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INTRODUCCIN ................................................................................................................... 1
1. MICROBIOLOGA .......................................................................................................... 2
1.1. Los mo y sus ambientes naturales ....................................................................... 3
1.2. Efecto de los mo entre s y en sus hbitats......................................................... 3
1.3. Impacto de los mo sobre el hombre ..................................................................... 4
1.3.1. Microorganismo y agricultura ......................................................................... 4
1.3.2. Microorganismos y alimentacin ................................................................... 5
1.3.3. Microorganismos, energa y medio ambiente .............................................. 6
1.3.4. Los microorganismos y el futuro ................................................................... 6
1.4. Races histricas de la microbiologa................................................................... 7
1.4.1. Ferdinand Cohn y la ciencia de la bacteriologa ......................................... 7
1.4.2. Pasteur y el fin de la generacin espontnea .............................................. 8
1.4.3. Koch y la teora microbiana de las enfermedades infecciosas .............. 10
1.4.4. Postulados de Koch ................................................................................... 11
1.4.5. Koch y los cultivos puros .............................................................................. 13
1.4.6. Koch y la tuberculosis .................................................................................... 13
1.5. Evolucin en la escala filogentica ..................................................................... 14
1.5.1. Las especies como unidades de clasificacin .......................................... 14
1.5.2. Divisin de organismos celulares ................................................................ 16
1.5.3. Las arqueobacterias........................................................................................ 16
1.5.4. Grupos que forman a las arqueobacterias ................................................. 16
2. ESTERILIZACIN........................................................................................................ 17
2.1. Teora y prctica de la esterilizacin .............................................................. 17
2.1.1. Esterilizacin por calor .............................................................................. 18
2.1.2. Esterilizacin por tratamiento qumico ................................................... 19
2.1.3. Esterilizacin por filtracin ....................................................................... 20
3. CRECIMIENTO MICROBIANO................................................................................... 21
3.1. Definicin de crecimiento ................................................................................. 21
3.2. Naturaleza y expresin matemtica del crecimiento ................................... 21
3.3. Tiempo de generacin y velocidad especfica de crecimiento .................. 24
3.4. Medicin del crecimiento .................................................................................. 26
I
3.4.1 Medicin de la masa celular ...................................................................... 26
3.4.2. Medicin del nmero de clulas .............................................................. 27
3.5. Rendimiento ......................................................................................................... 29
3.6. Crecimiento sincrnico ..................................................................................... 29
3.7. Cultivo por lote y cultivo continuo .................................................................. 30
4. EFECTOS AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO MICROBIANO ................ 32
4.1. Temperatura............................................................................................................. 32
4.1.1. Clases de microorganismos segn la temperatura .................................. 34
4.2. pH............................................................................................................................... 35
4.3. Efectos osmticos sobre el crecimiento microbiano ...................................... 36
4.4. Actividad de agua, smosis y halfilos.......................................................... 36
4.4.1. Solutos compatibles ....................................................................................... 37
4.5. Oxgeno................................................................................................................. 38
4.5.1. Clases de microorganismo en relacin al oxgeno ................................... 38
5. TRANSPORTE DE ELECTRONES............................................................................ 39
5.1. Complejos I a IV ...................................................................................................... 40
5.1.1. Complejo I ......................................................................................................... 40
5.1.2. Complejo II ........................................................................................................ 42
5.1.3. Complejo III ....................................................................................................... 43
5.1.4. Complejo IV ....................................................................................................... 45
5.1.5. Complejo V: ATP sintasa................................................................................ 46
Bibliografa ............................................................................................................................. 46
II
INTRODUCCIN
1
1. MICROBIOLOGA
2
industria. Muchas de las enfermedades ms importantes del hombre, de
otros animales y de las plantas, son producidas por MO. Los MO tambin
desempean una funcin destacada en la fertilidad del suelo y en la
produccin de animales domsticos. Adems muchos procesos
industriales y biotecnolgicos a gran escala, como la produccin de
antibiticos o de protenas humanas, se basan en la utilizacin de MO.
