Microlobiologa Bsica Ambiental y Agricola Lilian Friomi 2006

Microbiologa
Bsica, ambiental y agrcola
Bsica, ambiental y agrcola

Lillian Frioni es profesora de Microbiologa de la Facultad de
Agronoma de la Universidad de la Repblica, de Montevideo,
Uruguay, responsable de la Unidad Asociada Ecologa Microbiana
de la Facultad de Ciencias, de la misma Universidad, e
investigadora del PEDECIBA (Programa de Desarrollo de
Ciencias Bsicas).
Trabaj por ms de diez aos en la Facultad de Agronoma y
Veterinaria de la Universidad Nacional de Ro Cuarto y en la de
Rosario (Santa Fe) y colabor tambin con la Facultad de
Ciencias Agronmicas de la Universidad Nacional de Crdoba, en
Argentina.
Integr en numerosas oportunidades la Comisin Directiva de la
Sociedad Uruguaya de Microbiologa (SUM).
Realiz estudios en la Universidad de la Repblica (Uruguay), en
la Universidad dOrsay y en el Instituto Pasteur (Paris), en el
Centro de Pedologa Biolgica de Nancy (Francia), y en el
Microbiologa
Laboratorio de Sistemas Simbiticos Fijadores de Nitrgeno
Tropicales de Nogent sur Marne, Francia.
Microbiologa, Bsica, ambiental y agrcola es su tercer texto. El
primero Ecologa microbiana del suelo, fue editado en 1990 por la
Universidad de la Repblica, de Uruguay, luego de obtener un
premio de la Coleccin Reencuentro. El segundo, Procesos
microbianos, fue editado en 1999 por la Fundacin de la
Universidad Nacional de Ro Cuarto (Argentina).
ISBN: 9974-0-0290-7
Lillian Frioni / Facultad de Agronoma

Universidad de la Repblica, Uruguay 2005
20 Lillian Frioni Microbiologa: bsica, ambiental y agrcola 1
membrana
membrana ribosomas pared
retculo
pared
regin nuclear mitocondrias
ncleo
Figura 1- Esquemas de clulas procariotas y eucariotas
Estructuras permanentes En la figura 2 se observan estas diferencias en la pared

(de afuera hacia adentro de la clula) de ambos tipos de clulas y en la figura 3 se aprecia la
estructura de esta singular molcula.
Pared celular
Constituye la parte ms importante de la clula procariota La pared de una clula Gram positiva est formada por
ya que salvo algunos micoplasmas y arqueobacterias, pa- una gruesa capa de unos 20 a 80 nm de espesor, en ge-
rsitas intracelulares, todas las otras bacterias presentan neral formado por una nica molcula de peptidoglicano
esta barrera de proteccin contra el ambiente, sin la cual o murena, (figura 2), ubicada por fuera de la membrana
las clulas sufriran lisis osmtica en ambientes en general celular. Esta molcula que no aparece en las clulas eu-
hipo o hipertnicos (suelos, agua, organismos). En 1884, cariotas, est formada por una malla de polmeros de dos
Christian Gram desarroll la tincin que lleva su nombre y aminoazcares: N-acetil-glucosamina (NAG) y de cido
desde entonces, las bacterias se clasifican en dos grupos N-acetil murmico (NAM) unidas por enlaces glucosdi-
importantes: Gram negativas y Gram positivas. cos hidrolizados por una enzima conocida como lisozima,
contenida en las lgrimas, saliva (mecanismos de defen-
La diferencia estructural entre ambos grupos se puso de sa primaria contra infecciones microbianas (cuadro 3).
manifiesto con el microscopio electrnico de transmisin,
a mediados del siglo pasado. El cuadro 2 resume las La malla se fortalece aun ms con enlaces peptdicos, en
diferencias. general en cadenas de 4 aminocidos, tres de los cuales
Cuadro 2- Superficies celulares en clulas Gram positivas y Gram negativas
Gram positivas: la pared celular posee gruesa capa de peptidoglicano que retiene el colorante especfico (violeta)
Gram negativas: la pared celular presenta capa fina de peptidoglicano y una membrana externa y no retiene el colorante. Se
colorean con el segundo colorante, de rosado
Archeae: no presentan peptidoglicano tpico, su tincin es Gram positiva o negativa
Periplasma: espacio entre membrana externa de la pared celular y la membrana citoplasmtica, contiene numerosas protenas
hidrolticas
Cuadro 3- Breve historia de la Microbiologa
1660 Robert Hooke describe estructuras de hon- la enfermedad al inocularse en una planta o
gos animal sano
1632-1723 Anton van Leeuwwenhoek, Alemania, Debe poder reaislarse en cultivo puro a partir
publica dibujos de microorganismos vistos por del husped enfermo y reconocerse idntico al
un microscopio simple, con un solo lente (300 primer aislamiento
aumentos) 1886 Haeckel en Alemania: se propone el Reino
Siglo 19: Desarrollo de microscopios ms poten- de los Protistas. John Tyndall en Inglaterra, en-
tes, poder separador 0,2 mm dosporas resistentes al calor: tcnica de este-
Segunda mitad siglo 19: desarrollo acelerado de
la Microbiologa
Discusiones sobre dos temas fundamentales:
rilizacin por calor fraccionado (tindalizacin)
Ferdinand Cohn en Alemania: Mtodos de es-
terilizacin ms eficaces
Microbiologa:
Existe la generacin espontnea? 1928 Griffith: Descubrimiento de la transformacin bsica, ambiental y agrcola
Cal es la naturaleza de las enfermedades conta- 1933 Primer Microscopio electrnico de transmisin
giosas? 1953 Estructura doble hlice del ADN - Watson y
1822-1895 Luis Pasteur en Francia, determin la Crick
naturaleza microbiana de contaminaciones de 1977 Reconocimiento de Archeobacterias como
infusiones, el metabolismo anaerobio, la inmu- grupo
nizacin 1984 Desarrollo de la reaccin en cadena de la
1876 Robert Koch en Alemania: los microorganis- polimerasa
Lillian Frioni
mos como causantes de enfermedad del ga- 1986 Primera vacuna producida por Ingeniera
nado provocado por Bacillus anthracis (antrax) Gentica
Postulados de Koch 1996 Se obtiene la secuencia del genoma de Hae-
El microorganismos causal debe estar presen- mophilus influenzae
te en cada caso de enfermedad pero ausente Hasta la fecha han ocurrido innumerables
en organismos sanos avances en Biologa Molecular, Biotecnologa,
El agente infeccioso debe poder aislarse en incluida la secuenciacin del genoma huma-
cultivo puro no, a la que han contribuido los microorganis-
Debe ser capaz de reproducir los sntomas de mos.
Figura 6- Observaciones de microorganismos al microcopio ptico. Izquierda: algas al

estado fresco y derecha: bacilos luego de tincin
Otros mtodos de estudio de los microorganismos Preguntas de repaso

Numerosos mtodos son empleados para el estudio de
estructuras subcelulares de los microorganismos y para 1) Objeto de estudio de la Microbiologa
distinguir cepas bacterianas. Muchos de ellos son adap- 2) Disciplinas muy relacionadas a la microbiologa
taciones de tcnicas corrientes en biologa celular: colo-
3) Algunas de las especialidades en que se ha subdividi-
raciones diferenciales y observaciones microscpicas (ci-
do esta ciencia
toqumica), estudios enzimticos, evidencia de vas me-
tablicas y finalmente los mayores avances se realiza- 4) Concepto del trmino microorganismo y ejemplos de
ron por aplicacin de mtodos de biologa molecular. ellos
Muchos de ellos son descriptos en el captulo 8: Ecolo- 5) Por qu se dice que los microorganismos son muy
ga microbiana y en el Apndice prctico. buenas herramientas en estudios fisiolgicos, genti-
cos, enzimticos?
Como resumen, en el cuadro 3 se sealan algunos de 6) Por qu las bacterias estn tan distribuidas en la natu-
los descubrimientos ms importantes que contribuyeron raleza? Seale ambientes donde se las encuentra.
a la evolucin de la Microbiologa. 7) Cual fue el gran descubrimiento que permiti separar
2006 UNIVERSIDAD DE LA REPBLICA - FACULTAD DE AGRONOMA a los microorganismos en dos grandes grupos? Con
Reservados todos los derechos de la presente edicin para todos los pases. Este libro no se podr reproducir total o qu instrumento se logr este hallazgo?
parcialmente por ningn medio grfico, electrnico, digital, mecnico o cualquier otro, incluyendo los sistemas de Bibliografa
8) Diferencias entre bacteria, arquebacteria y eucariotas
fotocopia o fotoduplicacin, registro magnetofnico o de alimentacin de datos, sin expreso consentimiento de la
Facultad de Agronoma. Madigan, Martinko y Parker. Brock, Biologa de los mi- 9) Por qu resulta importante la tincin de los frotis bac-
croorganismos, 9. Edicin, 2000 Prentice Hall Inter- terianos antes de su observacin microscpica?
Contacto: lfrioni@fagro.edu.uy, Fax: 598 2 359 04 36 national 10) Por qu aun no se tiene certeza definitiva sobre la
Prescott, Harley, Klein, Microbiologa, 1999 McGraw-Hill evolucin del mundo microbiano? Qu herramientas
DEPOSITO LEGAL: 330.113/06 Interamericana resultan muy importantes de aplicar?
ISBN: 9974-0-0290-7
FOTOS DE TAPA: P. Izaguirre, Peltophorum dubium (Ibirapit) y Bauhinia foficata (Pata de vaca)
DISEO DE TAPA: Javier Santiago
DISEO, ARMADO E IMPRESIN: Departamento de Publicaciones de la Facultad de Agronoma, Universidad de la
Repblica Oriental del Uruguay. Avda. Garzn 780, 12900 Montevideo -URUGUAY
En general los microorganismos son fijados (frotis) y tei-

dos con colorantes cidos o bsicos a los efectos de au-
mentar su visibilidad y/o conservarlos para otros estudios.
Fijacin: se realiza en general secando suavemente el Tabla de contenidos

inculo sobre el portaobjeto a la llama y luego cortando
varias veces la llama con el preparado. El objetivo es con-
servar las estructuras lo ms intactas posibles antes de
su tincin. La fijacin puede realizarse con sustancias Prlogo .................................................................................................................. 7
qumicas, como el etanol, cido actico, formaldehdo, que
inactivan e insolubilizan molculas como los lpidos y pro- Los microorganismos: estructuras y funciones
tenas microbianas.
1 Introduccin a la Microbiologa .............................................................................. 9
Coloraciones: numerosos colorantes se emplean para
Figura 5- Microscpica electrnica. 2 Estructuras y funciones de las clulas eucariotas y procariotas. Los virus ......... 17
Izquierda: Rhizobium observado con microscopio electrnico facilitar la visualizacin de los microorganismos ms pe-
de transmisin, se aprecia la membrana y la pared celular , la queos, como las bacterias (figura 6). Presentan grupos 3 Nutricin y metabolismo bioenergtico en microorganismos .............................. 39
regin nuclear y gotas lipdicas (materiales de reserva). cromforos, con dobles enlaces que le dan el color carac-
terstico y adems se unen a estructuras celulares por 4 Crecimiento microbiano y su control. Efecto de factores ambientales ................ 65
Derecha: micrografa de Lactobacillus spp. con microscopa
electrnica de barrido. enlaces inicos, covalentes o hidrofbicos. Los coloran- 5 Gentica de mcroorganismos procariotas ........................................................... 85
tes bsicos, como el azul de metileno, la fucsina bsica,
el cristal violeta, la safranina, verde de malaquita, tienen 6 Taxonoma bacteriana y filogenia ........................................................................ 93
El primero permite visualizar estructuras dentro de la c-
grupos cargados positivamente que se unen a molculas 7 Los protistas superiores ................................................................................... 105
lula, as como caractersticas de la membrana y pared
cargadas negativamente, como los cidos nucleicos y
celular, por la diferencia de densidades al ser atravesa-
muchas protenas (superficies bacterianas). Los coloran-
das por un flujo acelerado de electrones. El de barrido Los microorganismos en los ciclos biogeoqumicos
tes cidos, como la eosina, rosa de Bengala y fucscina
muestra el relieve de superficies celulares ya que los elec-
cida son aninicos y se unen a grupos celulares carga-
trones se reflejan luego de chocar con una superficie me- 8 Ecologa microbiana y mtodos de estudio ....................................................... 117
dos positivamente.
tlica que recubre los preparados.
9 Ciclo biolgico del carbono ............................................................................... 137
Los microorganismos se pueden observar al microscopio
Tinciones luego de una tincin simple, es decir un solo colorante, 10 Ciclo biolgico del nitrgeno ............................................................................. 165
Los microorganismos vivos se pueden examinar directamen- por ejemplo con azul de metileno: se cubre el frotis con el
te con un microscopio ptico, prctica corriente en estudios colorante, por un tiempo prudencial, 1 minuto, se lava con 11 Fijacin biolgica del nitrgeno (FBN) .............................................................. 187
de morfologa de hongos, algas y protozoos (figura 6). agua, se seca y se observa. Permiten distinguir tamao, 12 Ciclos biolgicos del azufre, fsforo, hierro. ...................................................... 207
forma y organizacin de bacterias.
En el caso de las bacterias, dado su pequeo tamao y la
falta de contraste con el medio, esta tcnica de observa- Los mtodos de tincin diferencial permiten diferenciar Los microorganismos y sus interacciones
cin es menos usada. grupos bacterianos segn sus propiedades de tincin.
Ejemplo de estas es la tincin de Gram, que separa a 13 La rizosfera ........................................................................................................ 225
Sin embargo, es muy empleada para evidenciar la movili- bacterias Gram positivas (toman el primer colorante y lo
14 Interacciones entre microorganismos .............................................................. 237
dad bacteriana, con cultivos jvenes en medio lquido, en retienen y se ven violetas) y Gram negativas, que no re-
el microscopio ptico, ya que los flagelos son difciles de tienen el colorante violeta luego de lavado con etanol o 15 Fijacin biolgica de N2 en la rizosfera y en asociaciones nodulares ............... 249
observar aun con tinciones especiales. Se coloca una acetona y se colorean con el colorante de contraste, rosa-
16 Las micorrizas ................................................................................................... 285
gota de cultivo entre porta y cubre objeto o en portaobje- do, como la safranina.
tos especiales excavados, que se observan con baja lu- 17 Microorganismos promotores del crecimiento vegetal ...................................... 303
minosidad ya que existe poco contraste entre las clulas Existen otro grupo de tinciones que permiten visualizar es-
y el agua, lo que dificulta la observacin. tructuras como esporas, flagelos, materiales de reserva, etc. 18 Procesos microbianos en el rumen ................................................................... 317
Los microorganismos en los alimentos y la industria
19 Fermentacin lctica y alcohlica. Aplicaciones biotecnolgicas ...................... 333 Bacteria Archaea Eukarya
20 Aplicaciones industriales de los microorganismos ............................................ 349
Los microorganismos y la proteccin ambiental Entamebas Hongos

Animales
Bacterias verdes
Euriarqueotas mucosos
no sulfurosas
21 Biotransformacin de residuos orgnicos ......................................................... 363 Hongos
Mitocondria
Crenarqueotas
Methano- Methanosarcina Plantas
22 Degradacin de xenobiticos ............................................................................ 383 Bacterias
bacterium
Halfilos
Bacterias rojas gram- Thermoproteus extremos
positivas Methano- Ciliados
23 Biorremediacin ................................................................................................ 397 Cloroplastos Pyrodictium coccus Thermoplasma
Anexo prctico ................................................................................................... 407 Cianobacterias Thermococcus
Flavobacterias Flagelados
Korarqueotas Methanopyrus
Tricomnadas
Thermotoga
Aquifex Microsporidios
Diplomnadas
(Giardia)
Figura 4- Bacteria, Archae y Eukarya
Es posible que nuevos datos ayuden a dilucidar este pro- Como las bacterias presentan aproximadamente un di-
ceso evolutivo. metro de 1 m, con los microscopios pticos slo se pue-
den apreciar la forma general y las caractersticas morfo-
lgicas principales, pero no se aprecian estructuras sub-
Tcnicas de estudio de los microorganismos
celulares.
La mayor limitacin en el estudio de los microorganismos
Se emplean tambin microscopios de contraste de fa-
lo constituye su pequeo tamao, la falta de fsiles y la
ses y los fluorescentes, que permiten distinguir estruc-
dificultad de muchos de los microorganismos para ser
turas en base al empleo de colorantes fluorescentes,
cultivados en el laboratorio. Sin embargo, los avances en
como el naranja de acridina, diacetato de fluorescena
los ltimos 100 aos fueron enormes y el cuadro 3 resu-
etc. Muchos de ellos se consideran colorantes vitales,
me algunos de los eventos ms importantes.
ya que fluorescen en luz ultravioleta luego de ser em-
pleados por enzimas celulares.
Microscopa
El microscopio marc un hito en los estudios, ya que
La estructura interna detallada de los microorganismos
hay que considerar que el ojo desnudo aprecia como
fue visible con el microscopio electrnico, desarrollado a
independientes a dos puntos separados por 0,1mm (po-
partir de la dcada del 30 del siglo XX y que presenta un
der separador) y el mejor microscopio ptico presenta
poder separador aproximadamente 1000 veces superior
un lmite de resolucin de 0,2 m y un aumento mximo
al del microscopio ptico y puede distinguir puntos sepa-
de 1.500-2000X, que resulta de multiplicar el aumento
rados por 0,5nm (aumento eficaz 100.000X). Se emplean
del ocular (10-20X) por el del objetivo (5, 10, 20 aumen-
los microscopios electrnicos de transmisin y de barrido
tos, los comunes y x 100, el objetivo de inmersin en
(figura 5).
aceite).
Microbiologa, bsica, ambiental y agrcola
Lillian Frioni- Editorial de la Facultad de Agronoma, Montevideo,
Uruguay-2006
Fe de erratas
Tabla de contenidos: Algunos captulos presentan una numeracin de
pgina que no corresponde.
Captulo Pgina Captulo Pgina

1 11 15 255
2 19 16 291
8 121 17 309
9 143 18 323
10 169 19 341
11 191 20 357
12 211 21 373
13 231 22 393
14 243 23 407
Anexo Prctico 417
Pgina donde dice debe decir

9 Los protistas superiores Los microorganismos
eucariotas
13 Protistas inferiores Procariotas
27 Texto: La figura 12 presenta la La figura 12 presenta la

ultraestructura de una morfologa de bacilos
endospora al microscopio capsulados y esporulados
electrnico
28 Figura 12- Ultraestructura de Morfologa de bacilos
una endospora bacteriana y esporulados y capsulados
bacilos esporulados y
capsulados
42 Cuadro 4 hetertrofos hetertrofos
compuestos inorgnicos compuestos orgnicos
52 Fermentacin alcohlica: se Eliminar subrayado. Es:
realiza en el msculo y. Los microorganismos activos
son sobre todo los hongos
57 Debajo del Cuadro 21: El CO2 El H2 acta como donador y el
(carbonatos) acta como CO2 como aceptor de
donador y el H2 como aceptor electrones
de electrones.
105 Los protistas superiores Se estila ms referirlos como :
Microorganismos eucariotas
115 Zygomycetes: micelio eliminar: septado bien
cenoctico o septado bien desarrollado
desarrollado.
141 Cuadro 11: Bacterias
Bacterias aerobias/nitrificantes
aerobias/desnitrificantes
150 Cuadro 10 Hongos celulolticos Hongos celulolticos son:

: Ascomycetes Zygomycetes, Ascomycetes,
Basidiomycetes y
Deuteromycetes
300 El endofito.y Endogonales Endogonales (flia.
(flias. Gigasporaceae y Endogonaceae). Eliminar
Endogonaceae) Gigasporaceae
315 antibiticos o toxinas Sacar lo subrayado
especficas como bacteriocinas
422 Tcnica coloracin de Gram: se Decolorar con alcohol-cetona

omiti el 5 paso: decoloracin (2/1 vol/vol) suavemente con
(luego del tratamiento con ayuda de agua hasta que el
Lugol) frotis se vea limpio.
tes en los procariotas, originado a partir de una bacteria Los estudios sobre las secuencias del ARN ribosomal en
aerobia. Esta hiptesis se contradice con la creencia ge- clulas procariotas sugiere una separacin temprana de
neral de que este organismo primitivo fuera una ciano- estos organismos. La figura 4 (Madigan et al., 2000)pre-
bacteria. Estas bacterias y la fotosntesis productora de
oxgeno se desarrollaron probablemente hace unos 2.500
senta el arreglo segn estos criterios basados en la orga-
nizacin gentica. El rbol filogentico se divide en tres Prlogo
a 3.000 millones de aos. La diversidad microbiana au- ramas principales: Bacteria, Archaea y Eucarya. Las ar-
ment en forma notable luego de la aparicin del O2. queobacterias y las bacterias fueron las primeras en di- Microbiologa: bsica, ambiental y agrcola surge luego de revisin y ampliacin de Procesos microbianos, editado en
verger y luego se desarrollaron los organismos eucario- 1999 por la Fundacin de la Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina, texto que continu a Ecologa microbiana
La figura 3 muestra un esquema de la evolucin del mun- tas. Estos tres grupos primarios se denominan dominios del Suelo, editado en 1990 por el Departamento de Publicaciones de la Universidad de la Repblica (Uruguay).
do vivo basado en la estructura del ARN de los riboso- o imperios y se ubican por encima del nivel de los reinos En todos ellos se analizan actividades de los microorganismos que benefician al hombre y mejoran la calidad de los
mas. Desde el punto de vista evolutivo los organismos se clsicos. ecosistemas naturales, cuyo conocimiento permite manejarlas y dirigirlas en beneficio de la poblacin. En efecto,
pueden dividir en tres grupos principales: arqueobacte- muchas actividades microbianas permiten incrementar la produccin de alimentos, la salud de los suelos y de los
rias, eubacterias y eucariotas. Los organismos eucariotas presentan lpidos con acil dis- cauces de agua, evitando o disminuyendo las aplicaciones masivas de fertilizantes y sustancias altamente txicas como
teres del glicerol y ARN ribosomal eucariota y pertenecen herbicidas, fungicidas, etc.
Plantas a Eucarya. El dominio Bacteria (Eubacteria) presenta or- Debemos, sin embargo sealar las diferencias entre los tres textos: en Ecologa microbiana del suelo, se analizaron las
Animales
ganismos con clulas procariotas con lpidos de membra- transformaciones de la materia orgnica y mineral de los suelos, las interacciones de los microorganismos entre si y con
na con diacil dister de glicerol, mientras que los proca- los vegetales, con nfasis en dos importantes asociaciones simbiticas, las fijadoras de nitrgeno y las asociaciones con
Arqueobacterias Eucariotas Eubacterias riotas cuyas membranas estn compuestas por lpidos hongos micorrcicos.
isoprenoides del tipo diter de diglicerol o tetrater de di- En Procesos microbianos se agregaron temas vinculados a los procesos de biodegradacin de restos orgnicos, tanto
glecerol y ARNr arqueobacteriano comprenden el tercer aerobios como anaerobios que contribuyen a la conversin de materiales de deshecho de la industria lctea, de otras
Ancestro universal dominio, Archaea, que incluye a organismos termfilos, agroindustrias y de prcticas agrcolas, en productos que se usan como biofertilizantes y obtener efluentes de la indus-
anaerobios y acidfilos. tria sin carcter contaminante, contribuyendo a la proteccin ambiental. Otra temtica abordada en este segundo texto
Origen de la vida es la promocin del crecimiento vegetal, tanto en forma directa, por procesos microbianos de mineralizacin, oxido-
Parece probable que las clulas eucariotas modernas se reduccin, solubilizacin, fijacin, como por su contribucin a la eliminacin de microorganismos fitopatgenos por
Figura 3- Evolucin del mundo vivo basada en la originaron a partir de las procariotas hace unos 1.400 millo- mecanismos conocidos como Control Biolgico.
estructura del ARN de los ribosomas nes de aos. Los mecanismos no estn aun dilucidados. Finalmente, en el presente texto Microbiologa: bsica, ambiental y agrcola, adems de revisarse y actualizarse estos
temas, se entendi oportuno incorporar captulos dedicados a aspectos de Microbiologa General o Bsica, en el enten-
Aunque las eubacterias y las arqueobacterias son proca- Una de la hiptesis es la endosimbitica, que piensa que
dimiento de que muchas veces resulta dificultoso a los estudiantes de Agronoma, de Ciencias del Suelo o de Ciencias
riotas, desde un punto de vista evolutivo no estn ms la clula eucariota ancestral se pudo formar por la fusin
Ambientales, acceder a los excelentes textos que sobre el tema estn publicados.
estrechamente relacionadas entre si como lo estn con de antiguas eubacterias y arqueobacterias. Muchos auto-
Se continu una interesante experiencia de coordinacin realizada entre el 2000 y el 2002 por los docentes de Microbio-
los eucariotas. res consideran que Archaea y Eucarya estn ms relacio-
loga de las 7 Facultades de Uruguay que imparten conceptos de Microbiologa en la que se delimitaron los conceptos
nados de los que parece y proponen que la lnea eucariota
bsicos que deberan contener un curso comn de Microbiologa General, a aplicar en cada uno de esos centros, que
Las arqueobacterias (Archaeae) comprenden un grupo surgi de Archaea y luego se form el ncleo, posiblemen-
est disponible en CD. Sobre esta experiencia se desarrollaron los captulos del 1 al 7 del presente texto.
muy primitivo que incluye organismos halfitos y termfi- te a partir del aparato de Golgi. Las mitocondrias y los clo-
Otras temticas abordadas en este texto son el de Biorremediacin, o sea el tratamiento microbiolgico de situaciones
los extremos. Entre ellas se encuentran las bacterias me- roplastos parecen haber surgido con posterioridad.
de polucin graves, como las que lamentablemente nos tiene acostumbrados la prensa: derrames de petrleo, contami-
tanognicas, anaerobias estrictas. naciones por solventes, herbicidas, etc. y el de la aplicacin biotecnolgica de muchos microorganismos.
El eucariota ancestral fermentador de vida libre con su
El Anexo prctico contiene como en los textos anteriores, tcnicas bsicas para realizar experiencias sencillas y poner
Parecera que los tres grupos bacterianos surgieron tem- ncleo estableci relaciones simbiticas permanentes con
en evidencia los procesos microbiolgicos tratados en el texto.
prano en la historia de la tierra a partir de un organismo bacterias fotosintticas (cianobacterias) que evoluciona-
primitivo comn, el ancestro universal. ron hacia los cloroplastos. Eubacterias con respiracin
Por ltimo, se desea dedicar este texto a los estudiantes de distintas disciplinas: Agrcolas, Biolgicas, de Ciencias
aerobia (Agrobacterium, Rhizobium, rickettsias) seran los
Ambientales, Ciencias del Suelo, Bioqumica y Qumica, que sientan inters en adentrarse en el apasionante mundo de
Debido a que las clulas de los animales y de las plantas antecesores de las mipocondrias.
los microorganismos.
son eucariotas, se ha considerado en forma general que
han derivado de algn tipo de microorganismo, en tanto Esta teora endosimbitica ha sido avalada por el hallaz-
que los procariotas representan una rama que nunca su- go de una cianobacteria endosimbitica en un protozoo
per la etapa microbiana. diflagelado y que acta como su cloroplasto.
nuclear, contiene varias molculas de ADN y se divide por Ya desde la segunda mitad del siglo XIX se vislumbraban
mitosis o por una completa reproduccin sexual, que in- diferencias entre animales y vegetales con los organismos
cluye fusin de clulas, formacin de zigote diploide y se- ms simples, como las bacterias, hongos, algas y protozoos.
gregacin de clulas haploides luego de la meiosis.
El zologo alemn Haeckel propuso en 1886 incluir a es-
tos ltimos organismos en un nuevo reino, el de los Pro-
citoplasma 0.5 m
tistas: integrado por organismos muy simples, la mayora
clula
eucariota unicelulares, microscpicos, y otros macroscpicos fila-
clula
ncleo mentosos o cenocticos (tubos con paredes rgidas con
procariota
citoplasma y ncleos que fluyen libremente), conocidos
vulgarmente como microorganismos.
No se diferencian en tejidos ni rganos, ni presentan espe-

cializacin funcional, excepto, tal vez, para la reproduccin.
Luego de la evidencia de la existencia de los dos tipos de

organelos
clulas, el reino de los protistas se dividi en:
Protistas inferiores, con clula procariota, que incluye a

las bacterias, con las cianobacterias y actinomicetes y
Protistas superiores, con estructura eucariota, que com-

Figura 2- Relaciones entre las clulas procariotas prende a las algas, protozoos y hongos.
y las eucariotas
A los virus les faltan muchos de los atributos de las clu-
La clula procariota, por el contrario, no posee membrana las entre los cuales el ms importante es que no son sis-
nuclear, posee una sola molcula de ADN y la divisin asexual temas abiertos dinmicos. Una partcula viral es una es-
es por biparticin, amittica. La clula no est atravesada tructura esttica, incapaz de cambiar o reponer sus par-
por membranas, no posee organelos, excepto sacos muy tes. Carecen de organizacin celular, de capacidad meta-
simples que alberguen a los pigmentos fotosintticos y a ve- blica y de autoduplicacin, no se los considera microor-
ces vesculas de gas para flotar en el agua. ganismos, sino entidades biolgicas y sern tratados en
el captulo de gentica de procariotas, por el rol que ejer-
Los estudios a nivel de funciones celulares mostraron que cen en la transferencia de material gentico.
estas diferencias estructurales son la expresin de meca-
nismos diferentes de:
Evolucin y diversidad microbiana
transmisin de la informacin gentica
tipos de metabolismo bioenergtico Se calcula que nuestro planeta tiene una antigedad de
4.600 millones de aos y se han descubierto restos fsi-
procesos de entrada y salida de sustancias les de clulas bacterianas de unos 3.500 a 3.800 millones
de aos, por lo que se infiere que la vida procariota surgi
Uno de los hechos ms sorprendentes en la historia de la poco despus del enfriamiento terrestre.
evolucin debe ser sin duda la aparicin de la primera clu-
la eucaritica. Se est lejos de comprender las causas de Se postula a un hongo hemiascomicete como el primer
este gran salto en la evolucin, sobre todo por la escasez organismo eucariota, que fue adquiriendo los 22 caracte-
de fsiles, que permitan reconocer intermediarios. res universalmente presentes en los eucariotas y ausen-
Cuadro 1- Aspectos que estudia la Microbiologa Cuadro 2- Impacto de los microorganismos

en la actividad humana
Microbiologa general: herramienta para la compren-
sin de principios metablicos generales, gentica, di- Como agentes causantes de enfermedades
visin celular.
La mayora de los microorganismos estn bajo control.
Estudia: los microorganismos, su estructura, fisiologa, Sin embargo, en ciertas condiciones las enfermedades
clasificacin, diversidad, procesos bioqumicos, creci- microbianas constituyen causa de morbilidad y muerte
miento y su control Benficos: productores de antibiticos (100ton/ao)
Microbiologa aplicada: relacionada a problemas de
la medicina, ambiente, industria, produccin y con- En la agricultura
servacin de alimentos, transformaciones de la ma- Fijacin biolgica del N2 (175 millones toneladas
teria orgnica y mineral en ecosistemas naturales, N/ao)
generacin de energa, proteccin del ambiente, bio-
tecnologa
Transformaciones de elementos: C, N. S, P, K, etc.
Actividades microbianas en el rumen
Los microorganismos:
Los organismos cumplen con los 5 principios caracters-
Enfermedades de plantas (hongos, bacterias) y su Con-
trol Biolgico
estructuras y funciones
ticos de las clulas vivas: Energa y proteccin del ambiente
Biocombustibles: etanol, H2, metano
1. autoalimentacin o nutricin: las clulas toman las
sustancias qumicas del ambiente, las transforman, libe- Polmeros biodegradables: polialcanos ( OH-butirato) 1 Introduccin a la Microbiologa ....................................................... 11
ran energa y productos de desecho. Recuperacin de minerales de suelos de minas
Alimentos 2 Estructuras y funciones de las clulas eucariotas y procariotas.
2. autoduplicacin o desarrollo: las clulas son capa-
Conservacin de alimentos (fermentaciones cidas) Los virus .......................................................................................... 19
ces de dirigir su propia sntesis. Al crecer, se dividen dan-
do dos clulas cada una idntica a la original. Fermentaciones lctica y alcohlica
Biotecnologa 3 Nutricin y metabolismo bioenergtico en microorganismos .......... 39
3. diferenciacin: la mayor parte de las clulas pueden Organismos genticamente modificados de inters
presentar cambios en su forma o funcin. La diferencia- Produccin de compuestos farmacuticos 4 Crecimiento microbiano y su control.
cin suele ser parte del ciclo de vida celular: se forman Efecto de factores ambientales ....................................................... 65
Herramientas para la transferencia de genes (seleccio-
estructuras especializadas comprometidas con la repro-
nados o creados)
duccin sexual, la dispersin, la sobrevivencia en condi-
ciones desfavorables (esporas, cistos,etc). 5 Gentica de mcroorganismos procariotas ...................................... 85
organismos y confirmar la existencia de dos tipos de clu-
4. sealamiento qumico: interactan o se comunican 6 Taxonoma bacteriana y filogenia ................................................... 93
con otras clulas, por seales qumicas las: la eucaritica, unidad estructural de animales, vegeta-
les, protozoos, hongos y algas y la procaritica, caracte-
rstica de los organismos ms simples, las bacterias, inclu- 7 Los protistas superiores ............................................................... 105
5. evolucin: es la introduccin de cambios heredita-
rios como resultado de la seleccin natural. Consecuen- yendo entre stas a las cianobacterias (figura 2).
cia de estos cambios (que ocurren a velocidad baja pero
regular en todas las clulas) es la seleccin de los orga- A pesar de la extraordinaria diversidad de clulas eucari-
nismos mejor capacitados para vivir en determinado ticas, resultante de la especializacin evolutiva de los dis-
ambiente. tintos grupos, su arquitectura bsica es comn: comparti-
mentalizacin por sistemas membranosos (RE y Golgi), co-
Los estudios con el microscopio electrnico permitieron rrientes citoplasmticas, mitocondrias y cloroplastos. El
reconocer diferencias en la organizacin subcelular de los ncleo de los eucariotes est rodeado por una membrana
1 Introduccin a la Microbiologa
La Microbiologa es la ciencia que estudia a los microorga- paces de reproducirse por si mismos. Se les denomina:
nismos que constituyen un importante grupo de organis- entidades biolgicas.
mos primitivos y simples, la mayora unicelulares microsc-
picos y otros macroscpicos filamentosos o cenocticos, La Microbiologa estudia:
capaces de realizar innumerables procesos biolgicos, que i) clulas vivas y su funcionamiento
han surgido muy temprano en la evolucin, pero que se ii) los microorganismos, importante grupo capaz de
han adaptado a las condiciones ambientales actuales. existencia independiente
iii) diversidad microbiana y evolucin
El grupo est integrado por las bacterias, algas, hongos, iv) funciones en la biosfera, en nuestro organismo, en el
protozoos (figura 1). de los vegetales y animales
Los virus no se consideran microorganismos en sentido El cuadro 1 presenta la clsica divisin de la disciplina en
estricto, ya que no poseen estructura celular, presentan Microbiologa General y Microbiologa Aplicada y el cua-
una sola molcula de cido nucleico, carecen de activi- dro 2 resume algunos de los efectos de los microorganis-
dad metablica (excepto la enzima lisozima) y son inca- mos en las actividades humanas.
Figura 1- Bacterias, hongos, algas y protozoos

1 Introduccin a la Microbiologa
La Microbiologa es la ciencia que estudia a los microorga- paces de reproducirse por si mismos. Se les denomina:
nismos que constituyen un importante grupo de organis- entidades biolgicas.
mos primitivos y simples, la mayora unicelulares microsc-
picos y otros macroscpicos filamentosos o cenocticos, La Microbiologa estudia:
capaces de realizar innumerables procesos biolgicos, que i) clulas vivas y su funcionamiento
han surgido muy temprano en la evolucin, pero que se ii) los microorganismos, importante grupo capaz de
han adaptado a las condiciones ambientales actuales. existencia independiente
iii) diversidad microbiana y evolucin
El grupo est integrado por las bacterias, algas, hongos, iv) funciones en la biosfera, en nuestro organismo, en el
protozoos (figura 1). de los vegetales y animales
Los virus no se consideran microorganismos en sentido El cuadro 1 presenta la clsica divisin de la disciplina en
estricto, ya que no poseen estructura celular, presentan Microbiologa General y Microbiologa Aplicada y el cua-
una sola molcula de cido nucleico, carecen de activi- dro 2 resume algunos de los efectos de los microorganis-
dad metablica (excepto la enzima lisozima) y son inca- mos en las actividades humanas.
Figura 1- Bacterias, hongos, algas y protozoos

Cuadro 1- Aspectos que estudia la Microbiologa Cuadro 2- Impacto de los microorganismos

en la actividad humana
Microbiologa general: herramienta para la compren-
sin de principios metablicos generales, gentica, di- Como agentes causantes de enfermedades
visin celular.
La mayora de los microorganismos estn bajo control.
Estudia: los microorganismos, su estructura, fisiologa, Sin embargo, en ciertas condiciones las enfermedades
clasificacin, diversidad, procesos bioqumicos, creci- microbianas constituyen causa de morbilidad y muerte
miento y su control Benficos: productores de antibiticos (100ton/ao)
Microbiologa aplicada: relacionada a problemas de
la medicina, ambiente, industria, produccin y con- En la agricultura
servacin de alimentos, transformaciones de la ma- Fijacin biolgica del N2 (175 millones toneladas
teria orgnica y mineral en ecosistemas naturales, N/ao)
generacin de energa, proteccin del ambiente, bio-
tecnologa
Transformaciones de elementos: C, N. S, P, K, etc.
Actividades microbianas en el rumen
Los microorganismos:
Los organismos cumplen con los 5 principios caracters-
Enfermedades de plantas (hongos, bacterias) y su Con-
trol Biolgico
estructuras y funciones
ticos de las clulas vivas: Energa y proteccin del ambiente
Biocombustibles: etanol, H2, metano
1. autoalimentacin o nutricin: las clulas toman las
sustancias qumicas del ambiente, las transforman, libe- Polmeros biodegradables: polialcanos ( OH-butirato) 1 Introduccin a la Microbiologa ....................................................... 11
ran energa y productos de desecho. Recuperacin de minerales de suelos de minas
Alimentos 2 Estructuras y funciones de las clulas eucariotas y procariotas.
2. autoduplicacin o desarrollo: las clulas son capa-
Conservacin de alimentos (fermentaciones cidas) Los virus .......................................................................................... 19
ces de dirigir su propia sntesis. Al crecer, se dividen dan-
do dos clulas cada una idntica a la original. Fermentaciones lctica y alcohlica
Biotecnologa 3 Nutricin y metabolismo bioenergtico en microorganismos .......... 39
3. diferenciacin: la mayor parte de las clulas pueden Organismos genticamente modificados de inters
presentar cambios en su forma o funcin. La diferencia- Produccin de compuestos farmacuticos 4 Crecimiento microbiano y su control.
cin suele ser parte del ciclo de vida celular: se forman Efecto de factores ambientales ....................................................... 65
Herramientas para la transferencia de genes (seleccio-
estructuras especializadas comprometidas con la repro-
nados o creados)
duccin sexual, la dispersin, la sobrevivencia en condi-
ciones desfavorables (esporas, cistos,etc). 5 Gentica de mcroorganismos procariotas ...................................... 85
organismos y confirmar la existencia de dos tipos de clu-
4. sealamiento qumico: interactan o se comunican 6 Taxonoma bacteriana y filogenia ................................................... 93
con otras clulas, por seales qumicas las: la eucaritica, unidad estructural de animales, vegeta-
les, protozoos, hongos y algas y la procaritica, caracte-
rstica de los organismos ms simples, las bacterias, inclu- 7 Los protistas superiores ............................................................... 105
5. evolucin: es la introduccin de cambios heredita-
rios como resultado de la seleccin natural. Consecuen- yendo entre stas a las cianobacterias (figura 2).
cia de estos cambios (que ocurren a velocidad baja pero
regular en todas las clulas) es la seleccin de los orga- A pesar de la extraordinaria diversidad de clulas eucari-
nismos mejor capacitados para vivir en determinado ticas, resultante de la especializacin evolutiva de los dis-
ambiente. tintos grupos, su arquitectura bsica es comn: comparti-
mentalizacin por sistemas membranosos (RE y Golgi), co-
Los estudios con el microscopio electrnico permitieron rrientes citoplasmticas, mitocondrias y cloroplastos. El
reconocer diferencias en la organizacin subcelular de los ncleo de los eucariotes est rodeado por una membrana
nuclear, contiene varias molculas de ADN y se divide por Ya desde la segunda mitad del siglo XIX se vislumbraban
mitosis o por una completa reproduccin sexual, que in- diferencias entre animales y vegetales con los organismos
cluye fusin de clulas, formacin de zigote diploide y se- ms simples, como las bacterias, hongos, algas y protozoos.
gregacin de clulas haploides luego de la meiosis.
El zologo alemn Haeckel propuso en 1886 incluir a es-
tos ltimos organismos en un nuevo reino, el de los Pro-
citoplasma 0.5 m
tistas: integrado por organismos muy simples, la mayora
clula
eucariota unicelulares, microscpicos, y otros macroscpicos fila-
clula
ncleo mentosos o cenocticos (tubos con paredes rgidas con
procariota
citoplasma y ncleos que fluyen libremente), conocidos
vulgarmente como microorganismos.
No se diferencian en tejidos ni rganos, ni presentan espe-

cializacin funcional, excepto, tal vez, para la reproduccin.
Luego de la evidencia de la existencia de los dos tipos de

organelos
clulas, el reino de los protistas se dividi en:
Protistas inferiores, con clula procariota, que incluye a

las bacterias, con las cianobacterias y actinomicetes y
Protistas superiores, con estructura eucariota, que com-

Figura 2- Relaciones entre las clulas procariotas prende a las algas, protozoos y hongos.
y las eucariotas
A los virus les faltan muchos de los atributos de las clu-
La clula procariota, por el contrario, no posee membrana las entre los cuales el ms importante es que no son sis-
nuclear, posee una sola molcula de ADN y la divisin asexual temas abiertos dinmicos. Una partcula viral es una es-
es por biparticin, amittica. La clula no est atravesada tructura esttica, incapaz de cambiar o reponer sus par-
por membranas, no posee organelos, excepto sacos muy tes. Carecen de organizacin celular, de capacidad meta-
simples que alberguen a los pigmentos fotosintticos y a ve- blica y de autoduplicacin, no se los considera microor-
ces vesculas de gas para flotar en el agua. ganismos, sino entidades biolgicas y sern tratados en
el captulo de gentica de procariotas, por el rol que ejer-
Los estudios a nivel de funciones celulares mostraron que cen en la transferencia de material gentico.
estas diferencias estructurales son la expresin de meca-
nismos diferentes de:
Evolucin y diversidad microbiana
transmisin de la informacin gentica
tipos de metabolismo bioenergtico Se calcula que nuestro planeta tiene una antigedad de
4.600 millones de aos y se han descubierto restos fsi-
procesos de entrada y salida de sustancias les de clulas bacterianas de unos 3.500 a 3.800 millones
de aos, por lo que se infiere que la vida procariota surgi
Uno de los hechos ms sorprendentes en la historia de la poco despus del enfriamiento terrestre.
evolucin debe ser sin duda la aparicin de la primera clu-
la eucaritica. Se est lejos de comprender las causas de Se postula a un hongo hemiascomicete como el primer
este gran salto en la evolucin, sobre todo por la escasez organismo eucariota, que fue adquiriendo los 22 caracte-
de fsiles, que permitan reconocer intermediarios. res universalmente presentes en los eucariotas y ausen-
tes en los procariotas, originado a partir de una bacteria Los estudios sobre las secuencias del ARN ribosomal en
aerobia. Esta hiptesis se contradice con la creencia ge- clulas procariotas sugiere una separacin temprana de
neral de que este organismo primitivo fuera una ciano- estos organismos. La figura 4 (Madigan et al., 2000)pre-
bacteria. Estas bacterias y la fotosntesis productora de
oxgeno se desarrollaron probablemente hace unos 2.500
senta el arreglo segn estos criterios basados en la orga-
nizacin gentica. El rbol filogentico se divide en tres Prlogo
a 3.000 millones de aos. La diversidad microbiana au- ramas principales: Bacteria, Archaea y Eucarya. Las ar-
ment en forma notable luego de la aparicin del O2. queobacterias y las bacterias fueron las primeras en di- Microbiologa: bsica, ambiental y agrcola surge luego de revisin y ampliacin de Procesos microbianos, editado en
verger y luego se desarrollaron los organismos eucario- 1999 por la Fundacin de la Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina, texto que continu a Ecologa microbiana
La figura 3 muestra un esquema de la evolucin del mun- tas. Estos tres grupos primarios se denominan dominios del Suelo, editado en 1990 por el Departamento de Publicaciones de la Universidad de la Repblica (Uruguay).
do vivo basado en la estructura del ARN de los riboso- o imperios y se ubican por encima del nivel de los reinos En todos ellos se analizan actividades de los microorganismos que benefician al hombre y mejoran la calidad de los
mas. Desde el punto de vista evolutivo los organismos se clsicos. ecosistemas naturales, cuyo conocimiento permite manejarlas y dirigirlas en beneficio de la poblacin. En efecto,
pueden dividir en tres grupos principales: arqueobacte- muchas actividades microbianas permiten incrementar la produccin de alimentos, la salud de los suelos y de los
rias, eubacterias y eucariotas. Los organismos eucariotas presentan lpidos con acil dis- cauces de agua, evitando o disminuyendo las aplicaciones masivas de fertilizantes y sustancias altamente txicas como
teres del glicerol y ARN ribosomal eucariota y pertenecen herbicidas, fungicidas, etc.
Plantas a Eucarya. El dominio Bacteria (Eubacteria) presenta or- Debemos, sin embargo sealar las diferencias entre los tres textos: en Ecologa microbiana del suelo, se analizaron las
Animales
ganismos con clulas procariotas con lpidos de membra- transformaciones de la materia orgnica y mineral de los suelos, las interacciones de los microorganismos entre si y con
na con diacil dister de glicerol, mientras que los proca- los vegetales, con nfasis en dos importantes asociaciones simbiticas, las fijadoras de nitrgeno y las asociaciones con
Arqueobacterias Eucariotas Eubacterias riotas cuyas membranas estn compuestas por lpidos hongos micorrcicos.
isoprenoides del tipo diter de diglicerol o tetrater de di- En Procesos microbianos se agregaron temas vinculados a los procesos de biodegradacin de restos orgnicos, tanto
glecerol y ARNr arqueobacteriano comprenden el tercer aerobios como anaerobios que contribuyen a la conversin de materiales de deshecho de la industria lctea, de otras
Ancestro universal dominio, Archaea, que incluye a organismos termfilos, agroindustrias y de prcticas agrcolas, en productos que se usan como biofertilizantes y obtener efluentes de la indus-
anaerobios y acidfilos. tria sin carcter contaminante, contribuyendo a la proteccin ambiental. Otra temtica abordada en este segundo texto
Origen de la vida es la promocin del crecimiento vegetal, tanto en forma directa, por procesos microbianos de mineralizacin, oxido-
Parece probable que las clulas eucariotas modernas se reduccin, solubilizacin, fijacin, como por su contribucin a la eliminacin de microorganismos fitopatgenos por
Figura 3- Evolucin del mundo vivo basada en la originaron a partir de las procariotas hace unos 1.400 millo- mecanismos conocidos como Control Biolgico.
estructura del ARN de los ribosomas nes de aos. Los mecanismos no estn aun dilucidados. Finalmente, en el presente texto Microbiologa: bsica, ambiental y agrcola, adems de revisarse y actualizarse estos
temas, se entendi oportuno incorporar captulos dedicados a aspectos de Microbiologa General o Bsica, en el enten-
Aunque las eubacterias y las arqueobacterias son proca- Una de la hiptesis es la endosimbitica, que piensa que
dimiento de que muchas veces resulta dificultoso a los estudiantes de Agronoma, de Ciencias del Suelo o de Ciencias
riotas, desde un punto de vista evolutivo no estn ms la clula eucariota ancestral se pudo formar por la fusin
Ambientales, acceder a los excelentes textos que sobre el tema estn publicados.
estrechamente relacionadas entre si como lo estn con de antiguas eubacterias y arqueobacterias. Muchos auto-
Se continu una interesante experiencia de coordinacin realizada entre el 2000 y el 2002 por los docentes de Microbio-
los eucariotas. res consideran que Archaea y Eucarya estn ms relacio-
loga de las 7 Facultades de Uruguay que imparten conceptos de Microbiologa en la que se delimitaron los conceptos
nados de los que parece y proponen que la lnea eucariota
bsicos que deberan contener un curso comn de Microbiologa General, a aplicar en cada uno de esos centros, que
Las arqueobacterias (Archaeae) comprenden un grupo surgi de Archaea y luego se form el ncleo, posiblemen-
est disponible en CD. Sobre esta experiencia se desarrollaron los captulos del 1 al 7 del presente texto.
muy primitivo que incluye organismos halfitos y termfi- te a partir del aparato de Golgi. Las mitocondrias y los clo-
Otras temticas abordadas en este texto son el de Biorremediacin, o sea el tratamiento microbiolgico de situaciones
los extremos. Entre ellas se encuentran las bacterias me- roplastos parecen haber surgido con posterioridad.
de polucin graves, como las que lamentablemente nos tiene acostumbrados la prensa: derrames de petrleo, contami-
tanognicas, anaerobias estrictas. naciones por solventes, herbicidas, etc. y el de la aplicacin biotecnolgica de muchos microorganismos.
El eucariota ancestral fermentador de vida libre con su
El Anexo prctico contiene como en los textos anteriores, tcnicas bsicas para realizar experiencias sencillas y poner
Parecera que los tres grupos bacterianos surgieron tem- ncleo estableci relaciones simbiticas permanentes con
en evidencia los procesos microbiolgicos tratados en el texto.
prano en la historia de la tierra a partir de un organismo bacterias fotosintticas (cianobacterias) que evoluciona-
primitivo comn, el ancestro universal. ron hacia los cloroplastos. Eubacterias con respiracin
Por ltimo, se desea dedicar este texto a los estudiantes de distintas disciplinas: Agrcolas, Biolgicas, de Ciencias
aerobia (Agrobacterium, Rhizobium, rickettsias) seran los
Ambientales, Ciencias del Suelo, Bioqumica y Qumica, que sientan inters en adentrarse en el apasionante mundo de
Debido a que las clulas de los animales y de las plantas antecesores de las mipocondrias.
los microorganismos.
son eucariotas, se ha considerado en forma general que
han derivado de algn tipo de microorganismo, en tanto Esta teora endosimbitica ha sido avalada por el hallaz-
que los procariotas representan una rama que nunca su- go de una cianobacteria endosimbitica en un protozoo
per la etapa microbiana. diflagelado y que acta como su cloroplasto.
Los microorganismos en los alimentos y la industria
19 Fermentacin lctica y alcohlica. Aplicaciones biotecnolgicas ...................... 333 Bacteria Archaea Eukarya
20 Aplicaciones industriales de los microorganismos ............................................ 349
Los microorganismos y la proteccin ambiental Entamebas Hongos

Animales
Bacterias verdes
Euriarqueotas mucosos
no sulfurosas
21 Biotransformacin de residuos orgnicos ......................................................... 363 Hongos
Mitocondria
Crenarqueotas
Methano- Methanosarcina Plantas
22 Degradacin de xenobiticos ............................................................................ 383 Bacterias
bacterium
Halfilos
Bacterias rojas gram- Thermoproteus extremos
positivas Methano- Ciliados
23 Biorremediacin ................................................................................................ 397 Cloroplastos Pyrodictium coccus Thermoplasma
Anexo prctico ................................................................................................... 407 Cianobacterias Thermococcus
Flavobacterias Flagelados
Korarqueotas Methanopyrus
Tricomnadas
Thermotoga
Aquifex Microsporidios
Diplomnadas
(Giardia)
Figura 4- Bacteria, Archae y Eukarya
Es posible que nuevos datos ayuden a dilucidar este pro- Como las bacterias presentan aproximadamente un di-
ceso evolutivo. metro de 1 m, con los microscopios pticos slo se pue-
den apreciar la forma general y las caractersticas morfo-
lgicas principales, pero no se aprecian estructuras sub-
Tcnicas de estudio de los microorganismos
celulares.
La mayor limitacin en el estudio de los microorganismos
Se emplean tambin microscopios de contraste de fa-
lo constituye su pequeo tamao, la falta de fsiles y la
ses y los fluorescentes, que permiten distinguir estruc-
dificultad de muchos de los microorganismos para ser
turas en base al empleo de colorantes fluorescentes,
cultivados en el laboratorio. Sin embargo, los avances en
como el naranja de acridina, diacetato de fluorescena
los ltimos 100 aos fueron enormes y el cuadro 3 resu-
etc. Muchos de ellos se consideran colorantes vitales,
me algunos de los eventos ms importantes.
ya que fluorescen en luz ultravioleta luego de ser em-
pleados por enzimas celulares.
Microscopa
El microscopio marc un hito en los estudios, ya que
La estructura interna detallada de los microorganismos
hay que considerar que el ojo desnudo aprecia como
fue visible con el microscopio electrnico, desarrollado a
independientes a dos puntos separados por 0,1mm (po-
partir de la dcada del 30 del siglo XX y que presenta un
der separador) y el mejor microscopio ptico presenta
poder separador aproximadamente 1000 veces superior
un lmite de resolucin de 0,2 m y un aumento mximo
al del microscopio ptico y puede distinguir puntos sepa-
de 1.500-2000X, que resulta de multiplicar el aumento
rados por 0,5nm (aumento eficaz 100.000X). Se emplean
del ocular (10-20X) por el del objetivo (5, 10, 20 aumen-
los microscopios electrnicos de transmisin y de barrido
tos, los comunes y x 100, el objetivo de inmersin en
(figura 5).
aceite).
En general los microorganismos son fijados (frotis) y tei-

dos con colorantes cidos o bsicos a los efectos de au-
mentar su visibilidad y/o conservarlos para otros estudios.
Fijacin: se realiza en general secando suavemente el Tabla de contenidos

inculo sobre el portaobjeto a la llama y luego cortando
varias veces la llama con el preparado. El objetivo es con-
servar las estructuras lo ms intactas posibles antes de
su tincin. La fijacin puede realizarse con sustancias Prlogo .................................................................................................................. 7
qumicas, como el etanol, cido actico, formaldehdo, que
inactivan e insolubilizan molculas como los lpidos y pro- Los microorganismos: estructuras y funciones
tenas microbianas.
1 Introduccin a la Microbiologa .............................................................................. 9
Coloraciones: numerosos colorantes se emplean para
Figura 5- Microscpica electrnica. 2 Estructuras y funciones de las clulas eucariotas y procariotas. Los virus ......... 17
Izquierda: Rhizobium observado con microscopio electrnico facilitar la visualizacin de los microorganismos ms pe-
de transmisin, se aprecia la membrana y la pared celular , la queos, como las bacterias (figura 6). Presentan grupos 3 Nutricin y metabolismo bioenergtico en microorganismos .............................. 39
regin nuclear y gotas lipdicas (materiales de reserva). cromforos, con dobles enlaces que le dan el color carac-
terstico y adems se unen a estructuras celulares por 4 Crecimiento microbiano y su control. Efecto de factores ambientales ................ 65
Derecha: micrografa de Lactobacillus spp. con microscopa
electrnica de barrido. enlaces inicos, covalentes o hidrofbicos. Los coloran- 5 Gentica de mcroorganismos procariotas ........................................................... 85
tes bsicos, como el azul de metileno, la fucsina bsica,
el cristal violeta, la safranina, verde de malaquita, tienen 6 Taxonoma bacteriana y filogenia ........................................................................ 93
El primero permite visualizar estructuras dentro de la c-
grupos cargados positivamente que se unen a molculas 7 Los protistas superiores ................................................................................... 105
lula, as como caractersticas de la membrana y pared
cargadas negativamente, como los cidos nucleicos y
celular, por la diferencia de densidades al ser atravesa-
muchas protenas (superficies bacterianas). Los coloran-
das por un flujo acelerado de electrones. El de barrido Los microorganismos en los ciclos biogeoqumicos
tes cidos, como la eosina, rosa de Bengala y fucscina
muestra el relieve de superficies celulares ya que los elec-
cida son aninicos y se unen a grupos celulares carga-
trones se reflejan luego de chocar con una superficie me- 8 Ecologa microbiana y mtodos de estudio ....................................................... 117
dos positivamente.
tlica que recubre los preparados.
9 Ciclo biolgico del carbono ............................................................................... 137
Los microorganismos se pueden observar al microscopio
Tinciones luego de una tincin simple, es decir un solo colorante, 10 Ciclo biolgico del nitrgeno ............................................................................. 165
Los microorganismos vivos se pueden examinar directamen- por ejemplo con azul de metileno: se cubre el frotis con el
te con un microscopio ptico, prctica corriente en estudios colorante, por un tiempo prudencial, 1 minuto, se lava con 11 Fijacin biolgica del nitrgeno (FBN) .............................................................. 187
de morfologa de hongos, algas y protozoos (figura 6). agua, se seca y se observa. Permiten distinguir tamao, 12 Ciclos biolgicos del azufre, fsforo, hierro. ...................................................... 207
forma y organizacin de bacterias.
En el caso de las bacterias, dado su pequeo tamao y la
falta de contraste con el medio, esta tcnica de observa- Los mtodos de tincin diferencial permiten diferenciar Los microorganismos y sus interacciones
cin es menos usada. grupos bacterianos segn sus propiedades de tincin.
Ejemplo de estas es la tincin de Gram, que separa a 13 La rizosfera ........................................................................................................ 225
Sin embargo, es muy empleada para evidenciar la movili- bacterias Gram positivas (toman el primer colorante y lo
14 Interacciones entre microorganismos .............................................................. 237
dad bacteriana, con cultivos jvenes en medio lquido, en retienen y se ven violetas) y Gram negativas, que no re-
el microscopio ptico, ya que los flagelos son difciles de tienen el colorante violeta luego de lavado con etanol o 15 Fijacin biolgica de N2 en la rizosfera y en asociaciones nodulares ............... 249
observar aun con tinciones especiales. Se coloca una acetona y se colorean con el colorante de contraste, rosa-
16 Las micorrizas ................................................................................................... 285
gota de cultivo entre porta y cubre objeto o en portaobje- do, como la safranina.
tos especiales excavados, que se observan con baja lu- 17 Microorganismos promotores del crecimiento vegetal ...................................... 303
minosidad ya que existe poco contraste entre las clulas Existen otro grupo de tinciones que permiten visualizar es-
y el agua, lo que dificulta la observacin. tructuras como esporas, flagelos, materiales de reserva, etc. 18 Procesos microbianos en el rumen ................................................................... 317
Figura 6- Observaciones de microorganismos al microcopio ptico. Izquierda: algas al

estado fresco y derecha: bacilos luego de tincin
Otros mtodos de estudio de los microorganismos Preguntas de repaso

