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DIRECTORIO:
Editor
MVZ MES S. Genaro Jardn Herrera
Diseo de portada
MVZ Gerardo N. Valdivieso Navarro
Edicin electrnica
MVZ Gerardo N. Valdivieso Navarro
MVZ MPhil. MC Germn Valero Elizondo
Revisin Tcnica
Dr. Fernando Constantino Casas
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PRLOGO
MANUAL DE PRCTICAS
PATOLOGA CLNICA
Introduccin
El estudio de las enfermedades ha evolucionado notablemente, respecto
de la Patologa Clnica, las pruebas que tardaban varias horas en realizarse, hoy
se realizan rpido en micromtodos en equipos automatizados, lo que significa
que se ha avanzado en el ahorro de tiempo y reactivos. Lo mismo sucede con la
confiabilidad de los resultados obtenidos.
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CONTENIDO
Autor(es) ................................................................................................................................. 3
PRLOGO.............................................................................................................................. 4
CONTENIDO .......................................................................................................................... 5
Prctica 1.-REAS DEL LABORATORIO Y ANALITOS DETERMINADOS (Jardn Herrera S. G.) .... 6
Prctica 2.-OBTENCIN Y MANEJO DE MUESTRAS SANGUNEAS EN DIFERENTES
ESPECIES ANIMALES (Quiroz Rocha G. y Bouda J.) ............................................................................................................ 11
Prctica 3.- CENTRIFUGACIN Y MANEJO DE MUESTRAS (Lima Melo A.) ............................ 22
Prctica 4.- MICROHEMATCRITO (Jardn Herrera S. G.) ............................................................ 26
Prctica 5.- DETERMINACIN DE PROTENAS Y FIBRINGENO POR
REFRACTOMETRA (Jardn Herrea S. G.) ..................................................................................... 28
Prctica 6.- CUENTA DE ERITROCITOS Y LEUCOCITOS (Mondragon Vargas R.L.) ..................... 30
Prctica 7.- PREPARACIN Y TINCIN DE FROTIS SANGUNEOS (Jardn Herrera S. G.) ........ 33
Prctica 8.- DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS, ESTIMACIN DE PLAQUETAS,
CORRECCIN DE CUENTA DE LEUCOCITOS, MORFOLOGA DE ERITROCITOS ... (Jardn
Herrera S. G.)............................................................................................................................................................................................ 36
Prctica 9.- PRUEBAS CRUZADAS PARA DETERMINACIN DE COMPATIBILIDAD
SANGUNEA (Garca Escamilla R. M.) .............................................................................................. 51
Prctica 10.- TIEMPOS DE COAGULACIN (Garca Escamilla R.M.) ............................................. 53
Prctica 11.- URIANLISIS (Ramirez Daz G.) .............................................................................. 61
Prctica 12.- PRUEBA DE FLOTACIN PARA DETERMINACIN DE LIPIDOSIS
HEPTICA (Bouda J.) ................................................................................................................ 67
Prctica 13.- PRUEBAS DE MALA DIGESTIN Y MALA ABSORCIN (Lima Melo A.) ............. 69
Prctica 14.- PRUEBAS PARA EVALUAR INMUNIDAD CALOSTRAL (Bouda J. y Quiroz Rocha G.) 73
Prctica 15.- OBTENCIN Y ANLISIS DE LQUIDO RUMINAL (Bouda J.)............................. 75
Prctica 16.- MTODOS PARA DETECTAR MASTITIS SUBCLNICA EN BOVINOS ...... (Ruiz
Skewes H.) ................................................................................................................................................................................................. 83
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Prctica 1.-REAS DEL LABORATORIO Y ANALITOS DETERMINADOS
Hematologa
Fig. 6. Cmara de Newbauer, Fig. 7. Tincin. Fig. 8. Equipo para pruebas de Fig. 9. Equipo de cmputo.
pipetas para cuenta de clulas coagulacin.
sanguneas y pieza de caucho.
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Los estudios practicados en este laboratorio son:
Hematcrito, hemoglobina, eritrocitos, volumen globular medio (VGM),
concentracin globular media de hemoglobina (CGMH), reticulocitos, leucocitos,
plaquetas, protenas totales, fibringeno, cuenta diferencial de leucocitos
(neutrfilos segmentados, neutrfilos bandas, metamielocitos, mielocitos,
linfocitos, monocitos, eosinfilos, basfilos, metarrubricitos, neutrfilos txicos,
linfocitos atpicos y anormalidades morfolgicas de leucocitos y eritrocitos.
Hemostasia:
Tiempo de sangrado, cuenta y evaluacin de plaquetas, tiempo de protrombina
(TP), tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPa), tiempo de coagulacin
activada (TCa), productos de degradacin de la fibrina, Dmero D.
Bioqumica clnica
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Espectrofotometra de absorcin atmica, modelo 3110, Perkin-Elmer,
determina.- Zinc (Zn), Cobre (Cu), Hierro (Fe), Calcio (Ca++), Magnesio (Mg++),
posibilidad de otros cationes.
Urianlisis
Fig. 15. Microscopio ptico. Fig. 16. Centrifuga convencional. Fig.17. Porta y cubreobjetos.
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Fig.18. Tiras reactivas.
Serologa:
Leucemia viral felina, Parvovirosis canina, Dirofilaria + Ehrlichia + Borrelia,
Leucemia viral felina + SIDA felino.
Parasitologa
Para el diagnstico de endo y ectoparsitos el laboratorio cuenta con
microscopios convencionales y estereoscpicos, adems del equipo para
procesar, almacenar y conservar materiales biolgicos.
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Posterior a conocer los resultados obtenidos se lleva a cabo la
interpretacin de los mismos, a fin de conocer el estado actual de la muestra que
fue remitida al laboratorio.
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Prctica 2.-OBTENCIN Y MANEJO DE MUESTRAS SANGUNEAS EN
DIFERENTES ESPECIES ANIMALES
MVZ. Esp. MC Gerardo F. Quiroz Rocha
Dr. Jan Bouda
Introduccin:
La prctica clnica del mdico veterinario zootecnista incluye la obtencin
de muestras de sangre, su adecuado manejo y envo al laboratorio. El mdico
veterinario zootecnista debe ser capaz de aplicar tcnicas muy precisas para
que el material que remita al laboratorio est en perfectas condiciones para ser
procesado y a partir de ello obtener resultados confiables que sirvan como
herramienta mdica.
Existen una serie de condiciones que deben ser cuidadas al decidir tomar
una muestra para enviarla al laboratorio, como especie, tipo de pruebas a
realizar, volmenes a colectar, tiempo transcurrido entre toma y anlisis, etc.
Objetivos:
Que los alumnos aprendan a obtener, manejar y enviar muestras
sanguneas al laboratorio clnico.
Consideraciones generales
El animal antes y durante el muestreo debe encontrarse lo menos
estresado. Debe recordarse que es muy importante tomar las muestras antes de
cualquier tratamiento y hacer una adecuada identificacin de las mismas antes
de enviarlas a cualquier laboratorio de diagnstico. Para ello debe utilizarse
material que resista el manejo, como: usar tintas permanentes que no
desaparezcan al contacto con el agua, cintas engomadas o etiquetas que se
adhieran apropiadamente, y que no se desprendan durante el transporte. Es
necesario acompaar las muestras con un protocolo que incluya los datos de
identificacin del propietario, del mdico veterinario zootecnista o del
responsable de dichas muestras, incluyendo un telfono o direccin donde se le
pueda localizar con prontitud en caso necesario, as como los datos de
identificacin del (los) animal (es) muestreado (s). Para que se establezca un
verdadero vnculo profesional clnico-laboratorio, se requiere que el mdico
veterinario zootecnista enve una historia clnica completa o anamnesis del
paciente, debe indicar si sospecha de enfermedades contagiosas,
especialmente si estas ltimas son zoonticas (rabia, ntrax, brucelosis,
leptospirosis, salmonelosis, etc.).
Debido a que este material sufre cambios fisicoqumicos con el paso del
tiempo, es de suma relevancia mencionar la hora de la toma de muestra, as
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como emplear empaques que mantengan condiciones homogneas
principalmente de temperatura; es decir, que si aquella se enva congelada, es
recomendable que se mantenga as hasta que llegue al laboratorio.
Material:
Agujas de diferentes calibres (14-27)
Jeringas de volumen de 1 mL a 10 mL
Tubos con vaco VACUTAINER sin anticoagulante y con
anticoagulante
Agujas para obtencin de muestras sanguneas en VACUTAINER
Soporte para agujas VACUTAINER
Tubos de ensaye estriles (3-10 mL)
Tubos de plstico con vaco regulable
Laminillas porta y cubreobjetos
Solucin de heparina de sodio al 1%
Cintas y etiquetas
Tapones de goma, parafilm
Recipiente con agua y hielo
Gradilla
Alcohol, algodn
Liga de caucho o cuerda etc. (torniquete)
Rasuradora o navaja de afeitar
Fig. 20. Agujas de diferentes calibres. Fig. 21. Jeringas de diferentes volmenes.
Fig. 22. Gradilla, etiquetas, liga de caucho Fig. 23. Porta y cubreobjetos.
tapones de plstico, parafilm, algodn.
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CUADRO 1. Calibres de aguja recomendados para toma de muestras
sanguneas en diferentes especies animales.
Calibre Color Especie animal sugerida
de aguja
Vaso Bovino Equino Perro Gato Ave Cerdo Ovino Caprino Peces Reptiles Animales de
sanguneo laboratorio
Vena X X X X X X X X X
yugular
Vena X X
ceflica
Vena safena X
Vena caudal X X X X
o coccgea
Vena X X X X X
femoral
Vena X
sublingual
Plexo X
venoso
retroorbitario
Arteria facial X
Vena X
braquial
anterior o
vena alar
Vena cava X
anterior
Amputacin X
de pedazo
de cola
Vena X X X
auricular
Amputacin X
de cresta
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Figura 25.-. Algunos sitios utilizados para la obtencin de muestras sanguneas y
lquidos corporales.
Procedimiento:
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tubo, ya que esto causa hemlisis. Se debe dirigir el chorro de sangre hacia las
paredes.
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ms enfocado hacia determinaciones serolgicas como deteccin de
anticuerpos para diferentes enfermedades. Este tubo es ms usado en bovinos y
cerdos.
Causas de hemlisis:
Provocar vaco violento al extraer la muestra con calibres de aguja muy
delgados
Impacto del chorro de sangre en el fondo del recipiente
Emplear material hmedo con agua o alcohol
Material sucio o contaminado
Material de mala calidad, que presente bordes o paredes rugosas
Agitacin brusca de la muestra al incorporar el anticoagulante con la sangre
Choques trmicos tanto calientes como fros
Temperaturas extremas
Manipulacin brusca de muestras para obtencin de suero antes de que el
cogulo se haya formado.
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BIOQUMICA CLNICA
En forma rutinaria los laboratorios clnicos pueden utilizar suero o plasma
para las determinaciones bioqumicas. El uso del suero es el ms difundido para
este tipo de determinaciones, aqul se obtiene a partir de una muestra de
sangre extrada sin anticoagulante (tubo con tapn rojo), esperando el tiempo
necesario para la formacin y retraccin del cogulo. El promedio de tiempo de
formacin del cogulo es de 30 a 60 min para la mayora de las especies; para
el caso de los rumiantes, el tiempo que se requiere, es de entre 1 a 3 horas, por
esta razn es ms prctico y exacto enviar al laboratorio muestras de plasma
empleando la heparina de sodio o litio como anticoagulante para solicitar ese
tipo de determinaciones.
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gotas de heparina al 1% (0.2 mg o 200 UI) por cada 10 mL de sangre. Es muy
importante recordar que cuando se toman estas muestras debe mezclarse varias
veces en forma suave para incorporar perfectamente el anticoagulante con la
muestra, y sta se conserve en buen estado. Esta muestra heparinizada debe
centrifugarse a 3000 rpm durante 10 min y despus transferir slo el plasma
(libre de clulas) inmediatamente a otro tubo limpio. Esto puede hacerse con
pipeta Pasteur o jeringa, despus se tapar y enviar al laboratorio clnico,
aunque, si la muestra va a llegar dentro de la primera hora despus de tomada,
se puede enviar sin centrifugar, la centrifugacin se har inmediatamente
despus de ser recibida. Para los anlisis de bioqumica clnica completa (8-20
analitos) es suficiente extraer 3-4 mL de plasma, ste se obtiene a partir de 7-10
mL de sangre aproximadamente. En los laboratorios que emplean microtcnicas,
incluso es suficiente 1.5 mL de plasma.
HEMATOLOGA
A) Hemograma
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significativas en las concentraciones de los componentes sanguneos que se
miden en el hemograma. El anticoagulante para este estudio es el EDTA (tubo
con tapn morado), ya que es el que preserva en mejor estado las clulas
sanguneas, adems de no interferir con las tinciones hematolgicas; ste debe
utilizarse en la siguiente proporcin 10-20 mg o 3 gotas al 10%/10 mL de sangre.
Un exceso de anticoagulante puede alterar los resultados. Debe recordarse que
si se utiliza sistema vaco de vidrio, es importante llenar el tubo a la capacidad
que marca el fabricante, ya que el anticoagulante est dosificado para el
volumen mximo de cada tubo. Una vez extrada la muestra, es necesario
mezclar con suavidad al menos 10 veces para permitir la mezcla de la sangre y
el anticoagulante. En presencia de cogulos se efecta nueva coleccin de
muestra sangunea. Inmediatamente o dentro de la primera hora de tomada la
muestra deben hacerse al menos tres frotis sanguneos en portaobjetos que se
fijan al aire. La muestra puede ser conservada durante 2 horas a temperatura
ambiente (15-25 C). Si la muestra tardara en llegar ms de 2 horas al
laboratorio, es recomendable conservarla en refrigeracin, nunca congelarla.
Tambin es posible refrigerarla para ser procesada dentro de las 24 horas
posteriores a la toma, pero se debe esperar por lo menos 15 min despus de
tomada la muestra en temperatura ambiente antes de ser refrigerada, para evitar
que exista hemlisis de la misma. Es suficiente enviar 2-3 mL de sangre para
todo el anlisis. Los frotis se realizan en laminilla portaobjeto y fijan al aire
mediante movimientos rpidos de la laminilla. Se sugiere enviar 3 frotis, estos se
pueden apilar directamente uno sobre otro sin ningn material intermedio, ya
que el vidrio no afectar la confeccin del frotis, mientras que el contacto de la
sangre con algn material diferente como papel o cartn si puede daarlo. Los
frotis se conservan en un lugar seco y fresco, nunca en refrigeracin. Despus
de 24 horas empieza a haber cambios significativos en la muestra.
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Fig. 33. Babesia en eritrocito de bovino. Fig. 34. Anaplasma en eritrocitos de bovino.
