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Electrophorse : http://www.takween.com/techniques/05_Electrophorese.html
Isoenzymes-mutations : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-mutations.pdf
Isozymes. Principe de dtection : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-detection.pdf
Isozymes : loci, allles : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-loci-alleles.pdf
RAPD : http://www.takween.com/techniques/11_RAPD.pdf
AFLP : http://www.takween.com/techniques/13_AFLP.pdf
SSR (microsatellites) : http://www.takween.com/techniques/microsatellites-SSR-marqueurs.pdf

Polymorphisme de longueur des fragments de restriction de lADN (RFLP)


La technique RFLP repose sur la digestion d'un DNA cible par une ou plusieurs enzymes de
restriction spcifiques des sites de restriction ports par le DNA. Aprs lectrophorse, les fragments
spars sont hybrids avec un DNA sonde, provenant souvent de banques de DNA gnomique ou
complmentaire. Cette sonde peut provenir d'une espce proche de l'espce tudier (sonde
htrologue).

Si deux individus diffrent par un ou plusieurs sites ou, mme, par la distance sparant deux sites
identiques conscutifs, il se cre une diffrence dans la longueur des fragments gnrs par l'enzyme
de restriction. Les milliers de fragments obtenus aprs digestion enzymatique et rvls par le
bromure d'thidium (BET), montrent sous UV un seul voil continu (smear). Une fois transfr sur une
membrane de nylon ou de nitrocellulose (Southern, 1975) et hybrid par un DNA sonde, le DNA cible
digr est visualis par autoradiographie, si la sonde est marque au P32 (sonde chaude) ou par
mthodes biochimiques si la sonde est non radioactive (sonde froide).
Origines du polymorphisme de restriction (RFLP) :
- Perte ou gain d'un site de restriction
- Mutation de type insertion-dletion

Dans les deux cas les loci sont gnralement biallliques et l'expression des allles est codominante.

Polymorphisme du la disparition dun site de restriction (mutations ponctuelles).

Polymorphisme du aux mutations de type insertion - dltion.


Caractristiques principales des marqueurs RFLP.
Marqueurs refltant un polymorphisme de longueur de fragment
Marqueurs codominants

Sgrgation des marqueurs molculaires de type RFLP.


P1 P2 F1 F2 BC1

____ ____ ____ ____ ____


____ ____ ____ ___ ____ ____
1/4 1/2 1/4 1/2 1/2

Valeurs comparatives des marqueurs biochimiques et molculaires.


Effet de
Types de
Nombre Dterminisme lenvironnement Faisabilit Cots
marqueurs

Culture
Morphologie rares Dominants Oui ++++
de plantes
Isoenzymes 50 Codominants Non/Oui +++ +
RFLP Illimits Codominants Non + +++
Specific PCR,
CAPS Illimits Codominants Non ++ ++++
RAPD Illimits Dominants Non +++ ++++

Liens utiles :

Techniques-Sommaire : http://www.takween.com/techniques/techniques-biochimie.html
Electrophorse : http://www.takween.com/techniques/05_Electrophorese.html
Travaux dirigs (TD) : http://www.takween.com/techniques/electrophorese-isoenzymes-TD.pdf
Travaux dirigs (TP) : http://www.takween.com/techniques/electrophorese-isoenzymes-TP.pdf
Isoenzymes-mutations : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-mutations.pdf
Isozymes. Principe de dtection : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-detection.pdf
Isozymes : loci, allles : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-loci-alleles.pdf
Isozymes htromriques : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-heteromeriques.pdf
RAPD : http://www.takween.com/techniques/11_RAPD.pdf
AFLP : http://www.takween.com/techniques/13_AFLP.pdf
SSR (microsatellites) : http://www.takween.com/techniques/microsatellites-SSR-marqueurs.pdf

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