Numerosos mtodos son empleados para el estudio de
estructuras subcelulares de los microorganismos y para 1) Objeto de estudio de la Microbiologa
distinguir cepas bacterianas. Muchos de ellos son adap- 2) Disciplinas muy relacionadas a la microbiologa
taciones de tcnicas corrientes en biologa celular: colo-
3) Algunas de las especialidades en que se ha subdividi-
raciones diferenciales y observaciones microscpicas (ci-
do esta ciencia
toqumica), estudios enzimticos, evidencia de vas me-
tablicas y finalmente los mayores avances se realiza- 4) Concepto del trmino microorganismo y ejemplos de
ron por aplicacin de mtodos de biologa molecular. ellos
Muchos de ellos son descriptos en el captulo 8: Ecolo- 5) Por qu se dice que los microorganismos son muy
ga microbiana y en el Apndice prctico. buenas herramientas en estudios fisiolgicos, genti-
cos, enzimticos?
Como resumen, en el cuadro 3 se sealan algunos de 6) Por qu las bacterias estn tan distribuidas en la natu-
los descubrimientos ms importantes que contribuyeron raleza? Seale ambientes donde se las encuentra.
a la evolucin de la Microbiologa. 7) Cual fue el gran descubrimiento que permiti separar
2006 UNIVERSIDAD DE LA REPBLICA - FACULTAD DE AGRONOMA a los microorganismos en dos grandes grupos? Con
Reservados todos los derechos de la presente edicin para todos los pases. Este libro no se podr reproducir total o qu instrumento se logr este hallazgo?
parcialmente por ningn medio grfico, electrnico, digital, mecnico o cualquier otro, incluyendo los sistemas de Bibliografa
8) Diferencias entre bacteria, arquebacteria y eucariotas
fotocopia o fotoduplicacin, registro magnetofnico o de alimentacin de datos, sin expreso consentimiento de la
Facultad de Agronoma. Madigan, Martinko y Parker. Brock, Biologa de los mi- 9) Por qu resulta importante la tincin de los frotis bac-
croorganismos, 9. Edicin, 2000 Prentice Hall Inter- terianos antes de su observacin microscpica?
Contacto: lfrioni@fagro.edu.uy, Fax: 598 2 359 04 36 national 10) Por qu aun no se tiene certeza definitiva sobre la
Prescott, Harley, Klein, Microbiologa, 1999 McGraw-Hill evolucin del mundo microbiano? Qu herramientas
DEPOSITO LEGAL: 330.113/06 Interamericana resultan muy importantes de aplicar?
ISBN: 9974-0-0290-7
FOTOS DE TAPA: P. Izaguirre, Peltophorum dubium (Ibirapit) y Bauhinia foficata (Pata de vaca)
DISEO DE TAPA: Javier Santiago
DISEO, ARMADO E IMPRESIN: Departamento de Publicaciones de la Facultad de Agronoma, Universidad de la
Repblica Oriental del Uruguay. Avda. Garzn 780, 12900 Montevideo -URUGUAY
Cuadro 3- Breve historia de la Microbiologa
1660 Robert Hooke describe estructuras de hon- la enfermedad al inocularse en una planta o
gos animal sano
1632-1723 Anton van Leeuwwenhoek, Alemania, Debe poder reaislarse en cultivo puro a partir
publica dibujos de microorganismos vistos por del husped enfermo y reconocerse idntico al
un microscopio simple, con un solo lente (300 primer aislamiento
aumentos) 1886 Haeckel en Alemania: se propone el Reino
Siglo 19: Desarrollo de microscopios ms poten- de los Protistas. John Tyndall en Inglaterra, en-
tes, poder separador 0,2 mm dosporas resistentes al calor: tcnica de este-
Segunda mitad siglo 19: desarrollo acelerado de
la Microbiologa
Discusiones sobre dos temas fundamentales:
rilizacin por calor fraccionado (tindalizacin)
Ferdinand Cohn en Alemania: Mtodos de es-
terilizacin ms eficaces
Microbiologa:
Existe la generacin espontnea? 1928 Griffith: Descubrimiento de la transformacin bsica, ambiental y agrcola
Cal es la naturaleza de las enfermedades conta- 1933 Primer Microscopio electrnico de transmisin
giosas? 1953 Estructura doble hlice del ADN - Watson y
1822-1895 Luis Pasteur en Francia, determin la Crick
naturaleza microbiana de contaminaciones de 1977 Reconocimiento de Archeobacterias como
infusiones, el metabolismo anaerobio, la inmu- grupo
nizacin 1984 Desarrollo de la reaccin en cadena de la
1876 Robert Koch en Alemania: los microorganis- polimerasa
Lillian Frioni
mos como causantes de enfermedad del ga- 1986 Primera vacuna producida por Ingeniera
nado provocado por Bacillus anthracis (antrax) Gentica
Postulados de Koch 1996 Se obtiene la secuencia del genoma de Hae-
El microorganismos causal debe estar presen- mophilus influenzae
te en cada caso de enfermedad pero ausente Hasta la fecha han ocurrido innumerables
en organismos sanos avances en Biologa Molecular, Biotecnologa,
El agente infeccioso debe poder aislarse en incluida la secuenciacin del genoma huma-
cultivo puro no, a la que han contribuido los microorganis-
Debe ser capaz de reproducir los sntomas de mos.
Estructuras y funciones de las

2 clulas eucariotas y procariotas
Los virus
Organizacin de la clula procariota sume sus funciones principales y la figura 1 es un clsico
A pesar de su simplicidad se reconocen ciertas estructu- esquema de clulas procariota y eucariota, con sus com-
ras en la clula procariota. El cuadro 1 las describe y re- ponentes principales.
Cuadro 1- Estructuras en clulas procariotas
Estructuras permanentes
Pared celular Da forma a la clula y la protege de la lisis osmtica. Carcter antignico, permite el libre
pasaje de sustancias
Membrana citoplasmtica Barrera permeable selectiva, lmite de la clula, transporte activo y pasivo. Alberga
las enzimas de procesos metablicos importantes: respiracin, fotosntesis, seales
quimiotctiles
Citoplasma Solucin coloidal, agua, sales, protenas y dems componentes, con la membrana
forma el protoplasto
Espacio periplasmtico Entre la pared y la membrana, contiene enzimas hidrolticas y protenas para la
captacin de nutrientes
Nucleoide Molcula de ADN hiper enrrollada, material gentico principal
Plsmidos Molculas pequeas de ADN circulares, codifican informacin secundaria (resistencias)
Ribosomas Corpsculos de ARN-protenas encargados de la sntesis proteica, ms pequeos (70S)
que los eucariotas (80S)
Estructuras accesorias (dependen de la especie)
Cpsulas y capas mucosas Polisacridos y/o protenas, resistencia a la fagocitosis, adhesin a superficies
Fimbrias y pilis Cuerpos proteicos, fijacin a superficies, conjugacin bacteriana
Flagelos Protenas, movimiento, con carcter taxonmico

Endosporas Estructuras de resistencia a altas temperaturas, radiaciones, etc.
Vacuolas de gas Permite la flotacin en clulas acuticas
Inclusiones citoplasmticas Sin membrana, o con membrana no unitaria, en el citoplasma, fenoxialcanos (c.poli -OH
butrico, poli-fosfatos, S, etc.)
membrana
membrana ribosomas pared
retculo
pared
regin nuclear mitocondrias
ncleo
Figura 1- Esquemas de clulas procariotas y eucariotas
Estructuras permanentes En la figura 2 se observan estas diferencias en la pared

(de afuera hacia adentro de la clula) de ambos tipos de clulas y en la figura 3 se aprecia la
estructura de esta singular molcula.
Pared celular
Constituye la parte ms importante de la clula procariota La pared de una clula Gram positiva est formada por
ya que salvo algunos micoplasmas y arqueobacterias, pa- una gruesa capa de unos 20 a 80 nm de espesor, en ge-
rsitas intracelulares, todas las otras bacterias presentan neral formado por una nica molcula de peptidoglicano
esta barrera de proteccin contra el ambiente, sin la cual o murena, (figura 2), ubicada por fuera de la membrana
las clulas sufriran lisis osmtica en ambientes en general celular. Esta molcula que no aparece en las clulas eu-
hipo o hipertnicos (suelos, agua, organismos). En 1884, cariotas, est formada por una malla de polmeros de dos
Christian Gram desarroll la tincin que lleva su nombre y aminoazcares: N-acetil-glucosamina (NAG) y de cido
desde entonces, las bacterias se clasifican en dos grupos N-acetil murmico (NAM) unidas por enlaces glucosdi-
importantes: Gram negativas y Gram positivas. cos hidrolizados por una enzima conocida como lisozima,
contenida en las lgrimas, saliva (mecanismos de defen-
La diferencia estructural entre ambos grupos se puso de sa primaria contra infecciones microbianas (cuadro 3).
manifiesto con el microscopio electrnico de transmisin,
a mediados del siglo pasado. El cuadro 2 resume las La malla se fortalece aun ms con enlaces peptdicos, en
diferencias. general en cadenas de 4 aminocidos, tres de los cuales
Cuadro 2- Superficies celulares en clulas Gram positivas y Gram negativas
Gram positivas: la pared celular posee gruesa capa de peptidoglicano que retiene el colorante especfico (violeta)
Gram negativas: la pared celular presenta capa fina de peptidoglicano y una membrana externa y no retiene el colorante. Se
colorean con el segundo colorante, de rosado
Archeae: no presentan peptidoglicano tpico, su tincin es Gram positiva o negativa
Periplasma: espacio entre membrana externa de la pared celular y la membrana citoplasmtica, contiene numerosas protenas
hidrolticas
Cuadro 2- Macronutrientes en la naturaleza y en los medios de cultivo

Gram+ peptidoglicano Gram-
peptidoglicano
Elemento Forma habitual Forma qumica usada en
en el ambiente los medios de cultivo
Carbono (C) CO2, compuestos orgnicos Glucosa, malato, acetato, piruvato, muchos
compuestos o mezclas de compuestos (extracto de
levadura, peptonas, celulosa, petrleo,etc)
Hidrgeno (H) H2O, compuestos orgnicos H2O, compuestos orgnicos membrana
membrana
Oxgeno (O) H2O, compuestos orgnicos H2O, compuestos orgnicos perimembrana
-
Nitrgeno (N) NH3, NO3 , N2, compuestos Inorgnicos: sales amoniacales, ntricas, N2 lipopolisacrido y protena
orgnicos con N, peptonas, etc. Orgnicas: aminocidos, bases nitrogenadas de
nucletidos, numerosos compuestos orgnicos con N Figura 2- Tipos de paredes procariotas
-3
Fsforo (P) PO4 KH2PO4, Na2HPO4
glucano

= -G-M-G- G-M-G red Gram positiva son los cidos teicoicos (polmeros de
Azufre (S) H2S, SO4 , sulfuros metlicos, Na2SO4, S2O3Na2, Na2S, compuestos orgnicos con S
L-ala glicerol y ribitol unidos por grupo fosfato). Aminocidos
compuestos orgnicos con S: peptonas
pptidos L-ala como la D-alanina y azcares como la glucosa se pueden
Potasio (K) K+, sales solubles KCl, KH2PO4 D-glu unir a los grupos glicerol o ribitol y al peptidoglicano por
Magnesio (Mg) Mg++, en solucin o como sales MgCl2, MgSO4 puente D-glu-NH2 enlaces covalentes con el OH seis del cido N-acetil
Sodio (Na) Na+ en solucin o como NaCl DAP D-ala cruzado murmico o a los lpidos de la membrana citoplasmtica

NaCl u otras sales de sodio L-lis (se denominan entonces cidos lipoteicoicos) Estn car-
D-ala DAP gli gados negativamente y contribuyen con esas cargas a
Calcio (Ca) Ca++ en solucin o como CaCl2
D-ala gli estabilizar la pared Gram positiva. No estn presentes en
CaSO4 u otras sales
D-glu gli bacterias Gram negativas y sus funciones no estn aun
Hierro (Fe) Fe++ o Fe+++ en solucin como FeS, FeCl3, FeSO4, soluciones de Fe quelatado con EDTA, o gli dilucidadas.
Fe(OH)2 u otras sales de Fe citrato, etc.
D-ala gli
Cuadro 3- Caractersticas del peptidoglicano
Cuadro 3- Composicin qumica media de una clula procariota -G-M-G- D-ala
* Cadenas de glicano
Molcula % peso seco molculas por clula clases diferentes a) Escherichia coli b) Staphylococcus L-lis - polmeros lineares de N-acetilglucosamina (NAG)
Total de macromolculas 96 24.610.000 2.500 (G- ) aureus(G+) y cido N-acetil murmico (NAM)
D-glu-NH2 - hidrlisis por lisozima
Protenas 55 2.350.000 1.850
* Entrecruzamiento peptdico
Polisacridos 5 4.300 2 L-ala - unin al cido N-acetil murmico
Lpidos 9,1 22.000.000 4 - contiene D y L aminocidos, inhibicin por anti-
-G-M-G biticos lactmicos (penicilina)
ADN 3,4 2,1 1
* Funciones
ARN 20,5 255.500 660 Figura 3- Esquema de la molcula de peptidoglicano - confiere forma a la clula, previene la lisis osm-
Total de monmeros 3,5 350 tica
Aminoc.y precursores 0,5 100 (cido D-glutmico, D-alanina y cido meso-diaminopim- - su porosidad permite el pasaje de nutrientes
lico) no estn presentes en las protenas. La cadena pep-
Azcares y precursores 2 50
tdica de 4 aminocidos D y L alternados se conecta a un La pared de una clula Gram negativa (figura 2) es ms
Nucletidos y precursores 0,5 200 grupo carboxilo del cido N-acetilmurmico (figura 4). compleja, con capa de 2 a 7 nm de grosor formada por
Iones inorgnicos 1 18 peptidoglicano (5-10% del peso total de la pared) y se
La penicilina acta inhibiendo la incorporacin de los ami- presenta en forma de gel, ms que como una capa com-
total 100%
nocidos al peptidoglicano. Otros componentes de la pa- pacta. Luego se encuentra la llamada membrana externa
de 7-8 nm constituida por lipopolisacridos (LPS) con li- La cadena O (antgeno O) est formada por una cadena de
poprotenas en la cara interna. Algunas de stas, llama- polisacrido que se extiende hacia fuera y su composicin
das porinas, forman canales de entrada y salida de sus- vara con la cepa considerada y son reconocidos por anti-
tancias de bajo peso molecular. cuerpos del husped. Pueden mutar con gran facilidad.
Nutricin y metabolismo
Otra estructura que pueda dar resistencia a la pared Gram
negativa es la zona de adhesin. La membrana externa y
la citoplasmtica estn en contacto directo en muchos lu-
gares (fusin de membranas), por donde pueden pasar
Los LPS son importantes ya que protegen al resto de los
componentes de la pared frente a un ataque directo del
husped, brindan carga negativa a la superficie celular. El
lpido A es a menudo txico, de modo que el LPS puede
3 bioenergtico en microorganismos
sustancias hacia el interior de la clula. Entre la membra- actuar como una endotoxina y provocar algunos de los sn-
na interna y la pared celular (tambin llamada membrana tomas de las infecciones por bacterias Gram negativas.
externa) se encuentra un espacio conocido como peri- Nutricin microbiana Cuadro 1- Nutrientes microbianos
plasma, con muchas protenas hidrolticas. Una bacteria Gram negativa resiste ms la lisis osmtica
cuando la clula se trata con lisozima, enzima que hidro- Los microorganismos requieren nutrientes, sustancias 1- Fuentes de energa
El cuadro 4 compara ambos tipos de paredes bacterianas. liza los enlaces 1-4 del peptidoglicano por mantener la qumicas que estimulan el crecimiento microbiano y que (luz fototrofos)
envoltura formada por la capa externa (forman esferoplas- (reacciones qumicas quimiotrofos)
son empleadas en la sntesis de sus materiales celulares
Cuadro 4- Comparaciones entra ambos tipos de tos en medio isotnico), el peptidoglicano representa slo y que tambin brindan energa, a los efectos de realizar
paredes procariotas un 15-20% del peso seco de sus paredes. En una clula sus procesos metablicos, dividirse, moverse, esporular. 2. Macronutrientes
Gram + cuya pared est formada en un 80% por peptido- La sntesis de sus macromolculas, as como la obten- C K
Gram positiva glicano, los protoplastos esfricos formados en medio iso- cin de energa en los microorganismos quimiosintticos, H Mg
Puede presentar ms de 30 capas de peptidoglicano, tnico, estallan al pasar a un medio hipotnico (plasmop- O 95% Na
deben ser realizadas a partir de los nutrientes.
son altamente sensibles a antibiticos -lactmicos (pe- tisis) (captulo 4). N Ca
nicilina) S Fe
Las caractersticas que debe presentar un nutriente incluyen: P
Acidos teicoicos: le confieren carga negativa a la pared Las paredes de los microorganismos eucariotas cuando i) atravesar las barreras de la clula (membranas)
(ribitol o glicerol fosfato) estn presentes (hongos, algunas algas y protozoos) son 2. Micronutrientes (elementos traza)
ii) ser utilizado por alguna enzima celular
Acidos lipoprotecos: fijan la pared a la membrana plas- ms simples, formadas por polmeros de una misma subu- Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, B, etc.
iii) brindarle a la misma sub-unidades de sus macromol-
mtica nidad, como la celulosa, quitina, a veces mineral, con sli- culas y/o energa. 3- Factores de crecimiento
Gram negativa ce como en las diatomeas (cuadro 5). vitaminas coenzimas
Membrana externa: capa externa con lipopolisa- purinas y pirimidinas ADN, ARN
cridos (LPS), interna unida al peptidoglicano por Cuadro 5 - Resumen de los constituyentes Los elementos como nutrientes aminocidos esenciales sntesis proteica
lipoprotenas principales de las paredes microbianas
Porinas, protenas que permiten pasaje de pequeas La clula microbiana est constituida por agua en su mayor endosporas. El Mg forma complejos con el ATP y el Fe
molculas al periplasma Tipo de Clula Constituyentes parte y de la fraccin materia seca se distinguen los macro- forma parte de citocromos, es cofactor de enzimas y de
Protenas de enlace periplsmicas que unen nutrien- Procariota elementos: C, O, H, N, S, P, K, Ca, Mg, Fe, que la clula protenas transportadoras de electrones.
tes, interactan con protenas de transporte en la mem- eubacterias
toma en cantidades relativamente grandes (g/L en el me-
brana facilitando ingreso de nutrientes. G+ ptidoglicano, cidos teicoicos
dio de cultivo), mientras que los llamados micronutrientes El cuadro 2 resume los ingredientes fundamentales para
G- pptidoglicano y lipopolisacrido
se requieren en niveles muy bajos, del orden de los mg/L. el desarrollo de los organismos vivos y las formas qumi-
Los lipopolisacridos (LPS) son importantes componen- arqueobacterias pseudopeptidoglicano, glucopro- cas en que los microorganismos pueden tomarlos en la
tes de la pared Gram negativa, estn formados por lpi- tena polisacrido, protena El cuadro 1 presenta los distintos tipos de nutrientes re- naturaleza y en los medios de cultivo. El cuadro 3 presen-
dos e hidratos de carbono: 1) lpido A; 2) polisacrido cen- queridos para el desarrollo microbiano. ta la composicin media de una clula bacteriana.
tral y 3) cadena lateral (O). El lpido A contiene derivados Eucariota
algas celulosa, hemicelulosa, pectinas,
del azcar glucosamina y est unido a cidos grasos y Los 6 primeros macronutrientes integran importantes mo- Los microorganismos tambin requieren oligoelementos
slice (algunas)
fosfatos o polifostatos y se encuentra inmerso en la mem- hongos quitina, otros polisacridos, celu- lculas (hidratos de carbono, lpidos, protenas, cidos o micronutrientes, empleados en los medios en menor
brana externa. El resto de la molcula de LPS sobresale losa (en algunos) nuclecos), los restantes se encuentran en forma de ca- concentracin (mg/L), como el Mn, Zn, Co, Mo, Ni, Cu,
de la superficie. El polisacrido central (core) est unido protozoos ninguno o slice, carbonato de calcio tiones y pueden actuar como coenzimas de muchas enzi- etc.). A veces los contaminantes del agua, recipientes del
al lpido A. mas (K+). El Ca contribuye a la termoresistencia de las laboratorio, alcanzan a satisfacer las necesidades en es
las clulas que poseen la capacidad latente de producir Prescot, Harley, Klein, Microbiologa, 1999 McGraw- Membrana citoplasmtica y citoplasma la fijacin qumica para la observacin en el microscopio
partculas maduras de fago, se llaman lisognicas. Hill.Interamericana La membrana citoplasmtica est presente en clulas pro- electrnico. Pero como se aprecian tambin con otras tc-
Schlegel, H. G. y B. Bowien Autotrophic bacteria. 1989 cariotas y eucariotas, es responsable de su relacin con nicas como la criofractura celular, se piensa que partici-
Los fagos que realizan esta interaccin se dicen tempe- Science Tech. Publ, Madison, Wis el ambiente y es la barrera osmtica de la clula. Su com- pan en funciones relacionadas a la formacin de pared,
rados y el genoma viral en una clula lisognica se de- Stanier, R.Y., J.L. Ingraham, M.L. Wheelis, P.R. Painter posicin es lipoproteica, similar en todos los sistemas bio- en la replicacin del cromosoma procariota y su posterior
nomina profago. Parece que los bacterifagos encuen- The microbial world. 5t edicin, 1986 Prentice Hall, lgicos por lo que se la denomina membrana universal o distribucin en clulas hijas.
tran ventajas al lisogenizar clulas, cuando existe priva- Englewood Cliffs, N. J. unitaria, presenta un espesor de unas 5 a 10 nm.
cin de nutrientes antes de que las bacterias entren en Material gentico
inactividad degradan sus propios mARN y sus prote- La mayora de los lpidos son asimtricos y las porciones La gran diferencia entre clulas pro y eucariotas lo constitu-
nas. Esta situacin complicada puede evitarse si el fago Preguntas de repaso polares son hidrfilas e interactan con el agua, los extre- ye la organizacin del material gentico. Las procariotas
se vuelve inactivo (lisognico), al mismo tiempo que su mos no polares, o hidfobos son insolubles en agua y tien- carecen de ncleo tpico, rodeado por membrana. La ma-
husped. Cuando existe infeccin por multiplicidad de 1) Describa la estructura y la funcin de una clula bacteria- den a asociarse entre si, propiedades que les permite for- yor parte del ADN de una bacteria est constituido por una
fagos y todas las clulas estn infectadas, el ltimo ciclo na, indicando cuales de ellas estn presentes en todas mar las bicapas en las membranas. La nica diferencia sola molcula de ADN, de doble cadena, muy enrollada (fi-
de multiplicacin celular destruye todas las clulas del las bacterias y cuales solamente en algunas especies. encontrada entre membranas de clulas eu y procariotas gura 4) (Prescott et al., 1999). El material claro a los elec-
husped. Existe el riesgo de que los virus se queden sin 2) Cmo puede obtener nutrientes solubles desde el en que las ltimas carecen de esteroles como el coleste- trones es el ADN.
el husped y se encuentren expuestos a factores noci- ambiente? Y las partculas de gran tamao? rol, aunque se detectaron molculas pentacclicas, simi- Membrana plasmtica
vos del ambiente. 3) Compare la estructura y la composicin qumica de lares al esterol, llamadas hopanoides, sintetizados a par-
paredes de bacterias Gram positivas y negativas tir de los mismos precursores que los esteroides. Estos Ribosomas
Cuerpo de
La mayora de los fagos temperados existen como profa- 4) Describa el material gentico presente en una clula compuestos estabilizan la membrana bacteriana. inclusin
gos integrados en la bacteria lisognica. Pero algunos, procariota de PHB
como el fago P1 de E. coli se circulariza luego de la infec- 5) Polmeros acumulados fuera de la clula: composicin La membrana de las arqueobacterias difiere en composi-
cin y comienza a fabricar el represor que impide la activi- y funcin. Usos que hace el hombre de ellos. Polme- cin con las de las eubacterias: los lpidos poseen enla-
dad de la ARN polimerasa y la sntesis de protenas, se ros de reserva internos. ces ter en lugar de steres para unir los cidos grasos al
mantiene como molcula independiente y se replica al 6) Apndices celulares: comparacin con los presenta- glicerol y en lugar de los cidos grasos poseen compues-
Nucleoide
mismo tiempo que el cromosoma del husped. dos en eucariotas. Funcin de ellos tos derivados del hidrocarburo isopreno lo que le confiere
7) Qu propiedades adquieren las clulas esporuladas? propiedades diferentes a las del resto de los organismos. Mesosoma
Pared celular
Cuando E. coli se divide, el ADN del fago se reparte en las Por qu la esporulacin se considera una especie de Poseen una monocapa lipdica en lugar de una bicapa y
Figura 4- Microfotografa de clula procariota
clulas hijas, de modo que todas las clulas lisogeniza- ciclo celular? estn adaptadas a condiciones extremas.
das contienen una o dos copias del genoma fgico. 8) Por qu una bacteria no puede mantener endosim-
biontes? El citoplasma de clulas procariotas est constituido por Se habla de nucleoide, falso ncleo, o regin nuclear.
La lisogenia es un importante mecanismo de transfe- 9) Formas de divisin celular de un procariota. la matriz citoplasmtica, compuesta fundamentalmente por Muchas veces se lo menciona como "cromosoma bacte-
rencia de material gentico en procariotes, ya que al- 10) Cmo se explica que las bacterias colonicen ambien- agua (70%) y se presenta empaquetado con gran nme- riano" con la salvedad de que su estructura no es la de un
guno de los virus puede encapsular trozos del ADN de tes tan extremos (aguas termales, materiales en ferro de ribosomas, partculas esfricas formadas por pro- cromosoma eucariota. Esta molcula cerrada, circular, pue-
la clula infectada (defectuoso) y transferirlo a una c- mentacin, glaciares? tenas y ARN y responsables de la sntesis proteica. Son de apreciarse a veces unido al mesosoma o a la membra-
lula receptora por mecanismo conocido como trans- 11) Seale dos momentos en la evolucin de la ciencia de menor tamao que los de los eucariotas (70S en lugar na citoplasmtica. Contiene un 60% de ADN, algo de ARN
duccin (captulo 5). que contribuyeron marcadamente al conocimiento del de 80S). Sin embargo, los organismos eucariotas presen- y una pequea cantidad de protenas, diferentes a las his-
mundo microbiano. tan ribosomas del tipo bacteriano en sus organelos (mito- tonas de la clula eucariota y que facilitan su enrollamiento
12)Seale tres diferencias fundamentales entre ambos condrias, cloroplastos). (en Escherichia coli, bacilo de 2-6 m de longitud, el ADN
Bibliografa tipos celulares y sus consecuencias en su funciona- mide aproximadamente 1.400 m, lo que muestra el grado
miento. El citoplasma bacteriano no presenta organelos membra- de enrollamiento de la molcula en el citoplasma).
Madigan, Martinko y Parker, Brock, Biologa de los mi- 13)Cmo pondra en evidencia la presencia de bacteri- nosos complejos como mitocondrias y cloroplastos, se
croorganismos, 9 edicin, 2000, Prentice Hall Inter- fagos para bacterias entricas (E.coli, Salmonella) en aprecian a veces estructuras membranosas, como los En procariotas de vida libre contiene unas 1-6 X 106 pares
national muestras de aguas? mesosomas. Constituyen invaginaciones de la membra- de bases (pb), con 1000 a 5000 genes. El cromosoma
na plasmtica en forma de tbulos, pliegues, vesculas y bacteriano presenta genes esenciales para la vida celu-
son ms evidentes en bacterias Gram positivas. Algunos lar, sntesis de ribosomas, ARN mensajeros, enzimas
investigadores piensan que son artefactos generados por metablicas.
Plsmidos: pueden presentarse una o ms molculas

pequeas de ADN en el citoplasma que llevan informa-
cin no vital para la clula, como resistencias a antibiti- Fagos
cos, pesticidas, metales pesados, que pueden perderse y
transferir las resistencias a clulas sensibles que se con-
vierten en resistentes. Son tambin responsables de la
transferencia de material gentico de una clula a otra,
Bacterias
en la conjugacin y son muy empleados en prcticas de
ingeniera gentica.
Como material gentico adicional pueden encontrarse en

la clula procariota fagos temperados (lisognicos) y
transposones, fragmentos de ADN de pocas pares de
bases, mviles en la clula y que pueden insertarse en Figura 21- Seguimiento de un ciclo ltico de un bacterifago
distintos lugares del ADN del nucleoide o de los plsmi-
dos (captulo 5). sola partcula fgica, todos los derivados de l seran ge- rango de los huspedes y relaciones inmunolgicas, pero
nticamente idnticos. Los eventos ilustran una curva de las ms tiles son la morfologa, naturaleza del cido
Estructuras accesorias crecimiento de un solo paso. Se repica la playa de lisis en nucleico y de la cpside. Los virus que atacan bacterias
(del exterior al interior de la clula) Figura 5- Polisacridos extracelulares medio de cultivo bacteriano fresco. presentan en general ADN, habitualmente de doble ca-
Cpsulas y capas mucosas dena, presentan estructura icosadrica (20 caras en la
Constituyen deposiciones de materiales altamente polime- protena de la cpsula), sin cola, o virus con colas con-
rizados, hidratos de carbono, pptidos, que la clula libera haces de fibrillas de protenas entrelazadas y un haz central.
Son estructuras delgadas, rgidas de unos 20 nm de ancho y trctiles, fagos filamentosos. Hay incluso algunos con
al medio cuando las fuentes exceden a las necesidades de una envoltura lipdica ms externa. Los ms conocidos
la clula. Las clulas encapsuladas son resistentes a la fa- hasta 15-20 m de largo. Deben observarse en microscopio
de campo claro, o teirse con tcnicas especiales para au- y de estructura ms compleja son los fagos con colas
gocitosis por protozoos o glbulos blancos, en el caso de contrctiles, como los fagos conocidos como los de la
los patgenos del hombre. Tambin evita la desecacin de mentar su espesor. La estructura detallada slo se aprecia
en microscopa electrnica (figura 6) (Madigan et al., 2000). serie T de E. coli (figura 22).
las clulas y el ataque por bacterifagos y sustancias txi-
cas y colabora en la adhesin de las clulas a superficies
slidas, en el mar o a superficies de tejidos en huspedes Lisogenia
animales o vegetales (figura 5) (Madigan et al., 2000). Muchos bacterifagos a pesar de poder lisar a las clulas
del husped, ejercen efectos menos drsticos. Son los
Cuando esta capa externa est bien organizada y no se llamados virus temperados que pueden entrar en un
lava fcilmente, se habla de cpsula. Si el material es di- estado llamado lisogenia, donde la mayora de los genes
fuso y se elimina fcilmente se denomina capa mucosa. virales no se expresan. En gran parte de las clulas de la
El trmino gliocalix designa a ambas estructuras. Muchas progenie no se forman protenas virales, muchos de los
bacterias G+ y G- y algunas arqueobacterias presentan genes virales se han reprimido y su genoma es replicado
una capa externa muy organizada llamada capa S, for- Figura 22- Microfotografa electrnica de E. coli infectada por sincrnicamente con el genoma del husped, duplicn-
mada por protenas y glucoprotenas. El de las G- se ad- el fago T4. Se observan las placas basales y los tubos dose en la divisin celular, pasando de una generacin a
hiere directamente a la membrana externa, en las G+ a la proteicos de la cola otra por largos perodos de tiempo. Las clulas parecen
superficie del peptidoglicano. Puede proteger a la clula perfectamente normales.
de cambios en el pH, fuerza inica, enzimas o parsitos Los virus que atacan animales se repican en frascos con
microbianos y facilita la adhesin a superficies slidas. una monocapa de clulas animales. Las placas se reve- Pero esta bacteria, en ciertas condiciones puede espont-
lan por las zonas de destruccin de esas clulas. neamente o por agentes mutagnicos, como radiaciones
Apndices citoplasmticos UV, producir viriones del virus temperado y lisar a la clula
Las bacterias se mueven por flagelos, de estructura ms sim- Clasificacin de los fagos: no se han desarrollado re- portadora. La clula se lisa y libera los viriones maduros.
ple que los de las clulas eucariotas. Estn formados por 3 Figura 6- Flagelos bacterianos laciones filogenticas y se aplican propiedades como el Esta relacin virus-husped se conoce como lisogenia y
virus
adhesin gancho filamento
ADN monotrico
clula husped
lofotrico
inyeccin anillo L
membrana externa
ciclo ltico ciclo lisognico
peptidoglicano anfitrico
anillo S anillo P
replicacin membrana citoplasmtica
ADN viral
protenas del anillo M
integracin del
virus y unin ADN de virus
con el ADN induccin Figura 7- Esquema de la estructura de un flagelo bacteriano
clula lisogenizada
peritrico
La figura 7 muestra la ultraestructura del flagelo bacteria- Figura 8- Ubicacin de los flagelos en la clula bacteriana
divisin no, con la parte ms larga, el filamento, el gancho de an-
lisis celular
claje a la clula y el cuerpo basal, embebido en la clula. corridas y vueltas controladas por quimioatrayentes y
En bacterias G- se presentan en este cuerpo basal 4 ani- repelentes
llos unidos por una varilla central: el L y P se asocian con
induccin lisognica crecimiento normal el lipopolisacrido de la membrana externa y el peptido- Las fimbrias son apndices similares a los flagelos, pero
glicano, respectivamente y el anillo interno M se contacta ms cortos y ms abundantes (figura 9) (Madigan et al.,
Figura 20- Ciclos lticos y lisognico de un bacterifago con la membrana plasmtica y el gancho, que es un seg- 2000), no son responsables del desplazamiento celular
mento curvo y corto que une el filamento al cuerpo basal, sino que sirven para adherir a la clula a superficies sli-
mente relacionados, se pueden producir molculas re- Si bien pueden observarse en el microscopio electrnico, acoplndolo. En bacterias G+ se presentan slo dos ani- das. Los pelos son estructuras semejantes a las fimbrias
combinantes de ADN fgico. sta resulta una tarea larga y tediosa. En general se cuan- llos, uno interno relacionado a membrana plasmtica y pero ms largos, se encuentran pocos en la superficie
tifican midiendo sus efectos sobre las clulas bacterianas otro externo, vinculado al peptidoglicano. celular y estn relacionados a la transferencia de material
maduracin, luego que la replicacin del ADN del fago que atacan. Se habla de unidades infecciosas virales:
La flagelina es una protena flexible cuyo PM vara entre gentico (plsmidos, segmentos del cromosoma) y en ese
comienza, la parte no transcripta es usada para gober- la mnima cantidad que causa efecto detectable sobre un
30 y 60.000. Algunas bacterias poseen una envoltura de caso se llaman pelos sexuales o pili.
nar la sntesis del mARN viral tardo con la consiguien- husped sensible.
te formacin de un segundo grupo de protenas, entre lipopolisacrido por fuera, como Vibrio cholerae. Mutan-
ellas las subunidades de la cpside. Simultneamen- tes de bacterias con flagelos rectos o con regiones del
Recuento en caja: se siembran juntas diluciones del vi-
te, las molculas del ADN viral sufren condensacin gancho anormalmente largas, no pueden nadar.
rus con un cultivo bacteriano sensible al mismo en medio
tomando forma polihdrica. slido adecuado para el husped. Se observan las llama- Su presencia y distribucin en la clula tiene carcter taxo-
liberacin de viriones maduros: al final del perodo das playas o placas de lisis: zona de inhibicin del cre- nmico: monotricos (un flagelo), anfitricos (a ambos la-
latente de infeccin ltica, otra protena viral tarda cimiento bacteriano causado por la liberacin sucesiva de dos), lofotricos (grupos de flagelos en uno o ambos extre-
aparece en la clula: la lisozima que ataca al peptido- ciclos virales lticos (anticolonias). mos), peritricos (alrededor de la clula) (figura 8).
glicano de la pared celular, la que va siendo debilitada
hasta su ruptura por la presin osmtica interna. La Los resultados se expresan como unidades formadoras Los mecanismos de accin flagelar son provocados por:
progenie fgica se libera al ambiente con los otros cons- de playas/mL. El agregado de un filtrado bacterilogico
(0,45 m) de suelo, aguas, cultivos microbianos a un me- rotacin de los anillos en el cuerpo basal, estara dirigi- Figura 9- Fimbrias y pili en bacterias
tituyentes celulares. La figura 25 muestra los ciclos lti-
dio de cultivo lquido de una especie bacteriana sensible, do por gradiente de protones
cos y lisognicos
provocar desaparicin de la turbidez (los restos de las Inclusiones citoplasmticas
rotacin antihoraria que produce movimiento hacia de-
Seguimiento del ciclo ltico de un fago clulas lisadas se acumulan en el fondo del tubo). Materiales orgnicos e inorgnicos, visibles a veces al
lante, con corridas
La figura 21 esquematiza el procedimiento a seguir para microscopio de luz se encuentran en la matriz citoplas-
evidenciar la presencia de partculas de bacterifagos y Este mtodo permite tambin el aislamiento de partculas rotacin horaria que causa cese del movimiento hacia mtica. La clula almacena polmeros para evitar las con-
tambin para realizar su recuento (partculas virales/mL). vricas, ya que se supone que cada playa deriva de una delante, con vueltas de la clula secuencias de altas presiones osmticas que le ocasio-
naran lisis celular o cambios bruscos de pH. Algunos in- El PHB es un polmero con molculas de -hidroxibutirato de adsorcin: el ciclo ltico comienza cuando una par- fase de eclipse con dos etapas:
clusiones estn rodeadas por una membrana no unitaria unidas por enlaces ster entre los grupos carboxilo e hidroxi- tcula fgica tiene posibilidad de colisionar con una * formacin de protenas tempranas: el virus dentro de
de una sola capa de unos 2-4 nm de espesor (azufre, allo de molculas adyacentes (figura 10 a). En general se ob- clula husped; si el virin posee un sitio de adsor- la clula deja de existir como entidad independiente,
gunos de glicgeno, carboxisomas y vesculas de gas). servan en coloraciones al microscopio ptico, y estn formacin qumicamente complementario de un sitio recep- se dice que entra en fase vegetativa y se habla de
Se distinguen (figura 10) (Madigan et al., 2000): dos por una sola molcula por clula, evitando la lisis osm- tor de la superficie celular, ocurre una adsorcin irre- fago vegetativo. Parte del ADN viral es transcripto por
tica por acumulacin de molculas monomricas (alta pre- versible. Estos receptores se encuentran en bacte- ARN polimerasa del husped para formar ARN men-
grnulos de almacenamiento-polifosfato, fenoxialcanos, sin osmtica) y la elevacin del pH por los grupos COOH rias G- en la capa externa lipoproteica de la pared o sajero viral. Los ribosomas del husped traducen este
como el cido -OH butrico (PHB), principal material terminales, que en el polmero se neutralizan por unin ster bien a nivel de la capa lipopolisacrida. Para algunos mARN y forman nuevas enzimas (las tempranas), in-
carbonado de reserva de las clulas procariotas, azu- con grupos hidroxilos. El glicgeno se dispersa ms unifor- fagos el receptor se encuentra en los apndices, fla- cluyendo las necesarias para la replicacin del ADN
fre en bacterias fotosintticas anoxignicas memente en la matriz en grnulos ms pequeos y a veces gelos o pili. viral y una nueva ADN polimerasa y desoxirribonuclea-
vesculas de gas, para la flotacin slo se los aprecia en el microscopio electrnico. sa que destruye el ADN del husped.
la fijacin y penetracin: se realiza por las fibras de la * replicacin del ADN del fago: la de una molcula de
membranas que albergan pigmentos fotosintticos y Las cianobacterias acumulan grnulos de cianoficina, cola y una enzima (la lisozima) comienza a actuar, rom- ADN circular puede ocurrir de dos maneras: en el mo-
enzimas respiratorias polipptidos grandes con cantidades iguales de dos ami- piendo los enlaces glucosdicos del peptidoglicano. Lue- delo simtrico, las dos cadenas tienen igual papel,
nocidos: arginina y cido asprtico. Se pueden ver con go el bacterifago inyecta su ADN en la clula median- mientras que en el modelo asimtrico, una cadena no
c el microscopio de luz y se forman ante exceso de nitrge- te una contraccin de las fibras de la cola, quedando se rompe y la otra se hace lineal. En fagos con ADN
no en el medio. Los carboxisomas se presentan como po- afuera el resto del virin (cabeza y cola). monocatenario, ste es rpidamente convertido en
lmeros en forma de grnulos de unos 100 nm de dime- Se comprob radioqumicamente que slo el ADN pe- doble hlice por una ADN polimerasa bacteriana.
tro y se encuentran en algunas cianobacterias, bacterias netra en la clula, marcndolo con P32 (la radioactivi-
auttrofas como las nitrificantes y los thiobacilos. Consti- dad del ADN viral queda en las bacterias); las prote- Las molculas de ADN pueden sufrir mutaciones con
PHB tuyen una reserva de la enzima ribulosa 1-5 bifosfato car- nas, marcadas con S34, se detectaron fuera de las c- ruptura y unin de pares de bases; si la bacteria estu-
boxilasa y pueden ser el lugar de la fijacin del CO2. lulas (figura 20) (Madigan et al., 2000). viera infectada por dos fagos diferentes pero gentica-
a
Las vacuolas de gas se encuentran en cianobacterias,
b bacterias fotosintticas purpreas y verdes y en otras es-
pecies acuticas, lo que les permite flotar cerca de la su- capsmeros
d perficie y alcanzar las cantidades necesarias de luz, O2 y ncleo cpside
nutrientes necesarios. Estn formadas por las vesculas unidad cabeza
de gas cuya membrana est formada por protenas que estructural
e forman un cilindro rgido impermeable al agua, pero per-
meable a los gases. Estas pueden colapsar y la bacteria
Figura 10- Inclusiones citoplasmticas desciende.
a) Grnulos de lpidos (cido poli -OH butrico: PHB) Adenovirus
b) y c) Membrana fotosinttica en lminas (bacterias purpreas)
c) Membrana y vesculas individuales (clorobio) en bacterias purpreas Polifosfatos o grnulos de volutina: unidos por enlaces
d) Clorosomas unidos a la membrana plasmtica (bacterias verdes) steres, constituyen reservas de fosfato y de energa. Tam- envoltura cpside helicoidal Virus del eje tubular
e) Bacterioclorofila asociada directamente a la membrana plasmtica bin se llaman grnulos metacromticos, por el cambio mosaico del tabaco vaina
(Heliobacterium) de color del rojo al azul con azul de metileno o azul de fibras caudales
toluidina. Son muy llamativos los grnulos de azufre, ama-
Sistemas membranosos diferentes a los mesosomas se rillos y brillantes que muchas veces llenan el citoplasma
aprecian en bacterias fotosintticas como las cianobacte- de bacterias fotosintticas sulfurosas.
rias (vesculas clorobio), en las bacterias fotosintticas
purpreas y en bacterias nitrificantes (sculos aplanados) Endosporas
(figura 10). Su funcin puede ser la de ofrecer una super- Cuando las condiciones del ambiente se tornan desfavora- Virus gripal espinas caudales
ficie mayor para realizar funciones metablicas en forma bles, ciertos gneros de bacterias (Bacillus, Clostridium, Spo- Bacterifago
ms intensa (localizacin de pigmentos fotosintticos, rosarcina) son capaces de formar estructuras terminales o
enzimas respiratorias). intercalares, llamadas esporas (cuadro 6). Estn formadas Figura 19- Estructura de algunos virus
Cuadro 8- Comparacin entre clulas procariotas y eucariotas de gruesas paredes que la hacen resistentes a radiaciones, Luego de una serie de etapas que en Bacillus megate-
desecacin, luz UV. El escaso citoplasma se encuentra en rium lleva slo unas 10 horas, se aprecia en los cultivos
Organizacin gentica Eucariota Procariota un estado "criptobitico" sin actividad enzimtica y muy de- las esporas libres, refringentes, sin mucho contraste con
Nucleoplasma con membrana si no secado. Una nueva molcula se sintetiza: el cido dipicolni- el medio.
co (piridin di benzoico) que forma complejos organo-metli-
N de cromosomas varios 1 (?)
cos o quelatos con metales como el Ca, Mg, etc. impidiendo Cuadro 6- Carctersticas de las endosporas
Nucleolos si no que acten como cofactores de enzimas. Este ejemplo de bacterianas
Cromosomas con histonas si no ciclo celular se revierte cuando las condiciones se hacen fa-
Divisin mittica si no vorables (humedad, nutrientes, temperatura adecuados). La Resistencia al calor, radiacin, desecacin. Prdida
clula se rehidrata, pierde sus capas externas y el cido di de agua y sntesis de cido dipicolnico, que quelata
ADN en organelos si no
picolnico y retoma su morfologa tpica, las funciones fisiol- minerales impidiendoles actuar como coenzimas
Recombinacin por: gicas y comienza la divisin celular. Un shock trmico breve Producidas principalmente por los gneros Bacillus,
i) fusin de gametos si no
ayuda a desencadenar estos eventos. Clostridium y Sporosarcina
ii) diploides parciales no si
Permiten la sobrevivencia en ambientes desfavorables
Estructura citoplasmtica Las esporas constan de una cubierta externa, el exospo- por mucho tiempo
Retculo endoplasmtico si no rio, la corteza, en el espacio entre las dos membranas, El ADN est protegido por cido dipicolnico y prote-
Aparato de Golgi si no donde se acumulan el calcio y el cido dipicolnico y el nas

protoplasto, en estado criptobitico. Luego de la activacin por estrs, shock trmico, la
Lisosomas si no disponibilidad de nutrientes dispara la germinacin y
Mitocondrias si no el crecimiento
La figura 11 (Prescott et al., 1999). presenta un esquema
Ribosomas 80S (70S en organelos) 70S La localizacin en la clula (terminales, intercalares),
de la formacin de una endospora en un bacilo y la figura
Microtbulos si no 12 presenta la ultraestructura de una endospora al mi- se usa como carcter taxonmico
Organelos con membrana no unitaria no si croscopio electrnico.
Pared con peptidoglicano No si Divisin celular
En algunas bacterias el ADN se integra al genoma y se

plsmido cromosoma VIII
Espora libre
Pared
replica ordenadamente con la clula (lisogenia). Lisis del
I
Membrana
esporangio, Exosporio Formacin
plasmtica
liberacin de la Cubierta de la espora del
Los constituyentes esenciales de un virus son: un solo espora Crtex
ligamento DNA
cido nucleco ADN o ARN de cadena simple o doble y Protoplasto
bacterifago VI axial
una envoltura protectora o cpside de arquitectura heli- Finalizacin de la
sntesis de la cubierta, II
coidal o polihdrica, formada de subunidades proteicas aumento de la Formacin
(figura 19). Algunos virus poseen envolturas adicionales Algunos pueden presentar otra envoltura ms externa, de refractilidad del septo
con lpidos y polisacridos. Las protenas poseen carc- carcter lipdica. y la termorresistancia
ter antignico y permiten su reconocimiento. Exosporio
En la clula husped penetra slo el cido nucleico. V
Sntesis de
El ADN de varios virus bacterianos, llamados bacterifa- Son entidades biolgicas autoreplicativas: se multiplican la cubierta
gos, es circular, como los plsmidos y el cromosoma bac- dentro de las bacterias (ciclo ltico).
teriano, elementos genticos muy relacionados a los virus. Crtex
III
Los fagos virulentos slo se propagan por el ciclo lti- Inclusin de
Los bacterifagos, tambin llamados fagos, se caracte- co y los temperados pueden propagarse por ciclos la preespora
rizan por: lticos o lisognicos.

