la cantidad de semilla infestada por hongo.
102
BC Semilla con patgenos, I1
BA Semilla con patgenos, I2
BC
80
BC BC Semilla con Fusarium sp, I1
BC
BA Semilla con Fusarium sp, I2
BC BC
BA
BC
60 C BC
C
Porcentaje (%)
A
C C
C
40
BC
BA
20 BA
BA
Total patgenos, DMS = 23.957
Fusarium, , DMS = 23.734
0
0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300
Tiempo (s)
Figura 6.1 Influencia de los tiempos de irradiacin en el contenido de clorofila b, para I1 = 27.3 mW/cm2
e I2 = 4.9 mW/cm2
100
80 BC
BA
Porcentaje (%)
20
0
0 100 200 300 400 500 600
Tiempo (s)
Figura 6.2 Influencia de los tiempos de irradiacin en el contenido de clorofila b, para I1 = 27.3 mW/cm2
e I2 = 4.9 mW/cm2
104
Dichos tratamientos fueron significativamente (P 0.05) diferentes con respecto al testigo, disminuyndose en un 62.5%
la cantidad de semilla con ese tipo de hongo; en tanto que la mejor combinacin de tiempo e intensidad a la longitud de
onda manejada para disminuir la cantidad de semilla infestada por cualquier patgeno es la I = 16.35 mW/cm2 y un t = 5
minutos, ya que el decremento es de un 61.11% , con respecto al testigo.
En la semilla ND (Figura 6.2) el comportamiento para ambas situaciones; esto es patgenos de cualquier tipo y en
especfico el fusarium sp. Exclusivamente para el caso de el nivel de I2 = 4.65 mW/cm2 y para el hongo especficamente
fusarium, se da un decremento del 16.% en la cantidad de semilla infestada al compararla con relacin al testigo.
Estas respuestas estadsticamente significativas (Cuadros 5.3 y 5.4) de la irradiacin lser en el decremento de la
cantidad de patgenos en las semillas de maz, sugieren la necesidad de seguir investigando en esta tcnica, ya que es
prometedora y puede permitir el control de patgenos de la semilla de maz y en consecuencia mejorar su
establecimiento, a la vez que se limita la dispersin de enfermedades. No obstante, cabe reiterar la importancia de
encontrar la combinacin de tiempo e intensidad de irradiacin para lograr los resultados deseados.
Cuadro 6.3 Valores promedio del porcentaje (%) de semillaD y semillaND con
micoflora asociada de cada uno de los tratamientos. (patgenos totales)
Cuadro 6.4. Valores promedio del porcentaje (%) de semillaD y semillaND con el
hongo Fusarium de cada uno de los tratamientos.
Tiempo de irradiacin tiempo(s)
Intensidad
(mW/cm2 ) 0 30 60 180 300 600
Control*,
64
0 100
D 56 ba 48 ba 52 ba 24 c 40 bc
4.65 ND 100 a 100 a 100 a 84 b 100 a
D 36 bc 40 bc 48 ba 24 c 36 bc
16.31 ND 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
Para el caso particular de la cruza simple de maz CL1 x CL4, la irradiacin lser
puede ser un mtodo de utilidad prctica para mejorar las condiciones de sanidad
de la semilla. Es conveniente ampliar el mbito de su aplicacin considerando que
otros autores en el rea de microorganismos puntualizan los parmetros de
irradiacin que producen una estimulacin en crecimiento de cultivos de la
bacteria E.Coli, (Karu, 1987). Otros microorganismos eucariticos pueden ser
acelerados tambin con la adecuada combinacin de parmetros de irradiacin de
luz monocromtica (Karu, 1989).
Un comportamiento anlogo indica que con un lser de He-Ne con =
632.8 nm y potencia de salida de 7.3 mW, Ouf (1999) elimin la poblacin de
hongos en la semilla de soya a un tiempo de 3 minutos de irradiacin; Por ello
puede suponerse que de alguna manera el estmulo del lser se relaciona no solo
con la activacin del sistema bioqumico que permite el establecimiento de las
plntulas, sino que adems con los microorganismos que contenga la semilla, ya
sea en forma interna o externa
Por otro lado, no se encontraron diferencias estadsticamente significativas
entre los tratamientos en el nmero de semillas germinadas. Este resultado es
diferente a los trabajos reportados en donde la aplicacin de un lser de HeNe
aumenta la germinacin de todas las especies vegetales probadas (Ouf y Abdel-
Hady, 1999; Koper et al., 1999; Gladyszewska et al., 1998a y 1998b; Podleny y
Koper, 1998). Se cree que la percepcin del estmulo del lser HeNe ocurre va
fitocromos en una reaccin dependiente de Ca2+ (Skvarko y Demkiv, 1994). Es
posible entonces que para manifestarse el efecto de la irradiacin sea necesario
someterla a una condicin de estrs, ya que en condiciones controladas, tanto
para el diodo lser como para el lser semiconductor de los otros experimentos no
se encontraron diferencias estadsticamente significativas.
6.8 CONCLUSIONES
107
Se obtuvieron respuestas estadsticamente significativas en la disminucin de
patgenos en la semilla de maz empleando un diodo lser de 660 nm de longitud
de onda y 27.4 mW de potencia.
Para la semilla desinfectada (D) la combinacin de niveles de irradiacin que
producen los efectos ms favorables para disminuir el porcentaje de semilla
infestada por el hongo fusarium sp es: = 660 nm, intensidad = 16.35 mW/cm2
I = 4.65 mW/cm2 y tiempo de irradiacin = 5 minutos. Dichos tratamientos
fueron significativamente (P 0.05) superior al testigo, disminuyndose en un
62.5% la cantidad de semilla con ese tipo de hongo.
6.6 BIBLIOGRAFA
De Len, C. (1984). Enfermedades del maz. Una gua para su identificacin en el
campo. Centro Internacional de Mejoramiento del Maz y Trigo (CIMMYT), 3ra .
Ed. 114 p.
108
Revelo Morn Jorge Anibal (1993) Influencia de Pratylenchus pratensis en el
desarrollo de la pudricin de la raz del maz por Fusarium moniliforme. Revista
Mexicana de Fitopatologa 11(1) 13-18.
Neergaard, P. (1977) Seed Pathology, Vol. I and II. John Wiley & Sons, New York.
Harazaki, M. and Y. Isshiki. (1997). Soft laser irradiation effects on pain reduction
in orthodontic treatment. Bull. Tokyo Dent. Coll. 38:291-295.
Ouf, S.A., N.F. Abdel-Hady. (1999). Influence of He-Ne laser irradiation of
soybean seeds on seed mycoflora, growth, nodulation, and resistance to Fusarium
solani. Folia-Microbiol. 44:388-396.