B) Pruebas de coagulacin
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Para el envo de muestras para gasometra, es de suma importancia que
el sistema de identificacin que se emplee sea resistente al agua, ya que ser el
medio de transporte para estas muestras.
Procedimiento:
Este tipo de anlisis requiere un manejo muy preciso de las muestras, los
pasos para hacer una adecuada toma se describen a continuacin:
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Prctica 3.- CENTRIFUGACIN Y MANEJO DE MUESTRAS
Objetivo:
Los alumnos debern conocer el procesamiento de las muestras
sanguneas para obtener suero o plasma.
Qumica sangunea
Material:
Una muestra de sangre sin anticoagulante, mnimo 3 mL
Un tubo de ensayo al vaco de vidrio de 5 a 10 mL de capacidad
Un aplicador de madera
Una centrfuga convencional de 1000 a 3000 revoluciones por minuto (rpm)
Una pipeta serolgica o Pasteur con capacidad de 1 a 10 mL
Procedimiento:
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4. Centrifugar a 3000 rpm por 10 minutos.
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Plasma
Material:
Una muestra sangunea con anticoagulante, mnimo 3 mL
Un tubo de ensaye al vaco de vidrio de 5 a 10 mL
Una centrfuga convencional de 1000 a 3000 rpm
Una centrifuga Eppendorf de 10,000 a 15,000 rpm
Una pipeta Pasteur, serolgica o automtica
Un tubo Eppendorf
Procedimiento:
1. Las muestras para obtener plasma deben ser obtenidas utilizando
anticoagulante (ej.: heparina).
2. Se deben centrifugar a 3000 rpm por 10 minutos, en centrfuga Eppendorf
2 min.
3. Se separa el plasma utilizando una pipeta Pasteur o pipetas automticas
en alcuotas de 4 mL en tubos Eppendorf.
4. Congelar.
Tiempos de coagulacin
Material:
Una muestra sangunea tratada con citrato de sodio al 3.8 % , relacin 1:9
Un tubo al vaco con recubrimiento de silicn
Una centrfuga convencional de 1000 a 3000 rpm
Una pipeta Pasteur, serolgica o automtica
Procedimiento:
1. Para determinar tiempos de coagulacin: Tiempo de Protrombina (TP) y
Tiempo parcial de tromboplastina activada (TPTa) es necesario obtener
las muestras con citrato de sodio al 3.8%, en una relacin de nueve
partes de sangre y una de anticoagulante
2. Los tubos deben tener recubrimiento de silicn para evitar la activacin de
los tiempos de coagulacin con el vidrio
3. Centrifugar inmediatamente a 3000 rpm por 10 min.
4. Separar el plasma con ayuda de una pipeta Pasteur o de pipetas
automticas, en alcuotas, en tubos plsticos de 1 mL
5. Congelar inmediatamente
Nota: es importante no hemolizar las muestras debido a que ello interfiere con la
lectura de los tiempos de coagulacin. Todas las determinaciones deben
efectuarse por duplicado y realizar simultneamente con una muestra de un
testigo clnicamente sano. Se debe recordar que son 3 horas como mximo,
despus de tomar la muestra para la evaluacin de los tiempos de coagulacin.
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Manejo de muestras:
Las muestras se deben identificar con el nombre del paciente, raza, edad,
gnero, hora y fecha de muestreo. Se anota la anamnsis, los hechos relevantes
como diarrea, vmito, anorexia, hiporexia, das de duracin, adems de indicar
los tratamientos, por ejemplo: terapia de lquidos, corticoterapia, transfusin
sangunea, etctera.
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Prctica 4.- MICROHEMATCRITO
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a realizar tcnica e instrumentalmente el
microhematcrito y la interpretacin de los resultados obtenidos de su lectura.
Material:
Una microcentrfuga (11 000 a 15 000 rpm)
Un capilar de vidrio sin anticoagulante, de 75 mm.
Un homogenizador de muestras sanguneas
Un muestra sangunea tratada con EDTA, mnimo 3 mL
Un lector para microhematcritos
Procedimiento:
La muestra de sangre con anticoagulante (EDTA) se coloca en un
homogenizador, se deja en l durante 10 min, posteriormente se separa del
rotor, a continuacin se introduce un tubo capilar, mismo que se llenar slo en
tres cuartas partes de su capacidad.
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Fig. 42. Colocacin del tubo
capilar en la microcentrfuga.
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Prctica 5.- DETERMINACIN DE PROTENAS Y FIBRINGENO POR
REFRACTOMETRA
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a determinar protenas plasmticas y
fibringeno mediante el uso del refractmetro de Goldberg, as como la
interpretacin de los datos obtenidos.
Material:
Un muestra sangunea tratada con anticoagulante cido
etilendiaminotetraactico (EDTA)
Un tubo capilar de vidrio de 75 mm
Una centrfuga convencional de 1000 a 3000 rpm
Un refractmetro de Goldberg para determinacin de protenas
plasmticas y densidad urinaria
Procedimiento:
Previamente se calibra el refractmetro utilizando agua destilada que tiene
una densidad de 1.000, llevando la lectura de la escala a cero. Luego de ajustar
se realizan los siguientes pasos:
Introducir un capilar en el recipiente que contiene la muestra de sangre y
llenarlo tres cuartas partes.
Centrifugar un tubo capilar por 5 min. a 11 000 rpm.
Separar el capilar de la microcentrfuga.
Romper el capilar justo arriba de la capa leucoplaquetaria.
El plasma es depositado en la placa del refractmetro.
Para realizar la lectura se presiona la cubierta con suavidad pero
firmemente, dirigiendo el refractmetro haca una fuente de luz brillante,
de manera horizontal.
Enfocar el refractmetro moviendo el ocular.
La lectura se hace al detectar en la escala la lnea divisoria entre los
campos oscuro y luminoso.
De esta forma se obtiene el valor de protenas plasmticas en g/L.
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Respecto de la cuantificacin de fibringeno, esta tambin puede realizarse
mediante el uso del refractmetro de Golberg siguiendo los siguientes pasos:
Se obtiene una muestra de sangre tratada con EDTA.
Se llenan dos tubos capilares.
Ambos tubos se centrifugan por 5 minutos a 11 000 rpm.
Se coloca el plasma de un tubo sobre el prisma de refractmetro para
cuantificar protenas plasmticas.
El capilar restante se sumerge en agua a 56 uC por 3 min., de tal forma
que quede sumergido el capilar (sin que entre agua por la porcin no
sellada).
Se procede a centrifugar el capilar con el fin de separar el fibringeno
precipitado por accin del calor por 5 min.
Se mide la concentracin de protenas plasmticas, una vez ms
utilizando el refractmetro de Goldberg.
La diferencia entre los dos resultados de protena plasmtica corresponde
a la concentracin de fibringeno en g/L.
Fig. 44. Dos tubos capilares Fig. 45. Colocacin de tubo Fig. 46. Depositando plasma
centrifugados. capilar en bao Mara. en el refractmetro.
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Prctica 6.- CUENTA DE ERITROCITOS Y LEUCOCITOS
Introduccin:
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La solucin que diluye los leucocitos es cida para lizar los eritrocitos
cido actico glacial denominado Solucin de Turk. El diluente para eritrocitos
debe ser isotnico, la solucin ms utilizada es la de Hayem.
Objetivo:
Qu los alumnos aprendan a realizar cuentas manuales de eritrocitos y
leucocitos.
Material:
Una muestra de sangre con anticoagulante (EDTA), mnimo 3 mL
Una pipeta de Thoma para cuenta de leucocitos (dilucin 1:20)
Una pipeta de Thoma para cuenta de eritrocitos, (dilucin 1:200)
Una cmara de Newbauer cuenta glbulos o hemocitmetro
Un cubreobjetos especial (cubre hematmetro)
Algodn o papel higinico para limpieza de pipetas
Solucin para diluir la sangre (isotnica de cloruro de sodio, Hayem, Turk)
Una pieza de caucho para conectar la pipeta
Un contador de clulas de una tecla
Un microscopio ptico
Procedimiento:
Los pasos que se han de seguir para la cuenta de clulas hemticas, se
refieren de manera general a continuacin, considerando que para cada tipo
celular (eritrocitos y leucocitos) se requiere slo un tipo de pipeta con diferente
capacidad como ya se mencion, adems de una solucin distinta para cada
caso.
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de la pipeta que no se ha mezclado con la sangre. Para la cuenta de leucocitos
basta eliminar 3 gotas de la pipeta antes de llenar el hemocitmetro.
9.- Limpiar cuidadosamente el rea graduada del hemocitmetro y el
cubreobjetos especial, quitando pelusa y grasa.
10.- Colocar el cubreobjetos especial sobre los bordes de apoyo del
hemocitmetro, cuidando de manejar el cubreobjetos por los extremos.
11.- Controlando la salida del lquido de la pipeta, con el ndice sobre el extremo
superior de sta, se toca con la punta de ella, el espacio que se encuentra entre
el hemocitmetro y el cubreobjetos, permitiendo que el lquido llene dicho
espacio por capilaridad. Se debe retirar la pipeta antes de que se presenten
derrames.
Se esperan de 1 a 3 min., para que las clulas sedimenten, luego de lo anterior
se procede a contar las clulas.
12.- Con el objetivo de poco aumento (10X) se enfoca el cuadro central de los
nueve cuadros grandes. La distribucin celular debe ser uniforme, de lo contrario
la cmara se limpia y se vuelve a llenar. Si la distribucin es uniforme se cuentan
los leucocitos a 10X con luz reducida, en cada uno de los cuatro cuadros
grandes de las esquinas (marcados en la figura como B1, B2, B3 y B4). La suma
de ello se multiplica por 50 y el resultado se divide entre mil para obtener la
cuenta total leucocitaria en unidades internacionales (6X109/L).
Fig. 49. Llenado de pipeta Fig. 50. Aspirando el Fig. 51. Agitacin de pipetas. Fig.52. Llenado de la cmara
para cuenta de eritrocitos. diluente (Hayem). de Newbauer.
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Prctica 7.- PREPARACIN Y TINCIN DE FROTIS SANGUNEOS
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a preparar y teir frotis sanguneos
correctamente.
Material:
Una muestra sangunea tratada con EDTA, mnimo 3 mL
Un tubo capilar de vidrio de 75 mm
Colorantes: Wright, Giemsa, Azul de metileno
Laminillas portaobjetos y cubreobjetos
Un tren de tincin
Un frasco de 25 mL con medio de montaje (blsamo de Canad diluido en
xilol)
Una pizeta de plstico de 100 mL para realizar el lavado
Procedimiento:
Introducir el tubo capilar en el recipiente que contiene la sangre. El tubo
se llena tres cuartas partes, con ayuda del capilar se deposita una gota en uno
de los extremos de la laminilla; un segundo portaobjetos se coloca anteriormente
a la gota, ste se acerca hasta que toca la gota de sangre, esperamos a que la
sangre se distribuya por el borde de sta segunda laminilla, una vez que ha
terminado el movimiento capilar, el segundo portaobjetos es dirigido hacia
adelante con.
Fig. 53. Llenado de capilar. Fig. 54. Colocando una gota de Fig. 55. Acercando un porta
sangre en un extremo. objetos a la gota de sangre.
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Fig. 56. Distribucin de la gota de Fig. 57. Deslizamiento del porta Fig. 58. Obtencin de
sangre . objetos. extendidos celulares.
Tincin:
Para la correcta observacin de los frotis, es necesario teirlos con
colorantes especficos para sangre, entre ellos podemos utilizar los colorantes
de Wright, Giemsa, Diff Quick y Nuevo azul de metileno.
Fig. 59. Colocando colorante de Fig. 60. Agregando amortiguador Fig. 61. Depositando medio de montaje
Wright sobre el extendido. de fosfatos a la preparacin. a un frotis tenido.
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En el caso de la tincin de Giemsa, se prepara el frotis, se seca al aire,
posteriormente, se fija, sumergiendo la laminilla en alcohol etlico de 96o durante
5 minutos; se seca y posteriormente se introduce en un vaso de Coplin, el cual
contiene una mezcla de solucin comercial de colorante y agua destilada, en
nuestra experiencia basta mezclar 3 a 5 mL de colorante comercial con 10 a 15
mL de agua destilada. En la mezcla se mantiene el frotis por 10 min o ms
segn se hayan teido los elementos celulares. Si no se tieron correctamente
es factible volver a colocar la preparacin en el vaso de Coplin, hasta obtener la
tincin adecuada.
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Prctica 8.- DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS, ESTIMACIN DE
PLAQUETAS, CORRECCIN DE CUENTA DE LEUCOCITOS, MORFOLOGA DE
ERITROCITOS.
Esta prctica est dividida en cuatro momentos, por lo que en cada una
de ellas encontrars los pasos que debes seguir para el logro de los objetivos.
DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a identificar los diferentes tipos de leucocitos.
Material:
Un frotis sanguneo teido correctamente
Un microscopio ptico
Un contador de clulas de 8 teclas
Un frasco de 20 mL con aceite de inmersin
Procedimiento:
Los alumnos utilizarn el microscopio para observar los extendidos
celulares teidos, identificando a los leucocitos como neutrfilo, eosinfilo,
basfilo, linfocito, monocito y clula plasmtica con base en las caractersticas
morfolgicas de estas.
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Fig. 62. Leucocitos.
Neutrfilos:
Las clulas maduras de los neutrfilos segmentados, se distinguen por su
ncleo segmentado, cromatina condensada y lbulos nucleares unidos por
filamentos delgados de cromatina; presentan grnulos especficos en el
citoplasma. Una estructura parecida a un palillo de tambor o apndice nuclear
(cuerpo de Barr) contiene un cromosoma X inactivo, que puede ser visto en los
neutrfilos de las hembras de los mamferos.
Eosinfilos:
Las caractersticas distintivas de los eosinfilos son la presencia de
grnulos citoplasmticos brillantes, rosados, rojizos y un ncleo menos
segmentado que el de los neutrfilos maduros (es raro encontrar ms de dos
lbulos). Los grnulos presentes en el citoplasma varan en tamao y forma con
las diferentes especies y algunas veces incluso dentro de una misma.
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Basfilos:
Los basfilos presentan grnulos de color rojo violeta en el citoplasma; el
nmero, tamao y tincin de los grnulos vara entre las diferentes especies, los
basfilos de los perros presentan pocos grnulos, pero son grandes, en
comparacin con las clulas de los bovinos, caballos y gatos, cuyos grnulos
son pequeos y numerosos. La caracterstica metacromacia de los basfilos es
atribuida al contenido de sus grnulos de glicosaminoglicano sulfatado
(mucopolisacrido), heparina, cido condroitn sulfato y dermatn sulfato.
Monocitos:
Por lo general son grandes, de 16 a 20 m de dimetro, poseen ncleo
grande amorfo, su cromatina est distribuida en forma de listones y bandas, por
lo general presentan uno o dos pequeos nuclolos, su citoplasma es
abundante, de color azul grisceo y contiene numerosas vacuolas,
especialmente en un extremo de la clula, es frecuente detectar seudpodos en
la membrana celular, lo cual refleja la actividad motriz de estas clulas.