IV
Formacin del crtex
Contener pequeas molculas de ADN o ARN y una cu- Ciclo ltico de infeccin
bierta o cpside proteica que lo protege en el ambiente. Se distinguen varias fases: Figura 11- For macin de una endospora bacteriana
cl
cb
Figura 12- Ultraestructura de una endospora bacteriana y

bacilos esporulados y capsulados Figura 17- Ultraestructura de las cilias. Izquierda: cuerpo basal (cb) y la cilia (cl) con los microtbulos centrales y perifricos
(x100.000). Derecha: corte transversal de cilias con los dos microtbulos centrales rodeados por nueve pares de microtbulos
Organizacin de la clula eucariota (x160.000) (Prescott et al., 1999).
Las clulas eucariotas se diferencian principalmente de Por el contrario, la ultraestructura de cilios y flagelos es * No presentan mitosis ni meiosis y su organizacin ge-
las procariotas por poseer diversos organelos membra- muy similar: son cilindros rodeados de una membrana de ntica es ms simple (captulo 5)
nosos complejos en el citoplasma y por contener la mayor unas 0,2 micras. En la matriz se encuentran 9 pares de * No realizan fagocitosis ni pinocitosis, digestin intrace-
parte de su material gentico contenido en un ncleo con Figura 13- Ultraestructura de una clula eucariota microtbulos dispuestos en crculo alrededor de dos mi- lular, no presentan corrientes citoplasmticas dirigidas
membrana nuclear. VA vacuola autofgica, C centriolo, C cloroplasto, Ci cilias, CR crotbulos centrales (modelo 9+2) (figura 17). ni movimiento ameboide
cromatina, VD vacuola digestiva, F microfilamentos, G glucgeno, * No puede albergar endosimbiontes
La presencia de numerosos microtbulos, microfilamen- AG aparato de Golgi, GL gotas de lpidos, M mitocondrias, MT El cuerpo basal se ubica en el citoplasma, en la base de * Su nutricin se debe a procesos de smosis, hechos
microtbulos, N ncleo, UN nucleolo, P peroxisoma, LP lisosoma
tos confieren a esta clula su forma caracterstica e inter- primario, MP membrana pasmtica, VP vescula pinocitsica, R
cada cilia y flagelo (figura 17), se trata de un cilindro corto explicables por la pared rgida que envuelve a la clula.
vienen adems en su movilidad y en el transporte intrace- ribosomas y polisomas, CuR cuerpo residual, RER retculo con nueve pares de microtbulos alrededor de su perife-
lular. El material gentico se transmite a las clulas hijas endoplasmtico rugoso, REL retculo liso, VS vacuola de secrecin ria (modelo 9+0), separado por una placa basal. El movi- Sin embargo, desde el punto de vista metablico y bioqumi-
mediante los procesos de mitosis (asexual) y meiosis (re- (Prescott et al., 1999). miento requiere ATP y la protena dinena lo hidroliza. Estos co, las semejanzas son marcadas. Los constituyentes qumi-
produccin sexual). organelos vibran a ritmo de 10 a 40 golpes u ondas por cos son similares, con pocas excepciones el cdigo gentico
clula eucariota por sistemas membranosos permite el segundo, impulsando rpidamente a los microorganismos. es el mismo as como los metabolismos bsicos de sntesis
Sin embargo a pesar de estas importantes diferencias y desarrollo de funciones bioqumicas y fisiolgicas diferen- de macromolculas y de generacin de energa.
otras debidas al tamao y morfologa de las clulas, mu- tes en compartimentos separados, de modo que puedan Resumen: el cuadro 8 resume las principales caractersti-
chas son las similitudes entre ambos tipos de clulas, so- ocurrir simultneamente y con mayor facilidad, en forma cas de ambos tipos de clulas, la procariota y la eucariota
bretodo a nivel metablico y bioqumico. coordinada y con regulacin adecuada. Las bacterias y las arquerobacterias son procariotas, el Los virus
resto de los organismos (algas, hongos, protozoos, plan-
Presentaremos una pequea revisin de este tipo celular Los procesos bioenergticos y fotosintticos pueden rea- tas y animales) son eucariotas. Las clulas procariotas Se aplica el trmino virus a entidades biolgicas submicros-
(figura 13) que por otra parte ha sido exhaustivamente lizarse ms eficientemente ya que se localizan exclusiva- son en general ms pequeas, del orden del tamao de cpicas muy simples, desprovistas de actividad metablica
analizada en cursos previos, por constituir la unidad bio- mente en membranas. Tambin se facilita el transporte las mitocondrias y cloroplastos eucariotas. e incapaces de reproducirse fuera del organismo que para-
lgica de los animales, vegetales y de los microorganis- de nutrientes a travs de la clula. El cuadro 7 describe a sitan. Alternan su ciclo de vida en dos fases: la extracelular,
mos eucariotas: algas, protozoos y hongos. los principales organelos de las clulas eucariotas y sus La presencia del ncleo eucariota es la diferencia ms donde se comportan como partcula inerte, aunque infeccio-
funciones. obvia entre ambos tipos celulares. El cuadro 8 muestra sa, el virin; y la intracelular, en la cual el virus se presenta
En resumen: las diferencias ms obvias entre ambos ti- que las clulas procariotas presentan una estructura mu- como cido nucleico replicable y la clula del husped (ani-
pos celulares radican en la presencia y rol de las mem- Citoplasma y filamentos citoplasmticos cho ms sencilla. mal, vegetal o microbiana) gobernada por este cido nuclei-
branas. Estas rodean al ncleo en las clulas eucariotas La matriz citoplasmtica es una de las partes ms impor- co, rplica todos los componentes virales, provocando la in-
y tambin a sus organelos. La divisin del interior de una tantes y complejas de la clula ya que constituye el lugar * Carecen de organelos rodeados por membrana feccin daos celulares e incluso la lisis de las mismas.
clear (parte de un cromosoma especfico) dirige la pro- La pared celular rgida de clulas eucariotas es ms senci- Cuadro 7- Funciones de los organelos eucariotas
duccin de ARN ribosomal (rARN) que se combina con lla en composicin qumica que la procariota (peptidoglica-
protenas ribosomales de la matriz citoplasmtica, para no, cidos teicoicos, lipoproteinas), presenta en general un Membrana citoplasmtica Barrera semipermeable con sistema de transporte, soporte mecnico de la clula,
formar las subunidades ribosomales parcialmente acaba- polisacrido sencillo con un solo monmero, como la celu- adhesin a superficies, secrecin.
das, las que dejan el ncleo a travs de los poros de la losa, pectina. Otras contienen sustancias inorgnicas como Citoplasma Matriz donde se ubican los organelos y se realizan procesos metablicos
envoltura y maduran en el citoplasma. la slice (diatomeas) o carbonato de calcio (algunas algas).
Microfilamentos, microtbulos Estructura y movimientos celulares, forman el citoesqueleto
Los hongos presentan celulosa, quitina o glucano.
La divisin celular de una clula eucariota se realiza Retculo endosplasmtico Transporte de materiales, sntesis de protenas y lpidos
asexualmente mediante el proceso de mitosis (divisin nu- Cilias y flagelos
Ribosomas Sntesis proteica
clear y transmisin cromosmica) o mediante la fusin de Estos apndices citoplasmticos son organelos relacio-
ncleos y reduccin cromtica (ciclo sexual). El proceso de nados con la movilidad celular en eucariotas y se diferen- Aparato de Golgi Secrecin de materiales diversos, lisosomas
divisin celular ocupa solo una pequea parte de la vida de cian entre si por su longitud: las cilias miden entre 5 y 20 Mitocondrias Produccin de energa, ciclo de los cidos tricarboxlicos (ATC), transporte de
un organismo (ciclo celular). El crecimiento celular ocurre micras de longitud, mientras que los flagelos pueden al- electrones, fosforilacin oxidativa y otras vas
en la interfase, parte del ciclo celular entre dos mitosis. canzar 100 a 200 micras.
Cloroplastos Fotosntesis
Las clulas diploides pueden permanecer como tales du- Otra diferencia la constituye la forma de moverse: los fla- Ncleo Alberga la informacin gentica, control celular
rante su vida o en algn momento pueden reducir el n- gelos presentan movimiento ondulante, si la onda se mue- Nucleolo Sntesis de ARN robosomal, formacin de los ribosomas
mero de cromosomas a la mitad (clulas haploides), las ve desde la base a la punta, la clula es empujada hacia
que pueden actuar como gametos y fusionarse para vol- delante, mientras que las cilias lo hacen con una vibra- Pared celular y pelcula Forma y estructura a la clula
ver a formar organismos diploides, mediante el proceso cin con dos fases distintivas: en el golpe efectivo la cilia Cilias y flagelos Movimiento celular
de meiosis (figura 15)(Prescott et al., 1999). acta como un remo, por lo que impulsa al organismo hacia
delante (figura 16). A continuacin la cilia se pliega a lo
donde se realizan muchos procesos bioqumicos. Est for- cilias y flagelos. Ciertas sustancias como la colchicina al-
largo, mientras es arrastrado hacia delante en el golpe de mada por un 70 a 85% de agua, que se encuentra como teran la estructura de los microtbulos y bloquean la mito-
Organismo diploide
recuperacin, para preparar otro golpe efectivo. El orga-
agua en estado libre, osmticamente activa, o ligada, como sis y el movimiento de la clula.
nismo ciliado coordina los golpes de modo que algunas
agua de hidratacin de protenas y otras macromolcu-
cilias estn en fase de recuperacin mientras que otras las. El pH es cercano a la neutralidad, pero puede variar Las clulas procariotas carecen de este citoesqueleto
Meiosis estn en fase efectiva. De este modo se coordina el movi-
ampliamente (las vacuolas de los protozoos pueden tener organizado y no presentan protenas similares a la actina.
miento en el agua.
2n pH de 3 a 4).
Fusin Retculo endoplasmtico (RE) y aparato de Golgi (AG)
Los microfilamentos constituyen filamentos de prote- RE: Adems del citoesqueleto, el citoplasma est ocupado
1n nas con dimetro entre 4 a 7 nm, pueden estar distribui- por una red de tbulos membranosos ramificados y fusio-
dos por la matriz del citoplasma u organizados en redes y nados de 40 a 70 nm de dimetro y sacos aplanados que
participan en el movimiento y cambios de formas de las constituyen el RE. Cuando existe activa sntesis de prote-
Clula clulas (movimiento ameboide, de los grnulos y corrien- nas para excretar, el RE aparece cubierto de ribosomas
haploide tes citoplasmticas). La protena constitutiva es una acti- (retculo granular o rugoso). Las clulas que sintetizan gran
Gametos na, similar a la protena contrctil del tejido muscular. cantidad de lpidos presentan una RE liso o agrunular.
Los microtbulos, tienen forma de cilindros finos de 25 Funciones: transporte de protenas, lpidos y otros mate-
Figura 15- Esquema de una ciclo celular en eucariotas nm de dimetro formados por dos subunidades proteicas riales a travs de la clula y es tambin un importante
Estructuras externas esfricas que forman un cilindro con varias subunidades en lugar de sntesis de membrana celular.
Las clulas eucariotas presentan numerosas capas pro- cada vuelta. Estos ayudan a mantener la forma celular, par-
tectoras o de soporte externas a la membrana citoplas- ticipan con los microfilamentos en el movimiento celular y AG: es un organelo membranoso compuesto de 4 a 8
Figura 16- Modelos de movimiento flagelar y ciliar. actan en procesos de transporte a travs de la clula. sacos membranosos aplanados o cisternas, llamado dic-
mtica. Muchos microorganismos carecen de pared ce-
El de los flagelos (izquierda) produce ondas que se desplazan desde la tiosoma y no presentan ribosomas. En los extremos de
lular, como las amebas. La mayora de las membranas base a la punta o en sentido contrario y el organismo se impulsa. El de
eucariotas contienen esteroles, como el colesterol que le las cilias presenta dos fases (derecha): golpe efectivo y golpe de Los microtbulos estn tambin presentes en estructuras las cisternas se ubica una red compleja de tbulos y ves-
confieren resistencia mecnica. recuperacin. Las flechas indican el movimiento del agua. que participan en movimientos celulares: huso mittico, culas (dimetro de 20 a 100nm). Parece que los materia-
les se transportan de las cisternas en formacin hacia las proteica, las que penetran en el RE para su transporte,
Membrana externa
ms maduras por vesculas que se desprenden por ge- pueden ser secretadas (al ncleo, mitocondria, cloroplas- Menbrana interna
macin y se desplazan al saco siguiente. to) o permanecer integradas a la membrana.
ADN
Inclusin
El aparato de Golgi est presente en la mayora de las Mitocondrias
clulas eucariotas, pero muchos hongos y protozoos ci- En estos importantes organelos (figura 14) tiene lugar la
liados pueden carecer de una estructura visible. Este apa- actividad del ciclo de los cidos tricarboxlicos y la gene-
rato prepara a los materiales para su secrecin, variando racin de ATP por transporte de electrones a nivel del sus-
la naturaleza exacta de su rol segn el organismo. Partici- trato y por fosforilacin oxidativa. Al microscopio electr- Complejos
pa a menudo en el desarrollo de membranas celulares y nico se ven como estructuras cilndricas de 0,3 a 1,0 por 5 Crestas F1 -F0
en la secrecin de sustancias. En todos los casos los ma- a 10 m (tamao similar a las clulas bacterianas). Pue- Matriz
teriales se desplazan del RE al AG. Las vesculas se des- den presentarse mucha cantidad o una sola muy grande
prenden del RE por gemacin y se fusionan con las cis- por clula.
ternas del Golgi recin formadas (cis) (glucoprotenas con
hidratos de carbono de cadena corta). Presentan doble membrana, la interna presenta invagina-
ciones conocidas como crestas, que aumentan mucho la
Una funcin muy importante del AG y el RE es la sntesis de superficie. Las crestas pueden aparecer en forma lami-
otro organelo, el lisosoma, presente en numerosos microor- nar, de disco o de tbulo. La membrana interna engloba a Envoltura Laminilla del
ganismos y en plantas y animales. Son cuerpos esfricos la matriz mitocondrial, densa que contiene a los riboso- (doble membrana) estroma Matriz
cubiertos por membrana, su tamao vara desde 50 nm has- mas, ADN y a menudo grnulos de fosfato de calcio.
Grana
ta varias micras. Participan en la digestin intracelular y con-
tienen las enzimas necesarias para la degradacin de ma- Los ribososmas mitocondriales son ms pequeos que
cromolculas (hidrolasas, que funcionan mejor a pH bajo). los citoplasmticos y se parecen a los bacterianos por el
tamao, las subunidades y el ADN circular. Las enzimas
Estos organelos son muy importantes en los organismos que responsables de la generacin de energa se ubican sola- Tilacoides
se nutren por endocitosis: fagocitosis si se engloban part- mente en la membrana interna, donde muchas pequeas Figura 14- Mitocondrias y cloroplastos
culas de gran tamao e incluso otros microorganismos para esferas (partculas F1) estn adheridas por un pednculo Izquierda: Mitocondria. Arriba: Esquema de una mitocondria; abajo: micrografa electrnica de transmisin (x 85.000) donde se observan las
formar una vacuola fagoctica o fagosoma. En la pinocitosis, a la superficie interna y sintetizan ATP en la respiracin. membranas externas e internas de las crestas y las inclusiones de la matriz. Alrededor se aprecia el RE rugoso.
se atrapan pequeas cantidades de lquido circundante con Derecha: Cloroplasto. Arriba: cloroplastos de una Euglena, rodeado por membrana doble y los tilacoides estn dispuestos en grupos de tres o ms.
solutos y se forman vesculas pinoctcas o pinosomas. Las enzimas del ciclo ATC y las de la oxidacin de los Se aprecian gotitas de lpidos (L), grnulo de paramilo (P) y franjas de la pelcula (Pe) (Prescott et al., 1999).
cidos grasos, se localizan en la matriz.
El material de estos denominados endosomas es digeri- tro de la membrana interna con ADN, ribosomas gotas de y es el centro de control celular. Estn limitados por mem-
do con ayuda de lisosomas formando las vacuolas alimen- Las mitocondrias as como los cloroplastos se reprodu- lpidos, grnulos de almidn. La membrana interna se re- branas, la externa y la interna de 5-7 micras (membrana
ticias. Los nutrientes digeridos pasan al citoplasma. Los cen por fisin binaria y como se parecen a las bacterias, pliega formando unos sacos aplanados llamados tilacoi- unitaria). La envoltura contina en algunos puntos con el
lisosomas realizan estas funciones sin liberar sus enzi- apoyan la hiptesis de la simbiosis de clulas procariotas des. En muchas algas grupos de tilacoides en forma de RE y la membrana externa est recubierta de ribosomas.
mas digestivas al citoplasma, que destruira a la clula. para formar una eucariota. disco se apilan como monedas para formar los grana. La cromatina es la zona que contiene el ADN, que si bien
Todo este complejo sistema de organelos membranosos se encuentra dispersa, se condensa durante la mitosis,
estn coordinados para regular la entrada y salida de ma- Cloroplastos La fase oscura de la fotosntesis (reduccin del CO2) ocu- formando los cromosomas. Numerosos poros (dimetro
teriales de la clula. La clase ms importante de plastidios (organelos para la rre en el estroma y la captacin de energa lumnica para aproximado de 70 micras) penetran la envoltura y se for-
sntesis y almacenamiento de reservas nutritivas) son los generar ATP, NADPH y O2 (fase luminosa), se localiza en man por la fusin de ambas membranas. Los poros son
Ribosomas cloroplastos, que presentan clorofila y son el lugar donde las membranas de los tilacoides, donde se encuentra la una ruta de transporte entre el ncleo y el citoplasma.
Es de tamao superior al procariota (70S) y es un dmero se realiza la fotosntesis (figura 14). Varan en forma y clorofila y el sistema transportador de electrones.
formado por subunidades de 60S y 40S, con un dimetro tamao, pero en general son ovalados (2-4 por 5-10 mi- El nucleolo es un organelo complejo que no est rodeado
de aproximadamente de 22nm, coeficiente de sedimenta- cras), aunque algunas algas poseen un nico cloroplasto Ncleo de membranas, se observa en clulas en reposo pero
cin de 80S y PM de 4.106. Cuando est unido al RE ru- gigante que llena casi toda la clula. Son organelos de Es el organelo ms visible de las clulas eucariotas y fue desaparece en la mitosis. Desempea importante papel
goso lo hace por la subunidad 60S. Su rol es la sntesis doble membrana con una matriz llamada estroma, den- descripto desde 1831, almacena la informacin gentica en la sntesis de ribosomas. El ADN del organizador nu-
les se transportan de las cisternas en formacin hacia las proteica, las que penetran en el RE para su transporte,
Membrana externa
ms maduras por vesculas que se desprenden por ge- pueden ser secretadas (al ncleo, mitocondria, cloroplas- Menbrana interna
macin y se desplazan al saco siguiente. to) o permanecer integradas a la membrana.
ADN
Inclusin
El aparato de Golgi est presente en la mayora de las Mitocondrias
clulas eucariotas, pero muchos hongos y protozoos ci- En estos importantes organelos (figura 14) tiene lugar la
liados pueden carecer de una estructura visible. Este apa- actividad del ciclo de los cidos tricarboxlicos y la gene-
rato prepara a los materiales para su secrecin, variando racin de ATP por transporte de electrones a nivel del sus-
la naturaleza exacta de su rol segn el organismo. Partici- trato y por fosforilacin oxidativa. Al microscopio electr- Complejos
pa a menudo en el desarrollo de membranas celulares y nico se ven como estructuras cilndricas de 0,3 a 1,0 por 5 Crestas F1 -F0
en la secrecin de sustancias. En todos los casos los ma- a 10 m (tamao similar a las clulas bacterianas). Pue- Matriz
teriales se desplazan del RE al AG. Las vesculas se des- den presentarse mucha cantidad o una sola muy grande
prenden del RE por gemacin y se fusionan con las cis- por clula.
ternas del Golgi recin formadas (cis) (glucoprotenas con
hidratos de carbono de cadena corta). Presentan doble membrana, la interna presenta invagina-
ciones conocidas como crestas, que aumentan mucho la
Una funcin muy importante del AG y el RE es la sntesis de superficie. Las crestas pueden aparecer en forma lami-
otro organelo, el lisosoma, presente en numerosos microor- nar, de disco o de tbulo. La membrana interna engloba a Envoltura Laminilla del
ganismos y en plantas y animales. Son cuerpos esfricos la matriz mitocondrial, densa que contiene a los riboso- (doble membrana) estroma Matriz
cubiertos por membrana, su tamao vara desde 50 nm has- mas, ADN y a menudo grnulos de fosfato de calcio.
Grana
ta varias micras. Participan en la digestin intracelular y con-
tienen las enzimas necesarias para la degradacin de ma- Los ribososmas mitocondriales son ms pequeos que
cromolculas (hidrolasas, que funcionan mejor a pH bajo). los citoplasmticos y se parecen a los bacterianos por el
tamao, las subunidades y el ADN circular. Las enzimas
Estos organelos son muy importantes en los organismos que responsables de la generacin de energa se ubican sola- Tilacoides
se nutren por endocitosis: fagocitosis si se engloban part- mente en la membrana interna, donde muchas pequeas Figura 14- Mitocondrias y cloroplastos
culas de gran tamao e incluso otros microorganismos para esferas (partculas F1) estn adheridas por un pednculo Izquierda: Mitocondria. Arriba: Esquema de una mitocondria; abajo: micrografa electrnica de transmisin (x 85.000) donde se observan las
formar una vacuola fagoctica o fagosoma. En la pinocitosis, a la superficie interna y sintetizan ATP en la respiracin. membranas externas e internas de las crestas y las inclusiones de la matriz. Alrededor se aprecia el RE rugoso.
se atrapan pequeas cantidades de lquido circundante con Derecha: Cloroplasto. Arriba: cloroplastos de una Euglena, rodeado por membrana doble y los tilacoides estn dispuestos en grupos de tres o ms.
solutos y se forman vesculas pinoctcas o pinosomas. Las enzimas del ciclo ATC y las de la oxidacin de los Se aprecian gotitas de lpidos (L), grnulo de paramilo (P) y franjas de la pelcula (Pe) (Prescott et al., 1999).
cidos grasos, se localizan en la matriz.
El material de estos denominados endosomas es digeri- tro de la membrana interna con ADN, ribosomas gotas de y es el centro de control celular. Estn limitados por mem-
do con ayuda de lisosomas formando las vacuolas alimen- Las mitocondrias as como los cloroplastos se reprodu- lpidos, grnulos de almidn. La membrana interna se re- branas, la externa y la interna de 5-7 micras (membrana
ticias. Los nutrientes digeridos pasan al citoplasma. Los cen por fisin binaria y como se parecen a las bacterias, pliega formando unos sacos aplanados llamados tilacoi- unitaria). La envoltura contina en algunos puntos con el
lisosomas realizan estas funciones sin liberar sus enzi- apoyan la hiptesis de la simbiosis de clulas procariotas des. En muchas algas grupos de tilacoides en forma de RE y la membrana externa est recubierta de ribosomas.
mas digestivas al citoplasma, que destruira a la clula. para formar una eucariota. disco se apilan como monedas para formar los grana. La cromatina es la zona que contiene el ADN, que si bien
Todo este complejo sistema de organelos membranosos se encuentra dispersa, se condensa durante la mitosis,
estn coordinados para regular la entrada y salida de ma- Cloroplastos La fase oscura de la fotosntesis (reduccin del CO2) ocu- formando los cromosomas. Numerosos poros (dimetro
teriales de la clula. La clase ms importante de plastidios (organelos para la rre en el estroma y la captacin de energa lumnica para aproximado de 70 micras) penetran la envoltura y se for-
sntesis y almacenamiento de reservas nutritivas) son los generar ATP, NADPH y O2 (fase luminosa), se localiza en man por la fusin de ambas membranas. Los poros son
Ribosomas cloroplastos, que presentan clorofila y son el lugar donde las membranas de los tilacoides, donde se encuentra la una ruta de transporte entre el ncleo y el citoplasma.
Es de tamao superior al procariota (70S) y es un dmero se realiza la fotosntesis (figura 14). Varan en forma y clorofila y el sistema transportador de electrones.
formado por subunidades de 60S y 40S, con un dimetro tamao, pero en general son ovalados (2-4 por 5-10 mi- El nucleolo es un organelo complejo que no est rodeado
de aproximadamente de 22nm, coeficiente de sedimenta- cras), aunque algunas algas poseen un nico cloroplasto Ncleo de membranas, se observa en clulas en reposo pero
cin de 80S y PM de 4.106. Cuando est unido al RE ru- gigante que llena casi toda la clula. Son organelos de Es el organelo ms visible de las clulas eucariotas y fue desaparece en la mitosis. Desempea importante papel
goso lo hace por la subunidad 60S. Su rol es la sntesis doble membrana con una matriz llamada estroma, den- descripto desde 1831, almacena la informacin gentica en la sntesis de ribosomas. El ADN del organizador nu-
clear (parte de un cromosoma especfico) dirige la pro- La pared celular rgida de clulas eucariotas es ms senci- Cuadro 7- Funciones de los organelos eucariotas
duccin de ARN ribosomal (rARN) que se combina con lla en composicin qumica que la procariota (peptidoglica-
protenas ribosomales de la matriz citoplasmtica, para no, cidos teicoicos, lipoproteinas), presenta en general un Membrana citoplasmtica Barrera semipermeable con sistema de transporte, soporte mecnico de la clula,
formar las subunidades ribosomales parcialmente acaba- polisacrido sencillo con un solo monmero, como la celu- adhesin a superficies, secrecin.
das, las que dejan el ncleo a travs de los poros de la losa, pectina. Otras contienen sustancias inorgnicas como Citoplasma Matriz donde se ubican los organelos y se realizan procesos metablicos
envoltura y maduran en el citoplasma. la slice (diatomeas) o carbonato de calcio (algunas algas).
Microfilamentos, microtbulos Estructura y movimientos celulares, forman el citoesqueleto
Los hongos presentan celulosa, quitina o glucano.
La divisin celular de una clula eucariota se realiza Retculo endosplasmtico Transporte de materiales, sntesis de protenas y lpidos
asexualmente mediante el proceso de mitosis (divisin nu- Cilias y flagelos
Ribosomas Sntesis proteica
clear y transmisin cromosmica) o mediante la fusin de Estos apndices citoplasmticos son organelos relacio-
ncleos y reduccin cromtica (ciclo sexual). El proceso de nados con la movilidad celular en eucariotas y se diferen- Aparato de Golgi Secrecin de materiales diversos, lisosomas
divisin celular ocupa solo una pequea parte de la vida de cian entre si por su longitud: las cilias miden entre 5 y 20 Mitocondrias Produccin de energa, ciclo de los cidos tricarboxlicos (ATC), transporte de
un organismo (ciclo celular). El crecimiento celular ocurre micras de longitud, mientras que los flagelos pueden al- electrones, fosforilacin oxidativa y otras vas
en la interfase, parte del ciclo celular entre dos mitosis. canzar 100 a 200 micras.
Cloroplastos Fotosntesis
Las clulas diploides pueden permanecer como tales du- Otra diferencia la constituye la forma de moverse: los fla- Ncleo Alberga la informacin gentica, control celular
rante su vida o en algn momento pueden reducir el n- gelos presentan movimiento ondulante, si la onda se mue- Nucleolo Sntesis de ARN robosomal, formacin de los ribosomas
mero de cromosomas a la mitad (clulas haploides), las ve desde la base a la punta, la clula es empujada hacia
que pueden actuar como gametos y fusionarse para vol- delante, mientras que las cilias lo hacen con una vibra- Pared celular y pelcula Forma y estructura a la clula
ver a formar organismos diploides, mediante el proceso cin con dos fases distintivas: en el golpe efectivo la cilia Cilias y flagelos Movimiento celular
de meiosis (figura 15)(Prescott et al., 1999). acta como un remo, por lo que impulsa al organismo hacia
delante (figura 16). A continuacin la cilia se pliega a lo
donde se realizan muchos procesos bioqumicos. Est for- cilias y flagelos. Ciertas sustancias como la colchicina al-
largo, mientras es arrastrado hacia delante en el golpe de mada por un 70 a 85% de agua, que se encuentra como teran la estructura de los microtbulos y bloquean la mito-
Organismo diploide
recuperacin, para preparar otro golpe efectivo. El orga-
agua en estado libre, osmticamente activa, o ligada, como sis y el movimiento de la clula.
nismo ciliado coordina los golpes de modo que algunas
agua de hidratacin de protenas y otras macromolcu-
cilias estn en fase de recuperacin mientras que otras las. El pH es cercano a la neutralidad, pero puede variar Las clulas procariotas carecen de este citoesqueleto
Meiosis estn en fase efectiva. De este modo se coordina el movi-
ampliamente (las vacuolas de los protozoos pueden tener organizado y no presentan protenas similares a la actina.
miento en el agua.
2n pH de 3 a 4).
Fusin Retculo endoplasmtico (RE) y aparato de Golgi (AG)
Los microfilamentos constituyen filamentos de prote- RE: Adems del citoesqueleto, el citoplasma est ocupado
1n nas con dimetro entre 4 a 7 nm, pueden estar distribui- por una red de tbulos membranosos ramificados y fusio-
dos por la matriz del citoplasma u organizados en redes y nados de 40 a 70 nm de dimetro y sacos aplanados que
participan en el movimiento y cambios de formas de las constituyen el RE. Cuando existe activa sntesis de prote-
Clula clulas (movimiento ameboide, de los grnulos y corrien- nas para excretar, el RE aparece cubierto de ribosomas
haploide tes citoplasmticas). La protena constitutiva es una acti- (retculo granular o rugoso). Las clulas que sintetizan gran
Gametos na, similar a la protena contrctil del tejido muscular. cantidad de lpidos presentan una RE liso o agrunular.
Los microtbulos, tienen forma de cilindros finos de 25 Funciones: transporte de protenas, lpidos y otros mate-
Figura 15- Esquema de una ciclo celular en eucariotas nm de dimetro formados por dos subunidades proteicas riales a travs de la clula y es tambin un importante
Estructuras externas esfricas que forman un cilindro con varias subunidades en lugar de sntesis de membrana celular.
Las clulas eucariotas presentan numerosas capas pro- cada vuelta. Estos ayudan a mantener la forma celular, par-
tectoras o de soporte externas a la membrana citoplas- ticipan con los microfilamentos en el movimiento celular y AG: es un organelo membranoso compuesto de 4 a 8
Figura 16- Modelos de movimiento flagelar y ciliar. actan en procesos de transporte a travs de la clula. sacos membranosos aplanados o cisternas, llamado dic-
mtica. Muchos microorganismos carecen de pared ce-
El de los flagelos (izquierda) produce ondas que se desplazan desde la tiosoma y no presentan ribosomas. En los extremos de
lular, como las amebas. La mayora de las membranas base a la punta o en sentido contrario y el organismo se impulsa. El de
eucariotas contienen esteroles, como el colesterol que le las cilias presenta dos fases (derecha): golpe efectivo y golpe de Los microtbulos estn tambin presentes en estructuras las cisternas se ubica una red compleja de tbulos y ves-
confieren resistencia mecnica. recuperacin. Las flechas indican el movimiento del agua. que participan en movimientos celulares: huso mittico, culas (dimetro de 20 a 100nm). Parece que los materia-
cl
cb
Figura 12- Ultraestructura de una endospora bacteriana y

bacilos esporulados y capsulados Figura 17- Ultraestructura de las cilias. Izquierda: cuerpo basal (cb) y la cilia (cl) con los microtbulos centrales y perifricos
(x100.000). Derecha: corte transversal de cilias con los dos microtbulos centrales rodeados por nueve pares de microtbulos
Organizacin de la clula eucariota (x160.000) (Prescott et al., 1999).
Las clulas eucariotas se diferencian principalmente de Por el contrario, la ultraestructura de cilios y flagelos es * No presentan mitosis ni meiosis y su organizacin ge-
las procariotas por poseer diversos organelos membra- muy similar: son cilindros rodeados de una membrana de ntica es ms simple (captulo 5)
nosos complejos en el citoplasma y por contener la mayor unas 0,2 micras. En la matriz se encuentran 9 pares de * No realizan fagocitosis ni pinocitosis, digestin intrace-
parte de su material gentico contenido en un ncleo con Figura 13- Ultraestructura de una clula eucariota microtbulos dispuestos en crculo alrededor de dos mi- lular, no presentan corrientes citoplasmticas dirigidas
membrana nuclear. VA vacuola autofgica, C centriolo, C cloroplasto, Ci cilias, CR crotbulos centrales (modelo 9+2) (figura 17). ni movimiento ameboide
cromatina, VD vacuola digestiva, F microfilamentos, G glucgeno, * No puede albergar endosimbiontes
La presencia de numerosos microtbulos, microfilamen- AG aparato de Golgi, GL gotas de lpidos, M mitocondrias, MT El cuerpo basal se ubica en el citoplasma, en la base de * Su nutricin se debe a procesos de smosis, hechos
microtbulos, N ncleo, UN nucleolo, P peroxisoma, LP lisosoma
tos confieren a esta clula su forma caracterstica e inter- primario, MP membrana pasmtica, VP vescula pinocitsica, R
cada cilia y flagelo (figura 17), se trata de un cilindro corto explicables por la pared rgida que envuelve a la clula.
vienen adems en su movilidad y en el transporte intrace- ribosomas y polisomas, CuR cuerpo residual, RER retculo con nueve pares de microtbulos alrededor de su perife-
lular. El material gentico se transmite a las clulas hijas endoplasmtico rugoso, REL retculo liso, VS vacuola de secrecin ria (modelo 9+0), separado por una placa basal. El movi- Sin embargo, desde el punto de vista metablico y bioqumi-
mediante los procesos de mitosis (asexual) y meiosis (re- (Prescott et al., 1999). miento requiere ATP y la protena dinena lo hidroliza. Estos co, las semejanzas son marcadas. Los constituyentes qumi-
produccin sexual). organelos vibran a ritmo de 10 a 40 golpes u ondas por cos son similares, con pocas excepciones el cdigo gentico
clula eucariota por sistemas membranosos permite el segundo, impulsando rpidamente a los microorganismos. es el mismo as como los metabolismos bsicos de sntesis
Sin embargo a pesar de estas importantes diferencias y desarrollo de funciones bioqumicas y fisiolgicas diferen- de macromolculas y de generacin de energa.
otras debidas al tamao y morfologa de las clulas, mu- tes en compartimentos separados, de modo que puedan Resumen: el cuadro 8 resume las principales caractersti-
chas son las similitudes entre ambos tipos de clulas, so- ocurrir simultneamente y con mayor facilidad, en forma cas de ambos tipos de clulas, la procariota y la eucariota
bretodo a nivel metablico y bioqumico. coordinada y con regulacin adecuada. Las bacterias y las arquerobacterias son procariotas, el Los virus
resto de los organismos (algas, hongos, protozoos, plan-
Presentaremos una pequea revisin de este tipo celular Los procesos bioenergticos y fotosintticos pueden rea- tas y animales) son eucariotas. Las clulas procariotas Se aplica el trmino virus a entidades biolgicas submicros-
(figura 13) que por otra parte ha sido exhaustivamente lizarse ms eficientemente ya que se localizan exclusiva- son en general ms pequeas, del orden del tamao de cpicas muy simples, desprovistas de actividad metablica
analizada en cursos previos, por constituir la unidad bio- mente en membranas. Tambin se facilita el transporte las mitocondrias y cloroplastos eucariotas. e incapaces de reproducirse fuera del organismo que para-
lgica de los animales, vegetales y de los microorganis- de nutrientes a travs de la clula. El cuadro 7 describe a sitan. Alternan su ciclo de vida en dos fases: la extracelular,
mos eucariotas: algas, protozoos y hongos. los principales organelos de las clulas eucariotas y sus La presencia del ncleo eucariota es la diferencia ms donde se comportan como partcula inerte, aunque infeccio-
funciones. obvia entre ambos tipos celulares. El cuadro 8 muestra sa, el virin; y la intracelular, en la cual el virus se presenta
En resumen: las diferencias ms obvias entre ambos ti- que las clulas procariotas presentan una estructura mu- como cido nucleico replicable y la clula del husped (ani-
pos celulares radican en la presencia y rol de las mem- Citoplasma y filamentos citoplasmticos cho ms sencilla. mal, vegetal o microbiana) gobernada por este cido nuclei-
branas. Estas rodean al ncleo en las clulas eucariotas La matriz citoplasmtica es una de las partes ms impor- co, rplica todos los componentes virales, provocando la in-
y tambin a sus organelos. La divisin del interior de una tantes y complejas de la clula ya que constituye el lugar * Carecen de organelos rodeados por membrana feccin daos celulares e incluso la lisis de las mismas.
Cuadro 8- Comparacin entre clulas procariotas y eucariotas de gruesas paredes que la hacen resistentes a radiaciones, Luego de una serie de etapas que en Bacillus megate-
desecacin, luz UV. El escaso citoplasma se encuentra en rium lleva slo unas 10 horas, se aprecia en los cultivos
Organizacin gentica Eucariota Procariota un estado "criptobitico" sin actividad enzimtica y muy de- las esporas libres, refringentes, sin mucho contraste con
Nucleoplasma con membrana si no secado. Una nueva molcula se sintetiza: el cido dipicolni- el medio.
co (piridin di benzoico) que forma complejos organo-metli-
N de cromosomas varios 1 (?)
cos o quelatos con metales como el Ca, Mg, etc. impidiendo Cuadro 6- Carctersticas de las endosporas
Nucleolos si no que acten como cofactores de enzimas. Este ejemplo de bacterianas
Cromosomas con histonas si no ciclo celular se revierte cuando las condiciones se hacen fa-
Divisin mittica si no vorables (humedad, nutrientes, temperatura adecuados). La Resistencia al calor, radiacin, desecacin. Prdida
clula se rehidrata, pierde sus capas externas y el cido di de agua y sntesis de cido dipicolnico, que quelata
ADN en organelos si no
picolnico y retoma su morfologa tpica, las funciones fisiol- minerales impidiendoles actuar como coenzimas
Recombinacin por: gicas y comienza la divisin celular. Un shock trmico breve Producidas principalmente por los gneros Bacillus,
i) fusin de gametos si no
ayuda a desencadenar estos eventos. Clostridium y Sporosarcina
ii) diploides parciales no si
Permiten la sobrevivencia en ambientes desfavorables
Estructura citoplasmtica Las esporas constan de una cubierta externa, el exospo- por mucho tiempo
Retculo endoplasmtico si no rio, la corteza, en el espacio entre las dos membranas, El ADN est protegido por cido dipicolnico y prote-
Aparato de Golgi si no donde se acumulan el calcio y el cido dipicolnico y el nas

protoplasto, en estado criptobitico. Luego de la activacin por estrs, shock trmico, la
Lisosomas si no disponibilidad de nutrientes dispara la germinacin y
Mitocondrias si no el crecimiento
La figura 11 (Prescott et al., 1999). presenta un esquema
Ribosomas 80S (70S en organelos) 70S La localizacin en la clula (terminales, intercalares),
de la formacin de una endospora en un bacilo y la figura
Microtbulos si no 12 presenta la ultraestructura de una endospora al mi- se usa como carcter taxonmico
Organelos con membrana no unitaria no si croscopio electrnico.
Pared con peptidoglicano No si Divisin celular
En algunas bacterias el ADN se integra al genoma y se

plsmido cromosoma VIII
Espora libre
Pared
replica ordenadamente con la clula (lisogenia). Lisis del
I
Membrana
esporangio, Exosporio Formacin
plasmtica
liberacin de la Cubierta de la espora del
Los constituyentes esenciales de un virus son: un solo espora Crtex
ligamento DNA
cido nucleco ADN o ARN de cadena simple o doble y Protoplasto
bacterifago VI axial
una envoltura protectora o cpside de arquitectura heli- Finalizacin de la
sntesis de la cubierta, II
coidal o polihdrica, formada de subunidades proteicas aumento de la Formacin
(figura 19). Algunos virus poseen envolturas adicionales Algunos pueden presentar otra envoltura ms externa, de refractilidad del septo
con lpidos y polisacridos. Las protenas poseen carc- carcter lipdica. y la termorresistancia
ter antignico y permiten su reconocimiento. Exosporio
En la clula husped penetra slo el cido nucleico. V
Sntesis de
El ADN de varios virus bacterianos, llamados bacterifa- Son entidades biolgicas autoreplicativas: se multiplican la cubierta
gos, es circular, como los plsmidos y el cromosoma bac- dentro de las bacterias (ciclo ltico).
teriano, elementos genticos muy relacionados a los virus. Crtex
III
Los fagos virulentos slo se propagan por el ciclo lti- Inclusin de
Los bacterifagos, tambin llamados fagos, se caracte- co y los temperados pueden propagarse por ciclos la preespora
rizan por: lticos o lisognicos.

IV
Formacin del crtex
Contener pequeas molculas de ADN o ARN y una cu- Ciclo ltico de infeccin
bierta o cpside proteica que lo protege en el ambiente. Se distinguen varias fases: Figura 11- For macin de una endospora bacteriana
naran lisis celular o cambios bruscos de pH. Algunos in- El PHB es un polmero con molculas de -hidroxibutirato de adsorcin: el ciclo ltico comienza cuando una par- fase de eclipse con dos etapas:
clusiones estn rodeadas por una membrana no unitaria unidas por enlaces ster entre los grupos carboxilo e hidroxi- tcula fgica tiene posibilidad de colisionar con una * formacin de protenas tempranas: el virus dentro de
de una sola capa de unos 2-4 nm de espesor (azufre, allo de molculas adyacentes (figura 10 a). En general se ob- clula husped; si el virin posee un sitio de adsor- la clula deja de existir como entidad independiente,
gunos de glicgeno, carboxisomas y vesculas de gas). servan en coloraciones al microscopio ptico, y estn formacin qumicamente complementario de un sitio recep- se dice que entra en fase vegetativa y se habla de
Se distinguen (figura 10) (Madigan et al., 2000): dos por una sola molcula por clula, evitando la lisis osm- tor de la superficie celular, ocurre una adsorcin irre- fago vegetativo. Parte del ADN viral es transcripto por
tica por acumulacin de molculas monomricas (alta pre- versible. Estos receptores se encuentran en bacte- ARN polimerasa del husped para formar ARN men-
grnulos de almacenamiento-polifosfato, fenoxialcanos, sin osmtica) y la elevacin del pH por los grupos COOH rias G- en la capa externa lipoproteica de la pared o sajero viral. Los ribosomas del husped traducen este
como el cido -OH butrico (PHB), principal material terminales, que en el polmero se neutralizan por unin ster bien a nivel de la capa lipopolisacrida. Para algunos mARN y forman nuevas enzimas (las tempranas), in-
carbonado de reserva de las clulas procariotas, azu- con grupos hidroxilos. El glicgeno se dispersa ms unifor- fagos el receptor se encuentra en los apndices, fla- cluyendo las necesarias para la replicacin del ADN
fre en bacterias fotosintticas anoxignicas memente en la matriz en grnulos ms pequeos y a veces gelos o pili. viral y una nueva ADN polimerasa y desoxirribonuclea-
vesculas de gas, para la flotacin slo se los aprecia en el microscopio electrnico. sa que destruye el ADN del husped.
la fijacin y penetracin: se realiza por las fibras de la * replicacin del ADN del fago: la de una molcula de
membranas que albergan pigmentos fotosintticos y Las cianobacterias acumulan grnulos de cianoficina, cola y una enzima (la lisozima) comienza a actuar, rom- ADN circular puede ocurrir de dos maneras: en el mo-
enzimas respiratorias polipptidos grandes con cantidades iguales de dos ami- piendo los enlaces glucosdicos del peptidoglicano. Lue- delo simtrico, las dos cadenas tienen igual papel,
nocidos: arginina y cido asprtico. Se pueden ver con go el bacterifago inyecta su ADN en la clula median- mientras que en el modelo asimtrico, una cadena no
c el microscopio de luz y se forman ante exceso de nitrge- te una contraccin de las fibras de la cola, quedando se rompe y la otra se hace lineal. En fagos con ADN
no en el medio. Los carboxisomas se presentan como po- afuera el resto del virin (cabeza y cola). monocatenario, ste es rpidamente convertido en
lmeros en forma de grnulos de unos 100 nm de dime- Se comprob radioqumicamente que slo el ADN pe- doble hlice por una ADN polimerasa bacteriana.
tro y se encuentran en algunas cianobacterias, bacterias netra en la clula, marcndolo con P32 (la radioactivi-
auttrofas como las nitrificantes y los thiobacilos. Consti- dad del ADN viral queda en las bacterias); las prote- Las molculas de ADN pueden sufrir mutaciones con
PHB tuyen una reserva de la enzima ribulosa 1-5 bifosfato car- nas, marcadas con S34, se detectaron fuera de las c- ruptura y unin de pares de bases; si la bacteria estu-
boxilasa y pueden ser el lugar de la fijacin del CO2. lulas (figura 20) (Madigan et al., 2000). viera infectada por dos fagos diferentes pero gentica-
a
Las vacuolas de gas se encuentran en cianobacterias,
b bacterias fotosintticas purpreas y verdes y en otras es-
pecies acuticas, lo que les permite flotar cerca de la su- capsmeros
d perficie y alcanzar las cantidades necesarias de luz, O2 y ncleo cpside
nutrientes necesarios. Estn formadas por las vesculas unidad cabeza
de gas cuya membrana est formada por protenas que estructural
e forman un cilindro rgido impermeable al agua, pero per-
meable a los gases. Estas pueden colapsar y la bacteria
Figura 10- Inclusiones citoplasmticas desciende.
a) Grnulos de lpidos (cido poli -OH butrico: PHB) Adenovirus
b) y c) Membrana fotosinttica en lminas (bacterias purpreas)
c) Membrana y vesculas individuales (clorobio) en bacterias purpreas Polifosfatos o grnulos de volutina: unidos por enlaces
d) Clorosomas unidos a la membrana plasmtica (bacterias verdes) steres, constituyen reservas de fosfato y de energa. Tam- envoltura cpside helicoidal Virus del eje tubular
e) Bacterioclorofila asociada directamente a la membrana plasmtica bin se llaman grnulos metacromticos, por el cambio mosaico del tabaco vaina
(Heliobacterium) de color del rojo al azul con azul de metileno o azul de fibras caudales
toluidina. Son muy llamativos los grnulos de azufre, ama-
Sistemas membranosos diferentes a los mesosomas se rillos y brillantes que muchas veces llenan el citoplasma
aprecian en bacterias fotosintticas como las cianobacte- de bacterias fotosintticas sulfurosas.
rias (vesculas clorobio), en las bacterias fotosintticas
purpreas y en bacterias nitrificantes (sculos aplanados) Endosporas
(figura 10). Su funcin puede ser la de ofrecer una super- Cuando las condiciones del ambiente se tornan desfavora- Virus gripal espinas caudales
ficie mayor para realizar funciones metablicas en forma bles, ciertos gneros de bacterias (Bacillus, Clostridium, Spo- Bacterifago
ms intensa (localizacin de pigmentos fotosintticos, rosarcina) son capaces de formar estructuras terminales o
enzimas respiratorias). intercalares, llamadas esporas (cuadro 6). Estn formadas Figura 19- Estructura de algunos virus
virus
adhesin gancho filamento
ADN monotrico
clula husped
lofotrico
inyeccin anillo L
membrana externa
ciclo ltico ciclo lisognico
peptidoglicano anfitrico
anillo S anillo P
replicacin membrana citoplasmtica
ADN viral
protenas del anillo M
integracin del
virus y unin ADN de virus
con el ADN induccin Figura 7- Esquema de la estructura de un flagelo bacteriano
clula lisogenizada
peritrico
La figura 7 muestra la ultraestructura del flagelo bacteria- Figura 8- Ubicacin de los flagelos en la clula bacteriana
divisin no, con la parte ms larga, el filamento, el gancho de an-
lisis celular
claje a la clula y el cuerpo basal, embebido en la clula. corridas y vueltas controladas por quimioatrayentes y
En bacterias G- se presentan en este cuerpo basal 4 ani- repelentes
llos unidos por una varilla central: el L y P se asocian con
induccin lisognica crecimiento normal el lipopolisacrido de la membrana externa y el peptido- Las fimbrias son apndices similares a los flagelos, pero
glicano, respectivamente y el anillo interno M se contacta ms cortos y ms abundantes (figura 9) (Madigan et al.,
Figura 20- Ciclos lticos y lisognico de un bacterifago con la membrana plasmtica y el gancho, que es un seg- 2000), no son responsables del desplazamiento celular
mento curvo y corto que une el filamento al cuerpo basal, sino que sirven para adherir a la clula a superficies sli-
mente relacionados, se pueden producir molculas re- Si bien pueden observarse en el microscopio electrnico, acoplndolo. En bacterias G+ se presentan slo dos ani- das. Los pelos son estructuras semejantes a las fimbrias
combinantes de ADN fgico. sta resulta una tarea larga y tediosa. En general se cuan- llos, uno interno relacionado a membrana plasmtica y pero ms largos, se encuentran pocos en la superficie
tifican midiendo sus efectos sobre las clulas bacterianas otro externo, vinculado al peptidoglicano. celular y estn relacionados a la transferencia de material
maduracin, luego que la replicacin del ADN del fago que atacan. Se habla de unidades infecciosas virales:
La flagelina es una protena flexible cuyo PM vara entre gentico (plsmidos, segmentos del cromosoma) y en ese
comienza, la parte no transcripta es usada para gober- la mnima cantidad que causa efecto detectable sobre un
30 y 60.000. Algunas bacterias poseen una envoltura de caso se llaman pelos sexuales o pili.
nar la sntesis del mARN viral tardo con la consiguien- husped sensible.
te formacin de un segundo grupo de protenas, entre lipopolisacrido por fuera, como Vibrio cholerae. Mutan-
ellas las subunidades de la cpside. Simultneamen- tes de bacterias con flagelos rectos o con regiones del
Recuento en caja: se siembran juntas diluciones del vi-
te, las molculas del ADN viral sufren condensacin gancho anormalmente largas, no pueden nadar.
rus con un cultivo bacteriano sensible al mismo en medio
tomando forma polihdrica. slido adecuado para el husped. Se observan las llama- Su presencia y distribucin en la clula tiene carcter taxo-
liberacin de viriones maduros: al final del perodo das playas o placas de lisis: zona de inhibicin del cre- nmico: monotricos (un flagelo), anfitricos (a ambos la-
latente de infeccin ltica, otra protena viral tarda cimiento bacteriano causado por la liberacin sucesiva de dos), lofotricos (grupos de flagelos en uno o ambos extre-
aparece en la clula: la lisozima que ataca al peptido- ciclos virales lticos (anticolonias). mos), peritricos (alrededor de la clula) (figura 8).
glicano de la pared celular, la que va siendo debilitada
hasta su ruptura por la presin osmtica interna. La Los resultados se expresan como unidades formadoras Los mecanismos de accin flagelar son provocados por:
progenie fgica se libera al ambiente con los otros cons- de playas/mL. El agregado de un filtrado bacterilogico
(0,45 m) de suelo, aguas, cultivos microbianos a un me- rotacin de los anillos en el cuerpo basal, estara dirigi- Figura 9- Fimbrias y pili en bacterias
tituyentes celulares. La figura 25 muestra los ciclos lti-
dio de cultivo lquido de una especie bacteriana sensible, do por gradiente de protones
cos y lisognicos
provocar desaparicin de la turbidez (los restos de las Inclusiones citoplasmticas
rotacin antihoraria que produce movimiento hacia de-
Seguimiento del ciclo ltico de un fago clulas lisadas se acumulan en el fondo del tubo). Materiales orgnicos e inorgnicos, visibles a veces al
lante, con corridas
La figura 21 esquematiza el procedimiento a seguir para microscopio de luz se encuentran en la matriz citoplas-
evidenciar la presencia de partculas de bacterifagos y Este mtodo permite tambin el aislamiento de partculas rotacin horaria que causa cese del movimiento hacia mtica. La clula almacena polmeros para evitar las con-
tambin para realizar su recuento (partculas virales/mL). vricas, ya que se supone que cada playa deriva de una delante, con vueltas de la clula secuencias de altas presiones osmticas que le ocasio-
Plsmidos: pueden presentarse una o ms molculas

pequeas de ADN en el citoplasma que llevan informa-
cin no vital para la clula, como resistencias a antibiti- Fagos
cos, pesticidas, metales pesados, que pueden perderse y
transferir las resistencias a clulas sensibles que se con-
vierten en resistentes. Son tambin responsables de la
transferencia de material gentico de una clula a otra,
Bacterias
en la conjugacin y son muy empleados en prcticas de
ingeniera gentica.
Como material gentico adicional pueden encontrarse en

