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Genes
(Higgins, 2012)
Extraccin de ADN
1. Realizar una suspensin bacteriana turbia o bien cargada colocando una buena asada de la bacteria en un
tubo tipo eppendorf de 1.5ml adecuadamente rotulado que contenga 500uL de agua esterilizada.
2. En un termobloque, colocar los tubos eppendorf con las suspensiones bacterianas y configurarlo a una
temperatura de 100C y con una agitacin constante de 1000 rpm durante 10 minutos.
3. Dejar enfriar los tubos.
4. Centrifugar los tubos durante 1 minuto a 14000 rpm.
5. Cuidadosamente, sacar los tubos de la centrfuga y pasar el sobrenadante (contiene el DNA) a un nuevo
tubo eppendorf bien rotulado utilizando una pipeta.
6. Desechar el pellet.
7. Almacenar a -20C.
(Adwan, 2014; Capocefalo, Ridley, & Tranfield, 2016)
Programacin de PCR
REP-PCR
Electroforesis
1. Despus del ciclado de PCR, Realizar la corrida electrofortica del producto de PCR
(4l) en un gel de agarosa al 1,75% durante 6 horas a 60v.
2. Revelar el gel en el fotodocuemntador y codificar la foto de acuerdo al cdigo
respectivo.
Bibliografa
Crnich. (2014). Comparison of pulsed-gel electrophoresis and a commercial repetitive-element PCR
method for assessment of methicillin-resistant Staphylococcus aureus clustering in different
health care facilities. Journal of Clinical Microbiology, 2027-2032.