Linfocitos:
El ncleo en los linfocitos contiene cromatina compacta, su forma es
redonda, aunque puede ser oval o indentada, el nuclolo no es visto por lo
general, la cantidad de citoplasma es escasa en linfocitos pequeos pero puede
ser ms abundante en linfocitos grandes, una pequea cantidad de grnulos
azuroflicos pueden ser vistos en su citoplasma. Las clulas con grandes
grnulos azuroflicos son conocidas como linfocitos de grnulos grandes y
usualmente incluyen a las clulas asesinas NK y a un componente del
38
complejo principal mayor de histocompatibilidad (MHC) restringido a las clulas
T citotxicas.
Clulas plasmticas:
Las clulas plasmticas presentan ncleo pequeo generalmente
excntrico con cromatina agrupada a menudo en forma de una rueda de carreta,
citoplasma abundante intensamente basoflico y una pequea rea ms clara
cercana al ncleo. Nuclolo que puede ser visto en los plasmoblastos. La
basofilia presente en el citoplasma se atribuye al complejo retculo endoplsmico
rugoso (RER) que ocupa la mayor parte del citoplasma y una zona ms clara
que est ocupada por el aparato de Golgi.
CUENTA DE PLAQUETAS
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a cuantificar plaquetas, as como a evaluar su
morfologa.
Material:
Una muestra sangunea tratada con EDTA, mnimo 3 mL
Un frotis teido con tincin de Wright
Una cmara de Newbauer
39
Una pipeta de Thoma para cuenta de eritrocitos
Un frasco de vidrio de 50 mL con solucin de oxalato al 1% en agua
destilada
Una caja de Petri
Un microscopio ptico
Un cubrehematmetros
Un agitador mecnico de pipetas de Thoma
Un contador de clulas de 1 tecla
Procedimiento:
40
Cuenta de plaquetas en cmara de Newbauer
Objetivo:
Corregir la cuenta de leucocitos, dada la presencia de clulas rojas
nucleadas (eritrocitos).
Material:
Un frotis teido y montado correctamente
Un microscopio ptico
Un contador de clulas de 8 teclas
Un frasco de 20 mL con aceite de inmersin
Procedimiento:
La correccin se realiza si existen ms de 5 GRN mientras se cuentan
100 leucocitos, en una cuenta leucocitaria diferencial. Se determina la
proporcin de GRN/100 leucocitos. El ajuste del recuento de clulas nucleadas
se realiza con la siguiente formula:
Cuenta leucocitaria corregida = 100/ GRN + 100 X cuenta de clulas nucleadas
(Willard, 1993).
41
MORFOLOGA DE ERITROCITOS
Objetivo:
Qu los alumnos aprendan a identificar los eritrocitos de las diferentes
especies domsticas y las alteraciones morfolgicas que se presentan ms
frecuentemente.
Material:
Un frotis teido y montado correctamente
Un microscopio ptico
Un contador de clulas de 8 teclas
Un frasco de 20 mL con aceite de inmersin
Procedimiento:
Observacin cuidadosa al microscopio ptico, de frotis teidos
correctamente.
Anormalidades eritrocitarias
Rouleaux:
Los eritrocitos de las preparaciones de sangre de caballos, gatos y cerdos
sanos con frecuencia presentan rouleaux (adhesin de los eritrocitos en
conjunto, dando la imagen de pilas de monedas). El incremento en la
concentracin de fibringeno y de globulinas potencia su formacin como
sucede en procesos inflamatorios. Tambin se puede asociar con enfermedades
linfoproliferativas en las que una o ms inmunoglobulinas son producidas en
gran cantidad.
42
Fig. 70. Rouleaux, eritrocitos de caballo
ordenados en forma de pila de
monedas.
Aglutinacin:
La agregacin de eritrocitos en grupos celulares (no en cadenas como en
el rouleaux) es conocido como aglutinacin. La aglutinacin es producida por la
presencia de inmunoglobulinas unidas a la superficie de los eritrocitos.
Policromasia:
La presencia de eritrocitos de color rojo azulosos es conocido como
policromasia. Los eritrocitos policromticos generalmente son reticulocitos que
se tien de color rojo azuloso debido a la presencia de hemoglobina (rojo) y
ribosomas y polirribosomas (azul). Un pequeo nmero de eritrocitos
policromticos son generalmente vistos en la sangre de perros y cerdos sanos.
Cuando se presenta, el animal presenta anemia regenerativa, pese a no ser la
normalidad morfolgica que denote regeneracin ms importante.
Anisocitosis:
La variacin en el tamao de los eritrocitos en frotis de sangre teidos se
conoce como anisocitosis. Es frecuente en bovinos, pudindose presentar
cuando un nmero significativo de clulas pequeas son producidas, como en la
deficiencia de hierro, o cuando un gran nmero de clulas ms grandes son
producidas (reticulocitos). Consecuentemente, la anisocitosis esta presente en
anemia regenerativa.
43
Fig. 72. Anisocitosis en sangre de perro.
Hipocromia:
La presencia de eritrocitos con disminucin en la concentracin de
hemoglobina se conoce como hipocromia, generalmente se observa en anemia
por deficiencia de hierro.
Equinocitos:
Los equinocitos son eritrocitos con espculas espaciadas y de tamao
similar. Las espculas pueden ser picudas o redondeadas. Por lo general son
artefactos que resultan de la sobredosificacin de EDTA, deficiente tcnica en la
preparacin de frotis o prolongado almacenamiento de la muestra de sangre
antes de realizar la preparacin. La transformacin a equinocito ocurre in vitro en
presencia de cidos grasos; se forman cuando los eritrocitos se deshidratan,
cuando el pH se incrementa. Tambin pueden aparecer en animales urmicos,
inmediatamente posterior a transfusin de sangre almacenada, o en algunas
deficiencias de piruvato cinasa en perros con glomerulonefritis y neoplasias
(linfoma, hemangiosarcoma, tumor de clulas cebadas y en carcinomas).
44
Acantocitos:
Son eritrocitos con irregularidades espaciadas y de tamao variable. Entre
las causas que producen su presencia estn: alteraciones en los lpidos de la
membrana, incremento en el colesterol sanguneo o debido a la presencia
anormal de la composicin de las lipoprotenas del plasma; enfermedad
heptica, posiblemente debido a alteraciones en la composicin de los lpidos
del plasma; hemangiosarcomas; coagulacin intravascular diseminada y
glomerulonefritis.
Keratocitos:
Son eritrocitos que contienen o que parecen contener una vescula, estas
reas no teidas son reas circulares localizadas en un extremo de las clulas.
La remocin o ruptura de stas reas resulta en la formacin de una o dos
proyecciones. Los keratocitos han sido reconocidos en varias alteraciones en las
que se incluyen a las siguientes: anemia por deficiencia de hierro, enfermedades
hepticas, toxicidad por doxorubicina en gatos, sndromes mielodisplsicos y en
varias alteraciones en perros que presentan conjuntamente equinocitos y
acantocitos.
Estomatocitos:
Son eritrocitos en forma de copa que presentan elongacin del rea de
palidez central, con frecuencia aparecen como artefacto. La forma la adquieren
cuando el contenido de agua de los eritrocitos se incrementa.
45
Esferocitos:
Los esferocitos resultan del dao a la membrana celular. Presentan falta
de palidez central y dimetro menor. Se presentan frecuentemente en anemia
hemoltica inmuno mediada en perros, otras causas potenciales incluyen:
picadura de vboras y de abeja, intoxicacin por zinc, parsitos eritrocitarios,
transfusin de sangre almacenada, diseritropoyesis familiar, anaplasmosis,
entre otras.
Esquistocitos:
La destruccin de los eritrocitos puede aparecer cuando los eritrocitos son
forzados a travs de vasos sanguneos alterados, o cuando son expuestos a
fluido turbulento. Pueden ser vistos en perros con anemia hemoltica asociada
con coagulacin intravascular diseminada, en anemia severa por deficiencia de
hierro, mielofibrosis, enfermedad heptica, falla cardiaca, glomerulonefritis,
desrdenes hemofagocticos histiocticos en perros, entre otras causas.
Codocitos:
Son clulas delgadas, a menudo hipocrmicas con incremento en el
tamao de la membrana, presentan forma parecida a una campana con
densidad central u ojo de toro. Un pequeo nmero de codocitos son
frecuentemente vistos en la sangre de perros normales y pueden estar
incrementados en anemias regenerativas en los perros, en diseritropoyesis
46
congnita, en anemias por deficiencia de hierro y rara vez en insuficiencia
heptica.
Excentrocitos:
Son eritrocitos en los que la hemoglobina se localiza a un costado de la
clula, dejando un rea sin ella. Se forman por la adhesin de reas opuestas de
la cara interna de la membrana del eritrocito. Son vistos en animales que
ingieren o reciben oxidantes en los que se incluyen: cebolla, acetaminofn y
vitamina K en perros y perxido de hidrgeno intravenoso en bovinos. Los
excentrocitos tambin han sido observados en caballos con deficiencia de las
enzimas glucosa 6 fosfatasa deshidrogenasa y deficiencia de glutation reductasa
secundaria a deficiencia de flavin adenin dinucleotidasa eritrocitaria.
Eliptocitos (Ovalocitos):
Los eritrocitos de animales de la familia Camelidae presentan forma oval
o elptica. Generalmente son eritrocitos planos, ms que bicncavos. Han sido
reconocidos en gatos con anormalidades de la mdula sea (desrdenes
mieloproliferativos y leucemia linfoctica aguda), lipidosis heptica, puentes
portosistmicos, y toxicidad por doxorubricina en perros con mielofibrosis,
sndrome mielodisplsico y glomerulonefritis, en los que pueden ser espiculados.
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Dacriocitos:
Estos eritrocitos tienen forma de lgrima. Se observan en sangre de
perros y gatos con desrdenes mieloproliferativos, en glomerulonefritis,
hiperesplenismo. Son comunes en la deficiencia de hierro en rumiantes,
incluyendo a las llamas.
Drepanocitos:
Los eritrocitos fusiformes o en forma de hoz, son frecuentemente vistos
en sangre de venados o ciervos normales y en sangre de personas con anemia
de clulas delgadas. Los drepanocitos se desarrollan de forma secundaria en la
polimerizacin de la hemoglobina. La forma de drepanos en los venados
depende de los tipos de hemoglobina presente. Pueden ser producidos in vitro
cuando la tensin de oxgeno es alta y el pH se encuentra entre 7.6 y 7.8.
Cristales de hemoglobina:
La presencia de grandes cristales de hemoglobina dentro de los eritrocitos
es comnmente reconocida en frotis de sangre de gatos y llamas, y rara vez
reconocidos en frotis de perros. No son de importancia diagnstica.
Eritrocitos lizados:
La presencia de fantasmas en las preparaciones de sangre perifrica
evidencia que las clulas han sido destruidas previamente a la realizacin de la
preparacin, consecuentemente la presencia de eritrocitos lisados indica
hemlisis intravascular reciente o hemlisis in vitro en el tubo colector posterior a
la obtencin.
48
Fig. 86. Eritrocitos lizados en sangre de cerdo.
Cuerpos de Howell-Jolly:
Son remanentes nucleares pequeos y esfricos, presentes en bajo
nmero en sangre de caballos y gatos normales. Con frecuencia se presentan
en asociacin con anemia regenerativa o posterior a esplenectoma en otras
especies. Tambin pueden ser ms numerosos en animales que reciben terapia
con glucocorticoides.
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Reticulocitos:
Son eritrocitos inmaduros, presentan RNA en su citoplasma, el cual se
pone de manifiesto al teir los frotis de sangre con el colorante azul de metileno.
Su presencia en gran nmero representa respuesta regenerativa de la serie roja.
Cuerpos de Heinz:
Estas inclusiones corresponden a agregados de hemoglobina precipitada
que se une a la superficie interna de la membrana de los eritrocitos. Se tien de
azul oscuro. Pueden ser reconocidos como pequeas proyecciones cuando las
uniones con la membrana rodean a la inclusin. Cuando se presenta hemlisis
intravascular, pueden ser visibles como inclusiones en los eritrocitos fantasmas.
Estas estructuras se tien de azul con tinciones para reticulocitos. En contraste
con otras especies, los gatos pueden presentar hasta 5% de cuerpos de Heinz
dentro de sus eritrocitos, normalmente.
Puntilleo basoflico:
El puntilleo basoflico esta constituido por ribosomas y poliribosomas, que
en conjunto forman inclusiones que se tien de azul, con nuevo azul de
metileno. Con frecuencia se presenta en anemias regenerativas, siendo
prominente en animales intoxicados con plomo.
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Prctica 9.- PRUEBAS CRUZADAS PARA DETERMINACIN DE
COMPATIBILIDAD SANGUNEA
Objetivo:
Qu los alumnos aprendan a realizar las pruebas de compatibilidad
sangunea e interpreten correctamente los resultados proporcionados por las
pruebas realizadas.
Material:
Material para obtencin de muestras sanguneas: jeringa, algodn,
alcohol, maquina de rasurar, torniquete
Tubos al vaco de vidrio con anticoagulante cido etilendiaminoteractico
(EDTA)
Una centrfuga convencional de 1000 a 3000 rpm
Cinco pipetas Pasteur, automticas o serolgicas
Un frasco con solucin salina fisiolgica (NaCl 0.9%) de 500 mL
Una incubadora
Cubreobjetos y portaobjetos (una caja de 100 piezas c/u)
Procedimiento:
1. Recolectar 2.0 mL de sangre del donador y del receptor en tubos con
anticoagulante cido etilendiaminoteractico (EDTA)
2. Centrifugar las muestras a 3000 rpm durante un minuto, separar y retener
el plasma
3. Resuspender los eritrocitos en solucin salina, centrifugar y decantar el
sobrenadante (lavado), repetir tres veces este paso
4. Preparar una suspensin de hemates al 2% con 0.02 mL de eritrocitos
lavados y 0.98 mL de solucin salina isotnica de Na Cl al 0.9%
5. Compatibilidad mayor
Colocar dos gotas de la suspensin de eritrocitos del donador, adicionar
dos gotas de plasma del receptor
6. Compatibilidad menor
Colocar dos gotas de la suspensin de eritrocitos del receptor, adicionar
dos gotas del plasma del donador
El control se realiza colocando dos gotas de la suspensin de eritrocitos
del donador y adicionar dos gotas del plasma del donador.
7. Incubar todas las muestras a 25 C durante 30 minutos
51
8. Centrifugar todos los tubos a 3000 g durante un minuto
9. La aglutinacin o hemlisis es un resultado positivo a incompatibilidad
Interpretacin:
La prueba compatible in vitro es aquella en la que al concluir la tcnica
electiva no se observa aglutinacin (macroscpica ni microscpica), ni hemlisis.