la clula procariota fagos temperados (lisognicos) y
transposones, fragmentos de ADN de pocas pares de
bases, mviles en la clula y que pueden insertarse en Figura 21- Seguimiento de un ciclo ltico de un bacterifago
distintos lugares del ADN del nucleoide o de los plsmi-
dos (captulo 5). sola partcula fgica, todos los derivados de l seran ge- rango de los huspedes y relaciones inmunolgicas, pero
nticamente idnticos. Los eventos ilustran una curva de las ms tiles son la morfologa, naturaleza del cido
Estructuras accesorias crecimiento de un solo paso. Se repica la playa de lisis en nucleico y de la cpside. Los virus que atacan bacterias
(del exterior al interior de la clula) Figura 5- Polisacridos extracelulares medio de cultivo bacteriano fresco. presentan en general ADN, habitualmente de doble ca-
Cpsulas y capas mucosas dena, presentan estructura icosadrica (20 caras en la
Constituyen deposiciones de materiales altamente polime- protena de la cpsula), sin cola, o virus con colas con-
rizados, hidratos de carbono, pptidos, que la clula libera haces de fibrillas de protenas entrelazadas y un haz central.
Son estructuras delgadas, rgidas de unos 20 nm de ancho y trctiles, fagos filamentosos. Hay incluso algunos con
al medio cuando las fuentes exceden a las necesidades de una envoltura lipdica ms externa. Los ms conocidos
la clula. Las clulas encapsuladas son resistentes a la fa- hasta 15-20 m de largo. Deben observarse en microscopio
de campo claro, o teirse con tcnicas especiales para au- y de estructura ms compleja son los fagos con colas
gocitosis por protozoos o glbulos blancos, en el caso de contrctiles, como los fagos conocidos como los de la
los patgenos del hombre. Tambin evita la desecacin de mentar su espesor. La estructura detallada slo se aprecia
en microscopa electrnica (figura 6) (Madigan et al., 2000). serie T de E. coli (figura 22).
las clulas y el ataque por bacterifagos y sustancias txi-
cas y colabora en la adhesin de las clulas a superficies
slidas, en el mar o a superficies de tejidos en huspedes Lisogenia
animales o vegetales (figura 5) (Madigan et al., 2000). Muchos bacterifagos a pesar de poder lisar a las clulas
del husped, ejercen efectos menos drsticos. Son los
Cuando esta capa externa est bien organizada y no se llamados virus temperados que pueden entrar en un
lava fcilmente, se habla de cpsula. Si el material es di- estado llamado lisogenia, donde la mayora de los genes
fuso y se elimina fcilmente se denomina capa mucosa. virales no se expresan. En gran parte de las clulas de la
El trmino gliocalix designa a ambas estructuras. Muchas progenie no se forman protenas virales, muchos de los
bacterias G+ y G- y algunas arqueobacterias presentan genes virales se han reprimido y su genoma es replicado
una capa externa muy organizada llamada capa S, for- Figura 22- Microfotografa electrnica de E. coli infectada por sincrnicamente con el genoma del husped, duplicn-
mada por protenas y glucoprotenas. El de las G- se ad- el fago T4. Se observan las placas basales y los tubos dose en la divisin celular, pasando de una generacin a
hiere directamente a la membrana externa, en las G+ a la proteicos de la cola otra por largos perodos de tiempo. Las clulas parecen
superficie del peptidoglicano. Puede proteger a la clula perfectamente normales.
de cambios en el pH, fuerza inica, enzimas o parsitos Los virus que atacan animales se repican en frascos con
microbianos y facilita la adhesin a superficies slidas. una monocapa de clulas animales. Las placas se reve- Pero esta bacteria, en ciertas condiciones puede espont-
lan por las zonas de destruccin de esas clulas. neamente o por agentes mutagnicos, como radiaciones
Apndices citoplasmticos UV, producir viriones del virus temperado y lisar a la clula
Las bacterias se mueven por flagelos, de estructura ms sim- Clasificacin de los fagos: no se han desarrollado re- portadora. La clula se lisa y libera los viriones maduros.
ple que los de las clulas eucariotas. Estn formados por 3 Figura 6- Flagelos bacterianos laciones filogenticas y se aplican propiedades como el Esta relacin virus-husped se conoce como lisogenia y
las clulas que poseen la capacidad latente de producir Prescot, Harley, Klein, Microbiologa, 1999 McGraw- Membrana citoplasmtica y citoplasma la fijacin qumica para la observacin en el microscopio
partculas maduras de fago, se llaman lisognicas. Hill.Interamericana La membrana citoplasmtica est presente en clulas pro- electrnico. Pero como se aprecian tambin con otras tc-
Schlegel, H. G. y B. Bowien Autotrophic bacteria. 1989 cariotas y eucariotas, es responsable de su relacin con nicas como la criofractura celular, se piensa que partici-
Los fagos que realizan esta interaccin se dicen tempe- Science Tech. Publ, Madison, Wis el ambiente y es la barrera osmtica de la clula. Su com- pan en funciones relacionadas a la formacin de pared,
rados y el genoma viral en una clula lisognica se de- Stanier, R.Y., J.L. Ingraham, M.L. Wheelis, P.R. Painter posicin es lipoproteica, similar en todos los sistemas bio- en la replicacin del cromosoma procariota y su posterior
nomina profago. Parece que los bacterifagos encuen- The microbial world. 5t edicin, 1986 Prentice Hall, lgicos por lo que se la denomina membrana universal o distribucin en clulas hijas.
tran ventajas al lisogenizar clulas, cuando existe priva- Englewood Cliffs, N. J. unitaria, presenta un espesor de unas 5 a 10 nm.
cin de nutrientes antes de que las bacterias entren en Material gentico
inactividad degradan sus propios mARN y sus prote- La mayora de los lpidos son asimtricos y las porciones La gran diferencia entre clulas pro y eucariotas lo constitu-
nas. Esta situacin complicada puede evitarse si el fago Preguntas de repaso polares son hidrfilas e interactan con el agua, los extre- ye la organizacin del material gentico. Las procariotas
se vuelve inactivo (lisognico), al mismo tiempo que su mos no polares, o hidfobos son insolubles en agua y tien- carecen de ncleo tpico, rodeado por membrana. La ma-
husped. Cuando existe infeccin por multiplicidad de 1) Describa la estructura y la funcin de una clula bacteria- den a asociarse entre si, propiedades que les permite for- yor parte del ADN de una bacteria est constituido por una
fagos y todas las clulas estn infectadas, el ltimo ciclo na, indicando cuales de ellas estn presentes en todas mar las bicapas en las membranas. La nica diferencia sola molcula de ADN, de doble cadena, muy enrollada (fi-
de multiplicacin celular destruye todas las clulas del las bacterias y cuales solamente en algunas especies. encontrada entre membranas de clulas eu y procariotas gura 4) (Prescott et al., 1999). El material claro a los elec-
husped. Existe el riesgo de que los virus se queden sin 2) Cmo puede obtener nutrientes solubles desde el en que las ltimas carecen de esteroles como el coleste- trones es el ADN.
el husped y se encuentren expuestos a factores noci- ambiente? Y las partculas de gran tamao? rol, aunque se detectaron molculas pentacclicas, simi- Membrana plasmtica
vos del ambiente. 3) Compare la estructura y la composicin qumica de lares al esterol, llamadas hopanoides, sintetizados a par-
paredes de bacterias Gram positivas y negativas tir de los mismos precursores que los esteroides. Estos Ribosomas
Cuerpo de
La mayora de los fagos temperados existen como profa- 4) Describa el material gentico presente en una clula compuestos estabilizan la membrana bacteriana. inclusin
gos integrados en la bacteria lisognica. Pero algunos, procariota de PHB
como el fago P1 de E. coli se circulariza luego de la infec- 5) Polmeros acumulados fuera de la clula: composicin La membrana de las arqueobacterias difiere en composi-
cin y comienza a fabricar el represor que impide la activi- y funcin. Usos que hace el hombre de ellos. Polme- cin con las de las eubacterias: los lpidos poseen enla-
dad de la ARN polimerasa y la sntesis de protenas, se ros de reserva internos. ces ter en lugar de steres para unir los cidos grasos al
mantiene como molcula independiente y se replica al 6) Apndices celulares: comparacin con los presenta- glicerol y en lugar de los cidos grasos poseen compues-
Nucleoide
mismo tiempo que el cromosoma del husped. dos en eucariotas. Funcin de ellos tos derivados del hidrocarburo isopreno lo que le confiere
7) Qu propiedades adquieren las clulas esporuladas? propiedades diferentes a las del resto de los organismos. Mesosoma
Pared celular
Cuando E. coli se divide, el ADN del fago se reparte en las Por qu la esporulacin se considera una especie de Poseen una monocapa lipdica en lugar de una bicapa y
Figura 4- Microfotografa de clula procariota
clulas hijas, de modo que todas las clulas lisogeniza- ciclo celular? estn adaptadas a condiciones extremas.
das contienen una o dos copias del genoma fgico. 8) Por qu una bacteria no puede mantener endosim-
biontes? El citoplasma de clulas procariotas est constituido por Se habla de nucleoide, falso ncleo, o regin nuclear.
La lisogenia es un importante mecanismo de transfe- 9) Formas de divisin celular de un procariota. la matriz citoplasmtica, compuesta fundamentalmente por Muchas veces se lo menciona como "cromosoma bacte-
rencia de material gentico en procariotes, ya que al- 10) Cmo se explica que las bacterias colonicen ambien- agua (70%) y se presenta empaquetado con gran nme- riano" con la salvedad de que su estructura no es la de un
guno de los virus puede encapsular trozos del ADN de tes tan extremos (aguas termales, materiales en ferro de ribosomas, partculas esfricas formadas por pro- cromosoma eucariota. Esta molcula cerrada, circular, pue-
la clula infectada (defectuoso) y transferirlo a una c- mentacin, glaciares? tenas y ARN y responsables de la sntesis proteica. Son de apreciarse a veces unido al mesosoma o a la membra-
lula receptora por mecanismo conocido como trans- 11) Seale dos momentos en la evolucin de la ciencia de menor tamao que los de los eucariotas (70S en lugar na citoplasmtica. Contiene un 60% de ADN, algo de ARN
duccin (captulo 5). que contribuyeron marcadamente al conocimiento del de 80S). Sin embargo, los organismos eucariotas presen- y una pequea cantidad de protenas, diferentes a las his-
mundo microbiano. tan ribosomas del tipo bacteriano en sus organelos (mito- tonas de la clula eucariota y que facilitan su enrollamiento
12)Seale tres diferencias fundamentales entre ambos condrias, cloroplastos). (en Escherichia coli, bacilo de 2-6 m de longitud, el ADN
Bibliografa tipos celulares y sus consecuencias en su funciona- mide aproximadamente 1.400 m, lo que muestra el grado
miento. El citoplasma bacteriano no presenta organelos membra- de enrollamiento de la molcula en el citoplasma).
Madigan, Martinko y Parker, Brock, Biologa de los mi- 13)Cmo pondra en evidencia la presencia de bacteri- nosos complejos como mitocondrias y cloroplastos, se
croorganismos, 9 edicin, 2000, Prentice Hall Inter- fagos para bacterias entricas (E.coli, Salmonella) en aprecian a veces estructuras membranosas, como los En procariotas de vida libre contiene unas 1-6 X 106 pares
national muestras de aguas? mesosomas. Constituyen invaginaciones de la membra- de bases (pb), con 1000 a 5000 genes. El cromosoma
na plasmtica en forma de tbulos, pliegues, vesculas y bacteriano presenta genes esenciales para la vida celu-
son ms evidentes en bacterias Gram positivas. Algunos lar, sntesis de ribosomas, ARN mensajeros, enzimas
investigadores piensan que son artefactos generados por metablicas.
de 7-8 nm constituida por lipopolisacridos (LPS) con li- La cadena O (antgeno O) est formada por una cadena de
poprotenas en la cara interna. Algunas de stas, llama- polisacrido que se extiende hacia fuera y su composicin
das porinas, forman canales de entrada y salida de sus- vara con la cepa considerada y son reconocidos por anti-
tancias de bajo peso molecular. cuerpos del husped. Pueden mutar con gran facilidad.
Nutricin y metabolismo
Otra estructura que pueda dar resistencia a la pared Gram
negativa es la zona de adhesin. La membrana externa y
la citoplasmtica estn en contacto directo en muchos lu-
gares (fusin de membranas), por donde pueden pasar
Los LPS son importantes ya que protegen al resto de los
componentes de la pared frente a un ataque directo del
husped, brindan carga negativa a la superficie celular. El
lpido A es a menudo txico, de modo que el LPS puede
3 bioenergtico en microorganismos
sustancias hacia el interior de la clula. Entre la membra- actuar como una endotoxina y provocar algunos de los sn-
na interna y la pared celular (tambin llamada membrana tomas de las infecciones por bacterias Gram negativas.
externa) se encuentra un espacio conocido como peri- Nutricin microbiana Cuadro 1- Nutrientes microbianos
plasma, con muchas protenas hidrolticas. Una bacteria Gram negativa resiste ms la lisis osmtica
cuando la clula se trata con lisozima, enzima que hidro- Los microorganismos requieren nutrientes, sustancias 1- Fuentes de energa
El cuadro 4 compara ambos tipos de paredes bacterianas. liza los enlaces 1-4 del peptidoglicano por mantener la qumicas que estimulan el crecimiento microbiano y que (luz fototrofos)
envoltura formada por la capa externa (forman esferoplas- (reacciones qumicas quimiotrofos)
son empleadas en la sntesis de sus materiales celulares
Cuadro 4- Comparaciones entra ambos tipos de tos en medio isotnico), el peptidoglicano representa slo y que tambin brindan energa, a los efectos de realizar
paredes procariotas un 15-20% del peso seco de sus paredes. En una clula sus procesos metablicos, dividirse, moverse, esporular. 2. Macronutrientes
Gram + cuya pared est formada en un 80% por peptido- La sntesis de sus macromolculas, as como la obten- C K
Gram positiva glicano, los protoplastos esfricos formados en medio iso- cin de energa en los microorganismos quimiosintticos, H Mg
Puede presentar ms de 30 capas de peptidoglicano, tnico, estallan al pasar a un medio hipotnico (plasmop- O 95% Na
deben ser realizadas a partir de los nutrientes.
son altamente sensibles a antibiticos -lactmicos (pe- tisis) (captulo 4). N Ca
nicilina) S Fe
Las caractersticas que debe presentar un nutriente incluyen: P
Acidos teicoicos: le confieren carga negativa a la pared Las paredes de los microorganismos eucariotas cuando i) atravesar las barreras de la clula (membranas)
(ribitol o glicerol fosfato) estn presentes (hongos, algunas algas y protozoos) son 2. Micronutrientes (elementos traza)
ii) ser utilizado por alguna enzima celular
Acidos lipoprotecos: fijan la pared a la membrana plas- ms simples, formadas por polmeros de una misma subu- Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, B, etc.
iii) brindarle a la misma sub-unidades de sus macromol-
mtica nidad, como la celulosa, quitina, a veces mineral, con sli- culas y/o energa. 3- Factores de crecimiento
Gram negativa ce como en las diatomeas (cuadro 5). vitaminas coenzimas
Membrana externa: capa externa con lipopolisa- purinas y pirimidinas ADN, ARN
cridos (LPS), interna unida al peptidoglicano por Cuadro 5 - Resumen de los constituyentes Los elementos como nutrientes aminocidos esenciales sntesis proteica
lipoprotenas principales de las paredes microbianas
Porinas, protenas que permiten pasaje de pequeas La clula microbiana est constituida por agua en su mayor endosporas. El Mg forma complejos con el ATP y el Fe
molculas al periplasma Tipo de Clula Constituyentes parte y de la fraccin materia seca se distinguen los macro- forma parte de citocromos, es cofactor de enzimas y de
Protenas de enlace periplsmicas que unen nutrien- Procariota elementos: C, O, H, N, S, P, K, Ca, Mg, Fe, que la clula protenas transportadoras de electrones.
tes, interactan con protenas de transporte en la mem- eubacterias
toma en cantidades relativamente grandes (g/L en el me-
brana facilitando ingreso de nutrientes. G+ ptidoglicano, cidos teicoicos
dio de cultivo), mientras que los llamados micronutrientes El cuadro 2 resume los ingredientes fundamentales para
G- pptidoglicano y lipopolisacrido
se requieren en niveles muy bajos, del orden de los mg/L. el desarrollo de los organismos vivos y las formas qumi-
Los lipopolisacridos (LPS) son importantes componen- arqueobacterias pseudopeptidoglicano, glucopro- cas en que los microorganismos pueden tomarlos en la
tes de la pared Gram negativa, estn formados por lpi- tena polisacrido, protena El cuadro 1 presenta los distintos tipos de nutrientes re- naturaleza y en los medios de cultivo. El cuadro 3 presen-
dos e hidratos de carbono: 1) lpido A; 2) polisacrido cen- queridos para el desarrollo microbiano. ta la composicin media de una clula bacteriana.
tral y 3) cadena lateral (O). El lpido A contiene derivados Eucariota
algas celulosa, hemicelulosa, pectinas,
del azcar glucosamina y est unido a cidos grasos y Los 6 primeros macronutrientes integran importantes mo- Los microorganismos tambin requieren oligoelementos
slice (algunas)
fosfatos o polifostatos y se encuentra inmerso en la mem- hongos quitina, otros polisacridos, celu- lculas (hidratos de carbono, lpidos, protenas, cidos o micronutrientes, empleados en los medios en menor
brana externa. El resto de la molcula de LPS sobresale losa (en algunos) nuclecos), los restantes se encuentran en forma de ca- concentracin (mg/L), como el Mn, Zn, Co, Mo, Ni, Cu,
de la superficie. El polisacrido central (core) est unido protozoos ninguno o slice, carbonato de calcio tiones y pueden actuar como coenzimas de muchas enzi- etc.). A veces los contaminantes del agua, recipientes del
al lpido A. mas (K+). El Ca contribuye a la termoresistencia de las laboratorio, alcanzan a satisfacer las necesidades en es
Cuadro 2- Macronutrientes en la naturaleza y en los medios de cultivo

Gram+ peptidoglicano Gram-
peptidoglicano
Elemento Forma habitual Forma qumica usada en
en el ambiente los medios de cultivo
Carbono (C) CO2, compuestos orgnicos Glucosa, malato, acetato, piruvato, muchos
compuestos o mezclas de compuestos (extracto de
levadura, peptonas, celulosa, petrleo,etc)
Hidrgeno (H) H2O, compuestos orgnicos H2O, compuestos orgnicos membrana
membrana
Oxgeno (O) H2O, compuestos orgnicos H2O, compuestos orgnicos perimembrana
-
Nitrgeno (N) NH3, NO3 , N2, compuestos Inorgnicos: sales amoniacales, ntricas, N2 lipopolisacrido y protena
orgnicos con N, peptonas, etc. Orgnicas: aminocidos, bases nitrogenadas de
nucletidos, numerosos compuestos orgnicos con N Figura 2- Tipos de paredes procariotas
-3
Fsforo (P) PO4 KH2PO4, Na2HPO4
glucano

= -G-M-G- G-M-G red Gram positiva son los cidos teicoicos (polmeros de
Azufre (S) H2S, SO4 , sulfuros metlicos, Na2SO4, S2O3Na2, Na2S, compuestos orgnicos con S
L-ala glicerol y ribitol unidos por grupo fosfato). Aminocidos
compuestos orgnicos con S: peptonas
pptidos L-ala como la D-alanina y azcares como la glucosa se pueden
Potasio (K) K+, sales solubles KCl, KH2PO4 D-glu unir a los grupos glicerol o ribitol y al peptidoglicano por
Magnesio (Mg) Mg++, en solucin o como sales MgCl2, MgSO4 puente D-glu-NH2 enlaces covalentes con el OH seis del cido N-acetil
Sodio (Na) Na+ en solucin o como NaCl DAP D-ala cruzado murmico o a los lpidos de la membrana citoplasmtica

NaCl u otras sales de sodio L-lis (se denominan entonces cidos lipoteicoicos) Estn car-
D-ala DAP gli gados negativamente y contribuyen con esas cargas a
Calcio (Ca) Ca++ en solucin o como CaCl2
D-ala gli estabilizar la pared Gram positiva. No estn presentes en
CaSO4 u otras sales
D-glu gli bacterias Gram negativas y sus funciones no estn aun
Hierro (Fe) Fe++ o Fe+++ en solucin como FeS, FeCl3, FeSO4, soluciones de Fe quelatado con EDTA, o gli dilucidadas.
Fe(OH)2 u otras sales de Fe citrato, etc.
D-ala gli
Cuadro 3- Caractersticas del peptidoglicano
Cuadro 3- Composicin qumica media de una clula procariota -G-M-G- D-ala
* Cadenas de glicano
Molcula % peso seco molculas por clula clases diferentes a) Escherichia coli b) Staphylococcus L-lis - polmeros lineares de N-acetilglucosamina (NAG)
Total de macromolculas 96 24.610.000 2.500 (G- ) aureus(G+) y cido N-acetil murmico (NAM)
D-glu-NH2 - hidrlisis por lisozima
Protenas 55 2.350.000 1.850
* Entrecruzamiento peptdico
Polisacridos 5 4.300 2 L-ala - unin al cido N-acetil murmico
Lpidos 9,1 22.000.000 4 - contiene D y L aminocidos, inhibicin por anti-
-G-M-G biticos lactmicos (penicilina)
ADN 3,4 2,1 1
* Funciones
ARN 20,5 255.500 660 Figura 3- Esquema de la molcula de peptidoglicano - confiere forma a la clula, previene la lisis osm-
Total de monmeros 3,5 350 tica
Aminoc.y precursores 0,5 100 (cido D-glutmico, D-alanina y cido meso-diaminopim- - su porosidad permite el pasaje de nutrientes
lico) no estn presentes en las protenas. La cadena pep-
Azcares y precursores 2 50
tdica de 4 aminocidos D y L alternados se conecta a un La pared de una clula Gram negativa (figura 2) es ms
Nucletidos y precursores 0,5 200 grupo carboxilo del cido N-acetilmurmico (figura 4). compleja, con capa de 2 a 7 nm de grosor formada por
Iones inorgnicos 1 18 peptidoglicano (5-10% del peso total de la pared) y se
La penicilina acta inhibiendo la incorporacin de los ami- presenta en forma de gel, ms que como una capa com-
total 100%
nocidos al peptidoglicano. Otros componentes de la pa- pacta. Luego se encuentra la llamada membrana externa
0,9
tticos en el suelo enriqueciendo poblaciones escasas tos elementos. Integran normalmente enzimas y cofacto- de S hasta sulfatos. El Fe es asimilado en estado reduci-
0,8 clorofila a de ellas en una columna de vidrio, que se puede repro- res, tienen funcin cataltica y mantienen estructuras pro- do (Fe++) o en complejos orgnicos (EDTA-Fe).
0,7 carotenoide ducir en cualquier laboratorio. Se colocan barros o sedi- teicas. As, el Mo interviene en la fijacin del N2, en la
Absorbancia
0,6 mentos de estanques o lagos (inculo), con una fuente nitrato reductasa, el Co integra la vitamina B12, el Na es Los dems nutrientes son muy empleados en general
0,5 de materia orgnica (papel, almidn, azcares, etc.), requerido por muchas especies marinas. como sales solubles.
0,4 sulfato de sodio y anaerobiosis. Al cabo de un tiempo
Requerimientos de carbono: los microorganismos pre- Factores de crecimiento: muchos microorganismos, in-
0,3 con luz indirecta, se aprecian colores que evidencian el
sentan gran versatilidad en el empleo de sustancias car- cluso los auttrofos, requieren una o ms molculas org-
0,2 enriquecimiento logrado (figura 15). Actan primero bac-
bonadas. Por las fuentes de carbono que emplean se nicas para su desarrollo, ya que no pueden sintetizarla a
0,1 terias sulfatorreductoras hetertrofas que liberan sulfu-
clasifican en: partir de los nutrientes. Deben tomarlas completas del me-
0 ros que reaccionan con el hierro del suelo dando preci-
340 400 500 600 700 800 900 dio o bien sus precursores, a muy baja concentracin, como
longitud de onda (nm) pitado negro de sulfuro ferroso.
auttrofos: fuentes inorgnicas: CO, CO2 los micronutrientes. Ejemplos de ellos son: vitaminas (parte
o totalidad de cofactores de enzimas), aminocidos esen-
0,9 bacterioclorofila a Parte del sulfuro soluble es fuente de donadores externos hetertrofos: fuentes orgnicas muy variadas: azca- ciales para la sntesis proteca, bases pricas y pirimdi-
0,8 carotenoide de electrones para las bacterias fotosintticas, pigmenta- res, alcoholes, cidos grasos, hidrocarburos, polmeros cas (para la sntesis de cidos nuclecos) (cuadro 1).
0,7 das de verde y rojo (bacterias verdes y purpreas). Arriba
Absorbancia
como la celulosa, lignina.

0,6 se desarrollan algas. Muchos microorganismos son empleados para valorar can-
0,5 No existe ninguna molcula orgnica de origen natural tidades pequeas de factores de crecimiento, como la vi-
0,4 El aislamiento puede lograrse tomando muestras en la que no pueda ser empleada por un microorganismo. tamina B12, riboflavina. El microorganismo se desarrolla
0,3 columna con una pipeta, a la altura de los colores tpicos
0,2 Especies de pseudomonas pueden emplear ms de 100 en forma proporcional a la cantidad de factor de creci-
y sembrando en cajas de Petri cerradas y a la luz, a los miento agregado al medio de cultivo. Curvas patrones con
0,1
efectos de obtener colonias aisladas. compuestos diferentes de C orgnico. Desgraciadamen-
0 te, sustancias sintetizadas por el hombre como los plsti- estndares puros de la vitamina, permite efectuar las com-
340 400 500 600 700 800 900
cos, el DDT, muchos herbicidas, se degradan muy lenta- paraciones. Los bioanlisis microbiolgicos se emplean
longitud de onda (nm)
mente o no lo hacen (sustancias recalcitrantes). muchas veces a pesar de los avances en las determina-
Figura 14- Espectro de absorcin de la clorofila y de la ciones qumicas (Captulo 20).
bacterioclorofila. En el otro extremo de la escala, se encuentran bacterias
muy selectivas en el empleo de fuentes de carbono: las Un microorganismo se denomina:
metanotrficas, emplean el hidrocarburo metano, meta- prottrofo cuando emplea los mismos nutrientes que la
Cuadro 26- Bacterias fotosintticas anoxignicas nol, CO y algunas otras molculas con un slo C orgni- mayora de las cepas de su especie que existen en la
Anoxyphotobacteria co. Otras emplean CO2 y son los microorganismos pro- naturaleza. Pero esta bacteria puede mutar y requerir to-
ductores primarios de materia orgnica. mar del medio el nutriente para su desarrollo, se compor-
Purpreas no sulfurosas Flia I Rhodospirillaceae ta entonces como
gn. Rhodospirillum Requerimientos en N, P, S: los microorganismos pue-
Purpreas sulfurosas Flia II Chromatiaceae den emplear estos elementos a partir de las mismas fuen- auxtrofo para ese nutriente, como un aminocido, que
gn. Chromatium tes orgnicas de las que derivan el carbono, aunque usan se convierte en esencial. Estos microorganismos se usan
frecuentemente fuentes inorgnicas, como sales minera- mucho en estudios de gentica bacteriana.
Verdes sulfurosas Flia III Chlorobiaceae
gn. Chloorobium les solubles. El N lo usan desde fuentes inorgnicas redu-
cidas como el amonio (NH4+), pasando por el N-orgnico En resumen: las potencialidades metablicas de los mi-
(R-NH2), N2 (diazotrofos o fijadores de N2), NO3-. La fuen- croorganismos son muy variadas (cuadro 9), desde aque-
A modo de resumen el cuadro 26 se analizan los princi- llos prcticamente autosuficientes (fotolitotrofos), hasta los
te ms sencilla de asimilar la constituyen las sales de amo-
pales gneros de bacterias fotosintticas anoxignicas, muy exigentes, que requieren agregados de varios facto-
nio, ya que el N se encuentra en el mismo estado de oxi-
en el 27 se resumen los procesos generales de la fotosn- res de crecimiento, muchas veces contenidos en los ex-
dorreduccin que en los aminocidos. La clula emplea
tesis y en el 28 se comparan las propiedades de los siste- tractos de lavadura, de malta, de carne, de suelo, etc.
energa creciente al asimilar nitratos y nitrgeno molecu-
mas fotosintticos encontrados en microorganismos. Figura 15- Columna de Winogradsky. lar. El S puede ser nutriente como sulfuros (en general Entrada de nutrientes a la clula
Manchas negras de sulfuro ferroso, bacterias fotosintticas: txicos para la mayora de los microorganismos), S-org-
Antes de lograr su aislamiento en cultivo puro, Wino- sulfurosas purpreas y verdes y en la parte superior se En general los nutrientes deben ser transportados des-
nico (puentes sulfuro o disulfuro), S, formas inorgnicas de soluciones diluidas (suelo, aguas, alimentos) hacia
gradsky puso en evidencia procesos anaerobios fotosin- desarrollan algas.
la clula en contra de un gradiente de concentracin. La translocacin de grupos implica la introduccin de una Las figura 11 esquematiza el flujo de electrones en am- En el cuadro 25 se comparan ambos tipos de procesos.
Los nutrientes deben atravesar la membrana semiper- sustancia al interior de la clula luego de modificarla qu- bos tipos de fotosntesis, la 12 (Madigan et al., 2000) y la
meable por smosis, por los mecanismos conocidos micamente, el sistema de translocacin que mejor se co- 13 (Prescott et al.. 1999), muestran las estructuras celula- Cuadro 25- Energa y poder reductor en ambas
como: difusin facilitada, transporte activo y por translo- noce, es el del fosfoenolpiruvato, sistema fosfotransfera- res que albergan a los pigmentos fotosintticos y pigmen- fotosntesis
cacin de grupos. sa de azcares. Muchos hidratos de carbono son trans- tos accesorios en clulas procariotas y eucariotas. Poder reductor C energa
portados por este mecanismo. anoxignica
Microorganismos eucariotas sin pared o con orificios en
la misma incorporan nutrientes por endocitosis: pinoci- Importante es el papel que juegan los siderforos, mol- H2S CO2 ADP
tosis en el caso de sustancias en solucin (gotas) o fago- culas orgnicas de bajo peso molecular, capaces de formar Membrana fotosittica en lminas

complejos organo-metlicos con el ion frrico a los efectos (bacterias purpreas) S hv
citosis, sustancias particuladas (bacterias).

de transportarlo al interior de las clulas, donde una hierro SO4= (CH2O) ATP
El sistema ms comn entre las bacterias es la difusin reductasa lo reduce a in ferroso, asimilable por el micro- n
pasiva, proceso por el cual las molculas se desplazan organismo. El tema es relevante en el control biolgico de Membranas y vesculas individuales oxignica
desde una regin de alta concentracin a otra de menor microorganismos fitopatgenos, quienes compiten por ba- (clorobio) H2 O CO2 ADP
concentracin. Cuando intervienen protenas de mem- jos niveles de hierro disponible en los suelos, con los micro- (bacterias purpreas) hv hv

brana (permeasas) que se unen al sustrato para facilitar organismos antagonistas seleccionados e inoculados en las 1
/2O2 (CH2O) ATP
n
su difusin al interior de la clula se habla de difusin semillas en viveros, como Pseudomonas (captulo 17). Clorosomas unidos a la membrana
facilitada. plasmtica La figura 14 (Madigan et al., 2000) muestra la composi-
(bacterias verdes)
Clasificacin nutricional cin y espectro de absorcin de la clorofila a, tpica de los
El transporte activo permite el pasaje de molculas en
de los microorganismos eucariotas, la bacterioclorofila, de los procariotas. Se ob-
contra de un gradiente de concentracin, situacin muy
Bacterioclorofila asociada directamente serva el mayor espectro de absorcin en las bacterioclo-
comn en la naturaleza, con aporte de energa en forma a la membrana plasmtica
Los microorganismos se clasifican nutricionalmente por rofilas, que absorben adems en la regin azul del espec-
de ATP, lo que permite concentrar sustancias con inter-
la naturaleza de su fuente de energa, por la fuente princi- tro, luz de longitud de onda larga, cerca de 1000nm, no
vencin de protenas transportadoras que se unen a de-
pal de carbono y por la naturaleza de los donadores de Figura 12- Localizacin de pigmentos fotosintticos en visible al ojo humano (zona oscura, en pantanos, suelos
terminados solutos en forma muy especfica y forman un
electrones (cuadro 4). procariotas anegados).
poro en la membrana. Sustancias similares pueden com-
petir por la protena de transporte tanto en la difusin faci- El cuadro 5 presenta los tipos nutricionales ms comu-
litada como en el transporte activo. Las bacterias emplean nes, donde se aprecian organismos que emplean sustan- Membrana interna Membrana externa
tambin la fuerza motriz de protones (generada en el gra- Cloroplasto
cias muy simples, como minerales y CO2 y aquellos, ms Estroma
diente de protones en el transporte de electrones a nivel exigentes, con requerimientos de compuestos carbona- Tilacoide
de membrana) para dirigir el transporte activo. dos variados.
Los microorganismos presentan varios sistemas de trans- Resumiendo veremos ejemplos de algunos grupos:
porte para una misma sustancia, lo que les brinda gran Fotoautolitotrofos Algas, bacterias fotosintticas sulfu-
ventaja competitiva en el ambiente. rosas, cianobacterias ATP
Estroma
Piridin
nucletido reductasa
Cuadro 4 Clasificacin nutricional de los microorganismos ADP + Pi 3H+ ATP
CF1
Fotones Complejo citocromo bf Fotones 2H+ + sintetasa
Fuentes de energa (fototrofos emplean la luz 8H+ 2NADP+ 2NADPH
(quimiotrofos reacciones qumicas con sustratos: orgnicos e-
Fd FAD
inorgnicos QA QB 4PQH2 e- Cit b6 FeS
Feofitina e- A
FeS
Fuente principal de carbono (auttrofos CO2 4PQ
e- P680 Cit f
(hetertrofos compuestos inorgnicos Mn e- e- P700
CGO 8H + PC - Cu+ 3H+
PC - Cu2+ Fotosistema I
2H2O O2 + 4H+ Fotosistema II
Fuente de donadores de electrones/H+ (orgnicos organotrofos Lumen
(molcula que se oxida) (inorgnicos litotrofos Figura 13- Localizacin de pigmentos fotosintticos en eucariotas
oxgeno y 2 ATP y 2 NADPH+ por vuelta y emplea agua El tipo 2) es realizado por las bacterias fotosintticas sul- Cuadro 5- Ejemplos de tipos nutricionales microbianos
como donador externo de electrones (litotrofos). Es con- furosas purpreas y verdes: Chromatiaceae y Chlorobia-
siderada ms reciente en la evolucin en relacin a la ceae (gneros ms conocidos: Chromatium y Chlorobium) Tipo Fuente Fuente de Donadores Ejemplos
anoxignica. Los microrganismos poseen dos fotosiste- distinguibles por sus pigmentos. Usan H2S o H2 como do- de energa carbono de electrones
mas: I generador de ATP y poder reductor y el II que libera nadores de electrones. El S acumulado en las clulas
Fotoautolitotrofos luz CO2 Agua, sulfuros, H2 Algas, cianobacterias
O2 consecuencia de la fotlisis del agua (figura 11). puede ser empleado como fuente de energa cuando cre-
(FAL) Bacterias fotosintticas
cen en quimiotrofia, sin luz. Crecen en barros o aguas en sulfurosas
El cuadro 23 presenta a los microorganismos fotosin- donde hubo anaerobiosis (produccin de H2S).
tticos, eucariotas y procariotas. Es curiosa la posicin Fotoautoorganotrofos luz CO2 cidos orgnicos Bacterias fotosintticas
de las cianobacterias, que poseyendo estructura celu- El tipo 3) y 4) lo realizan integrantes de una sla familia de (FAO) no sulfurosas
lar procariota han evolucionado en la funcin fotosin- bacterias fotosintticas no sulfurosas: Rhodospirillaceae
Fotoheteroorganotrofos luz Materia orgnica Materia orgnica Algunas bacterias
ttica, al emplear el agua como donador externo de (gnero Rhodospirillum). No pueden emplear H2S ni H2 (FHO) (cidos) (cidos) fotosintticas no sulfurosas
electrones. como donadores de electrones, pero si molculas orgni-
cas simples, como cidos o alcoholes. El tipo 4) no puede Quimioheteroorganotrofos Reacciones Materia orgnica Materia orgnica La mayora de los
reducir el CO2 (la forma ms oxidada del carbono) con la (QHO) qumicas microorganismos
Cuadro 23- Diversidad de organismos
energa de la fotosntesis, la que slo le alcanza para re-
fotosintticos Quimioautolitotrofos Reacciones CO2 NH4+, S=, H2, etc. Pocas bacterias
ducir molculas de estado de oxidacin intermedio (ci- (QAL) qumicas tpicas y archeae
eucariotas procariotas
dos) hasta carbohidratos.
plantas superiores cinaobacterias Son fotoheteroorganotrofas.
algas filamentosas bacterias sulfurosas Fotoautoorganotrofos Bacterias fotosintticas no sulfu- Para el desarrollo microbiano es necesario tener en cuen-
y unicelulares verdes y purpreas La mayora de las bacterias fotosintticas anaerobias se rosas (emplean sustancias orgnicas simples como do- ta adems de los nutrientes, las llamadas condiciones
(diatomeas, euglenoides, bacterias no sulfurosas desarrollan en ambientes anegados, barros, capas sub- nadores de electrones en la fotosntesis) de cultivo: el pH, presin osmtica, temperatura de in-
dinoflagelados) verdes superficiales de suelos, sucediendo a las bacterias sulfa- cubacin, nivel de oxgeno, etc. a niveles adecuados,
y purpreas torreductoras, que liberan cido sulfhdrico en anaerobio- Quimioautolititrofos Bacterias oxidantes del amonio, del sin las cuales el microorganismo no se desarrollar o lo
sis. Tambin la mayora es capaz de fijar N2, por lo que nitrito, del azufre, del hierro, del hidrgeno (aerobias), har mal.
constituyen una importante herramienta de estudio; el flu- desnitrificantes auttrofas (anaerobias). Importantes en los
La fotosntesis anoxignica (tipos 2, 3 y 4) es ms pri- ciclos biogeoqumicos. Condiciones para el crecimiento microbiano
jo electrnico de la fotosntesis es capaz de reducir CO2 y
mitiva, es conocida como fotosntesis bacteriana, o ccli- Se toman en cuenta:
N2 en anaerobiosis.
ca, los electrones de la clorofila bacteriana, o bacterioclo- Quimioheterotrofas La mayora de los microorganismos Los medios de cultivo, que aportan los nutrientes, como
rofila, que absorbe en el infrarojo (700-800nm), vuelven a FOTOSISTEMA I usan materia orgnica como fuente de energa, de carbo- el agua, fuentes de E, C, N, S, P, etc., los micronutrientes,
ella por lo que genera slo 1 ATP por vuelta de los electro- A P700+ B no y donadores de electrones (la sustancia que se oxida). empleados en baja concentracin (Cu, Cd, Zn, etc. y los
nes. Se realiza en anaerobiosis y surgi cuando en la -1.5 Fd
En general la misma sustancia puede cumplir todas estas que actan como factores de crecimiento (vitaminas, ami-
800+
atmsfera no haba oxgeno. El NADP+ es reducido por BI
funciones. Todos los hongos, protozoos y la mayora de nocidos esenciales, bases de cidos nucleicos).
NADP
FOTOSISTEMA II
flujo inverso de electrones o directamente por los dona- P680+
NADP NADPH, H
las bacterias pertenecen a esta categora.
-1.0
dores externos de electrones en reaccin independiente Feofitina Las condiciones de cultivo: temperatura, radiaciones,
PQ Q
de la luz (cuadro 24). NADPH, H
luz, aireacin, presin osmtica, que afectan el desarrollo
CIT. b/f
PC CIT. bc Medios de cultivo de los microorganismos.
0.0 P700
Cuadro 24- Reduccin de NAD+ en bacterias CIT. c Un gran desarrollo en la microbiologa se ha logrado lue- Clasificacin de los medios de cultivo
verdes y purpreas 800
go del aislamiento y cultivo de los microorganismos en el Los medios de cultivo (cuadro 6) pueden ser de origen na-
P680
H2O laboratorio. Esto se logr a partir de su siembra en los tural, como jugos vegetales, leche, etc. o artificiales, formu-
1.0 Donadores externos
ATP ADP + Pi O2 + H+ de electrones llamados medios de cultivo: conjunto de nutrientes que lados en el laboratorio. Por su naturaleza fsica, se usan
H2S, S + NAD+
=
S, SO4 + NADH + H
+ Complejo
Mn
permiten el desarrollo de microorganismos particulares. lquidos para propagar un microorganismo, para el estudio
ac. orgnicos fumarato Todos contienen agua y fuentes de energa, C, N, S, Fe, de aspectos metablicos, etc., slidos, con sustancias soli-
succinato Figura 11 Esquemas de las fotosntesis oxignica (A) y de la P, etc., micronutrientes, factores de crecimiento y aditivos dificantes, en general orgnica como agar-agar al 2%, o
anoxignica (B) como colorantes, antibiticos, sales, etc. minerales, como el slico-gel.
Cuadro 6- Clasificacin de los medios de cultivo Cuadro 20- Reduccin de los sulfatos masa microbiana que lo hace apto para uso como me-
jorador de suelos.
Por su origen Bacterias anaerobios estrictas, G-, bacilos con flagelos
naturales (derivados de tejidos, leche, vegetales, sangre, etc. polares Cuadro 22- Reduccin de iones frricos
artificiales (sintticos, de composicin qumica conocida Hetertrofas
= = (ferrireduccin)
(complejos, de composicin no definida, con: peptonas, extracto de carne, CH3CH2OH + SO4 CH3COOH + 2CO2 + S + 2H2O
de levadura, de suelo, sangre +++ ++
Auttrofas MO + Fe CO + H2O + Fe (soluble)
= = 2
Por su naturaleza fsica H2 + SO4 2H O + S
lquidos (en tubos, matraces, en la industria
2 Complejos organo-metlicos
+++
Los sulfuros (H2S, voltil y txico para vegetales Siderforos + Fe el complejo entra a la
slidos (solidificantes como agar-agar al 2%, slico-gel (inorgnico) ++
(precipitan con metales FeS (insoluble) clula y se reduce en el citoplasma (Fe asimilable)
semislidos (0,2% de agar
(reductasa-frrica)
Por su uso en el laboratorio
bsicos o fundamentales: permiten el desarrollo de microorganismos hetertrofos corrientes. Ej: agua, sales, ClNH4, Corrosin anaerobia de metales
Aceptor carbonatos (CO2) Metanognesis =
4Fe + SO4 + H2O SFe + 3Fe(OH) (soluble) + OH
-
glucosa 2
Proceso muy importante en la naturaleza, permite la de-
mejorados o enriquecidos, ejemplo: caldo simple (extracto de carne (5g), NaCl (5g), peptona (10g), agua 1L, pH 7,2
gradacin de molculas orgnicas hasta la produccin de
diferenciales: colorantes distinguen colonias por cambios de pH, potencial redox. Ejemplo: agar simple con glucosa y
azul de bromotimol gas metano (cuadro 21). Este proceso es muy aplicado en el tratamiento de resi-
selectivos: permiten el desarrollo de un tipo microbiano. Ejemplo: nitrificantes (agua, sales, ClNH , pH neutro, oscuridad duos de tambos (estircol), restos de cosechas y en la
4
Cuadro 21- Reduccin de los carbonatos (CO2) depuracin de efluentes de fbricas, en anaerobiosis y es
Hasta la introduccin del agar-agar los medios se solidifi- El cuadro 7 muestra medios de complejidad creciente, los tratado en el captulo 21.
caron con una protena, la gelatina, con el inconveniente medios 2 al 5 llevan los nutrientes del medio 1 ms lo Hidrogenotrfica: CO2 + 4H2 CH + 2H2O (auttrofas)
4
de que muchos microorganismos producen proteasas que sealado en el cuadro. Se aprecia que las capacidades Acetilclstica CH3COOH CO + CH El cuadro 22 resume la intervencin del hierro en proce-
2 4
la hidrolizan, licuando al medio, inicialmente slido. El agar- metablicas de los microorganismos decrecen desde los Methanosarcina, Mathanobacillus, Methanococcus sos redox anaerobios, que lleva a los iones frricos inso-
agar es un polmero de alto peso molecular, aislado de un que se pueden desarrollar en el medio 1 (agua y sales, Metilotrfica: usan metilamina, metilsufuros (hetertrofas) lubles y no aprovechables por las plantas a formas redu-
alga marina. Funde a los 100C y se mantiene en estado sin C ni N combinados) hasta el medio 5 (complejo, con cidas ferrosas, solubles (captulo 12).
lquido hasta aproximadamente 45C lo que permite re- extracto de levadura como fuente de N - aminocidos y
El CO2 (carbonatos) acta como donador y el H2 como
partirlo en cajas de Petri, antes de su solidificacin. factores de crecimiento (vitaminas, aminocidos, precur-
aceptor de electrones (autotrficas)
sores de los cidos nucleicos). Fotosntesis
Se usan solidificantes inorgnicos, como el slico gel, pro-
En la metanognesis acetoclstica, las bacterias quimio-
ducido por la unin de soluciones de silicato de sodio o de En resumen los medios pueden ser: Constituye un proceso redox de conversin de la energa
hetertrofas pueden desdoblar el cido actico en meta-
potasio con cido clorhdrico de densidades adecuadas. no selectivos, o de amplio espectro que permiten el de- lumnica en energa qumica (ATP). La energa de la luz
no y CO2.
Luego de gelificacin y repetidos lavados para eliminar el sarrollo de muchos microorganismos. Como se supone, se emplea para reducir CO2 o compuestos orgnicos
cido restante, se pasan por agua hirviendo y luego se aislar la mayora de los organismos es tarea imposible. La mayora de las bacterias metanognicas son Arche- menos reducidos a molculas orgnicas (azcares), por
impregnan con los nutrientes. Es empleado para aisla- Se denomina microflora total al conjunto de los hetertro- obacterias, o sea las bacterias ms primitivas, que slo organismos aerobios y anaerobios.
miento de organismos auttrofos, como los nitrificantes. fos capaces de crecer en medio con extracto de suelo y crecen en ambientes desprovistos de O2, muchas veces
una fuente de carbono y energa, como la glucosa. acta ms de una especie, sinrgicamente y resulta difcil Tipos de fotosntesis en los microorganismos
Los medios slidos se usan en tubos o cajas de Petri, su aislamiento en cultivo puro.
para el aislamiento, purificacin y numerosos tipos de es- Otros medios son ms aptos para el desarrollo de los hon- 1) CO2 + 2H2O (CH2O)n + H2O + O2 (oxignica)
tudios. Los semislidos, llevan baja concentracin de so- gos: sales minerales, sacarosa, nitratos, acidificado por Una importante aplicacin de este proceso microbiano 2) CO2 + H2S (CH2O)n + S (anoxignica)
lidificante, por ejemplo con 0,2% de agar y son emplea- cidos orgnicos y con antibiticos que inhiben la prolife- lo constituye la biotransformacin de residuos orgni-
dos para estudios de microorganismos microaeroflicos racin de bacterias. Los actinomicetes pueden atacar nu- cos en: 3) CO2 + CH3COOH (CH2O)n + H2O
(cuadro 7). Los medios selectivos son muy tiles para el trientes ms complejos que las bacterias, como casena, 4) CH3COOH (CH2O)n + H2O
aislamiento de miroorganismos con exigencias particula- quitina, almidn, cidos hmicos, etctera. biogs (mezcla de gases donde predomina el metano,
res, como los autotrfos (medios sin C-combinado), fija- con H2, CO2, etc) y
La oxignica (tipo 1) es la realizada por los vegetales y
dores de N2 (medio sin N-combinado), otros medios lle- selectivos, o de espectro limitado, estn formulados biofertilizante un resto no contaminante que contiene entre los microorganismos por las algas (protistas supe-
van antibiticos, sales biliares, etc. para evitar el desarro- para favorecer el desarrollo de un grupo particular de la fraccin lignocelulsica de los restos orgnicos y bio- riores) y las cianobacterias (protistas inferiores), libera
llo de organismos no deseados. microorganismos a expensas del resto de la poblacin.
mos a nivel de los citocromos, con lo cual el rendimiento tadoras de electrones para la oxidacin del mismo sus- Cuadro 7- Medios de cultivo de complejidad creciente
energtico no supera los 2-3 o algo ms de moles de ATP trato: una aerobia, que le rinde ms energa y otra anae-
por mol de sustrato oxidado. Las coenzimas deben ser robia, ms corta, que rinde entre 2 y 3 ATP por mol de Componentes comunes componentes adicionales
reoxidadas por flujo inverso de electrones con gasto de glucosa. Medio 1 Medio 2 Medio 3 Medio 4 Medio 5
ATP (figura 10). Estos metabolismos son muy antiguos y
poco eficientes. Agua, 1L
-0,32V
Cuadro 19- Reduccin de los nitratos K2HPO4, 1g NH4Cl, 1g NH4Cl, 1g NH4Cl, 1g
+ +
NAD NADH + H KH2PO4, 1g glucosa glucosa glucosa
Bacterias anaerobias facultativas: Pseudomonas, Bacillus,
Spirillum, Micrococcus MgSO4.7H2O, 20mg cido nicotnico extracto de
Hetertrofas 100mg levadura, 5g
- -
CH3COOH + NO3 CO2 + N2 (N2O) + OH
ADP + P1 FeSO4.7H2O, 10mg
Flavoprotena Sustrato variado: productos de degradacin de polmeros:
ATP celulosa, pectinas, almidn Micronutrientes: Mn,
Mo,Cu,Co,Zn, como sales
e= Auttrofas (0,02-0,5mg/L de c/u)
NO2- Citocromos = - = +
S, S2O3 + NO3 + H2O SO4 + N2 (N2O) + H
-
H2 + NO3 N2 (N2O) + H2O As, la puesta en evidencia de los grupos fisiolgicos - por enriquecimiento previo: si la poblacin es baja
NO3-
Cit a1 Thiobacillus denitrificans, nico representante del gnero conjunto de organismos taxonmicamente a veces no re- se inocula la muestra en un medio selectivo lquido y
con metabolismo anaerobio lacionado, pero que presentan la misma aptitud para efec- por libre competencia predominarn los grupos capa-
ADP + P1 Hidrogenomonas agilis, Micrococcus denitrificans tuar reacciones de biodegradacin o de biosntesis, como ces de emplear los sustratos. Luego de sucesivos pa-
Cit a3 Condiciones para maximizar el proceso los celulolticos, los amonificantes, etc., se realiza por siem- sajes por medio fresco se logra el aislamiento sem-
ATP alto nivel de donadores de electrones (de preferencia bra en medios selectivos apropiados. brando en la superficie del mismo medio, pero slido.
orgnicos)
alto nivel de de nitratos Los medios se hacen selectivos por:
anaerobiosis Siembra y aislamiento 1. contener un sustrato especfico, como fosfato inso-
1/2O2 H2O luble, celulosa, sales de amonio como nica fuente de
Siembra: es colocar un microorganismo en un medio apro-
+0,82V nitrgeno y energa, N2, etc.
Como los nitratos se forman en aerobiosis, una alternan- piado para que se desarrolle.
Figura 10- Flujo inverso de electrones para reducir cia de perodos de aerobiosis y de anaerobiosis (lluvias y 2. cambio del pH, la acidificacin inhibe el desarrollo
coenzimas (NAD, FAD) anegamiento seguidos de aireacin en suelos) estimula Se realiza con fines variados: aumentar el nmero de mi-
de la mayora de los neutrfilos y se posibilita el creci-
mucho este proceso que resulta muy importante en la croorganismos en medio slido o lquido, para obtener bio-
miento de especies resistentes (Lactobacillus, Thio-
depuracin de aguas altamente contaminadas: el nitrge- masa microbiana para uso industrial, preparar inoculan-
bacillus, etc.).
Aceptor nitratos (desnitrificacin) no orgnico se mineraliza a nitratos en aerobiosis y se tes biolgicos, obtener metabolitos de inters. La siembra
Proceso perjudicial para las plantas ya que utiliza a desnitrifica volatilizndose a la atmsfera como N2 por puede realizarse para obtener cultivos puros, entonces 3. con sustancias inhibidoras selectivas: actidiona,
los a los nitratos, que se reducen a N2 que se pierde en respiracin anaerobia. se habla de aislamiento. antibiticos, p-nitroitrobenceno, que inhibe a la mayora
la atmsfera pero el proceso es benfico para el am- de los hongos, pero no a Fusarium sp.
Aislamiento: obtencin de cultivos puros, en general mi-
biente, ya que es la forma de eliminar los nitratos (txi- Aceptor sulfatos (sulfatorreduccin) croorganismos derivados de una sola clula (clon).
cos para el hombre y animales) hacia la atmsfera. La Este proceso es realizado por un grupo de bacterias anae- 4. modificando las condiciones de incubacin (altas
desnitrificacin cierra el ciclo del nitrgeno en la natura- robias estrictas, es decir que slo pueden crecer en anae- temperaturas, por ejemplo) se facilita el desarrollo de
El aislamiento puede ser:
leza (captulo 10). robiosis. Los gneros ms conocidos son Desulfotoma- termfilos, la anaerobiosis inhibe a los aerobios, etc.
culum, Desulfovibrio (cuadro 20). directo: con ayuda de ansa se siembra la superficie del Estos procedimientos son muy tiles para aislar bacte-
La desnitrificacin hetertrofa (cuadro 19) es la ms medio slido. Cuando la densidad es alta (como es el rias difciles de identificar por simple examen micros-
difundida y es realizada por bacterias capaces de rea- El proceso perjudica a las plantas que emplean sulfatos, caso de la mayora de los hetertrofos) se logran colo- cpico. En cambio, en otros grupos de protistas como
lizar la reduccin desasimilativa de los nitratos, en pero es favorable en la depuracin de cursos de aguas nias aisladas. La ayuda de micromanipuladores per- hongos y algas, la diversidad morfolgica facilita su re-
ausencia de O2. Estas bacterias son anaerobias fa- contaminadas, pues volatiliza formas combinadas de azu- mite aislar bajo el microscopio una clula o propgulos conocimiento.
cultativas, es decir que poseen dos cadenas transpor- fre, como gas H2S (captulo 12). claramente visibles como hongos muy pigmentados, pero El cuadro 8 resume principios de aislamiento para nume-
resulta ms difcil en el caso de las bacterias. rosos microorganismos.
Cuadro 8- Tcnicas de enriquecimiento para aislar bacterias de la naturaleza CH3CH2OH + O2 COOH CH ATP se acopla a la oxidacin del donador de electro-
3
(preparacin de vinagre) nes y la energa de reduccin se obtiene directamente a
Fototrfas a la luz, principal fuente de carbono: CO2 etanol cido actico partir del compuesto inorgnico, si tiene potencial redox
aerobiosis suficientemente bajo, o por reacciones de transporte in-
organismos enriquecidos inculo Estas respiraciones poseen importantes aplicaciones bio- verso de electrones.
tecnolgicas por |os productos formados, cidos glucur-
N2 como fuente de N cianobacterias agua de pozo, lodos, tierra hmeda a la luz
nicos, cido actico, etc. El cuadro 18 resume los potenciales redox en estas respi-
anaerobiosis raciones que indica que varios compuestos inorgnicos
H2, c.orgnicos, N2 H2S bacterias purpreas lodos ricos en sulfuros Con sustrato inorgnico que pueden dar al oxidarse con el O2, energa suficiente
-
donador de e no sulfurosas Proceso slo realizado por bacterias quimioautotrficas para la sntesis de ATP.
bacterias sulfurosas que pueden generar energa en la oxidacin de compues-
purpreas y verdes tos minerales, en aerobiosis, Estas reacciones estn aco- Cuadro 18 - Produccin de energa a partir de la
pladas con la reduccin del CO2, mediante el ciclo de oxidacin de varios donadores inorgnicos de
Quimiautolitotrficas en la oscuridad: fuente de C (CO2) Calvin al igual que en la fase oscura de la fotosntesis: electrones
aerobiosis
donador de e
-
aceptor de e
-
organismos inculo Reaccin G (kJ/reaccin)
6 CO2 + 18 ATP + 12 NADPH
- +
NH4
+
O2 Nitrosomonas tierra, lodos C6H12O6 + 18 ADP + Pi + 12 NADP+ HS + H + 0,5O2 S + H0 -203,2
2
= +
- S + 0,5O2 + H2O SO + 2H -589,1
NO2 O2 Nitrobacter aguas servidas +
4
- +
NH4 + 0,5O2 NO + 2H + H O -260,2
H2 O2 bacterias del H2 biodigestores anaerobios Reconocemos 5 grupos de respiraciones aerobias con -
2
-
2
NO2 + 0,5 O2 NO3 - 75,8
= sustrato inorgnico (cuadro 17). La energa que liberan ++ + +++
H2S, S, S2O3 O2 Thiobacillus spp suelos estas reacciones es escasa, ya que los electrones entran Fe + H + 0,25 O2 Fe + 0,5 O - 71,2
2
+3 ++
Fe , pH bajo O2 T. ferrooxidans suelos a nivel de los citocromos a y b liberando entre 1 y 2 ATP. En Fe se calcul a pH 2-3, las otras a pH 7,0 - Los datos
anaerobia
Como se aprecia las cadenas son ms cortas que en las son valores promedios a los efectos de comparacin.
= -
respiraciones aerobias y las coenzimas NADH son reoxi-
S, S2O3 NO3 T. denitrificans suelos, lodos dadas mediante un transporte inverso de electrones, con
H2 CO2 metanognicas biodigestor, lodos, rumen consumo de energa (figura 10). Su rol puede resultar muy importante en la naturale-
- za por la liberacin de iones fundamentales para las
H2 NO3 Paracoccus denitrificans plantas: nitratos, sulfatos. La oxidacin del hierro con-
Cuadro 17- Bacterias quimioauttrofas aerobias
duce a la formacin de Fe(OH)3 insoluble, indisponi-
Quimiorganotrficas en la oscuridad, fuente de C compuestos orgnicos
Oxidantes de Ecuacin (ATP) Grupo ble para los cultivos. Esta sustancia produce obstruc-
aerobiosis, respiracin aerobia
Fisiolgico ciones en las caeras de hierro atacadas por las fe-
-
componentes aceptor de e organismos + -
rrobacterias.
+ amonio NH4 + 1,5O2 = NO2 + H20 Nitritantes
lactato, NH O2 Pseudomonas fluorescens - - +
4 nitrito NO2 + 0,5 O2 = NO3 + H Nitratantes Respiraciones anaerobias
vegetacin en descomposicin pasteurizar (80C) para enriquecer en Bacillus = = = =
Constituyen procesos realizados solamente por protistas
+
azufre (H2S, S, S2O3 ,S3O6 ) + O2 = SO4 Sulfooxidantes
almidn, NH O2 Bacillus polymyxa, otros Bacillus spp ++ +++ inferiores (bacterias) en anaerobiosis. Los distintos tipos
4 hierro Fe + O2 = Fe + H2O Ferroxidantes
etanol (4%)+ 1% O2 Acetobacter, Gluconobacter
se presentan en la figura 9. El flujo de electrones en las
hidrgeno H 2 + O2 = H2O Oxidantes del H2 respiraciones, sus cadenas transportadoras de electrones
extracto de levadura (CTE) se aprecia en la figura 4.
pH 6, hidrocarburos (ej.aceite mineral), Estas bacterias crecen por lo tanto muy lentamente, su
amonio O2 Mycobacterium, Nocardia
tiempo de generacin es alto y la turbidez en medios de Los rendimientos energticos, son muy superiores en las
celulosa, amonio O2 Cytophaga, Sporocytophaga cultivo es apreciable luego de ms de 3 semanas de cre- respiraciones aerobias con sustratos orgnicos.
azcares, N2 O2 Azotobacter cimiento. En los litotrofos la generacin de ATP es en prin-
cipio similar que en los organotrofos, excepto que los do- Las cadenas transportadoras de electrones en las respi-
nadores de electrones son sustancias inorgnicas. As, el raciones anaerobias son ms cortas, entrando los mis-
RESPIRACION
Compuestos orgnicos Flujo de C anaerobiosis, respiracin anaerobia

CO2 -
componentes aceptor e Organismos, inculo (tierra, lodo, sedimentos de lagos)
Flujo de e-
comp. org. cido orgnico KNO3(2%) Pseudomonas (especies desnitrificantes)
CO3-
- +++ =
O2 NO3 Fe SO 4 extracto de levadura KNO3(10%) Bacillus
Respiracin aerobia Respiracin anaerobia
cidos orgnicos Na2SO4 Desulfovibrio, Desulfotomaculum
Compuestos inorgnicos CO2
NH4+ , NO2- , S= , Fe++ , H2 Flujo de C CH3OH Na2CO3 Methanosarcina barkeri
Flujo de e- CH3NH2 KNO3 Hyphomicrobium

Lacobacillus Biosntesis
(Ciclo de Calvin) anaerobiosis, fermentacin
O2 SO4= NO3- Fe+++
glutamato Clostridium lodo, sedimentos
histidina Tetanomorphum vegetales en descomp., lcteos, rumen, aguas servidas
Figura 9- Flujos de carbono y electrones en las respiraciones almidn, amonio Clostridium spp
almidn, N2 C. pasteurianum
Respiraciones aerobias glucosa,

