Determinacin de azcares

Azcares reductores por el mtodo de Fehling

Este mtodo tiene su origen en el reactivo de Fehling, tambin conocido como Licor de Fehling, es
una disolucin descubierta por el qumico alemn Hermann von Fehling y que se utiliza como
reactivo para la determinacin de azcares reductores, un azcar reductor es todo azcar con un
grupo carbonilo en su estructura, el cual puede funcionar como aldehdo o cetona segn su
ubicacin en dicha estructura, poseen la capacidad de reducir otros compuestos por la alta
reactividad del doble enlace del oxgeno. Respecto al grupo carbonilo, los sacridos se clasifican en
aldosas o en cetosas . Los monosacridos son un gran ejemplo de azcares reductores. (aldosas:
glucosa, ribosa, eritrosa, etc.)

Este mtodo sirve para demostrar la presencia de glucosa, as como para detectar derivados de sta
tales como la sacarosa o la fructosa. El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas:

Sulfato de cobre cristalizado, 35 g y agua destilad hasta 1.000 mL.

Sal de Seignette o Tartrato mixto de potasio y sodio 150 g, solucin de hidrxido de sodio
al 40 %, 3 g y agua hasta 1.000 mL.

Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso, para evitar la precipitacin del hidrxido
de cobre. El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo
de los aldehdos. ste se oxida a cido y reduce la sal de cobre en medio alcalino a xido de cobre,
formando un precipitado de color rojo.

Un aspecto importante de esta reaccin es que la forma aldehdo puede detectarse fcilmente
aunque exista en muy pequea cantidad. Si un azcar reduce el licor de Fehling a xido de cobre
rojo, se dice que es un azcar reductor. Esta reaccin se produce en medio alcalino fuerte, por lo
que algunos compuestos no reductores como la fructosa que contiene un grupo cetona, puede
enolizarse a la forma aldehido dando lugar a un falso positivo. Otras sustancias hecen que la prueba
de Fehling no es especfica, sustancias que dan reaccin positiva son los fenoles, aminofenoles,
benzona, cido rico, catecol, cido frmico, hidrazobenceno, fenilhidrazina, pirogalol y resorcinol.
Al reaccionar con monosacaridos se torna verdoso, y si lo hace con disacricos toma el color del
ladrillo.
Carbohidratos por el mtodo de cido-fenol-sulfrico

El mtodo presenta una reaccin de color para medir la concentracin de carbohidratos solubles en
la muestra por espectrofotometra . Los carbohidratos sern destruidos por calor y por cido, son
particularmente sensible a cidos fuertes y altas temperaturas. Bajo estas condiciones una serie de
reacciones complejas toman lugar empezando con una deshidratacin simples, si se contina el
calentamiento y la catlisis cida se producen varios derivados del furano que condensan consigo
mismos y con otros subproductos para producir compuestos obscuros o compuestos coloridos
producto de la condensacin de compuestos fenlicos y con heterociclos con el nitrgeno como
heterotomo. La condensacin ms comn es con fenol. Este mtodo es fcil, eficaz y rpido.

Todos los azcares como oligosacridos y polisacridos pueden ser determinados, recordando que
estos bajo hidrlisis cida producen monosacridos. La forma en que procede la reaccin no es
estequiomtrica y depende de la estructura del azcar, por lo tanto se realiza una curva patrn.

Resultados

Determinacin de azcares reductores mtodo fehling

Solucin patrn

2.5g/250 ml ---------- Concentracin 0.01g/mL

Muestra

El refresco de la marca SPRITE contiene 9g de azcar en 100 mL lo que equivale a 0.09 g en

1 mL. ---------------Se toman 0.99 g (11mL)

11ml y se aforan a 100ml -------- Concentracin 0.00999g/mL (casi equivalente a 0.01 g/mL)

Factor fehling

Factor Fehling= (15 mL)(0.01 g/mL) =0.15

% AZCARES REDUCTORES

% Azcares reductores= (Factor Fehling/V muestra)100

% Azcares reductores= (0.15/3.5)100= 4.28

Mtodo de cido-fenol-sulfrico

La muestra de refresco light se toma directa, mientas que la de refresco normal se prepara la
muestra haciendo una dilucin 1:2000 antes del procedimiento.

Curva estndar

tubo Concentracin Absorbancia

(mg/ml) (nm)
1 bco 0 0
2 0.02 0.317
3 0.04 0.405
4 0.06 0.467
5 0.08 0.52
6 0.1 0.596

Absorbancia de las muestras:

Sprite light: 0.896 nm

Sprite normal: 0.589

Ecuacin de la recta para determinar mg/ml de azucares en la muestra:

x-(y-0.2591)/3.365 donde: X=mg/ml

y=absorbancia

Discusin

Prueba de Fehling

De acuerdo a los clculos obtenidos se muestra un porcentaje de azcares reductores de 4.28%. Si

nos fijamos en el etiquetado del refresco Sprite el contenido que tiene de azcares totales es de
9g en 100 g. Sin embargo hay que recordar que el mtodo empleado es un mtodo semi cuantitativo
por lo que no se puede tener mucha confianza de estos resultados, as que se preferira usar un
mtodo de anlisis meramente cuantitativo.
Mtodo Fenol-sulfrico.

A diferencia del mtodo de Fehling, la ventaja de este mtodo es el poder de cuantificacin de los
carbohidratos de una forma ms detallada, lo que le da ms sensibilidad y credibilidad a los
resultados.

Referencias

IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION DE AZUCARES, extrado de

https://acasti.webs.ull.es/docencia/practicas/5.pdf

CARBOHIDRATOS, extrado de
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CARBOHIDRATOS_21119.pdf

Bioqumica II, extrado de http://bioquimicaii.foroblog.net

FUNDAMENTOS Y TECNICAS DE ANALISIS DE ALIMENTOS, extrado de

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/FUNDAMENTOSYTECNICASDEANALISISDEALIMENTO
S_12286.pdf

Manual de mtodos generales para la determinacin de carbohidratos, extrado de Universidad

Pedaggica y Tecnolgica de Colombia, https://es.slideshare.net/LeidyCristancho/manual-de-
mtodos-generales-para-determinacin-de-carbohidratos