52
Prctica 10.- TIEMPOS DE COAGULACIN
Introduccin:
Objetivo general:
Qu los alumnos aprendan a realizar las pruebas utilizadas para evaluar
la cascada de la coagulacin, adems de interpretar correctamente los
resultados proporcionados por cada una de las pruebas.
CUENTA PLAQUETARIA
El recuento plaquetario permite clasificar la intensidad de la
plaquetopenia, vigilar el curso de la enfermedad y la respuesta al tratamiento.
Independientemente del mtodo automatizado o manual, la disminucin se
denomina trombocitopenia y al aumento con base en los valores limtrofes
trombocitosis. Son causas de trombocitopenia: toma inadecuada de muestra,
exceso de sangre en relacin al anticoagulante, mezcla inadecuada de la
muestra, ya que se forma cogulos quedando atrapadas las plaquetas, tcnica
impropias. La observacin microscpica de las plaquetas es de gran utilidad, ya
que es posible identificar la cantidad, las caractersticas morfolgicas, con
53
relacin a su tamao y si estn parasitadas o no, ya que es posible identificar
por ejemplo mrulas de Ehrlichia platis en pacientes con trombocitopenia y
sangrado anormal. Los cmulos de plaquetas pueden indicar defectos en las
tcnicas de extraccin o de la confeccin del frotis.
Objetivo:
Qu los alumnos aprendan a cuantificar plaquetas mediante mtodos manuales.
Material:
Para observacin en frotis
Un frotis de sangre teido correctamente
Un frasco de plstico con 100 mL de aceite de inmersin
Un microscpio ptico
Procedimiento:
La estimacin de las plaquetas se realiza en frotis teidos con colorantes
hematolgicos empleando el objetivo de 100X y usando aceite de inmersin, se
cuenta el nmero promedio de plaquetas en 10 campos.
Interpretacin:
En perros sanos habitualmente se encuentran entre 8 a 29 plaquetas y en
gatos de 10 a 29. Es probable que en perros con 20 000 L o inferiores se
presente sangrado. Cifras iguales o menores a 100 000 L son interpretadas
como trombocitopenia.
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a realizar instrumentalmente el TSMO.
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Material:
Una lanceta
Una cuerda de 50 centmetros de largo
Un cronmetro
Una caja de papel filtro o papel higinico
Procedimiento:
El aumento de la presin venosa se produce colocando una cuerda en el
hocico (perro), misma que tambin sirve para mantener el labio evertido, a
continuacin se realiza un corte estndar, teniendo cuidado de no presionar la
herida, ni manipularla. Con el papel filtro se absorbe la sangre que sale de la
herida a intervalos de 15 segundos, sin tocar la incisin. Generalmente no se
requiere anestesiar al animal.
Interpretacin:
El tiempo de sangrado en la mucosa oral no debe superar los 5 6 minutos.
Objetivo:
Qu los alumnos aprendan a realizar instrumentalmente la prueba de retraccin
del cogulo.
Material:
Un tubo de ensaye sin anticoagulante
Una muestra de sangre sin anticoagulante
Un bao Mara
Un cronmetro
Procedimiento:
El procedimiento consiste en colocar la sangre en un tubo sin
anticoagulante, despus de que coagul, se incuba a 37 C.
Interpretacin:
La observacin despus de una hora debe mostrar cierto nivel de suero
exprimido fuera del cogulo, por lo tanto visible en forma externa. A las 24 horas
el cogulo sufre su mxima retraccin. Si el cogulo se lisa rpidamente durante
las 24 horas en que es incubado a 37 C, sugiere hiperactividad fibrinoltica,
como sucede en coagulacin intravascular diseminada.
55
TIEMPO DE PROTROMBINA
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a realizar instrumentalmente el tiempo de
protrombina, as como la interpretacin de los resultados proporcionados por la
misma.
Material:
Una muestra de sangre tratada con citrato de sodio al 3.8%, una parte de
anticoagulante y nueve de sangre
Una centrfuga (3000 rpm)
Una pipeta Pasteur
Un bao Mara
Un thrombotimer (evaluador de tiempos de coagulacin)
Procedimiento:
En un tubo precalentado a 37 C, pipetear:
Plasma citratado 100 L
Reactivo Pathromtin* 100 L
Incubar 2 minutos a 37 C
Solucin de cloruro de calcio (37 C) 100 L
*Pathromtin BEHRING.
Fig. 90. Thrombotimer. Fig. 91. Depositando plasma. Fig.92. Colocando reactivo.
Valores normales:
Perros: 9 a 14 segundos
Ganado bovino: 18 a 28 segundos
Caballos: 9 a 12 segundos
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Interpretacin:
Esta prueba valora a los factores dependientes de la vitamina K, y a los
de sntesis heptica. De estos, los factores II, VII, IX, y X, el VII tiene la vida
media ms corta, cuando la sntesis de stos factores es retenida o deteriorada
significativamente, el FVII sufrir deficiencia ms precoz. El factor VII se
encuentra en la va extrnseca y por tanto TP es el nico estudio que evala a la
va comn, ste se eleva con ms rapidez y tiene el mximo incremento relativo
como aumento del porcentaje por encima de la media normal. El TP se eleva en
hepatopata severa, en enfermedad colesttica, en esteatorrea aclica y en
intoxicacin por warfarina.
Objetivo:
Qu los alumnos aprendan a realizar instrumentalmente el TPTa, e interpretar
los resultados obtenidos.
Material:
Un plasma normal fresco o tratado con citrato de sodio
Un equipo Ci-Trol Coagulation Control, Niveles I, II y III
Una pipeta Pasteur
Equipo manual o automatizado para evaluar TPTa
Procedimiento:
Precalentar la tromboplastina IS a 37 C
Pipetear en los tubos de coagulacin precalentados en la siguiente forma:
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Valores normales:
Perros: 17 a 30 segundos
Interpretacin:
La alteracin ms frecuente es la deficiencia hereditaria del factor VIII:C
de la coagulacin conocida como hemofilia A y la deficiencia de FBI:ag
denominada enfermedad de von Willebrand, deficiencia del factor IX de la
coagulacin conocida como hemofilia B.
Objetivo:
Qu los alumnos aprendan a realizar instrumentalmente el tiempo de
coagulacin activado, adems de interpretar los resultados obtenidos de la
prueba.
Material:
Dos tubos de ensaye al vaco que contengan tierra primitiva
Una muestra de sangre sin anticoagulante, mnimo 3 mL
Un cronmetro
Procedimiento:
Obtener sangre y dividirla en dos alcuotas
La primera se coloca en uno de los tubos
En el segundo tubo se coloca la otra alcuota
Precalentar los tubos a 37 C y mantener la temperatura constante hasta
que forme el cogulo
Incubar la sangre a 37 C durante 60 segundos a partir de que se coloc
la muestra en el tubo
Invertir el tubo cada 5 segundos hasta que se forme el primer cogulo
visible, este es el punto final
Interpretacin:
En perros el cogulo se debe formar entre 60 y 100 segundos y en gatos menos
de 60 segundos.
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TIEMPO DE TROMBINA (TT)
Esta prueba evala la cantidad y actividad del fibringeno, se usa tambin
para vigilar la terapia con heparina y para productos de degradacin del
fibringeno (FDFs). El TT modificado tiene un exceso de trombina y es til para
cuantificar el fibringeno. En la terapia con heparina y en la disfibrinogenemia e
hipofibrinogenemia se encuentra prolongado su valor.
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a realizar instrumentalmente el tiempo de trombina,
adems de aprender a interpretar los resultados obtenidos.
Material:
Un tubo de ensaye de 10 X 75 mm
Plasma del paciente tratado con citrato de sodio al 3.8%
Un bao Mara
Reactivo de trombina bovina (10 U/L)
Un cronmetro
Procedimiento:
A un tubo de ensaye de 10 X 75 mm se le agregan 0.2 mL de plasma del
paciente.
Se coloca en bao Mara a 37 C.
Se agrega rpidamente 0.1 mL de trombina bovina (10 U/mL) al mismo
tiempo se pone en marcha un cronmetro.
El punto final es la formacin de un cogulo, el cual se compara con un
plasma control normal de la misma especie.
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observado disminuida en perros con insuficiencia heptica por menor sntesis.
La deficiencia de AT III se presenta en glomerulopata.
DMEROS D (DD)
Posterior a la formacin del polmero de fibrina, el FXIII lo estabiliza,
despus la lisis del cogulo de fibrina debido al efecto de la plasmina, degrada el
cogulo liberando fragmentos de diferentes tamaos (fragmentos X, Y, E, D, y
Dmeros D). Algunos de stos productos de degradacin son comunes entre el
fibringeno y la fibrina, y otros son especficos de fibrina como los dmeros D,
stos no son detectados hasta despus de la formacin, estabilizacin y lisis de
la fibrina. Los DD son tiles para el diagnstico de coagulacin intravascular
diseminada y enfermedad trombo embolica venosa, as como en trombo embolia
pulmonar. En alteraciones hemostticas y en hepatopatas pueden estar
normales o aumentadas, en fibrinolisis anormal primaria y en coagulacin
intravascular diseminada estn aumentados. En enfermedades trombticas y en
deficiencia de ATIII los valores pueden estar normales o aumentados.
60
Prctica 11.- URIANLISIS
Introduccin:
El urianlisis es un estudio diagnstico, que de realizarse correctamente
aporta informacin de mucho valor. Algunos datos del examen de orina pueden
utilizarse para evaluar el estado en que se encuentra el hgado, el rin,
etctera, as como en algunas circunstancias puede emplearse para integrar el
diagnstico como en el caso de diabetes mellitus. Tambin refleja el estado en
que se encuentran las vas urinarias, como en inflamacin, infecciones, entre
otras.
Objetivo:
Qu los alumnos conozcan la manera de realizar correctamente el
urianlisis como herramienta diagnstica.
Material:
Una muestra de orina correctamente conservada
Dos tubos de ensaye de 10 mL
Una pipeta Pasteur
Una perilla plstica
Un refractmetro de Goldberg
Un tubo con tiras reactivas para analisis qumico de la orina
Una centrfuga convencional (2500 a 3000 rpm)
Un portaobjetos
Un cubreobjetos
Un microscopio ptico
Un frasco con solucin de cido sulfosaliclico al 5%
Procedimiento:
Examen fsico:
Para realizar este examen se depositan por lo menos 10 mL de orina en
un tubo de ensaye en el cul se valorar lo siguiente:
Aspecto, para valorarla se debe colocar el tubo con la orina sobre una
superficie con letras impresas e intentar leerlas, si se pueden apreciar las
letras, entonces la orina es transparente y si resulta difcil apreciarlas, la
orina se considera turbia, el nmero de cruces en que se informa
depende de la visibilidad de la muestra, es decir si la turbidez es leve
(1+), si es moderada (2+) y si es marcada (3+). En la mayora de las
61
especies la apariencia es transparente, excepto en equinos donde es
normal observar cierto grado de turbidez.
62
movimiento se realiza la lectura. La densidad de la mayora de los
animales se encuentra entre un rango de 1.015 1.045.
63
Fig. 97. Tira reactiva dentro del tubo con orina.
pH:
Fundamento: El rea reactiva contiene los indicadores de rojo de metilo y
azul de bromotimol, que permite medir pH entre 5 y 9. De manera general
el pH de los carnvoros es cido, flucta entre 5.5. 7.5; mientras que el
de los herbvoros es alcalino, de 7.5 8.5.
Bilirrubinas:
Fundamento: Se basa en la formacin de un complejo entre una sal
diazdica y la bilirrubina en un medio cido, que da un cambio
caracterstico de color. La reaccin de diazotizacin se produce ms
fcilmente con la bilirrubina conjugada.
Urobilingeno:
Fundamento: El urobilingeno junto con la sal diazdica produce un
colorante azoico rojo.
Glucosa:
Fundamento: Se basa en el mtodo de glucosa oxidasa, que genera
perxido de hidrgeno a partir de la glucosa. La peroxidasa cataliza
entonces la degradacin del peroxido utilizando electrones y protones
donados por un cromgeno que cambian de color durante el proceso.
64
Cuerpos cetnicos:
Fundamento: Se base en la reaccin del acetoacetato (principalmente) o
la acetona (en menor medida) con el nitroprusiato de sodio y la glicina en
condiciones alcalinas, que produce un color violeta.
Examen microscpico:
Para el examen microscpico se centrifugan 10 mL de orina por 2 a 3
min., a 2 500 rpm, posteriormente se decanta y se deja el sedimento, ste
se homogeniza y se coloca una gota en un portaobjetos, el cul se cubre
con un cubreobjetos y se observa con los objetivos 10X y 40X. En
aumento de 100X se observan estructuras como cristales y en ocasiones
algunos cilindros; en el aumento de 400X se realiza la lectura celular
observando al menos 10 campos y se obtiene un rango.
Fig. 99. Centrifugacin a 2500 rpm.
Fig. 103. Cilindro granular fino.. Fig. 104. Cristales de estruvita. Fig.105. Espermatozoides.
65
Fig. 106. Sedimento visto a 1000
aumentos, bacterias
teidas con Wright.
66
Prctica 12.- PRUEBA DE FLOTACIN PARA DETERMINACIN DE
LIPIDOSIS HEPTICA
Introduccin:
Lipidosis heptica (hgado graso, esteatosis heptica, sndrome de
la vaca gorda) es una condicin que ocurre con alta frecuencia en vacas
lecheras altas productoras, en las primeras semanas posparto. La
sobrealimentacin en el perodo seco resulta en sobre-acondicionamiento de las
vacas antes del parto y al parto. Se presenta el sndrome de lipomobilizacin y
acumulacin de lpidos en el hgado.
Objetivos:
Que los alumnos aprendan y realicen la prueba de campo para
diagnosticar lipidosis heptica en vacas lecheras.
Material:
Una aguja para biopsia heptica de 20 a 22 cm de largo y 2 mm de
dimetro, con mandril, trocar y gua
Anestsico local, jeringa con aguja
Soluciones de sulfato de cobre de densidad 1.025 (CuSO4 al 3.18%),
1.055 (CuSO4 al 8,11%) y agua destilada, en frascos de 50 mL
Tubos (3) de ensaye de 10 mL
Bistur
Desinfectante (alcohol)
Rasuradora
Torundas de algodn con alcohol
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Procedimiento:
Rasurar la zona de puncin, previa asepsia y analgesia local se procede a
incidir la piel con bistur o aguja ms gruesa. Acto seguido se introduce la aguja
con el mandril hasta detectar la cpsula heptica, se perfora y luego se quita el
mandril, introducindose en la gua la aguja para obtener la biopsia de 2 a 5 cm.
La biopsia obtenida con la aguja es depositada en una caja de petri para su
posterior anlisis.