Streptococcus extracto de
Con sustrato orgnico
levadura, pH 5 bacterias del cido lctico,
Los microorganismos son capaces de respirar molcu-
Lactobacillus
las orgnicas de naturaleza muy diversa, en orden de- Streptococcus pastos, tambos, suelos
creciente de empleo se pueden sealar: azcares, alco-
holes, protenas, aminocidos, cidos orgnicos, hidro-
carburos, almidn, pectinas, celulosa, lignina, pesticidas. En resumen: la prctica de aislamiento tiene por objeto 2) Seale: ejemplos de microorganismos auto y hetero-
La presencia de una cadena transportadora de electro- la obtencin de cultivos puros, formados por la progenie trficos, asi como aquellos de mayor capacidad biosin-
nes (CTE) que incluye varias molculas como NAD, FAD, o clon de una sola clula, en general en forma de colo- ttica. Cuales son los ms distribuidos en la naturale-
Leuconostoc citocromos y culmina en el O2, es caracterstica de este nia a partir de una clula. Las colonias se describen en za?
proceso. La degradacin de un mol de glucosa por esta funcin de su: tamao, forma, borde, elevacin, color,
Figura 8- Bacterias lcticas va rinde 38 ATP, luego del acople con el ciclo de los olor, que ayuda en la identificacin (caracteres cultura- 3) Complete el siguiente cuadro indicando la forma
cidos tricarboxlicos. les en medio slido). A partir de colonias aisladas se rea- qumica en que los principales elementos se usan
Todos los organismos que la realizan son quimiotrofos liza un examen microscpico (morfologa, coloracin de como nutrientes a vegetales, animales y microor-
ya que obtienen la energa de reacciones redox. Segn C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O (647 kcal/mol) Gram) que brindan los caracteres morfolgicos y tinto- ganismos
la naturaleza de los aceptores de electrones se distin- riales. Las colonias se reaislan por repique en medio no
guen dos tipos de respiraciones: aerobias y anaerobias. Esta es una respiracin aerobia completa, ya que el sus- selectivo para asegurarse su pureza. Elemento vegetales animales microorganismos
trato es oxidado completamente a CO2 y agua, liberando C
En cualquiera de los casos los donadores de electrones toda la energa de la molcula. Los sustratos orgnicos N
pueden ser orgnicos (lo ms frecuente y eficiente) o in- son degradados muy rpidamente por esta va. S
orgnicos. Preguntas de repaso P
Existen casos en los que los organismos carecen de enzi- Fe
La figura 9 relaciona los sustratos orgnicos e inorgni- mas del ciclo de Krebs y no pueden llevar el sustrato a 1) Conceptos y ejemplos de:
cos con los aceptores de electrones inorgnicos, en los Nutriente Ca
CO2, son las respiraciones con sustrato orgnico incom-
distintos tipos de respiraciones. Medio de cultivo Mn
pletas:
Condiciones de cultivo Micronutrientes
4) Clasifique nutricionalmente a los siguientes microorga- Los mecanismos de biosntesis de distintas macromol- organismo debe oxidar gran cantidad de sustrato para Bacterias acidolcticas
nismos culas, como hidratos de carbono, lpidos, protenas, ci- lograr desarrollarse. Son quizs unas de las bacterias ms estudiadas y culti-
A B C D dos nucleicos, no sern analizadas ya que los procesos vadas por su importancia econmica ya que participan en
C-CO2 + - + + no difieren mayormente en la escala biolgica. En efecto, las transformaciones de un alimento tan importante como
C-orgnico - + - - el equipo enzimtico y los mecanismos bioqumicos sue- la leche y son responsables de aplicaciones biotecnol-
2ADP 2ATP
Luz + - - + len ser similares en una bacteria y en organismos supe- gicas en derivados de la leche: leches agrias y yogur, que-

Reacciones qumicas - + + - riores, incluido el hombre.
sos. La produccin de cido lctico hace que el producto
C6H12O6 2 CH3COCOOH
Donadores de electrones H2O orgnico NH4+ c. actico se estabilice, evitando el deterioro microbiano. Este pro-
(cido pirvico)
Clasificacin: ceso se emplea tambin en la conservacin de pasturas y

Cuadro 10- Estrategias bioenergticas en granos en el proceso conocido como ensilaje, tema que
2 NAD 2NADH deshidrogenasa
Ejemplos: microorganismos ser tratado en el captulo 18.
lctica
5) Relativa al cuadro 7
i)Clasifique los medios de cultivo (1...5) por su empleo en Fermentaciones La figura 8 (Prescott et al., 1999) presenta caractersticas
NADH
el laboratorio Donadores y aceptores de electrones compuestos or- de representantes de los tres gneros ms distribuidos:
ii) Seale los factores de crecimiento presentes en los gnicos Lactobacillus, Streptococcus y Leuconostoc. En base a la
Rinde poca energa (E) y nada de poder reductor. Ej: composicin de (G+C)% en el ADN y el tipo de fermenta-
medios y su rol en la clula NAD

ii) Cmo hara diferencial al medio 3? fermentaciones lctica y alcohlica cin que realizan, en esta familia se incluyen los gneros:
2 CH3CHOHCOOH
iv) Cmo trabajara en anaerobiosis con el medio 4? Lactobacillus, Streptococcus y Leuconostoc, Pediococcus,
(cido lctico)
v) Rol del par fosfato en los medios de cultivo Respiraciones Enterococcus, y Lactococcus. Se encuentran muy distri-
Donadores de e- pueden ser orgnicos o inorgnicos, Figura 6- Fermentacin homolctica buidas en la naturaleza: en pastos, cuerpo del ganado,
los aceptores son en general inorgnicos: leche. Algunas especies son habitantes del intestino y mu-
Metabolismo bioenergtico O2 (aerobia) cosas y pueden encontrarse representantes patgenos.
= = - +++
en los microorganismos CO3 , SO4 , NO3 , Fe (anaerobia) Se cree que es el metabolismo bioenergtico ms anti-
guo, cuando no exista el O2. Los microorganismos fer- Por ms detalles y aplicaciones biotecnolgicas de estas
El cuadro 9 es un clsico esquema sobre la utilizacin de Fotosntesis mentadores se han adaptado a las nuevas condiciones bacterias, se remite al captulo 19.
los nutrientes con el objeto de obtener energa o con fines Transformacin de energa lumnica en qumica por fo- de la atmsfera, realizando el mismo proceso que sus
biosintticos. Se abordarn distintos aspectos relaciona- tofosforilacin ancestros. Otras fermentaciones producen molculas de gran va-
dos a los mecanismos de obtencin de energa por los Oxignica (la superior), libera O2 lor econmico: acetona, butanol, propanol, cido acti-
microorganismos, que como todo organismo, emplean los Anoxignica (bacterias anaerobias, no liberan O2) co, butrico, H2, etc. Y muchas veces resulta ms eco-
glucosa glucosa-6P 6P-gluconato nmica su produccin va fermentaciones que por snte-
tres tipos de procesos: fermentacin, fotosntesis y res-
NAD sis qumica.
piracin (cuadro 10). ATP ADP NAD NADH
Cuadro 11- Objetivos del metabolismo
bioenergtico NADH
Cuadro 9- Metabolismo bioenergtico y
biosinttico ribulosa - 5P CO2 Respiraciones
i) obtencin de energa gliceradldehdo - P
fuentes biopolmeros
* nivel del sustrato: NAD 2 ADP acetil - P NADH Constituye un proceso redox de obtencin de energa en

de energa Pi
c.2P-glicricoc.P-enol pirvicoc. pirvico +ATP donde los donadores de electrones pueden ser compues-
* transporte de electrones (CTE en membranas): fosfori- NADH 2 ATP NAD tos orgnicos o inorgnicos, pero los aceptores son por lo

calor energa ADP intermediarios lacin oxidativa, fotofosforilacin cido pirvico acetaldehdo - P general inorgnicos (O2 o compuestos distintos al O2). La
utilizable biosintticos NADH NADH ecuacin general de las respiraciones se puede esque-

Reacciones de biosntesis matizar:

ii) poder reductor NAD NAD

productos ATP depsitos CTE
metablicos celulares * autotrofia: CO2 Corgnico cido lctico etanol
AH2 + B A + BH2

* transferencia de poder reductor:

+
nutrientes sustrato oxidado + NADH sust.reducido+ NAD A y B donador y aceptor de electrones, CTE cadena
externos Figura 7- Fermentacin heterolctica transportadora de electrones
. 1 2
Cuadro 16- Aplicaciones de la fermentacin Breve repaso sobre bioenergtica Cuadro 13- Potenciales redox
CO2
Lactato NADH
NADH Etanol alcohlica Todos los procesos generadores de energa (cuadro 12)
Piruvato Acetaldehdo
se caracterizan por la transferencia de electrones desde Semi reaccin Eo [v]
CO2 Piruvato
CO2 levadura del pan una sustancia con mayor poder reductor hacia una con + -
CoASH 6CO2 + 24 H + 24 e = C6H12O6 + 6H2O -0.43
menor energa libre. El cuadro 13 muestra diversos pares
3 4 como alimento, complemento proteico + -
Oxaloacetato acetolactato redox. Volveremos a l cuando se presenten procesos 2H + 2e = H2 -0.41 **
Acetil -CoA Formato CO2 aditivos en medios de cultivo: agua y extracto de redox realizados por los microorganismos con materia + + - +
NADH Pi 5 levadura (vitaminas, aminocidos, etc.) orgnica y mineral. NAD + 2H + 2e = NADH + H -0.32
CoA H2 CO2
- + - -
Malato Acetil P Acetaldehdo Acetona
produccin de etanol como solvente, combustible CO2 + HCO3 + H + e = CH3COO + 3H2O -0.29
ADP NADH Cuadro 12- Generacin de energa
H2O NAHD + -
ATP
produccin de bebidas: vino, cerveza, sidra. CO2(g) + 8H + 8e = CH4(g) + 2H2O -0.25 **
Acetato Etanol
Fumarato 6
destiladas: ron, whisky, etc. Oxidacin de compuestos luz S(s) + 2H + 2e = H2S(g)
+ -
-0.24
Acetoacetil-CoA orgnicos o inorgnicos + - -
NADH SO4-2 + 9H + 8e = HS + 4H2O -0.22 **
CO2
Fermentacin lctica
ENERGIA + -
Succinato Acetona Butiril -CoA
Pi (1KCAL=4,184Kjulios) piruvato + 2H + 2e = lactato -0.19
NADH CoA Coa
La enzima clave es la deshidrogenasa lctica que acta
CO2 NADH - + - +
con NAD y la realizan las llamadas bacterias cido-lcti- NO3 + 10H + 8 e = NH4 + 3H2O 0.36
Butiraldehdo Butiril P G =energa libre (disponible para realizar trabajo)
Propionato Isupropanol NADH
ADP cas, algunos hongos y el msculo de los animales. Pro- a pH 7,0 y 25C
- + - -
ATP NO3 + 2H + 2e = NO2 + H2O 0.42
ducen casi exclusivamente cido lctico (figura 6).
ATP + H2O= ADP + Pi G= - 31,8kj/mol + -
CHCl3 + H + 2e- = CH2Cl2 + Cl 0.56
en anaerobiosis: G= -60kj/mol
Figura 5- Tipos de fermentaciones Fermentacin heterolctica en aerobiosis G= -75kj/mol
+ -
CCl4 + H + 2e- = CHCl3 + Cl 0.67
Las bacterias carecen de enzimas de la va glicoltica (al-
- + -
Fermentacin alcohlica dolasa y triosafosfato isomerasa) y la degradacin de la 2NO3 + 12H + 10 e = N2 + 6H2O 0.74 **
La enzima involucrada es la deshidrogenasa alcohlica, glucosa se realiza por la va del fosfogluconato: oxidan protenas polisacridos lpidos -
Fe+3 + e = Fe+2 0,76
el donador de electrones se encuentra en la va glicolti- glucosa-6P a 6-fosfogluconato que luego decarboxilan a Etapa 1 +
ca (triosa-P) y los productos finales son el etanol y el pentosa-P. Esta se transforma en triosa-P y acetil-P por la O2 + 4H = 2H2O 0.82
CO2. Se realiza en el msculo y entre los microorganis- enzima fosfocetolasa. La triosa da cido lctico con la aminocidos monosacridos Glicerol + cidos grasos
mos son sobre todo los hongos y entre ellos las levadu- formacin de un mol de ATP, mientras que el acetil-P acep-
ta electrones a partir de los NADH generados en la pro- ATP NADH
ras, como Saccharomyces cereviseae, son muy emplea- FADH2
duccin de pentosa-P y se convierte en etanol sin produc- Etapa 2 NADH Catabolismo de hidratos de carbono en microor-
das en la produccin industrial de etanol, en la vinifica- NH3
cin, en la panificacin (el CO2 es el agente levador, el cin de ATP. Piruvato NADH ganismos
etanol se volatiliza en el horno). La figura 1 y el cuadro 14 resumen la degradacin de distin-
Acetil CoA
El rendimiento energtico es menor: 1 solo mol de ATP, en tos sustratos orgnicos por algunas de las vas presentes en
El empleo de distintas sustancias qumicas que al hume- lugar de 2 como en los homofermentadores, que producen Citrato
los microorganismos: la gliclisis, la va de las pentosas fos-
Etapa 3 Oxaloacetato
decerse y con la temperatura liberan CO2 (tartratos, bicar- el doble de biomasa por mol de azcar fermentado. ATP fato y su continuidad en las fermentaciones o la entrada al
bonatos) empelados en los polvos de hornear, no ha po- Ciclo de los NADH ciclo de los cidos tricarboxlicos (ATC) y la reoxidacin de
dido sustituir a las levaduras, que dan a la masa un sabor No se acumula poder reductor (figura 7). cidos FADH2 las coenzimas reducidas por fermentacin o quimismosis.
Isocitrato
tricarboxlicos
y textura muy particular. La produccin de CO2 es una forma sencilla de distinguir La figura 2 (Prescott et al., 1999). repasa la gliclisis, por la
CO2
un grupo de otro. Importantes productos son formados en -cetoglutarato cual un microorganismo obtiene una ganancia neta de 2 ATP
El cuadro 16 resume las mltiples aplicaciones biotec- estos procesos, que el hombre ha aprovechado desde muy CoQ y 2 NADH/mol de glucosa, en ausencia de oxgeno.
ATP
nolgicas de la fermentacin alcohlica, una de las ms antiguo, incluso antes de conocerse el rol de los microor- Succinil Co A
CO2
Citocromos
empleadas, junto a la fermentacin lctica, a nivel in- ganismos en el proceso. Cadena de muchos azcares-P pueden ser convertidas en glu-
dustrial. Ya vimos el uso del agua o del extracto de leva- tranporte cosa-6P
de electrones O2
duras en los medios de cultivo, como fuentes de ami- El balance energtico es muy bajo, 2 ATP en las fer- 2 ATP se invierten en la produccin de fructosa (C6)
nocidos, de carbono y de factores de crecimiento (vita- mentaciones alcholica y lctica y 1 en la heterolcti- Figura 1- Degradacin de distintos sustratos por bifosfato
minas y otros). ca. No se genera poder reductor, por lo cual el micro- microorganismos (Prescott et al., 1999) Fructosa 1,6-bi-P se corta en dos molculas intercam-
biables con 3-carbonos La figura 3 presenta metabolismos alternativos al piruva- Gliceraldehdo-3 - P

Cada molcula se usa para sintetizar 2 ATP va fosfori- to: la va de Entner-Doudoroff y la de la pentosa fosfato.
lacin a nivel del sustrato, reducir 1 NAD+ a NADH y Las bacterias presentan todos los metabolismos de de-
2H+ 4H+ 2H+
producir piruvato como producto final gradacin de hidratos de carbono descriptos. NAD+ NAD+
Ganancia neta: 2 ATP/glucosa NADH+H + NADH+H+
No requiere O Glucosa 1,3-bisfosfoglicerato
2
ATP
Cuadro 14- Metabolismo de los hidratos de NADH+H+ Piruvato
ADP NADH NAD+ 1/2O2+2H +
H 2O
carbono por microorganismos NAD+
Glucosa 6-fosfato +H+ NADH+H+
Matriz Lactato
NADP + NAD+
Catabolismo de azcares a piruvato va:

Glicolisis
Pentosa fosfato NADPH Figura 4- Comparacin entre la respiracin y la fermentacin (Prescott et al., 1999)
Entner-Doudoroff 6-fosfogluconato
Rendimientos energticos
Destino del piruvato 38 ATP/glucosa en la respiracin con O2: El cuadro 15 presenta el esquema general de las tres
Fermentacin H2O * 10 NADH x 3ATP= 30 ATP fermentaciones con mayores aplicaciones biotecnol-
Ciclo de los ATC gicas:
* 2FADH2 x 2 ATP = 4 ATP
Destino del NADH 2-ceto-3-desoxi-6-fosfogluconato * 2ATP + 2 GTP = 4 ATP
C6H12O6 CO2 + CH3CH2OH Alcohlica
Fermentacin 2 ATP/ glucosa en las fermentaciones C6H12O6 CH3CHOHCOOH Homolctica
Cadena respiratoria
Glucosa C6H12O6 CO2+ CH3CH2OH + CH3CHOHCOOH
Menos de 2-6 ATP/glucosa en respiraciones anaero-
Etapa de 6 Piruvato Gliceraldehdo 3-fosfato Heterolctica
carbonos bias: los electrones entran en general pos los citocro-
Entner-Doudoroff mos. El NAD+ se regenera por flujo inverso de electro-
Los sustratos son en general azcares, aunque muchos
Glucosa 6-fosfato rinde: -1 ATP/glucosa nes con gasto de ATP (figura 10).
-2 NAD(P)H
microorganismos pueden usar protenas, aminocidos, para
Pentosa fosfato Caractersticas de las fermentaciones obtener energa por esta va. Los donadores y aceptores
Fructosa 6-fosfato
Glucosa -6-P oxidada, produce CO2 i) Diferentes organismos liberan distintos productos por de electrones surgen de la degradacin del sustrato.
Interconversiones entre azcares con 3, 4, 5, 6, 7 C
las fermentaciones (cidos, alcoholes, solventes, H2)
Importante en la formacin de NADPH para anabolismo, ri- La molcula clave en este proceso es el cido pirvico
Fructosa 1,6-bisfosfato bosa para cidos nucleicos
que son usados para su identificacin y aprovechados
por el hombre producido en la va glicoltica, donde se generan los do-
Aldolasa nadores de electrones para las distintas fermentaciones
Gliceraldehdo 3-P Dihidroxiacetona-P Figura 3- Metabolismo alternativo al piruvato
ii) Mucha energa de los azcares se pierde en las fer- (triosa-P). El tipo de fermentacin depender de las en-
Etapa 3
Pi
carbonos mentaciones como productos de deshecho, es un pro- zimas que posea el microorganismo y de las condicio-
Fermentaciones ceso ineficiente nes del ambiente.
1,3-bisfofoglicerato
Fosforilacin a
nivel de sustrato Constituyen procesos redox de generacin de ATP en iii) El poder reductor generado en la va glicoltica se usa en Los tipos de fermentaciones sirven tambin para identifi-
donde los donadores y aceptores de electrones son mo- la reduccin del piruvato. No se general poder reductor car microorganismos (figura 5) (Prescott et al., 1999).
3-fosfoglicerato
lculas orgnicas, en general derivadas del mismo sus-
trato. La figura 4 compara a las fermentaciones con las Cuadro 15- Fermentaciones alcohlica y lctica
2-fosfoglicerato
respiraciones. - -
fermentacin donador de e aceptor de e enzimas productos finales
Fosfoenolpiruvato El NAD(P) requerido para la gliclisis y otros mecanis-
Fosforilacin a mos de sntesis del piruvato debe ser regenerado. alcohlica triosa-P acetaldehido deshidrogenasa CO2,
nivel de sustrato alcohlica etanol
Piruvato En la respiracin, los aceptores de electrones son en ge- homolctica triosa-P cido pirvico deshidrogenasa cido lctico
neral inorgnicos y en las fermentaciones son orgnicos, lctica
Figura 2- Gliclisis, va de Embden-Meyerhof usualmente el piruvato y sus derivados.
biables con 3-carbonos La figura 3 presenta metabolismos alternativos al piruva- Gliceraldehdo-3 - P

Cada molcula se usa para sintetizar 2 ATP va fosfori- to: la va de Entner-Doudoroff y la de la pentosa fosfato.
lacin a nivel del sustrato, reducir 1 NAD+ a NADH y Las bacterias presentan todos los metabolismos de de-
2H+ 4H+ 2H+
producir piruvato como producto final gradacin de hidratos de carbono descriptos. NAD+ NAD+
Ganancia neta: 2 ATP/glucosa NADH+H + NADH+H+
No requiere O Glucosa 1,3-bisfosfoglicerato
2
ATP
Cuadro 14- Metabolismo de los hidratos de NADH+H+ Piruvato
ADP NADH NAD+ 1/2O2+2H +
H 2O
carbono por microorganismos NAD+
Glucosa 6-fosfato +H+ NADH+H+
Matriz Lactato
NADP + NAD+
Catabolismo de azcares a piruvato va:

Glicolisis
Pentosa fosfato NADPH Figura 4- Comparacin entre la respiracin y la fermentacin (Prescott et al., 1999)
Entner-Doudoroff 6-fosfogluconato
Rendimientos energticos
Destino del piruvato 38 ATP/glucosa en la respiracin con O2: El cuadro 15 presenta el esquema general de las tres
Fermentacin H2O * 10 NADH x 3ATP= 30 ATP fermentaciones con mayores aplicaciones biotecnol-
Ciclo de los ATC gicas:
* 2FADH2 x 2 ATP = 4 ATP
Destino del NADH 2-ceto-3-desoxi-6-fosfogluconato * 2ATP + 2 GTP = 4 ATP
C6H12O6 CO2 + CH3CH2OH Alcohlica
Fermentacin 2 ATP/ glucosa en las fermentaciones C6H12O6 CH3CHOHCOOH Homolctica
Cadena respiratoria
Glucosa C6H12O6 CO2+ CH3CH2OH + CH3CHOHCOOH
Menos de 2-6 ATP/glucosa en respiraciones anaero-
Etapa de 6 Piruvato Gliceraldehdo 3-fosfato Heterolctica
carbonos bias: los electrones entran en general pos los citocro-
Entner-Doudoroff mos. El NAD+ se regenera por flujo inverso de electro-
Los sustratos son en general azcares, aunque muchos
Glucosa 6-fosfato rinde: -1 ATP/glucosa nes con gasto de ATP (figura 10).
-2 NAD(P)H
microorganismos pueden usar protenas, aminocidos, para
Pentosa fosfato Caractersticas de las fermentaciones obtener energa por esta va. Los donadores y aceptores
Fructosa 6-fosfato
Glucosa -6-P oxidada, produce CO2 i) Diferentes organismos liberan distintos productos por de electrones surgen de la degradacin del sustrato.
Interconversiones entre azcares con 3, 4, 5, 6, 7 C
las fermentaciones (cidos, alcoholes, solventes, H2)
Importante en la formacin de NADPH para anabolismo, ri- La molcula clave en este proceso es el cido pirvico
Fructosa 1,6-bisfosfato bosa para cidos nucleicos
que son usados para su identificacin y aprovechados
por el hombre producido en la va glicoltica, donde se generan los do-
Aldolasa nadores de electrones para las distintas fermentaciones
Gliceraldehdo 3-P Dihidroxiacetona-P Figura 3- Metabolismo alternativo al piruvato
ii) Mucha energa de los azcares se pierde en las fer- (triosa-P). El tipo de fermentacin depender de las en-
Etapa 3
Pi
carbonos mentaciones como productos de deshecho, es un pro- zimas que posea el microorganismo y de las condicio-
Fermentaciones ceso ineficiente nes del ambiente.
1,3-bisfofoglicerato
Fosforilacin a
nivel de sustrato Constituyen procesos redox de generacin de ATP en iii) El poder reductor generado en la va glicoltica se usa en Los tipos de fermentaciones sirven tambin para identifi-
donde los donadores y aceptores de electrones son mo- la reduccin del piruvato. No se general poder reductor car microorganismos (figura 5) (Prescott et al., 1999).
3-fosfoglicerato
lculas orgnicas, en general derivadas del mismo sus-
trato. La figura 4 compara a las fermentaciones con las Cuadro 15- Fermentaciones alcohlica y lctica
2-fosfoglicerato
respiraciones. - -
fermentacin donador de e aceptor de e enzimas productos finales
Fosfoenolpiruvato El NAD(P) requerido para la gliclisis y otros mecanis-
Fosforilacin a mos de sntesis del piruvato debe ser regenerado. alcohlica triosa-P acetaldehido deshidrogenasa CO2,
nivel de sustrato alcohlica etanol
Piruvato En la respiracin, los aceptores de electrones son en ge- homolctica triosa-P cido pirvico deshidrogenasa cido lctico
neral inorgnicos y en las fermentaciones son orgnicos, lctica
Figura 2- Gliclisis, va de Embden-Meyerhof usualmente el piruvato y sus derivados.
. 1 2
Cuadro 16- Aplicaciones de la fermentacin Breve repaso sobre bioenergtica Cuadro 13- Potenciales redox
CO2
Lactato NADH
NADH Etanol alcohlica Todos los procesos generadores de energa (cuadro 12)
Piruvato Acetaldehdo
se caracterizan por la transferencia de electrones desde Semi reaccin Eo [v]
CO2 Piruvato
CO2 levadura del pan una sustancia con mayor poder reductor hacia una con + -
CoASH 6CO2 + 24 H + 24 e = C6H12O6 + 6H2O -0.43
menor energa libre. El cuadro 13 muestra diversos pares
3 4 como alimento, complemento proteico + -
Oxaloacetato acetolactato redox. Volveremos a l cuando se presenten procesos 2H + 2e = H2 -0.41 **
Acetil -CoA Formato CO2 aditivos en medios de cultivo: agua y extracto de redox realizados por los microorganismos con materia + + - +
NADH Pi 5 levadura (vitaminas, aminocidos, etc.) orgnica y mineral. NAD + 2H + 2e = NADH + H -0.32
CoA H2 CO2
- + - -
Malato Acetil P Acetaldehdo Acetona
produccin de etanol como solvente, combustible CO2 + HCO3 + H + e = CH3COO + 3H2O -0.29
ADP NADH Cuadro 12- Generacin de energa
H2O NAHD + -
ATP
produccin de bebidas: vino, cerveza, sidra. CO2(g) + 8H + 8e = CH4(g) + 2H2O -0.25 **
Acetato Etanol
Fumarato 6
destiladas: ron, whisky, etc. Oxidacin de compuestos luz S(s) + 2H + 2e = H2S(g)
+ -
-0.24
Acetoacetil-CoA orgnicos o inorgnicos + - -
NADH SO4-2 + 9H + 8e = HS + 4H2O -0.22 **
CO2
Fermentacin lctica
ENERGIA + -
Succinato Acetona Butiril -CoA
Pi (1KCAL=4,184Kjulios) piruvato + 2H + 2e = lactato -0.19
NADH CoA Coa
La enzima clave es la deshidrogenasa lctica que acta
CO2 NADH - + - +
con NAD y la realizan las llamadas bacterias cido-lcti- NO3 + 10H + 8 e = NH4 + 3H2O 0.36
Butiraldehdo Butiril P G =energa libre (disponible para realizar trabajo)
ADP cas, algunos hongos y el msculo de los animales. Pro- a pH 7,0 y 25C
- + - -
ATP NO3 + 2H + 2e = NO2 + H2O 0.42
ducen casi exclusivamente cido lctico (figura 6).
ATP + H2O= ADP + Pi G= - 31,8kj/mol + -
CHCl3 + H + 2e- = CH2Cl2 + Cl 0.56
en anaerobiosis: G= -60kj/mol
Figura 5- Tipos de fermentaciones Fermentacin heterolctica en aerobiosis G= -75kj/mol
+ -
CCl4 + H + 2e- = CHCl3 + Cl 0.67
Las bacterias carecen de enzimas de la va glicoltica (al-
- + -
Fermentacin alcohlica dolasa y triosafosfato isomerasa) y la degradacin de la 2NO3 + 12H + 10 e = N2 + 6H2O 0.74 **
La enzima involucrada es la deshidrogenasa alcohlica, glucosa se realiza por la va del fosfogluconato: oxidan protenas polisacridos lpidos -
Fe+3 + e = Fe+2 0,76
el donador de electrones se encuentra en la va glicolti- glucosa-6P a 6-fosfogluconato que luego decarboxilan a Etapa 1 +
ca (triosa-P) y los productos finales son el etanol y el pentosa-P. Esta se transforma en triosa-P y acetil-P por la O2 + 4H = 2H2O 0.82
CO2. Se realiza en el msculo y entre los microorganis- enzima fosfocetolasa. La triosa da cido lctico con la aminocidos monosacridos Glicerol + cidos grasos
mos son sobre todo los hongos y entre ellos las levadu- formacin de un mol de ATP, mientras que el acetil-P acep-
ta electrones a partir de los NADH generados en la pro- ATP NADH
ras, como Saccharomyces cereviseae, son muy emplea- FADH2
duccin de pentosa-P y se convierte en etanol sin produc- Etapa 2 NADH Catabolismo de hidratos de carbono en microor-
das en la produccin industrial de etanol, en la vinifica- NH3
cin, en la panificacin (el CO2 es el agente levador, el cin de ATP. Piruvato NADH ganismos
etanol se volatiliza en el horno). La figura 1 y el cuadro 14 resumen la degradacin de distin-
Acetil CoA
El rendimiento energtico es menor: 1 solo mol de ATP, en tos sustratos orgnicos por algunas de las vas presentes en
El empleo de distintas sustancias qumicas que al hume- lugar de 2 como en los homofermentadores, que producen Citrato
los microorganismos: la gliclisis, la va de las pentosas fos-
Etapa 3 Oxaloacetato
decerse y con la temperatura liberan CO2 (tartratos, bicar- el doble de biomasa por mol de azcar fermentado. ATP fato y su continuidad en las fermentaciones o la entrada al
bonatos) empelados en los polvos de hornear, no ha po- Ciclo de los NADH ciclo de los cidos tricarboxlicos (ATC) y la reoxidacin de
dido sustituir a las levaduras, que dan a la masa un sabor No se acumula poder reductor (figura 7). cidos FADH2 las coenzimas reducidas por fermentacin o quimismosis.
Isocitrato
tricarboxlicos
y textura muy particular. La produccin de CO2 es una forma sencilla de distinguir La figura 2 (Prescott et al., 1999). repasa la gliclisis, por la
CO2
un grupo de otro. Importantes productos son formados en -cetoglutarato cual un microorganismo obtiene una ganancia neta de 2 ATP
El cuadro 16 resume las mltiples aplicaciones biotec- estos procesos, que el hombre ha aprovechado desde muy CoQ y 2 NADH/mol de glucosa, en ausencia de oxgeno.
ATP
nolgicas de la fermentacin alcohlica, una de las ms antiguo, incluso antes de conocerse el rol de los microor- Succinil Co A
CO2
Citocromos
empleadas, junto a la fermentacin lctica, a nivel in- ganismos en el proceso. Cadena de muchos azcares-P pueden ser convertidas en glu-
dustrial. Ya vimos el uso del agua o del extracto de leva- tranporte cosa-6P
de electrones O2
duras en los medios de cultivo, como fuentes de ami- El balance energtico es muy bajo, 2 ATP en las fer- 2 ATP se invierten en la produccin de fructosa (C6)
nocidos, de carbono y de factores de crecimiento (vita- mentaciones alcholica y lctica y 1 en la heterolcti- Figura 1- Degradacin de distintos sustratos por bifosfato
minas y otros). ca. No se genera poder reductor, por lo cual el micro- microorganismos (Prescott et al., 1999) Fructosa 1,6-bi-P se corta en dos molculas intercam-
4) Clasifique nutricionalmente a los siguientes microorga- Los mecanismos de biosntesis de distintas macromol- organismo debe oxidar gran cantidad de sustrato para Bacterias acidolcticas
nismos culas, como hidratos de carbono, lpidos, protenas, ci- lograr desarrollarse. Son quizs unas de las bacterias ms estudiadas y culti-
A B C D dos nucleicos, no sern analizadas ya que los procesos vadas por su importancia econmica ya que participan en
C-CO2 + - + + no difieren mayormente en la escala biolgica. En efecto, las transformaciones de un alimento tan importante como
C-orgnico - + - - el equipo enzimtico y los mecanismos bioqumicos sue- la leche y son responsables de aplicaciones biotecnol-
2ADP 2ATP
Luz + - - + len ser similares en una bacteria y en organismos supe- gicas en derivados de la leche: leches agrias y yogur, que-

Reacciones qumicas - + + - riores, incluido el hombre.
sos. La produccin de cido lctico hace que el producto
C6H12O6 2 CH3COCOOH
Donadores de electrones H2O orgnico NH4+ c. actico se estabilice, evitando el deterioro microbiano. Este pro-
(cido pirvico)
Clasificacin: ceso se emplea tambin en la conservacin de pasturas y

Cuadro 10- Estrategias bioenergticas en granos en el proceso conocido como ensilaje, tema que
2 NAD 2NADH deshidrogenasa
Ejemplos: microorganismos ser tratado en el captulo 18.
lctica
5) Relativa al cuadro 7
i)Clasifique los medios de cultivo (1...5) por su empleo en Fermentaciones La figura 8 (Prescott et al., 1999) presenta caractersticas
NADH
el laboratorio Donadores y aceptores de electrones compuestos or- de representantes de los tres gneros ms distribuidos:
ii) Seale los factores de crecimiento presentes en los gnicos Lactobacillus, Streptococcus y Leuconostoc. En base a la
Rinde poca energa (E) y nada de poder reductor. Ej: composicin de (G+C)% en el ADN y el tipo de fermenta-
medios y su rol en la clula NAD

ii) Cmo hara diferencial al medio 3? fermentaciones lctica y alcohlica cin que realizan, en esta familia se incluyen los gneros:
2 CH3CHOHCOOH
iv) Cmo trabajara en anaerobiosis con el medio 4? Lactobacillus, Streptococcus y Leuconostoc, Pediococcus,
(cido lctico)
v) Rol del par fosfato en los medios de cultivo Respiraciones Enterococcus, y Lactococcus. Se encuentran muy distri-
Donadores de e- pueden ser orgnicos o inorgnicos, Figura 6- Fermentacin homolctica buidas en la naturaleza: en pastos, cuerpo del ganado,
los aceptores son en general inorgnicos: leche. Algunas especies son habitantes del intestino y mu-
Metabolismo bioenergtico O2 (aerobia) cosas y pueden encontrarse representantes patgenos.
= = - +++
en los microorganismos CO3 , SO4 , NO3 , Fe (anaerobia) Se cree que es el metabolismo bioenergtico ms anti-
guo, cuando no exista el O2. Los microorganismos fer- Por ms detalles y aplicaciones biotecnolgicas de estas
El cuadro 9 es un clsico esquema sobre la utilizacin de Fotosntesis mentadores se han adaptado a las nuevas condiciones bacterias, se remite al captulo 19.
los nutrientes con el objeto de obtener energa o con fines Transformacin de energa lumnica en qumica por fo- de la atmsfera, realizando el mismo proceso que sus
biosintticos. Se abordarn distintos aspectos relaciona- tofosforilacin ancestros. Otras fermentaciones producen molculas de gran va-
dos a los mecanismos de obtencin de energa por los Oxignica (la superior), libera O2 lor econmico: acetona, butanol, propanol, cido acti-
microorganismos, que como todo organismo, emplean los Anoxignica (bacterias anaerobias, no liberan O2) co, butrico, H2, etc. Y muchas veces resulta ms eco-
glucosa glucosa-6P 6P-gluconato nmica su produccin va fermentaciones que por snte-
tres tipos de procesos: fermentacin, fotosntesis y res-
NAD sis qumica.
piracin (cuadro 10). ATP ADP NAD NADH
Cuadro 11- Objetivos del metabolismo
bioenergtico NADH
Cuadro 9- Metabolismo bioenergtico y
biosinttico ribulosa - 5P CO2 Respiraciones
i) obtencin de energa gliceradldehdo - P
fuentes biopolmeros
* nivel del sustrato: NAD 2 ADP acetil - P NADH Constituye un proceso redox de obtencin de energa en

de energa Pi
c.2P-glicricoc.P-enol pirvicoc. pirvico +ATP donde los donadores de electrones pueden ser compues-
* transporte de electrones (CTE en membranas): fosfori- NADH 2 ATP NAD tos orgnicos o inorgnicos, pero los aceptores son por lo

calor energa ADP intermediarios lacin oxidativa, fotofosforilacin cido pirvico acetaldehdo - P general inorgnicos (O2 o compuestos distintos al O2). La
utilizable biosintticos NADH NADH ecuacin general de las respiraciones se puede esque-

Reacciones de biosntesis matizar:

ii) poder reductor NAD NAD

productos ATP depsitos CTE
metablicos celulares * autotrofia: CO2 Corgnico cido lctico etanol
AH2 + B A + BH2

* transferencia de poder reductor:

+
nutrientes sustrato oxidado + NADH sust.reducido+ NAD A y B donador y aceptor de electrones, CTE cadena
externos Figura 7- Fermentacin heterolctica transportadora de electrones
RESPIRACION
Compuestos orgnicos Flujo de C anaerobiosis, respiracin anaerobia

CO2 -
componentes aceptor e Organismos, inculo (tierra, lodo, sedimentos de lagos)
Flujo de e-
comp. org. cido orgnico KNO3(2%) Pseudomonas (especies desnitrificantes)
CO3-
- +++ =
O2 NO3 Fe SO 4 extracto de levadura KNO3(10%) Bacillus
cidos orgnicos Na2SO4 Desulfovibrio, Desulfotomaculum
Compuestos inorgnicos CO2
NH4+ , NO2- , S= , Fe++ , H2 Flujo de C CH3OH Na2CO3 Methanosarcina barkeri
Flujo de e- CH3NH2 KNO3 Hyphomicrobium

Lacobacillus Biosntesis
(Ciclo de Calvin) anaerobiosis, fermentacin
O2 SO4= NO3- Fe+++
glutamato Clostridium lodo, sedimentos
histidina Tetanomorphum vegetales en descomp., lcteos, rumen, aguas servidas
Figura 9- Flujos de carbono y electrones en las respiraciones almidn, amonio Clostridium spp
almidn, N2 C. pasteurianum
Respiraciones aerobias glucosa,

Streptococcus extracto de
Con sustrato orgnico
levadura, pH 5 bacterias del cido lctico,
Los microorganismos son capaces de respirar molcu-
Lactobacillus
las orgnicas de naturaleza muy diversa, en orden de- Streptococcus pastos, tambos, suelos
creciente de empleo se pueden sealar: azcares, alco-
holes, protenas, aminocidos, cidos orgnicos, hidro-
carburos, almidn, pectinas, celulosa, lignina, pesticidas. En resumen: la prctica de aislamiento tiene por objeto 2) Seale: ejemplos de microorganismos auto y hetero-
La presencia de una cadena transportadora de electro- la obtencin de cultivos puros, formados por la progenie trficos, asi como aquellos de mayor capacidad biosin-
nes (CTE) que incluye varias molculas como NAD, FAD, o clon de una sola clula, en general en forma de colo- ttica. Cuales son los ms distribuidos en la naturale-
Leuconostoc citocromos y culmina en el O2, es caracterstica de este nia a partir de una clula. Las colonias se describen en za?
proceso. La degradacin de un mol de glucosa por esta funcin de su: tamao, forma, borde, elevacin, color,
Figura 8- Bacterias lcticas va rinde 38 ATP, luego del acople con el ciclo de los olor, que ayuda en la identificacin (caracteres cultura- 3) Complete el siguiente cuadro indicando la forma
cidos tricarboxlicos. les en medio slido). A partir de colonias aisladas se rea- qumica en que los principales elementos se usan
Todos los organismos que la realizan son quimiotrofos liza un examen microscpico (morfologa, coloracin de como nutrientes a vegetales, animales y microor-
ya que obtienen la energa de reacciones redox. Segn C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O (647 kcal/mol) Gram) que brindan los caracteres morfolgicos y tinto- ganismos
la naturaleza de los aceptores de electrones se distin- riales. Las colonias se reaislan por repique en medio no
guen dos tipos de respiraciones: aerobias y anaerobias. Esta es una respiracin aerobia completa, ya que el sus- selectivo para asegurarse su pureza. Elemento vegetales animales microorganismos
trato es oxidado completamente a CO2 y agua, liberando C
En cualquiera de los casos los donadores de electrones toda la energa de la molcula. Los sustratos orgnicos N
pueden ser orgnicos (lo ms frecuente y eficiente) o in- son degradados muy rpidamente por esta va. S
orgnicos. Preguntas de repaso P
Existen casos en los que los organismos carecen de enzi- Fe
La figura 9 relaciona los sustratos orgnicos e inorgni- mas del ciclo de Krebs y no pueden llevar el sustrato a 1) Conceptos y ejemplos de:
cos con los aceptores de electrones inorgnicos, en los Nutriente Ca
CO2, son las respiraciones con sustrato orgnico incom-
distintos tipos de respiraciones. Medio de cultivo Mn
pletas:
Condiciones de cultivo Micronutrientes
Cuadro 8- Tcnicas de enriquecimiento para aislar bacterias de la naturaleza CH3CH2OH + O2 COOH CH ATP se acopla a la oxidacin del donador de electro-
3
(preparacin de vinagre) nes y la energa de reduccin se obtiene directamente a
Fototrfas a la luz, principal fuente de carbono: CO2 etanol cido actico partir del compuesto inorgnico, si tiene potencial redox
aerobiosis suficientemente bajo, o por reacciones de transporte in-
organismos enriquecidos inculo Estas respiraciones poseen importantes aplicaciones bio- verso de electrones.
tecnolgicas por |os productos formados, cidos glucur-
N2 como fuente de N cianobacterias agua de pozo, lodos, tierra hmeda a la luz
nicos, cido actico, etc. El cuadro 18 resume los potenciales redox en estas respi-
anaerobiosis raciones que indica que varios compuestos inorgnicos
H2, c.orgnicos, N2 H2S bacterias purpreas lodos ricos en sulfuros Con sustrato inorgnico que pueden dar al oxidarse con el O2, energa suficiente
-
donador de e no sulfurosas Proceso slo realizado por bacterias quimioautotrficas para la sntesis de ATP.
bacterias sulfurosas que pueden generar energa en la oxidacin de compues-
purpreas y verdes tos minerales, en aerobiosis, Estas reacciones estn aco- Cuadro 18 - Produccin de energa a partir de la
pladas con la reduccin del CO2, mediante el ciclo de oxidacin de varios donadores inorgnicos de
Quimiautolitotrficas en la oscuridad: fuente de C (CO2) Calvin al igual que en la fase oscura de la fotosntesis: electrones
aerobiosis
donador de e
-
aceptor de e
-
organismos inculo Reaccin G (kJ/reaccin)
6 CO2 + 18 ATP + 12 NADPH
- +
NH4
+
O2 Nitrosomonas tierra, lodos C6H12O6 + 18 ADP + Pi + 12 NADP+ HS + H + 0,5O2 S + H0 -203,2
2
= +
- S + 0,5O2 + H2O SO + 2H -589,1
NO2 O2 Nitrobacter aguas servidas +
4
- +
NH4 + 0,5O2 NO + 2H + H O -260,2
H2 O2 bacterias del H2 biodigestores anaerobios Reconocemos 5 grupos de respiraciones aerobias con -
2
-
2
NO2 + 0,5 O2 NO3 - 75,8
= sustrato inorgnico (cuadro 17). La energa que liberan ++ + +++
H2S, S, S2O3 O2 Thiobacillus spp suelos estas reacciones es escasa, ya que los electrones entran Fe + H + 0,25 O2 Fe + 0,5 O - 71,2
2
+3 ++
Fe , pH bajo O2 T. ferrooxidans suelos a nivel de los citocromos a y b liberando entre 1 y 2 ATP. En Fe se calcul a pH 2-3, las otras a pH 7,0 - Los datos
anaerobia
Como se aprecia las cadenas son ms cortas que en las son valores promedios a los efectos de comparacin.
= -
respiraciones aerobias y las coenzimas NADH son reoxi-
S, S2O3 NO3 T. denitrificans suelos, lodos dadas mediante un transporte inverso de electrones, con
H2 CO2 metanognicas biodigestor, lodos, rumen consumo de energa (figura 10). Su rol puede resultar muy importante en la naturale-
- za por la liberacin de iones fundamentales para las
H2 NO3 Paracoccus denitrificans plantas: nitratos, sulfatos. La oxidacin del hierro con-
Cuadro 17- Bacterias quimioauttrofas aerobias
duce a la formacin de Fe(OH)3 insoluble, indisponi-
Quimiorganotrficas en la oscuridad, fuente de C compuestos orgnicos
Oxidantes de Ecuacin (ATP) Grupo ble para los cultivos. Esta sustancia produce obstruc-
aerobiosis, respiracin aerobia
Fisiolgico ciones en las caeras de hierro atacadas por las fe-
-
componentes aceptor de e organismos + -
rrobacterias.
+ amonio NH4 + 1,5O2 = NO2 + H20 Nitritantes
lactato, NH O2 Pseudomonas fluorescens - - +
4 nitrito NO2 + 0,5 O2 = NO3 + H Nitratantes Respiraciones anaerobias
vegetacin en descomposicin pasteurizar (80C) para enriquecer en Bacillus = = = =
Constituyen procesos realizados solamente por protistas
+
azufre (H2S, S, S2O3 ,S3O6 ) + O2 = SO4 Sulfooxidantes
almidn, NH O2 Bacillus polymyxa, otros Bacillus spp ++ +++ inferiores (bacterias) en anaerobiosis. Los distintos tipos
4 hierro Fe + O2 = Fe + H2O Ferroxidantes
etanol (4%)+ 1% O2 Acetobacter, Gluconobacter
se presentan en la figura 9. El flujo de electrones en las
hidrgeno H 2 + O2 = H2O Oxidantes del H2 respiraciones, sus cadenas transportadoras de electrones
extracto de levadura (CTE) se aprecia en la figura 4.
pH 6, hidrocarburos (ej.aceite mineral), Estas bacterias crecen por lo tanto muy lentamente, su
amonio O2 Mycobacterium, Nocardia
tiempo de generacin es alto y la turbidez en medios de Los rendimientos energticos, son muy superiores en las
celulosa, amonio O2 Cytophaga, Sporocytophaga cultivo es apreciable luego de ms de 3 semanas de cre- respiraciones aerobias con sustratos orgnicos.
azcares, N2 O2 Azotobacter cimiento. En los litotrofos la generacin de ATP es en prin-
cipio similar que en los organotrofos, excepto que los do- Las cadenas transportadoras de electrones en las respi-
nadores de electrones son sustancias inorgnicas. As, el raciones anaerobias son ms cortas, entrando los mis-
mos a nivel de los citocromos, con lo cual el rendimiento tadoras de electrones para la oxidacin del mismo sus- Cuadro 7- Medios de cultivo de complejidad creciente
energtico no supera los 2-3 o algo ms de moles de ATP trato: una aerobia, que le rinde ms energa y otra anae-
por mol de sustrato oxidado. Las coenzimas deben ser robia, ms corta, que rinde entre 2 y 3 ATP por mol de Componentes comunes componentes adicionales
reoxidadas por flujo inverso de electrones con gasto de glucosa. Medio 1 Medio 2 Medio 3 Medio 4 Medio 5
ATP (figura 10). Estos metabolismos son muy antiguos y
poco eficientes. Agua, 1L
-0,32V
Cuadro 19- Reduccin de los nitratos K2HPO4, 1g NH4Cl, 1g NH4Cl, 1g NH4Cl, 1g
+ +
NAD NADH + H KH2PO4, 1g glucosa glucosa glucosa
Bacterias anaerobias facultativas: Pseudomonas, Bacillus,
Spirillum, Micrococcus MgSO4.7H2O, 20mg cido nicotnico extracto de
Hetertrofas 100mg levadura, 5g
- -
CH3COOH + NO3 CO2 + N2 (N2O) + OH
ADP + P1 FeSO4.7H2O, 10mg
Flavoprotena Sustrato variado: productos de degradacin de polmeros:
ATP celulosa, pectinas, almidn Micronutrientes: Mn,
Mo,Cu,Co,Zn, como sales
e= Auttrofas (0,02-0,5mg/L de c/u)
NO2- Citocromos = - = +
S, S2O3 + NO3 + H2O SO4 + N2 (N2O) + H
-
H2 + NO3 N2 (N2O) + H2O As, la puesta en evidencia de los grupos fisiolgicos - por enriquecimiento previo: si la poblacin es baja
NO3-
Cit a1 Thiobacillus denitrificans, nico representante del gnero conjunto de organismos taxonmicamente a veces no re- se inocula la muestra en un medio selectivo lquido y
con metabolismo anaerobio lacionado, pero que presentan la misma aptitud para efec- por libre competencia predominarn los grupos capa-
ADP + P1 Hidrogenomonas agilis, Micrococcus denitrificans tuar reacciones de biodegradacin o de biosntesis, como ces de emplear los sustratos. Luego de sucesivos pa-
Cit a3 Condiciones para maximizar el proceso los celulolticos, los amonificantes, etc., se realiza por siem- sajes por medio fresco se logra el aislamiento sem-
ATP alto nivel de donadores de electrones (de preferencia bra en medios selectivos apropiados. brando en la superficie del mismo medio, pero slido.
orgnicos)
alto nivel de de nitratos Los medios se hacen selectivos por:
anaerobiosis Siembra y aislamiento 1. contener un sustrato especfico, como fosfato inso-
1/2O2 H2O luble, celulosa, sales de amonio como nica fuente de
Siembra: es colocar un microorganismo en un medio apro-
+0,82V nitrgeno y energa, N2, etc.
Como los nitratos se forman en aerobiosis, una alternan- piado para que se desarrolle.
Figura 10- Flujo inverso de electrones para reducir cia de perodos de aerobiosis y de anaerobiosis (lluvias y 2. cambio del pH, la acidificacin inhibe el desarrollo
coenzimas (NAD, FAD) anegamiento seguidos de aireacin en suelos) estimula Se realiza con fines variados: aumentar el nmero de mi-
de la mayora de los neutrfilos y se posibilita el creci-
mucho este proceso que resulta muy importante en la croorganismos en medio slido o lquido, para obtener bio-
miento de especies resistentes (Lactobacillus, Thio-
depuracin de aguas altamente contaminadas: el nitrge- masa microbiana para uso industrial, preparar inoculan-
bacillus, etc.).
Aceptor nitratos (desnitrificacin) no orgnico se mineraliza a nitratos en aerobiosis y se tes biolgicos, obtener metabolitos de inters. La siembra
Proceso perjudicial para las plantas ya que utiliza a desnitrifica volatilizndose a la atmsfera como N2 por puede realizarse para obtener cultivos puros, entonces 3. con sustancias inhibidoras selectivas: actidiona,
los a los nitratos, que se reducen a N2 que se pierde en respiracin anaerobia. se habla de aislamiento. antibiticos, p-nitroitrobenceno, que inhibe a la mayora
la atmsfera pero el proceso es benfico para el am- de los hongos, pero no a Fusarium sp.
Aislamiento: obtencin de cultivos puros, en general mi-
biente, ya que es la forma de eliminar los nitratos (txi- Aceptor sulfatos (sulfatorreduccin) croorganismos derivados de una sola clula (clon).
cos para el hombre y animales) hacia la atmsfera. La Este proceso es realizado por un grupo de bacterias anae- 4. modificando las condiciones de incubacin (altas
desnitrificacin cierra el ciclo del nitrgeno en la natura- robias estrictas, es decir que slo pueden crecer en anae- temperaturas, por ejemplo) se facilita el desarrollo de
El aislamiento puede ser:
leza (captulo 10). robiosis. Los gneros ms conocidos son Desulfotoma- termfilos, la anaerobiosis inhibe a los aerobios, etc.
culum, Desulfovibrio (cuadro 20). directo: con ayuda de ansa se siembra la superficie del Estos procedimientos son muy tiles para aislar bacte-
La desnitrificacin hetertrofa (cuadro 19) es la ms medio slido. Cuando la densidad es alta (como es el rias difciles de identificar por simple examen micros-
difundida y es realizada por bacterias capaces de rea- El proceso perjudica a las plantas que emplean sulfatos, caso de la mayora de los hetertrofos) se logran colo- cpico. En cambio, en otros grupos de protistas como
lizar la reduccin desasimilativa de los nitratos, en pero es favorable en la depuracin de cursos de aguas nias aisladas. La ayuda de micromanipuladores per- hongos y algas, la diversidad morfolgica facilita su re-
ausencia de O2. Estas bacterias son anaerobias fa- contaminadas, pues volatiliza formas combinadas de azu- mite aislar bajo el microscopio una clula o propgulos conocimiento.
cultativas, es decir que poseen dos cadenas transpor- fre, como gas H2S (captulo 12). claramente visibles como hongos muy pigmentados, pero El cuadro 8 resume principios de aislamiento para nume-
resulta ms difcil en el caso de las bacterias. rosos microorganismos.
Cuadro 6- Clasificacin de los medios de cultivo Cuadro 20- Reduccin de los sulfatos masa microbiana que lo hace apto para uso como me-
jorador de suelos.
Por su origen Bacterias anaerobios estrictas, G-, bacilos con flagelos
naturales (derivados de tejidos, leche, vegetales, sangre, etc. polares Cuadro 22- Reduccin de iones frricos
artificiales (sintticos, de composicin qumica conocida Hetertrofas
= = (ferrireduccin)
(complejos, de composicin no definida, con: peptonas, extracto de carne, CH3CH2OH + SO4 CH3COOH + 2CO2 + S + 2H2O
de levadura, de suelo, sangre +++ ++
Auttrofas MO + Fe CO + H2O + Fe (soluble)
= = 2
Por su naturaleza fsica H2 + SO4 2H O + S
lquidos (en tubos, matraces, en la industria
2 Complejos organo-metlicos
+++
Los sulfuros (H2S, voltil y txico para vegetales Siderforos + Fe el complejo entra a la
slidos (solidificantes como agar-agar al 2%, slico-gel (inorgnico) ++
(precipitan con metales FeS (insoluble) clula y se reduce en el citoplasma (Fe asimilable)
semislidos (0,2% de agar
(reductasa-frrica)
Por su uso en el laboratorio
bsicos o fundamentales: permiten el desarrollo de microorganismos hetertrofos corrientes. Ej: agua, sales, ClNH4, Corrosin anaerobia de metales
Aceptor carbonatos (CO2) Metanognesis =
4Fe + SO4 + H2O SFe + 3Fe(OH) (soluble) + OH
-
glucosa 2
Proceso muy importante en la naturaleza, permite la de-
mejorados o enriquecidos, ejemplo: caldo simple (extracto de carne (5g), NaCl (5g), peptona (10g), agua 1L, pH 7,2
gradacin de molculas orgnicas hasta la produccin de
diferenciales: colorantes distinguen colonias por cambios de pH, potencial redox. Ejemplo: agar simple con glucosa y
azul de bromotimol gas metano (cuadro 21). Este proceso es muy aplicado en el tratamiento de resi-
selectivos: permiten el desarrollo de un tipo microbiano. Ejemplo: nitrificantes (agua, sales, ClNH , pH neutro, oscuridad duos de tambos (estircol), restos de cosechas y en la
4
Cuadro 21- Reduccin de los carbonatos (CO2) depuracin de efluentes de fbricas, en anaerobiosis y es
Hasta la introduccin del agar-agar los medios se solidifi- El cuadro 7 muestra medios de complejidad creciente, los tratado en el captulo 21.
caron con una protena, la gelatina, con el inconveniente medios 2 al 5 llevan los nutrientes del medio 1 ms lo Hidrogenotrfica: CO2 + 4H2 CH + 2H2O (auttrofas)
4
de que muchos microorganismos producen proteasas que sealado en el cuadro. Se aprecia que las capacidades Acetilclstica CH3COOH CO + CH El cuadro 22 resume la intervencin del hierro en proce-
2 4
la hidrolizan, licuando al medio, inicialmente slido. El agar- metablicas de los microorganismos decrecen desde los Methanosarcina, Mathanobacillus, Methanococcus sos redox anaerobios, que lleva a los iones frricos inso-
agar es un polmero de alto peso molecular, aislado de un que se pueden desarrollar en el medio 1 (agua y sales, Metilotrfica: usan metilamina, metilsufuros (hetertrofas) lubles y no aprovechables por las plantas a formas redu-
alga marina. Funde a los 100C y se mantiene en estado sin C ni N combinados) hasta el medio 5 (complejo, con cidas ferrosas, solubles (captulo 12).
lquido hasta aproximadamente 45C lo que permite re- extracto de levadura como fuente de N - aminocidos y
El CO2 (carbonatos) acta como donador y el H2 como
partirlo en cajas de Petri, antes de su solidificacin. factores de crecimiento (vitaminas, aminocidos, precur-
aceptor de electrones (autotrficas)
sores de los cidos nucleicos). Fotosntesis
Se usan solidificantes inorgnicos, como el slico gel, pro-
En la metanognesis acetoclstica, las bacterias quimio-
ducido por la unin de soluciones de silicato de sodio o de En resumen los medios pueden ser: Constituye un proceso redox de conversin de la energa
hetertrofas pueden desdoblar el cido actico en meta-
potasio con cido clorhdrico de densidades adecuadas. no selectivos, o de amplio espectro que permiten el de- lumnica en energa qumica (ATP). La energa de la luz
no y CO2.
Luego de gelificacin y repetidos lavados para eliminar el sarrollo de muchos microorganismos. Como se supone, se emplea para reducir CO2 o compuestos orgnicos
cido restante, se pasan por agua hirviendo y luego se aislar la mayora de los organismos es tarea imposible. La mayora de las bacterias metanognicas son Arche- menos reducidos a molculas orgnicas (azcares), por
impregnan con los nutrientes. Es empleado para aisla- Se denomina microflora total al conjunto de los hetertro- obacterias, o sea las bacterias ms primitivas, que slo organismos aerobios y anaerobios.
miento de organismos auttrofos, como los nitrificantes. fos capaces de crecer en medio con extracto de suelo y crecen en ambientes desprovistos de O2, muchas veces
una fuente de carbono y energa, como la glucosa. acta ms de una especie, sinrgicamente y resulta difcil Tipos de fotosntesis en los microorganismos
Los medios slidos se usan en tubos o cajas de Petri, su aislamiento en cultivo puro.
para el aislamiento, purificacin y numerosos tipos de es- Otros medios son ms aptos para el desarrollo de los hon- 1) CO2 + 2H2O (CH2O)n + H2O + O2 (oxignica)
tudios. Los semislidos, llevan baja concentracin de so- gos: sales minerales, sacarosa, nitratos, acidificado por Una importante aplicacin de este proceso microbiano 2) CO2 + H2S (CH2O)n + S (anoxignica)
lidificante, por ejemplo con 0,2% de agar y son emplea- cidos orgnicos y con antibiticos que inhiben la prolife- lo constituye la biotransformacin de residuos orgni-
dos para estudios de microorganismos microaeroflicos racin de bacterias. Los actinomicetes pueden atacar nu- cos en: 3) CO2 + CH3COOH (CH2O)n + H2O
(cuadro 7). Los medios selectivos son muy tiles para el trientes ms complejos que las bacterias, como casena, 4) CH3COOH (CH2O)n + H2O
aislamiento de miroorganismos con exigencias particula- quitina, almidn, cidos hmicos, etctera. biogs (mezcla de gases donde predomina el metano,
res, como los autotrfos (medios sin C-combinado), fija- con H2, CO2, etc) y
La oxignica (tipo 1) es la realizada por los vegetales y
dores de N2 (medio sin N-combinado), otros medios lle- selectivos, o de espectro limitado, estn formulados biofertilizante un resto no contaminante que contiene entre los microorganismos por las algas (protistas supe-
van antibiticos, sales biliares, etc. para evitar el desarro- para favorecer el desarrollo de un grupo particular de la fraccin lignocelulsica de los restos orgnicos y bio- riores) y las cianobacterias (protistas inferiores), libera
llo de organismos no deseados. microorganismos a expensas del resto de la poblacin.
oxgeno y 2 ATP y 2 NADPH+ por vuelta y emplea agua El tipo 2) es realizado por las bacterias fotosintticas sul- Cuadro 5- Ejemplos de tipos nutricionales microbianos
como donador externo de electrones (litotrofos). Es con- furosas purpreas y verdes: Chromatiaceae y Chlorobia-
siderada ms reciente en la evolucin en relacin a la ceae (gneros ms conocidos: Chromatium y Chlorobium) Tipo Fuente Fuente de Donadores Ejemplos
anoxignica. Los microrganismos poseen dos fotosiste- distinguibles por sus pigmentos. Usan H2S o H2 como do- de energa carbono de electrones
mas: I generador de ATP y poder reductor y el II que libera nadores de electrones. El S acumulado en las clulas
Fotoautolitotrofos luz CO2 Agua, sulfuros, H2 Algas, cianobacterias
O2 consecuencia de la fotlisis del agua (figura 11). puede ser empleado como fuente de energa cuando cre-
(FAL) Bacterias fotosintticas
cen en quimiotrofia, sin luz. Crecen en barros o aguas en sulfurosas
El cuadro 23 presenta a los microorganismos fotosin- donde hubo anaerobiosis (produccin de H2S).
tticos, eucariotas y procariotas. Es curiosa la posicin Fotoautoorganotrofos luz CO2 cidos orgnicos Bacterias fotosintticas
de las cianobacterias, que poseyendo estructura celu- El tipo 3) y 4) lo realizan integrantes de una sla familia de (FAO) no sulfurosas
lar procariota han evolucionado en la funcin fotosin- bacterias fotosintticas no sulfurosas: Rhodospirillaceae
Fotoheteroorganotrofos luz Materia orgnica Materia orgnica Algunas bacterias
ttica, al emplear el agua como donador externo de (gnero Rhodospirillum). No pueden emplear H2S ni H2 (FHO) (cidos) (cidos) fotosintticas no sulfurosas
electrones. como donadores de electrones, pero si molculas orgni-
cas simples, como cidos o alcoholes. El tipo 4) no puede Quimioheteroorganotrofos Reacciones Materia orgnica Materia orgnica La mayora de los
reducir el CO2 (la forma ms oxidada del carbono) con la (QHO) qumicas microorganismos
Cuadro 23- Diversidad de organismos
energa de la fotosntesis, la que slo le alcanza para re-
fotosintticos Quimioautolitotrofos Reacciones CO2 NH4+, S=, H2, etc. Pocas bacterias
ducir molculas de estado de oxidacin intermedio (ci- (QAL) qumicas tpicas y archeae
eucariotas procariotas
dos) hasta carbohidratos.
plantas superiores cinaobacterias Son fotoheteroorganotrofas.
algas filamentosas bacterias sulfurosas Fotoautoorganotrofos Bacterias fotosintticas no sulfu- Para el desarrollo microbiano es necesario tener en cuen-
y unicelulares verdes y purpreas La mayora de las bacterias fotosintticas anaerobias se rosas (emplean sustancias orgnicas simples como do- ta adems de los nutrientes, las llamadas condiciones
(diatomeas, euglenoides, bacterias no sulfurosas desarrollan en ambientes anegados, barros, capas sub- nadores de electrones en la fotosntesis) de cultivo: el pH, presin osmtica, temperatura de in-
dinoflagelados) verdes superficiales de suelos, sucediendo a las bacterias sulfa- cubacin, nivel de oxgeno, etc. a niveles adecuados,
y purpreas torreductoras, que liberan cido sulfhdrico en anaerobio- Quimioautolititrofos Bacterias oxidantes del amonio, del sin las cuales el microorganismo no se desarrollar o lo
sis. Tambin la mayora es capaz de fijar N2, por lo que nitrito, del azufre, del hierro, del hidrgeno (aerobias), har mal.
constituyen una importante herramienta de estudio; el flu- desnitrificantes auttrofas (anaerobias). Importantes en los
La fotosntesis anoxignica (tipos 2, 3 y 4) es ms pri- ciclos biogeoqumicos. Condiciones para el crecimiento microbiano
jo electrnico de la fotosntesis es capaz de reducir CO2 y
mitiva, es conocida como fotosntesis bacteriana, o ccli- Se toman en cuenta:
N2 en anaerobiosis.
ca, los electrones de la clorofila bacteriana, o bacterioclo- Quimioheterotrofas La mayora de los microorganismos Los medios de cultivo, que aportan los nutrientes, como
rofila, que absorbe en el infrarojo (700-800nm), vuelven a FOTOSISTEMA I usan materia orgnica como fuente de energa, de carbo- el agua, fuentes de E, C, N, S, P, etc., los micronutrientes,
ella por lo que genera slo 1 ATP por vuelta de los electro- A P700+ B no y donadores de electrones (la sustancia que se oxida). empleados en baja concentracin (Cu, Cd, Zn, etc. y los
nes. Se realiza en anaerobiosis y surgi cuando en la -1.5 Fd
En general la misma sustancia puede cumplir todas estas que actan como factores de crecimiento (vitaminas, ami-
800+
atmsfera no haba oxgeno. El NADP+ es reducido por BI
funciones. Todos los hongos, protozoos y la mayora de nocidos esenciales, bases de cidos nucleicos).
NADP
FOTOSISTEMA II
flujo inverso de electrones o directamente por los dona- P680+
NADP NADPH, H
las bacterias pertenecen a esta categora.
-1.0
dores externos de electrones en reaccin independiente Feofitina Las condiciones de cultivo: temperatura, radiaciones,
PQ Q
de la luz (cuadro 24). NADPH, H
luz, aireacin, presin osmtica, que afectan el desarrollo
CIT. b/f
PC CIT. bc Medios de cultivo de los microorganismos.
0.0 P700
Cuadro 24- Reduccin de NAD+ en bacterias CIT. c Un gran desarrollo en la microbiologa se ha logrado lue- Clasificacin de los medios de cultivo
verdes y purpreas 800
go del aislamiento y cultivo de los microorganismos en el Los medios de cultivo (cuadro 6) pueden ser de origen na-
P680
H2O laboratorio. Esto se logr a partir de su siembra en los tural, como jugos vegetales, leche, etc. o artificiales, formu-
1.0 Donadores externos
ATP ADP + Pi O2 + H+ de electrones llamados medios de cultivo: conjunto de nutrientes que lados en el laboratorio. Por su naturaleza fsica, se usan
H2S, S + NAD+
=
S, SO4 + NADH + H
+ Complejo
Mn
permiten el desarrollo de microorganismos particulares. lquidos para propagar un microorganismo, para el estudio
ac. orgnicos fumarato Todos contienen agua y fuentes de energa, C, N, S, Fe, de aspectos metablicos, etc., slidos, con sustancias soli-
succinato Figura 11 Esquemas de las fotosntesis oxignica (A) y de la P, etc., micronutrientes, factores de crecimiento y aditivos dificantes, en general orgnica como agar-agar al 2%, o
anoxignica (B) como colorantes, antibiticos, sales, etc. minerales, como el slico-gel.
la clula en contra de un gradiente de concentracin. La translocacin de grupos implica la introduccin de una Las figura 11 esquematiza el flujo de electrones en am- En el cuadro 25 se comparan ambos tipos de procesos.
Los nutrientes deben atravesar la membrana semiper- sustancia al interior de la clula luego de modificarla qu- bos tipos de fotosntesis, la 12 (Madigan et al., 2000) y la
meable por smosis, por los mecanismos conocidos micamente, el sistema de translocacin que mejor se co- 13 (Prescott et al.. 1999), muestran las estructuras celula- Cuadro 25- Energa y poder reductor en ambas
como: difusin facilitada, transporte activo y por translo- noce, es el del fosfoenolpiruvato, sistema fosfotransfera- res que albergan a los pigmentos fotosintticos y pigmen- fotosntesis
cacin de grupos. sa de azcares. Muchos hidratos de carbono son trans- tos accesorios en clulas procariotas y eucariotas. Poder reductor C energa
portados por este mecanismo. anoxignica
Microorganismos eucariotas sin pared o con orificios en
la misma incorporan nutrientes por endocitosis: pinoci- Importante es el papel que juegan los siderforos, mol- H2S CO2 ADP
tosis en el caso de sustancias en solucin (gotas) o fago- culas orgnicas de bajo peso molecular, capaces de formar Membrana fotosittica en lminas