3
1.3. Impacto de los mo sobre el hombre
4
contenidas en los ndulos de las races reducen la necesidad de fertilizantes
costosos para plantas. Tambin tienen gran importancia agrcola los MO que son
esenciales en el proceso digestivo de los rumiantes, como las vacas y las ovejas.
Estos animales poseen un rgano digestivo especial llamado rumen, donde los
microorganismos realizan el proceso digestivo. Sin estos microorganismos las
vacas y las ovejas no podran digerir su alimento y, por tanto, no podran
desarrollarse sobre sustancias tan pobres en nutrientes como la hierba o el heno.
Los MO tambin desempean funciones crticas en el reciclado de elementos
importantes para la nutricin vegetal, en particular del carbono, nitrgeno y
azufre. En el suelo y en el agua, los MO convierten estos elementos en formas
asimilables por las plantas. Adems de beneficios, los MO tambin acarrean
perjuicios a la agricultura. Las enfermedades microbianas de animales y plantas
tienen un importante impacto econmico.
5
1.3.3. Microorganismos, energa y medio ambiente
Los MO tambin se pueden usar para ayudar a eliminar la polucin originada por
las actividades humanas, un proceso que se denomina biorremediacin. Se han
aislado varios MO de la naturaleza que consumen vertidos de petrleo,
disolventes, pesticidas y otros productos txicos que contaminan el ambiente,
bien sea directamente en el sitio del vertido o bien posteriormente, cuando el
material txico ha penetrado en el suelo o alcanzado el agua subterrnea.
6
ser producida microbiolgicamente a partir del gen de la insulina humana
expresado en un MO.
7
(estudio de las bacterias) y coloc la incipiente microbiologa en un buen punto
de partida.
En el siglo XIX tuvo lugar una gran polmica sobre la teora de la generacin
espontnea. La idea bsica de la generacin espontnea puede comprenderse
fcilmente. El alimento se pudre si permanece durante cierto tiempo a la
interperie. Cuando este material putrefacto se examina al microscopio se
encuentra que est repleto de bacterias. De donde provienen estas bacterias
que no se ven en el alimento fresco?. Algunos pensaban que provenan de
semillas o grmenes que llegaban al alimento a travs del aire, mientras otros
opinaban que se originaban espontneamente a partir del material inerte.
8
El adversario ms ferviente de la generacin espontnea fue el qumica francs
Louis Pasteur, cuyo trabajo sobre este problema fue el ms riguroso y
convincente. En primer lugar, Pasteur demostr que en el aire haba estructuras
que se parecan mucho a los MO encontrados en el material putrefacto.
Descubri que el aire normal contiene continuamente una diversidad de clulas
microbianas que son indistinguibles de las que se encuentran en mucha mayor
cantidad en los materiales en putrefaccin. Por tanto, concluy que los
organismos encontrados en tales materiales se originaban a partir de MO
presentes en el aire. Adems postul que dichas clulas en suspensin se
depositan constantemente sobre todos los objetos, Pasteur pens que si sus
conclusiones eran correctas, entonces no debera estropearse un alimento
tratado, de tal modo que todos los organismos que lo contaminaran fueran
destruidos.
Pasteur emple el calor para eliminar los contaminantes, pues ya se saba que
el calor destruye con efectividad los organismos vivos. De hecho, otros
investigadores ya haban mostrado que si una solucin de nutrientes se
introduca en un matraz de vidrio, se sellaba y se calentaba luego hasta
ebullicin, nunca se descompona. Los defensores de la generacin espontnea
criticaban tales experimentos argumentando que se necesitaba aire fresco para
la generacin espontnea y que el aire dentro del matraz cerrado se modificaba
por el calentamiento de modo que no era capaz de permitir la generacin
espontnea. Pasteur super esta objecin de modo simple y brillante
construyendo un matraz con forma de cuello de cisne, que ahora se designa
como un matraz Pasteur (figura 1.1).
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Figura 1.1. Experimento de Pasteur con matraces de cuello de cisne. (a) Esterilizacin del contenido del matraz.
(b) Si el matraz se mantiene en posicin vertical no hay crecimiento microbiano. (c) Si los microorganismos
atrapados en el cuello alcanzan el lquido estril, crecen rpidamente.
