Mrgenes 2,5 cm (1 pulgada)

BIORREACTORES FACTORES DE CONTROL Y

GENERALIDADES PARA CULTIVO CELULAR

Sebastian Camilo Gmez Castaeda1

Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas Facultad Tecnolgica, Colombia.

RESUMEN

El objetivo de este documento es realizar una determinacin por medio de una revisin
bibliogrfica cuales son los tipos de biorreactores para el cultivo de clulas, y el control
con los cuales estos deben contar ya que el biorreactores y el proceso debe ser diferente
para cada una de las clulas a cultivar se debe llevar un debido proceso y un control
especial de variables fundamentales como son (pH, temperatura, humedad, presin,
suministro de nutrientes),[1] tambin es de resaltar y para tener en cuenta en algunos de
los estudios se ve que la ubicacin de los equipos de acuerdo al laboratorio y la
trazabilidad de los procesos se deben colocar los tanques y diferentes etapas y as
optimizar los procesos y los riesgos de contaminar el cultivo que se est llevando
acabo.[2]

Palabras clave: pH, temperatura, humedad, presin, suministro de nutrientes, control,

birreactor, cultivo)

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Tecnlogo en el electrnica, Estudiante de decimo semestre, ingeniera en control,
scgomezc@correo.udistrital.edu.co.

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INTRODUCCIN

Las investigaciones y desarrollos presentados en este documento nos da una idea ms

acertada sobre lo que son los biorreactores y cultivos in vitro, con el control de estos se
puede asegurar el xito en el cultivo de cierto tipo de clulas tanto animales como
vegetales. Cuando hablamos de cultivos in vitro y birreactores tenemos que tener en
cuenta que las clulas se encuentran expuestas a condiciones de ambientes
desconocidas para estas, as que se hace imperativo someter crear un ambiente en el
cual se garanticen las condiciones necesarias para su crecimiento, esto se logra creando
las mismas circunstancias de ambiente natural en el cual crecen[3], evitando que se
mueran a temprana edad, que crezcan con deformaciones; pero tambin controlar y
hacer una cadena de crecimiento continuo celular fue uno de los aportes ms importantes
a los cultivos in vitro con la introduccin de los biorreactores a los procesos de esta
manera permitiendo realizar experimentos y atreves de estmulos mecnicos,
bioqumicos o fisiolgicos acelerar los procesos de la produccin de los cultivos.[4]

1. MARCO REFERENCIAL O ESTADO DEL ARTE

Los biorreactores se han utilizado para la produccin de diversos tipos de tejido operando
bajo parmetros distintos segn requerimientos de cada tipo celular vale la pena
considerar lo siguiente que son algunos bsquedas de las diferentes investigaciones para
desarrollar los biorreactores acorde al medio natural al que pertenece la clula:

1.1 Tejido cardio vascular

Como una alternativa a las ciruga de bypass para el tratamiento de enfermedades

cardiacas coronarias, se ha buscado recrear la estructura de los vasos sanguneos in
vitro usando diferentes estrategias, por ejemple bajo flujos pulstiles para la producir
vasos sanguneos con propiedades histolicas y mecnicas similares al tejido nativo.
Teniendo en cuento lo dicho anteriormente los biorreactores empleados estn inspirados
en la expansin y retroceso de los vasos sanguneos debido a un incremento y

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disminucin de la presin, teniendo un muy buen desarrollo en biorreactores de paredes

rotantes.

