Journal of Chromatography, 471 (1989) 443-446

Elsevier Science Publishers BV, Amsterdam - Impreso en los Pases Bajos

Chrom. 21 308

Nota

Traza / ultratrazas anlisis de compuestos inestables

Las investigaciones sobre hidrazobenceno y azobenzenea
S. AHUJA * G. Thompson y J. SMITH
Departamento de Desarrollo, Divisin de Productos Farmacuticos, Ciba-Geigy Corporation, Suffern, Nueva
York 10901

el anlisis de trazas por lo general implica la determinacin a nivel de ppm o

gg / g. Los anlisis realizados en el rastro o niveles ms bajos (ultratrazas) son
difcil cobertura para llevar a cabo por varias razones. Las dificultades relacionadas
con la obtencin de una muestra representativa, evitando la prdida o
contaminacin durante la preparacin de muestras, la bsqueda de un mtodo
adecuado para la resolucin del componente de inters sin prdida significativa, y,
por ltimo, que tiene detectabilidad sumcient en el intervalo de inters para
asegurar la cuantificacin fiable. Estos problemas se complican an ms cuando
uno est tratando con compuestos tales como hidrazobenceno y azobenceno.
Discuten a continuacin es un mtodo desarrollado para analizar estos compuestos
y que sortear algunos de los problemas encontrados con ellos.

EXPERIMENTAL

Un peso de la muestra previsto para contener ca. 10 ppm de hidrazobenceno

o azobenceno se pesa con precisin y se agita con 30 ml de pH 9,2 tris
(hidroximetil) aminometano (THAM) de amortiguamiento. Esto es seguido por
extraccin con 10 ml de n-hexano. Despus de la centrifugacin, se evaporaron 5
ml de la capa de n-hexano a sequedad a temperatura ambiente con nitrgeno y el
residuo se solubiliza en I 0,0 ml de acetonitrilo. Una muestra de 25-gl se inyecta
inmediatamente en un aparato de alto rendimiento de cromatografa lquida
(HPLC) equipado con una columna Partisil 10 gm C8 (25 cm x 4,6 mm ID) y un
detector de dos canales (254 y 313 nm). La elucin se lleva a cabo con una fase
mvil compuesta de tampn de acetonitrilo-acetato, pH 4,1 (ll: 14, v / v). Ambas
normas hidrazobenceno y azobenceno son tratados de manera similar.

RESULTADOS Y DISCUSIN

Una revisin de la literatura revel que un mtodo de HPLC en fase normal

se ha descrito para el anlisis de hidrazobenceno y azobenceno l. El mtodo se basa
en la extraccin de estos compuestos en n-hexano de NaOH 1 M, seguido de
anlisis en Partisil-10 columna de PAC con una fase mvil que contiene 2,5% de
etanol absoluto.

Presentado en parte en el Simposio sobre Anlisis Trace - Logros, objetivos, retos, Normas ef Oficina
Nacional, Gaithersburg, MD 28 de septiembre de 1987.

0021-9673 / 89 / $ 03,50 C 1989 Elsevier Science Publishers BV

444 S. Ahuja, G. Thompson, J. SMITH

TABLA 1
ESTABILIDAD DE hidrazobenceno Y azobenzne

Medio Hora % Prdida

(Min)
hidrazobenceno azobenceno

NaOH 0,1 M 30 82.9a 4.6b

9,2 tampn de pH 30

concentracin original en el 10% de acetonitrilo, 11,8 ug hidrazobenceno / ml.

concentracin original en el 10% de acetonitrilo, 15,7 pg
azobenceno / ml. concentracin original en el 10% de acetonitrilo,
3,55 gg hidrazobenceno / ml. d concentracin original en acetonitrilo
al 10%, 2,59 pg azobenceno / ml.

El mtodo publicado adolece de las siguientes deficiencias: hidrazobenceno y

azobenceno muestran inestabilidad significativa en NaOH 1 M (Tabla I);
azobenceno puede producirse en forma de ismeros cis y trans. Su separacin no
se demuestra o contabilizar en el mtodo; compuesto original (I) puede degradar
directa o indirectamente en hidrazobenceno y azobenceno 2 (Fig. 1); selectividad
de los productos de transformacin indicados en la figura. No se demuestra.
Las propiedades de hidrazobenceno y azobenceno se dan en la Fig. 2.
hidrazobenceno se sabe que es un compuesto inestable; Se oxida fcilmente a
azobenceno y otros compuestos y tiene t1 / 2 de 15 min en las aguas residuales.
Azobenceno, por otro lado, puede isomerizar o sublime, incluso a 30.003
Para asegurar que la metodologa sera fiable a ca. 10 ppm, los mtodos
adecuados se han desarrollado para la deteccin de estos compuestos a niveles <i
ppm, es decir, niveles ultraoligoelementos. Para asegurar an ms la fiabilidad de
los anlisis, se hizo un esfuerzo por cumplir con los siguientes requisitos para
analysis6 ultratrazas: Muestra utilizada para el anlisis fue representativa de la
totalidad del lote; tcnicas de separacin y deteccin ptimas metodologa
incorporada; componente de inters se le permiti a sufrir una prdida mnima
durante las diversas operaciones analticas; las medidas adecuadas se incorporaron
en el mtodo analtico para dar cuenta de las prdidas que pudieran ocurrir debido
a la preparacin de muestras o la degradacin. Adems, para ayudar a otros
investigadores para evaluar si estos mtodos podran ser tiles para sus
investigaciones, se incluyeron los siguientes parmetros analticos:

CsH5-NN-C6H5 Hyd. C6H5-NN-C6H5

z
1 11

02

C6H5-N = N-C6H5
111

Higo. l. va de degradacin de compound2 padre.