Skvarko, K.O. and O.T. Demkiv. (1994). Changes in the Ca2+ content and
intracellular pH in cress (Lepidium sativum) under the influence of laser radiation.
Fiziologiya-i-Biokhimiya-Kul'turnykh-Rastenii 26:26-32.
109
Koper, R., B. Kornas-Czuczuwar, T. Procniak, J. Podlesnv (1999). Effect of
pre-sowing laser biostimulation of white lupine sedes on mecanical properties of
crop yield. Inzynieria Rolnicza 2:21-28.
7. DISCUSIN GENERAL
110
Io = 0 (Control)
1.75
I1 = 3.2 mW/cm2
1.6 I2 = 5.5 mW/cm2
1.45 I3 = 20 mW/cm2
1.3
1.15
1
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Tiempo (minutos)
1.2 80
1.05
Peso seco de plntulas. (g)
70
0.9
60
0.75
50
0.6
40
0.45
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Tiempo (minutos) T ie m p o (m in u to s )
1.4
4
1.3
Peso seco (g)
3.5 1.2
3 1.1
2.5 1
2 0.9
111
% de Plntulas emergidas
100
90
80
70
60 I1 = 4.9 mW/cm2
0 100 200 300 400
I2 = 9.7 mW/cm2
Tiempo (s) I3 = 19.8 mW/cm2
I4 = 27.3 mW/cm2
112
significativas (P 0.01) con relacin al testigo; incrementndose en un 42.89% la
velocidad de emergencia, en 48.07% las plntulas emergidas, siendo dichas
plntulas 63.24% ms pesadas que el testigo; en semilla no teida porcentajes
menores de diferencia con respecto al control fueron encontrados en la prueba de
vigor. La combinacin de los niveles de irradiacin que producen los efectos ms
favorables en los parmetros de vigor de la semilla fue la intensidad de
9.7mW/cm2 y tiempo de irradiacin = 1 minuto. Este tratamiento mostr
incrementos significativos (p 0.05) respecto a las de control en velocidad de
emergencia (33.19%), emergencia (25%) y peso seco (14.45%).
Para esta investigacin se puede afirmar que la irradiacin con lser de baja
intensidad induce una bioestimulacin positiva a determinada combinacin de
intensidad y tiempo de irradiacin que se traduce en una mejora significativa de la
calidad fisiolgica de la semilla.
Debido a que las respuestas a la irradiacin lser dieron origen a
bioestimulaciones tanto benficas como negativas en vigor de semilla, es muy
importante definir dosis especficas de irradiacin para cada genotipo estudiado.
En la literatura, no existen investigaciones donde muestren los resultados de
aplicar diferentes tratamientos de irradiacin empleando como fuente de luz un
113
lser semiconductor, para tratar la semilla de maz, ni sobre su evaluacin
empleando pruebas de vigor.
Los resultados presentados, al igual que los que se describen en el Captulo 2 y 3
presentan diferencias estadsticas significativas; en estos resultados se puede
confirmar la necesidad de elegir la combinacin de tiempo e intensidad adecuados
para lograr los efectos favorables,
En algunos resultados aplicando un tiempo de irradiacin de 1 minuto en
semillas de trigo, en una prueba de germinacin no se encontraron diferencias
estadsticas significativas entre los tratamientos (Benavides, 2003). Esto sugiere
que bajo condiciones controladas de germinacin, esto es sin someterlas al estrs
a las semillas, no existe evidencia experimental de las diferencias con respecto al
control. En cambio en las semillas irradiadas sometidas al estrs salino en ese
mismo reporte, se observ una tendencia clara hacia la disminucin de la
densidad estomtica en las plntulas conforme aument la concentracin salina a
que fue expuesta la semilla (Benavides, 2003).
Trabajos reportados en donde la aplicacin fue de un lser de HeNe han
indicado el aumento de la germinacin de todas las especies de semillas
probadas (Ouf y Abdel-Hady, 1999; Koper et al., 1999; Gladyszewska et al., 1998a
y 1998b; Podleny y Koper, 1998). Se cree que la percepcin del estmulo del
lser HeNe ocurre va fitocromos en una reaccin dependiente de Ca2+ (Skvarko y
Demkiv, 1994). Es posible entonces que el estmulo originado por el lser
semiconductor de AsAlGa sea percibido o transducido en forma tal que interacte
con el subsistema de la semilla encargado de esas funciones. Por ello puede
suponerse que de alguna manera el estmulo del lser se relaciona con la
activacin del sistema bioqumico de la planta que tiene que ver con la tolerancia
al estrs, tal como fue demostrado por Kapelev (1989)(citado por Benavides,
2003) al encontrar mayor actividad de lipasa (una enzima involucrada en las
cascadas de transduccin de seales de estrs) en semillas de Nepeta cataria
tratadas con un lser HeNe.
Es necesario seguir investigando en esta tcnica, ya que se ha probado ser un
mtodo adecuado y el productor de semillas puede aplicarlo como una
114
herramienta y as coadyuvar en el logro de un buen establecimiento del cultivo
de maz, incrementndose de esta forma la productividad de los cultivos y en
consecuencia repercutir en las cifras nacionales que impiden al pas ser
autosuficientes en la produccin de este cultivo primordial para el consumo
humano.
Al interactuar la luz lser con la semilla de maz, estimula tambin a los fitocromos
encargados de establecer el contenido del pigmento en las hojas de las plntulas,
ya que los resultados encontrados reflejan este comportamiento a determinadas
combinaciones de intensidad y tiempo de irradiacin.
Como se describi en el Captulo 4 se obtuvieron respuestas estadsticas
significativas en las clorofilas a y b contenidas en las hojas de plntulas de maz
provenientes de semilla (cruza simple de maz CL1 x CL4) que fue irradiada con un
lser semiconductor de AsAlGa de 660 nm y P = 30 mW; as para dos condiciones
diferentes de intensidad existe un patrn de comportamiento de los espectros de
absorcin (Figura 6.3)
1.35 1.35
Amplitud de la seal Fotoacstica
1.3 1.3
1.25 t1=30 s
Amplitud de la seal Fotoacstica
1.25
1.2 t2=60 s
1.2 t1 =30 s
1.15 t3= 120 s
1.15 t2= 60 s
1.1 t4 = 300 seg t3= 120 s
1.1
1.05 control t4= 300 s
1.05
1 control
0.95 1
0.9 0.95
(a) (b)
Figuras 7.3. Espectro de absorcin ptico de hojas de plntulas, Para las
clorofilas a y b.
Nota: Para a). I = 27.3 mW/cm2 , y para b). I = 4.9 mW/cm2.
