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PRCTICA N 7

RECONOCIMIENTO DE PROTENAS

Las protenas son elementos vitales para los organismos, encontrndose en plantas y animales en una proporcin
elevada. Hay una gran variedad de protenas y cada una desempea una funcin biolgica especfica que puede ser
de reserva, de sostn, transporte, estructural, etc. Qumicamente las protenas estn constituidas por combinaciones
complejas de carbono, hidrogeno, oxigeno, nitrgeno y otros elementos en menor proporcin como son azufre cobre y
fosforo.

Cuando la estructura de la protena se desorganiza, se dice que se encuentra desnaturalizada y esto trae como
consecuencia la perdida de la actividad biolgica. La desnaturalizacin puede lograrse por medios fsicos como el
calor o qumicos como una variacin de pH, observndose una disminucin en la solubilidad y la formacin de un
coagulo. Este mtodo es utilizado para demostrar la presencia de protenas. Tambin se puede identificar protenas
mediante el uso de sustancias que al ponerse en contacto con ellas, producen una coloracin especfica, tal es el
caso de la Reaccin de Biuret.

La reaccin debe su nombre al Biuret, una molcula formada a partir de dos de urea (H 2N-CO-NH-CO-NH2), que es la
ms sencilla que da positiva esta reaccin la presencia de protenas. El reactivo de Biuret contiene CuSO 4 en solucin
acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de una compuesto de color violeta, debido a
la formacin de un complejo de coordinacin entre iones Cu 2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno
que forman parte de los enlaces peptdicos presentando un mximo de absorcin a 540nm.

II.- Objetivo

Identificar la presencia de protenas en diversos alimentos por medio de la reaccin de Biuret, observando la
desnaturalizacin de una protena

Adquirir informacin acerca de las propiedades fsicas y qumicas de las protenas

Comprobar la solubilidad de las protenas en diferentes solventes

III. Materiales

Material de vidrio y otros

Tubos de ensayo
Gradilla
Mechero
Vasos de precipitados
Pipetas
Pinza para tubos
Baos mara
Reactivos

HCl concentrado
HNO3 concentrado
Alcohol etlico
SO4Cu al 1%
NaOH al 20% Y 40%
cido actico
Acetato de plomo al 5%.

Material biolgico
Leche
Albmina

IV. Metodologa

4.1. COAGULACIN DE LAS PROTENAS

FUNDAMENTO

Las protenas debido al gran tamao de sus molculas forman con el agua soluciones coloidales que pueden
precipitar formndose cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70C o al ser tratadas con soluciones
salinas, cidos, alcohol, etc.

La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes indicados
que al actuar sobre la protena la desordenan por destruccin de sus estructuras secundaria y terciaria.

Procedimiento

Para ver la coagulacin de las protenas se puede utilizar clara de huevo, para conseguir ms volumen puede
prepararse para toda la clase una dilucin de clara de huevo en agua, de forma que quede una mezcla an espesa.

1 Colocar en un tubo de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo.

2 Aadir 5 gotas de cido actico y calentar el tubo a la llama del mechero.

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4.2. Reaccion Xantoproteica

Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con
cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de
grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali
vira a un color anaranjado oscuro.

Pocedimiento

1 Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 ml. de solucin problema (clara de huevo).

2 Aadir 1 ml. de HNO3 concentrado.

3 Calentar al bao mara a 100 C.

4 Enfriar en agua fra

5 Aadir gota a gota una disolucin de sosa al 40%.

4.3. Reaccion de Biuret


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La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptdico
(- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminocidos.
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada
biuret, de frmula:

que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluda, da una coloracin violeta caracterstica.

Procedimiento

1 Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 ml. de albmina de huevo.

2 Aadir 2ml. de solucin de hidrxido sdico al 20%.

3 A continuacin 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%.

4 Debe aparecer una coloracin violeta-roscea caracterstica.

4.4. Reaccion de los Aminoacidos Azufrados

Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la
separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de
plomo, forma el sulfuro de plomo.

