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Universit Dr Yahia Fars de Mda 1er Anne SNV / 2015-2016

UEF 01. Matire : Biologie Cellulaire


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Chapitre 01 :
Introduction la
biologie cellulaire
Gnralits
Classification et importance relative du monde vivant
Cellule et thorie cellulaire
Types cellulaires (Procaryote, Eucaryote, Acaryote)
Mthodes d'tude de la cellule
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I. Gnralits :

Les sciences de la nature, ou sciences naturelles ont pour objet dtude le


monde naturel. Elles englobent Les Sciences de la vie & de l'environnement
(agronomie, anatomie, biologie, cologie, mdecine, microbiologie, pharmacologie,
physiologie, zoologie.). les Sciences de la Terre et de l'Univers climatologie,
gologie, ocanographie, vulcanologie) et les Sciences de la matire (chimie, chimie
minrale/organique, physique, physique nuclaire, thermochimie..).

La biologie (bios = vie ; logos = tude) ; est ltude des tres vivants. Elle
recouvre une partie des sciences naturelles. Ce terme (en franais) t cre par le
naturaliste Jean-Baptiste de Lamarck en 1802 ; Tout ce qui est gnralement commun
aux vgtaux et aux animaux comme toutes les facults qui sont propres chacun de ces tres sans
exception, doit constituer l'unique et vaste objet d'une science particulire qui n'est pas encore fonde, qui
n'a mme pas de nom, et laquelle je donnerai le nom de biologie.

Lobjet de la biologie est le vivant. Bien que la diffrence entre un tre vivant et
un objet minral est fait de faon simple et intuitive. Lanalyse chimique montre que
lon y trouve les mmes atomes et que Les systmes biologiques sont constitus de
molcules organiques inertes obissant aux lois physiques et chimiques. En rsultat,
de nombreuses difficults surgissent lorsquon se questionne : Quest ce qui
permet de dire quune chose est vivante ?

Un organisme nest vivant que si on peut lui attribuer un certain nombre de


caractristiques et proprits dynamiques rassembles sous le terme de physiologie.
Les caractristiques propres la matire vivante sont les suivantes :

Organisation cellulaire ; Complexit ordonne ; Sensibilit ; Croissance,


dveloppement et reproduction ; Utilisation dnergie ; Homostasie et
lAdaptation volutive
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II. Classification et importance du monde vivant:

La diversit est une caractristique de la vie. Les biologistes ont identifi ce


jour 1,8 millions d'espces. Cette diversit est connue pour inclure au moins 6.300
espces de procaryotes, 100.000 champignons, 290.000 plantes, 52.000 vertbrs,
un million d'insectes. Les estimations du nombre total d'espces varient d'environ 10
millions plus de 100 millions.

Grouper les diffrents lments en fonction des similitudes est une tendance
humaine. Par exemple, on peut organiser la musique par artiste, et regrouper les
divers artistes dans des catgories plus larges, tels que le rock, le jazz et classique. De
la mme manire, on peut tudier les d'cureuils et papillons en reconnaissons que
de nombreuses espces diffrentes appartiennent un groupe. Nous pouvons aussi
trier les groupes dans des catgories plus larges, comme les rongeurs (qui
comprennent les cureuils) et d'insectes (qui comprennent les papillons). La
Taxonomie (branche de la biologie) est une science qui nomme, classe et regroupe
les espces.

Lordre taxonomique est en changement continuelle en fonction des nouvelles


dcouvertes et du progrs scientifique. Jean-Baptiste de Lamarck au dpart, a limit
- dans a dfinition - le monde vivant que sur les animaux et les vgtaux.
Maintenant, La dcouvertes de nouveaux royaumes et lutilisation de nouvelles
mthodes telles que les comparaisons d'ADN des diffrentes d'espces, engage Les
chercheurs rvaluer les limites de leur classification. Malgr a, Il ya un consensus
que les royaumes de la vie peuvent dsormais tre regroupes en trois niveaux
encore plus levs de classification appel domaines.

Actuellement, Les biologistes dsignent trois grands groupes (Domaines) ; Les


Bactries, Les Archaebactrie, et les Eucaryotes. Ces trois domaines se divisent en
six rgnes : (1) les bactries ; (2) les Archaebactrie ; (3) les protistes ; (4)
les champignons ; (5) les vgtaux et (6) les animaux.