115
De acuerdo a los resultados de la investigacin no se identificaron diferencias
significativas en los niveles adecuados para tratar la semilla de maz de un hbrido
CL1 x CL4 que mejoraron el vigor de la semilla y en consecuencia su calidad, ya
que: stas slo se obtuvieron con un valor alto de intensidad de irradiacin bajo y
un nivel bajo.
116
emplendo un lser de He-Ne (Shaban et al., 1988). Por otro lado, Ouf et al.,
(1999) reportan que el contenido de clorofila a y b vari dependiendo de la dosis
de irradiacin con las cuales fueron tratadas las semilla de soya antes de la
siembra; indican que para semilla irradiada por un tiempo de 1 o 3 minutos, la
formacin de clorofila a fue menos afectada que la clorofila b, con un lser de He-
Ne de P = 7.3mW. Tambin Vasilevski y Bosev (1997) reportan un incremento del
41% en clorofila en plantas de cebolla. En los resultados de esta investigacin se
concluye que en funcin de la combinacin del nivel de intensidad y del tiempo de
irradiacin se afecta mayor o menor grado tanto a la clorofila a como a la clorofila
b. Las reacciones a travs de las cuales la clorofila es formada son catalizadas por
la fotoenzima NADP: Photochlorophyllide oxidoreductase, la cual es controlada por
un gen definido (Boddi y Frank, 1997). Los resultados de esta investigacin
confirman que la irradiacin lser emitida por un lser semiconductor de 660 nm
y P = 30 mW, interacta con el gen responsable de sintetizar la clorofila, variando
de acuerdo a la combinacin de intensidad y tiempo de irradiacin.
Es un hecho conocido desde hace aos, que el maz (Zea mays L.) es un cultivo
muy exigente de fertilizantes nitrogenados. Cantidades adecuadas de nitrgeno
producen hojas de color verde oscuro, debido a que stas tienen una alta
concentracin de clorofila. La deficiencia de N resulta en clorosis (amarillamiento)
de las hojas debido a presencia de cantidades reducidas de clorofila. Este
amarillamiento se inicia en las hojas ms viejas y luego se traslada a las hojas
ms jvenes, a medida que la deficiencia se torna ms severa (Novoa, 2002)
El pigmento verde de la clorofila absorbe la energa de la luz necesaria para
iniciar la fotosntesis. La clorofila ayuda a convertir el carbono, el hidrgeno y el
oxigeno en azcares simples. Estos azcares y los productos de su
transformacin son usados para el crecimiento y desarrollo de la planta. Cuando el
N es insuficiente, las semillas y las partes vegetativas de la planta tienen bajo
contenido de protenas, en cambio cuando se aplica la cantidad de fertilizacin
adecuada de N se puede mejorar la calidad y nivel protenico del producto final
(Zepeda, 2004).
117
Vasilevski y Bosev (1997) reportan un incremento del grado de azcar en
pepinos y tomates, del 1.5 % y del 33% de vitaminas, con la aplicacin de la luz
lser. En los valores que resultaron de un anlisis bromatolgico en donde se
aplic semilla de lechuga a un minuto de irradiacin con el lser semiconductor
empleado en esta investigacin se encontr un nivel ms bajo de protena, grasas,
nitrgeno y fibra cruda en las plntulas (2003 - no publicados los resultados), lo
cual se puede deber a que ese valor de tiempo e intensidad de irradiacin no son
los adecuados para la semilla de lechuga, ya que de acuerdo a las caractersticas
de la semilla, color, tamao, estructura genotpica, etc. sern la combinacin de
tiempo e intensidad adecuados.
118
Ouf et al., (1999) indican que lograron la eliminacin total empleando un lser de
He-Ne cuya potencia fue de 7.3 mW y a un tiempo mayor a 5 minutos;
probablemente las diferencias provengan de la respuesta del lser, pus se sabe
que el lser de He-Ne posee mejores caractersticas de irradiacin que un lser
semiconductor, o tambin puede deberse a la forma en colocarse la semilla de
maz para la aplicacin de los tratamientos, que en este caso fue en semilla en
movimiento, mientras que en este estudio la posicin fue aleatoria pero fija. Otro
factor de variacin puede ser el tipo de semilla empleado, que es totalmente
distinta a la del presente estudio; adems del tipo de hongo, que en el caso
reportado fue Fusarium solani. En lo que s se coincide es que existe un tiempo
adecuado en donde se pueden eliminar los patgenos contenidos en las semillas.
Estudios en hongos Endomyces magnusii Torulopsis sphaerica y otros ms, han
reportado cambios en la actividad respiratoria y la sensitividad a varios agentes
qumicos (Karu, 1996). Lo que ha sido indudablemente repetible a nivel de
microorganismos es la necesidad de emplear la dosis, la intensidad y el tiempo de
irradiacin adecuados para estimular el crecimiento de los microorganismos; de
los resultados de esta investigacin puede decirse que cuando la semilla est
contaminada con patgenos, el efecto del tratamiento depender de las
caractersticas del lser, de las condiciones de la semilla y del tiempo e intensidad
de irradiacin de la luz lser y as, bajo las condiciones de los experimentos
realizados, se pudieran eliminar parcialmente los patgenos contenidos en la
semilla, no totalmente pero si en cierto porcentaje.
Las necesidades actuales de los productores de semilla son entre otras cosas
tener mtodos viables para conservar en las mejores condiciones a la semilla,
sobre todo cuando se tiene almacenada, ya que es un ente vulnerable a cualquier
contaminacin por enfermedades; por tal motivo antes de sembrar se podra estar
pensando en tcnicas de tratamiento con luz lser para mejorar de esta forma la
calidad de la semilla, eliminando en gran medida patgenos asociados.
119
En esta investigacin se demostr que un lser semiconductor puede ser
un elemento bioestimulador de procesos metablicos en la semilla, ya que gracias
al mecanismo de accin de la radiacin lser con el objeto biolgico estudiado, se
encontraron diferencias estadsticas significativas en los parmetros evaluados.
En la agricultura sustentable, una de las metas es utilizar ms bioestimuladores,
(Vasilevski, 2003). El emplear como bioestimulador un lser para fotoactivar
semillas, requiere investigacin de la combinacin de los parmetros de
irradiacin, hablando de longitud de onda, intensidad y tiempo de irradiacin. Con
los datos disponibles en la literatura, se encontraron que se han manejado los
lseres de Nitrgeno (337.1 nm), de argn (514.5 nm), de CO2 (10,060 nm), de
Rub (694 nm) y mas ampliamente el lser de He-Ne.
El lser de He-Ne emite en la regin del espectro visible a una longitud de onda
de 632.8 nm y es el que ms ha sido empleado en diversas investigaciones, en los
ltimos aos; para las cuales en todas ellas han variado las dosis de irradiacin
aplicadas. De acuerdo a los resultados en esta investigacin se puede decir que
el lser semiconductor o diodos lser pueden ser empleados para tratar la semilla
de maz antes de la siembra ya que produce efectos al irradiar la semilla a
determinada combinacin de tiempo e intensidad de irradiacin.
