html Electrophorse : http://www.takween.com/techniques/05_Electrophorese.html Isoenzymes-mutations : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-mutations.pdf Isozymes. Principe de dtection : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-detection.pdf Isozymes : loci, allles : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-loci-alleles.pdf RAPD : http://www.takween.com/techniques/11_RAPD.pdf AFLP : http://www.takween.com/techniques/13_AFLP.pdf SSR (microsatellites) : http://www.takween.com/techniques/microsatellites-SSR-marqueurs.pdf
Polymorphisme de longueur des fragments de restriction de lADN (RFLP)
La technique RFLP repose sur la digestion d'un DNA cible par une ou plusieurs enzymes de restriction spcifiques des sites de restriction ports par le DNA. Aprs lectrophorse, les fragments spars sont hybrids avec un DNA sonde, provenant souvent de banques de DNA gnomique ou complmentaire. Cette sonde peut provenir d'une espce proche de l'espce tudier (sonde htrologue).
Si deux individus diffrent par un ou plusieurs sites ou, mme, par la distance sparant deux sites identiques conscutifs, il se cre une diffrence dans la longueur des fragments gnrs par l'enzyme de restriction. Les milliers de fragments obtenus aprs digestion enzymatique et rvls par le bromure d'thidium (BET), montrent sous UV un seul voil continu (smear). Une fois transfr sur une membrane de nylon ou de nitrocellulose (Southern, 1975) et hybrid par un DNA sonde, le DNA cible digr est visualis par autoradiographie, si la sonde est marque au P32 (sonde chaude) ou par mthodes biochimiques si la sonde est non radioactive (sonde froide). Origines du polymorphisme de restriction (RFLP) : - Perte ou gain d'un site de restriction - Mutation de type insertion-dletion
Dans les deux cas les loci sont gnralement biallliques et l'expression des allles est codominante.
Polymorphisme du la disparition dun site de restriction (mutations ponctuelles).
Polymorphisme du aux mutations de type insertion - dltion.
Caractristiques principales des marqueurs RFLP. Marqueurs refltant un polymorphisme de longueur de fragment Marqueurs codominants
Sgrgation des marqueurs molculaires de type RFLP.
P1 P2 F1 F2 BC1
____ ____ ____ ____ ____
____ ____ ____ ___ ____ ____ 1/4 1/2 1/4 1/2 1/2
Valeurs comparatives des marqueurs biochimiques et molculaires.
Effet de Types de Nombre Dterminisme lenvironnement Faisabilit Cots marqueurs
Culture Morphologie rares Dominants Oui ++++ de plantes Isoenzymes 50 Codominants Non/Oui +++ + RFLP Illimits Codominants Non + +++ Specific PCR, CAPS Illimits Codominants Non ++ ++++ RAPD Illimits Dominants Non +++ ++++
