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UNIDAD PROFESIONAL
INTERDISCIPLINARIA DE
BIOTECNOLOGA
Prctica No.1
5FV1
Equipo: 3
Integrantes:
Profesores:
Objetivo general
Objetivos especficos
a) Comprender los fundamentos del proceso de extraccin de ADNg.
b) Analizar la calidad de ADNg a travs de la electroforesis en gel de agarosa.
c) Analizar la pureza y concentracin de ADNg.
d) Obtener el peso molecular de ADNg.
e) Discutir la importancia de la ingeniera gentica dentro de la farmacutica.
II.- INTRODUCCIN
Sangre: Las clulas nucleadas de sangre perifrica son una de las fuentes
ms accesibles y utilizadas en medicina para la obtencin de DNA
genmico. En esta extraccin se separan los leucocitos y se lisan con una
solucin que contiene el detergente dodecil sulfato de sodio (SDS) y la
proteinasa K, la cual libera el DNA por precipitacin de las protenas
celulares provocada con una solucin saturada de NaCl, y finalmente se
obtiene el DNA por precipitacin con alcohol etlico absoluto.
Tejidos conservados en congelacin: Se requiere un primer paso de
homogeneizacin que rompa el tejido y facilite la posterior lisis de las
clulas que forman el tejido. Despus el tejido homogeneizado se incuba
durante 12 horas con SDS y proteinasa K para desnaturalizar y digerir las
protenas. Posteriormente el DNA se somete a unas serie de extracciones
con fenol y cloroformo que tienen como objeto acabar de digerir las
protenas y separarlas del DNA.
Tejidos parafinados: El DNA de estas muestras es estable durante muchos
aos. Se obtienen secciones, se desparafinan y se incuban durante 72
horas con SDS y proteinasa K, a partir de aqu el procedimiento es idntico
al descrito para el caso de tejidos conservados por congelacin; extraccin
con fenol-cloroformo y precipitacin con etanol absoluto. Para futuros
anlisis se ha de tener en cuenta que a veces el DNA genmico de tejidos
incluidos en bloques de parafina se encuentran muy fragmentados, y que,
por ejemplo, no es recomendable montar reacciones en cadena de la
polimerasa (PCR) para buscar y amplificar fragmentos de DNA superiores a
300 a 400 pares de bases. Tambin es importante saber que algunos
fijadores degradan el DNA de forma ms intensa que otros.
III.- RESULTADOS
*Preparacion de la muestra
Fenol:Cloroformo:Isoamlico
El fenol y alcohol isoamlico son solventes orgnicos mientras que el
cloroformo es un solvente inorgnico
*Transiluminador
V.- CUESTIONARIO
VI.- CONCLUSIONES
w
M=
PM L
w=MPML
mol
w=3 ( 0.01 L ) (83.0343 g /mol)
L
w=2.4610 g
o Buffer de extraccin
Tris HCl pH 8.0 Ci= 1000mM:100mMVf=7.2ml
Na2EDTA pH8.0 Ci=500mM:20mMVf=2.88ml
NaCl 2.10g, SDS(1%) 0.72ml Vf=72ml
Tris HCl
1000 mM ( 72 ml )
Vf= =7.2 ml
100 mM
Na2EDTA
20 mM (72 ml )
Vf= =2.88 ml
500 mM
NaCl 0.5M
w
M=
PM L
w=MPML
mol
w=0.5 ( 0.072 L ) (58.44 g/mol)
L
w=2.10 g
VIII.- REFERENCIAS
Francisco Fierro Fierro, "electroforesis de ADN [en linea] (ref: 9 febrero 2017) sitio
web: <www2.inecc.gob.mx>
Ivan Arenas Sosa, etal, "espectrofotometria de absorcion", Instituto de
biotecnologia, UNAM. Cuernavaca Morelos Junio 2004.
"electroforesis de proteinas y acidos nucleicos" [en linea] (ref:9 febrero 2012) sitio
web: <biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio/htm>
Antonio Gmez "caracteristicas y preparacion de buffer", [en linea] (ref:9 febrero
2012) sitio web:Antoniogomezmartin.wordpress.com