complejos organo-metlicos con el ion frrico a los efectos (bacterias purpreas) S hv
citosis, sustancias particuladas (bacterias).

de transportarlo al interior de las clulas, donde una hierro SO4= (CH2O) ATP
El sistema ms comn entre las bacterias es la difusin reductasa lo reduce a in ferroso, asimilable por el micro- n
pasiva, proceso por el cual las molculas se desplazan organismo. El tema es relevante en el control biolgico de Membranas y vesculas individuales oxignica
desde una regin de alta concentracin a otra de menor microorganismos fitopatgenos, quienes compiten por ba- (clorobio) H2 O CO2 ADP
concentracin. Cuando intervienen protenas de mem- jos niveles de hierro disponible en los suelos, con los micro- (bacterias purpreas) hv hv

brana (permeasas) que se unen al sustrato para facilitar organismos antagonistas seleccionados e inoculados en las 1
/2O2 (CH2O) ATP
n
su difusin al interior de la clula se habla de difusin semillas en viveros, como Pseudomonas (captulo 17). Clorosomas unidos a la membrana
facilitada. plasmtica La figura 14 (Madigan et al., 2000) muestra la composi-
(bacterias verdes)
Clasificacin nutricional cin y espectro de absorcin de la clorofila a, tpica de los
El transporte activo permite el pasaje de molculas en
de los microorganismos eucariotas, la bacterioclorofila, de los procariotas. Se ob-
contra de un gradiente de concentracin, situacin muy
Bacterioclorofila asociada directamente serva el mayor espectro de absorcin en las bacterioclo-
comn en la naturaleza, con aporte de energa en forma a la membrana plasmtica
Los microorganismos se clasifican nutricionalmente por rofilas, que absorben adems en la regin azul del espec-
de ATP, lo que permite concentrar sustancias con inter-
la naturaleza de su fuente de energa, por la fuente princi- tro, luz de longitud de onda larga, cerca de 1000nm, no
vencin de protenas transportadoras que se unen a de-
pal de carbono y por la naturaleza de los donadores de Figura 12- Localizacin de pigmentos fotosintticos en visible al ojo humano (zona oscura, en pantanos, suelos
terminados solutos en forma muy especfica y forman un
electrones (cuadro 4). procariotas anegados).
poro en la membrana. Sustancias similares pueden com-
petir por la protena de transporte tanto en la difusin faci- El cuadro 5 presenta los tipos nutricionales ms comu-
litada como en el transporte activo. Las bacterias emplean nes, donde se aprecian organismos que emplean sustan- Membrana interna Membrana externa
tambin la fuerza motriz de protones (generada en el gra- Cloroplasto
cias muy simples, como minerales y CO2 y aquellos, ms Estroma
diente de protones en el transporte de electrones a nivel exigentes, con requerimientos de compuestos carbona- Tilacoide
de membrana) para dirigir el transporte activo. dos variados.
Los microorganismos presentan varios sistemas de trans- Resumiendo veremos ejemplos de algunos grupos:
porte para una misma sustancia, lo que les brinda gran Fotoautolitotrofos Algas, bacterias fotosintticas sulfu-
ventaja competitiva en el ambiente. rosas, cianobacterias ATP
Estroma
Piridin
nucletido reductasa
Cuadro 4 Clasificacin nutricional de los microorganismos ADP + Pi 3H+ ATP
CF1
Fotones Complejo citocromo bf Fotones 2H+ + sintetasa
Fuentes de energa (fototrofos emplean la luz 8H+ 2NADP+ 2NADPH
(quimiotrofos reacciones qumicas con sustratos: orgnicos e-
Fd FAD
inorgnicos QA QB 4PQH2 e- Cit b6 FeS
Feofitina e- A
FeS
Fuente principal de carbono (auttrofos CO2 4PQ
e- P680 Cit f
(hetertrofos compuestos inorgnicos Mn e- e- P700
CGO 8H + PC - Cu+ 3H+
PC - Cu2+ Fotosistema I
2H2O O2 + 4H+ Fotosistema II
Fuente de donadores de electrones/H+ (orgnicos organotrofos Lumen
(molcula que se oxida) (inorgnicos litotrofos Figura 13- Localizacin de pigmentos fotosintticos en eucariotas
0,9
tticos en el suelo enriqueciendo poblaciones escasas tos elementos. Integran normalmente enzimas y cofacto- de S hasta sulfatos. El Fe es asimilado en estado reduci-
0,8 clorofila a de ellas en una columna de vidrio, que se puede repro- res, tienen funcin cataltica y mantienen estructuras pro- do (Fe++) o en complejos orgnicos (EDTA-Fe).
0,7 carotenoide ducir en cualquier laboratorio. Se colocan barros o sedi- teicas. As, el Mo interviene en la fijacin del N2, en la
Absorbancia
0,6 mentos de estanques o lagos (inculo), con una fuente nitrato reductasa, el Co integra la vitamina B12, el Na es Los dems nutrientes son muy empleados en general
0,5 de materia orgnica (papel, almidn, azcares, etc.), requerido por muchas especies marinas. como sales solubles.
0,4 sulfato de sodio y anaerobiosis. Al cabo de un tiempo
Requerimientos de carbono: los microorganismos pre- Factores de crecimiento: muchos microorganismos, in-
0,3 con luz indirecta, se aprecian colores que evidencian el
sentan gran versatilidad en el empleo de sustancias car- cluso los auttrofos, requieren una o ms molculas org-
0,2 enriquecimiento logrado (figura 15). Actan primero bac-
bonadas. Por las fuentes de carbono que emplean se nicas para su desarrollo, ya que no pueden sintetizarla a
0,1 terias sulfatorreductoras hetertrofas que liberan sulfu-
clasifican en: partir de los nutrientes. Deben tomarlas completas del me-
0 ros que reaccionan con el hierro del suelo dando preci-
340 400 500 600 700 800 900 dio o bien sus precursores, a muy baja concentracin, como
longitud de onda (nm) pitado negro de sulfuro ferroso.
auttrofos: fuentes inorgnicas: CO, CO2 los micronutrientes. Ejemplos de ellos son: vitaminas (parte
o totalidad de cofactores de enzimas), aminocidos esen-
0,9 bacterioclorofila a Parte del sulfuro soluble es fuente de donadores externos hetertrofos: fuentes orgnicas muy variadas: azca- ciales para la sntesis proteca, bases pricas y pirimdi-
0,8 carotenoide de electrones para las bacterias fotosintticas, pigmenta- res, alcoholes, cidos grasos, hidrocarburos, polmeros cas (para la sntesis de cidos nuclecos) (cuadro 1).
0,7 das de verde y rojo (bacterias verdes y purpreas). Arriba
Absorbancia
como la celulosa, lignina.

0,6 se desarrollan algas. Muchos microorganismos son empleados para valorar can-
0,5 No existe ninguna molcula orgnica de origen natural tidades pequeas de factores de crecimiento, como la vi-
0,4 El aislamiento puede lograrse tomando muestras en la que no pueda ser empleada por un microorganismo. tamina B12, riboflavina. El microorganismo se desarrolla
0,3 columna con una pipeta, a la altura de los colores tpicos
0,2 Especies de pseudomonas pueden emplear ms de 100 en forma proporcional a la cantidad de factor de creci-
y sembrando en cajas de Petri cerradas y a la luz, a los miento agregado al medio de cultivo. Curvas patrones con
0,1
efectos de obtener colonias aisladas. compuestos diferentes de C orgnico. Desgraciadamen-
0 te, sustancias sintetizadas por el hombre como los plsti- estndares puros de la vitamina, permite efectuar las com-
340 400 500 600 700 800 900
cos, el DDT, muchos herbicidas, se degradan muy lenta- paraciones. Los bioanlisis microbiolgicos se emplean
longitud de onda (nm)
mente o no lo hacen (sustancias recalcitrantes). muchas veces a pesar de los avances en las determina-
Figura 14- Espectro de absorcin de la clorofila y de la ciones qumicas (Captulo 20).
bacterioclorofila. En el otro extremo de la escala, se encuentran bacterias
muy selectivas en el empleo de fuentes de carbono: las Un microorganismo se denomina:
metanotrficas, emplean el hidrocarburo metano, meta- prottrofo cuando emplea los mismos nutrientes que la
Cuadro 26- Bacterias fotosintticas anoxignicas nol, CO y algunas otras molculas con un slo C orgni- mayora de las cepas de su especie que existen en la
Anoxyphotobacteria co. Otras emplean CO2 y son los microorganismos pro- naturaleza. Pero esta bacteria puede mutar y requerir to-
ductores primarios de materia orgnica. mar del medio el nutriente para su desarrollo, se compor-
Purpreas no sulfurosas Flia I Rhodospirillaceae ta entonces como
gn. Rhodospirillum Requerimientos en N, P, S: los microorganismos pue-
Purpreas sulfurosas Flia II Chromatiaceae den emplear estos elementos a partir de las mismas fuen- auxtrofo para ese nutriente, como un aminocido, que
gn. Chromatium tes orgnicas de las que derivan el carbono, aunque usan se convierte en esencial. Estos microorganismos se usan
frecuentemente fuentes inorgnicas, como sales minera- mucho en estudios de gentica bacteriana.
Verdes sulfurosas Flia III Chlorobiaceae
gn. Chloorobium les solubles. El N lo usan desde fuentes inorgnicas redu-
cidas como el amonio (NH4+), pasando por el N-orgnico En resumen: las potencialidades metablicas de los mi-
(R-NH2), N2 (diazotrofos o fijadores de N2), NO3-. La fuen- croorganismos son muy variadas (cuadro 9), desde aque-
A modo de resumen el cuadro 26 se analizan los princi- llos prcticamente autosuficientes (fotolitotrofos), hasta los
te ms sencilla de asimilar la constituyen las sales de amo-
pales gneros de bacterias fotosintticas anoxignicas, muy exigentes, que requieren agregados de varios facto-
nio, ya que el N se encuentra en el mismo estado de oxi-
en el 27 se resumen los procesos generales de la fotosn- res de crecimiento, muchas veces contenidos en los ex-
dorreduccin que en los aminocidos. La clula emplea
tesis y en el 28 se comparan las propiedades de los siste- tractos de lavadura, de malta, de carne, de suelo, etc.
energa creciente al asimilar nitratos y nitrgeno molecu-
mas fotosintticos encontrados en microorganismos. Figura 15- Columna de Winogradsky. lar. El S puede ser nutriente como sulfuros (en general Entrada de nutrientes a la clula
Manchas negras de sulfuro ferroso, bacterias fotosintticas: txicos para la mayora de los microorganismos), S-org-
Antes de lograr su aislamiento en cultivo puro, Wino- sulfurosas purpreas y verdes y en la parte superior se En general los nutrientes deben ser transportados des-
nico (puentes sulfuro o disulfuro), S, formas inorgnicas de soluciones diluidas (suelo, aguas, alimentos) hacia
gradsky puso en evidencia procesos anaerobios fotosin- desarrollan algas.
to mayor es el dimetro del halo de inhibicin, ms efi- Cuadro 27- Ecuaciones generales de fotosntesis Cuadro 28- Propiedades de los sistemas
ciente es el antibitico, en este caso impregnado en los fotosintticos microbianos
discos de papel de filtro. Por ejemplo, en este caso se oxignica
observa que la vancomicina (V) es efectiva para M. algas, cianobacterias Propiedad eucariotas cianobacterias bacterias
luteus, pero no para el S. albus. verdes y
CO2 + 2H2O (CH2O)n + H2O + O2 purpreas
Pigmento
Pared celular Membrana celular anoxignica fotosinttico clorofila a clorofila a bacterioclorofila
CO2 + H2S (CH2O) n + S
Fotosistema II presente presente ausente
cido nucleico bact. sulfurosas purpreas y verdes Donadores
Figura 20- Antibiograma para los patgenos Staphylococcus de electrones H2O H2O H2, H2S, S,
(Chomatiaceae y Chlorobiaceae)
albus y Micrococcus luteus comp.orgnicos
CO2 + CH3COOH (CH O) n + H2O
Replicacin
2 Produccin
Acidos nucleicos La formacin de la penicilinasa, enzima que hidroliza O2 oxignica oxignica anoxignica
Transcripcin cadenas laterales de las penicilinas, es un ejemplo de estos bact. no sulfurosas (Rhodospirillaceae)
Ribosoma
Productos
Enzima
mRNA
mecanismos de resistencia y la diseminacin de estas primarios de
CH3COOH (CH2O) n + H2O
resistencias va plsmidos hace que rpidamente se pro- la conversin
Traduccin Protena integrantes de Rhodospirillaceae
paguen patgenos en ambientes intrahospitalarios. de energa ATP, NADPH ATP, NADPH ATP
Sustrato
fase oscura: Fuente de
Antimetabolitos
Sntesis proteica Resumen: el uso indebido de los antibiticos, su reco- 6CO2+ 18 ATP +12NADPH C6H12O6 +18ADP + Pi carbono CO2 CO2 Compuestos org-
mendacin sin efectuar el aislamiento y cultivo del pat- +12NADP+ nicos y/o CO2
Figura 19- Modos de accin de los antibiticos
geno para conocer el antibitico adecuado, su empleo in-
discriminado en raciones para aves, alimentos para ga- Resumen final: el cuadro 29 vincula la clasificacin nutricional de los microorganismos con los posibles mecanismos
Resistencias: si bien la investigacin y desarrollo de nue- nado, en invernculos con ciertos cultivos de valor econ- de obtencin de energa y cita ejemplos de cada grupo.
vos antibiticos, incluidos los semisintticos o los comple- mico, han hecho que se deban estar cambiando conti-
tamente sintticos (antivirales o antiprotozoarios) se ha nuamente las frmulas, las cadenas laterales, los radica-
incrementado mucho en los ltimos aos, tanto los de les unidos a la molcula principal y deba gastarse mucho
espectro reducido (eficaces frente a una gama estrecha tiempo y dinero en investigaciones en la bsqueda de
de patgenos), como los de amplio espectro, como la nuevos antibiticos.
ampicilina, rifampicina), existe el problema de la prdida
creciente de eficacia por el desarrollo de resistencias en Se desarrollan programas internacionales sobre el uso
los microorganismos originariamente sensibles. racional de antibiticos como el de la Organizacin Mun-
dial de la Salud (OMS) al que muchos pases adhieren.
Los mecanismos de resistencia a antibiticos crea-
dos por los microorganismos incluyen:
a) desarrollo de una va metablica alternativa a la va Anexo: Esterilizacin
que el antibitico bloquea
b) la produccin de enzimas que inactivan a los antibiticos Se define por esterilizacin el proceso por el cual se elimi-
c) alteracin del sitio blanco de accin del antibitico evi- nan todos los microorganismos incluidas las endosporas
tando su unin bacterianas de cualquier objeto, superficie o medio, por
d) bloqueo del transporte del antibitico al interior del mi- remocin o muerte de stos. Se emplean mtodos fsicos
croorganismo y qumicos (cuadro 12).
Cuadro 29 - Clasificacin nutricional de los microorganismos Su modo de accin (figura 19) es variada, pueden alterar
cualquier estructura sensible de la clula: inhibiendo la
Fuente de energa: sntesis proteica, actuando sobre los ribosomas 70S, o su
Luz (fototrofos) Carbono: CO2 ( auttrofos) fraccin 50S como la eritromicina, estreptomicina o el clo-
orgnico (hetertrofo) ranfenicol, la sntesis de cidos nucleicos, como la rifam-
-
Reacciones qumicas Donadores de e : inorgnico (litotrofo) picina, alterando estructura de la pared celular (penicilina,
(quimiotrofos) orgnico (organotrofo) ampicilina, bacitracina, cefalosporinas), o la membrana
(polimixinas), inhibiendo procesos bioenergticos.
Electromagntica: FOTOTROFOS Figura 17- Frmula de la penicilina
Fotoautolitotrofos Fotoautoorganotrofo Fue en 1928 cuando el mdico escocs Alexander Fle-
* Bacterias sulfurosas purpreas y verdes * Bacterias no sulfurosas purpreas a ming redescubri la penicilina (ya detallada en 1896 por
(Chromatiaceae y Chlorobiaceae) (Rhodospirillaceae) un estudiante en Francia), al dejar durante sus vacacio-
CO2 + H2S (CH2O)n + S + H2O CO2 + CH3COOH (CH2O)n+ H2O nes una caja de Petri con estafilococos patgenos sobre
* cianobacterias Fotoheteroorganotrofo los cuales se desarrollaron las esporas del hongo Penici-
CO2 + 2H2O (CH O)n + O + H O * Bacterias no sulfurosas llum notatum, que inhibieron el crecimiento de las colo-
2 2 2
CH3COOH (CH2O)n + H2O nias bacterianas. Recin en 1940 se publicaron los tra-
No pueden reducir el CO2 bajos de aislamiento y se extendi la aplicacin de esta
sustancia, a la que sigui la estreptomicina por Waks-
Reacciones qumicas: QUIMIOTROFOS man, en 1944.
Quimioautolitotrofo Quimioheteroorganotrofo
Bacterias: aerobias La mayora de las bacterias, todos los hongos, protozoos Evaluacin de la concentracin de un antibitico
b A los efectos de conocer la concentracin de estas sus-
oxidantes del amonio: Respiraciones aerobios
+
NH4 1,5 O2
- + tancias ya sea en sueros de pacientes, en preparados
NO2 + 2H + H2O C6H12O6 + O2 6CO2 + 6H2O
comerciales, etc. se emplean los mtodos de:
oxidantes del nitrito: Respiraciones anaerobias
- - -
NO2 + 0,5O2 NO3 C6H12O6 +NO3 CO2+ H2O + N2 1) difusin en agar, donde se siembra en superficie pat-
oxidantes del azufre: Aceptores de electrones: genos aerobios o un microorganismo aerobio facultati-
S + 1,5O2 H2SO4 + H20 Nitrato: desnitrificantes vo de crecimiento rpido como el Staphylococcus o
=
S O + 4O H SO + H O Sulfato: sulfatorreduccin Pseudomonas y se colocan discos de papel impregna-
2 3 2 2 4 2
C6H12O6+SO4= CO2 + H20 + H2S dos con distintas concentraciones del antibitico. El di-
oxidantes del hierro: metro del halo de inhibicin formado es proporcional a
++
Fe
+++ +++ la concentracin.
Fe + O2 + H2O Hierro: reduccin del Fe
oxidantes del hidrgeno: CO2/carbonatos: metanognesis 2) dilucin en tubos, determina la CIM (concentracin
H2 + O2 H2O H2 + CO2 CH4 + H2O inhibitoria mnima), que es la concentracin ms baja
del frmaco que impide el crecimiento de determina-
Bacterias anaerobias: Fermentaciones:
- = - do patgeno, colocando diluciones seriadas del anti-
SH2 + NO3 SO4 + N2 Donadores y aceptores de e : molculas orgnicas
(bacterias, hongos) Figura 18- Hongos productores de penicilina bitico en tubos sembrados con un patgeno estn-
Fermentacin lctica a) halo de inhibicin dar. Luego de la incubacin se determina la CIM como
C6H12O6 CH3CHOHCOOH b) micelio y esporas de Penicillum spp la dilucin menor que no presenta crecimiento aun lue-
go de replicar el cultivo en medio fresco sin el antibi-
Actinomicetes del gnero Streptomyces tico.
Grupo pequeo, gran especificidad por el sustrato, La mayora de los microorganismos de la naturaleza. Bacterias como las del gnero Bacillus
bajo rendimiento energtico, por respiraciones aerobias Los ms eficientes: respiraciones aerobias con sustratos Hongos como los de los gneros Penicillum y Cepha- La figura 20 es una prueba de sensibilidad de un micro-
y anaerobias con sustrato inorgnico. orgnicos losporium organismo patgeno frente a distintos antibiticos. Cuan
Crecimiento lento. Productos importantes para las plantas.
Ejemplos de ellos: penicilina, estreptomicina, kanami- Bibliografa 3) Por qu las respiraciones aerobias con sustrato inor-
cina. gnico rinden menos energa que las con sustrato or-
Madigan, Martinko y Parker, Brock, Biologa de los microor- gnico?
Sulfanilamida cido p-aminobenzoico La mayora de los antibiticos empleados en salud animal ganismos, 9 edicin, 2000, Prentice Hall International 4) Seale alguna respiracin aerobia incompleta de gran
y humana son producidos por hongos y bacterias. Se co- Prescott, Harley, Klein Microbiologa, 1999 McGraw- valor biotecnolgico
nocen ms de 8000 sustancias antibiticas y cada ao se Hill.Interamericana 5) Por qu se considera que las fermentaciones son pro-
descubren cientos de nuevos productos. Los trabajos son cesos muy antiguos
arduos y costosos (cuadro 11) (captulo 20). 6) La aparicin de que elemento cambi las formas de
Preguntas de repaso obtencin de energa?
Cuadro 11- Produccin de antibiticos 7) Por qu se dice que las bacterias fotosintticas anae-
1) Cite 3 grupos de bacterias fotoauttrofas y 3 quimiau- robias pueden crecer en zonas donde aparentemente
ttrofas que habiten el suelo y explique las diferen- no hay luz visible?
Deteccin de organismos productores (siembra
cido flico cias entre ambos grupos. Anote y diferencie la forma 8) Qu importancia ecolgica tienen estas bacterias?
de suspensiones de suelo en medios slidos:
por la cual ellas obtienen carbono y energa. 9) Compare la estructura y la funcin fotosinttica de: cia-
Figura 16- Acido para amino benzoico y la sulfanilamida seleccin de colonias con halos de inhibicin)
2) Seale los tipos metablicos por los cuales obtienen nobacterias y bacterias sulfurosas purpreas y verdes?
Mtodos de extraccin y purificacin eficientes
energa los siguientes microorganismos: aerobios obli- 10) Analice la sucesin microbiana en la llamada columna
y obtencin de un producto cristalino de elevada
La sulfanilamida que es anloga pero no idntica (figu- gados, anaerobios obligados, anaerobios facultativos de Winogradsky. Cmo aislara en cultivo puro a los
pureza
ra 16) al cido para amino benzoico (PABA), requerido y anaerobios aerotolerantes diferentes grupos?
Acabar con un producto nico en alta concentra-
en la sntesis del cido flico, vitamina y factor de creci-
cin
miento para muchos microorganismos, fue empleada en
Determinar el espectro de accin (microorganis-
medicina antes del descubrimiento de los antibiticos.
mos sensibles)
El 5 Br uracilo es anlogo del uracilo, pero el correspon-
diente cido nucleico no puede sintetizarse en su pre-
sencia. La resistencia desarrollada por los microorganismos a los
antibiticos constituye uno de los mayores problemas en
Estas sustancias vuelven a emplearse en medicina, la prdida de eficacia de estas importantes sustancias
dado el problema de resistencias que estn provocan- quimioteraputicas. Los antibiticos naturales son mejo-
do los antibiticos, que pueden convertir en inefecti- rados por la industria, cambiando los radicales (R), largo
vos a estos productos poco tiempo despus de su re- de cadenas laterales, etc. como ocurre con la penicilina.
comendacin. (figura 17).
La formacin de antibiticos se consideraba un fenmeno

Antibiticos de laboratorio, ya que se producen en pequeas cantida-
des y se pensaba que en ecosistemas naturales no al-
Los antibiticos son sustancias qumicas de composi- canzaran a la clula sensible sin descomponerse y/o ad-
cin qumica variada, desde pptidos a molculas hetero- sorberse a los coloides del suelo o a partculas en el agua.
cclicas, como la penicilina (figura 17), quinonas, como Pero actualmente se reconoce su participacin en fen-
las tetraciclinas, con accin antimicrobiana, producidas por menos de lucha biolgica en ambientes naturales como
un microorganismo contra otro microorganismo. Los ms el suelo o aguas, asegurando, entre otros factores, la su-
conocidos son los secretados por bacterias (incluidos los premaca de un microorganismo sobre sus competidores
actinomicetes) y los hongos (figura 18). Se producen en en lugares con escasos nutrientes.
la fase estacionaria de crecimiento, cuando las condicio-
nes para el crecimiento son limitantes (telofase) y se con- Los grupos microbianos productores de antibiticos com-
sideran metabolitos secundarios. prenden:
a) concentracin del agente qumico Cuadro 10- Antispticos y desinfectantes

b) temperatura en que se emplea ms comunes
c) tipo y concentracin del microorganismo
d) naturaleza del material a tratar Sustancia Modo de accin Usos
Etanol Desnaturaliza protenas Antisptico

Por sus efectos en el equilibrio biolgico en ambientes y solubiliza lpidos (piel)
naturales analizaremos el efecto de algunas de estas sus- Formaldehdo Reacciona con grupos Desinfectante
-SH y -COOH
tancias: las bacteriocinas, las toxinas, enzimas, anti-
biticos en los captulos 14 y 20. Nitrato de plata Precipita protenas Antisptico
(ojos)
Detergentes Altera membranas Antisptico
a c Desinfectante
log N log N
clulas clulas Compuestos Desnaturaliza protenas Antisptico
fenlicos Daa membranas Desinfectante
bacteriosttico tiempo bacteriosttico tiempo

Agentes quimioteraputicos
b recuento total
log N recuento de Los agentes quimioteraputicos se emplean para el con-
clulas viables
trol microbiano dentro del husped, deben reconocer es-
tructuras celulares microbianas y no actuar sobre las mis-
bactericida tiempo mas estructuras del organismo superior (accin selecti-
va). Son sustancias qumicas utilizadas para matar o inhi-
Figura 15- Tres tipos de accin de sustancias qumicas bir microorganismos dentro del cuerpo humano; poseen
sobre los microorganismos toxicidad selectiva: actan sobre las clulas de algunos
a) bacteriosttico, b) bactericida sin lisis,
microorganismos y no sobre las clulas del tejido huma-
c) bactericida con lisis
no, para esto su accin debe estar dirigida a estructuras o
funciones exclusivamente microbianas.
El cuadro 10 seala conceptos referentes a sustancias
que actan como desinfectantes: usados para la reduc- Los ms empleados son las sulfanilamidas o anlogos de
cin o eliminacin de microorganismos en objetos inani- factores de crecimiento y los antibiticos.
mados, como mesadas, pinzas, como son los alcoholes,
formaldehido, compuestos fenlicos, detergentes. Son en Sulfas y anlogos a factores de crecimiento
general ms corrosivos que los empleados como antisp- Son sustancias estructuralmente similares a los factores
ticos, los que pueden emplearse adems, en tejidos ani- de crecimiento, de manera que impiden su utilizacin ya
males, como la piel y mucosas (nitrato de plata, ciertos que son inhibidores competitivos. El microorganismo toma
colorantes, los organo-mercuriales). del medio estas sustancias para sintetizar el factor de cre-
cimiento, pero el mismo no puede hacerlo y muere, si no
Muchas veces una misma sustancia puede actuar de una lo toma del medio.
u otra forma, segn la concentracin Ejemplos: sulfanilamida, 5-Br-uracilo.
El espectro solar incluye radiaciones de distinta longitud de no afectarlo

onda (figura 14) (Prescott et al., 1999). La luz visible (400- estimularlo, son los nutrientes
800 nm de longitud de onda) es muy beneficiosa y participa inhibirlo, sustancias microbiosttica y microbicida,
en la sntesis de materia orgnica en la fotosntesis. Puede con y sin lisis (microltica)
provocar sin embargo, daos en los pigmentos fotosensi-
bles (clorofila, citocromos) ya que transfieren energa al O2
(oxgeno activado), que es muy reactivo y letal.
La figura 15 muestra alguno de estos efectos en un culti-
vo bacteriano creciendo exponencialmente en un medio
lquido. En el momento indicado por la flecha se ha agre-
4 Crecimiento microbiano y su
La radiacin ultravioleta (UV), es de longitud de onda
corta (10-400nm) y alta energa. La ms letal (260nm) es
gado una concentracin inhibitoria de la sustancia en es-
tudio. Se aprecia diferencia en los recuentos de clulas
control
absorbida por el ADN, provocando dmeros de timina que totales y de viables, consecuencia de la lisis celular.
inhiben su replicacin. Puede ocurrir reparacin por ac-
cin de una enzima que usa luz azul y separa los dmeros La ubicacin de una sustancia qumica en alguna de es- El crecimiento en sentido biolgico implica un aumento nes ptimas por la carencia de nutrientes y por las condi-
(fotorreactivacin). Se reconoce una reactivacin oscura tas categoras es muchas veces arbitraria ya que una mis- ordenado de todos los componentes celulares y no slo ciones ambientales, no siempre favorables ni constantes.
por corte de la cadena y sustitucin del segmento afectado. ma sustancia puede ser nutriente o bacteriosttico depende alguno de ellos. En este sentido el concepto es ms
diendo de la concentracin, como es el caso de los az- estrecho que el trmino desarrollo. Una bacteria puede En la naturaleza los microorganismos se encuentran li-
En Microbiologa son muy empleadas lmparas con luz cares que al 1% son nutrientes para la mayora de los acumular polisacridos y aumentar su peso, sin que por bres en la solucin del suelo y usualmente existen en bio-
ultravioleta en las cmaras de flujo laminar que comple- microorganismos, pero a altas dosis previenen el creci- ello est creciendo. En poblaciones de organismos uni- films: grupos de diferentes microorganismos organizados
mentan con su efecto germicida la accin de los filtros miento por plasmolisis (conservacin de alimentos). celulares, como son el caso de la mayora de las bacte- en capas e inmovilizados en la superficie de un sustrato,
bacteriolgicos por los que circula el aire que entra a es- rias, algas unicelulares, protozoos y esporas de hongos, rodeados en general por una matriz de polmeros orgni-
tas cmaras de cultivo. Prcticamente cualquier sustancia orgnica de origen el crecimiento trae aparejado la divisin celular y el au- cos de origen microbiano. Se desarrollan prcticamente
biolgico es utilizada por algn grupo de microorga- mento del nmero de clulas por unidad de volumen. en todas las superficies inmersas en ambientes acuosos
Las radiaciones ionizantes, de longitud de onda muy nismo. Aquellas sustancias naturales o artificiales que se naturales, biolgicos, como en los vegetales, como abiti-
corta contienen mucha energa y producen ionizacin, acumulan en los ecosistemas a concentraciones no de- La figura 1 presenta los eventos en la divisin binaria de cos, como plsticos, piedras, partculas del suelo. All, las
radicales libres (OH.), que oxidan los dobles enlaces, rom- seables para las comunidades naturales, se denominan una clula procariota: duplicacin del ADN y de todos los interacciones son numerosas tanto sinrgicas como an-
pen anillos aromticos y producen polimerizacin de mo- recalcitrantes (captulo 22). componentes celulares, formacin del tabique o septo di- tagnicas (captulo 14).
lculas. Se usan los rayos X que se producen artificial- rigido por la membrana celular, con formacin de dos c-
mente entre nodo y ctodo, los rayos gama, por la des- Por su toxicidad, las sustancias qumicas se clasifican lulas hijas idnticas (clon). En el laboratorio, los organismos son estudiados como
integracin de radioistopos. en: cultivos puros, en medios y condiciones de cultivo ade-
toxicidad no selectiva, el agente acta sobre todo tipo cuadas. Analizaremos la cintica del crecimiento en el
A bajas dosis se producen mutaciones que pueden con- de clulas: microbianas, del hospedante. Son conoci- 1. laboratorio (in-vitro).
ducir o no a la muerte, segn el segmento del gen lesio- dos los antispticos, que son efectivos sobre mucosas
nado. A mayores dosis son letales y se usan para esterili- (colorantes, sales de mercurio, etc.) y los desinfectan- Crecimiento exponencial
zacin. Algunas endosporas pueden resistir altas dosis. tes aplicados sobre superficies inertes (alcoholes, ja- 2. Es aquel en que todas las clulas se dividen al mismo
bones, cresoles). Esta separacin tambin es arbitra- tiempo, en forma sincrnica, duplicando la poblacin en
Las radiaciones infrarrojas liberan gran cantidad de caria, pues los efectos dependen de la concentracin. cada unidad de tiempo conocido como tiempo de genera-
3.
lor y no se usan para esterilizar. Es el caso de los hornos Actan, en general, a altas concentraciones. cin. Se postula que en esta fase todas las clulas son
a microondas (1.000nm de longitud de onda). Se usan en toxicidad selectiva, son ms txicos para las clulas viables y que la poblacin no envejece.
el laboratorio para fundir medios con agar, descongelar y microbianas (incluso para Gram positivas y no para 4.
calentar soluciones, etc. Gram negativas) y son inocuas para las clulas del Algunos conceptos:
hospedante. Estos son los agentes quimioteraputi- Figura 1- Divisin binaria de microorganismos unicelulares
cos, de gran empleo en el tratamiento de enfermeda- (bacilo) Velocidad de crecimiento: Es el nmero de generacio-
Factores qumicos des infecciosas. Son efectivas a muy bajas concen- nes (divisiones) que ocurren por unidad de tiempo y se
traciones. expresa en generaciones por hora.
Las sustancias qumicas pueden ejercer distintos efectos El crecimiento de los microorganismos en la naturaleza
sobre el desarrollo de los microorganismos: Los factores que influyen en la accin antimicrobiana son: es mucho ms lento que en el laboratorio bajo condicio- Vc= n/ t
Tiempo de generacin: Es el tiempo requerido para que Vemos que la diferencia entre los logaritmos en base 2 Cuadro 8- Microorganismos y el oxgeno Cuadro 9- Efecto de otros gases
a partir de una clula se formen dos, o sea el tiempo re- del N de clulas/mL es igual al nmero de generaciones
querido para duplicar el nmero de clulas de una pobla- transcurridas en el tiempo analizado (ecuacin y cuadro 1). N2 componente principal de la atmsfera (78%).
Aerobios
cin. Se expresa en horas/generacin y en E. coli puede Gas inerte: no es usado por la mayora de los orga-
Obligados: requieren O 2 (21% o ms),
se de 20 minutos (3 generaciones/h). Como usamos ms los logaritmos en base 10, en lugar nismos, los que pueden reducir el triple enlace del
Ej. Bacillus, hongos, etc.
de los de base 2 tenemos: N2 con la enzima nitrogenasa se denominan dia-
tg=1/vc log10 Nf - log10 N0 Microaeroflicos: lo requieren pero a nivel menor zotrofos o fijadores de N2
n = que el atmosftico (5-10%) CO txico para la mayora de los organismos
Analizaremos el caso hipottico de un organismo unicelu- log10 2 = 0,301 Ej: Azospirillum (cadena respiratoria). Puede ser oxidado a CO2 por
lar, bacteria, protozoo, alga, que comience a dividirse en algunos microorganismos
La velocidad de crecimiento expresa la eficiencia en la Anaerobios
forma exponencial en un medio de cultivo lquido adecua- CH4 liberado a la atmsfera por microorganismos me-
utilizacin de los sustratos y el efecto de los factores am- Facultativos: no requieren O2, pero el desarrollo
do. Calcularemos el nmero de generaciones, el nmero tanognicos, gas con efecto invernadero, puede ser
bientales. es mejor con l. Ej: levaduras, E. coli
final de clulas/mL a medida que transcurre el tiempo oxidado a CO2 por bacterias metanotrficas
(cuadro 1). Aerotolerantes: no son sensibles al oxgeno (cre- CO2 importante gas, fuente de carbono para los
El crecimiento de clulas viables (capaces de reproducir- cen en ausencia o presencia de O2) auttrofos, aerobios y anaerobios, fotosintticos o
se en un medio adecuado) se expresa en escala semilo- Ej: Enterococcus faecalis,
Cuadro 1- Crecimiento exponencial (logartmico) quimiosintticos. Muchos hongos lo requieren a
gartmica (nmero de clulas/mL en logaritmo y el tiempo Streptococcus spp.
en una bacteria niveles superiores a los atmsfericos
en escala aritmtica) ya que resulta imposible graficar el
Obligados: no toleran el O2, mueren en su pre- H2 poco usado, txico para la mayora de los
N de Tiempo N log Ncel/mL log Ncel/mL
crecimiento de organismos unicelulares en escala aritm-
sencia. microorganismos, brinda energa a bacterias
clulas/mL (h) generaciones
2 10
tica (al cabo de unas horas pueden alcanzar densidades
Ej: Clostridium, Methanobacterium Hydrogenomonas: H2+ O2 = H2O + ATP
1 0 0 0 0,000 muy elevadas: 108-1010 clulas/mL).
2 0,5 1 1 0,301
4 1 2 2 0,602 NOTA: i) Para verificar este hecho calcule el peso de c-
8 1,5 3 3 0.903
lulas bacterianas luego de 24 horas de crecimiento expo-
Radiaciones
16 2 4 4 1,204
32 2,5 5 5 1,505 nencial, partiendo de una clula cuyo peso es un picogra-
Nf (nmero t n n = log Ncl./mL log Ncel./mL mo (10-12g) y cuyo tiempo de generacin es de 1 hora. Tapa Tornillo de seguridad
Abrazadera Rayos gamma
2 n= 10
final) (tiempo) generaciones 0,301 ii) Por qu el crecimiento se detiene en la naturaleza y Rayos X Ondas de radio
su representacin sigue una curva sigmoide? Ultravioleta Infrarrojo
log N clulas/mL 1- fase de latencia o lag
2- fase logartmica o exponencial Junta de
3- fase estacionaria La figura 2 muestra los eventos que pueden darse cuan- goma
10-4 0.01 1.0 100 103 104 106 108
4- fase de muerte do un microorganismo unicelular se introduce en un me- Cmara
3 dio lquido adecuado a su crecimiento. Se aprecian 4 fa- del El oxgeno se Longitud de onda (nm)
catalizador elimina de la
4 ses, desde el inicio del cultivo (inoculacin, tiempo cero) cmara, al com-
2 hasta la muerte de la mayora de las clulas (esteriliza- binarse con hidr-
1 cin del cultivo). geno para formar
agua.
tiempo
Las caractersticas de las distintas fases son: Infrarrojo
Figura 2- Crecimiento de un microorganismo en medio lquido Sobre Rojo
generador Tira indicadora Naranja
de volumen fijo (batch) Fase de latencia o fase lag no hay divisin celular, las de gas de anaerobiosis Amarillo
clulas se adaptan al medio, aumenta el nivel de coenzi- El azl de Verde
Analizando los eventos en la divisin celular del cuadro 1, mas necesarias para el funcionamiento de enzimas. Esta metileno pierde el
Ultravioleta
Azul
color en ausencia Violeta
podemos deducir que la ecuacin que representa el n- fase debe acortarse en el laboratorio y en la industria, de O2.
mero final de clulas por unidad de volumen es: 200 300 400 500 600 700 800 900
porque implica gasto de energa y tiempo. Esto se logra
Longitud de onda (nm)
Nf= No.2 n repicando el cultivo a un medio de la misma composicin
que el de origen, introduciendo un inculo grande (en ge-
No= nmero inicial de clulas/mL Nf = nmero final de clulas/mL Figura 13- Cultivo de microorganismos anaerobios Figura 14- Radiaciones
neral un 10% del volumen final del nuevo medio) y sem-
n = nmero de generaciones n = log2Nf-log2No brando con cultivos jvenes.
Cuadro 7- Clasificacin de los microorganismos El trabajo con microorganismos anaerobios obligados, La edad del inculo es el tiempo transcurrido entre la siem-
segn su capacidad para crecer en ambientes como los matanognicos, por ejemplo, es dificultoso y se bra en el medio de origen y el repique (ejemplo de 6, 12
con distinta actividad de agua requieren dispositivos especiales como las cmaras anae- horas).
Medio fresco
robias (figura 13) (Prescott et al., 1999), las cuales luego
de cargarlas con tubos y cajas, se cierran hermticamen- Fase exponencial o logartmica (log), en esta etapa se lo-
Halfilos: crecen en ambientes salinos (agua de
te y se les hace vaco. Tambin se pueden incubar en gra el mayor crecimiento, la velocidad de crecimiento es
mar, alimentos conservados con sal, etc.
recipientes con granos de cebada, centeno, etc., en ger- mxima y el tiempo de generacin mnimo. Se postula que Vlvula de control
Osmfilos: crecen en ambientes con alta concen-
minacin, que se cierran hermticamente. Al poco tiempo en esta etapa cada clula es capaz de dividirse, por lo que
tracin de azcar (alimentos, savia de ciertos vege-
se consume el O2 del recipiente por la demanda biolgica todas las clulas estn viables. En la industria interesa traba-
tales, etc.) Suministro
de los granos. Adecuados indicadores que cambian de jar en esta fase y por ello se realizan cultivos continuos (figu-
Xerfilos: crecen en ambientes muy secos (granos, de aire
color segn el potencial redox, verifican la anaerobiosis. ra 3) (Prescott et al., 1999) donde la concentracin de una
conservas, etc.) Filtro
sustancia limitante del crecimiento, por ejemplo una vitami- de aire
Los tubos con medio lquido se llenan casi al borde, ase- na, es incorporada al medio de modo de lograr una velocidad
aw= actividad agua expresa la disponibilidad de Recipiente
gurando baja relacin superficie/volumen. El O2 es poco de crecimiento constante y mxima por mucho tiempo.
agua, vara entre 0 y 1 de cultivo
soluble en agua. Se emplean tambin sustancias que re-
Suelo agrcola= 0,9-1,0 harinas= 0,7, fiambres =0,85
accionan con el O2 y lo excluyen del medio (glicolato). Los cultivos continuos se caracterizan por:
Actualmente se adaptan cmaras de flujo laminar con cir-
i) Suministrar igual cantidad de medio fresco que el re-
culacin de gases como el N2, H2, CO2, a los efectos de
Ambiente hipertnico
movido del sistema Colector
trabajar en ausencia de O2. Lo mismo ocurre en las estu-
La concentracin de agua ii) La concentracin de nutrientes limitantes controla la
fas de cultivo.
es mayor dentro de la densidad celular Figura 3- Cultivo continuo (quimiostato)
clula y sta tiende a salir: iii) La tasa de dilucin controla la tasa de crecimiento
plasmolisis Otros gases inciden en los microorganismos como el N2,
iv) Si el cultivo es cuidadosamente controlado puede ser
CO2, H2, CH4 (cuadro 9).
mantenido indefinidamente
Evaluacin de crecimiento
Ambiente hipotnico Algunos de ellos, como el N2 es reducido biolgicamente
Fase estacionaria por diversos motivos el crecimiento en
La concentracin de agua solamente por un grupo bacteriano: los fijadores de N2
la naturaleza se detiene, en general por falta de nutrien- Analizaremos los distintos procedimientos para medir el
es mayor fuera de la que son analizados en los captulos 11 y 15.
clula, entra agua: tes y/o por acumulacin de sustancias inhibidoras o txi- crecimiento (cuadro 2).
plasmoptisis(irreversible) cas productos del propio metabolismo celular. El caso ms
tpico es la detencin del crecimiento de bacterias lcti-
cas debido a la produccin de cido lctico en la fermen- Recuentos microbianos
Ambiente isotnico tacin, que inhibe a las clulas, que son neutrfilas.
La concentracin de agua Recuento de microorganismos totales en cma-
es igual fuera que dentro En esta etapa pueden darse dos situaciones: ras
de la clula, existe
equilibrio osmtico:
Que las clulas dejan de dividirse en su conjunto, vc=0, Fundamento del mtodo: una muestra de cultivo bacte-
ptimo crecimiento puede ser el caso de la acumulacin de productos riano diluido se coloca en una cmara de volumen peque-
txicos. o y conocido, como por ejemplo la de Petroff-Hause que
Figura 11- Microorganismos y presin osmtica encierra 2,5x10-7 mL y se cuentan al microscopio las clu-
Que la vc=vm, o sea, la velocidad resultante es estadsti- las contenidas en numerosos cuadrados de la cmara
camente cero, pero hay clulas que se dividen aun, pero (figura 4) (Prescott et al., 1999).
Aerobio
Gases obligado Anaerobio Anaerobio Anaerobio
Microaerfilo muere la misma cantidad, en el mismo periodo de tiempo
facultativo aerotolerante estricto Se calcula el promedio de clulas contenidas en dicho
El oxgeno afecta a los microorganismos y stos se Fase de muerte, domina la velocidad de muerte (negati- volumen y se expresa el N clulas/mL de la muestra. La
clasifican por sus relaciones con este gas (cuadro 8 y Figura 12- Clasificacin de los microorganismos en relacin va) sobre la de crecimiento. El cultivo puede llegar a este- desventaja es que no se pueden distinguir clulas viables
figura 12). al uso del O rilizarse, o bien puede esporular y conservarse en estado de no viables y el error experimental es alto. Pero se pue-
2
cripto bitico. den efectuar numerosas determinaciones en poco tiem-
po, con solo lavar la cmara y volverla a cargar.
Cuadro 2- Evaluacin del crecimiento Cubreobjetos alcalinizantes: suben el pH del ambiente por consumo de
cidos (deterioro de los silos al descender el cido lctico),
1- Determinacin del nmero de microorganis- Cmara que contiene o por liberacin de bases, como aminas, amonio.
mos: recuentos (a) bacterias
Mtodos directos: recuento total Para mantener el crecimiento de los microorganismos se
Recuento microscpico directo (cmaras de re- agregan a los medios o bien sustancias con carcter ci-
cuento) do o alcalino (carbonato de calcio; cidos orgnicos) o
Conteo electrnico (cada clula origina una co- pares de sustancias con carcter tampn (buffers), como
rriente elctrica) el par fosfato: K2HPO4 y KH2PO4 (figura 10). Estas sus-
Mtodos indirectos: recuentos de viables (b) tancias permiten el crecimiento durante ms tiempo y re-
Recuentos en placa (cada clula origina una co- sultan imprescindibles en la industria, donde se requiere
lonia) llegar a altos nmeros de clulas por mL.
Filtracin por membrana e incubacin del filtro
en caja de Petri Presin osmtica
2- Determinacin de la masa celular Los microorganismos deben desarrollarse en medios con
Mtodos directos adecuadas concentraciones de solutos. Si sta no se con-
Figura 9- Efecto de la temperatura sobre el crecimiento trola, los organismos no se desarrollan e incluso se llega
Medida de la masa
(c) microbiano (vc = velocidad de crecimiento) a la lisis celular. La figura 11 muestra el efecto de la con-
Medida del volumen
Mtodos indirectos centracin de solutos y el cuadro 7 presenta la clasifica-
Figura 4- Cmara de recuento de Petroff-Hause
Determinacin del contenido de N, C, P, etc. Cuadro 6- Efecto del pH sobre los cin de los microorganismos segn su adaptacin a am-
Turbidimetra (determinacin de la densidad p- microorganismos bientes con distinta actividad de agua.
tica de los cultivos) Ventajas: es el nico procedimiento correcto, ya que cada
3- Determinacin de la actividad celular unidad formadora de colonia (clula, trozo de micelio, es- Tipos rango de pH ptimo
Actividad enzimtica (deshidrogenasas, fosfa- pora) da origen a una colonia. alcalinizantes
acidfilos 0 -7 5 pH (amonificantes)
tasas, etc.) neutrfilos 5 -12 7
Concentracin de un metabolito (C, N, S, etc.) Desventajas: es ms lento, no existe un medio de culti-
basfilos 9 -14 10 a
Medida de la respiracin (evolucin del CO o vo para desarrollar a todos los microorganismos presen- acidificantes
consumo de O )
2 tes en una muestra. Resulta muy til en la evaluacin de (bact. lcticas)
2 grupos fisiolgicos: microorganismos que pueden no En ambientes de pH bajo dominan bacterias fermentati- 0 5 10 15 20
tiempo (h)
estar relacionados taxonmicamente, pero que realizan vas, como las lcticas, las anaerobias y hongos, que si log10Ncl/mL
a
Este tipo de recuento es muy empleado cuando se desea una funcin metablica comn. Por ejemplo: fijadores bien son neutrfilos como grupo, se favorecen en ambien-
conocer el nivel de crecimiento de cultivos conocidos, en aerobios de nitrgeno, celulolticos anaerobios, nitrificantes cidos por falta de competencia de las bacterias. Los b b
el laboratorio o en la industria que se encuentren en fase tes, etc. medios de cultivo se acidifican con cidos orgnicos, lc-
logartmica, en forma rpida. tico, actico, ya que penetran en la clula sin disociarse y
1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml dentro liberan los protones que alteran el pH interno de tiempo (h)
las clulas, ms eficientemente que los cidos inorgni- pH