Procedimiento

1 Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 ml. de albmina de huevo (clara de huevo).

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2 Aadir 2 ml. de solucin de hidrxido sdico al 20%.

3 Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%.

4 Calentar el tubo hasta ebullicin.

5 Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizndose el
azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar proteinas que tienen en su composicin aminocidos
con azufre.

V. RESULTADOS Y DISCUSIN
Se dibujaran las diferentes reacciones de reconocimiento de carbohidratos y se discutirn los resultados de
acuerdo a lo obtenido.

5 RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS - DERECHO


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8 RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS - DERECHO
La desnaturalizacin de protenas se da en la clara de los huevos, que son engran parte albminas en agua. En los
huevos frescos, la clara es transparente ylquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa
slidaintercomunicada. Esa misma desnaturalizacin puede producirse a travs deuna desnaturalizacin qumica

RESULTADOS OBTENIDOS:
Al colocar la clara de huevo en un tubo de ensayo y aadirle la solucin de SO4Cu al 1% de color azul turquesa,
observamos que obtenemos un color azul fuerte. Luego al aadirle a esta mezcla el NaOH al 20%, se vuelve la
disolucin de un color azul ms claro. Lo agitamos y finalmente podemos observar como el resultado es que la mezcla
se torna de color violeta, lo que nos indica que efectivamente hay presencia de protenas gracias a la reaccin del
Biuret, por la coordinacin del Cu en medio alcalino, con los enlaces peptdicos de las protenas de la clara del huevo.

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VI. CONCLUSIONES
Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el organismo ya que cumplen muchas funciones

Las protenas estn constituidas por aminocidos por los cuales los mtodos se basan en el reconocimiento de los
aminocidos

Al realizar las diferentes pruebas con la albmina se pudo comprobar experimentalmente efectivamente que se trata
de una protena

Las protenas son sensibles con las sales metlicas pesadas (mercurio, cobre ,plomo) formando precipitados

En las reacciones donde se obtuvo precipitacin se debi a un cambio en el estado fsico de la protena , mientras que
en la coagulacin se ha producido un cambio en el estado fsico y en la estructura qumica por eso es irreversible

Finalmente se observa y se corrobora que la clara de huevo se desnaturaliza en todas las sustancias expuestas en
este laboratorio.
La leche presenta un estado de coagulacin en presencia del HCL

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El estudiante concluir de acuerdo a los objetivos planteados.

VII. CUESTIONARIO

1 Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo?

La desnaturalizacin de protenas se da en la clara de los huevos, que son en gran parte albminas en agua. En los
huevos frescos, la clara es transparente y lquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa
slida intercomunicada. Esa misma desnaturalizacin puede producirse a travs de una desnaturalizacin qumica,
por ejemplo volcndola en un recipiente con acetona. Desnaturalizacin

irreversible

de la protena de la clara de huevo y prdida disolubilidad, causadas por la alta temperatura (mientras se la fre)

2 Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una protena?

La prueba general para determinar protenas es la de BIURET,en la que un color violeta indica positivo.En realidad
se determina la presencia del enlace peptdico CONH2 unido a otro CONH2.La reaccin de ninhidrina .
Pruebas fsicas sencillas como la coagulacin y la precipitacin en sales neutras , tambin confirman.

3 Qu coloracin da la reaccin del Biuret?

Provoca una coloracin violeta cuya intensidad de color depende de la concentracin de protenas.

4 Una protena coagulada podra dar la reaccin del Biuret?

Si una protena coagulada podra dar la reaccin de Biuret, porque el reactivo reacciona con cualquier
protena ,liquida o slida , por ejemplo cuando se hace una cuantificacin d protenas en suero ( liquida) o
cuando haces una prueba cualitativa en huevos ,carnes , papas ,etc.

