FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS

GUA DE PRCTICAS DE
LABORATORIO

PERIODO ACADMICO: Abril Agosto 2017.

CARRERA: Ingeniera en Biotecnologa Ambiental.

ASIGNATURA: Biologa Celular.

NIVEL: Segundo.

DOCENTE: Ing. Ana Rafaela Pacurucu Reyes.

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NDICE.

TEMA. Pg.

Normas de seguridad en el laboratorio. .. 3

Prctica 1. Observacin de clulas eucariotas .. 4

Prctica 2. Tincin Gram .. 7

Prctica 3. Observacin de plastos .. 10

Prctica 4. Actividad enzimtica de la catalasa .. 13

Prctica 5. Extraccin de ADN .. 16

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NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO.

NORMAS GENERALES.
No fume, coma o beba en el laboratorio.
Utilice mandil y tngalo siempre bien abrochado, as proteger su ropa.
Cuando trabaje con sustancias altamente txicas utilice mascarilla protectora y realice el
experimento bajo una cmara de extraccin de gases.
Guarde sus prendas y los objetos personales en un armario o cajn y no los deje nunca sobre la
mesa de trabajo.
No lleve bufanda, pauelos largos ni prendas u objetos que dificulten su movilidad.
Procure no andar de un lado para otro sin motivo y, sobre todo, no corra dentro del laboratorio.
Si tiene el cabello largo, recjaselo.
Disponga sobre la mesa slo los libros y cuadernos que sean necesarios.
Tenga siempre sus manos limpias y secas. Si tiene alguna herida, cbrala.
No pruebe ni ingiera los productos del laboratorio.
En caso de producirse un accidente, quemadura o lesin, comunquelo inmediatamente al profesor.
Recuerde dnde est situado el botiqun.
Mantenga el rea de trabajo limpia y ordenada.

NORMAS PARA MANIPULAR INSTRUMENTOS O EQUIPOS Y PRODUCTOS O REACTIVOS

QUMICOS.

No utilice ninguna herramienta o equipo sin conocer su uso, funcionamiento y normas de seguridad
especficas.
Maneje con especial cuidado el material frgil, como por ejemplo el vidrio.
Fjese en los signos de peligrosidad que aparecen en los frascos de los productos qumicos.
Lvese las manos con jabn despus de tocar cualquier producto qumico.
Al acabar la prctica, limpie y ordene el material utilizado.
Si le salpica accidentalmente alguna sustancia qumica, lave la zona afectada con agua abundante.
Evite el contacto con fuentes de calor. No manipule cerca de ellas sustancias inflamables. Para
sujetar el instrumental de vidrio y retirarlo del fuego utilice pinzas. Cuando caliente los tubos de
ensayo con la ayuda de dichas pinzas, procure darles cierta inclinacin. Nunca mire directamente
al interior del tubo por su abertura ni dirija sta hacia algn compaero.
Si tiene que mezclar algn cido (por ejemplo, cido sulfrico) con agua, aade el cido sobre el
agua, nunca al contrario, pues el cido saltara y podra provocarle quemaduras en la cara y los
ojos.
No deje destapados los frascos ni aspire su contenido. Muchas sustancias lquidas (alcohol, ter,
cloroformo, amonaco, etc.) emiten vapores txicos.
El manejo de animales de experimentacin deber ser debidamente fundamentado y aprobado por
un Comit de tica institucional.

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PRCTICA 1.

TEMA. OBSERVACIN DE CLULAS EUCARIOTAS

OBJETIVOS.

OBJETIVO GENERAL.
Identificar las estructuras bsicas de diferentes organismos eucariotas.

OBJETIVOS ESPECFICOS.
Diferenciar a los organismos de los reinos del dominio Eukarya.
Observar estructuras visibles al microscopio en diferentes muestras eucariotas.

INTRODUCCIN.