10
bacteria. Mediante cuidadosos estudios de microscopa, Koch puso de
manifiesto que la bacteria estaba siempre presente en la sangre de los animales
enfermos. Sin embargo, la mera asociacin de la bacteria con la enfermedad no
demostraba que la bacteria fuera la causa de la enfermedad; por el contrario,
podra ser un efecto de la enfermedad. Por eso, Koch demostr que era posible
tomar una pequea cantidad de sangre de un ratn enfermo, inyectarla en un
segundo ratn y provocar en ste la enfermedad y la muerte. Tomando sangre
de este segundo animal e inyectndola en otro, obtena de nuevo los sntomas
caractersticos de la enfermedad.
Koch llev este experimento aun ms lejos. Tambin demostr que la bacteria
poda ser cultivada en caldos nutritivos fuera del animal y que, incluso despus
de muchas resiembras o transferencias de cultivo, la bacteria poda causar la
enfermedad an cuando se reinoculaba a un animal. Es decir, la bacteria
procedente de un animal enfermo y la mantenida en cultivo inducan los mismos
sntomas de la enfermedad tras su inoculacin. Basndose en ste y en otros
experimentos, Koch formul los siguientes criterios, conocidos en la actualidad
como postulados de Koch, para demostrar que un tipo concreto de MO es el
agente etiolgico de una enfermedad especfica.
11
Los postulados de Koch se resumen en la figura 1.2. estos postulados no slo
permitieron demostrar que organismos especficos originan enfermedades
especficas, sino que impulsaron el desarrollo de la microbiologa haciendo
hincapi en la importancia de la utilizacin de los cultivos en el laboratorio.
Usando estos postulados como gua otros investigadores revelaron
posteriormente la causa de muchas enfermedades importantes del hombre y
de los animales. A su vez, estos descubrimientos condujeron al
establecimiento de tratamientos adecuados para la prevencin y cura de
muchas enfermedades infecciosas, amplindose de este modo las bases
cientficas de la medicina clnica.
Figura 1.2. Los postulados de Koch para demostrar que un determinado microorganismo causa una
enfermedad especfica.
12
1.4.5. Koch y los cultivos puros
13
Ahora sabemos que el bacilo de la tuberculosis Mycobacterium tuberculosis, es
muy difcil de teir debido a que posee grandes cantidades de lpidos en su
superficie. Pero Koch dise un procedimiento para teir M. tuberculosis en
muestras de tejidos usando azul de metileno alcalino y un segundo colorante
(marrn Bismark) que tea solo tejido. El mtodo de Koch fue el precursor de
la tincin de Ziehl-Nielsen usada hoy para teir bacterias cido-alcohol
resistentes como M. tuberculosis
14
divergente, que pueda dar lugar a la aparicin de una nueva especie, tendr
lugar solamente cuando una fraccin de esta poblacin se separe del resto,
quedando aislada, desde el punto de vista de la reproduccin y relegada a unas
condiciones ambientales distintas. Este aislamiento, probablemente tiene lugar,
en primera instancia, por razones geogrficas; ciertos tipos de barreras fsicas
(sistemas montaosos, masas de agua) pueden interponerse entre dos sectores
de una poblacin que inicialmente era continua.
16
1. Metangenos
2. Halfilos
3. Termoacidfilos
2. ESTERILIZACIN
2.1. Teora y prctica de la esterilizacin
17
La tasa de mortalidad nos dice solamente que fraccin de la poblacin inicial
sobrevive a un determinado periodo de tratamiento. Para determinar el nmero
real de sobrevivientes es preciso conocer, adems, el tamao inicial de la
poblacin. De acuerdo con esto, para establecer los procedimientos de
esterilizacin ha que tener en concideracin dos factores: la tasa de mortalidad
y el tamao de la poblacin inicial.
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el nivel caracterstico de las esporas. Por consiguiente, la tasa de muerte es
mucho ms baja para las clulas desecadas que para las hidratadas.