La base del mecanismo de la estimulacin de acuerdo a Bielozierskich y
Zolotariewa citado en Koper et al., (1996); indican que: es el sinergismo entre
las propiedades de la luz lser : coherencia, polaridad y monocromaticidad y la
familia de fotorreceptores: los fitocromos, trayendo como resultado de la
irradiacin de semillas la fotoactivacin de stos. Los cuales intensifican el
desarrollo de las plantas en las fases de crecimiento. De esta forma de acuerdo a
la Figura 6.4 (Quail, 2002) que representa el espectro de absorcin de los
fitocromos, se observa que para fotoactivar los procesos fisiolgicos que llevan a
cabo los fitocromos conviene estar ubicados en un rango de longitud de onda de
610 nm a 680 nm; as es que en los ltimos aos la mayora de las investigaciones
reportadas corresponden al empleo del lser de He-Ne, el cual se ubica en la
longitud de onda de 632.8 nm.
120
1.2
0.8
0.6
Pr
Pfr
0.4
0.2
0
350 375 400 425 450 475 500 525 550 575 600 625 650 675 700 725 750 775 800
Los diodos lser en los ltimos aos han reportado precios ms econmicos,
(mucho ms bajos que los lser de He-Ne.) Con este trabajo, se proporcionan las
caractersticas en funcin del tiempo e intensidades necesarias para que se
puedan radiar las semillas de maz y mejorar las condiciones de calidad, hablando
en trminos de mejoramiento de vigor y mejoramiento de la calidad sanitaria.
121
8. CONCLUSIONES GENERALES
Y PERSPECTIVAS
122
Existen decremento o aumento del nivel de clorofila a y b dependiendo de
la combinacin del tiempos e intensidades de irradiacin de la luz lser de baja
intensidad.
El tratamiento con luz lser con las caractersticas del lser semiconductor
manejado en esta investigacin, resulto ser un mtodo viable para ser empleado
en el rea agrcola.
123
retirndose las mazorcas daadas, para dejar exclusivamente las que a la vista
no presentan gran dao visual, as se pasa desgranado. Una vez desgranadas las
mazorcas se pasa por elevadores para subirlas a tolbas, en donde se lleva a cabo
una clasificacin de acuerdo al tamao de la semilla (grandes, medianas, chicas),
para bajar en forma independiente los distintos tamaos hacia el tratamiento de la
semilla con un colorante (llamado Rodhamina) y un fungicida, por ejemplo el
Intercaptan para los hongos o Carbocaptan.
124
As con la consciencia de que debemos contribuir e investigar siempre, no
olvidndonos de que se debe conservar la vida y el habitt humano este mtodo
junto con otros mtodos que se estn estudiando entusiastamente y
comprometidamente en el mundo y que han mostrado no daar ni los alimentos
que consumimos , ni el ambiente se presenta esta aportacin que se espera abra
camino a otro enfoque y forma de darle un uso adecuado a tantos avances
tecnolgicos que a partir de los aos 50s del siglo pasado han tenido un ascenso
impresionante.
125
IX BIBLIOGRAFA CITADA EN CAPTULO 1, 2, DISCUSIN GENERAL Y
ANEXOS.
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133
134
135
ANEXOS
136
ANEXO 1
Siembra: 16/XII/2002
Repeticiones
137
24 CS1 (1x4) I1 5 min 34 49 102 126
25 CS1 (1x4) I1 10 min 8 57 81 120
26 CS1 (1x4) I3 30 21 51 97 123
seg
27 CS1 (1x4) I3 1 min 38 53 108 145
28 CS1 (1x4) I3 2 min 30 58 88 129
29 CS1 (1x4) I3 3 min 37 39 47 115
30 CS1 (1x4) I3 5 min 7 72 80 132
31 CS1 (1x4) I3 10 min 35 56 107 135
32 CS1 (1x4) I4 30 seg 17 48 92 138
33 CS1 (1x4) I4 1 min 36 50 105 116
34 CS1 (1x4) I4 2 min 31 62 79 121
35 CS1 (1x4) I4 3 min 32 47 84 136
36 CS1 (1x4) I4 5 min 28 55 85 142
37 CS1 (1x4) I4 10 min 29 42 87 125
38 CS (1x4) testigo 25 52 99 131
Cama de semillas
152
152 115 114 77
REPETICION I REPETICION II
1 1 38 39 76
138
A.1 RESULTADOS
139
2 4 29 1.689160839 80 1.3 60 0.81 1 6 15 20 20 20 20 20 20
2 1 30 1.690024681 84 1.43 64 0.84 3 9 16 17 17 18 18 21 21
2 2 30 1.570512821 80 1.25 60 0.76 0 0 15 20 20 20 20 20 20
2 3 30 1.767191142 88 1.26 60 0.69 0 1 15 20 20 20 20 22 22
2 4 30 2.054574592 92 1.92 84 0.97 4 17 21 22 22 22 22 23 23
2 1 31 1.606942078 80 1.02 48 0.55 0 2 12 18 19 19 19 20 20
2 2 31 1.406043956 72 1.17 56 0.55 0 0 14 14 15 18 18 18 18
2 3 31 1.726498501 84 1.15 52 0.62 1 7 13 18 19 19 21 21 21
2 4 31 2.178088578 96 1.43 60 0.94 7 19 15 23 23 24 24 24 24
2 1 32 1.657692308 76 1.35 60 0.78 1 12 15 19 19 19 19 19 19
2 2 32 1.668976856 84 1.51 72 0.78 0 1 18 17 20 20 21 21 21
2 3 32 1.965617716 92 1.73 80 1.14 0 9 20 23 23 23 23 23 23