5 Qu tipo de enlace detecta el reactivo de Biuret?

6.- Porque algunos aminocidos se les conoce como esenciales?

Se les llama asi porque no pueden ser fabricados por nuestro cuerpo ( el resto si ) y deben obtenerse a travs de la
alimentacin .los aminoaciods esenciales son la LEUCINA ,
ISOLEUCINA,VALINA,TRIPTOFANO,FENILALANINA,METIONINA,TREONINA,
LISINA E HISTIDINA.

7.- A que se denomina desnaturalizacin de protenas?

Se denomina a la desnaturalizacin de las protenas a la PERDIDA DE LAS ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERIOR


(secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena poli peptdica reducida a un polmero estadstico sin niguna
estructura tridimensional fija.

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Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena con el disolvente disminuir su estabilidad en disolucin y
provocara la precipitacin .As, la desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa ,la neutralizacin de las cargas
elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrogeno facilitara la agregacin intermolecular y provocara
la precipitacin suele ser consecuencia del fenmeno llamado DESNATURALIZACION y se dice entonces que la
protena se encuentra DESNATURALIZADA
.

PRCTICA N 8

EXTRACCIN DE ADN

I.- INTRODUCCIN

El ADN es una de las partes fundamentales de los cromosomas, son estructuras constituidas por dos
pequeos filamentos o brazos, que pueden ser iguales o desiguales, estn unidos por un punto comn llamado
Centrmero; varan en forma y tamao, pueden verse fcilmente al momento de la divisin celular por medio de un
microscopio.

Los cromosomas qumicamente estn formados por protenas y por el cido Desoxirribonucleico ADN.

Estructura del ADN

El ADN est formado por unidades llamadas nucletidos, cada una de las cuales tiene tres sustancias: el
cido fosfrico, un azcar de cinco carbonos llamado pentosa y una base nitrogenada.

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El cido fosfrico forma el grupo fosfato; la base nitrogenada es de cuatro clases: adenina (A), guanina (G),
citocina (C) y timina (T).

Segn los descubridores del ADN, James Watson y Francis Crick, el ADN est formado por una doble cadena
de nucletidos que forman una especie de doble hlice semejante a una escalera en espiral; a los lados se disponen
en forma alternada un fosfato y un azcar y en los peldaos dos bases nitrogenadas.

Funciones y Propiedades del ADN

a) El ADN controla la actividad de la clula.

b) Es el que lleva la informacin gentica de la clula, ya que las unidades de ADN, llamadas genes, son las
responsables de las caractersticas estructurales y de la transmisin de estas caractersticas de una clula a
otra en la divisin celular.

Los genes se localizan a lo largo del cromosoma.

c) El ADN tiene la propiedad de duplicarse durante la divisin celular para formar dos molculas idnticas,
para lo cual necesita que en el ncleo existan nucletidos, energa y enzimas.

II.- OBJETIVOS

El objetivo fundamental de esta prctica es utilizar unas sencillas tcnicas para poder extraer el ADN de un
tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar. A partir de la longitud enorme de
las fibras tambin se confirma que en el ncleo el ADN se encuentra replegado.

III.- MATERIALES
Higadito de pollo
Varilla de vidrio
Alcohol de 96
Cloruro sdico 2M
SDS ( cualquier detergente concentrado)
Arena Trocito de tela para usar de filtro
Eosina
Vasos de precipitado
Probeta
Embudo
Mortero

IV.- METODOLOGA

1 Triturar medio higadito de pollo en un mortero. Para ello aadir una cucharadita de arena para que al triturar
se puedan romper las membranas y queden los ncleos sueltos.

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2 Aadir al triturado, 20 ml de agua.

3 Remover hasta hacer una especie de papilla o pur.


4 Filtrar varias veces en una probeta sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado por
romper.

5 Medir el volumen del filtrado final con una probeta


6 Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro sdico 2M.