La taxonomie classique ( de Carl von Linn ) est organise comme suit :

Domaines rgnes embranchement classes

Ordres familles genres espces.


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Fig.01 : exemple de taxonomie classique de lourse amricain

III. La cellule et la thorie cellulaire

Au XVIIe sicle, ltude du monde vivant na t oriente que vers la


description des diffrences et la juxtaposition dtres totalement indpendants. La
recherche de similitudes tait plutt que inconcevables et hors de porte.

La dcouverte de lorganisation cellulaire de tous les tres vivants est


troitement lie aux progrs des instruments doptique. Lobservation la premire
fois dAnton Van Leeuwenhock en 1660 de croutes de peau, de spermatozodes et
des bactries ; et celles de Robert Hook en 1675 sur des feuilles vgtale qui la
proposa le terme cellule = logette identique juxtapose ; ainsi, Brown en 1833 a
dcouvert que les tres animale et vgtale ont un noyau qui se ressemble ; ont
conduit le savoir vers une nouvelle ide : celle que la biodiversit et la diffrence des
tres vivants dans lapparence, ont une structure unitaire semblable.
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En 1838 : M- Schleiden et T- Schwann : gnralise lide : la cellule est lunit
structurale et fonctionnelle des plantes et des animaux .. Et depuis, la thorie
cellulaire est une thorie centrale et principale de la biologie cellulaire
cellulaire. Elle Postule
que la cellule reprsente lunit structurale et fonctionnelle commune
lorganisation de tous les tres vivants . Elle est fonde sur 5 principes :

Tous les tres vivants sont constitus d'une ou plusieurs cellules

Toute cellule provient d'une autre cellule par


pa division cellulaire

La cellule est lunit


unit vivante , autonome capable de raliser un certain
nombre de fonctions ncessaires et suffisantes sa vie

individualit cellulaire grce la membrane plasmique qui rgle les


changes entre la cellule et son environnement

La cellule renferme de l'information ncessaire son fonctionnement et


sa reproduction (ADN).
(ADN)

La biologie cellulaire une science qui tudie les cellules, du point du vue
structural et fonctionnel.. Cest Ltude des lois qui rgissent les phnomnes
communs aux divers units lmentaires (cellules) dorganisation de la matire
ltat vivant

Fig.02 : Microscope et observation de R.HOOK


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IV. Types cellulaires (Procaryote, Eucaryote, Acaryote)

De faon superficielle, les cellules prsentent une diversit stupfiante. Elles


peuvent tre solitaires ou vivent en communaut ; elles prsentent des formes et des
couleurs variables (gomtrique, ronde, aplatie, souple) (vert, rouge, transparent) ;
certaines nagent, rampent, et certaines sont sdentaires. Compte tenu de ces
diffrences, il n'y a que deux types de cellules : (1) Les cellules bactriennes, dites
procaryotes (grec pour avant noyau ), parce qu'ils ont trs peu de l'organisation
interne visible de sorte que le matriel gntique est libre dans la cellule. Elles sont
aussi petites, (1-2m de longueur) ; habituellement unicellulaire. (2) Et les cellules de
tous les autres organismes, (protistes, mammifres, champignons et les plantes) dites
Eucaryotes (du grec avec un noyau ). Elles sont structurellement plus complexe et
contiennent une varit de structures spcialises appeles collectivement organites.
Le noyau, est lorganite qui stock l'information gntique. Leur taille est plus grande
(5-100 m). Elles peuvent tre uni/multicellulaires.

Fig.03 : Lorganisation de Procaryote et dEucaryote


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A. Caractristiques Gnrales Des Eucaryotes

La taille moyenne est comprise entre 05 et 100 m, certaines peuvent tre


significativement plus grandes (en cm, chez les Algues unicellulaires ou de nombreux
ufs, d Animaux). En termes de volumes, ces cellules sont 1 000 un million de fois
plus grosses que les cellules procaryotes ; cette simple observation est mise en
rapport la diffrence de complexit existante entre les deux groupes et doit tre
directement en consquence physiologiques quelle implique.