Mtodo indirecto- Recuento de viables en placa a
El fundamento del mtodo es permitir el crecimiento de cos, disociados. b

10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 c
una sola clula en la superficie de un medio de cultivo Muestra de 9ml 9ml 9ml 9ml 9ml 9ml a- medio con par fosfato
slido apropiado. Se postula que cada colonia proviene E. coli 0 1ml 0 1ml 0 1ml Por el efecto sobre el pH del ambiente se distinguen mi- tiempo (h) b- medio sin buffer
de una sola clula y teniendo en cuenta el volumen de coorganismos:
10-5 10-6 10-7
inculo empleado y la suspensin-dilucin sembrada (fi- Figura 10- Clasificacin de los microorganismos por su efecto
gura 5) se calcula el N de unidades formadoras de colo- acidfilos: bajan el pH de restos vegetales en los silos, en el pH del medio (a). Crecimiento (b) y variacin del pH del
nias (ufc)/mL) o por gramo en caso de muestras slidas de suelos, en la leche, por produccin de cidos (lcti- medio (c) del microorganismo acidificante con y sin par
Figura 5- Preparacin de suspensiones-diluciones de un
(suelo, alimentos, etc.). co, etc.) o consumo de lcalis, como el amonio tampn
cultivo bacteriano
Segn los rangos de temperatura en que pueden desa- Cuadro 5- Clasificacin de los microorganismos Procedimiento: consiste en contar el nmero de colo-
rrollarse los distintos grupos microbianos, se los clasifica segn la temperatura nias formadas en medio de cultivo slido adecuado, lue-
en sicrfilos, mesfilos y termfilos (cuadro 4). go de sembrar volmenes conocidos de varias suspen-
siones-diluciones de la muestra (suelo, aguas, alimentos).
Sicrfilos: microorganismos capaces de crecer a
Cuadro 4- Rangos de temperatura en La siembra con varias repeticiones permite disminuir el
bajas temperaturas
microorganismos o error experimental, el cual es alto en esta tcnica. El m-
rango: 0 -20C, ptimo < 15 C
todo selecciona las cajas de Petri con entre 30 y 300 colo-
- organismos marinos, algas: Chlamydomonas Figura 7- Recuento de viables en medio slido previa
Tipos Rango de temperatura ptimo nias (figura 6), ya que ms de 300 colonias por caja impli-
nivalis (nieve rosada), bacterias: Pseudomonas, filtracin de muestras lquidas (aguas)
ca que muchas pueden originarse por ms de una clula
sicrfilos 0-20C 15C Flavobacterium
dada su alta densidad y las de menos de 30 colonias tam-
mesfilos 15-45C 35C - la membrana contiene alto % de cidos grasos
bin presentan gran error. Ejemplo:
termfilos 40-70C 55C insaturados
N de colonias en la suspensin dilucin 10-5 = 65, 68, 77;
Sicrtrofos o sicrfilos facultativos
La mayora de los habitantes de los ecosistemas naturales o inculo/caja = 100L
rango: 0-35C, ptimo 20-30 C N ufc/mL = 70 X 105 X 10 = 7,0 X 107.
son mesfilos, incluidos los patgenos de animales y el - Pseudomonas - crecen en el refrigerador
hombre. Se encuentran sicrfilos sobre glaciales, suelos En muchos casos se expresa en logaritmo en base 10:
Mesfilos rango: 15-45 C, ptimo: 30-40C
Dilucin 104
congelados, a los que colorean con sus pigmentos y son log10 N ufc/mL = 7, 84
la mayora de los microorganismos (del suelo,
sobre todo algas y cianobacterias. La mayora de los micro-
aguas, patgenos) Recuento de viables en medio lquido (Nmero
organismos activos en suelos en perodos fros del invierno
se consideran mesfilos resistentes al fro, ms que verda- Termfilos: microorganismos capaces de crecer ms probable = NMP)
deros sicrfilos. Algunos hongos se desarrollan en helade- a temperaturas superiores a 45C. Se basa en la siembra (1mL, por ejemplo) de 3 o 5 tubos
o
ras (5C) donde deterioran alimentos (cuadro 5). rango: 40-70C, ptimo de 55-65 C por cada suspensin-dilucin de la muestra en estudio,
Dilucin 105
- membrana contiene alto % de cidos grasos sa- con medio adecuado para el grupo fisiolgico analizado
Los termfilos son los ms activos metablicamente, turados (celulolticos, fijadores de N2, amonificantes, etc.). Se efec-
sabemos que las reacciones qumicas duplican su veloci- - enzimas estables al calor tan 3 repeticiones del recuento completo (figura 8).
dad por cada aumento de 10C de la temperatura, hasta - Bacillus stearothermophilus, organismos del
un valor en que se desnaturalizan macromolculas im- compostaje Luego de un perodo adecuado de incubacin se leen los
portantes, como cidos nucleicos, protenas, etc. En la naturaleza hay pocos ambientes con tem- tubos positivos (crecimiento por: turbidez y/o aparicin o
peraturas tan elevadas Dilucin 106 desaparicin de una sustancia, evaluada qumicamente)
o
La figura 9 muestra el efecto de la temperatura en el Hipertermfilos rango: 80-113C, ptimo > 90 C en tres diluciones consecutivas.
crecimiento microbiano. La curva no es simtrica preci- - Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales) 1ml 1ml 1ml
samente por la desnaturalizacin rpida que ocurre no
bien se excede la temperatura ptima de crecimiento. Figura 6- Recuento de viables en medio slido
10-1 10-2 10-3
Los termfilos son responsables de importantes proce- Las altas temperaturas se usan para esterilizar. La Muestra de 9ml 9ml 9ml
sos microbianos en pilas de restos orgnicos, en el com- destruccin de los microorganismos por el calor se rea- Recuento en aguas: la figura 7 (Prescott et al., 1999) mues- E. coli
postaje, etc., donde la temperatura se eleva localmente liza por calor seco (estufas) o calor hmedo (autocla- tra el procedimiento seguido para el recuento de viables,
1ml 1ml 1ml
(captulo 21). ves). por ejemplo coliformes en aguas, las que deben ser filtra-
das (por ejemplo 100 mL de agua) a los efectos de concen-
trar la carga microbiana, por filtros bacteriolgicos (0,45 mi- 10-1 10-1 10-1 10-2 10-2 10-2 10-3 10-3 10-3
Las bajas temperaturas se emplean para conservar ali- pH
mentos, microorganismos, etc. Estos se mezclan con una Si bien el pH interno de las clulas es neutro, los microor- cras), los que luego se depositan en la superficie de me-
sustancia que baja el punto de congelamiento, como el ganismos poseen mecanismos de control de entrada y dios adecuados. Muchas veces los filtros estn cuadricula- 3 1 0
glicerol (30-50% en volumen) a los efectos de no inducir salida de protones y cationes a nivel de la membrana y dos, lo que facilita el recuento de las colonias formadas.
310 en la tabla 4,5
lesiones en las membranas por |os cristales de hielo for- pueden desarrollarse en amplios rangos de concentracin
NMP de microorganismos/ml = 4,5 X 1/dilucin = 45
mados y se conservan en pequeos tubos a -70C. hidrogeninica (cuadro 6). Expresin de los resultados
N de ufc/mL= (promedio de colonias en 3 o ms repeti- Figura 8- Esquema de un recuento de viables en medio
ciones) X 1/dilucin X 1/inculo lquido (NMP)
Se forma as el nmero caracterstico = N caracterstico, recta, por la turbidez de los cultivos en funcin del tiem- 11) Analice las causas de divergencias en otras etapas de Por comodidad los factores del ambiente se dividen en:
de 3 cifras, con el cual se entra en tablas como la de Mc po. Se evala la densidad ptica a unos 600nm en es- la curva. Calcule el nmero de coliformes en una mues- fsicos, como la temperatura, gases, presin osmtica, pH
Crady (Anexo prctico), que da el NMP en un mL de la pectrofotmetro. La misma es proporcional a la concentra de aguas en medio de cultivo lquido adecuado para qumicos, o fsico-qumicos: nutrientes, sustancias an-
primera de las tres diluciones del N caracterstico. tracin, dentro de ciertos lmites y esta tcnica es muy este grupo (3 repeticiones, siembra =1 mL en cada uno timicrobianas
empleada en la rutina del laboratorio. Requiere de una de tres tubos/dilucin). biolgicos, otros organismos: microorganismos, micro y
Ejemplo de recuento: se sembraron 0,1 mL. de suspen- determinacin previa que relaciona densidad ptica fren- mesofauna, la vegetacin, afectan tambin las activida-
siones-diluciones de una muestra de leche en medio l- te a recuentos microbianos, efectuados en medio slido Suspensin/dilucin 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 des microbianas.
quido adecuado (3 tubos/dilucin). Los resultados fueron: en placas. crecimiento (+) +++ +++ +++ ++- - - -
negativo (-) +++ +++ +++ +- - - - - Las interacciones biolgicas de microorganismos entre si,
Suspensin/dilucin 10-3 10-4 10-5 10-6 Los otros mtodos de evaluacin del crecimiento emplean +++ +++ +++ --- --- con animales (rumen) y con las plantas, son analizadas
Tubos positivos +++ +++ ++- --- propiedades bioqumicas y metablicas como son las de- en los captulos 13 al 18.
con crecimiento +++ +++ +++ --- terminaciones de alguna enzima, actividad respiratoria, Qu piensa de la calidad de este producto?
+++ +++ +-- --- contenidos de C, N. etc., muchos de ellos pueden encon- Los distintos factores actan simultneamente y resulta
trarse en el Apndice prctico. 10) Fundamento de los mtodos que evalan densidades difcil el estudio integrado de los efectos. En general, se
Lectura: N caracterstico: 320, 330 y 310 (dilucin 10-4) pticas de los cultivos vara uno de los factores, por ejemplo la temperatura de
en las 3 repeticiones NMP (tabla) 9,5, 25,0 y 4,5 respecti- incubacin y se dejan los restantes factores a niveles cons-
vamente, para 0,1 mL de inculo de la misma dilucin (se Preguntas de repaso tantes y ptimos. Se evala el crecimiento del microorga-
promedian) Efecto del ambiente sobre los microorganis- nismo en estudio determinando su velocidad de crecimien-
1) Una poblacin de bacterias pas de 2.103 a 5.108 clu- mos to, tiempo de generacin o la cosecha mxima (log N de
Recuento de microorganismos lcticos viables= las /mL en 10 horas. Calcule el nmero de generacio- clulas a las que llega con y sin la incidencia del factor en
13,0 x 10 (para pasar a 1mL) x 104 = 1,3 x 106/ mL de nes, la velocidad de crecimiento, y el tiempo de gene- Los microorganismos estn muy distribuidos en la natura- estudio). Muchas veces se aprecian fracasos en aislamien-
muestra original racin. leza, en ambientes tan variables como los suelos, aguas, tos de organismos debido a pequeas variaciones en los
2) Determine el nmero total de clulas presentes por aire, superficie de vegetales, en animales e incluso en el niveles de nutrientes o en las condiciones de cultivo.
Constituye un mtodo indirecto, ya que la tabla se cons- mL en una muestra de levaduras usando la cmara hombre. El carcter mayoritariamente unicelular o muy
truy realizando el recuento de viables en medio slido de Neubauer o similares, cuyo cuadrado grande simple de los microorganismos los hace muy vulnerables La comprensin de cmo los factores ambientales afectan el
de algunas combinaciones y luego por computadora se est dividido en 25 medianos y cada uno en 16 chi- a cambios en el ambiente (cuadro 3): crecimiento microbiano permite interpretar la distribucin de
calculan los puntos no determinados. Es muy empleado cos. Datos de stos ltimos: los mismos en la naturaleza y disear mtodos de control del
en recuentos de coliformes en aguas y de muchos grupos A = 0,0025mm2, h = 0,1 mm Cuadro 3- Relaciones entre organismos y el desarrollo microbiano y destruir organismos indeseados.
fisiolgicos en suelos. No requiere el manipuleo de cajas Resultados: n de clulas/ cuadrado chico: 18, 32,45, ambiente
de Petri. 88,68, 19, 46, 69, 70
3) Concepto de crecimiento exponencial
Microorganismos Vegetales inferiores Vegetales superiores Animales
Efecto de algunos factores del ambiente
Recuento de viables en plantas 4) Por qu ste no puede mantenerse indefinidamente

Se aprovecha alguna propiedad de los microorganismos, en la naturaleza? Fsicos y fsico-qumicos
Complejidad de la organizacin
como la formacin de ndulos, produccin de alguna en- 5) Y en el laboratorio puede mantenerse?
Temperatura
fermedad en vegetales. Se siembran las suspensiones di- 6) Diferencias entre mtodos de recuento directo (clulas Dependencia del ambiente Oxgeno y otros gases
luciones de la muestra en tubos o macetas con las plntu- totales) e indirectos (clulas viables) pH
las elegidas (leguminosas, por ejemplo). La aparicin de 7) Ventajas y limitaciones principales de los mtodos de Presin osmtica
ndulos indicar que al menos una clula ha sido inocula- recuentos de viables en medio slido Se aprecia una relacin inversa entre complejidad de la or-
Radiaciones
da en ese tubo o maceta. Tablas adecuadas permiten cal- 8) Fundamento y aplicacin del recuento de viables en ganizacin de los distintos organismos y su dependencia
cular el NMP. Este recuento se explica en el Anexo prcti- medio lquido (NMP) con el ambiente. En los microorganismos toda su superfi- Temperatura: los microorganismos se encuentran en casi
co. 9) Cuando se va a construir la curva de crecimiento de un cie celular est en contacto con el ambiente y cambios muy todos los ambientes, incluso los muy extremos y cada uno
microorganismo en un medio adecuado, se usan re- marcados en factores como la temperatura, acidez, pre- presenta un rango de temperatura de crecimiento, con una
Otros mtodos cuentos de viables o de totales? sin osmtica, concentracin de sustancias qumicas, pue- temperatura mnima, debajo de la cual no se evidencia el
Muy empleado es el mtodo de evaluacin del crecimien- 10) En qu etapas de la curva puede emplear indistinta- den detener procesos microbianos. Si los microorganismos crecimiento, una ptima, donde este es mximo y una
to por determinacin de la masa celular en forma indi- mente ambos mtodos de recuentos? pueden esporular, lo harn en condiciones adversas, otras mxima, por encima de la cual el crecimiento cesa (figura
veces su nmero decae marcadamente. 9) (Madigan et al., 2000).
Se forma as el nmero caracterstico = N caracterstico, recta, por la turbidez de los cultivos en funcin del tiem- 11) Analice las causas de divergencias en otras etapas de Por comodidad los factores del ambiente se dividen en:
de 3 cifras, con el cual se entra en tablas como la de Mc po. Se evala la densidad ptica a unos 600nm en es- la curva. Calcule el nmero de coliformes en una mues- fsicos, como la temperatura, gases, presin osmtica, pH
Crady (Anexo prctico), que da el NMP en un mL de la pectrofotmetro. La misma es proporcional a la concentra de aguas en medio de cultivo lquido adecuado para qumicos, o fsico-qumicos: nutrientes, sustancias an-
primera de las tres diluciones del N caracterstico. tracin, dentro de ciertos lmites y esta tcnica es muy este grupo (3 repeticiones, siembra =1 mL en cada uno timicrobianas
empleada en la rutina del laboratorio. Requiere de una de tres tubos/dilucin). biolgicos, otros organismos: microorganismos, micro y
Ejemplo de recuento: se sembraron 0,1 mL. de suspen- determinacin previa que relaciona densidad ptica fren- mesofauna, la vegetacin, afectan tambin las activida-
siones-diluciones de una muestra de leche en medio l- te a recuentos microbianos, efectuados en medio slido Suspensin/dilucin 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 des microbianas.
quido adecuado (3 tubos/dilucin). Los resultados fueron: en placas. crecimiento (+) +++ +++ +++ ++- - - -
negativo (-) +++ +++ +++ +- - - - - Las interacciones biolgicas de microorganismos entre si,
Suspensin/dilucin 10-3 10-4 10-5 10-6 Los otros mtodos de evaluacin del crecimiento emplean +++ +++ +++ --- --- con animales (rumen) y con las plantas, son analizadas
Tubos positivos +++ +++ ++- --- propiedades bioqumicas y metablicas como son las de- en los captulos 13 al 18.
con crecimiento +++ +++ +++ --- terminaciones de alguna enzima, actividad respiratoria, Qu piensa de la calidad de este producto?
+++ +++ +-- --- contenidos de C, N. etc., muchos de ellos pueden encon- Los distintos factores actan simultneamente y resulta
trarse en el Apndice prctico. 10) Fundamento de los mtodos que evalan densidades difcil el estudio integrado de los efectos. En general, se
Lectura: N caracterstico: 320, 330 y 310 (dilucin 10-4) pticas de los cultivos vara uno de los factores, por ejemplo la temperatura de
en las 3 repeticiones NMP (tabla) 9,5, 25,0 y 4,5 respecti- incubacin y se dejan los restantes factores a niveles cons-
vamente, para 0,1 mL de inculo de la misma dilucin (se Preguntas de repaso tantes y ptimos. Se evala el crecimiento del microorga-
promedian) Efecto del ambiente sobre los microorganis- nismo en estudio determinando su velocidad de crecimien-
1) Una poblacin de bacterias pas de 2.103 a 5.108 clu- mos to, tiempo de generacin o la cosecha mxima (log N de
Recuento de microorganismos lcticos viables= las /mL en 10 horas. Calcule el nmero de generacio- clulas a las que llega con y sin la incidencia del factor en
13,0 x 10 (para pasar a 1mL) x 104 = 1,3 x 106/ mL de nes, la velocidad de crecimiento, y el tiempo de gene- Los microorganismos estn muy distribuidos en la natura- estudio). Muchas veces se aprecian fracasos en aislamien-
muestra original racin. leza, en ambientes tan variables como los suelos, aguas, tos de organismos debido a pequeas variaciones en los
2) Determine el nmero total de clulas presentes por aire, superficie de vegetales, en animales e incluso en el niveles de nutrientes o en las condiciones de cultivo.
Constituye un mtodo indirecto, ya que la tabla se cons- mL en una muestra de levaduras usando la cmara hombre. El carcter mayoritariamente unicelular o muy
truy realizando el recuento de viables en medio slido de Neubauer o similares, cuyo cuadrado grande simple de los microorganismos los hace muy vulnerables La comprensin de cmo los factores ambientales afectan el
de algunas combinaciones y luego por computadora se est dividido en 25 medianos y cada uno en 16 chi- a cambios en el ambiente (cuadro 3): crecimiento microbiano permite interpretar la distribucin de
calculan los puntos no determinados. Es muy empleado cos. Datos de stos ltimos: los mismos en la naturaleza y disear mtodos de control del
en recuentos de coliformes en aguas y de muchos grupos A = 0,0025mm2, h = 0,1 mm Cuadro 3- Relaciones entre organismos y el desarrollo microbiano y destruir organismos indeseados.
fisiolgicos en suelos. No requiere el manipuleo de cajas Resultados: n de clulas/ cuadrado chico: 18, 32,45, ambiente
de Petri. 88,68, 19, 46, 69, 70
3) Concepto de crecimiento exponencial
Microorganismos Vegetales inferiores Vegetales superiores Animales
Efecto de algunos factores del ambiente
Recuento de viables en plantas 4) Por qu ste no puede mantenerse indefinidamente

Se aprovecha alguna propiedad de los microorganismos, en la naturaleza? Fsicos y fsico-qumicos
Complejidad de la organizacin
como la formacin de ndulos, produccin de alguna en- 5) Y en el laboratorio puede mantenerse?
Temperatura
fermedad en vegetales. Se siembran las suspensiones di- 6) Diferencias entre mtodos de recuento directo (clulas Dependencia del ambiente Oxgeno y otros gases
luciones de la muestra en tubos o macetas con las plntu- totales) e indirectos (clulas viables) pH
las elegidas (leguminosas, por ejemplo). La aparicin de 7) Ventajas y limitaciones principales de los mtodos de Presin osmtica
ndulos indicar que al menos una clula ha sido inocula- recuentos de viables en medio slido Se aprecia una relacin inversa entre complejidad de la or-
Radiaciones
da en ese tubo o maceta. Tablas adecuadas permiten cal- 8) Fundamento y aplicacin del recuento de viables en ganizacin de los distintos organismos y su dependencia
cular el NMP. Este recuento se explica en el Anexo prcti- medio lquido (NMP) con el ambiente. En los microorganismos toda su superfi- Temperatura: los microorganismos se encuentran en casi
co. 9) Cuando se va a construir la curva de crecimiento de un cie celular est en contacto con el ambiente y cambios muy todos los ambientes, incluso los muy extremos y cada uno
microorganismo en un medio adecuado, se usan re- marcados en factores como la temperatura, acidez, pre- presenta un rango de temperatura de crecimiento, con una
Otros mtodos cuentos de viables o de totales? sin osmtica, concentracin de sustancias qumicas, pue- temperatura mnima, debajo de la cual no se evidencia el
Muy empleado es el mtodo de evaluacin del crecimien- 10) En qu etapas de la curva puede emplear indistinta- den detener procesos microbianos. Si los microorganismos crecimiento, una ptima, donde este es mximo y una
to por determinacin de la masa celular en forma indi- mente ambos mtodos de recuentos? pueden esporular, lo harn en condiciones adversas, otras mxima, por encima de la cual el crecimiento cesa (figura
veces su nmero decae marcadamente. 9) (Madigan et al., 2000).
Segn los rangos de temperatura en que pueden desa- Cuadro 5- Clasificacin de los microorganismos Procedimiento: consiste en contar el nmero de colo-
rrollarse los distintos grupos microbianos, se los clasifica segn la temperatura nias formadas en medio de cultivo slido adecuado, lue-
en sicrfilos, mesfilos y termfilos (cuadro 4). go de sembrar volmenes conocidos de varias suspen-
siones-diluciones de la muestra (suelo, aguas, alimentos).
Sicrfilos: microorganismos capaces de crecer a
Cuadro 4- Rangos de temperatura en La siembra con varias repeticiones permite disminuir el
bajas temperaturas
microorganismos o error experimental, el cual es alto en esta tcnica. El m-
rango: 0 -20C, ptimo < 15 C
todo selecciona las cajas de Petri con entre 30 y 300 colo-
- organismos marinos, algas: Chlamydomonas Figura 7- Recuento de viables en medio slido previa
Tipos Rango de temperatura ptimo nias (figura 6), ya que ms de 300 colonias por caja impli-
nivalis (nieve rosada), bacterias: Pseudomonas, filtracin de muestras lquidas (aguas)
ca que muchas pueden originarse por ms de una clula
sicrfilos 0-20C 15C Flavobacterium
dada su alta densidad y las de menos de 30 colonias tam-
mesfilos 15-45C 35C - la membrana contiene alto % de cidos grasos
bin presentan gran error. Ejemplo:
termfilos 40-70C 55C insaturados
N de colonias en la suspensin dilucin 10-5 = 65, 68, 77;
Sicrtrofos o sicrfilos facultativos
La mayora de los habitantes de los ecosistemas naturales o inculo/caja = 100L
rango: 0-35C, ptimo 20-30 C N ufc/mL = 70 X 105 X 10 = 7,0 X 107.
son mesfilos, incluidos los patgenos de animales y el - Pseudomonas - crecen en el refrigerador
hombre. Se encuentran sicrfilos sobre glaciales, suelos En muchos casos se expresa en logaritmo en base 10:
Mesfilos rango: 15-45 C, ptimo: 30-40C
Dilucin 104
congelados, a los que colorean con sus pigmentos y son log10 N ufc/mL = 7, 84
la mayora de los microorganismos (del suelo,
sobre todo algas y cianobacterias. La mayora de los micro-
aguas, patgenos) Recuento de viables en medio lquido (Nmero
organismos activos en suelos en perodos fros del invierno
se consideran mesfilos resistentes al fro, ms que verda- Termfilos: microorganismos capaces de crecer ms probable = NMP)
deros sicrfilos. Algunos hongos se desarrollan en helade- a temperaturas superiores a 45C. Se basa en la siembra (1mL, por ejemplo) de 3 o 5 tubos
o
ras (5C) donde deterioran alimentos (cuadro 5). rango: 40-70C, ptimo de 55-65 C por cada suspensin-dilucin de la muestra en estudio,
Dilucin 105
- membrana contiene alto % de cidos grasos sa- con medio adecuado para el grupo fisiolgico analizado
Los termfilos son los ms activos metablicamente, turados (celulolticos, fijadores de N2, amonificantes, etc.). Se efec-
sabemos que las reacciones qumicas duplican su veloci- - enzimas estables al calor tan 3 repeticiones del recuento completo (figura 8).
dad por cada aumento de 10C de la temperatura, hasta - Bacillus stearothermophilus, organismos del
un valor en que se desnaturalizan macromolculas im- compostaje Luego de un perodo adecuado de incubacin se leen los
portantes, como cidos nucleicos, protenas, etc. En la naturaleza hay pocos ambientes con tem- tubos positivos (crecimiento por: turbidez y/o aparicin o
peraturas tan elevadas Dilucin 106 desaparicin de una sustancia, evaluada qumicamente)
o
La figura 9 muestra el efecto de la temperatura en el Hipertermfilos rango: 80-113C, ptimo > 90 C en tres diluciones consecutivas.
crecimiento microbiano. La curva no es simtrica preci- - Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales) 1ml 1ml 1ml
samente por la desnaturalizacin rpida que ocurre no
bien se excede la temperatura ptima de crecimiento. Figura 6- Recuento de viables en medio slido
10-1 10-2 10-3
Los termfilos son responsables de importantes proce- Las altas temperaturas se usan para esterilizar. La Muestra de 9ml 9ml 9ml
sos microbianos en pilas de restos orgnicos, en el com- destruccin de los microorganismos por el calor se rea- Recuento en aguas: la figura 7 (Prescott et al., 1999) mues- E. coli
postaje, etc., donde la temperatura se eleva localmente liza por calor seco (estufas) o calor hmedo (autocla- tra el procedimiento seguido para el recuento de viables,
1ml 1ml 1ml
(captulo 21). ves). por ejemplo coliformes en aguas, las que deben ser filtra-
das (por ejemplo 100 mL de agua) a los efectos de concen-
trar la carga microbiana, por filtros bacteriolgicos (0,45 mi- 10-1 10-1 10-1 10-2 10-2 10-2 10-3 10-3 10-3
Las bajas temperaturas se emplean para conservar ali- pH
mentos, microorganismos, etc. Estos se mezclan con una Si bien el pH interno de las clulas es neutro, los microor- cras), los que luego se depositan en la superficie de me-
sustancia que baja el punto de congelamiento, como el ganismos poseen mecanismos de control de entrada y dios adecuados. Muchas veces los filtros estn cuadricula- 3 1 0
glicerol (30-50% en volumen) a los efectos de no inducir salida de protones y cationes a nivel de la membrana y dos, lo que facilita el recuento de las colonias formadas.
310 en la tabla 4,5
lesiones en las membranas por |os cristales de hielo for- pueden desarrollarse en amplios rangos de concentracin
NMP de microorganismos/ml = 4,5 X 1/dilucin = 45
mados y se conservan en pequeos tubos a -70C. hidrogeninica (cuadro 6). Expresin de los resultados
N de ufc/mL= (promedio de colonias en 3 o ms repeti- Figura 8- Esquema de un recuento de viables en medio
ciones) X 1/dilucin X 1/inculo lquido (NMP)
Cuadro 2- Evaluacin del crecimiento Cubreobjetos alcalinizantes: suben el pH del ambiente por consumo de
cidos (deterioro de los silos al descender el cido lctico),
1- Determinacin del nmero de microorganis- Cmara que contiene o por liberacin de bases, como aminas, amonio.
mos: recuentos (a) bacterias
Mtodos directos: recuento total Para mantener el crecimiento de los microorganismos se
Recuento microscpico directo (cmaras de re- agregan a los medios o bien sustancias con carcter ci-
cuento) do o alcalino (carbonato de calcio; cidos orgnicos) o
Conteo electrnico (cada clula origina una co- pares de sustancias con carcter tampn (buffers), como
rriente elctrica) el par fosfato: K2HPO4 y KH2PO4 (figura 10). Estas sus-
Mtodos indirectos: recuentos de viables (b) tancias permiten el crecimiento durante ms tiempo y re-
Recuentos en placa (cada clula origina una co- sultan imprescindibles en la industria, donde se requiere
lonia) llegar a altos nmeros de clulas por mL.
Filtracin por membrana e incubacin del filtro
en caja de Petri Presin osmtica
2- Determinacin de la masa celular Los microorganismos deben desarrollarse en medios con
Mtodos directos adecuadas concentraciones de solutos. Si sta no se con-
Figura 9- Efecto de la temperatura sobre el crecimiento trola, los organismos no se desarrollan e incluso se llega
Medida de la masa
(c) microbiano (vc = velocidad de crecimiento) a la lisis celular. La figura 11 muestra el efecto de la con-
Medida del volumen
Mtodos indirectos centracin de solutos y el cuadro 7 presenta la clasifica-
Figura 4- Cmara de recuento de Petroff-Hause
Determinacin del contenido de N, C, P, etc. Cuadro 6- Efecto del pH sobre los cin de los microorganismos segn su adaptacin a am-
Turbidimetra (determinacin de la densidad p- microorganismos bientes con distinta actividad de agua.
tica de los cultivos) Ventajas: es el nico procedimiento correcto, ya que cada
3- Determinacin de la actividad celular unidad formadora de colonia (clula, trozo de micelio, es- Tipos rango de pH ptimo
Actividad enzimtica (deshidrogenasas, fosfa- pora) da origen a una colonia. alcalinizantes
acidfilos 0 -7 5 pH (amonificantes)
tasas, etc.) neutrfilos 5 -12 7
Concentracin de un metabolito (C, N, S, etc.) Desventajas: es ms lento, no existe un medio de culti-
basfilos 9 -14 10 a
Medida de la respiracin (evolucin del CO o vo para desarrollar a todos los microorganismos presen- acidificantes
consumo de O )
2 tes en una muestra. Resulta muy til en la evaluacin de (bact. lcticas)
2 grupos fisiolgicos: microorganismos que pueden no En ambientes de pH bajo dominan bacterias fermentati- 0 5 10 15 20
tiempo (h)
estar relacionados taxonmicamente, pero que realizan vas, como las lcticas, las anaerobias y hongos, que si log10Ncl/mL
a
Este tipo de recuento es muy empleado cuando se desea una funcin metablica comn. Por ejemplo: fijadores bien son neutrfilos como grupo, se favorecen en ambien-
conocer el nivel de crecimiento de cultivos conocidos, en aerobios de nitrgeno, celulolticos anaerobios, nitrificantes cidos por falta de competencia de las bacterias. Los b b
el laboratorio o en la industria que se encuentren en fase tes, etc. medios de cultivo se acidifican con cidos orgnicos, lc-
logartmica, en forma rpida. tico, actico, ya que penetran en la clula sin disociarse y
1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml dentro liberan los protones que alteran el pH interno de tiempo (h)
las clulas, ms eficientemente que los cidos inorgni- pH

Mtodo indirecto- Recuento de viables en placa a
El fundamento del mtodo es permitir el crecimiento de cos, disociados. b

10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 c
una sola clula en la superficie de un medio de cultivo Muestra de 9ml 9ml 9ml 9ml 9ml 9ml a- medio con par fosfato
slido apropiado. Se postula que cada colonia proviene E. coli 0 1ml 0 1ml 0 1ml Por el efecto sobre el pH del ambiente se distinguen mi- tiempo (h) b- medio sin buffer
de una sola clula y teniendo en cuenta el volumen de coorganismos:
10-5 10-6 10-7
inculo empleado y la suspensin-dilucin sembrada (fi- Figura 10- Clasificacin de los microorganismos por su efecto
gura 5) se calcula el N de unidades formadoras de colo- acidfilos: bajan el pH de restos vegetales en los silos, en el pH del medio (a). Crecimiento (b) y variacin del pH del
nias (ufc)/mL) o por gramo en caso de muestras slidas de suelos, en la leche, por produccin de cidos (lcti- medio (c) del microorganismo acidificante con y sin par
Figura 5- Preparacin de suspensiones-diluciones de un
(suelo, alimentos, etc.). co, etc.) o consumo de lcalis, como el amonio tampn
cultivo bacteriano
Cuadro 7- Clasificacin de los microorganismos El trabajo con microorganismos anaerobios obligados, La edad del inculo es el tiempo transcurrido entre la siem-
segn su capacidad para crecer en ambientes como los matanognicos, por ejemplo, es dificultoso y se bra en el medio de origen y el repique (ejemplo de 6, 12
con distinta actividad de agua requieren dispositivos especiales como las cmaras anae- horas).
Medio fresco
robias (figura 13) (Prescott et al., 1999), las cuales luego
de cargarlas con tubos y cajas, se cierran hermticamen- Fase exponencial o logartmica (log), en esta etapa se lo-
Halfilos: crecen en ambientes salinos (agua de
te y se les hace vaco. Tambin se pueden incubar en gra el mayor crecimiento, la velocidad de crecimiento es
mar, alimentos conservados con sal, etc.
recipientes con granos de cebada, centeno, etc., en ger- mxima y el tiempo de generacin mnimo. Se postula que Vlvula de control
Osmfilos: crecen en ambientes con alta concen-
minacin, que se cierran hermticamente. Al poco tiempo en esta etapa cada clula es capaz de dividirse, por lo que
tracin de azcar (alimentos, savia de ciertos vege-
se consume el O2 del recipiente por la demanda biolgica todas las clulas estn viables. En la industria interesa traba-
tales, etc.) Suministro
de los granos. Adecuados indicadores que cambian de jar en esta fase y por ello se realizan cultivos continuos (figu-
Xerfilos: crecen en ambientes muy secos (granos, de aire
color segn el potencial redox, verifican la anaerobiosis. ra 3) (Prescott et al., 1999) donde la concentracin de una
conservas, etc.) Filtro
sustancia limitante del crecimiento, por ejemplo una vitami- de aire
Los tubos con medio lquido se llenan casi al borde, ase- na, es incorporada al medio de modo de lograr una velocidad
aw= actividad agua expresa la disponibilidad de Recipiente
gurando baja relacin superficie/volumen. El O2 es poco de crecimiento constante y mxima por mucho tiempo.
agua, vara entre 0 y 1 de cultivo
soluble en agua. Se emplean tambin sustancias que re-
Suelo agrcola= 0,9-1,0 harinas= 0,7, fiambres =0,85
accionan con el O2 y lo excluyen del medio (glicolato). Los cultivos continuos se caracterizan por:
Actualmente se adaptan cmaras de flujo laminar con cir-
i) Suministrar igual cantidad de medio fresco que el re-
culacin de gases como el N2, H2, CO2, a los efectos de
Ambiente hipertnico
movido del sistema Colector
trabajar en ausencia de O2. Lo mismo ocurre en las estu-
La concentracin de agua ii) La concentracin de nutrientes limitantes controla la
fas de cultivo.
es mayor dentro de la densidad celular Figura 3- Cultivo continuo (quimiostato)
clula y sta tiende a salir: iii) La tasa de dilucin controla la tasa de crecimiento
plasmolisis Otros gases inciden en los microorganismos como el N2,
iv) Si el cultivo es cuidadosamente controlado puede ser
CO2, H2, CH4 (cuadro 9).
mantenido indefinidamente
Evaluacin de crecimiento
Ambiente hipotnico Algunos de ellos, como el N2 es reducido biolgicamente
Fase estacionaria por diversos motivos el crecimiento en
La concentracin de agua solamente por un grupo bacteriano: los fijadores de N2
la naturaleza se detiene, en general por falta de nutrien- Analizaremos los distintos procedimientos para medir el
es mayor fuera de la que son analizados en los captulos 11 y 15.
clula, entra agua: tes y/o por acumulacin de sustancias inhibidoras o txi- crecimiento (cuadro 2).
plasmoptisis(irreversible) cas productos del propio metabolismo celular. El caso ms
tpico es la detencin del crecimiento de bacterias lcti-
cas debido a la produccin de cido lctico en la fermen- Recuentos microbianos
Ambiente isotnico tacin, que inhibe a las clulas, que son neutrfilas.
La concentracin de agua Recuento de microorganismos totales en cma-
es igual fuera que dentro En esta etapa pueden darse dos situaciones: ras
de la clula, existe
equilibrio osmtico:
Que las clulas dejan de dividirse en su conjunto, vc=0, Fundamento del mtodo: una muestra de cultivo bacte-
ptimo crecimiento puede ser el caso de la acumulacin de productos riano diluido se coloca en una cmara de volumen peque-
txicos. o y conocido, como por ejemplo la de Petroff-Hause que
Figura 11- Microorganismos y presin osmtica encierra 2,5x10-7 mL y se cuentan al microscopio las clu-
Que la vc=vm, o sea, la velocidad resultante es estadsti- las contenidas en numerosos cuadrados de la cmara
camente cero, pero hay clulas que se dividen aun, pero (figura 4) (Prescott et al., 1999).
Aerobio
Gases obligado Anaerobio Anaerobio Anaerobio
Microaerfilo muere la misma cantidad, en el mismo periodo de tiempo
facultativo aerotolerante estricto Se calcula el promedio de clulas contenidas en dicho
El oxgeno afecta a los microorganismos y stos se Fase de muerte, domina la velocidad de muerte (negati- volumen y se expresa el N clulas/mL de la muestra. La
clasifican por sus relaciones con este gas (cuadro 8 y Figura 12- Clasificacin de los microorganismos en relacin va) sobre la de crecimiento. El cultivo puede llegar a este- desventaja es que no se pueden distinguir clulas viables
figura 12). al uso del O rilizarse, o bien puede esporular y conservarse en estado de no viables y el error experimental es alto. Pero se pue-
2
cripto bitico. den efectuar numerosas determinaciones en poco tiem-
po, con solo lavar la cmara y volverla a cargar.
Tiempo de generacin: Es el tiempo requerido para que Vemos que la diferencia entre los logaritmos en base 2 Cuadro 8- Microorganismos y el oxgeno Cuadro 9- Efecto de otros gases
a partir de una clula se formen dos, o sea el tiempo re- del N de clulas/mL es igual al nmero de generaciones
querido para duplicar el nmero de clulas de una pobla- transcurridas en el tiempo analizado (ecuacin y cuadro 1). N2 componente principal de la atmsfera (78%).
Aerobios
cin. Se expresa en horas/generacin y en E. coli puede Gas inerte: no es usado por la mayora de los orga-
Obligados: requieren O 2 (21% o ms),
se de 20 minutos (3 generaciones/h). Como usamos ms los logaritmos en base 10, en lugar nismos, los que pueden reducir el triple enlace del
Ej. Bacillus, hongos, etc.
de los de base 2 tenemos: N2 con la enzima nitrogenasa se denominan dia-
tg=1/vc log10 Nf - log10 N0 Microaeroflicos: lo requieren pero a nivel menor zotrofos o fijadores de N2
n = que el atmosftico (5-10%) CO txico para la mayora de los organismos
Analizaremos el caso hipottico de un organismo unicelu- log10 2 = 0,301 Ej: Azospirillum (cadena respiratoria). Puede ser oxidado a CO2 por
lar, bacteria, protozoo, alga, que comience a dividirse en algunos microorganismos
La velocidad de crecimiento expresa la eficiencia en la Anaerobios
forma exponencial en un medio de cultivo lquido adecua- CH4 liberado a la atmsfera por microorganismos me-
utilizacin de los sustratos y el efecto de los factores am- Facultativos: no requieren O2, pero el desarrollo
do. Calcularemos el nmero de generaciones, el nmero tanognicos, gas con efecto invernadero, puede ser
bientales. es mejor con l. Ej: levaduras, E. coli
final de clulas/mL a medida que transcurre el tiempo oxidado a CO2 por bacterias metanotrficas
(cuadro 1). Aerotolerantes: no son sensibles al oxgeno (cre- CO2 importante gas, fuente de carbono para los
El crecimiento de clulas viables (capaces de reproducir- cen en ausencia o presencia de O2) auttrofos, aerobios y anaerobios, fotosintticos o
se en un medio adecuado) se expresa en escala semilo- Ej: Enterococcus faecalis,
Cuadro 1- Crecimiento exponencial (logartmico) quimiosintticos. Muchos hongos lo requieren a
gartmica (nmero de clulas/mL en logaritmo y el tiempo Streptococcus spp.
en una bacteria niveles superiores a los atmsfericos
en escala aritmtica) ya que resulta imposible graficar el
Obligados: no toleran el O2, mueren en su pre- H2 poco usado, txico para la mayora de los
N de Tiempo N log Ncel/mL log Ncel/mL
crecimiento de organismos unicelulares en escala aritm-
sencia. microorganismos, brinda energa a bacterias
clulas/mL (h) generaciones
2 10
tica (al cabo de unas horas pueden alcanzar densidades
Ej: Clostridium, Methanobacterium Hydrogenomonas: H2+ O2 = H2O + ATP
1 0 0 0 0,000 muy elevadas: 108-1010 clulas/mL).
2 0,5 1 1 0,301
4 1 2 2 0,602 NOTA: i) Para verificar este hecho calcule el peso de c-
8 1,5 3 3 0.903
lulas bacterianas luego de 24 horas de crecimiento expo-
Radiaciones
16 2 4 4 1,204
32 2,5 5 5 1,505 nencial, partiendo de una clula cuyo peso es un picogra-
Nf (nmero t n n = log Ncl./mL log Ncel./mL mo (10-12g) y cuyo tiempo de generacin es de 1 hora. Tapa Tornillo de seguridad
Abrazadera Rayos gamma
2 n= 10
final) (tiempo) generaciones 0,301 ii) Por qu el crecimiento se detiene en la naturaleza y Rayos X Ondas de radio
su representacin sigue una curva sigmoide? Ultravioleta Infrarrojo
log N clulas/mL 1- fase de latencia o lag
2- fase logartmica o exponencial Junta de
3- fase estacionaria La figura 2 muestra los eventos que pueden darse cuan- goma
10-4 0.01 1.0 100 103 104 106 108
4- fase de muerte do un microorganismo unicelular se introduce en un me- Cmara
3 dio lquido adecuado a su crecimiento. Se aprecian 4 fa- del El oxgeno se Longitud de onda (nm)
catalizador elimina de la
4 ses, desde el inicio del cultivo (inoculacin, tiempo cero) cmara, al com-
2 hasta la muerte de la mayora de las clulas (esteriliza- binarse con hidr-
1 cin del cultivo). geno para formar
agua.
tiempo
Las caractersticas de las distintas fases son: Infrarrojo
Figura 2- Crecimiento de un microorganismo en medio lquido Sobre Rojo
generador Tira indicadora Naranja
de volumen fijo (batch) Fase de latencia o fase lag no hay divisin celular, las de gas de anaerobiosis Amarillo
clulas se adaptan al medio, aumenta el nivel de coenzi- El azl de Verde
Analizando los eventos en la divisin celular del cuadro 1, mas necesarias para el funcionamiento de enzimas. Esta metileno pierde el
Ultravioleta
Azul
color en ausencia Violeta
podemos deducir que la ecuacin que representa el n- fase debe acortarse en el laboratorio y en la industria, de O2.
mero final de clulas por unidad de volumen es: 200 300 400 500 600 700 800 900
porque implica gasto de energa y tiempo. Esto se logra
Longitud de onda (nm)
Nf= No.2 n repicando el cultivo a un medio de la misma composicin
que el de origen, introduciendo un inculo grande (en ge-
No= nmero inicial de clulas/mL Nf = nmero final de clulas/mL Figura 13- Cultivo de microorganismos anaerobios Figura 14- Radiaciones
neral un 10% del volumen final del nuevo medio) y sem-
n = nmero de generaciones n = log2Nf-log2No brando con cultivos jvenes.
El espectro solar incluye radiaciones de distinta longitud de no afectarlo

onda (figura 14) (Prescott et al., 1999). La luz visible (400- estimularlo, son los nutrientes
800 nm de longitud de onda) es muy beneficiosa y participa inhibirlo, sustancias microbiosttica y microbicida,
en la sntesis de materia orgnica en la fotosntesis. Puede con y sin lisis (microltica)
provocar sin embargo, daos en los pigmentos fotosensi-
bles (clorofila, citocromos) ya que transfieren energa al O2
(oxgeno activado), que es muy reactivo y letal.
La figura 15 muestra alguno de estos efectos en un culti-
vo bacteriano creciendo exponencialmente en un medio
lquido. En el momento indicado por la flecha se ha agre-
4 Crecimiento microbiano y su
La radiacin ultravioleta (UV), es de longitud de onda
corta (10-400nm) y alta energa. La ms letal (260nm) es
gado una concentracin inhibitoria de la sustancia en es-
tudio. Se aprecia diferencia en los recuentos de clulas
control
absorbida por el ADN, provocando dmeros de timina que totales y de viables, consecuencia de la lisis celular.
inhiben su replicacin. Puede ocurrir reparacin por ac-
cin de una enzima que usa luz azul y separa los dmeros La ubicacin de una sustancia qumica en alguna de es- El crecimiento en sentido biolgico implica un aumento nes ptimas por la carencia de nutrientes y por las condi-
(fotorreactivacin). Se reconoce una reactivacin oscura tas categoras es muchas veces arbitraria ya que una mis- ordenado de todos los componentes celulares y no slo ciones ambientales, no siempre favorables ni constantes.
por corte de la cadena y sustitucin del segmento afectado. ma sustancia puede ser nutriente o bacteriosttico depende alguno de ellos. En este sentido el concepto es ms
diendo de la concentracin, como es el caso de los az- estrecho que el trmino desarrollo. Una bacteria puede En la naturaleza los microorganismos se encuentran li-
En Microbiologa son muy empleadas lmparas con luz cares que al 1% son nutrientes para la mayora de los acumular polisacridos y aumentar su peso, sin que por bres en la solucin del suelo y usualmente existen en bio-
ultravioleta en las cmaras de flujo laminar que comple- microorganismos, pero a altas dosis previenen el creci- ello est creciendo. En poblaciones de organismos uni- films: grupos de diferentes microorganismos organizados
mentan con su efecto germicida la accin de los filtros miento por plasmolisis (conservacin de alimentos). celulares, como son el caso de la mayora de las bacte- en capas e inmovilizados en la superficie de un sustrato,
bacteriolgicos por los que circula el aire que entra a es- rias, algas unicelulares, protozoos y esporas de hongos, rodeados en general por una matriz de polmeros orgni-
tas cmaras de cultivo. Prcticamente cualquier sustancia orgnica de origen el crecimiento trae aparejado la divisin celular y el au- cos de origen microbiano. Se desarrollan prcticamente
biolgico es utilizada por algn grupo de microorga- mento del nmero de clulas por unidad de volumen. en todas las superficies inmersas en ambientes acuosos
Las radiaciones ionizantes, de longitud de onda muy nismo. Aquellas sustancias naturales o artificiales que se naturales, biolgicos, como en los vegetales, como abiti-
corta contienen mucha energa y producen ionizacin, acumulan en los ecosistemas a concentraciones no de- La figura 1 presenta los eventos en la divisin binaria de cos, como plsticos, piedras, partculas del suelo. All, las
radicales libres (OH.), que oxidan los dobles enlaces, rom- seables para las comunidades naturales, se denominan una clula procariota: duplicacin del ADN y de todos los interacciones son numerosas tanto sinrgicas como an-
pen anillos aromticos y producen polimerizacin de mo- recalcitrantes (captulo 22). componentes celulares, formacin del tabique o septo di- tagnicas (captulo 14).
lculas. Se usan los rayos X que se producen artificial- rigido por la membrana celular, con formacin de dos c-
mente entre nodo y ctodo, los rayos gama, por la des- Por su toxicidad, las sustancias qumicas se clasifican lulas hijas idnticas (clon). En el laboratorio, los organismos son estudiados como
integracin de radioistopos. en: cultivos puros, en medios y condiciones de cultivo ade-
toxicidad no selectiva, el agente acta sobre todo tipo cuadas. Analizaremos la cintica del crecimiento en el
A bajas dosis se producen mutaciones que pueden con- de clulas: microbianas, del hospedante. Son conoci- 1. laboratorio (in-vitro).
ducir o no a la muerte, segn el segmento del gen lesio- dos los antispticos, que son efectivos sobre mucosas
nado. A mayores dosis son letales y se usan para esterili- (colorantes, sales de mercurio, etc.) y los desinfectan- Crecimiento exponencial
zacin. Algunas endosporas pueden resistir altas dosis. tes aplicados sobre superficies inertes (alcoholes, ja- 2. Es aquel en que todas las clulas se dividen al mismo
bones, cresoles). Esta separacin tambin es arbitra- tiempo, en forma sincrnica, duplicando la poblacin en
Las radiaciones infrarrojas liberan gran cantidad de caria, pues los efectos dependen de la concentracin. cada unidad de tiempo conocido como tiempo de genera-
3.
lor y no se usan para esterilizar. Es el caso de los hornos Actan, en general, a altas concentraciones. cin. Se postula que en esta fase todas las clulas son
a microondas (1.000nm de longitud de onda). Se usan en toxicidad selectiva, son ms txicos para las clulas viables y que la poblacin no envejece.
el laboratorio para fundir medios con agar, descongelar y microbianas (incluso para Gram positivas y no para 4.
calentar soluciones, etc. Gram negativas) y son inocuas para las clulas del Algunos conceptos:
hospedante. Estos son los agentes quimioteraputi- Figura 1- Divisin binaria de microorganismos unicelulares
cos, de gran empleo en el tratamiento de enfermeda- (bacilo) Velocidad de crecimiento: Es el nmero de generacio-
Factores qumicos des infecciosas. Son efectivas a muy bajas concen- nes (divisiones) que ocurren por unidad de tiempo y se
traciones. expresa en generaciones por hora.
Las sustancias qumicas pueden ejercer distintos efectos El crecimiento de los microorganismos en la naturaleza
sobre el desarrollo de los microorganismos: Los factores que influyen en la accin antimicrobiana son: es mucho ms lento que en el laboratorio bajo condicio- Vc= n/ t
a) concentracin del agente qumico Cuadro 10- Antispticos y desinfectantes

b) temperatura en que se emplea ms comunes
c) tipo y concentracin del microorganismo
d) naturaleza del material a tratar Sustancia Modo de accin Usos
Etanol Desnaturaliza protenas Antisptico

Por sus efectos en el equilibrio biolgico en ambientes y solubiliza lpidos (piel)
naturales analizaremos el efecto de algunas de estas sus- Formaldehdo Reacciona con grupos Desinfectante
-SH y -COOH
tancias: las bacteriocinas, las toxinas, enzimas, anti-
biticos en los captulos 14 y 20. Nitrato de plata Precipita protenas Antisptico
(ojos)
Detergentes Altera membranas Antisptico
a c Desinfectante
log N log N
clulas clulas Compuestos Desnaturaliza protenas Antisptico
fenlicos Daa membranas Desinfectante
bacteriosttico tiempo bacteriosttico tiempo