68
Prctica 13.- PRUEBAS DE MALA DIGESTIN Y MALA ABSORCIN
Introduccin:
El pncreas excrino se encarga de la produccin y secrecin de
enzimas digestivas. Cualquier alteracin en su produccin ocasiona
problemas de digestin, consecuentemente los animales presentan
disminucin de peso y diarrea crnica.
Objetivo:
Los alumnos conocern y realizarn las tcnicas desarrolladas en
pacientes con insuficiencia pancretica excrina (IPE).
Material:
Procedimiento:
Mezclar heces ms agua en una proporcin de 1:1, colocar unas gotas de
Sudan III y homogenizar, observar al microscopio en campo seco dbil.
Interpretacin:
Positivo: presencia de gotas color naranja o rojas.
Negativo: ausencia de gotas naranjas o rojas.
69
Figs. 112. y 113. Tincin con colorante Sudan III para detectar presencia de esteatorrea.
Procedimiento:
Mezclar un poco de heces en un portaobjetos con azul de metileno, observar al
microscopio en campo seco dbil.
Interpretacin:
Positivo: presencia de grnulos azul oscuro grandes y en gran cantidad.
Negativo: ausencia de grnulos azules.
Figs. 114. y 115. Tincin con azul de metileno para detectar amilorrea.
Procedimiento:
Mezclar heces con lugol al 2% en un portaobjetos observar la preparacin al
microscopio en campo seco dbil.
Interpretacin:
Positivo: presencia de fibras musculares parcialmente digeridas color caf.
Negativo: ausencia de fibras musculares.
Nota: es esencial que el paciente sea sometido a una dieta donde se excluya la
carne por 3 das, antes de realizar ste procedimiento.
70
Figs. 116. y 117. Tincin con lugol para detectar creatorrea.
Procedimiento:
Colocar 2 mL de solucin de gelatina al 7.5% en un tubo de ensaye
Mezclar lo anterior con una mezcla hecha previamente de una parte de
heces y 9 partes de NaHCO3 al 8%
Incubar a 37 C o refrigerar por 20 minutos
Interpretacin:
Positivo: gelatina no solidificada, presencia de tripsina fecal.
Negativo: gelatina solidificada, ausencia de tripsina fecal, por tanto
indicativo de IPE.
Procedimiento:
Mezclar 9 mL de NaHCO3 al 8% con 1 g de heces
Colocar una tira de pelcula radiogrfica no procesada
Incubar a 37 C por 30 minutos, o 120 minutos a 22 C
71
Interpretacin:
Positivo: Tira de la pelcula digerida (aclaramiento), presencia de tripsina
fecal.
Negativo: Tira de pelcula no digerida (color negro), ausencia de tripsina
fecal.
Nota: se debe realizar al mismo tiempo otra prueba con heces de un animal
sano como control.
72
Prctica 14.- PRUEBAS PARA EVALUAR INMUNIDAD CALOSTRAL
Introduccin:
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a realizar e interpretar los mtodos indirectos
para la determinacin de gama-globulinas en las cras de 2 a 5 das de edad.
Material:
Un refractmetro de Goldberg
Un mL del suero de becerro, potro o lechn entre 2 y 5 das de edad
Tres soluciones de sulfito de sodio al 14%, 16% y 18% en agua destilada
Tres tubos de ensaye de 3-5 mL de volumen
Una incubadora
Procedimiento:
1) La refractometra
Se calibra el refractmetro con agua destilada.
En el refractmetro se coloca 1 gota del suero y se realiza la lectura en la
escala de protenas.
2) La prueba de precipitacin con sulfito de sodio
Se coloca 1.9 mL de cada una de las soluciones de sulfito de sodio en 3
tubos.
Se aade 0.1 mL del suero en cada uno de los tubos, mezclando el
contenido.
Se deja incubar durante 60 min a 22 oC o durante 30 min a 37 oC.
Se observa turbidez, la presencia de precipitado al fondo de cada tubo.
Interpretacin:
Refractometra
Las cras de rumiantes al nacimiento tienen concentraciones de protena total
srica de 37 a 42 g/L. El valor superior de 55 g/L en el suero del becerro entre 2
y 5 das de edad indica buena inmunidad pasiva, la ideal es mayor a 60 g/L. Ms
73
exacto es determinar protena total en el suero de la cra antes de la toma del
calostro (al nacimiento) y otra vez entre 2-5 das de edad. La diferencia entre
protenas sricas antes y despus de la calostracin, indica la concentracin de
gama-globulinas. El valor superior de 15 g/L indica buena inmunidad calostral.
74
Prctica 15.- OBTENCIN Y ANLISIS DE LQUIDO RUMINAL
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a obtener, procesar e interpretar las muestras
de lquido ruminal en condiciones de campo.
Material:
Un nariguero
Un abrebocas
Una sonda oro-ruminal con cabeza metlica perforada de 3.3 m
Una bomba para obtencin de lquido ruminal
Un recipiente para obtencin de lquido ruminal de 200 m
Una aguja para rumenocentesis de calibre 1.6 mm x 125 mm de largo
Xilacina para realizacin de rumenocentesis
Una jeringa desechable de 10 mL
Tres tubos de ensaye
Un potencimetro porttil
Un frasco de 50 mL de solucin con azul de metileno al 0.03%
Dos frascos de 50 mL con amortiguadores de pH 7.00 y pH 4.00
Una rasuradora
Torundas de algodn con alcohol etlico
Procedimiento:
75
Se sujeta una vaca con ayuda del nariguero, para luego colocarle el
abrebocas (Fig. 121), sujetando las correas a los cuernos o nuca del animal. Se
lubrica con agua la sonda oro-ruminal (longitud de 3.3 m) y se introduce a travs
del abrebocas hacia el rumen (Fig. 122). Una vez que la sonda es introducida
deber quedar aproximadamente un metro fuera y libre, dependiendo del
tamao del animal. El extremo libre de la sonda se conecta al extremo distante
de la bomba (Fig 123). Acto seguido, se conecta en la salida superior un trozo
de manguera y se eliminan los primeros 200mL de lquido para evitar
contaminacin con saliva (Fig 124). El lquido obtenido se depositar en una
botella de plstico para su anlisis posterior.
Fig. 123. Conexin de bomba y sonda. Fig. 124. Obtencin de lquido ruminal.
76
2. Extraccin de lquido ruminal con sonda oro-ruminal y de mquina
ordeadora:
Fig. 125. Conexin de sonda con Fig. 126. Conexin de sonda con la
el tanque. mquina ordeadora.
De esta forma se hace el vaco dentro del tanque y ste a su vez har la
succin del lquido del rumen haca ste. El tanque tiene lateralmente ventanillas
para verificar el nivel de llenado (Fig. 128), y evitar que el lquido pase a la
mquina ordeadora. En pocos minutos se obtendrn varios litros de lquido
ruminal.
77
Fig. 128. Ventanillas en el tanque.
Examen fsico:
1. Color. La coloracin normal del lquido ruminal puede variar en forma
normal desde el verde olivo, verde pardo, hasta el verde grisceo, de
acuerdo al tipo de alimentacin que el animal reciba. Dentro de las
anormalidades en la coloracin podemos encontrar las siguientes:
78
lechoso grisceo (acidosis ruminal); verde negruzco (alcalosis,
putrefaccin ruminal).
2. Olor. El olor normal del lquido ruminal puede definirse como aromtico.
Sin embargo, los olores perceptibles son cido picante (acidosis ruminal)
o el amoniacal (alcalosis ruminal).
Examen bioqumico:
El valor del pH en el lquido ruminal de una vaca sana es entre 6.0 y 7.0
(6.4 a 7.0 en dietas ricas en fibra y 6.0 a 6.6 en dietas ricas en alto contenido
en carbohidratos solubles). Los valores obtenidos fuera del rango normal
79
sern considerados como patolgicos: el pH < 6.0 se presenta en la acidosis
ruminal; el pH > 7.3 en alcalosis ruminal.
80
Interpretacin:
Acidosis ruminal
Indigestin Acidosis ruminal subclnica o Alcalosis ruminal Putrefaccin Lquido ruminal
Parmetro
simple aguda subaguda ruminal normal
Color Verde-pardo obscuro Lechoso, grisceo Gris verdoso Verde pardo Negro verdoso Verde olivo
Mohoso
Olor cido picante cido ligero Amoniacal Amoniacal ptrido Aromtico
Sedimentacin Rpida, con poco Rpida, ms tarde sin Rpida Variable Sin separacin Durante 4 a 8 min.
sedimento sedimento
81
(Continuacin)
Acidosis ruminal
Indigestin Acidosis ruminal subclnica o Alcalosis ruminal Putrefaccin Lquido ruminal
Parmetro
simple aguda subaguda ruminal normal
pH 6.8 - 7.2 3.8 - 5.0 5.1 - 5.9 7.3 - 8.0 7.5 - 8.5 6.0 - 7.0
Actividad > 8 min. Ausente Acelerada > 8 min. > 8 min. 3 - 6 min.
bacteriana 2 - 4 min
pH de orina 7.0 - 7.5 5.5 - 7.0 6.0 - 7.5 Alcalina (NaHCO3) Alcalina o 7.7 - 8.4
o variable variable
82
Prctica 16.- MTODOS PARA DETECTAR MASTITIS SUBCLNICA EN BOVINOS
PRUEBA DE CALIFORNIA
Introduccin:
La prueba fue desarrollada para determinar la presencia de mastitis
subclnica en la leche de los cuartos, leche mezclada y leche del tanque de
almacenamiento.
Objetivo:
Los alumnos aprendern a realizar la prueba de California para detectar
mastitis subclnica a travs de la interpretacin de los resultados obtenidos.
Material:
Una muestra de leche, mnimo 10 mL
Una paleta de plstico especial para la prueba de California
Reactivo de California (Pronavive) 100 mL
Una fuente de agua fra de la llave
Una jeringa hipodrmica desechable de 3 mL
Un cronmetro
Procedimiento:
1.- Se vierten 2 mL de leche de cada cuarto usando una pipeta o jeringa en la
copa correspondiente de la charola de reaccin o leche de tanque o leche
mezclada de todos los cuartos en uno de los recipientes.
2.- Se agregan 2 mL de reactivo y se mezcla con la leche rotando suavemente
en forma circular durante aproximadamente 10 segundos. Inmediatamente
despus se registra el grado de reaccin y su acidez o alcalinidad.
3.- Se lava la paleta con agua de la llave y se sacude el exceso de agua. La
paleta no necesita secarse.
4.- En el cuadro 7 aparece el grado de reaccin e interpretacin de la prueba de
California.
83
CUADRO 7. Grado de reaccin e interpretacin de la prueba de California
para deteccin de mastitis subclnica.
Smbolo Interpretacin Reaccin visible Clulas somticas por
mL.
- Negativa La mezcla permanece 0 a 200 000
lquida sin evidencia de
precipitacin.
Trazas Se forma un ligero
precipitado. La
reaccin se observa
mejor moviendo la
paleta hacia delante y
atrs y observando la
mezcla cuando fluye
sobre el fondo de la
copa. La reaccin
tiende a desaparecer
con el movimiento
continuo del lquido.
1 Dbilmente positiva Se forma precipitado 400 000 a 1 500 000
claro pero sin
tendencia a la
formacin de gel. En
algunas leches la
reaccin es reversible
con los movimientos
continuos de la paleta
y el precipitado puede
desaparecer.
2 Claramente positiva La mezcla se espesa 800 000 a 5 000 000
inmediatamente,
sugiriendo la formacin
de gel. Durante la
rotacin de la paleta, la
mezcla tiende a
moverse hacia el
centro, dejando
expuesta la porcin
exterior del fondo.
Cuando el movimiento
se detiene la mezcla
cubre todo el fondo.
3 Fuertemente positiva Se forma un gel que > 5 000 000
causa que la superficie
de la mezcla se vuelva
convexa. Usualmente
existe un pico central
que sobresale de la
masa despus de
cesar el movimiento de
la paleta. La viscosidad
aumenta
considerablemente de
tal manera que la
masa tiende a
84
(Continuacin)
adherirse al fondo de
la copa.
+ Leche alcalina Este smbolo se Una reaccin alcalina
agrega cuando la refleja disminucin de
reaccin es claramente la actividad secretora,
alcalina, esto est resultado de
indicado por un color inflamacin o del
prpura oscuro. secado de la glndula.
A Leche cida El bromocresol prpura Una leche cida es
es de color amarillo a rara. Cuando se
pH 5.2. Este smbolo encuentra, indica la
debe agregarse al fermentacin de la
grado de reaccin lactosa por las
cuando la mezcla es bacterias.
amarilla.
PRUEBA DE WISCONSIN
Introduccin:
La prueba de Wisconsin es similar a la prueba de California. El detergente
del reactivo al ponerse en contacto con el DNA de las clulas somticas produce
una mezcla con viscosidad relacionada al nmero de clulas somticas
presentes en la leche. En la prueba se mezclan en un tubo el reactivo y la leche,
despus se permite drenar a los tubos graduados durante unos segundos y se
vuelve a poner en posicin vertical para leer los mL de solucin que quedaron en
el tubo. La prueba es rpida, sencilla y barata. Esta provee un medio objetivo de
graduar la viscosidad de la mezcla del reactivo de California con la leche.
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a realizar instrumentalmente la prueba de Wisconsin
as como su interpretacin en casos de mastitis subclnica.
Material:
10 tubos de prueba: son de plstico transparente, flexibles de 12.1 X 130 mm
de dimetro interno (DI) con un orificio de ventilacin de un dimetro
aproximado de 3 mm localizado a unos 65 mm arriba del fondo del tubo
10 tapones de latn: con un orificio en el centro de 1.09 a 1.10 mm de
dimetro
Una gradilla para los tubos: para sostener firmemente 10 tubos de plstico
para la prueba
Una jeringa o pipeta automtica: con capacidad de 2 mL para verter
muestras de leche. Se debe ajustar la exactitud
Un cronmetro
Procedimiento:
1.- Enjuagar y sacudir los tubos para remover el exceso de agua antes de
usarlos.
85
2.- Enjuagar la jeringa en agua y sumergirla en una muestra de leche bien
mezclada. Verter 2 mL de la muestra de leche en el tubo deslizndola sobre la
pared de cada tubo para evitar la formacin excesiva de espuma.
3.- Agregar rpidamente 1 mL de reactivo tibio debajo de la superficie de
la leche a cada tubo en una gradilla para lograr una buena mezcla de la leche y
reactivo y tapar los tubos.
4.- Empezar el mezclado dentro de los siguientes 30 segundos, agregar el
reactivo al primer tubo en la gradilla. Mezclar sosteniendo los tubos en una
posicin casi horizontal, e inclinndolos hacia adelante y atrs, permitiendo que
el lquido suba hacia las tapas y regrese. Las 10 excursiones deben suceder
entre 8 y 10 segundos. Se debe evitar la agitacin vigorosa. La temperatura de
la mezcla leche-reactivo en el momento de la inversin debe ser de 24 C ms
menos 2 C.