Laugmentation considrable du volume moyen est lie la diminution relative


de la surface cellulaire, ce qui pose des problmes importants au niveau des
changes entre cellule et milieu. Par ailleurs, laugmentation de volume du
cytoplasme tend diminuer lefficacit des ractions enzymatiques se droulant en
phase soluble. Les procaryotes assurent une diversit de fonctions par la seule
membrane cytoplasmique, ceci ne peut plus tre assur chez les Eucaryotes avec la
mme manire. La rsolution de cette difficult a conduit, la slection de dispositifs
de compartimentation de lespace cellulaire par des membranes, en permettant une
rgionalisation du mtabolisme.

Les cellules eucaryotes sont subdivises en territoires limits par des


membranes simples ou doubles, appels organites, do une organisation interne
dune grande complexit. Parmi ces organites, le noyau, qui renferme du matriel
gntique. La sparation physique de linformation gntique a des consquences
sur son fonctionnement ; les deux tapes fondamentales de son expression (la
transcription et la traduction) sont ainsi spatialement et temporellement dissocies.

Les mitochondries et les plastes (ces derniers chez les Vgtaux et certains
Protistes, seulement), sont des organite bien dlimits. Leur fonction est lie au
mtabolisme nergtique et aux conversions dune forme dnergie en une autre au
sein de la cellule (respiration, photosynthse).

Le rticulum endoplasmique et lappareil de Golgi, forment des sacs uni-


membranaires aplatis dont les fonctions sont essentiellement associes aux
mcanismes de scrtion de protines et de polysaccharides, ainsi La synthses de
lipides membranaires. des structures vsiculaires de taille et de morphologie varies
sont galement rencontres dans ces cellules. Il sagit des lysosomes des
peroxysomes et des endosomes, impliqus dans Des processus de digestion
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intracellulaire ou de mtabolisme oxydatif non gnrateur dnergie. Un
compartiment spcifique du monde vgtal est
reprsent par la (ou les) vacuole(s), dont les fonctions sont galement multiples.

Le hyaloplasme (ou cytosol), milieu dans lequel baignent les organites


prcdemment cits, est hautement structur par un systme de microtubules et de
microfilaments, appel cytosquelette, qui na pas dquivalent chez les Procaryotes.
Celui-ci a une double fonction : il est responsable de larchitecture cellulaire dune
part, et des mouvements intracellulaires (affectant les organites ou les
chromosomes, lors de la division) ou cellulaires (dplacement des cellules isoles),
dautre part. En rapport la fois avec ces divers mouvements de grande ampleur.

Chez les Eucaryotes, des processus spcifiques dendocytose et dexocytose.


Ces processus, qui impliquent lintervention de vsicules, permettent des changes
de matire dans les deux sens entre lintrieur et lextrieur de la cellule.

Lorganisation du matriel gntique des Eucaryotes est fondamentalement


diffrente de celles des Procaryotes. Les premiers, dont linformation gntique est
en moyenne 100 1 000 fois plus importante (en taille globale, mais pas en nombre
de gnes). Elles possdent des chromosomes, la division cellulaire permet la
sparation et la rpartition du matriel gntique dupliqu dans deux cellules-filles
grce un systme dune grande complexit ; il sagit de lappareil mitotique.

Les Eucaryotes (exceptions chez les Protistes) pratiquent le mode de


reproduction sexue, qui est caractris par lexistence dun cycle de vie dans lequel
existe une alternance de deux phases distinctes dites haplode et diplode. Ces
phases sont spares par deux vnements compensateurs (en nombre de
chromosomes et en quantit dinformation gntique): la miose et la fcondation.

Les capacits mtaboliques des Eucaryotes, (aptitude utiliser les sources de


matire et extraire lnergie), sont beaucoup moins diversifies que celles
rencontres dans lensemble des Procaryotes ; la respiration et la photosynthse
sont en effet les deux seuls types mtaboliques retenus par la trs grande
majorit dEucaryotes. Seuls quelques protistes prsentent des mtabolismes
atypiques par rapport cette norme.

.
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B. Caractristiques Gnrales Des Procaryotes

Les organismes procaryotes sont en grande majorit unicellulaires,


gnralement de forme sphrique ou en btonnets. Elles ont une taille moyenne
comprise entre 1 et 10 m. On utilise souvent le terme gnrique de Bactries pour
dsigner les diffrentes espces de Procaryote. le plan dorganisation cellulaire est ici
considrablement plus simple que celui dcrit pour les Eucaryotes.