1.2 Cartlago

Este es un tejido no vascularizado, en su medio ambiente natural est sujeto a mucho

estrs debido a movimientos mecnicos existe en un ambiente cido y casi anaerobio,
condiciones fundamentales para lograr su regenera miento ya que un cartlago adulto
eficientemente de manera natural, hace necesario la aparicin de cultivos in vitro. Aqu
es importante realizar un sembrado de clulas mediante una introduccin lenta y continua
mejorando la calidad de la matriz extracelular producida y aun mejor si esta se somete a
estrs mecnico tambin consiguiendo mayor densidad celular

1.3 Tejido muscular cardiaco

Cuando se sufre un infarto una porcin el suplemento de sangre al corazn se bloquea

produciendo que clulas del musculo cardiaco mueran debido a la falta de oxgeno, es
de conocimiento de todos que la habilidad del musculo cardiaco por regenerarse es
limitada y la cicatrizacin del tejido produce ms problemas al encoger otros vasos. La
entrada de oxgeno en clulas cardiacas es vital para mantener el crecimiento in vitro
produciendo una capa suficientemente gruesa. Cuando el cultivo se realiza en
biorreactores de paredes rotantes se genera la transferencia uniforme de oxigeno pero
no se genera estmulos mecnicos (contracciones) encontrados en su ambiente natural
para el cultivo de estas clulas se hace mejor utilizar sistemas de perfusin (introduccin
lenta y continua) llegando a observar contracciones espontaneas de manera sincronizada
en el tejido cultivado luego de unos das de sembrado.

1.4 Hueso

Es un tejido altamente vascularizado que se encuentra en constante renovacin. Se ha

cultivado en matraces estticos, En los matraces estticos las clulas se concentran solo

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en la capa ms superficial. En el biorreactor de paredes rotantes se observa una

distribucin celular ms uniforme pero se form matriz extracelular poco mineralizada.
Finalmente, en el matraz agitado se han obtenido resultados satisfactorios, pues los
constructos obtenidos mostraron una mayor densidad celular, mineralizacin y
diferenciacin. Esto se debe a la sensibilidad de los osteoblastos al esfuerzo cortante
causado por el mezclado, lo que activa factores de crecimiento e induce a la formacin
de clulas de estrs. [5]

1.5 Requerimientos bsicos en los biorreactores

Los principios generales al desarrollar un biorreactor son los siguientes:

1.5.1 Seleccin adecuada del material: los materiales deben ser biocompatibles o
bioinertes. Por ejemplo, el acero inoxidable puede utilizarse si es tratado de tal
forma que los iones de cromo no se filtren al medio. Otras condiciones que deben
cumplir es que puedan emplearse a 37C y en un ambiente hmedo y que adems
las partes del biorreactor puedan ser esterilizadas ya sea por el autoclave o
desinfeccin por sumersin en alcohol. De forma alternativa, pueden usarse
partes desechables que sean reemplazadas despus de cada uso. Otras opciones
en la seleccin es respecto a su flexibilidad y transparencia u opacidad. [6]
1.5.2 Monitoreo de las condiciones en el biorreactor: se incorporan sensores para
monitorear parmetros como el pH, la temperatura, la concentracin de nutrientes
o los niveles de oxgeno. Si se proveen los niveles adecuados en estas
condiciones, se podra garantizar una distribucin celular homognea.[7]
1.5.3 Utilizacin de bombas: deben ser los suficientemente pequeas para caber en una
incubadoras y ser capaces de aplicar pequeas fuerzas de forma precisa.
1.5.4 Para cuantificar la transferencia de oxgeno al medio de cultivo se estima el
coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno (KLA), donde A considera el
rea superficial total entre el gas y la fase lquida.
1.5.5 En el diseo de un reactor es importante considerar el tipo y velocidad de agitacin,
el esfuerzo cortante, el mezclado, la aireacin, la formacin de eddies. Todo esto
generar un efecto en las clulas y en su crecimiento.

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Para asegurar que se mantenga la esterilidad durante la operacin del biorreactor, ste
debe disearse como un sistema cerrado con la posibilidad del monitoreo. Adems, es
necesario permitir la automatizacin del proceso para reducir el error humano.