5.- Invertir la gradilla dentro de los 30 segundos despus de que inicie la
accin de mezclado. Antes de invertir los tubos, mantener los tubos
horizontalmente mientras espera un momento de inicio apropiado en el
cronmetro. Invertir la gradilla rpidamente y mantenerla en posicin vertical
durante 15 segundos. Regresar los tubos a la posicin vertical, remover las
tapas y dejar reposar los tubos al menos por un minuto, dejando que la mezcla
vuelva al fondo del tubo.
6.- Leer con la escuadra la columna de lquido remanente arriba del
menisco en mL.
86
Prctica 17.- DETERMINACIN DE LA GRAVEDAD ESPECFICA (GE) DEL
CALOSTRO
Introduccin:
Los becerros nacen virtualmente sin niveles detectables de inmunidad
especfica. Esto es debido a que las inmunoglobulinas no pasan a travs de la
placenta. Por tanto, la inmunidad del becerro a agentes infecciosos, depende de
la ingestin y la absorcin de inmunoglobulinas maternas del calostro. Este
proceso, denominado transferencia pasiva es un determinante crtico de la
inmunidad del becerro y de su salud.
Objetivo:
Qu los alumnos aprendan a determinar instrumentalmente la gravedad
especfica del calostro, as como la interpretacin de los resultados obtenidos.
87
Material:
Un calostrmetro
100 mL de calostro del primer ordeo post-parto
Un recipiente limpio para la obtencin del calostro
Una probeta de 100 mL
Calostrmetro:
El calostrmetro es un aremetro con dos escalas, una numerada y otra
que tiene tres colores que indican la GE del calostro.
Procedimiento:
Se llena con calostro el cilindro o recipiente con suficiente profundidad
para que flote el calostrmetro sin tocar el fondo. El calostrmetro debe tener
una temperatura cercana a 22 C. Se debe retirar la espuma o nata para evitar
errores en la lectura. Se introduce el calostrmetro con cuidado y se deja que
flote libremente. Una vez que se ha estabilizado, se hace la lectura en la escala
numerada o de los colores, situada en la parte superior del densitmetro.
Interpretacin de la lectura:
Una lectura superior a 1.060= buena calidad, 1.050= mediana calidad,
< 1.050 baja calidad.
88
Prctica 18.- EVALUACIN DE LQUIDOS CORPORALES (EFUSIONES,
LQUIDO SINOVIAL Y LQUIDO CEFALORRAQUDEO).
Introduccin:
Los lquidos corporales pueden ser evaluados desde el punto de vista
fsico, qumico y celular. La primera de estas evaluaciones puede realizarse
desde el momento mismo de la toma de la muestra, la informacin que
proporciona puede ser valiosa para el establecimiento de un diagnstico
presuntivo. Las dos evaluaciones restantes pueden o no llevarse a cabo en el
lugar del muestreo, dependiendo del material con el que se cuente.
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a procesar e interpretar las muestras de
lquidos corporales.
Material:
Un hemocitmetro
Un refractmetro de Goldberg
Un frasco con tiras reactivas para el anlisis qumico de la orina
Un frasco con 50 mL de reactivo de Pandy
Un portaobjetos
Un cubreobjetos
Una jeringa hipodrmica desechable (1-3mL)
Una vela o parafina
Procedimiento:
Es conveniente subrayar que dependiendo del tamao de la muestra se
realizar el anlisis de la misma, ya que si slo se obtuvo una muestra pequea
se dar prioridad a la evaluacin citolgica sobre las dems pruebas. En el caso
*
El fenol es una sustancia carcinognica, por lo que esta cayendo en desuso.
89
en el que se haya obtenido una cantidad mayor, se puede realizar un mayor
nmero de pruebas, considerando la cuenta celular como el segundo punto de
importancia. En las muestras donde sea posible se efectuar una evaluacin
completa.
Examen fsico:
Depositando un volumen X de la muestra en un tubo de ensayo, se
procede a determinar color, olor, aspecto (turbio, transparente, con partculas
suspendidas), gravedad especfica y protenas totales (en el caso de efusiones
y lquido sinovial, con el refractmetro). Cuando la muestra sea LCR la
concentracin de protenas puede estimarse utilizando tiras reactivas para orina
(ver examen qumico) todos los resultados se anotan para su interpretacin.
Cuenta celular:
Posteriormente se realiza la cuenta celular con ayuda de un
hemocitmetro y una pipeta de Thoma de la misma forma a como se realiza en
el hemograma, cuando se trabajan efusiones.
Citolgico:
La cantidad de clulas nucleadas es normalmente baja, por ello es
necesario concentrar la muestra. Se debe evitar la centrifugacin ya que
destruye las clulas, por lo que se puede proceder a utilizar la tcnica de
sedimentacin. La preparacin por sedimentacin es econmica, puede
realizarse en la clnica y tiene una recuperacin de aproximadamente 25%. La
tcnica de sedimentacin consiste en fijar con cera una de las secciones de
jeringa de 1 mL a un portaobjetos. Se deposita 0.5 mL aproximadamente de
LCR en el interior de sta cmara y se deja sedimentar a las clulas por
espacio de 30 a 60 minutos. Despus, el sobrenadante es aspirado con una
pipeta Pasteur, se remueve el cilindro y los bordes con el fluido remanente son
secados mientras el portaobjetos es inclinado ligeramente y se secan las clulas
90
(adheridas) rpidamente al aire. El frotis debe ser sometido a tincin y finalmente
evaluado por un especialista.
91
Para las efusiones de cavidad abdominal se sugiere efectuar determinacin de
urea, creatinina, bilirrubinas, para lo cual se necesitan tcnicas
espectrofotomtricas.
92
Prctica 19.- SOLUCIN DE CASOS CLNICOS
Objetivo:
Que los alumnos aprendan a integrar la informacin proporcionada por la
historia clnica, el examen fsico y pruebas de laboratorio, para emitir un
diagnstico.
93
Material:
Informacin proporcionada por el propietario, informacin obtenida del
examen fsico y resultados de las pruebas de laboratorio.
Procedimiento:
Analizar la informacin proporcionada por la historia clnica, el examen
fsico y los resultados de laboratorio, acto seguido los alumnos deben solicitar de
manera escrita de acuerdo a su anlisis, pruebas especficas para confirmar el
diagnstico de la enfermedad que se presume presenta el animal.
EXAMEN FSICO
El paciente present: cianosis, disnea, aletargamiento, debilidad,
mucosas cianticas y fatiga.
HEMOGRAMA 1
unidades valores de referencia
Hematocrito : 0.75 L/L 0.37 - 0. 55
Hemoglobina: 258 g/L 120 - 180
Glbulos rojos: 10.3 X 1012/L 5.5 - 8.5
VGM: 72 fL 60 - 77
CMHG: 344 g/L 320 - 360
Plaquetas: 200 X 109/L 200 - 900
Protenas totales: 77 g/L 60 - 75
Leucocitos: 7.1 X109/L 6.0 - 17.0
Neutrfilos: 5.5 X 109/L 3.0 - 11.5
Bandas: 0.1 X 109/L 0 - 0.3
Metamielocitos: 0 X 109/L 0
Mielocitos: 0 X 109/L 0
Linfocitos: 0.9 X 109/L 1.0 - 4.8
Monocitos: 0.1 X 109/L 0.1 - 1.4
Eosinfilos 0.5 X 109/L 0.1 - 0.9
Basfilos: 0.0 X 109/L Raros
94
HEMOGRAMA 2
unidades valores de referencia
Hematcrito: 0.56 L/L 0.37 - 0.55
Hemoglobina: 188 g/L 120 - 180
Glbulos rojos: 9.3 X 1012/L 5.5 - 8.5
VGM: 60 fL 60 - 77
CMHG: 335 g/L 320 - 360
Plaquetas: 280 X 109/L 200 - 900
Protenas totales: 55 g/L 60 - 75
Leucocitos: 16.2 X109/L 6.0 - 17.0
9
Neutrfilos: 15.2 X 10 /L 3.0 - 11.5
Bandas: 0 X 109/L 0 - 0.3
Metamielocitos: 0 X 109/L 0
Mielocitos: 0 X 109/L 0
9
Linfocitos: 0.04 X 10 /L 1.0 - 4.8
Monocitos: 0.01 X 109/L 0.1 - 1. 4
Eosinfilos: 0.0 X 109/L 0.1 - 0.9
9
Basfilos: 0.0 X 10 /L Raros
HEMOGRAMA 3
Valores obtenidos Unidades Valores de referencia
Hematcrito: 0.64 L/L 0.37 - 0. 55
Hemoglobina: 213 g/L 120 - 180
Glbulos rojos: 10.4 X 1012/L 5.5 - 8.5
VGM: 61 fL 60 - 77
CMHG: 332 g/L 320 - 360
9
Plaquetas: 290 X 10 /L 200 - 900
Protenas totales: 64 g/L 60 - 75
9
Leucocitos: 8.0 X10 /L 6.0 - 17.0
Neutrfilos: 5.4 X 109/L 3.0 - 11.5
Bandas: 0 X 109/L 0 - 0.3
9
Metamielocitos: 0 X 10 /L 0
Mielocitos: 0 X 109/L 0
9
Linfocitos: 2.3 X 10 /L 1.0 - 4.8
Monocitos: 0.1 X 109/L 0.1 - 1.4
9
Eosinfilos: 0.2 X 10 /L 0.1 - 0.9
Basfilos: 0.0 X 109/L Raros
95
URIANLISIS
Aspecto: Transparente
Color: Amarillo claro
Densidad: 1.023
pH: 5.5
Protena: Negativo
Cetona: Negativo
Glucosa: Negativo
Bilirrubina: Negativo
Urobilingeno: Normal
Sedimento: Eritrocitos: 5 a 10 /campo
Leucocitos: 0 a 1
Clulas transitorias: 0 a 1
Lpidos: 1+
BIOQUMICA CLNICA
96
ESTUDIOS ADICIONALES
ECOCARDIOGRAFA
EQUILIBRIO CIDO-BASE
1 2 3 valores de referencia
pH 7.20 7.37 7.33 (7.32 - 7.45)
pCO2 56 39.9 43.3 (32 - 46) mmHg
HCO3 24.6 22.0 22.2 (19 - 28) mmol/L
EB -1.3 -2.1 -2.9 (-5.0 - 3.6) mmol/L
DIAGNSTICO FINAL
97
Prctica 20- CITOLOGA EN PATOLOGA CLNICA
Introduccin:
El examen citolgico se ha convertido en un instrumento muy til para los
mdicos veterinarios, puesto que a partir del surgimiento de la citopatologa con
los trabajos de Papanicolau y Stockard, en 1917 esta rama fue adquiriendo
importancia de tal modo que paulatinamente se amplio su estudio y desarrollo
gracias al esfuerzo de un sin nmero de investigadores que a travs del tiempo
han aportado importantes conocimientos que han sido la base para lo que
actualmente es la citologa clnica, que constituye una herramienta muy
importante en el diagnstico veterinario.
Objetivo general:
Que los alumnos aprendan en forma breve y concisa los procedimientos
de las diferentes tcnicas utilizadas para la obtencin de muestras celulares, as
como el manejo necesario para preservarlas lo ms intactas posible desde la
toma hasta las manos de quin las interpreta.
Introduccin:
La evaluacin citolgica de muestras de lquidos corporales, es una parte
integral para el diagnstico en medicina veterinaria, por medio de esta se
pueden revelar las caractersticas celulares de lquido, determinar la presencia o
ausencia de inflamacin, confirmar procesos neoplsicos y la deteccin de
agentes infecciosos como: bacterias, hongos, parsitos, e inclusiones virales.
98
ABDOMINOCENTSIS
Introduccin:
La obtencin de lquido abdominal ya sea en poca o mayor cantidad,
puede aliviar en forma temporal el malestar del paciente, no obstante, el
beneficio primordial radica en la posibilidad de establecer un diagnstico y de
esa manera elegir la terapia ms adecuada. Un aumento de fluido en la cavidad
abdominal no es una enfermedad por s misma, pero es indicativa de un proceso
patolgico en la produccin o en el sistema de drenaje del fluido. El anlisis del
fluido incluyendo examen citolgico, es un mtodo rpido, fcil, de bajo costo y
relativamente seguro. Se puede obtener informacin til para el diagnstico,
pronstico y tratamiento de los procesos que causan acumulacin de fluido en la
cavidad abdominal.
Indicaciones:
Para evaluar cualquier enfermedad que produzca aumento del lquido
abdominal.
Abdomen agudo.
Cuando hay evidencia de gas libre en cavidad abdominal.
Determinar el dao a un rgano relacionado con traumatismo
abdominal.
Objetivo:
Que los alumnos aprendan el procedimiento para la obtencin de lquido
abdominal, los casos en que est indicado, el material que se utiliza, el manejo
adecuado de la muestra y los diagnsticos que se pueden obtener.
Material:
Distintos materiales pueden ser utilizados en diferentes tcnicas en
funcin de la cantidad de lquido presente y de la naturaleza del examen que el
clnico desea practicar en ese fluido.
Aguja de calibre 20 a 22 G de 1 pulgada con jeringa de 6 a 10 mL, cuando hay
cantidades considerables de lquido, es una tcnica fcil, rpida y barata, sin
embargo, se puede correr el riesgo de lesionar rganos abdominales.
99
Catter endovenoso de plstico calibre 20 de 1 pulgadas: existe menor
riesgo de lesionar vsceras, pero el catter puede retorcerse y dificultar la
extraccin y tampoco es muy valiosa si hay poca cantidad de lquido.
Catter de dilisis peritoneal: este es el mejor mtodo de obtencin de fluido.
Este catter no tiende a colapsarse o a ocluirse, no se corren riesgos de lesionar
vsceras y tambin puede ser utilizado para introducir lquido a fin de realizar un
lavado diagnstico o teraputico. En su lugar, puede utilizarse una sonda uretral
de gato, a la cual se le realizan fenestraciones en el extremo para facilitar la
extraccin.
Procedimiento:
Rasurar la zona abdominal ventral a nivel del ombligo y preparar la piel en
forma asptica.
Antes de iniciar la abdominocentesis la vejiga debe estar vaca.
El animal se mantiene en pie o en decbito lateral. En la mayora de los casos
la abdominocentesis puede ser realizada sin anestesia. Y con mnimo riesgo, sin
embargo, el paciente debe estar inmovilizado con firmeza en todo momento, de
modo que no se mueva, ya que con el movimiento podra empujar los rganos
contra la aguja. Si se requiere puede infiltrarse piel y tejido subcutneo con
analgesia local.