De faon gnrale, les seules membranes rencontres dans ces cellules sont
celles qui les limitent, lintrieur de la cellule ne prsente donc pas dorganites ; en
particulier, le patrimoine gntique nest pas enferm dans un systme
membranaire clos et il nexiste pas de noyau vrai. Ceci entrane une continuit
entre les lieux o se droulent les diffrentes tapes de lexpression de linformation
gntique ; lorganisation molculaire du matriel gntique est, probablement en
rapport avec ce fait, trs diffrente chez les Procaryotes et les Eucaryotes.

Les mouvements intracellulaires sont absents dans les cellules procaryotes, de


mme que les processus dendo- et dexocytose, car il nexiste pas de cytosquelette
au sein de leur cytoplasme. Une caractristique remarquable de trs nombreux
Procaryotes est lexistence dune double membrane limitante, la membrane
cytoplasmique classique tant double extrieurement par une autre membrane
phospholipidique typique, la paroi. quelques exceptions prs, toutes les cellules
procaryotes sont pourvues dune paroi rigide plus ou moins paisse ; celle-ci assure
un rle de protection mcanique qui est rendu ncessaire par la pression osmotique
interne trs leve.

La motilit cellulaire est gnralement assure par des flagelles, structure


simple et mode de fonctionnement particulier (rotation), qui sont
fondamentalement diffrents de ceux observs chez les Eucaryotes ; certaines
formes sont mobiles par glissement sur le support.

La division chez les Procaryotes prsente des modalits trs simplifies,


compar ce que lon dcrit chez les Eucaryotes. La duplication de lunique
chromosome bactrien est coordonne avec la croissance, de sorte que la division a
lieu immdiatement aprs la fin de cette duplication. Les deux chromosomes-frres,
relis la membrane plasmique, sont spars par une cloison qui partage la cellule
initiale en deux ; ce type de division simple est nomm scissiparit.
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Il nexiste pas chez les Bactries de phnomne de sexualit vraie ; des
changes de matriel gntique et des phnomnes de recombinaison ont lieu, mais
ils concernent chaque fois une faible proportion du matriel gntique. DDe plus, il ne
sagit pas dchanges rciproques entre partenaires car le transfert reste
unidirectionnel, entre une cellule donneuse et une cellule receveuse. Les Procaryotes
fonctionnent sur le mode haplode, ce qui les rend plus sensibles que la plupart des
Eucaryotes aux phnomnes de mutation et de slection naturelle.

Au plan mtabolique,, les Procaryotes prsentent une diversit considrable de


types trophiques, Certains sont capables de fixer lazote atmosphrique ; dautres
peuvent raliser la photosynthse
osynthse partir de leau ou de drivs soufrs, ou bien
oxyder un grand nombre de composs minraux et peu prs toutes les molcules
organiques connues. Ils tirent de lnergie partir de ces derniers en rduisant lO2
ou bien des anions minraux tels
tel que NO3ou SO42 ; ce sont les seuls tres vivants
pratiquer les chimiosynthses. Ils participent ce titre de faon cruciale aux grands
cycles des lments de la biosphre (cycles de lazote, te, du soufre, du carbone).

Tab. 01 diffrences globales entre


en procaryote et eucaryote
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C. Les Acaryotes

Un acaryote est une cellule sans noyau. De faon plus large, le terme dsigne
galement les organismes dpourvus de noyaux, d'organites et de mtabolisme. Ils
possdent cependant une information gntique, sous forme d'ADN ou ARN. Le type
le plus commun d'acaryotes est le globule rouge. Les virus sont gnralement aussi
considrs comme tant des acaryotes.

Les virus occupent une place particulire entre les vivants et non vivants. D'une
part, ils sont faits des mmes molcules que les cellules vivantes. D'autre part, ils
sont incapables d'existence indpendante, tant compltement dpendant d'une
cellule hte pour se reproduire. Les virus sont des particules sub-microscopiques
constitues de matriel gntique enferm l'intrieur d'une couche de protine
appele la capside. Certains virus ont une couche de membrane supplmentaire
appel l'enveloppe. Les virus sont mtaboliquement inertes jusqu' ce qu'ils entrent
dans une cellule hte, aprs quoi le matriel gntique viral sapproprie la
machinerie de la cellule hte pour produire une protine virale et le matriel
gntique viral.