Eukarya es un dominio dentro de la clasificacin de los seres vivos en donde se engloba a todos los
organismos que presentan clulas con un ncleo verdadero. En este dominio se ubican cuatro reinos:
Protista, Fung, Plantae y Animalia. En ellos se conserva el criterio dado por Wittaker, el cual clasific
a estos organismos de acuerdo con su modo de nutricin y con su organizacin, pluricelular o unicelular.

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.

MATERIALES:
Placas porta y cubre objetos.
Hisopos estriles.
Zanahoria
Seta

REACTIVOS:
Azul de metileno.

EQUIPOS:
Microscopio compuesto.

PROCEDIMIENTO.

Muestra de mucosa.
1. Raspar el epitelio de la mucosa bucal de la zona interna del carrillo con un hisopo estril,
obtenindose un producto blanquecino, extenderlo y dispersarlo sobre una placa porta objetos.
2. Aadir una gota del colorante azul de metileno y cubrirla con el cubre objetos.
3. Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina.

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4. Observar con los lentes objetivos de 4X, 10X y 40X.

5. Dibujar lo observado con el lente 40X e identificar cada parte de la clula eucariota.

Muestra de zanahoria.
1. Realizar un corte transversal de una fina lmina de zanahoria.
2. Colocar sobre el portaobjetos y aadir una gota de suero fisiolgico.
3. Cubrir con el cubre objetos.
4. Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina.
5. Observar con los lentes objetivos de 4X, 10X y 40X.
6. Dibujar lo observado con el lente 40X.

Muestra de seta.
1. Realizar un corte longitudinal de una fina lmina de una seta.
2. Colocar sobre el portaobjetos y aadir una gota de azul de metileno.
3. Cubrir con el cubre objetos.
4. Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina.
5. Observar con los lentes objetivos de 4X, 10X y 40X.
6. Dibujar lo observado con el lente 40X.

PROCEDIMIENTO.

GRFICOS.

RESULTADOS.

a. Notar la diferencia entre las estructuras de las muestras visualizadas.

b. Describir las estructuras bsicas celulares observadas.

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CUESTIONARIO.

1. Enliste las diferencias entre las clulas procariotas y las clulas eucariotas.
2. Enliste las diferencias y semejanzas entre los organismos de los reinos del dominio Eukarya.

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PRCTICA 2.

TEMA. TINCIN GRAM

OBJETIVOS.

OBJETIVO GENERAL.
Caracterizar una colonia de bacteriana utilizando la tcnica de tincin Gram.

OBJETIVOS ESPECFICOS.
Comprender el fundamento de la Tincin Gram.
Distinguir a las bacterias Gram positivas y a las Gram negativas.

INTRODUCCIN.

La tincin de Gram es usada para clasificar bacterias sobre la base de sus formas, tamaos,
morfologas celulares y reaccin Gram (color). A nivel del laboratorio es til como test para un rpido
diagnstico presuntivo de agentes infecciosos.
Las bacterias se tien Gram positivas (+) o Gram negativas () debido a las diferencias en la
composicin de su pared y arquitectura celular.
Las bacterias Gram (+) tienen una gruesa capa de pptidoglucano y gran cantidad de cidos teicicos
que no son afectados por la decoloracin, reteniendo el colorante inicial acomplejado con iodo y
visualizndose en distintos grados de tonos desde el violeta al azul claro.
Las bacterias Gram () tienen en su pared celular una delgada capa de peptidoglucano ligada a una
membrana externa por molculas de lipopolisacridos. Esta membrana externa es daada en la
decoloracin, permitiendo que el primer colorante acomplejado con iodo escape y sea reemplazado por
el contracolorante.

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.

MATERIALES:
Placas porta y cubre objetos.
Asa de cultivo.
Lmpara de alcohol.

REACTIVOS:
Aceite de inmersin
Cristal violeta
Lugol
Decolorante: Alcohol- Acetona

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Safranina

EQUIPOS:
Microscopio compuesto.

PROCEDIMIENTO.