El lugar ms frecuente para la puncin,
es la lnea media del abdomen, de 1 a 2
cm caudalmente al ombligo (Fig 132). En
este punto se evita la grasa falciforme que
puede obstruir el orificio de la aguja. Si
existe una incisin quirrgica previa, la
aguja se inserta al menos a 1.5 cm de esta
para evitar las vsceras que pudieran estar
adheridas a la pared abdominal en el rea
de la cicatriz. Fig. 132. Abdominocentesis.
Una vez que se ha insertado la aguja, no suele ser necesario acoplar una
jeringa para realizar el aspirado, puesto que se ha comprobado que la
abdominocentesis con aguja abierta es ms adecuada que la aspiracin con
jeringa. En caso de acoplarse la jeringa slo se debe ejercer una leve presin
negativa, de otro modo, es posible aspirar tejidos abdominales hacia la abertura
de la aguja con la cual se obstruye el flujo del fluido.
Si la cantidad de lquido es reducida una sola aspiracin puede resultar
negativa. En tales casos la aguja se inserta en varios puntos hasta conseguir la
muestra. La evaluacin de colectas mnimas de fluido se pueden realizar
tambin con la ayuda de ultrasonografa, con la cual se obtendrn excelentes
resultados.
Si por este mtodo no es posible la obtencin de lquido, se proceder a otras
tcnicas alternativas como la utilizacin del catter endovenoso, si an as no se
obtiene muestra por la poca cantidad de lquido en el abdomen, se puede
proceder a un lavado peritoneal, en donde se utiliza un catter de dilisis
peritoneal por medio del cual se administra solucin salina fisiolgica tibia a
100
razn de 20 mL/kg de peso corporal, mientras se realiza un masaje al abdomen
con suavidad para ayudar a difundir el lquido, tambin puede ser de ayuda girar
al paciente de un lado a otro con delicadeza.
Posteriormente obtener fluido para su anlisis.
Manejo de la muestra:
En general, si se obtuvo poco lquido, se pueden realizar extensiones, las
cuales deben ser fijadas al aire, si se obtuvo una cantidad considerable de
lquido se deber introducir en un tubo de vidrio al vaco con EDTA para evitar
que la muestra coagule.
Utilidad diagnstica:
Clasificacin de la efusin: trasudado, trasudado modificado y exudado
(Cuadros 9 y 10)
Peritonitis infecciosa felina
Neoplasia
Metstasis
Hiperplasia mesotelial
Peritonitis biliar
Uroperitoneo
Efusiones de quilo o pseudoquilo
Efusiones hemorrgicas
Ascitis por enfermedad cardiaca
101
CUADRO 9. Caractersticas fisicoqumicas y citolgicas de
trasudados y exudados. Diferenciacin de trasudados, trasudados
modificados y exudados en perros.
TRASUDADO TRASUDADO EXUDADO OBSERVACIONES
MODIFICADO
Densidad <1.017 1.017-1.025 > 1.020 Con base en la
densidad del agua
destilada, 1.000
Protenas <25 25-50 >30
totales(g/L)
Clulas nucleadas < 1.0 0.5-10.0 >5.0 Colectar la muestra
9
(X 10 /L) con EDTA
Tipos celulares Mononuclear, Linfocitos Neutrfilos
predominantes Mesotelial Monocitos Mononuclear
Mesotelial Eritrocitos
Eritrocitos
Bacterias Ausentes Ausentes Variable Teir los frotes
sanguneos con
Gram cuando se
requiera
sanguneos
TORACOCENTSIS
Introduccin:
La toracocentsis es esencial para el establecimiento del diagnstico
presuntivo o definitivo. As mismo, la extraccin del lquido mejora la
visualizacin radiolgica del pulmn y pleura, adems de brindar solucin a
alteraciones que cursan con disnea.
Indicaciones:
Pleurorrea.
Neumotrax o hidrotrax como tratamiento para estabilizar a un paciente con
disnea.
Masas en cavidad pleural o mediastino.
102
Objetivo:
Que los alumnos aprendan el procedimiento para la obtencin de lquido
torcico, los casos en que esta indicado, el material que se utiliza, el manejo
correcto de la muestra y los diagnsticos que se pueden obtener.
Material:
Una aguja de mariposa estril (calibres 19 a 22) para animales pequeos,
delgados y en gatos.
Un catter calibres 20 a 22 para animales grandes u obesos. Este tipo de
catter permite retirar la aguja una vez introducido en la cavidad torcica, de
esta forma se disminuye la posibilidad de daar los rganos intratorcicos.
Venoclisis.
Una llave de tres vas.
Una jeringa de 12, 20, o 60 mL dependiendo del volumen de lquido o aire que
se va a evacuar.
Procedimiento:
Colocar al animal de pie o en decbito
esternal. Frente al paciente con
neumotrax o pleurorrea, se requiere
mayor cuidado debido a que la
manipulacin o adopcin de posturas
puede exacerbar la disnea.
103
lacerar el nervio y los vasos sanguneos intercostales que
se encuentran a lo largo del borde caudal de cada costilla,
el sitio de puncin debe ser justo craneal a la misma.
Manejo de la muestra:
Colectar una muestra del fluido en un tubo de EDTA para realizar el
recuento total de clulas nucleadas, determinacin de protenas totales y
examen citolgico. Es necesario tomar otras muestras en un tubo sin
anticoagulante si se van a realizar anlisis bioqumicos (colesterol o triglicridos
por ejemplo) y en un medio de cultivo si se pretenden realizar pruebas
microbiolgicas.
Complicaciones:
Las complicaciones resultan excepcionales con una tcnica bien
empleada, las que comnmente se presentan son las siguientes:
Neumotrax por laceracin pulmonar, o por una tcnica mal ejecutada que
permite el paso de aire del exterior al interior.
Puncin miocrdica con resultante hemorragia y arritmias cardiacas.
Piotrax, si no se lleva a cabo una tcnica asptica.
Hemotrax, por lesin a estructuras no deseadas, debido a esto, una
contraindicacin relativa para realizar el procedimiento, es la presencia de un
desorden hemorrgico causado por coagulopatas o trombocitopenias
manifiestas.
Utilidad diagnstica:
Clasificacin de la efusin: trasudado, trasudado modificado y exudado
Efusiones hemorrgicas
104
Neoplasias
Metaplasias
Quilotrax
PERICARDIOCENTSIS
Introduccin
La pericardiocentsis es una tcnica diagnstica y teraputica que debe
aplicarse en todos los pacientes con derrame pericrdico. Cuando se realiza de
forma correcta, es segura y eficaz, principalmente desde el punto de vista
teraputico. El examen del lquido pericrdico incluye recuentos completos de
clulas nucleadas, eritrocitos, determinacin de protenas totales y examen
citolgico. Si en la citologa se observan bacterias es recomendable realizar
cultivo y antibiograma.
Indicaciones:
Derrames pericrdicos de origen incierto
Estabilizar clnicamente a perros y gatos con derrame pericrdico.
Objetivo:
Que los alumnos aprendan el procedimiento utilizado para la obtencin
del lquido pericrdico, los casos en que se indica, el material necesario y los
diagnsticos que se pueden obtener con esta muestra.
Material:
Se utiliza un catter de calibre 14 a 16, de 13 a 15 cm de largo que tenga
entre uno y tres orificios laterales cerca de la punta. Los orificios laterales se
pueden cortar con una hoja de bistur procurando no dejar bordes cortantes. El
catter se conecta a una llave de tres vas, una extensin y una jeringa de 30 a
60 mL.
Procedimiento:
Colocar al paciente en decbito lateral izquierdo, debe utilizarse la zona
precordial derecha para evitar laceraciones de vasos
coronarios extramurales del lado izquierdo. Los lbulos
pulmonares derechos tienen una escotadura cardiaca
mayor, de modo que se minimiza la posibilidad de
lesin.
105
5 espacio intercostal (Fig. 135), unos centmetros por encima de la unin
costocondral, en direccin dorsal. Si se dispone de ecocardiografa, el lugar
puede determinarse explorando al paciente. Se deber tener cuidado con los
grandes vasos que corren a lo largo del borde caudal de la costilla.
Complicaciones:
Si se realiza la tcnica correctamente las complicaciones son poco
frecuentes, entre ellas:
Hemopericardio
Lesiones del corazn
Lesiones en pulmn
Generacin de arritmias
Diseminacin de neoplasias o infecciones a cavidad torcica
Utilidad diagnstica:
El examen del lquido pericrdico por lo general permite distinguir
perfectamente si se trata de un trasudado, de un lquido sptico o de quilo, sin
embargo, la distincin entre derrames neoplsicos y no neoplsicos se ve
limitada dado que muchas alteraciones neoplsicas intrapericrdicas no son muy
exfoliativas, por lo que comnmente pueden resultar falsos negativos, adems
las clulas mesoteliales reactivas que se presentan en gran cantidad en todas
las muestras de lquido pericrdico son muy similares a la neoplsicas, por lo
cual la identificacin citolgica precisa de los derrames neoplsicos es difcil.
ARTROCENTSIS
Introduccin:
La artrocentsis implica la insercin percutnea de una aguja en una
cavidad articular con el objeto de obtener lquido sinovial para su evaluacin.
Puede realizarse con equipo mnimo, en un tiempo breve y sin mayores
complicaciones para el paciente, por lo cual hace que esta tcnica tenga un gran
106
valor para el diagnstico de las artropatas caninas y felinas. Adems del
examen citolgico, debe comprobarse el volumen obtenido, color, turbidez,
viscosidad, concentracin de mucina (cido hialurnico), concentracin de
protenas, y conteo de clulas nucleadas. Basndose en esos hallazgos puede
clasificarse la artropata ms fcilmente.
Indicaciones:
En perros con pirexia persistente asociada a rigidez o claudicacin.
En articulacin caliente y tumefacta sugestiva de un proceso infeccioso.
En animales con signos radiogrficos sugerentes de proceso articular
degenerativo, para descartar un proceso inflamatorio concomitante.
Poliartritis, en la cual el paciente tiene antecedentes de dolor, dificultades
ambulatorias o claudicacin.
Lupus eritematoso.
Objetivo:
Que los alumnos aprendan los abordajes de las diferentes articulaciones
accesibles para la obtencin de lquido sinovial, los casos en que est indicada,
el material necesario, el procedimiento, el manejo de la muestra y la utilidad
diagnstica.
Material:
El equipo necesario para la artrocentsis consiste de una aguja
hipodrmica de 1 a 1.5 pulgadas de calibre 20 a 22 con jeringa estril de 3 a 5
mL. Si el espacio articular del que se va a hacer la extraccin es pequeo (el
carpo de perros pequeos o de gatos) puede ser preferible utilizar una aguja
espinal de calibre 25, debido a que al tener un estilete ms corto, es ms
probable que entre a la articulacin de una forma adecuada y en cualquier caso,
la jeringa no debe ser de 1 mL debido a que la presin negativa ejercida por esta
no es suficiente para la obtencin de una cantidad de lquido adecuada. Los
perros grandes pueden requerir una aguja espinal de 3 pulgadas para ingresar
en la articulacin de la cadera. Es necesario tambin utilizar guantes estriles
para reducir la posibilidad de contaminacin iatrognica.
Procedimiento:
A continuacin se describe el procedimiento general que puede ser
utilizado para todas las articulaciones:
107
Rasurar y preparar en forma asptica la articulacin
afectada.
ABORDAJES
Articulacin radiocarpiana:
Se flexiona el carpo y la aguja se inserta por la cara craneal entre el radio
y el hueso radiocarpiano.
Articulacin escapulohumeral:
Se flexiona ligeramente el hombro y se inserta la aguja medialmente
ventral al proceso acromin del hmero. Se avanza en forma oblcua
108
ventrocaudal para pasar a travs del msculo bceps braquial y medial al
msculo deltoides.
Articulacin femorotibiorotuliana:
La artrocentsis de esta articulacin puede realizarse desde ambos lados
del ligamento recto patelar, puesto que ambos espacios articulares estn
conectados. Se flexiona la articulacin para extender la cpsula articular,
mientras se aplica presin digital sobre la cpsula en un lado del ligamento
patelar. Ello causa la protrusin de la cpsula en el lado opuesto. Se hace
avanzar la guja a travs de est ltima zona en direccin oblicua.
Articulacin coxofemoral:
Se puede utilizar un abordaje lateral o ventral. En el primer caso, se
abduce y se rota el fmur cranealmente (normalmente agarrando la articulacin
femorotibiorotuliana). Esta maniobra permite abrir el espacio articular y tensa la
cpsula. Se inserta la aguja craneal al trocnter mayor del fmur y se avanza
craneoventralmente hacia la articulacin. Debe tenerse cuidado para evitar la
arteria femoral, que cruza la cpsula articular y el nervio citico, que es caudal a
la articulacin.
Manejo de la muestra:
La muestra debe manipularse correctamente lo antes posible despus de
su obtencin. El lquido sinovial normal no se coagula, sin embargo, cuando
exista contaminacin sangunea, hemorragia intraarticular o exudacin proteica,
en diferentes enfermedades inflamatorias, las muestras pueden coagularse a no
ser que se procesen de inmediato o se les aada un anticoagulante. Si se
obtiene poca cantidad de lquido, es necesario realizar inmediatamente las
extensiones, cuando es un volumen mayor se deposita en un tubo de vidrio al
vaco con EDTA, para el estudio citolgico, mientras que para la prueba del
cogulo de mucina se prefiere heparina. Cualquier anticoagulante es adecuado
para las otras pruebas de diagnstico.
Utilidad diagnstica:
Procesos no inflamatorios
Hemoartrosis
Artropatas degenerativas
Procesos inflamatorios
Artritis sptica
109
Artritis asptica
Procesos neoplsicos
Enfermedades inmunomediadas
LQUIDO CEFALORRAQUDEO
Introduccin:
El examen de lquido cefalorraqudeo (LCR) es un complemento muy
importante en la exploracin de los animales con enfermedad neurolgica y
como mnimo debera incluir el recuento de clulas nucleadas, evaluacin
citolgica y determinacin de la concentracin de protenas.
Indicaciones:
Disfuncin del sistema nervioso central
Trastorno neurolgico detectado en el examen fsico
Historia reciente de signos neurolgicos
Investigacin de enfermedades focales de la mdula espinal
Sospecha de infiltracin de linfoma en sistema nervioso central
Objetivo:
Que los alumnos aprendan el
procedimiento y los abordajes de los
sitios anatmicos en donde se puede
obtener LCR, las indicaciones, el
material necesario, el manejo de la
muestra, la utilidad diagnsticas y las
principales complicaciones a considerar.
Material:
Se utiliza una aguja espinal con
estilete de calibre 20 de 9 cm, en la Fig. 139. Abordaje atlantoocipital para la
mayora de los pacientes. En perros extraccin de lquido cefalorraqudeo.
pequeos y gatos puede utilizarse una
aguja de calibre 22 de 3 a 5 pulgadas.