V. Mthodes d'tude de la cellule


1. La microscopie

Les microscopes font de petits objets paraissent plus grands. Le premier


microscope de Antoine Van Leeuwenhoeck 1665, nest que la superposition des
lentilles, Il a pu agrandir des particules provenant de la surface de sa peau, de sa
bouche et les dessine. Le microscope optique peut agrandir une image jusqu' 1500
fois sa taille originale. Les microscopes lectroniques peuvent atteindre des
grossissements jusqu' 1 million de fois.

Cependant, plus grand est que mieux quand plus de dtails sont rvls. La
finesse de dtails qui peut rvler un microscope est son pouvoir de rsolution. Ceci
est dfini comme le plus petit la distance que deux objets peuvent approcher un de
l'autre mais encore tre reconnue comme tant distinctes. La rsolution est
principalement fonction de la longueur d'onde de la source d'clairage ; La plus
petite longueur d'onde, plus l'objet qui provoquera la diffraction, et meilleur est le
pouvoir de rsolution. Le microscope optique utilise la lumire visible de longueur
d'onde d'environ 500 nanomtres (1000 nm = 1 m), est capable de distinguer des
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objets aussi petits que la moiti de ce: 250 nm. Le microscope lectronique est
ncessaire pour rvler lultra-structure des organites et d'autres structures
cytoplasmiques. La longueur d'onde d'un faisceau d'lectrons est d'environ 100 000
fois infrieure celle de la lumire. En thorie, le microscope lectronique peut
distinguer structures environ 1000 fois plus petites, qui est, environ 0,2 nm.

A. Le microscope optique

Un microscope optique se compose d'une source de lumire, naturelle ou


artificielle, et trois lentilles en verre: une lentille de condenseur pour concentrer la
lumire sur l'chantillon, une lentille d'objectif pour former l'image agrandie, et une
lentille de projecteur, gnralement appel loculaire, qui transmettre l'image
agrandie l'il. En fonction de la longueur focale des diffrentes lentilles et leurs
dispositions, un grossissement donn est atteint.
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Les prparations cellulaires sinteragir avec la lumire de plusieurs faons :

en absorbant certaines longueurs d'onde de la lumire.

La microscopie champs lumineux. Limage est constitue des couleurs non


absorb par la cellule. La plupart des cellules vivantes ont peu de couleur et sont
donc en grande partie transparente la lumire transmise. Ce problme peut tre
surmont par cytochimie, l'utilisation de taches de couleur (exp. Eosine, negrosine)
pour mettre en vidence de manire slective des structures particulires et des
organites.

en provoquant un dphasage des diffrents rayons

La microscopie en contraste de phase. Cela repose sur le fait que la lumire


se dplace des vitesses diffrentes travers les rgions de la cellule selon la
diffrence en composition. Le microscope contraste de phase convertit ces
diffrences d'indice de rfraction pour avoir diffrents contrastes, et beaucoup plus
de dtails sont rvls.

en mettant de la lumire dune autre longueur d'onde que celle d'origine.

La microscopie fluorescence. La lumire est rmise par fluorescence par


un chantillon clair au moyen dune lumire de longueur donde approprie. De
nombreux composs organiques sont naturellement fluorescents (la chlorophylle,
par exemple), mais on utilise surtout en biologie des composs artificiels. La
fluorescine, par exemple, a un pic dabsorption situ entre 450 et 490 nm (bleu) et
un pic dmission situ entre 520 et 560 nm (jaune-vert).

B. Le microscope lectronique

Le principe du MET (Microscope lectronique transmission) est que le


faisceau de photons est remplac par un faisceau dlectrons. La longueur donde
dun faisceau dlectrons est plus courte mais plus rapide : (acclrs par une tension
de 50 000 volts (0,005 nm=105< la lumire)). Le pouvoir sparateur atteint
nanmoins 0,2 nm et est 1 000 fois plus lev.

Une srie de lentilles (bobines) lectromagntiques et de diaphragmes,


permettant de contrler la trajectoire des lectrons ; une bobine condenseur focalise
le faisceau sur lobjet observer, puis une bobine dflectrice, (comme un objectif),
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donne une image agrandie. Une dernire lentille magntique (le projecteur),
quivalent dun oculaire, agrandit limage prcdente. Les images sont formes
Lorsque le faisceau incident dlectrons traverse lobjet ultrafin analyser sous vide,
ceux-ci sont absorbs ou rflchis par certains de ses atomes. Les atomes majeurs du
vivant (C, H, O, N) sont transparents aux lectrons, do la ncessit de contraster les
structures au moyen datomes lourds (uranium, plomb), opaques aux lectrons, qui
se fixent plus ou moins slectivement leur niveau.