2 4 32 1.842424242 80 1.84 80 1.03 6 16 20 20 20 20 20 20 20
2 1 33 1.061421911 52 0.84 40 0.66 0 1 10 12 12 13 13 13 13
2 2 33 1.768825619 88 1.11 52 0.73 0 4 13 19 20 21 21 21 22
2 3 33 1.587262737 76 1.21 56 0.47 1 5 14 17 19 19 19 19 19
2 4 33 1.85236014 84 1.56 68 0.95 4 14 17 20 20 20 21 21 21
2 1 34 1.673150461 84 1.04 48 0.6 0 5 12 16 18 19 20 20 21
2 2 34 1.457692308 72 1.08 52 0.64 0 0 13 17 17 18 18 18 18
2 3 34 1.892948718 96 1.25 60 0.55 0 0 15 20 20 22 24 24 24
2 4 34 1.907886558 88 1.7 76 1.07 1 14 19 21 21 21 21 21 22
2 1 35 1.878554779 92 1.49 68 0.92 1 9 17 22 23 23 23 23 23
2 2 35 1.451964702 72 1.35 64 0.76 0 2 16 17 18 18 18 18 18
2 3 35 1.223484848 60 1.1 52 0.6 0 2 13 13 13 13 15 15 15
2 4 35 1.897785548 84 1.68 72 1.11 7 15 18 20 20 21 21 21 21
2 1 36 1.723380786 84 1.24 56 0.66 1 9 14 16 17 18 21 21 21
2 2 36 1.626440226 80 1.26 60 0.79 0 1 15 18 19 20 20 20 20
2 3 36 1.401126651 68 1.04 48 0.87 0 5 12 16 16 16 16 16 17
2 4 36 1.784848485 76 1.78 76 1.33 8 17 19 19 19 19 19 19 19
2 1 37 1.428824362 72 0.88 40 0.36 1 5 10 13 14 14 17 18 18
2 2 37 1.6126998 80 1.02 48 0.48 0 3 12 17 19 19 20 20 20
2 3 37 1.733488733 84 1.48 68 0.72 1 7 17 18 18 19 19 19 21
2 4 37 1.495134033 68 1.28 56 0.63 4 10 14 16 16 16 17 17 17
2 1 38 1.751122489 84 1.34 60 0.67 2 9 15 17 19 19 20 20 21
2 2 38 1.482112332 76 1 48 0.6 0 0 12 16 17 18 18 18 19
2 3 38 1.744366744 84 1.23 56 0.68 0 8 14 20 20 20 20 20 21
2 4 38 1.500660451 68 1.3 44 0.91 3 12 11 16 16 16 16 16 17
140
B) Experimento (Captulo 4)
Diseo Experimental
141
1 - 4to 2 - 5to 3 -6to 4 -7to
11 14 0 8 10 20
11 22 0 9 15 19
11 49 0 11 17 20
12 17 0 7 12 20
12 23 0 11 18 20
12 48 0 9 17 20
13 13 0 8 13 18
13 19 0 8 14 20
13 41 0 12 15 20
14 3 0 14 18 20
14 29 0 14 19 20
14 50 0 12 16 20
15 9 0 7 17 19
15 28 0 12 17 20
15 40 0 10 16 18
16 15 0 8 13 18
16 24 0 10 14 20
16 46 0 12 16 20
17 12 0 5 11 19
17 33 0 8 17 20
17 37 0 5 16 20
B.1 RESULTADOS
16 1 1 2.66666667 1.11 75
27 2 1 3.03333333 1.12 80
35 3 1 2.66666667 1.11 75
10 1 2 2.9 1.17 80
18 2 2 2.86666667 1.16 75
39 3 2 2.93333333 1.17 80
4 1 3 2.66666667 1.18 70
20 2 3 3.16666667 1.26 80
38 3 3 2.46666667 1.16 65
7 1 4 3.03333333 1.19 80
25 2 4 3.16666667 1.12 80
44 3 4 2.63333333 1.02 70
2 1 5 2.8 1.08 75
34 2 5 2.9 1.12 80
47 3 5 3.23333333 1.2 90
6 1 6 3.65 1.25 95
30 2 6 3.36666667 1.3 90
43 3 6 3.3 1.29 85
5 1 7 3.16666667 1.25 75
142
32 2 7 2.66666667 1.2 70
36 3 7 3.06666667 1.21 80
11 1 8 2.16666667 0.8 60
26 2 8 2.91666667 1.09 75
45 3 8 2.33333333 1.07 65
1 1 9 2.13333333 0.96 60
31 2 9 2.76666667 1.25 75
51 3 9 3.03333333 1.29 80
8 1 10 3.48333333 1.31 90
21 2 10 3.71666667 1.3 95
42 3 10 3.36666667 1.27 90
14 1 11 1.93333333 1.15 50
22 2 11 2.8 1.21 75
49 3 11 3.2 1.23 85
17 1 12 2.23333333 1.12 60
23 2 12 3.36666667 1.19 90
48 3 12 3.13333333 1.18 85
13 1 13 2.43333333 1.24 65
19 2 13 2.6 1.23 70
41 3 13 2.9 1.23 75
3 1 14 3.46666667 1.26 90
29 2 14 3.63333333 1.27 95
50 3 14 3.06666667 1.23 80
9 1 15 3.06666667 1.01 85
28 2 15 3.23333333 1.23 85
40 3 15 3 1.2 80
15 1 16 2.43333333 0.88 65
24 2 16 2.66666667 1.14 70
46 3 16 3.06666667 1.38 80
12 1 17 2 1.01 55
33 2 17 3.1 1.23 85
37 3 17 2.83333333 1.15 80
143
C). Perfiles de absorcin
(Captulo 5)
Grupo 1 de datos
1 14R1B 1C 2A 15 2B 2C 3A 16 3B 3C
600 1 1 1 1 1 1 1 1 1
601 0.99580138 1.011804636 0.979798124 0.994870478 1.002273587 1.000428633 1.010116038 1.02544312 1.015335939
602 0.995965989 1.021753659 0.970178319 0.992434112 1.01431361 0.996207746 1.003100542 1.03792414 1.021175797
603 1.01717518 1.033864944 1.000485416 0.986402696 1.016257209 0.99603433 1.009259942 1.046066419 1.051304922
604 1.015219004 1.037987655 0.992450352 0.97798815 1.022666243 0.996502227 0.993491107 1.05426282 1.055415543
605 1.013214611 1.035974787 0.990454435 0.976957862 1.03402207 0.993855175 1.0023727 1.054611603 1.057716986
606 1.014120942 1.035948577 0.992293306 0.977502756 1.035254227 1.005631121 1.020584774 1.064013711 1.055217796
607 1.012139248 1.035151817 0.989126679 0.977546598 1.03237213 1.014465534 0.994032981 1.066912218 1.068218633
608 1.031751545 1.038821109 1.024681981 0.97395468 1.019599473 1.00530392 0.981714179 1.070893155 1.074096358
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145
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146
Grupo 2 de datos
