UNIVERSIDAD TCNICA DE MANAB

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE MEDICINA

A.- DATOS GENERALES DE LA PRACTICA DE LABORATORIO

Asignatura: Bioqumica

N de Gua: 3 Cdigo: OC-0212

Fecha:..Hora de inicio:Hora de finalizacin:.

Profesor Responsable:

Estudiante:.

Grupo al que va dirigido la Gua: Paralelo:...

B.- DATOS ESPECFICOS DE LA PRACTICA DE LABORATORIO

TTULO DE LA PRCTICA

DETERMINACIN DE GLUCOSA EN SANGRE Y VALORACIN CLNICA

CONTENIDOS:

Medicin de la concentracin de glucosa.

OBJETIVOS DE APRENDIZAJE
Objetivo general:

Determinar la concentracin de glucosa en plasma sanguneo.

Objetivos especficos:

- Establecer la importancia de la glucosa en el organismo.

- Describir las pruebas clnicas empleadas para la determinacin de la glucosa.
- Mencionar los estados patolgicos que involucran de la glucosa.
- Entender y practicar los principios bsicos de la espectrofotometra y la centrifugacin.
- Adquirir destreza en el uso de pipetas graduadas y automticas.

TIEMPO PLANIFICADO PARA LA PRCTICA DE LABORATORIO.

2 horas
RECURSOS PARA REALIZAR LA PRCTICA DE LABORATORIO.
- rea destinada para realizar el procedimiento (Laboratorio).
- In focus para proyectar diapositivas
- Espectrofotmetro.
- Centrfugas y tubos
- Pipetas graduadas y automticas
- Cristalera y materiales de laboratorio
- Algodn, alcohol etlico
 - Material adicional no suministrado: guantes, jeringuilla de 10 mL, jabn y papel toalla o
toalla desechable, rotulador permanente.
- Reactivo y calibrador.

INSTRUCCIONES PARA REALIZAR LA PRCTICA.

El estudiante debe:
- Estudiar previamente los aspectos relacionados con la prctica explicados en la
conferencia.
- Estudiar previamente el material elaborado por el profesor con los aspectos tericos y
prcticos relacionados con la prctica.
- Traer la gua de la prctica que es personal e intransferible.

DESARROLLO DE LA PRCTICA

- Introduccin de la prctica por parte del profesor.

- Los estudiantes tendrn en su puesto de trabajo una bandeja con diferentes materiales que
sern utilizados en el laboratorio.
- Utilizacin de la centrfuga y del espectrofotmetro.
- Separacin de un precipitado mediante centrifugacin.
- Medicin de volmenes mediante la utilizacin de pipetas graduadas y automticas.

PROCEDIMIENTOS

a)- Obtencin del suero:

Un tubo para ensayo seco (sin anticoagulante) verter 10 mL aproximadamente de sangre y dejar
coagular la muestra de forma espontnea durante alrededor de 10 minutos

Proceder a centrifugar (balanceando los tubos como se pudo observar en la prctica 1 y para evitar
roturas) para obtener suero los tubos se centrifugarn de 2500 a 3500 rpm durante 5-10 minutos.
La centrifugacin no debe ser muy prolongada, pues ello tambin favorece el deterioro celular.
Cuando la centrfuga se detenga esperar al menos 5 minutos antes de abrirla para evitar el
contacto con los aerosoles que se deprenden de la centrifugacin.

b)- Reactivos (SPINREACT)

PREPARACIN
Reactivo de trabajo (RT): Disolver el contenido de un vial de R2 Enzimas en un frasco de R1
Tampn.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 1 mes en nevera (2-8C) o 7 das a Temperatura ambiente (15-25C).

CONSERVACIN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta,
cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita la
contaminacin durante su uso.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
GLUCOSE CAL
Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos de
la luz y se evita su contaminacin.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partculas y turbidez.
- Absorbancia (A) del Blanco a 505 nm 0,10.

PRECAUCIN
Corrosivo (C): R35: Provoca quemaduras graves.
Sulfato de cobre (II): Peligroso para el medio ambiente (N): R50/53:
Nocivo para los organismos acuticos, puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio
ambiente acutico.
S22: No respirar el polvo. S60: Elimnense el producto y su recipiente como residuos peligrosos.
S61: Evtese su liberacin el medio ambiente.

PREPARACIN
Los reactivos estn listos para su uso.

CONSERVACIN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta,
cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su
contaminacin.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partculas y turbidez.
- Absorbancia (A) del Blanco a 540 nm 0,22.

c)- Condiciones del ensayo:

1. Preparar el espectrofotmetro:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . ...540 (530 -550) nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .1 cm paso de luz
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37C / 15-25C

2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.

3. Pipetear en una cubeta:

Blanco Patrn Muestra

R (mL) 1,0 1,0 1,0
Patrn(L) -- 25 --
Muestra (L) -- -- 25
4. Se realizar el procedimiento con pipeta manual (Tubo 1) y automtica (Tubo 2).
Mezclar e incubar 10 minutos a 37C 30 min a temperatura ambiente (15-25C).

5. Leer la absorbancia (A) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable
como mnimo 30 minutos.

d)- Clculo

PRECAUCIONES Y RECOMENDACIONES.

- Cumplir las normas de bioseguridad.

- Debido a la naturaleza del producto, es aconsejable tratar el patrn con sumo cuidado ya
que se puede contaminar con facilidad.
- Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensacin.
- Utilizar el mandil durante toda la prctica.
- No manipular los equipos sin la autorizacin del profesor.
- No utilizar las pipetas graduadas sin la pera de seguridad.
- Una vez concluida la prctica lavar la cristalera utilizada y organizar su puesto de trabajo.
- Despus de terminar la prctica proceder al lavado de las manos.

C.- EVALUACIN DEL APRENDIZAJE

- Durante la prctica se evaluar el estudio del material elaborado por los profesores y entregado
al estudiante previo al desarrollo de la prctica (Evaluacin terica 1 punto).
- Disciplina, manipulacin de los equipos y materiales de laboratorio y resultado de la
concentracin: Tubo 1 ________Tubo2________ (2 puntos).
- Se realizar una evaluacin escrita al finalizar la prctica (2 puntos).

D.- CONCLUSIONES:

El estudiante obtiene en la prctica la calificacin de _________ puntos

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DOCENTE ESTUDIANTE