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Muchas de las sustancias usadas para preparar medios de cultivo son
demasiado lbiles frente al calor para ser esterilizadas en la autoclave. Para tales
sustancias resulta extremadamente til un mtodo qumico fiable de
esterilizacin. El requerimeinto esencial para un agente qumico esterilizante es
que sea voltil as como txico, de manera que pueda ser fcilmente eliminado
del objeto esterilizado despus del tratamiento. El mejor candidato disponible es
el xido de etileno, un lquido que hierve a 10.7C. puede aadirse a las
disoluciones en forma lquida (a una concentracin final aproximada de 0.5 a 1.0
por ciento) a una temperatura de 0 a 4C, o bien puede usarse como gas
esterilizante a temperaturas por encima de su punto de ebullicin. Sin embargo,
es qumicamente inestable y se descompone en disolucin acuosa dando
etilenglicol, que no es voltil y puede tener efectos no deseables. Adems, el
xido de etileno es explosivo y txico para los seres humanos, por lo que es
preciso adoptar precauciones especiales para su manejo. Por estas razones la
esterilizacin con xido de etileno no se ha convertido en procedimiento de rutina
en el laboratorio. Se usa, sin embargo, en la industria para la esterilizacin de
placas de petri y de otros objetos de plstico que se funden a temperaturas
superiores a los 100C.
20
3. CRECIMIENTO MICROBIANO
3.1. Definicin de crecimiento
= , =kX, = kZ
21
Donde N es el nmero de clulas/mL, X es la masa de clulas/mL, Z es la
cantidad de cualquier componente celular/mL, t es el tiempo y k es la constante
de velocidad de crecimiento. Estas ecuaciones describen adecuadamente el
crecimiento de la mayora de los cultivos de bacterias unicelulares.
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uno importante es el agotamiento de las reservas celulares de energa. Al igual
que el crecimiento, la muerte es una funcin exponencial y de aqu que en una
representacin semilogartmica la fase de muerte venga representada por una
disminucin lineal del nmero de clulas viables a lo largo del tiempo. La
velocidad de muerte de las bacterias es muy variable y depende tanto del
ambiente como del organismo en concreto.
23
3.3. Tiempo de generacin y velocidad especfica de crecimiento
Supongamos que se inocula un medio con una clula que se divide cada 20
minutos (tabla 3.1). La poblacin ser de dos clulas despus de 20 minutos, 4
clulas despus de 40 minutos y as sucesivamente. Debido a que la poblacin
es duplicada en cada generacin, el incremento en la poblacin es siempre 2 n.
No=Poblacin inicial
Nt=Poblacin en un tiempo t
Nt=No X 2n
24
Resolviendo para n (nmero de generaciones) aplicando logartmos
logNt = logN0+nlog2
Despejando n
0 0
n= esto es igual a
2 0.301
0
= = 0.301
Nt=2N0
log(20)0 2+00
= =
0.301 0.301
1
=
td=1/
25
3.4. Medicin del crecimiento
26
A=log (I0/I)
27
cierra un circuito elctrico establecido, a travs del lquido de suspensin, entre
un electrodo del interior y otro del exterior del tubo.
Protenas
Pptidogicano
DNA, RNA
28
ATP
3.5.Rendimiento
Donde:
3.6.Crecimiento sincrnico
29
celular. Las mediciones llevadas a cabo en tales cultivos equivalen a las
realizadas en las mismas clulas.
Quimiostato (figura 3.2). Este sistema est diseado de tal forma que se pueda
suministrar medio fresco al cultivo a la misma velocidad que se retira medio que
contiene microorganismos (cultivo).
30
D=f/V
Donde:
31
Figura 3.3. Velocidad de dilucin y crecimiento microbiano
4.1. Temperatura
32
fras o muy calientes los microorganismos no crecern. Pero los valores
absolutos de estas temperaturas mnimas o mximas varan mucho entre
microorganismos diferentes y, por lo general, reflejan el rango de temperatura
media de su hbitat natural.
Temperaturas cardinales
La temperatura ejerce dos tipos de efectos opuestos sobre los organismos vivos.
