MATERIALES:

Agar Spezieller Nahrstofmmarmer (ASN)

PDA
Medio de cultivo papa dextrosa
Varilla esmerialda
Vortex
Cloroformo- alcohol isoamilico
Isopropanol
Hipoclorito de sodio (3%)
Hematocitometro

METODOLOGIA:
IDENTIFICACION
- Para identificar los generos se realizo un aislamiento que consiste en
pequeos cortes de la zona de avance de la enfermedad osea por las
races que se tornan de color caf; esto se desinfecta con hipoclorito
de sodio durante 3 min, se enjuaga y se siembra en placas Petri con
medio PDA. Posteriormente incubadas a 27+-2C durante 7 dias.

- Para identificacin de especies se elaboraron cultivos monoconidiales

que fueron dispersados en placas con PDA, las colonias
monoconidiales para su conservacin fueron transferidas al medio
Spezieller Nahrstommarmer. Mediante la observacin de sus
caractersticas microscpicas de las colonias obtenidas en las placas
se identificaron.

- La concentracin de ADN se determino mediante el mtodo de Doyle.

Se raspo el micelio de Fusarium con medio de cultivo de papa
dextrosa, se peso y se macero en una varilla esmerilada luego se
agito en un vortex y se dejo reposar en hielo. Se agrego cloroformo-
alcohol isoamilico y se le adiciono el mismo volumen de isopropanol,
se reposo en hielo y se centrifugo durante 10min, recuperamos la
pastilla adicionando ARNasa y se incuba a 37C durante 1h.

PRUEBAS DE PATOGENICIDAD EN INVERNADERO

- Desinfectamos las semillas de ajo y sembramos en bolsas con
sustrato esteril 4 plantas por tratamiento 12 cepas de Guanajuato, 10
de Aguacalientes, 12 de Zacatecas y un testigo inoculado con agua
destilada. Se incluyo la cepa AGS Y10 aislada en semillas de ajo para
comparar la patogenicidad de la cepa ZAC 119A.

- Se prepara el inoculo agregando al micelio 50 ml de agua destilada y

se licua, la inoculacin se trata alrededor del suelo y dicho inoculo fue
cubierto con sustrato esteril. Para describir la severidad de la
enfermedad se evaluo la reaccin cada 24 h y se recurrio a la escala
utilizada por Velasques y Medina.

RESULTADOS
Se lograron identificar cinco especies F. acuminatum, F. oxysporum, F. solani,
F. proliferatum y F. verticillioides. La especie encontrada con mayor
frecuencia fue F.oxysporum (36,05%) y la menos frecuente fue
F.acuminatum con un (1,36%).
Las cepas AGSY-10 (F. acuminatum), AGS1A (F. oxyspuriom), AGS1B
(F.oxysporum) fueron las que manifestaron mayor severidad.
Las primeras plantas en mostrar sntomas caracteristicos de la enfermedad
fueron las inoculadas con las cepas GT054A (F. solani) y AGS1B (F.
oxysporum) ; esta ultima expreso mayor patogenicidad.