Guantes estriles
Tubos con y sin EDTA
110
Procedimiento:
El lugar de la obtencin del LCR, se selecciona basndonos en la
localizacin de la lesin. El LCR se obtiene del espacio atlantooccipital en
lesiones por encima del foramen mgnum o del segmento craneal de la mdula
espinal. En lesiones caudales a la mdula cervical craneal, el LCR se obtiene en
el espacio subaracnoideo lumbar.
Abordaje atlantooccipital:
Inducir al animal a anestesia general e
intubarlo.
Rasurar el rea atlantooccipital, preparar la
piel quirrgicamente.
Colocar al animal en decbito lateral
derecho.
Con la ayuda de un asistente, se mantiene
la cabeza flexionada en sentido ventral, con la
nariz perpendicular a las vrtebras verticales
superiores, de esta forma se consigue abrir el
espacio atlantoocipital para facilitar el acceso.
Se tira de las orejas hacia delante con la Fig. 140. Abordaje atlantoocipital para la
extraccin de lquido cefalorraqudeo.
finalidad de tensar la piel. Bajo la cabeza del
animal se puede colocar una toalla o una
almohadilla para mantener la columna a una
distancia constante de la superficie de la mesa. Es necesario asegurarse que el
tubo endotraqueal no se obstruya en esta posicin.
Con la mano izquierda se palpa con los dedos la protuberancia occipital y las
alas rostrales del atlas. El dedo ndice se utiliza para palpar la depresin
existente entre estas tres estructuras. Dicha depresin seala el punto de
insercin de la aguja. Otro mtodo para identificar el punto de insercin de la
aguja es trazando dos lneas imaginarias, una entre los bordes craneales de las
alas del atlas y la otra desde la protuberancia occipital hacia caudal por la lnea
media, el punto de insercin se localiza en donde interceptan las dos lneas.
Con guantes estriles, se introduce lentamente la aguja (con el bisel orientado
hacia craneal) perpendicular a la piel en el punto previamente localizado.
Generalmente, se aprecia una sensacin de disminucin de la resistencia al
pasar la duramadre. En ese momento se retira el estilete y se evita la primera
gota para reducir la contaminacin de la muestra. El LCR se deja gotear en un
tubo con EDTA.
Si la aguja ha avanzado lo suficiente como para que pueda haber atravesado
la duramadre y no se aprecia disminucin en la resistencia, se debe retirar el
estilete y esperar 2 a 3 segundos a que fluya el LCR. Si no se detecta ningn
flujo, puede reinstalarse el estilete y avanzar un poco la aguja. Esta tcnica se
repite hasta obtener el LCR. Es siempre mejor retirar el estilete y observar el
flujo cada 2 a 3 mm. si no se est seguro de la posicin de la punta del estilete,
con esta tcnica se pueden evitar lesiones innecesarias. Si la aguja choca contra
111
una superficie sea durante la insercin, se redirige ligeramente craneal o
caudalmente hasta penetrar en el espacio atlantooccipital. Si las primeras gotas
de la puncin estn diluidas con sangre, estas pueden ser utilizadas nicamente
para cultivo microbiolgico ya que aun la cantidad ms pequea de sangre
invalida las cuentas celulares y otro tipo de pruebas qumicas.
Si se obtiene sangre pura, la aguja probablemente est fuera de la lnea media
y se encuentre en un seno vertebral; cuando este es el caso se repite toda la
maniobra nuevamente. En la mayora de los casos el LCR no estar
contaminado y an se puede extraer una muestra adecuada.
Una vez obtenido el lquido se extrae la aguja del paciente y se proceder a su
recuperacin anestsica, observando con atencin la funcin cardiorrespiratoria
para descubrir signos de herniacin del tronco cerebral.
Fig. 141. Rasurado de la Fig. 142. Embrocado Fig. 143. Localizacin Fig. 144. Obtencin LCR.
regin occipital. de la regin occipital. del sitio para obtencin
del LCR.
Abordaje lumbar:
El animal es inducido a anestesia general
Rasurar y preparar la piel quirrgicamente en una zona que se extiende 3 a 4
cm lateralmente de la lnea media desde la porcin craneal de las alas del leon
hasta el proceso espinoso dorsal de L6.
Se coloca al animal en decbito lateral y se flexiona el rea lumbosacra
atrayendo cranealmente las extremidades posteriores. De preferencia el rea a
puncionar debe ubicarse en la orilla de la
mesa para facilitar el movimiento de la
mano del operador.
Con guantes estriles se palpan las
apfisis espinosas dorsales de las
vrtebras lumbares. Los puntos ptimos
para la obtencin de LCR son los
espacios L 4 - L 5 y L 5 - L6
112
Retirar y desechar la primera gota para evitar la contaminacin; el LCR se deja
gotear en los tubos de coleccin.
Complicaciones:
Puncin del bulbo raqudeo debido a la colocacin incorrecta de la aguja
espinal.
Contaminacin del sistema nervioso central por tcnicas incorrectas de
asepsia en los procedimientos.
Hemorragia en lquido cefalorraqudeo debido a puncin de senos vertebrales.
Si se introduce demasiado la aguja espinal puede producirse lesin en la
mdula espinal o en el tallo enceflico.
La complicacin ms notable es la herniacin cerebral, debido a esto, la
recoleccin de LCR est contraindicada en los casos donde se sabe que ha
113
aumentado la presin intracraneal. En dichos casos el remover el lquido de la
cisterna magna, crea una baja presin local ocasionando que el tallo cerebral se
desve caudalmente y que se presente la herniacin del vermis cerebral a travs
del foramen magno. La herniacin del cerebelo comprime la mdula oblongada y
los centros vitales del tallo cerebral, produciendo la muerte. Hay que sospechar
de un aumento en la presin intracraneal en los animales que presentan un
deterioro rpido del nivel de conciencia, anisocoria, midriasis, estupor, paresis
rgida, alteracin de los patrones de respiracin o del ritmo cardiaco
(bradicardia) y coma.
En pacientes donde la anestesia general es un riesgo potencial, estar
contraindicada la obtencin de LCR.
Utilidad diagnstica:
La obtencin de un diagnstico definitivo basado exclusivamente en el
examen del LCR no es comn, sin embargo, su evaluacin es til para confirmar
la presencia y el tipo de enfermedad primaria del sistema nervioso central. Los
parmetros del LCR se ven alterados en procesos inflamatorios, infecciosos,
neoplsicos, traumticos y algunos de los degenerativos del cerebro y de la
mdula espinal. El LCR es generalmente normal en enfermedades congnitas,
metablicas o txicas. Cuando se combina la informacin obtenida del anlisis
del LCR con la historia clnica, examen neurolgico y otras pruebas
diagnsticas, puede confirmarse o rechazarse un diagnstico presuntivo.
Meningitis supurativa que responde a esteroides
Meningoencefalitis granulomatosa
Meningoencefalitis necrozante del Pug
Enfermedad medular traumtica
Enfermedades degenerativas
Meningoencefalitis bacteriana (rara)
Vasculitis
Enfermedades virales: moquillo, peritonitis infecciosa felina, rabia
Enfermedades fngicas: cryptococosis, blastomicosis
Enfermedades rickettsiales: ehrliquiosis
Enfermedades por protozoarios: toxoplasmosis, neosporosis
Enfermedades neoplsicas
114
improntas y permite obtener clulas de diversas reas dentro de la lesin, con lo
cual proporciona material ms representativo.
Indicaciones:
En lesiones externas:
Cualquier tipo de masas, para diferenciar entre inflamacin, hiperplasia y
neoplasia.
Abscesos cutneos, granulomas, hematomas o quistes.
Masas e inflamaciones de glndula mamaria.
Linfonodos, aumentados de tamao.
En lesiones internas:
Masas intracavitarias: Pulmn, hgado, rin y bazo.
Prostatomegalias de origen desconocido.
Anormalidades de mdula sea.
Material:
Agujas de calibre 21 a 25 (el largo depender de la profundidad de la
lesin)
Jeringas de 3 a 20 mL
Un porta jeringas de Farenzen o de Cameco
Procedimiento:
Identificar y palpar la lesin.
Preparar la piel de la misma forma que para una vacunacin o puncin venosa.
Delimitar y sujetar firmemente la masa para facilitar el procedimiento y tener
mayor control de la aguja.
Introducir la aguja acoplada a la jeringa (cuidando que esta no contenga aire)
en el centro de la masa y se aplica presin negativa tirando del mbolo hasta las
tres cuartas partes del volumen de la jeringa para provocar la aspiracin celular.
Las lesiones blandas suelen exfoliar con facilidad. En estos casos no es
115
necesario crear un vaco tan grande para obtener clulas representativas
intactas. Esto es particularmente importante cuando se realizan aspirados de
linfonodos o de posibles linfomas ya que los linfocitos inmaduros son muy
frgiles. Las lesiones de consistencia ms firme, normalmente contienen una
gran cantidad de clulas del estroma que se exfolian con menos facilidad y
dificultan su obtencin, en estos casos, para optimizar el muestreo, hay que
crear un vaco mayor y realizar un movimiento ms enrgico con la aguja.
Si el tamao de la masa es lo suficientemente grande y manteniendo siempre
el vaco en la jeringa, se redirige la aguja con movimientos hacia atrs y hacia
delante describiendo el rea de un abanico como si se estuviera infiltrando con
un analgsico local, esto con el fin de ampliar la posibilidad de la obtencin de
clulas representativas. Es importante que en ningn momento se salga de la
lesin, puesto que esto provocara la entrada de aire y que el material contenido
en la aguja pase a la jeringa, con lo cual la muestra sera prcticamente
imposible de recuperar. Cuando la masa no sea lo bastante grande como para
mover la aguja sin riesgo de salir de ella, se dejar de ejercer presin negativa
en los cambios de posicin de la aguja. En esta situacin slo se ejercer
presin cuando la aguja se encuentre estable. Este procedimiento debe
realizarse rpida y suavemente, si se provoca un traumatismo innecesario con la
punta de la aguja, se produce una mayor aspiracin de sangre y la activacin en
pocos segundos de la cascada de coagulacin. Si tiene lugar la coagulacin de
la muestra, debe repetirse la aspiracin utilizando material nuevo y en un lugar
distinto.
Tras obtener muestras de varias reas, se elimina la presin negativa en la
jeringa dejando el mbolo en la posicin cero y se extrae la aguja de la masa y
de la piel. En la mayora de los casos no se aprecia material en la jeringa y la
cantidad de clulas presentes dentro del cono de la aguja por lo regular es
adecuada para obtener de 2 a 4 extendidos de buena calidad. Una tcnica
alternativa basada en el principio de la capilaridad conocida como muestreo
capilar con aguja delgada se realiza colocando una aguja en la lesin sin la
necesidad de efectuar succin. Las clulas se desplazan dentro del cilindro de la
aguja mediante accin capilar. ste mtodo se utiliza principalmente en rganos
vascularizados, puesto que tiene la ventaja de minimizar la contaminacin
sangunea y reduce el riesgo de ruptura celular.
Posteriormente separar la aguja de la jeringa y tirar del mbolo para llenarla de
3 a 5 mL de aire.
Acoplar la aguja de nuevo y presionar el mbolo rpidamente para expeler el
tejido acumulado en la aguja y depositarlo en un portaobjetos. La aguja debe
estar lo ms cercana posible al portaobjetos ya que si se expulsa el material
desde cierta distancia, se obtiene una gran cantidad de gotas que se secan
antes de poder aplicar cualquier tcnica de extensin. El resultado suele ser una
muestra no diagnstica, debido a que las clulas se hallan agregadas y de esa
forma no pueden ser evaluadas.
Una vez obtenida la muestra en el portaobjetos, es esencial aplicar tcnicas
adecuadas para la extensin de clulas.
Fijar las laminillas al aire.
116
Complicaciones:
Ruptura de procesos inflamatorios encapsulados.
Diseminacin de un agente infeccioso.
Siembra de clulas neoplsicas en el recorrido de la aguja.
Hemorragia.
A) Insercin de la aguja en el interior de la masa. B) Se aplica presin negativa. C) Se redirige la aguja describiendo el
rea de un abanico. D) Se elimina la presin negativa. E) Se extrae la aguja de la masa. F) Se separa la aguja de la
jeringa. G) Se tira del mbolo para obtener de 3 a 5 mL de aire. H) Se acopla la aguja a la jeringa. I) Se deposita la
muestra en un portaobjetos.
IMPRONTA
Las improntas son las huellas que quedan en una laminilla cuando se
pone en contacto con un tejido. Son fciles de obtener y requieren de una
sujecin mnima del paciente. En general producen muestras menos celulares
que los raspados y ms contaminacin que un aspirado, sin embargo, la
morfologa de las clulas puede ser excelente. En consecuencia, las improntas
de lesiones superficiales a menudo slo reflejan una infeccin bacteriana
secundaria y/o displasia tisular inducida por inflamacin. Ello dificulta su uso en
el diagnstico de neoplasias, sin embargo, son muy tiles para la evaluacin
rpida de una muestra de biopsia.
117
Indicaciones:
Lesiones superficiales.
Muestras de biopsias quirrgicas.
Lesiones: pstula, ppula o quiste.
Linfoadenomegalia (linfoma).
Procedimiento:
En lesiones ulceradas:
Si es una lesin ulcerada, realizar la primera impronta antes de limpiar el
exudado, de esta forma es ms fcil identificar algunos microorganismos
bacterianos que se perderan si se limpia la lesin.
La limpieza posterior para la segunda impronta, se lleva a cabo con una gasa
humedecida con solucin salina fisiolgica, retirando contaminantes como
exudado y sangre, de esta forma se obtiene una preparacin de mejor calidad.
Presionar un portaobjetos limpio contra la lesin previamente preparada. La
presin se ejerce con suavidad y aplicando un ligero movimiento ondulante, de
otra forma se pueden obtener clulas deformadas. De preferencia deben
obtenerse varias improntas de un mismo lugar.
Fijar la impronta al aire, puede ser de utilidad agitar la laminilla, esto ayuda a
preservar las clulas y la calidad de la muestra.
En muestras de biopsias:
Empleando una hoja de bistur se secciona el tejido o masa a examinar,
creando una nueva superficie.
La sangre y el lquido tisular deben retirarse de la superficie mediante contacto
con un material absorbente limpio (Fig. 149). El exceso de sangre o fluidos
puede inhibir la adherencia de las clulas tisulares a la superficie de cristal.
Apoyar con suavidad la superficie secada con lo cual se obtiene una
preparacin celular del tejido sobre un portaobjetos limpio y se retira con
rapidez. En un mismo portaobjetos pueden realizarse 3 o 4 improntas
Fijar las muestras al aire.
118
Fig. 149. Tcnica de impronta de una muestra de biopsia
en donde se observa el contacto con un papel absorbente (flecha).
119
LITERATURA CONSULTADA
Bush, BM.: Interpretation of laboratory results for small animal clinicians. Blackwell
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