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633 1.02537 0.8702 1.07371 1.00705 1.07701 1.30026 0.96966 0.91661 1.04364
634 1.02157 0.86811 1.06394 1.01331 1.08835 1.29839 0.98116 0.91391 1.05169
635 1.03528 0.86989 1.06674 1.01944 1.0825 1.29563 0.97617 0.9077 1.04707
636 1.02929 0.86617 1.07831 1.02241 1.08266 1.30106 0.9792 0.91594 1.04407
637 1.03071 0.85653 1.06644 1.01811 1.06928 1.29379 0.97629 0.91554 1.03857
638 1.02977 0.86463 1.05888 1.00896 1.06578 1.29855 0.9753 0.90431 1.04583
639 1.02628 0.8642 1.07143 1.01793 1.07134 1.30901 0.98215 0.8909 1.04881
640 1.02882 0.85537 1.07266 1.03022 1.06741 1.30443 0.97673 0.8732 1.06127
641 1.0319 0.85829 1.08787 1.03254 1.07464 1.30629 0.97791 0.86252 1.06552
642 1.02496 0.85769 1.08611 1.04342 1.07122 1.30986 0.97527 0.84037 1.05901
643 1.02027 0.86026 1.08061 1.03649 1.06652 1.30719 0.97611 0.82891 1.06895
644 1.02083 0.86129 1.07457 1.04438 1.06117 1.29843 0.97943 0.82162 1.06414
645 1.02981 0.85787 1.09256 1.04917 1.06108 1.30294 0.97714 0.84974 1.07135
646 1.03293 0.85321 1.0923 1.06022 1.07082 1.31059 0.9777 0.86103 1.06531
647 1.02655 0.85812 1.08991 1.06562 1.0705 1.3054 0.98451 0.88648 1.06617
648 1.0315 0.86901 1.10185 1.07589 1.07658 1.30845 0.9753 0.89748 1.06593
649 1.03751 0.8686 1.11305 1.08283 1.07081 1.32569 0.98396 0.90004 1.08476
147
650 1.04276 0.87048 1.11678 1.09199 1.07216 1.3227 0.98237 0.91831 1.08714
651 1.03699 0.87282 1.13104 1.09655 1.07186 1.31575 0.98562 0.91127 1.09541
652 1.03219 0.8806 1.13256 1.10997 1.07318 1.3172 0.98936 0.90572 1.08178
653 1.03609 0.88435 1.13214 1.11599 1.06969 1.3184 0.99072 0.92821 1.0941
654 1.04511 0.87942 1.15012 1.11975 1.07715 1.31968 0.9939 0.9353 1.09925
655 1.05491 0.88924 1.15404 1.14173 1.08397 1.3097 0.98883 0.95439 1.09298
656 1.0504 0.88717 1.13909 1.13549 1.08667 1.32742 1.00017 0.95361 1.09364
657 1.0547 0.88902 1.15146 1.13888 1.0885 1.3248 1.00367 0.96484 1.0918
658 1.06101 0.89469 1.16609 1.14938 1.08727 1.32933 1.00421 0.96477 1.10022
659 1.05274 0.89988 1.17403 1.15918 1.08934 1.33381 1.00492 0.96931 1.1062
660 1.05928 0.89519 1.19013 1.17569 1.09404 1.34411 1.00868 0.98631 1.12672
661 1.05882 0.90088 1.17623 1.18506 1.08806 1.35318 1.01076 0.99343 1.1341
662 1.06371 0.90964 1.19072 1.18414 1.09929 1.34165 1.01166 0.99945 1.12736
663 1.06949 0.91204 1.20905 1.20508 1.09423 1.34916 1.01873 0.98628 1.12842
664 1.07492 0.92108 1.20842 1.21181 1.10195 1.35574 1.01668 1.00663 1.14013
665 1.0726 0.92365 1.22138 1.21862 1.10433 1.35846 1.02153 1.02269 1.14762
666 1.0732 0.93684 1.24152 1.2253 1.10915 1.36307 1.02582 1.03142 1.14587
667 1.08728 0.93328 1.23718 1.23092 1.10856 1.36851 1.0272 1.03236 1.15303
668 1.08218 0.93707 1.25124 1.25201 1.12318 1.37482 1.03178 1.04325 1.16355
669 1.08392 0.94162 1.25657 1.26791 1.12429 1.37887 1.02933 1.04062 1.16455
670 1.09808 0.94808 1.25874 1.27216 1.11792 1.3887 1.04547 1.05164 1.17804
671 1.09561 0.95708 1.27369 1.27687 1.13224 1.3974 1.03988 1.05428 1.18758
672 1.0978 0.96541 1.27503 1.28829 1.13243 1.40048 1.04001 1.06199 1.18315
673 1.09944 0.96499 1.28893 1.29213 1.13479 1.41136 1.04032 1.06288 1.18001
674 1.09779 0.9664 1.28655 1.2823 1.13049 1.42199 1.0385 1.05682 1.16478
675 1.09613 0.97101 1.28237 1.29109 1.13397 1.39955 1.04952 1.072 1.1799
676 1.10369 0.97503 1.29031 1.30473 1.12921 1.40276 1.04269 1.07556 1.18531
677 1.09819 0.96337 1.29263 1.29126 1.12914 1.39275 1.04375 1.06264 1.1808
678 1.09433 0.97549 1.29536 1.30812 1.12936 1.3947 1.0408 1.0619 1.18478
679 1.09935 0.98411 1.30273 1.3115 1.13345 1.39565 1.04473 1.07846 1.18381
680 1.09501 0.97517 1.30438 1.31012 1.1287 1.39384 1.03743 1.06112 1.1729
681 1.09648 0.96508 1.28677 1.30467 1.116 1.38651 1.03574 1.06805 1.17777
682 1.07651 0.96142 1.28326 1.28256 1.11289 1.36884 1.0265 1.05284 1.1611
683 1.06766 0.9564 1.27063 1.27436 1.10208 1.36483 1.01621 1.03505 1.14735
684 1.0681 0.9477 1.25455 1.26388 1.09903 1.35807 1.01125 1.04382 1.14146
685 1.07125 0.94691 1.2451 1.25293 1.09186 1.348 1.01016 1.02269 1.13221
686 1.05891 0.93103 1.22545 1.2437 1.08063 1.33893 1.00605 1.02519 1.12071
687 1.03709 0.93528 1.21777 1.22442 1.06893 1.31608 0.99799 1.00791 1.10583
688 1.03494 0.92065 1.19844 1.21438 1.05937 1.29742 0.96859 1.00973 1.08813
689 1.01737 0.90471 1.16747 1.19199 1.03879 1.28767 0.96561 1.0778 1.0651