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7 Con esto conseguimos producir el estallido de los ncleos para que queden libres las fibras de cromatina.
8 Verterlo todo en un vaso de precipitado.
9 A continuacin se aade 1 ml de SDS. La accin de este detergente es formar un complejo con las protenas
y separarlas del ADN. As nos quedar el ADN libre de las protenas que tiene asociadas.

10 Aadir mediante una pipeta ( o probeta) 25-50 centmetros cbicos de alcohol de 96


11 Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas.

12 En la interfase, precipita el ADN.

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13 Importante inclinar el vaso de precipitado para evitar el contacto directo y asegurarnos el resbale. ES EL
PUNTO MS DELICADO DE TODA LA PRCTICA.
14 Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma direccin.
15 Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la
agrupacin de muchas fibras de ADN.

16 Tomar una pequea muestra de las fibras y teir con eosina, aadiendo una gota del colorante y dejndolo
reposar durante 10 minutos. Observar al microscopio. Se pueden conseguir resultados similares utilizando
azul de metileno y esperando 1-3 minutos.

V. RESULTADOS Y DISCUSIN
Se dibujaran el proceso de extraccin de ADN y se discutirn los resultados de acuerdo a lo obtenido.

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17 RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS - DERECHO
VII.- CUESTIONARIO

1De qu est formada la cromatina?

La cromatina esta formada por el ADN con la informacin


gentica y las protenas que lo empaquetan que se encuentran
dentro del nucle .La cromatina es una estructura dinmica que
adapta su estado de compactacin y empaquetamiento para
optimizar los procesos de replicacin, transcripcin y reparacin
del ADN.

1 Para qu aadimos arena al triturado?

Para que al triturar se puedan romper las membranas y


queden los ncleos sueltos.

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2 Por qu crees que estallan los ncleos al aadir el cloruro sdico?

NaOH( hidrxido de sdio) que saponifica. A esto se denomina efecto del in comun en Qumica. El efecto
inmediato es formar mas sales de sodio del cido estearico( de la grasa), antiguamente este efecto se le
denominaba : Salificacin. La formacin de rpidamente la sal del cido graso,ante nuestra vista se traduce como
"corte", permitiendo que el liquido( glicerina, agua y restos de NaOH), drene y separe facilmente al Jabon( sal sdica
del cido graso)

3 Qu accin tiene el SDS sobre la cromatina?

4 Realiza un dibujo de la observacin de las fibras al microscopio.

5 Con que objetivo se usa la solucin alcalina NaCl

El etanol se utiliza para precipitar la solucin del ADN

6 Que efecto puede causar la solucin de cloroformo, alcohol isoamilico y el uso de etanol frio, en la extraccin
de cido nucleico.

Con el NaCl conseguimos producir el estallido de los ncleos para que queden libres las fibras de
cromatina

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VIII .- Conclusin

Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulta que las fibrillas de ADN comenzaron a salir, de un color blanco
precipitado por sobre el alcohol (mezcla Heterognea). Con un alambre doblas y obtenemos y sacamos del tubo de
ensayo el ADN. Si quieres conservar el ADN puede dejarse secar sobre un papel de filtro.
En caso de que el ADN de la Muestra Vegetal no se pueda apreciar muy claramente. Tenemos que agitar el tubo un
poco para poderlo apreciarlo mejor.
Si se tiene problemas con el filtro, que no est bien hecho y que no filtra bien, por lo tanto hay que hacer otro. Tambin
puede haber complicaciones con la forma de poner el alcohol de manera que cayera por las paredes del tubo de
ensayo.
Con esto podemos saber cmo es el procedimiento del extracto del ADN, as como si estructura de una forma fcil y
sencilla.

IX.-Bibliografa

http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/
http://html.rincondelvago.com/extraccion-del-adn-de-una-cebolla.html
http://centros5.pntic.mec.es/ies.victoria.kent/Rincon-C/Practica/PR-5.htm

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