6. Llevar el asa a la llama de la lmpara de alcohol hasta que se torne al rojo vivo. Esperar durante
unos segundos cerca de la llama hasta que el asa se enfre.
7. Con ayuda del asa ya estril, tomar muestra del cultivo bacteriano y extenderla en un portaobjetos.
Realizar el mismo procedimiento para diferentes tipos de cultivos bacterianos.
8. Fijar la muestra haciendo pasar la placa 3 veces por la llama (de modo que la placa corte la llama).
9. Cubrir la muestra con cristal violeta por 45 segundos.
10. Lavar con agua.
11. Colocar lugol por 1 minuto.
12. Lavar la placa con agua.
13. Aadir alcohol-acetona por 30 segundos.
14. Lavar con agua.
15. Cubrir con safranina o fucsina durante 1 minuto.
16. Lavar con agua y dejar secar.
17. Colocar 1 gota de aceite de inmersin en la muestra.
18. Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina.
19. Observar con el lente objetivos de 100 X.
20. Dibujar lo observado a travs del lente e identificar si son bacterias Gram positivas o Gram
negativas.

GRFICOS.

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RESULTADOS.

c. Notar la coloracin final que presenta la muestra.

d. Describir las formas bacterianas (redondeadas, alargadas, agrupadas, etc.).

CUESTIONARIO.

3. Qu caractersticas presentan las clulas procariotas? Explique utilizando una grfica bacteriana.
4. Cules son las diferencias entre bacterias Gram positivas y Gram negativas?
5. Realice un dibujo que esquematice la membrana celular de Gram positivas y en otro la membrana
de Gram negativas. Identifique en ambos casos los componentes principales de cada una de ellas.
6. Cul es el fundamento de la tincin Gram?

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PRCTICA 3.

TEMA. OBSERVACIN DE PLASTOS.

OBJETIVOS.

OBJETIVO GENERAL.
Observar al microscopio diferentes tipos de plastos.

OBJETIVOS ESPECFICOS.
Identificar la presencia de cloroplastos, cromoplastos y amiloplastos en muestras de espinaca,
tomate y papa, respectivamente.
Determinar las funciones que cumplen estos plastos.

INTRODUCCIN.

Los plastos, plstidos o plastidios son orgnulos celulares eucariticos, propios de las plantas y algas.
Su principal funcin es la produccin y almacenamiento de importantes compuestos qumicos usados
por la clula. Usualmente, contienen pigmentos utilizados en la fotosntesis, aunque el tipo de pigmento
presente puede variar, determinando el color de la clula.
Cloroplastos: slo en las clulas de plantas y algas. Los cloroplastos son los orgnulos celulares que
en los organismos eucariontes fotosintetizadores se ocupan de la fotosntesis.
Cromoplastos: slo en las clulas de plantas y algas. Sintetizan y almacenan pigmentos. Su presencia
en las plantas determina el color rojo, anaranjado o amarillo de algunas frutas, hortalizas y flores. El
color de los cromoplastos se debe a la presencia de ciertos pigmentos; como los carotenos, de color
rojo y las xantofilas, de color amarillo.
Leucoplastos: estos plastos son incoloros y se localizan en las clulas vegetales de rganos no
expuestos a la luz, tales como races, tubrculos, semillas y rganos que almacenan almidn.

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.

MATERIALES:
Placas porta y cubre objetos.
Bistur / Estilete
Papa
Pulpa de tomate
Espinaca / algas

REACTIVOS:
Lugol
Suero fisiolgico.

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EQUIPOS:
Microscopio compuesto.

PROCEDIMIENTO.

Muestra de algas / Muestra de espinacas.

1. Realizar un raspado de una fina lmina del haz de la hoja de espinaca con el bistur o estilete. En
el caso de la muestra de algas no se requiere de preparacin previa alguna.
2. Colocar sobre el portaobjetos y aadir una gota de suero fisiolgico (slo para el caso de la
espinaca). En el caso de las algas aplicar la muestra directamente.
3. Cubrir con el cubre objetos.
4. Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina.
5. Observar con los lentes objetivos de 4X, 10X y 40X.
6. Dibujar lo observado con el lente 40X.