TRACE Y ANLISIS DE hidrazobenceno azobenzne 445

NH -NH Blanco cristales

Soluble en etanol
hidrazobenceno
cristales de color rojo-naranja
Soluble en etanol, ter etlico,
benceno, cido actico
Momento dipolar 0.0D '
trans-azobenceno
cristales de color rojo-naranja
Soluble en etanol, ter
etlico, benceno, actico cido
cis-azobenceno momento
dipolar 3.0D '
Higo. 2. Las propiedades fsicas de hidrazobenceno y azobenceno 3 Por el momento dipolar ver ref. 4.

cantidad presente en la muestra original (apios); cantidad mnima detectada en g

(MAD); cantidad mnima cuantific en g (MAQ).
Las investigaciones revelaron que el pH ptimo para la extraccin tanto para
hidrazobenceno y azobenceno es 9,2. A este pH, estos compuestos se pueden
extraer fcilmente del compuesto original y tambin son bastante estables (Tabla
I). El ismeros cis y trans de azobenceno y hidrazobenceno se pueden resolver bien
con el mtodo reversedphase HPLC (Fig. 3). Investigaciones anteriores haban
confirmado la selectividad de
 1 .2 7.2 9.5 20.5

313 Nuevo
Mjico

cis-azobenzne trans-azobenzne

SOLVENTE hidrazobenceno
FRENTE

IO.
Tiempo (minutos)
Higo. 3. Los cromatogramas de los ismeros cis y trans-azobenceno y hidrazobenceno. Se inyect una muestra
de 0,05-gg de cada compuesto y se control a 313 y 254 nm.

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TABLA 11
RECUPERACIN DE LOS DATOS DE muestras adicionadas
Apios: 10 gg / g de compuesto original.

Muestra hidrazobenceno encontrado azobenceno encontrado

Compuesto original ( % ) 89,0 8,6 (n 7) 123 2,6 (n 6)

Cpsulas (%) 89,6 10,8 (n - 5) 98,7 10,2 (n 3)
Tabletas (0/0) 95,8 5,4 (n 3) 3)
Media (%) RSD 91 114
(0/0)
MAD (pg) 0,006 0,007

MAQ (gg / g)

este mtodo en cuanto se resuelve el compuesto I (Tr I l min) de otros productos

de transformacin 7. Los datos sobre muestras enriquecidas se dan en la Tabla Il.
Se obtuvo una recuperacin promedio de 91 y 114% para hidrazobenceno y
azobenceno, respectivamente, con una desviacin estndar relativa (RSD) de 3-1
al 1%. Los mtodos se han encontrado tiles para la cuantificacin de I gg / g de
estos compuestos con respecto al compuesto original (MAD = 6-7 ng). La alta
recuperacin obtenida para azobenceno se debe en parte a la conversin de
hidrazobenceno a azobenceno (aproximadamente 9%). Se estn investigando
nuevas mejoras.
CONCLUSIONES

Los procedimientos selectivos se han desarrollado para el anlisis de

hidrazobenceno y azobenceno.
La inestabilidad de hidrazobenceno en disolventes acuosos y orgnicos es
bien conocida. Este problema se ha tratado de manera efectiva con el hecho de que
se obtuvo una recuperacin promedio de 91% para el ingrediente activo, cpsulas
y tabletas.
Se encontr que azobenceno es susceptible a la isomerizacin y la
sublimacin. El procedimiento desarrollado ofrece una recuperacin promedio de
114% para el ingrediente activo, cpsulas y tabletas. Los valores altos se deben en
parte a la conversin de hidrazobenceno en azobenceno (ca. 9%).
Los mtodos desarrollados proporcionan valores confiables (3-1 1% RSD)
para hidrazobenceno y azobenceno a una concentracin de <10 gg / g (<10 ppm)
en trminos del compuesto original.
Referencias

F. Matsui, EG Lovering, NM Curran y JR Watson, J. Pharm. Sci., 72 (1983) 1223.

2 S. Ahuja, en J. Touchstone (Editor), Tcnicas y Aplicaciones de los TLC, Wiley, Nueva York, 1985.
3 RC Weast, Handbook ofChemistry y Fsica, CRC Press, Boca Raton, FL, 1985, pp. C-91, C-314, C-664.
4 J. Janssen, J. Chem. Educ., 46 (1969) 1 17.
5 RM Riggin y CC Howard, Anal. Chem., 51 (1979) 210.
6 S. Ahuja, Anlisis Ultratrazas Qf productos farmacuticos y otros compuestos de inters, Wiley, Nueva
York, 1986, pl
7 S. Ahuja, S. Shiromani, G. Thompson y J. Smith, comunicacin personal 2 de marzo de 1984.