690 1.01185 0.89517 1.15129 1.18147 1.03313 1.27446 0.96109 1.08812 1.0583
691 1.00418 0.88473 1.12547 1.1581 1.01473 1.25842 0.94852 1.05662 1.04206
692 0.98148 0.87957 1.09806 1.12584 0.99391 1.23996 0.92973 1.03922 1.02317
693 0.97279 0.8626 1.08875 1.11593 0.98769 1.22193 0.91412 1.02624 1.00152
694 0.95384 0.85157 1.05696 1.09095 0.97008 1.20064 0.91054 1.00491 0.98274
695 0.93309 0.82783 1.02272 1.06047 0.9513 1.17845 0.89805 0.98508 0.95958
696 0.91732 0.81592 0.99432 1.03911 0.93228 1.16623 0.87239 0.96066 0.94331
697 0.89077 0.79434 0.95672 1.00565 0.9204 1.12974 0.85662 0.93142 0.9225
698 0.87424 0.78167 0.92033 0.98081 0.89663 1.09775 0.84675 0.90256 0.89569
699 0.85641 0.76005 0.89162 0.95587 0.87628 1.08947 0.83064 0.88231 0.87335
700 0.82842 0.7357 0.86615 0.92032 0.85925 1.06324 0.81074 0.85314 0.85629
701 0.80898 0.71305 0.83105 0.89741 0.82269 1.03396 0.78437 0.82776 0.8227
702 0.77577 0.68079 0.81346 0.85417 0.81068 1.00411 0.75903 0.7958 0.79137
703 0.76077 0.66515 0.76455 0.83038 0.78506 0.96885 0.73829 0.761 0.76456
704 0.72941 0.63742 0.73695 0.7882 0.75785 0.94873 0.71487 0.73215 0.74473
705 0.71271 0.60782 0.69953 0.74745 0.73432 0.91541 0.70224 0.69903 0.71237
148
706 0.67798 0.58067 0.67144 0.71546 0.70545 0.8878 0.67856 0.66589 0.69574
707 0.65389 0.56361 0.66307 0.69025 0.68026 0.86954 0.65478 0.64338 0.66759
708 0.6388 0.53106 0.63973 0.66117 0.65797 0.83205 0.6344 0.61377 0.64457
709 0.60639 0.51322 0.59477 0.64125 0.63925 0.79568 0.59973 0.57788 0.62205
710 0.57926 0.49499 0.58683 0.60871 0.61263 0.77896 0.58411 0.54958 0.60316
711 0.56504 0.47891 0.5712 0.57541 0.58146 0.74266 0.5689 0.5297 0.57446
712 0.54485 0.45572 0.54682 0.5762 0.56367 0.71774 0.54246 0.5084 0.56259
713 0.52388 0.44239 0.54226 0.54927 0.54121 0.6984 0.53314 0.47895 0.54205
714 0.50353 0.41903 0.49696 0.52336 0.52581 0.66897 0.5167 0.44892 0.53035
715 0.48571 0.39768 0.47735 0.50894 0.51161 0.64879 0.48958 0.44203 0.49789
716 0.47967 0.38887 0.46604 0.4727 0.49622 0.6229 0.48124 0.41983 0.48982
717 0.46519 0.3751 0.44733 0.45831 0.47289 0.59878 0.46886 0.40608 0.46115
718 0.45129 0.35547 0.43959 0.46292 0.45144 0.58082 0.45172 0.39009 0.44617
719 0.43201 0.34321 0.41251 0.43221 0.43431 0.56342 0.43344 0.38462 0.43489
720 0.41961 0.33941 0.39404 0.40166 0.42485 0.5383 0.41378 0.37124 0.41918
721 0.39639 0.32639 0.38873 0.41166 0.40874 0.51363 0.40829 0.35521 0.40108
722 0.38281 0.31974 0.37123 0.38597 0.38927 0.49651 0.39683 0.34476 0.39249
723 0.372 0.30448 0.36948 0.38598 0.37152 0.47715 0.39228 0.33137 0.37471
724 0.36924 0.29378 0.35886 0.36364 0.36528 0.46411 0.36283 0.31743 0.35984
725 0.35277 0.29158 0.33422 0.35892 0.34597 0.43964 0.35824 0.31336 0.34762
149
Grupo 3 de datos
7 11R7B 7C 8 8B 8C 9A 17R9B 9C
600 1 1 1 1 1 1 1 1 1
601 1.04444 1.00971 1.00741 1.0126 1.02582 1.03904 1.00696 1.00768 1.01809
602 1.0558 1.01436 1.01368 1.02301 1.0502 1.07739 1.04012 1.0054 1.03588
603 1.08707 1.02036 1.02261 1.03523 1.07649 1.11775 1.0528 1.00489 1.04209
604 1.10074 1.02232 1.02072 1.04988 1.09875 1.14761 1.05584 0.99964 1.03538
605 1.11842 1.02277 1.02899 1.05673 1.11812 1.1795 1.06879 1.00216 1.03482
606 1.14143 1.0261 1.03123 1.06093 1.12964 1.19834 1.07353 0.99474 1.02798
607 1.15908 1.03097 1.02964 1.08442 1.14974 1.21506 1.09303 0.99163 1.01979
608 1.17481 1.03131 1.03057 1.09484 1.1606 1.22637 1.09367 0.99528 1.03116
609 1.17525 1.02346 1.02872 1.10672 1.17124 1.23576 1.08798 0.99174 1.03193
610 1.18413 1.01844 1.02875 1.11392 1.18416 1.25441 1.10461 0.98055 1.03407
611 1.19768 1.03146 1.02306 1.1251 1.19445 1.2638 1.11447 0.97835 1.02957
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714 0.59633 0.48433 0.5022 0.55386 0.62945 0.70504 0.45633 0.47872 0.61338
715 0.57684 0.46449 0.48509 0.5512 0.61831 0.68542 0.44055 0.45336 0.5849
716 0.56361 0.44174 0.46509 0.54084 0.60291 0.66498 0.42362 0.42559 0.56115
717 0.5324 0.42393 0.45838 0.52287 0.58211 0.64136 0.39836 0.41223 0.54784
718 0.52249 0.40353 0.4366 0.50459 0.5653 0.62601 0.36505 0.40762 0.54573
719 0.51286 0.38697 0.41854 0.47815 0.54512 0.61208 0.36541 0.37935 0.52144
720 0.49495 0.37395 0.40697 0.47158 0.53028 0.58897 0.33879 0.36788 0.49946
721 0.48103 0.36016 0.37949 0.45033 0.50627 0.56222 0.31027 0.35232 0.4928
722 0.45318 0.35016 0.36977 0.45307 0.4951 0.53713 0.29464 0.33559 0.48035