A medida que se eleva la temperatura, las reacciones qumicas y enzimticas de
la clula son ms rpidas y el crecimiento se acelera. Sin embargo, por encima
de cierta temperatura algunas protenas particulares pueden sufrir daos
irreversibles. En consecuencia, dentro de un cierto margen, un aumento de
temperatura supone un incremento en el crecimiento y en el metabolismo hasta
un punto que tienen lugar las reacciones de inactivacin. Por encima de tal punto,
las reacciones celulares caen rpidamente a cero. As para cada organismo
existe una temperatura mnima por debajo de la cual no es posible el crecimiento,
una temperatura ptima a la que se produce el crecimiento ms rpido, y una
temperatura mxima por encima de la cual no es posible el crecimiento. La
temperatura ptima est siempre ms cerca de la mxima que de la mnima.
Estas tres temperaturas, se denominan temperaturas cardinales o
fundamentales.
33
Figura 4.1. Efecto de la temperatura sobre la velocidad de crecimiento y consecuencias moleculares para la clula
34
Figura. 4.2. Clases de microorganismos segn la temperatura
4.2. pH
35
estudiados han sido bacterias aerbicas no marinas, muchas de las cuales son
especies de Bacillus.
El agua difunde desde una regin con alta concentracin de agua (baja
concentracin de solutos) hasta una regin con menor concentracin de agua
(mayor concentracin de solutos) por el proceso denominado smosis. En la
mayora de los casos, el citoplasma de una clula tiene una concentracin de
solutos mayor que el medio, por lo que el agua tiende a entrar al interior de la
36
clula, dicindose entonces que existe un balance de agua positivo. Sin
embargo, cuando una clula est en un medio con baja actividad de agua, existe
una tendencia del agua a salir de la clula.
Cuando un organismo crece en un medio con baja actividad de agua solo puede
obtener agua del ambiente incrementando su concentracin interna de solutos.
Tal aumento puede llevarse a cabo aumentando el bombeo de iones inorgnicos
37
hacia el interior de la clula a partir del medio ambiente, o bien sintetizando o
concentrando un soluto orgnico.
4.5. Oxgeno
38
aerobios son facultativos, lo que significa que en condiciones nutritivas y de
cultivo apropiadas pueden crecer tanto en condiciones aerbicas como
anaerbicas.
Figura 4.1. (a) El oxgeno penetra solo una corta distancia en el tubo, de modo que los aerobios estrictos solo
crecen en la superficie; (b) Los anaerobios, como son sensibles al oxgeno, solo crecen lejos de la superficie;
(c) Los aerobios facultativos son capaces de crecer tanto en presencia como en ausencia de oxgeno crecen
por todo el tubo; (d) Los microaerfilos crecen apartndose de la zona ms txica; (e) Los anaerobios
aerotolerantes crecen por todo el tubo.
5. TRANSPORTE DE ELECTRONES
39
5.1. Complejos I a IV
Los complejos de transporte de electrones se pueden difundir en forma
independiente en la membrana, pero tienden a formar grandes estructuras a
travs de interacciones dbiles mutuas. Los cuatro complejos enzimticos
contienen una gran variedad de centros xido-reduccin. Pueden ser cofactores,
como FAD, FMN o ubiquinona (Q). Otros centros tienen grupos de Fe-S,
coenzimas de protena como los citocromos, con contenido de hemo, y protenas
con cobre. El flujo de electrones se efecta por reduccin y oxidacin de esos
centros redox y el flujo va desde un agente reductor hacia un agente oxidante.
5.1.1. Complejo I
El complejo I cataliza la transferencia de dos electrones desde NADH hasta Q.
El nombre sistemtico de esta enzima es NADH:ubiquinona oxidorreductasa. Es
una enzima muy complicada. Sus versiones procariotas contienen 14 cadenas
diferentes de polipptidos. Las formas eucariotas tienen 14 subunidades
homlogas, ms otras 20 a 32 subunidades, dependiendo de la especie. Es
probable que las unidades eucariticas adicionales estabilicen al complejo y
eviten fugas de electrones.
40
Las molculas de NADH en la superficie interna de la membrana donan
electrones al complejo I. Los electrones se pasan de dos en dos as como unin
hidruro (H-, dos electrones y un protn). En el primer paso de la transferencia de
electrones, el in hidruro es transferido a FMN y se forma FMNH 2. A continuacin
se oxida el FMNH2 en dos pasos a travs de una semiquinona intermedia. Los
dos electrones son transferidos uno por uno al siguiente agente oxidante, un
grupo de hierro-azufre.