Le MEB (Microscope lectronique balayage) produit des images partir


d'lectrons que sont rflchis par la surface d'un spcimen que le faisceau
d'lectrons balaye rapidement de faon va-et-vient. Ces lectrons rflchis sont
traites pour gnrer une image sur un moniteur d'affichage. Le microscope
lectronique balayage fonctionne sur une large plage de grossissement, de 10
100.000 avec une rsolution d'environ 1 nm. Son plus grand avantage, cependant,
est d'un grand profondeur de champ qui donne une image en trois dimensions. Il est
particulirement utile pour fournir des informations topographiques sur les surfaces
des cellules ou des tissus.

Fig. 05. Principe de base de la microscopie photonique et lectronique


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2. Fractionnement cellulaire

Le fractionnement, est de prendre des cellules et sparer les organelles et les


autres structures subcellulaires les unes des autres. L'instrument utilis est la
centrifugeuse, qui tourne des tubes essai contenant des mlanges de cellules
rompues diffrentes vitesses. Les forces rsultantes provoquent une fraction des
composants qui se dpose au fond du tube, formant un culot. A bas vitesses, le culot
est constitu de composants plus grands et lourds. A vitesse leve, le culot est
constitu des composants plus petits et lgers. Lultracentrifugation, parvienne
jusqu' 130, 000 par minute (RPM) et appliquent des forces d1 million de fois la
force de gravit (1,000,000 g). Le fractionnement cellulaire permet aux chercheurs de
prparer des composants en vrac et identifier leurs fonctions.

Fig.06. principe de fractionnement sub-cellulaire


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3. La technique cyto-histologique

Contrast la coloration des cellules en cytochimie, ncessite des manipulations


spcifiques. Le principe est prserv la structure cellulaire/tissulaire, dobtenir des
coupe minces du spcimen observ, et de contrast les nuances des composs
subcellulaire. Lordre est le suivant : Prlvement, fixation, inclusion, coupe et
coloration.

a) Prlvement :
Dans le milieu mdical, les prlvements sont effectus en clinique, l'hpital ou
dans des cabinets privs ou mdecin spcialiste.
On distingue quatre catgories majeures de prlvement :
o Les frottis : grattage (du col de l'utrus...),
o Les biopsies : fragments de tissu ou dorgane,
o Les organes en intgralit,
o Les liquides d'panchement divers (pleural, ascitique, pricardique)

Il existe galement des techniques de prlvement plus sophistiques : par


excision, ponction ou microdissection.

b) Fixation :
Cest laction de tuer les cellules, en vitant tout phnomne agonique, de
manire conserver les structures dans un tat morphologique aussi proche que
possible de ltat vivant. Une bonne fixation doit viter tout artefact : apparition
dune structure nouvelle (par coagulation), disparition dune structure normalement
prsente (par solubilisation), dformation ou dplacement des constituants
cellulaires (par cristallisation)

On peut fixer laide de procds chimiques : Alcool, formol, acide actique,


etc.ou bien par des procds physiques, (conglation).

c) Dshydratation :
Pour dshydrater les tissus, on les plonge dans des alcools de degrs
croissants, 70, 80, 90, 100, pendant le temps ncessaire l'quilibre des
concentrations. La pice anatomique doit tre entirement dshydrate avant
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l'inclusion dans la paraffine. La paraffine n'est pas non plus soluble dans l'alcool
utilis pour la dshydratation. On procde donc une double substitution.
On remplace l'eau par de l'alcool (Dshydratation)
On remplace l'alcool par le tolune (Substitution)

d) Inclusion :
La coupe ne peut tre pratique que dans une substance assez dure ; cest
pourquoi on imprgne les tissus dune substance denrobage, en gnral la paraffine
; lalcool ntant pas parfaitement miscible avec la paraffine, on plonge le tissu
dshydrat dans un solvant organique intermdiaire miscible lalcool et la
paraffine, le xylne, puis dans la paraffine maintenue liquide l'tuve entre 50 et
60C. On refroidit alors et on obtient un bloc de paraffine durcie contenant le tissu
examiner. Cette imprgnation suppose une dshydratation et une substitution de
leau par lalcool, solvant de la paraffine. En effet l'inclusion ne se fera de faon
satisfaisante que si la pice couper ne contient ni eau ni solvant intermdiaire
(alcool).