2. MARCO TERICO

Teniendo en cuenta que lo que tratamos en esta ponencia es el control de los

biorreactores aqu vamos a ver los efectos que tienen las diferentes variables que
intervienen en el proceso de cultivo in-vitro en los biorreactores.[8]

2.1 Efectos de la temperatura

Los problemas mas generales en la elaboracin y puesta en marcha de un biorreactor

son la perdida de la capacidad de calentamiento y el mantenimiento de la temperatura
optima de cultivo. Una temperatura uniforme y aceptable se debe mantener
completamente en el biorreactor para evitar zonas de baja temperatura provocando una
actividad bacteriana no deseada en el proceso. Variaciones en la temperatura de de
incluso pocos grados afectan casi toda la actividad biolgica. Con esto podemos decir
que las variaciones de temperatura pueden ser ventajosas para ciertos grupos y
desventajosas para otros.

2.2 Efectos del pH

La mayora de las lneas de cultivo crecen bien a un pH de 7,4 pero el pH ptimo para
una determinada linea celular que puede variar, Es muy importante mantener el pH
estable en el medio de cultivo a travs de un buffer, porque hay condiciones que tienden
a disminuirlo, por ejemplo, las lneas celulares transformadas y a alta densidad sobre
producen CO2 y cido lctico. A pesar de la pobre capacidad amortiguadora del
bicarbonato a pH fisiolgico, sigue utilizndose por su baja toxicidad y bajo costo.

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2.3 Efectos del oxigeno

El otro constituyente principal de la fase gaseosa es el O 2. Aunque la mayora de las

clulas requieren oxgeno para respirar in vivo, el metabolismo de la mayora de las
clulas en cultivo est basado en la gliclisis anaerobia. Las clulas en cultivo se
mantienen con el O2 atmosfrico, el cual se disuelve en el medio. Sin embargo, el cultivo
de rganos, particularmente de embriones tardos, neonatos y adultos, requiere hasta
95% de O2 en la fase gaseosa. Este aumento en el requerimiento de O2 puede deberse a
un problema de difusin, relacionado a la geometra y penetracin gaseosa en el cultivo
de rgano (Figura 8.2), o reflejar la diferencia entre clulas diferenciadas y clulas
rpidamente proliferantes.

2.4 Agitacin

La agitacin, en ingeniera de tejidos, es la que se encarga de generar estmulos fsicos

que permitan el acceso a reguladores y nutrientes (glucosa, aminocidos y oxgeno, entre
otros) hacia las clulas. La agitacin afecta la homogeneidad del acceso a nutrientes,
como tambin la eliminacin de los residuos metablicos celulares y determina la calidad
y uniformidad de los productos obtenidos e interviene directamente en la transferencia de
masa entre la fase gaseosa y la fase lquida. La caracterizacin de la agitacin en un
biorreactor se calcula midiendo el tiempo de mezclado, el cual es el tiempo requerido por
un biorreactor para alcanzar cierto grado de homogeneidad. Se puede medir con una
reaccin de neutralizacin cido-base llevada a cabo dentro del biorreactor. Otra forma
es estudiando el comportamiento hidrodinmico dentro del biorreactor para hallar ese
grado de homogeneidad entre los componentes del medio de cultivo y las clulas. [9]

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2.5 Suministro de nutrientes

Se debe tener en cuenta el sustrato o medio de cultivo donde van a crecer las clulas,
estos contienen una mezcla compleja de componentes orgnicos, tales como
aminocidos, vitaminas, cidos orgnicos y otros, junto con sales inorgnicas
tamponantes. Algunos medios todava contienen suero sanguneo o suero bovino (5-
20%) para el aporte de factores de crecimiento, elementos traza, lpidos y otros factores
desconocidos. Sin embargo, el uso de suero genera muchos problemas, incluyendo la
variabilidad del contenido de nutrientes entre lotes, la irregularidad de los suplementos, y
ms recientemente el miedo a que el suero pueda estar contaminado con partculas
virales o priones[10].