41
QH2 se vuelve a oxidar por el complejo III, y entonces los protones son liberados
al exterior.
5.1.2. Complejo II
El complejo II es la succinato:ubiquinona oxidorreductasa, y tambin se llama
complejo de succinato deshidrogenasa. Cataliza una de las reacciones del ciclo
del cido ctrico. El complejo II acepta electrones de succinato, e igual que el
complejo I, cataliza la reduccin de Q a QH2.
En las reacciones catalizadas |por el complejo II se libera muy poca energa libre.
Eso quiere decir que el complejo no puede contribuir en forma directa al
gradiente de concentracin de protones a travs de la membrana. Ms bien
suministra electrones de la oxidacin de succinato, a medio camino en la
secuencia de transporte de electrones. Q puede aceptar electrones del complejo
I o II, y donarlos al complejo III, y por consiguiente al resto de la cadena de
transporte de electrones.
42
5.1.3. Complejo III
El complejo III es ubiquinol: citocromo c oxidorreductasa, que tambin se llama
complejo citocromo bc. Esta enzima cataliza la oxidacin de molculas de
ubiquinol (QH2) en la membrana, y la reduccin de una molcula mvil e
hidrosoluble de citocromo c en la superficie externa. El transporte de electrones
a travs del complejo III se acopla en la transferencia de H + a travs de la
membrana por un proceso llamado ciclo Q.
La reaccin comienza cuando QH2 (del complejo I o del complejo II) se une al
sitio Q0 de la subunidad de citocromo b. QH2 se oxida a la semiquinona, y pasa
un solo electrn al complejo Fe-S adyacente en la subunidad de ISP. De all, el
electrn se transfiere al grupo hemo del citocromo c 1 esta transferencia se facilita
por el movimiento del grupo de
43
reducir la semiquinona a QH2. El segundo electrn viene de la oxidacin de una
segunda molcula de QH2 en el sitio Q0. La segunda oxidacin de QH2 tambin
da como resultado la reduccin de una segunda molcula de citocromo c, ya que
los dos electrones de la segunda QH2 van por caminos separados. El resultado
neto es que la oxidacin de dos molculas de QH 2 en el sitio Q0 produce dos
molculas de citocromo c reducido y regenera una molcula de QH 2 en el sitio
Q1.
As para cada par de electrones que pasa por el complejo III, desde QH 2 al
citocromo c, hay cuatro protones traslocados a travs de la membrana. Se
reducen dos molculas de citocromo c,y esos portadores mviles transportan a
un electrn, cada uno, al complejo IV. En realidad hay dos molculas de QH2 que
se oxidan (cediendo cuatro electrones), pero dos de esos electrones se reciclan
y regeneran una molcula de QH2.
44
5.1.4. Complejo IV
El complejo IV es la citocromo c oxidasa. Este complejo cataliza la oxidacin de
molculas de citocromo c reducido producidas por el complejo III. En la reaccin
se incluye una reduccin, con cuatro electrones, del oxgeno molecular (O 2) para
formar agua (2H2O), y la traslocacin de cuatro protones a travs de la
membrana.
Los electrones se transfieren uno tras otro del sitio CuA al grupo prosttico hemo
a en la subunidad I. de ah se transfieren al centro binuclear hemo a 3-CuB. el
primer paso de la reduccin de oxgeno molecular en el centro binuclear consiste
en la descomposicin rpida del oxgeno molecular. Un tomo de oxgeno se
une al tomo de hierro del grupo de hemo a3 y el otro se une al tomo de cobre.
La protonacin que sigue, y la transferencia de electrn, da como resultado la
liberacin de una molcula de agua del sitio del cobre, seguida por la liberacin
de una segunda molcula de agua del ligando de hierro. La reaccin total
requiere la toma de cuatro protones de la superficie interna de la membrana.
Bibliografa
Horton, R., Laurence, M., Scrimgeour, G., Perry, M., & Rawn, D. (s.f.). Principios de Bioqumica
(Cuarta ed.). Pearson.
Prescott, L., Harley, J., & Klein, D. (s.f.). Microbiologa (Quinta ed.). Mc Graw Hill.
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46