e) Coupe (microtomisation) :
Le bloc de paraffine est dcoup en tranches minces laide des microtomes
qui sont des appareils permettant de dbiter les blocs de paraffine en coupes de
quelques microns quelques dizaines de microns. Les forces de frictions entre
couteau et bloc chauffent la paraffine et la mettent en surfusion, ce qui permet de
coller les coupes les unes la suite de l'autre : ruban de coupes sries. On les
recueille sur des lames de verre (porte objets) autrefois enduites d'une solution
d'ovalbumine qui les colle sur la lame en schant. .

f) R hydratation :
Les coupes colles sur lame de verre sont dparaffines l'aide d'un solvant
organique et ramenes l'eau par des bains d'alcools de concentrations
dcroissantes. Cela permet de les colorer, car la majorit des colorants sont solubles
dans l'eau ou dans l'alcool.
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g) Coloration :
Les objets biologiques coups et examins par transparence ne sont pas ou
peu colors: ils offrent trs peu de contraste, donc de visibilit, et aucun dtail ne
peut tre peru. Il faut renforcer le contraste de couleur des diffrents organites ou
mieux les colorer. Cette lame de verre est alors plonge dans un colorant. On dispose
nombreux colorants naturels, qui se fixent sur telle ou telle structure de la cellule, par
exemple, le vert de mthyle colore en vert la chromatine
On utilise deux catgories de colorants : Les plus courants sont :
l'hmatoxyline, qui colore les noyaux cellulaires en bleu violac
Losine, qui colore les cytoplasmes en rose
Les bleus (Bleu de mthylne, de toluidine)

Fig. 07. Etapes de prparation histologique


Universit Dr Yahia Fars de Mda 1er Anne SNV / 2015-2016
UEF 01. Matire : Biologie Cellulaire
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Examen des chantillons en microscopie lectronique
a) Fixation : encore plus exigeante (les artefacts sont plus visibles), elle est
ralise avec des fixateurs spciaux, comme : le ttraoxyde dosmium OsO4 et le
glutaraldehyde C5H8O2. Ce sont les deux principaux fixateurs chimiques utiliss en
microscopie lectronique.
b) Dshydratation : elle suit le mme principe qu'en microscopie optique; mais
elle est dlicate car les tissus doivent tre conservs jusqu'au niveau molculaire.
c) Inclusion : elle se fait dans un milieu trs dur, dans des matires plastiques
telle que la rsine. Une fois refroidi, durci par polymrisation, on obtient un
chantillon solide.
d) Coupe : effectue sur un ultramicrotome, elle fournit des tranches encore
plus minces, de 50 nm.
e) Coloration : cest plutt une imprgnation (il ny a que le noir et le blanc en
microscopie lectronique) par des sels de mtaux lourds, comme les sels de plomb
ou duranyle, qui augmente le contraste des structures cellulaires.

- EXAMENS CYTOLOGIQUES

La cytologie est l'tude microscopique de cellules en dehors de toute organisation


tissulaire. Elle fait appel deux techniques de prlvement : le frottis et la ponction.
Cet examen de dpistage pourra tre ventuellement complt par la ralisation
d'une biopsie.

Les cellules peuvent provenir de matriels varis : liquide : sang, panchement


des sreuses, urines, LCR... semi liquide : scrtions vaginales, sperme, aspiration de
moelle osseuse... solide : tumeurs, ganglions, grumeaux de moelle osseuse
obtenus en mme temps quune biopsie mdullaire...

Modes dtalement : Ils sont essentiellement de trois types :

1. Ltalement de matriel centrifug cest--dire liquides trs fluides


2. urines, panchements sreux, kystes, LCR,
3. La cytocentrifugeuse projette les cellules en suspension dans le liquide, sur
une lame, perpendiculaire laxe de centrifugation.
4. Le frottis est la mthode de choix pour les semi-liquides, les liquides trs
cellulaires (aprs centrifugation et limination du liquide excdentaire).