2.6 Suministro de aire

Para lograr una adecuada transferencia de masas entre la fase gaseosa y el medio
lquido, es necesario implementar un sistema de aireacin eficiente. Los sistemas de
micro dispersin de gas (burbujeo) son muy utilizados ya que proporcionan una alta
transferencia de masa y son fciles de operar [5]Aunque el burbujeo del gas puede causar
dao en las clulas cultivadas [11] varias estrategias han sido estudiadas para proteger
a las clulas. Entre estas se encuentran el uso de aditivos, soportes o geles que protegen
a las clulas mantenindolas en su interior y el uso de una velocidad de aireacin
baja.[12]

3. METODOLOGA

Se realiz una revisin de la literatura, artculos de investigacin, tesis en los cuales se

ha evaluado el cultivo en biorreactores de clulas de diferentes orgenes y la
implementacin de los biorreactores y los controles que estos deben tener para mantener
una produccin continua y de calidad para la implementacin de estas clulas, con esto
se gener un lista de factores que se deben evaluar en general para montar los
biorreactores para diferentes cultivos, donde se encuentran: el medio de cultivo,

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aireacin, pH, temperatura, presin, agitacin. Tambin se muestran diferentes avances

en clulas animales principalmente, se presenta su crecimiento en los diferentes
ambientes naturales y el desarrollo que se ha implementado para llegar a tener xito en
el cultivo in-vitro como los son de clulas: de tejido cardio vascular, cartlago, huesos.
Luego se dan las pautas generales para hacer el montaje de un biorreactor lo que este
como mnimo debe contar para iniciar un cultivo claro est dejando claro que estas
pueden variar dependiendo de las clulas a cultivar.

4. RESULTADOS

Los resultados de los diferentes estudios nos muestran que los avances en el cultivo de
clulas en general est siendo exitoso y se puede llegar a realizar tratamientos de
recuperacin donde antes era impensable, aumentar la calidad de vida de los pacientes
haciendo ms cortos los tiempos de instalacin de tejidos ya que con un muy buen
proceso se podran cultivar las celular que el paciente necesite desde su mismo cuerpo,
tratar enfermedades regenerativas de los huesos, seguir investigando esta rea que aun
falta mucho por desarrollar debido a que as mismo como la tecnologa permite que las
investigaciones sean cada vez mas atrevidas y con progresos mas altos.

5. CONCLUSIONES Y DISCUSIN

Dentro de las ventajas del cultivo celular en biorreactores, se puede destacar el constante
control que se tiene del medio, del pH, de la temperatura, de la presin osmtica, de la
tensin de oxgeno (O2) de las clulas cultivadas y las condiciones fisiolgicas que deben
ser constantes. Los cultivos de clulas permiten someter a las mismas a una baja y
definida concentracin de reactivos asegurando un acceso directo en ellas, asi como
tambin diferentes experimentos para intentar acelerar el crecimiento del cultivo,
garantizar una produccin continua, alargar la vida de los cultivos y tratar de llevar los
ambientes de manera artificial pero con adiciones que en el cuerpo seria imposibles
realizar para conocer ms a fondo el comportamiento de las diferentes clulas que son
objeto de estudios.

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Las desventajas del cultivo celular son, que requiere unas condiciones de asepsia y
estelaridad en cualquiera de los procesos estrictas porque hay tantas clulas y tipos de
ellas que el proceso debe ser muy bien descrito y con una trazabilidad total ya que si en
al momento del proceso algo cambia debe quedar registro de lo ocurrido ya que esto
puede afectar el crecimiento en la mayora de los cultivos modificarlos o arruinarlos.
Adems, sistemas capaces de responder ante el ms minino cambio en los parmetros
para evitar la alteracin para evitar lo antes mencionado, con esto lo que aumenta en
gran sentido son los costos de fabricacin mantenimiento se hace muy costosos ya que
se requiere que estos tengan una gran precisin.

BIBLIOGRAFA (alineado a la izquierda, negrita, texto en mayscula, letra Arial 12)

Escriba aqu la lista de las referencias que aparezcan citadas en la ponencia.

BIBLIOGRAFIA

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Mrgenes 2,5 cm (1 pulgada)

biorreactores, p. 26, 2001.

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[12] T. D. E. Grado, Cultivo en biorreactores de clulas eucariotas superiores

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