FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS

AURORA MARN N.

Biologa Celular Pedagoga en Ciencias Mencin Biologa

Gua de Laboratorio 4: Extraccin de ADN desde tejidos vegetales

Introduccin

La macromolcula cido desoxirribonucleico (ADN), forma parte de todas las clulas. Contiene
informacin gentica usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos
conocidos y de algunos virus, siendo el responsable de su transmisin hereditaria.

La extraccin del ADN celular es una etapa clave en muchos procedimientos

de biologa molecular y aplicaciones de ingeniera gentica. El mtodo
vara dependiendo de la clula o tejido desde donde se necesita extraer el
DNA, sin embargo, los pasos a seguir en forma general pueden resumirse as:

1 Las clulas deben ser lisadas, es decir, debe romperse la pared celular y la membrana
plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la
membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas
emulsionan los lpidos de las membranas celulares y las rompen.
2 La disminuye o evita la unin de las protenas al ADN.
3 Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero
cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el
agua. Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de
otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa, aunque no es
completamente eficiente en esta accin, por lo cual, dependiendo de las aplicaciones
posteriores, puede ser necesario someter el DNA a etapas de purificacin adicionales.
Usualmente el DNA extrado se analiza mediante electroforesis en geles de agarosa y/o
espectrometra UV.

Objetivo General

- Extraer ADN de diferentes muestras por mtodos fsico-qumicos

Objetivos Especficos

- Conocer la metodologa bsica para la extraccin de ADN

- Extraer ADN desde tejidos vegetales con elementos sencillos, aplicables en cualquier
establecimiento educacional.
 - Observar la formacin del ovillo de ADN.

- Investigar los efectos de cada una de las sustancias y de los pasos realizados para
extraer el ADN desde tejidos vegetales.
- Realizar ensayos para observar las propiedades fisicoqumicas de los cidos nucleicos.

Parte I Extraccin de ADN

Materiales por grupo:

- 1 Mortero con pistilo

- 1 Embudo de vidrio
- 3 Tubos de ensayo
- 20 ml de agua destilada (por muestra)
- 1 pipeta de 10 ml
- 1 pipeta de 5 ml
- 1 gradilla

Materiales por sesin:

- etanol (95% ) o alcohol isoproplico (91%)

- 1 recipiente con hielo grande
- 1 gotario para el etanol (o pipeta de 5 ml)
- HCl 0,1 N
- 2 vasos pp de 1000 ml
- Mecheros con trpode y rejilla

Materiales que deben ser trados por cada alumno

- Una cuchara plstica

- Sal de mesa (1/2 cucharada por muestra)
- shampoo de color claro o detergente de loza (1/2 cucharada por muestra)
- 1 pltano o 2 kiwis, o 4 frutillas (por grupo, en el prctico deben haber al menos 3
vegetales distintos)
- 1 colador pequeo

Procedimiento

- En un mortero muele el tejido vegetal sin cscara junto con unos 20 ml de agua
destilada.

- Agrega cucharadita de shampoo y mezcla suavemente.

- Agrega cucharadita de sal y mezcla suavemente durante 5 a 10 minutos.

- Pon a enfriar el frasco con etanol o alcohol isoproplico en hielo.

- Pon a enfriar un tubo de ensayo.

 - Cuela o filtra la mezcla, recibindola en el tubo de ensayo fro.

- Con el gotario, escurre suavemente el alcohol fro, sin retirar el tubo del hielo y deja
reposar por 3 a 5 minutos.

- Mueve suavemente la mezcla hasta ver aparecer en la fase alcohlica una especie de
ovillo o coloide blanquecino.

Parte II Ensayos para observar las propiedades fisicoqumicas de los cidos

nucleicos.

II A.- Efecto de la temperatura.

1.- A una muestra de ADN contenida en un tubo de ensayo agregar 2 mL de agua destilada,
agitar suavemente.
2.- Colocar el tubo en Bao Mara a 100C (recuerda las precauciones de seguridad).
3.- Observa y anota los cambios.

II B.- Efecto de un medio cido.

1.- En un tubo de ensayo conteniendo una muestra de ADN agregar 2ml de HCl 0,1 N y agitar
vigorosamente por 2 minutos. Esta operacin puede efectuarse fcilmente sujetando el tubo por
la parte superior con una mano y golpeando con el dedo ndice de la otra mano., no ponga dedos
en el extremo superior del tubo.
2.- Observa y anota los cambios.

Preguntas para el anlisis de la experiencia

a.Qu otro tipo de sustancias es posible encontrar entre los componentes del tejido vegetal
usado?

b.Cul es la funcin del detergente en la experiencia?

c.Cul es la funcin de la sal en la experiencia?

d. Cul es la funcin del alcohol en la experiencia?

e.Qu ocurre con el material gentico que se consume?

f. Por qu se forma una especie de ovillo blanquecino?, A qu corresponde?

Investiga: Cmo podras purificar el ADN obtenido?

g. Cul es el efecto de la temperatura y de un medio cido sobre el ADN?