Muestra de tomate.
7. Realizar un raspado de una fina lmina de la pulpa de tomate.
8. Colocar sobre el portaobjetos y aadir una gota de suero fisiolgico.
9. Cubrir con el cubre objetos.
10. Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina.
11. Observar con los lentes objetivos de 4X, 10X y 40X.
12. Dibujar lo observado con el lente 40X.

Muestra de papa.
7. Realizar un raspado de una fina lmina de papa.
8. Colocar sobre el portaobjetos y aadir una gota de lugol.
9. Cubrir con el cubre objetos.
10. Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina.
11. Observar con los lentes objetivos de 4X, 10X y 40X.
12. Dibujar lo observado con el lente 40X.

GRFICOS.

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RESULTADOS.

a. Notar las diferentes coloraciones que toman los plastos.

b. Describir las diferentes formas que presentan las clulas y las estructuras que puedan distinguirse.
.

CUESTIONARIO.

1. Qu son los plastos?

2. Cul es la funcin de los amiloplastos, cromoplastos y cloroplastos?
3. Por qu para la observacin de amiloplastos se utiliza lugol, mientras que para la observacin de
cromoplastos y cloroplastos nicamente se utiliza suero fisiolgico?

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PRCTICA 4.

TEMA. ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA CATALASA.

OBJETIVOS.

OBJETIVO GENERAL.
Comprobar la accin de la enzima catalasa sobre la destruccin del agua oxigenada y su
presencia en las muestras estudiadas.

OBJETIVOS ESPECFICOS.
(Escribir al menos 2 objetivos especficos).

INTRODUCCIN.

La catalasa es una enzima en los peroxisomas y cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno
(H202) en oxgeno y agua. El perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de muchos
organismos vivos, pero dada su toxicidad debe transformarse rpidamente en compuestos menos
peligrosos. Para ello se usa con frecuencia esta enzima que cataliza su descomposicin en agua y
oxgeno.
La reaccin enzimtica se resume como:
Catalasa
2 H2O2 2 H2O + O2
Substrato enzima Productos

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.

MATERIALES:
2 matraces erlenmeyer
2 tapones para matraz (1 orificio)
2 termmetros
1 cronometro
5 g de papa cruda y 3 g de papa cocinada.
5 g de hgado fresco y 3 g de hgado cocinado

REACTIVOS:
Perxido de hidrgeno 30%

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PROCEDIMIENTO.

Muestra de hgado.
1. Pesar 5 gramos de hgado crudo.
2. Cortar el tejido en pequeos trozos con la ayuda de un estilete.
3. Introducir en el matraz erlenmeyer adicionando con la pipeta el agua oxigenada H2O2.
4. Tapar, y para evitar fuga de calor introduciendo en el orificio del tapn un termmetro para poder
medir las variaciones de temperatura.
5. Poner el cronmetro en marcha y comenzar a tomar medidas en intervalos de 1 minuto.
6. En el vaso de precipitacin colocar el hgado cocinado y adicionar 5 ml de agua oxigenada.
7. Realizar las respectivas observaciones y comparaciones.

Muestra de papa.
1. Pesar 5 gramos de papa cruda.
2. Cortar el tejido en pequeos trozos con la ayuda de un estilete.
3. Introducir en el matraz erlenmeyer adicionando con la pipeta el agua oxigenada H2O2.
4. Tapar para evitar fuga de calor introduciendo en el orificio del tapn un termmetro para poder
medir las variaciones de temperatura.
5. Poner el cronometro en marcha y comenzar a tomar medidas en intervalos de 1 minuto.
6. En el vaso de precipitacin colocar la papa cocinada y adicionar 5 ml de agua oxigenada.
7. Realizar las respectivas observaciones y comparaciones.

GRFICOS.

RESULTADOS.

a. Notar la variacin de temperatura tras la adicin del H2O2 en las muestras crudas, percibiendo el
calor generado.
b. Observar en qu tipo de muestra se produce mayor cantidad de burbujeo, producto de la reaccin.
c. Tomar en cuenta qu ocurre tras la adicin del H2O2 en las muestras cocinadas.