723 0.44397 0.33863 0.35284 0.4267 0.47095 0.51521 0.29252 0.32829 0.47541
724 0.43024 0.32718 0.33167 0.417 0.45504 0.49309 0.27874 0.31072 0.44819
725 0.43042 0.31459 0.32714 0.40785 0.44451 0.48116 0.26104 0.29209 0.42635
152
D). PATGENOS
Tiempo
Total Fusariu Aspergill Penicilliu Alternari
m sp us m a sp
(s) % % % % %
Control R1 0 1 1000 80 60 0 0 0
R2 0 2 1000 40 40 0 0 0
R3 0 3 1000 80 80 0 0 0
R4 0 4 1000 80 80 0 0 0
R5 0 5 1000 80 60 60 0 0
I ,30s R1 30 1 1 60 40 20 20 0
1
R2 30 2 1 60 40 20 0 0
R3 30 3 1 60 40 20 0 0
R4 30 4 1 20 20 0 0 0
R5 30 5 1 40 40 0 0 0
I1,1min R1 60 1 2 60 80 0 0 20
R2 60 2 2 40 40 0 0 60
R3 60 3 2 60 0 0 0 60
R4 60 4 2 20 20 0 0 60
R5 60 5 2 20 20 0 0 60
I1,3min R1 180 1 3 40 40 20 0 0
R2 180 2 3 80 80 40 0 0
R3 180 3 3 40 40 0 0 0
R4 180 4 3 40 40 0 0 0
R5 180 5 3 40 40 20 0 0
I1, R1 300 1 4 40 20 0 20 0
5min
R2 300 2 4 40 40 0 0 0
R3 300 3 4 20 20 0 0 0
R4 300 4 4 20 20 0 0 0
R5 300 5 4 20 20 0 0 0
I1, 10 R1 600 1 5 40 40 0 0 0
min
R2 600 2 5 40 40 0 0 0
R3 600 3 5 40 40 0 0 0
R4 600 4 5 40 40 0 0 0
153
R5 600 5 5 40 20 20 0 0
I2,30s R1 30 1 11 40 40 0 0 0
R2 30 2 11 60 60 0 0 0
R3 30 3 11 40 40 0 0 0
R4 30 4 11 80 60 0 0 20
R5 30 5 11 80 80 20 0 0
I2,1min R1 60 1 22 60 60 0 0 20
R2 60 2 22 40 40 0 0 0
R3 60 3 22 80 80 0 0 0
R4 60 4 22 40 40 0 0 0
R5 60 5 22 20 20 0 0 0
I2,3min R1 180 1 33 80 80 0 0 0
R2 180 2 33 20 20 0 0 0
R3 180 3 33 20 20 0 0 0
R4 180 4 33 80 80 0 0 0
R5 180 5 33 60 60 0 0 0
I2, R1 300 1 44 40 20 20 0 0
5min
R2 300 2 44 20 20 0 0 0
R3 300 3 44 20 20 0 0 0
R4 300 4 44 40 40 20 0 0
R5 300 5 44 20 20 0 0 0
I2, 10 R1 600 1 55 60 40 0 20 0
min
R2 600 2 55 40 40 0 0 0
R3 600 3 55 20 20 0 0 0
R4 600 4 55 60 60 20 0 0
R5 600 5 55 60 40 20 0 0
154
ND: No Desinfestada
Tiempo No Desinfest
Total Fusarium sp Aspergillus Penicillium Alternaria sp
(s) % % % % %
Control R1 0 1 1000 100 100 0 40 0
R2 0 2 1000 100 100 0 0 20
R3 0 3 1000 100 100 0 20 0
R4 0 4 1000 100 100 0 20 0
R5 0 5 1000 100 100 0 20 0
I ,30s R1 30 1 1 100 100 0 0 0
1
R2 30 2 1 100 100 0 0 20
R3 30 3 1 100 100 0 20 0
R4 30 4 1 100 100 0 0 0
R5 30 5 1 100 100 0 20 20
155
I2,30s R1 30 1 11 100 100 0 40 0
R2 30 2 11 100 100 0 20 0
R3 30 3 11 100 100 0 20 0
R4 30 4 11 100 100 0 20 0
R5 30 5 11 100 100 0 60 0
I2, R1 300 1 44 60 60 0 40 0
5min
R2 300 2 44 100 100 0 40 0
R3 300 3 44 100 100 0 40 0
R4 300 4 44 60 60 0 20 0
R5 300 5 44 100 100 0 0 40
156
Figura (d.1) Montaje experimental para la irradiacin
157
(a)
(b)
Figura (d.3). Comparacin visual entre la semilla con el mejor tratamiento para
disminuir la cantidad de semilla infestada. a) Muestras de control, b) Muestras
irradiadas durante 5 minutos (el mejor tratamiento).
158
ANEXO 2
159
j = 1, ..... , b
i = 1, ... t
Donde:
Tratamientos
Prueba F
160
Ho = 1 = 2 = ...... = t, en oposicin a
Ha: al menos un tratamiento es diferente
Fcalculada Ftablas
Donde:
C.M .Tratamiento
Fcalculada =
C.M .Error
S .C.Tratamiento
C.M .Tratamiento =
t 1
t Yi.2
S .C.Tratamiento = F .C.
i =1 b
Y..2
F .C. =
bt
Donde:
161
Cuando la prueba F rechaza la hiptesis Ho, la conclusin alternativa es de que
2s 2
DMS = t ;
r
t ; : es la t Student
= (r - 1)(t - 1) grados de libertad
s 2 : es el cuadrado medio del error.
r : es el nmero de repeticiones de cada tratamiento
Programa SAS
DATA A;
INPUT GEN REP TRAT VE PESOSECO PE;
CARDS;
1 1 1 2.666 1.11 75
1 2 1 3.033 1.12 80
1 3 1 2.666 1.11 75
.
.
.
1 1 17 2 1.01 55
1 2 17 3.1 1.23 85
1 3 17 2.83 1.15 80
;
/*DISEO BLOQUES AL AZAR*/
PROC GLM;
162
CLASS REP TRAT;
MODEL VE PESOSECO PE = REP TRAT;
MEANS TRAT/LSD LINES;
RUN;
ANEXO 3
F). MODELO DE JERARQUIZACIN ANALTICA
163
Establecer la estructura Jerrquica
2 1
Comparaciones
1
A1 A2 A3 A4
ALGORITMO
1 2 3
Tabla de comparaciones
A1 A2 A3 A4 A1 vs A2 A1 vs A2 A1 vs A2
3 A1
A2
A1 vs A3
A1 vs A4
A1 vs A3 A1 vs A3
A1 vs A4 A1 vs A4
A3
A4
N objetivos o atributos
Obtenemos la raz n
Matriz Unitaria de los elementos. n= numero de alternativas
b11 6 (b11)1/n
b21 (b31) 1/n
b31 (b31 ) 1/n
b41 (b41 )1/n
164
Normalizamos
7
(c11) (c11 / ) 100
(c31) (c31 / ) 100
(c31 )
(c41 ) (c31 / ) 100
(c41 / ) 100
165
1.2
0.8
0.6
Pr
Pfr
0.4
0.2
0
350 375 400 425 450 475 500 525 550 575 600 625 650 675 700 725 750 775 800
166
1.2
0.8
0.6
0.4
Pr
0.2 Pfr
0 Serie3
350 375 400 425 450 475 500 525 550 575 600 625 650 675 700 725 750 775 800
-0.2
-0.4
-0.6
-0.8
167