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Tabla TEMPERATURA TIEMPO: .

CUESTIONARIO.

1. Qu es una enzima?
2. Qu es la catalasa y en dnde se encuentra?
3. Por qu la actividad catalsica es mayor en tejidos animales, especficamente en el hgado?
Explique esto en trminos de sus observaciones y de la variacin de la temperatura.
4. Por qu no se produjo actividad catalsica en el caso de las muestras cocinadas?

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PRCTICA 5.

TEMA. EXTRACCIN DE ADN.

OBJETIVOS.

OBJETIVO GENERAL.
Extraer el ADN de las clulas del hgado de pollo.

OBJETIVOS ESPECFICOS.
(Escribir al menos 2 objetivos especficos).

INTRODUCCIN.

El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y muy replegado, unido a protenas para
formar la cromatina. As, para extraerlo ser necesario homogeneizar el tejido y romper las clulas para
separar el ncleo, romper tambin la envoltura nuclear para liberar su contenido, luego separar el ADN
de las protenas que lo protegen y, por ltimo, precipitarlo para extraerlo de la solucin. Una vez
realizado esto, el ADN aparecer como un agregado de fibras blanquecinas que se adhieren a la varilla
de vidrio. Finalmente, se puede situar sobre un porta objetos, teirlo con un colorante bsico y
observarlo al microscopio.

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.

MATERIALES:
Placas porta y cubre objetos
Papel filtro
Gasa
Mortero
Embudo
Probeta 50 ml
Vaso de precipitacin 250 ml
Varilla de agitacin
Arena lavada
Cacerola
Detergente lquido (transparente de preferencia)
Hielos
Hgado de pollo (fresco)

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REACTIVOS:
Solucin de NaCl 2M
Etanol (fro)
Agua destilada
Azul de metileno

EQUIPOS:
Microscopio compuesto.

PROCEDIMIENTO.

1. Triturar completamente en fro la muestra de hgado en el mortero junto con arena.

2. Aadir 50 ml de agua destilada y remover suavemente pero mezclando a fondo.
3. Filtrar varias veces el resultado a travs de una gasa primero, y luego a travs de papel filtro.
4. Aadir al filtrado resultante un volumen igual de solucin de NaCl 2M.
5. Aadir 1 ml de detergente lquido y revolver suavemente, mezclando bien pero evitando que se
forme espuma. Repetir la mezcla varias veces dejando reposar un minuto cada vez. Si se forma
espuma se puede retirar con una esquina de papel de filtro o con un gotero.
6. Volver a filtrar.
7. Aadir 50 ml de alcohol muy fro, teniendo cuidado de hacerlo inclinando el vaso de precipitacin y
dejando resbalar muy lentamente el alcohol por la pared de aquel para formar una capa sobre la
solucin anterior. Es muy importante evitar que se mezclen ambas soluciones, pues ser en la
interfase donde precipitar el ADN. El ADN ir apareciendo poco a poco en la interfase agua-alcohol
en forma de grumos blancos.
8. Recoger mediante la varilla de vidrio unas hebras blancas que corresponden a miles de fibras de
ADN, introducindola ligeramente bajo la interfase y hacindola girar suavemente mientras se
extrae.
9. Tomar una muestra del ADN recogido, depositarla sobre un porta objetos y teir con azul de
metileno durante 1 a 3 minutos.
10. Observar al microscopio.

GRFICOS.

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RESULTADOS.

a. Tomar en cuenta el proceso de formacin de las hebras blancas que corresponden a miles de fibras
de ADN.
b. Comparar con la imagen vista al microscopio.

CUESTIONARIO.

1. Cul es la estructura de la molcula de ADN?

2. Qu funcin tiene el ADN en los organismos?
3. Con qu finalidad se adiciona la solucin de NaCl 2M?
4. Cul es el objetivo de aadir el detergente?
5. Para qu se adiciona el etanol?

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