Agentes quimioteraputicos
b recuento total
log N recuento de Los agentes quimioteraputicos se emplean para el con-
clulas viables
trol microbiano dentro del husped, deben reconocer es-
tructuras celulares microbianas y no actuar sobre las mis-
bactericida tiempo mas estructuras del organismo superior (accin selecti-
va). Son sustancias qumicas utilizadas para matar o inhi-
Figura 15- Tres tipos de accin de sustancias qumicas bir microorganismos dentro del cuerpo humano; poseen
sobre los microorganismos toxicidad selectiva: actan sobre las clulas de algunos
a) bacteriosttico, b) bactericida sin lisis,
microorganismos y no sobre las clulas del tejido huma-
c) bactericida con lisis
no, para esto su accin debe estar dirigida a estructuras o
funciones exclusivamente microbianas.
El cuadro 10 seala conceptos referentes a sustancias
que actan como desinfectantes: usados para la reduc- Los ms empleados son las sulfanilamidas o anlogos de
cin o eliminacin de microorganismos en objetos inani- factores de crecimiento y los antibiticos.
mados, como mesadas, pinzas, como son los alcoholes,
formaldehido, compuestos fenlicos, detergentes. Son en Sulfas y anlogos a factores de crecimiento
general ms corrosivos que los empleados como antisp- Son sustancias estructuralmente similares a los factores
ticos, los que pueden emplearse adems, en tejidos ani- de crecimiento, de manera que impiden su utilizacin ya
males, como la piel y mucosas (nitrato de plata, ciertos que son inhibidores competitivos. El microorganismo toma
colorantes, los organo-mercuriales). del medio estas sustancias para sintetizar el factor de cre-
cimiento, pero el mismo no puede hacerlo y muere, si no
Muchas veces una misma sustancia puede actuar de una lo toma del medio.
u otra forma, segn la concentracin Ejemplos: sulfanilamida, 5-Br-uracilo.
Ejemplos de ellos: penicilina, estreptomicina, kanami- Bibliografa 3) Por qu las respiraciones aerobias con sustrato inor-
cina. gnico rinden menos energa que las con sustrato or-
Madigan, Martinko y Parker, Brock, Biologa de los microor- gnico?
Sulfanilamida cido p-aminobenzoico La mayora de los antibiticos empleados en salud animal ganismos, 9 edicin, 2000, Prentice Hall International 4) Seale alguna respiracin aerobia incompleta de gran
y humana son producidos por hongos y bacterias. Se co- Prescott, Harley, Klein Microbiologa, 1999 McGraw- valor biotecnolgico
nocen ms de 8000 sustancias antibiticas y cada ao se Hill.Interamericana 5) Por qu se considera que las fermentaciones son pro-
descubren cientos de nuevos productos. Los trabajos son cesos muy antiguos
arduos y costosos (cuadro 11) (captulo 20). 6) La aparicin de que elemento cambi las formas de
Preguntas de repaso obtencin de energa?
Cuadro 11- Produccin de antibiticos 7) Por qu se dice que las bacterias fotosintticas anae-
1) Cite 3 grupos de bacterias fotoauttrofas y 3 quimiau- robias pueden crecer en zonas donde aparentemente
ttrofas que habiten el suelo y explique las diferen- no hay luz visible?
Deteccin de organismos productores (siembra
cido flico cias entre ambos grupos. Anote y diferencie la forma 8) Qu importancia ecolgica tienen estas bacterias?
de suspensiones de suelo en medios slidos:
por la cual ellas obtienen carbono y energa. 9) Compare la estructura y la funcin fotosinttica de: cia-
Figura 16- Acido para amino benzoico y la sulfanilamida seleccin de colonias con halos de inhibicin)
2) Seale los tipos metablicos por los cuales obtienen nobacterias y bacterias sulfurosas purpreas y verdes?
Mtodos de extraccin y purificacin eficientes
energa los siguientes microorganismos: aerobios obli- 10) Analice la sucesin microbiana en la llamada columna
y obtencin de un producto cristalino de elevada
La sulfanilamida que es anloga pero no idntica (figu- gados, anaerobios obligados, anaerobios facultativos de Winogradsky. Cmo aislara en cultivo puro a los
pureza
ra 16) al cido para amino benzoico (PABA), requerido y anaerobios aerotolerantes diferentes grupos?
Acabar con un producto nico en alta concentra-
en la sntesis del cido flico, vitamina y factor de creci-
cin
miento para muchos microorganismos, fue empleada en
Determinar el espectro de accin (microorganis-
medicina antes del descubrimiento de los antibiticos.
mos sensibles)
El 5 Br uracilo es anlogo del uracilo, pero el correspon-
diente cido nucleico no puede sintetizarse en su pre-
sencia. La resistencia desarrollada por los microorganismos a los
antibiticos constituye uno de los mayores problemas en
Estas sustancias vuelven a emplearse en medicina, la prdida de eficacia de estas importantes sustancias
dado el problema de resistencias que estn provocan- quimioteraputicas. Los antibiticos naturales son mejo-
do los antibiticos, que pueden convertir en inefecti- rados por la industria, cambiando los radicales (R), largo
vos a estos productos poco tiempo despus de su re- de cadenas laterales, etc. como ocurre con la penicilina.
comendacin. (figura 17).
La formacin de antibiticos se consideraba un fenmeno

Antibiticos de laboratorio, ya que se producen en pequeas cantida-
des y se pensaba que en ecosistemas naturales no al-
Los antibiticos son sustancias qumicas de composi- canzaran a la clula sensible sin descomponerse y/o ad-
cin qumica variada, desde pptidos a molculas hetero- sorberse a los coloides del suelo o a partculas en el agua.
cclicas, como la penicilina (figura 17), quinonas, como Pero actualmente se reconoce su participacin en fen-
las tetraciclinas, con accin antimicrobiana, producidas por menos de lucha biolgica en ambientes naturales como
un microorganismo contra otro microorganismo. Los ms el suelo o aguas, asegurando, entre otros factores, la su-
conocidos son los secretados por bacterias (incluidos los premaca de un microorganismo sobre sus competidores
actinomicetes) y los hongos (figura 18). Se producen en en lugares con escasos nutrientes.
la fase estacionaria de crecimiento, cuando las condicio-
nes para el crecimiento son limitantes (telofase) y se con- Los grupos microbianos productores de antibiticos com-
sideran metabolitos secundarios. prenden:
Cuadro 29 - Clasificacin nutricional de los microorganismos Su modo de accin (figura 19) es variada, pueden alterar
cualquier estructura sensible de la clula: inhibiendo la
Fuente de energa: sntesis proteica, actuando sobre los ribosomas 70S, o su
Luz (fototrofos) Carbono: CO2 ( auttrofos) fraccin 50S como la eritromicina, estreptomicina o el clo-
orgnico (hetertrofo) ranfenicol, la sntesis de cidos nucleicos, como la rifam-
-
Reacciones qumicas Donadores de e : inorgnico (litotrofo) picina, alterando estructura de la pared celular (penicilina,
(quimiotrofos) orgnico (organotrofo) ampicilina, bacitracina, cefalosporinas), o la membrana
(polimixinas), inhibiendo procesos bioenergticos.
Electromagntica: FOTOTROFOS Figura 17- Frmula de la penicilina
Fotoautolitotrofos Fotoautoorganotrofo Fue en 1928 cuando el mdico escocs Alexander Fle-
* Bacterias sulfurosas purpreas y verdes * Bacterias no sulfurosas purpreas a ming redescubri la penicilina (ya detallada en 1896 por
(Chromatiaceae y Chlorobiaceae) (Rhodospirillaceae) un estudiante en Francia), al dejar durante sus vacacio-
CO2 + H2S (CH2O)n + S + H2O CO2 + CH3COOH (CH2O)n+ H2O nes una caja de Petri con estafilococos patgenos sobre
* cianobacterias Fotoheteroorganotrofo los cuales se desarrollaron las esporas del hongo Penici-
CO2 + 2H2O (CH O)n + O + H O * Bacterias no sulfurosas llum notatum, que inhibieron el crecimiento de las colo-
2 2 2
CH3COOH (CH2O)n + H2O nias bacterianas. Recin en 1940 se publicaron los tra-
No pueden reducir el CO2 bajos de aislamiento y se extendi la aplicacin de esta
sustancia, a la que sigui la estreptomicina por Waks-
Reacciones qumicas: QUIMIOTROFOS man, en 1944.
Quimioautolitotrofo Quimioheteroorganotrofo
Bacterias: aerobias La mayora de las bacterias, todos los hongos, protozoos Evaluacin de la concentracin de un antibitico
b A los efectos de conocer la concentracin de estas sus-
oxidantes del amonio: Respiraciones aerobios
+
NH4 1,5 O2
- + tancias ya sea en sueros de pacientes, en preparados
NO2 + 2H + H2O C6H12O6 + O2 6CO2 + 6H2O
comerciales, etc. se emplean los mtodos de:
oxidantes del nitrito: Respiraciones anaerobias
- - -
NO2 + 0,5O2 NO3 C6H12O6 +NO3 CO2+ H2O + N2 1) difusin en agar, donde se siembra en superficie pat-
oxidantes del azufre: Aceptores de electrones: genos aerobios o un microorganismo aerobio facultati-
S + 1,5O2 H2SO4 + H20 Nitrato: desnitrificantes vo de crecimiento rpido como el Staphylococcus o
=
S O + 4O H SO + H O Sulfato: sulfatorreduccin Pseudomonas y se colocan discos de papel impregna-
2 3 2 2 4 2
C6H12O6+SO4= CO2 + H20 + H2S dos con distintas concentraciones del antibitico. El di-
oxidantes del hierro: metro del halo de inhibicin formado es proporcional a
++
Fe
+++ +++ la concentracin.
Fe + O2 + H2O Hierro: reduccin del Fe
oxidantes del hidrgeno: CO2/carbonatos: metanognesis 2) dilucin en tubos, determina la CIM (concentracin
H2 + O2 H2O H2 + CO2 CH4 + H2O inhibitoria mnima), que es la concentracin ms baja
del frmaco que impide el crecimiento de determina-
Bacterias anaerobias: Fermentaciones:
- = - do patgeno, colocando diluciones seriadas del anti-
SH2 + NO3 SO4 + N2 Donadores y aceptores de e : molculas orgnicas
(bacterias, hongos) Figura 18- Hongos productores de penicilina bitico en tubos sembrados con un patgeno estn-
Fermentacin lctica a) halo de inhibicin dar. Luego de la incubacin se determina la CIM como
C6H12O6 CH3CHOHCOOH b) micelio y esporas de Penicillum spp la dilucin menor que no presenta crecimiento aun lue-
go de replicar el cultivo en medio fresco sin el antibi-
Actinomicetes del gnero Streptomyces tico.
Grupo pequeo, gran especificidad por el sustrato, La mayora de los microorganismos de la naturaleza. Bacterias como las del gnero Bacillus
bajo rendimiento energtico, por respiraciones aerobias Los ms eficientes: respiraciones aerobias con sustratos Hongos como los de los gneros Penicillum y Cepha- La figura 20 es una prueba de sensibilidad de un micro-
y anaerobias con sustrato inorgnico. orgnicos losporium organismo patgeno frente a distintos antibiticos. Cuan
Crecimiento lento. Productos importantes para las plantas.
to mayor es el dimetro del halo de inhibicin, ms efi- Cuadro 27- Ecuaciones generales de fotosntesis Cuadro 28- Propiedades de los sistemas
ciente es el antibitico, en este caso impregnado en los fotosintticos microbianos
discos de papel de filtro. Por ejemplo, en este caso se oxignica
observa que la vancomicina (V) es efectiva para M. algas, cianobacterias Propiedad eucariotas cianobacterias bacterias
luteus, pero no para el S. albus. verdes y
CO2 + 2H2O (CH2O)n + H2O + O2 purpreas
Pigmento
Pared celular Membrana celular anoxignica fotosinttico clorofila a clorofila a bacterioclorofila
CO2 + H2S (CH2O) n + S
Fotosistema II presente presente ausente
cido nucleico bact. sulfurosas purpreas y verdes Donadores
Figura 20- Antibiograma para los patgenos Staphylococcus de electrones H2O H2O H2, H2S, S,
(Chomatiaceae y Chlorobiaceae)
albus y Micrococcus luteus comp.orgnicos
CO2 + CH3COOH (CH O) n + H2O
Replicacin
2 Produccin
Acidos nucleicos La formacin de la penicilinasa, enzima que hidroliza O2 oxignica oxignica anoxignica
Transcripcin cadenas laterales de las penicilinas, es un ejemplo de estos bact. no sulfurosas (Rhodospirillaceae)
Ribosoma
Productos
Enzima
mRNA
mecanismos de resistencia y la diseminacin de estas primarios de
CH3COOH (CH2O) n + H2O
resistencias va plsmidos hace que rpidamente se pro- la conversin
Traduccin Protena integrantes de Rhodospirillaceae
paguen patgenos en ambientes intrahospitalarios. de energa ATP, NADPH ATP, NADPH ATP
Sustrato
fase oscura: Fuente de
Antimetabolitos
Sntesis proteica Resumen: el uso indebido de los antibiticos, su reco- 6CO2+ 18 ATP +12NADPH C6H12O6 +18ADP + Pi carbono CO2 CO2 Compuestos org-
mendacin sin efectuar el aislamiento y cultivo del pat- +12NADP+ nicos y/o CO2
Figura 19- Modos de accin de los antibiticos
geno para conocer el antibitico adecuado, su empleo in-
discriminado en raciones para aves, alimentos para ga- Resumen final: el cuadro 29 vincula la clasificacin nutricional de los microorganismos con los posibles mecanismos
Resistencias: si bien la investigacin y desarrollo de nue- nado, en invernculos con ciertos cultivos de valor econ- de obtencin de energa y cita ejemplos de cada grupo.
vos antibiticos, incluidos los semisintticos o los comple- mico, han hecho que se deban estar cambiando conti-
tamente sintticos (antivirales o antiprotozoarios) se ha nuamente las frmulas, las cadenas laterales, los radica-
incrementado mucho en los ltimos aos, tanto los de les unidos a la molcula principal y deba gastarse mucho
espectro reducido (eficaces frente a una gama estrecha tiempo y dinero en investigaciones en la bsqueda de
de patgenos), como los de amplio espectro, como la nuevos antibiticos.
ampicilina, rifampicina), existe el problema de la prdida
creciente de eficacia por el desarrollo de resistencias en Se desarrollan programas internacionales sobre el uso
los microorganismos originariamente sensibles. racional de antibiticos como el de la Organizacin Mun-
dial de la Salud (OMS) al que muchos pases adhieren.
Los mecanismos de resistencia a antibiticos crea-
dos por los microorganismos incluyen:
a) desarrollo de una va metablica alternativa a la va Anexo: Esterilizacin
que el antibitico bloquea
b) la produccin de enzimas que inactivan a los antibiticos Se define por esterilizacin el proceso por el cual se elimi-
c) alteracin del sitio blanco de accin del antibitico evi- nan todos los microorganismos incluidas las endosporas
tando su unin bacterianas de cualquier objeto, superficie o medio, por
d) bloqueo del transporte del antibitico al interior del mi- remocin o muerte de stos. Se emplean mtodos fsicos
croorganismo y qumicos (cuadro 12).
El cuadro 10 resume algunas de las estructuras y/o fun- Cuadro 11- Caracteres que confirman el rbol Cuadro 12- Mtodos de esterilizacin Empleo de distintas procedimientos de
ciones que se emplean en estudios filogenticos dada su universal construido a partir del gen de la fraccin esterilizacin
estabilidad gentica y el cuadro 11 presenta las ventajas 16S de la subunidad menor del rARN Mtodos fsicos
del anlisis de la fraccin 16S del r ARN. Calor Altas temperaturas
Principales caractersticas diferenciales entre calor seco, en hornos, hornos o estufas con aire Calor hmedo en autoclave
Cuadro 10- Propiedades definidas genticamente dominios Bacteria, Archae y Eukarya caliente a 160-180C por dos horas El calor en forma de vapor en saturacin y a presin es el
que han cambiado poco en bacterias Caractersticas de los procariotas actuales ms calor hmedo, en autoclaves, a 115-120C agente ms prctico para esterilizar ya que el vapor a pre-
cercanos al ancestro relacionadas con las con- (1 atmsfera de sobrepresin) por 20 minutos sin proporciona temperaturas superiores a las que se
Estructura de la pared celular: peptidoglicano pre- diciones fisicoqumicas en el origen de la vida Filtracin: lminas de asbesto, filtros bacteriolgi- obtienen a presin normal. Los autoclaves (figura 21) son
sente solamente en bacterias coherentes filo- Caractersticas de los Eukarya ms cercanos a cos (0,22-0,45 ), filtros para aire recipientes hermticamente cerrados donde se regula la
genticamente los procariotas: Giardia y Microspiridia Radiaciones presin y el tiempo. En general su emplean a una presin
Lpidos de membrana (esteres o teres) Secuencias de otras molculas, especialmen- no ionizantes: rayos ultravioleta: lmparas para de vapor de una atmsfera por encima de la atmosfrica,
Fotosntesis oxignica: solo en Cianobacterias te las ligadas a la replicacin, transcripcin y cmaras de siembra lo que corresponde a una temperatura de 120C. Para
Metanognesis: todas estas bacterias pertene- traduccin. ionizantes: rayos gamma, rayos X y rayos cs- volmenes pequeos se usan 20 minutos, si stos son
cen a uno de los 4 linajes dentro de Archaea micos (electrones de alta energa) mayores se alarga el tiempo de exposicin.
Originaron organismos no metanognicos, pero Mtodos qumicos
Entre los Archaea se encuentran los termfilos extremos
el proceso surgi una sola vez Gases, ejemplo: xido de etileno, que pasa de lqui- No se pueden esterilizar en autoclave: sustancias que no se
(incluidos termfilos acidfilos), los sulfatorreductores,
do a vapor en autoclave (poco empleado por su alta disuelven en agua ya que el vapor no las alcanza, ni sustan-
metanognicos y halfitos extremos.
toxicidad) cias termolbiles (muchas protenas, vitaminas, algunos hi-
Arboles filogenticos dratos de carbono), destruidas a altas temperaturas.
Las relaciones filogenticas se representan en diagramas Efectos del ambiente en la esterilizacin Tindalizacin: se usa cuando las sustancias no pueden
ramificados o rboles, que son grficos compuestos por calentarse por encima de 100C. Se calienta el material
ramas que se conectan en nudos (unidades taxonmicas Temperatura: a mayor temperatura, mayor accin letal. (leche, por ejemplo) por media hora durante 3 das con-
como especies o gneros). Puede presentar raz o estar La alta temperatura combinada con alto grado de hume- secutivos Las esporas germinarn en la incubacin y en
desprovista de ella (figura 2). Los sin raz representan sim- dad es uno de los mtodos ms efectivos para destruir la siguiente exposicin al calor las clulas vegetativas re-
plemente relaciones evolutivas pero no brinda datos de microorganismos. El calor hmedo mata a los micoorga- sultantes sern destruidas. Es uno de los mtodos ms
vas evolutivas. nismos porque coagula sus protenas y otras macromol- antiguos de esterilizacin.
culas y es ms rpido y efectivo que el calor seco que los
La figura 2a (Prescott et al., 1999) muestra que el micro- destruye al oxidar a sus constituyentes qumicos. As, las
organismo A est ms relacionado con C que con D y B, esporas de Clostridium botulinum son destruidas entre 4
pero no da datos sobre un ancestro comn ni direcciones a 20 minutos a 120C con calor hmedo, mientras que se
de cambio. En b se muestra un rbol con raz que presen- necesitan alrededor de 2 horas de exposicin al calor seco.
ta un nudo que sirve de antecesor comn y muestra el
desarrollo de las cuatro especies desde esta raz. Tipo de microorganismo: las clulas vegetativas en de-
sarrollo son mucho ms susceptibles que las esporas.
Una pregunta que surgi tempranamente en estudios
filogenticos es por qu existen tantas diferencias entre Ambiente: el calor es ms eficaz en medios cidos que
los organismos procariotes (cuadro12). en alcalino. La consistencia del material, acuoso o visco-
so, influye en la penetracin del agente. Las concentra-
Algunas explicaciones se basan en el hecho de que son ciones altas de hidratos de carbono aumentan, por lo ge-
los organismos ms ancestrales, son muy ubicuistas, se neral, la resistencia trmica de los organismos. La pre-
encuentran en ambientes extremos, son parsitos o sim- sencia de materia orgnica extraa reduce notablemente
biontes de todos los Eukarya y representan la mayor di- Figura 2- Arboles filogenticos. a) sin raz que une la eficacia de los agentes qumicos antimicrobianos por
versidad de seres vivos, biodiversidad que aun no est 4 unidades taxonmicas y b) con raz inactivarlos a por proteger al microorganismo. Figura 21- Autoclave
completamente explorada.
NOTA: La pasteurizacin no es procedimiento de es- mos, sino que pueden conservarlos durante largos pero- En los estudios de evolucin y parentesco microbianos se Cuadro 8- Filogenia bacteriana
terilizacin, pero se emplea mucho en leche, manteca y dos de tiempo. Se usa para conservar microorganismos analizan mucho los ARN ribosomales ya que se encuen-
ciertas bebidas alcohlicas (cerveza, vino) que se some- indefinidamente. Los cultivos se conservan congelados a tran en todos los organismos, su rol es tambin similar y * Es un mtodo de clasificacin que adems plan-
ten a tratamientos de calor controlado que slo matan a -70C o en recipientes con nitrgeno lquido a -196C. La su estructura se modifica muy lentamente debido precisa- tea una hiptesis de evolucin (determina relacio-
ciertos tipos de microorganismos y no a todos. La leche mezcla con 30-50% de glicerol, baja el punto de congela- mente a la importante funcin que desempean. Como nes de parentesco entre las especies)
pasteurizada queda libre de patgenos y de clulas via- miento de los cultivos y evita mortandad. contienen secuencias estables y variables, es posible com- * Compara secuencias de molculas (cronmetros
bles. Resisten los esporulados y los termfilos. Se usa parar tanto microorganismos estrechamente relacionados evolutivos) y establece las diferencias entre ellas
Mycobacterium tuberculosis como microorganismo test a como aquellos ms alejados filogenticamente. * Propiedades de un buen cronmetro evolutivo:
los efectos de evidenciar buena pasteurizacin. Este es Esterilizacin por radiaciones - distribucin universal en toda forma de vida
uno de los microorganismos patgenos ms resistentes La metodologa escapa a los lmites del texto pero incluye celular
en la leche y se destruye en 15 minutos a 60C. A- Ionizantes ruptura del ARN marcado con elementos radioactivos con - igual funcin en todos los organismos
Rayos gama: tienen mucha energa y son emitidos por ayuda de ribonuclasa, en fragmentos pequeos que se - cumplir una funcin celular central (replicacin,
Se usan 63C durante 30 72C durante 15 segun- ciertos istopos radiactivos como es el cobalto (60Co), pero separan y secuencian por su composicin en oligonucle- transcripcin, traduccin)
dos (pasteurizacin rpida), luego la leche se enfra r- son difciles de controlar ya que este istopo emite cons- tidos, que se comparan con ayuda de programas de com- - secuencia altamente conservada para distancias
pidamente. tantemente rayos gama en todas direcciones. Los mate- putacin y se calculan los coeficientes de asociacin. evolutivas grandes
riales se pueden empaquetar y luego esterilizar. - ausencia de transferencia horizontal (poco pro-
Calor seco (para materiales slidos estables al Tambin se fabrica el ADN complementario con ayuda de bable para funciones centrales)
calor) Rayos catdicos (haz de electrones): se usan para este- la transcriptasa inversa. Mediante la reaccin en cadena - cantidad de informacin suficiente (ser suficien-
Horno Pasteur: para materiales de vidrio y otros slidos rilizar material quirrgico, medicamentos y otros materia- de la polimerasa (PCR) se amplifica ese ADN y se se- temente grande)
estables al calor (arena, suelos, rastrojos, etc). Para males. Las radiaciones penetran las envolturas y actan a cuencia. Finalmente se deduce la secuencia del ARNr a
teriales de vidrio de laboratorio se consideran suficientes temperatura ambiente. partir de los resultados.
dos horas a 160-180C. Los materiales (pipetas, vasos, Cuadro 9- Segmentos de ARN en procariotas
cajas de Petri) deben envolverse de a grupos para evitar B- No ionizantes Actualmente la tcnica est muy evolucionada y se han usados en estudios filogenticos
su recontaminacin. Luz ultravioleta: La porcin UV del espectro incluye a secuenciado genomas bacterianos completos como los Nombre Tamao Ubicacin
radiaciones desde 15 a 390nm. Las radiaciones con lon- de Haemophilus influenzae y Micoplasma genitalium. (nucletidos)
Incineracin: Las ansas, puntas de bistur, varillas de vi- gitudes de onda de 265nm son las de mayor efecto bacte- El del primero contiene 1.743 genes en 1.830.137 pares
5S 120 Subunidad mayor del ribosoma
drio, etc. se calientan a la llama de mecheros Bunsen. Se ricida (200-295nm). Se usan en cmaras de siembra, en de bases y es mucho mayor que el genoma de un virus. 16S 1500 Subunidad menor
puede sumergirlos previamente en alcohol. Se coloca pri- cmaras de flujo laminar y para tratar superficies conta- 23S 2900 Subunidad mayor
mero la pieza en el cono amarillo y luego lentamente en el minadas en industrias de alimentos y leche. Posee poca
azul (mayor poder calorfico). Se enfra cerca de la llama capacidad para penetrar la materia por lo que slo los Filogenia bacteriana Secuencias de 16SrARN
antes de su uso. microorganismos que se encuentran en la superficie de Estructura primaria: mosaico de dominios que varan
los objetos son susceptibles de ser destruidos. La taxonoma bacteriana evoluciona muy rpidamente con en trminos del grado de conservacin de la secuencia
Preparacin del material para esterilizar: Un requisito los conocimientos sobre la biologa de las bacterias, la primaria de nucletidos.
indispensable en los laboratorios de Microbiologa es que aplicacin de mtodos moleculares al estudio de las rela- - Dominios de conservacin universal
- Dominios de nivel intermedio de conservacin, con cam-
los materiales y medios de cultivo utilizados estn estri- Esterilizacin por filtracin ciones filogenticas entre grupos bacterianos, ayudados
bios de secuencia, pero con conservacin de la estructu-
les y protegidos adecuadamente para conservar la esteri- con importantes aplicaciones de las tcnicas de la infor-
ra secundaria
lidad durante su almacenamiento. En la esterilizacin por Algunos materiales como los lquidos biolgicos (suero mtica. El cuadro 8 resumen estos avances y el cuadro 9 - Regiones altamente variables
calor hmedo es necesario envolver los objetos en un de animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas y presenta algunos de los segmentos de cidos nucleicos
Estructura secundaria:
material que permita el paso del vapor de agua y que ade- antibiticos) son termolbiles. Cuando no se puede usar empleados en estos estudios y la metodologa aplicada. similar en todos los organismos
ms los proteja posteriormente de la contaminacin am- las radiaciones, se procede a la filtracin a travs de fil- acotada por su funcin
biental (papel de aluminio). tros capaces de retener a los microorganismos, por el Se considera que la similitud en molculas implica simili- sntesis de protenas: funcin ancestral
pequeo tamao de los poros del filtro y en parte por la tud en los genes. Cuanto ms reciente es el ancestro co- Metodologa
Bajas temperaturas adsorcin a las paredes del poro debido a la carga elctri- mn, se encuentra mayor similitud y relaciones entre los transcriptasa reversa
Si bien el metabolismo microbiano est inhibido debajo ca del mismo y de los microorganismos. No se puede te- microorganismos segn la similitud en los genes. Se em- PCR
de 0C, estas temperaturas no matan a los microorganis- ner certeza de retener a los virus. plean tcnicas de hibridacin ADN-ADN y de compara- Secuencias de 16SrARN
cin de genes especficos.
ADN simple En general, el contenido de G+C de las cepas de una A-Filtros de membrana para los microorganismos de manera que pueda ser fcil-
misma especie es bastante constante. Si dos organismos Son discos de steres de celulosa con poros pequeos que mente eliminado del objeto esterilizado luego del trata-
difieren en ms del 10% en su contenido de G+C, sus evitan el paso de los microorganismos (0,45, 0,22 micras). miento. Normalmente se usa el xido de etileno, un lqui-
A genomas presentan secuencias de bases diferentes. Existen distintos tipos de filtro dependiendo del tamao del do que hierve a 10,7C y se usa en la industria para este-
ADN doble
b poro. Son desechables. Adems de usarse en la esteriliza- rilizar placas de Petri, jeringas y otros objetos de plstico
s.
Este mtodo debe complementarse con otros que evalan los cin de lquidos se usan en el anlisis microbiolgico de que se funden a temperaturas superiores a los 100C.
caracteres que apoyan a la taxonoma clsica, ya que aun con aguas ya que concentran los microorganismos existentes Debido a su alto poder de penetracin estos objetos se
220 260 300 contenidos de bases similares, las secuencias de las bases en grandes volmenes de agua (figura 22). empaquetan primero y luego se esterilizan. El xido de
Longitud de onda pueden ser diferentes. A la inversa, Staphylococcus presenta etileno acta inactivando enzimas y otras protenas con
un contenido de G+C de 30-38% y Micrococcus de 64 al 75%, B- Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) estn com- grupos sulfhidrilos (R-SH) en reaccin de alquilacin
sin embargo estos gneros de cocos Gram positivos tienen puestos por pliegues de acetato de celulosa que retienen (R-S-CH2CH2O-H).
Aumento de Absorbancia del
ADN a 260nm por
muchas caractersticas en comn. las partculas (incluidos los microorganismos) del aire que
desnaturalizacin sale de una cmara de flujo laminar (figura 23). 2- Glutaraldehdo: una solucin acuosa al 2% presenta
Hibridacin de cidos nucleicos, es la otra tcnica muy amplia actividad antimicrobiana. Es efectivo frente a vi-
empleada en los estudios taxonmicos. Si una mezcla de rus, clulas vegetativas y esporas de bacterias y hongos.
ADN monocatenario se enfra y se mantiene unos 25C Se usa en medicina para esterilizar instrumentos pticos
ADN simple debajo de la Tm, las cadenas con secuencias comple- y otros.
mentarias se reasociarn para formar una ADN de doble
desnaturaliza cadena estable, mientras que las cadenas no complemen-
A tarias permanecern sin aparearse. La incubacin a Bibliografa
b Tm =
10-15C por debajo de la Tm permite que se formen hbri-
s.
ADN doble dos slo con cadenas prcticamente idnticas. Se em- Madigan, Martinko y Parker. Brock, Biologa de los
plean segmentos de ADN monocatenario radiactivos, de Microorganismos, 2000. Prentice Hall International.
modo que luego de la hibridacin se mide la radiactividad Prescott, Harley, Klein. Microbiologia, 1999. McGraw-Hill.
80 90 100
temperatura
resultante que se expresa como % de la lograda con el Interamericana.
ADN de referencia (100%). www.fagro.edu.uy/microbiologia, Guia de prcticos, 2005.
Tm: punto medio del perfil de
desnaturalizacin trmica de Figura 22- Filtros bacteriolgicos descartables
Se considera que dos cepas cuyos ADN muestran al me-
ADN-ADN o de ADN-ARN
nos un 70% de similitud bajo condiciones de hibridacin Preguntas de repaso
Figura 1- Anlisis de ADN ptimas y menos de un 5% de diferencias en su Tm, son
miembros de la misma especie. Estos criterios van cam- 1) Cmo determinara el efecto de la temperatura en el
biando a medida que las tcnicas se perfeccionan. crecimiento de un microorganismo de inters?
Cuadro 7- Contenido de G+C en organismos 2) Por qu los factores del ambiente no actan solos?
Para organismos no tan relacionados se emplea la hibri- Cite ejemplos de potenciacin de efectos por accin
Animales y plantas superiores 30-50% (promedio 40%)
dacin del ARN (ribosomal o de transferencia, radiactivo) de dos o ms factores.
Microorganismos eucariotas: muy variable con ADN. Se usan los ARN ya que los genes que codifi- 3) Seale algn microorganismo anaerobio y cmo tra-
Algas 38-79 can a estas molculas no han evolucionado tan rpida- bajara con l?
Protozoos 20-60 mente como la mayora de los genes microbianos. 4) Cmo emplea las radiaciones en la prctica del labo-
Mohos mucosos 20-40 Figura 23- Filtros para aire ratorio?
Hongos 30-66
Secuenciacin de los cidos nucleicos: las estructu- 5) Cmo verificara que la cmara de siembra de flujo
Procariotas: 25-80 ras genmicas se comparan en la actualidad mediante la laminar est estril?
Actinomyces 59-73
Bacillus 32-62
secuenciacin del ADN y el ARN. La mayor atencin se Uso de agentes esterilizantes qumicos 6) Cmo desinfecta su mesada?
Escherichia 48-52 ha focalizado en la secuenciacin de fracciones conser- 7) Diferencias entre sustancias que actan como antisp-
Pseudomonas 58-70 vadas del ARN, como la 5S y 16S, aislados de las subuni- 1- Oxido de etileno: el requisito esencial para un agente ticos y como agentes quimioteraputicos. Ejemplos de
Salmonella 50-53 dades 50S y 30S de los ribosomas bacterianos. qumico esterilizante es que sea voltil, as como txico ambos tipos de sustancias
8) Por qu es necesario racionalizar el uso de antibiti- 11) Como esterilizara: muchas veces codifican para un carcter de importancia En el ADN bicatenario tres puentes de H unen los pares
cos en sanidad humana? como la sensibilidad a antibiticos, metales pesados, etc. GC y dos los AT. De modo que cuanto mayor es la propor-
9) Cuesta mucho la bsqueda de nuevos antibiticos? i) cmara de siembra, ii) el ansa, iii) frascos y tubos de En general, conviene emplear en la clasificacin un grupo cin de GC que se encuentre en el ADN, sus cadenas se
Por qu? vidrio vacos, iv) medios de cultivo usuales, v) medios grandes de caracteres (ver taxonoma numrica). separarn a mayor temperatura. La fusin se puede se-
10)Accin de la penicilina sobre bacterias Gram positivas con antibiticos, vi) solucin de vitaminas, vii) leche y guir en espectrometra ya que la absorbancia a 260nm
y Gram negativas. Acta sobre cultivos viejos? cerveza (UV) del ADN aumenta durante la separacin de las ca-
Caractersticas moleculares denas (figura 1). Al calentar una muestra de ADN la tem-
peratura sube durante la separacin de las hebras, a me-
Los abordajes ms modernos en la taxonoma se basan dida que se van rompiendo los puentes de H. Se alcanza
en los anlisis de protenas y cidos nucleicos, que brin- una meseta cuando todo el ADN se convierte en monoca-
dan importante informacin sobre relaciones entre micro- tenario. El punto medio de la curva proporciona la tempe-
organismos. ratura de fusin, medida directa del contenido de GC.
Comparacin de protenas Tambin se obtiene este dato centrifugando el ADN en un

Las secuencias de aminocidos en las protenas son refle- gradiente de CsCl (la densidad del ADN aumenta propor-
jo de las secuencias de ARNm y por lo tanto estn relacio- cionalmente con el contenido de GC).
nados con los genes que las codifican. Se determina la se-
cuencia de aminocidos de protenas con la misma funcin Cuadro 6- Anlisis clsicos de ADN
(si stas son similares, es muy probable que los organis-
mos que las poseen estn estrechamente relacionados).
Composicin de bases
Como estos estudios son largos y caros, se han emplea-
% C+C = G + C x100
do tcnicas indirectas de comparacin de protenas, como
G+C+T+A
la movilidad electrofortica de las mismas, o el empleo de
anticuerpos especficos que permiten distinguir protenas
* gradiente de CsCl
muy similares.
* desnaturalizacin trmica
Composicin de cidos nucleicos criterio de exclusin: % GC > 3 dos especies
diferentes
Los genes microbianos se pueden comparar directamen- % GC > 10 dos gneros
te por anlisis de su genoma. En el cuadro 6 se resumen diferentes
las tcnicas empleadas que incluyen determinacin del
contenido de bases guanina y citosina (G+C) e hibrida- Hibridacin ADN-ADN
cin de sus cidos nucleicos. - depende de la secuencia
- determinacin por:
Composicin de bases del ADN, constituye una de las * % hibridacin de ADN1 marcado con ADN2
primeras tcnicas empleadas en el anlisis del genoma
* < T del hbrido y del cultivo puro
microbiano. Las 4 bases pricas y pirimdicas que inte- m
gran los cidos nucleicos son: adenina (A), guanina (G), - es el criterio actual de definicin de especie:
citosina (C) y timina (T), A se aparea con T y C con G. - > 70% de hibridizacin
- Tm < 5C
El porcentaje de G+C del ADN refleja la secuencia de
bases y se determina por anlisis cromatogrfico de las
bases luego de hidrlisis o en forma ms sencilla por la El cuadro 7 presenta algunos de los valores de GC en
temperatura de fusin (Tm) del ADN. diversos organismos.
El aporte de estos caracteres se ha incrementado luego Los perfiles metablicos de poblaciones de inters se pue-
del empleo del microscopio electrnico de transmisin o den evaluar en sistemas comerciales como el Biolog, don-
de barrido, cuyo poder de resolucin (1nm) supera am- de se siembra el aislamiento en una placa con numero-
pliamente a los pticos (0,2 micras). sos orificios, cada uno con una fuente de carbono diferen-
te. Luego de la incubacin la placa se lee en un lector
Gentica de microorganismos
La coloracin de Gram contina siendo una importante
herramienta en la taxonoma bacteriana ya que permite
separar grupos segn composicin y estructura de la pa-
red celular procariota.
electrnico (aparece color donde hubo crecimiento y utili-
zacin del sustrato).
5 procariotas
Caracteres ecolgicos
Caracteres fisiolgicos y metablicos Son propiedades que afectan la relacin de los microor-
ganismos con el ambiente, como las relaciones simbiti- Elementos genticos en bacterias
Estos constituyen una importante contribucin en la taxo- cas, la produccin de enfermedades en un husped es-
noma ya que estn directamente relacionados con las pecfico, las preferencias de habitat, las necesidades de Los elementos genticos presentes en clulas bacteria-
enzimas microbianas y las protenas de transporte. Como ciertos rangos de temperatura, pH, O2, concentracin os- nas son:
las protenas son resultado de sntesis gnica, estos es- mtica. Algunas caractersticas de crecimiento se consi- a) cromosoma bacteriano
tudios metablicos permiten una comparacin indirecta deran tambin caracteres fisiolgicos. b) plsmidos
de los genomas microbianos. En el cuadro 5 se muestran c) cidos nucleicos de virus
algunas de determinaciones ms empleadas. d) elementos transponibles Figura 2- Esquema de una clula bacteriana con su
cromosoma y tres copias de un plsmido
Caracteres genticos
Cuadro 5- Caracteres fisiolgicos y metablicos Cromosoma bacteriano
usadas en la clasificacin microbiana Resultan de indudable aplicacin en la taxonoma de eu- El genoma bacteriano es haploide, est constituido por monocopia, oligocopia o multicopia. Sus principales fun-
cariotes, donde la especie se define en trminos de re- una molcula de ADN autorreplicativa (replicn), de 1.000 ciones no estn relacionadas a metabolismos fundamen-
Fuentes de carbono, nitrgeno, azufre, de energa, etc. produccin sexual. En procariotas, el fenmeno es frag- a 6.000Kb (4.700Kb en E. coli) y alberga la mayor infor- tales para la viabilidad de la clula, sino que albergan ge-
Componentes de la pared celular mentario, pero de todas formas se realizan grandes avan- macin gentica esencial de la clula (figura 1). nes que codifican para funciones accesorias como ser
Tipos de fermentacin y productos finales ces en el estudio de intercambio de genes mediante la resistencias a antibiticos, fungicidas, metales pesados,
Clasificacin nutricional recombinacin (transformacin, transduccin, conjuga- etc. Son empleados como vectores de informacin gen-
Efectos de factores del ambiente: temperatura, cin) (captulo 5). La primera ocurre principalmente entre tica y la clula al dividirse por fisin binaria asegura pre-
pH, gases, solutos, etc. Valores ptimos y rangos especies bacterianas diferentes, pero raramente entre viamente la duplicacin de sus plsmidos, ya que stos
Produccin de luz (luciferasa) gneros. Se han realizado estudios de transformacin con contienen un replicn bsico que hace posible que se
Metabolismos bioenergticos varios gneros: Bacillus, Micrococcus, Rhizobium y otros. dupliquen las copias plasmdicas antes de la divisin ce-
Pigmentos fotosintticos Pero, puede suceder que no ocurra transformacin por lular (figura 3).
Bases
Necesidades y tolerancia a la sal motivos diferentes a la homologa del ADN.
Metabolitos secundarios: antibiticos, toxinas, Replicacin Particin
pigmentos La conjugacin se ha empleado mucho en estudios taxo- Azcar
Sensibilidad a inhibidores metablicos y antibiticos nmicos. As entre las bacterias entricas, Escherichia
Inclusiones citoplasmticas: fosfatos, azufre, puede conjugar con los gneros Salmonella y Shigella,
fenoxialcanos pero no con Proteus ni Enterobacter, lo que concuerda Figura 1- Genoma bacteriano
con otros datos que muestran que los tres primeros gne-
Los estudios llevan en general tiempo ya que el microor- ros estn ms estrechamente relacionados entre si que
Los plsmidos estn formados por ADN circular, de do-
ganismo en estado puro se cultiva en medios con sustra- con los otros dos restantes.
ble hlice, son replicones, su nmero de copias es carc-
tos especficos. Se evala el empleo de algunos de ellos
terstico y vara de una clula a otra. El tamao de un
(azcares, nitratos, etc.) por la desaparicin del mismo y/ El nmero y tipo de plsmido presente en clulas bacte-
plsmido y su nmero por clula se usan como carcter
o por la aparicin de productos finales del metabolismo. rianas tambin se emplea con fines taxonmicos, ya que
taxonmico (figura 2).Una clula puede tener plsmidos Figura 3- Mantenimiento de plsmidos
La figura 4 presenta un plsmido muy estudiado el R1 de 5ACTG CAGT 3 Cuadro 3- Jerarquas en taxonoma. En este caso simplificado se cita el ejemplo de los miembros del gnero
3TGAC GTCA 5
E. coli, del cual se conocen por clonacin, zonas como la tmp Shigella y sus rangos taxonmicos superiores.
regin tra, que asegura su transferencia conjugativa, la
regin determinante de resistencia (antibiticos, metales
pesados) R-det y la regin par, que asegura que las co-
pias del plsmido se repartan a las clulas hijas (parti-
cin).
copB copA ori replicn bsico
repA
(replicacin)
KmR (kanamicina) Figura 5- Transposones

ApR (ampicilina)
RTF R-det SmR (estreptomicina) En resumen: las bacterias presentan la informacin ge-
regin tra Resistance Resistance
(transferencia Transfer determinants ntica esencial en el nucleoide, falso ncleo tambin lla-
conjugativa Factor SuR (sulfonamida) mado cromosoma bacteriano y pueden contener infor-
CmR (cloranfenicol) macin gentica adicional, no fundamental, en plsmidos,
profagos y transposones. Estos ltimos, al no ser esen-
ciales, pueden variar mucho en nmero y contenido de
parA parB regin par (particin ADN y son responsables de la mayor parte de los cam-
bios genticos en bacterias. Evidentemente, sta constituye una clasificacin artificial microbiana desde hace mucho tiempo. Resultan tiles e
Figura 4- El plsmido R que no permite inferir relaciones filogenticos o evoluti- la identificacin microbiana y pueden brindar tambin in-
1
Las variaciones genticas en procariotas se pueden ge- vas entre microorganismos ni determinar evolucin de fun- formacin filogentica.
nerar por dos mecanismos: ciones (respiracin, fotosntesis, etc.). Tampoco dice nada
Los bacterifagos Transferencia horizontal de genes, entre bacterias prxi- de organismos no cultivables y por lo tanto aun no aislados
Son virus que atacan a bacterias (captulo 2) y su multipli- mas, por ejemplo por pasaje de un plsmido de una clu- en cultivo puro, que se sabe constituyen una importante Caracteres morfolgicos
cacin est asegurada por un ciclo ltico y otro lisognico. la dadora a una receptora (evento intercelular) fraccin del germoplasma microbiano en la naturaleza.
Intervienen por lo tanto en la lisis celular (ciclo ltico) o en Recombinacin gentica: reaccin de corte, intercam- Son muy empleados en taxonoma ya que resultan fciles
la incorporacin de material gentico a clulas bacteria- bio y unin de ADN, por ejemplo la incorporacin de un de estudiar, son bastante estables por ser la expresin de
nas (ciclo lisognico). plsmido al cromosoma (evento intracelular) Caracteres clsicos numerosos genes, suelen ser estables del punto de vista
gentico y en general, sobretodo en los eucariotas, no
Los elementos transponibles Los caracteres morfolgicos, fisiolgicos, bioqumicos, varan mucho con el ambiente. El cuadro 4 presenta algu-
Son segmentos de ADN de cientos o miles de pares de Ciclo celular bacteriano ecolgicos y genticos han sido empleados en taxonoma nos de los caracteres morfolgicos empleados.
bases, con extremos repetidos invertidos, (figura 5), nun-
ca independientes y que pueden saltar en la clula de un Comnmente las clulas bacterianas se dividen por Cuadro 4- Algunos caracteres morfolgicos empleados en la clasificacin e identificacin microbiana
lugar a otro del ADN con muy baja frecuencia. El sitio lo fisin binaria o biparticin: la membrana celular jue-
eligen al azar y dan motivo a mutaciones. No son replico- ga un importante rol separando las dos molculas de Carcter Grupos microbianos
nes, por lo que deben insertarse en uno. ADN y sintetizando a su paso la nueva pared. El septo Forma celular y tamao celular Muy empleados en todos los grupos microbianos
o tabique formado separa finalmente a las dos clulas Morfologa de las colonias Todos los grupos principales
Los ms conocidos son los: hijas (figura 6). No hay mitosis: se la designa tambin Estructuras subcelulares Todos los grupos principales
IS- secuencias de insercin, son los ms simples, slo como amittica Tinciones Bacterias, algunos hongos
saltan. transferencia horizontal de genes: existen mecanis- Cilias y flagelos Todos los grupos principales
Tn-transposones propiamente dichos, son ms comple- mos de intercambio gentico entre procariotas que es Movilidad Bacterias deslizantes, espiroquetas
jos y adems de saltar, llevan genes adicionales, por muy diferente al de los eucariotas: el proceso es frag- Forma y ubicacin de las endosporas Bacterias formadoras de endosporas
ejemplo de resistencia a antibiticos, metales pesa- mentario, no intervienen los complementos cromos- Morfologa y localizacin de conidios y esporas eucariotas Algas, hongos
dos, etc. micos completos de ambas clulas y el ADN se trans- Inclusiones celulares Todos los grupos principales
Color Todos los grupos principales
Cuadro 2- Caracteres empleados en estudios fiere en una sola direccin, del donador al recipiente pasar virus pero no bacterias. Si no ocurre es que se
Dominio: Bacteria: ejemplo Eubacteria taxonmicos (se habla de formacin de diploides parciales). requiere contacto clula-clula (conjugacin).
Reino: Proteobacteria
Seccin: Proteobacterias Fenotpicos Los mecanismos son especializados. Puede haber o no En resumen: la variabilidad gentica en bacterias
Clase: Zymobacteria recombinacin de materiales genticos (incorporacin del se logra por:
Orden: Enterobacteriales caracteres culturales en: segmento transferido al material preexistente) (cuadro 1 y Recombinacin (transferencia horizontal de genes por
Famila:Enterobacteriaceae i) medio lquido (velo, turbidez uniforme, sedi- figura 7) (Madigan et al., 2000). transformacin, transduccin, conjugacin)
Gnero: Shigella mento) Mutaciones (transferencia vertical de genes)
Especie: S. flexneri ii) en medio slido (tamao, forma, bordes, de la
Cepa: poblacin que colonia) Transformacin
desciende de un cultivo puro, pueden diferenciarse
donador ADN libre receptor
unas de otras de varias maneras. caracteres morfolgicos Crecimiento Duplicacin del ADN
Biovariedad: varian- tamao, forma, forma de agruparse de las Divisin celular
tes de cepas caracterizadas por diferencias bioqu- clulas en medio lquido
micas y fisiolgicas. Las morfovariedades se dife- Figura 6- Ciclo celular en una clula procariota Transduccin
ADN en virus
rencian del punto de vista morfolgico y las serova- caracteres tintoriales
riedades, por sus caracteres antignicos. coloraciones simples, diferenciales (Gram), Cuadro 1- Transferencia horizontal de genes
especficas (esporas, flagelos, etc.) en bacterias Conjugacin
Una cepa de una especie se designa como cepa tipo. Fisiolgicos y metablicos tambin llamada sexualidad
Suele tratarse de uno de los primeros aislamientos y es- Empleo de fuentes de C, N, S, etc., formas de ob- se da en cualquier momento del ciclo de vida de
tar muy bien caracterizada. tencin de energa, produccin de sustancias biti- transferencia de transferencia de
la bacteria cromosoma plasmidios
cas (vitaminas) y abiticas (antibiticos) con mayor frecuencia entre bacterias relaciona-
Un gnero es un grupo bien definido de una o ms espe-
das, pero genes de una bacteria pueden integrar Figura 7- Mecanismos de transferencia horizontal
cies que est claramente separado de otros gneros. Serolgicos el genoma de otra bacteria muy alejada genti- de genes en bacterias
Reconocimiento por reacciones antgeno (somti- camente
La taxonoma toma en cuenta numerosos caracteres que cos o flagelares de la bacteria) y anticuerpos espe- por lo que el concepto de especie no se aplica
se resumen en el cuadro 2. cficos producidos contra esas molculas no presen- claramente en bacterias Recombinacin
tes en animales de sangre caliente: conejos, coba-
Los caracteres son evaluados en clave dicotmica y las yos, caballo Involucra intercambio fsico de material gentico entre
familias, gneros, especies, sub-especies, biovariedades,
Un dispositivo muy sencillo permite determinar el meca- elementos genticos. Se generan nuevas combinacio-
son descriptas en el Bergeys Manual of Systematic Bac- Ecolgicos, patolgicos y/o simbiticos nismo por el cul se formaron recombinantes cuando dos nes: se une lo que antes estaba separado y se separa
teriology (ltima edicin 2001) y en otras aproximaciones Asociaciones con animales, plantas, etc., efecto de cultivos se ponen en contacto: en un tubo doblado en U lo que antes estaba unido. Es un evento intracelular.
taxonmicas. factores del ambiente se siembran los cultivos, uno en cada rama, separados Se reconocen:
por un filtro bacteriolgico, que deja pasar los bacterifa-
El cuadro 3 (Prescott et al., 1999) muestra los niveles o Genticos gos, pero no a las clulas. a)Recombinacin homloga o general: el intercambio se
rangos empleados con mayor frecuencia: especies, g- Anlisis del nmero y tamao de los plsmidos, in- Si los cultivos se tratan previamente con ADNasa, realiza en segmentos extensos de secuencias homlo-
neros, familias, rdenes, clases y reinos. Los nombres tercambio de genes mediante los procesos de re- entonces el proceso no fue por transformacin ya gas o muy parecidas
de los grupos microbianos de cada nivel o rango tienen combinacin que el ADN libre est expuesto a la accin de la b)Recombinacin especfica de sitio: el intercambio se
terminaciones (sufijos) caractersticos: ales para rde-
enzima. Si igual ocurre recombinacin, debe ser por opera en segmentos muy cortos de secuencias espec-
nes, eae para familias. Obsrvese que las secciones son Moleculares alguno de los otros mecanismos de transferencia ficas (ejemplo integracin del genoma fgico al cromo-
categoras informales empleadas para dividir el Manual Estudio de protenas y cidos nucleicos, muy desa- horizontal. soma bacteriano).
en partes manejables (30 o ms secciones con ttulos rrollados en la actualidad, proporciona valiosa infor- Sin ADNasa, la recombinacin debe ocurrir por trans- c)Recombinacin ilegtima: es la transposicin: el inter-
formales como: metangenicos, Bacillus, Lactobacillus, macin sobre relaciones entre microorganismos duccin o por transformacin, ya que el filtro deja cambio se opera por salto a cualquier secuencia, al azar.
Halobacterias, Espiroquetas.
Transferencia horizontal de genes en Las bacterias son escasamente transformadas por pls-
bacterias midos, ya que stos deben permanecer con doble hlice
y circulares para replicarse. La figura 8 muestra la trans-
Ocurre por tres mecanismos (figura 7): formacin de una bacteria sensible a la ampicilina (Aps)
1. conjugacin: la transferencia es resultado de un con- que se convierte en resistente (ApR) por la adquisicin de
tacto clula-clula (se parece al proceso sexual en eu-
cariotas). El segmento de ADN transferido depende del
tiempo de contacto y se realiza a travs de un pelo
sexual.
un plsmido con esa resistencia.
Muchos ensayos se han realizado a los efectos de au-

mentar la competencia de ciertas bacterias de inters para
6 Taxonoma bacteriana y filogenia
2. transduccin, donde la transferencia est mediada por transformar, como por ejemplo tratarlas con altas concen-
partculas virales. traciones de iones calcio.
3. transformacin, donde participa el ADN libre en pe-
queos trozos que penetran por la membrana. La clu- La necesidad de agrupar y clasificar a los microorganis- tud en sus propiedades fenotpicas y que difieren de otros
la dadora en general se lisa y el ADN queda en la natu- mos surgi muy temprano en los estudios de la microbio- grupos de organismos o cepas en el caso de las bacte-
raleza expuesto a la biodegradacin, accin de la ApR loga. Los criterios empleados para agrupar, sobretodo con rias, en muchas caractersticas fenotpicas independien-
ADNasa, etc. Pero en ambientes muy colonizados, como ApR
las bacterias incluyeron categoras nutricionales (auttro- tes. En general presentan: % de hibridacin de sus ci-
la rizosfera (zona del suelo en contacto con las races) fas, hetertrofas), caractersticas tintoriales (Gram nega- dos nucleicos superior al 70% y el hbrido debe presentar
Transformacin
puede llegar a clulas receptoras que lo ingresan en su tivas y Gram positivas), respuestas al oxgeno (aerobias, una estabilidad trmica de menos de 5C (cuadro 1).
interior. anaerobias) rango de temperatura del crecimiento, etc.
Cuadro 1- Conceptos generales en
Cuando en la transferencia de genes se involucran as- La taxonoma (cuadro 1) clasifica a los organismos en taxonoma microbiana
pectos nutritivos, de resistencias a antibiticos, etc. es grupos (taxones) en base a similitudes, le asigna nom-
posible detectar los recombinantes por siembra en me- bres a los mismos e identifica organismos desconocidos Taxonoma o sistemtica:
dios selectivos donde no crece la clula receptora pero si Seleccin Ap
(los ubica en algunos de los taxones definidos). La expe- clasifica organismos en grupos (taxones) en base
la recombinante. Por ejemplo, si la clula receptora no riencia generada con la clasificacin de otros seres vivos, a su similitud
sintetiza triptofano (Trp-), no se desarrollar al sembrarla como los animales y los vegetales ayud a construir una asigna nombres a los taxones
en caja de Petri con medio sin ese aminocido, pero al Medio de cultivo con Ap aproximacin para el caso de los microorganismos y en identifica organismos desconocidos (determina si
recibir ADN de clulas Trp+, las recombinantes formarn especial para las bacterias. La taxonoma es una ciencia un organismo pertenece a alguno de los taxones
colonias en el medio sin el aminocido. que requiere la determinacin de numerosos caracteres y definidos antes).
luego una interpretacin rigurosa de los mismos.
Especie:
unidad taxonmica bsica
Transformacin Se debe distinguir entre taxonoma e identificacin de
grupo de cepas que tiene un alto grado de simili-
las bacterias. La primera conduce a una caracterizacin tud en sus propiedades y que difieren de otros gru-
El ADN libre (lisis celular) lineal se debe unir a la superficie Slo crecen clones transformados exhaustiva, con aplicacin de la teora y los mtodos de
pos de cepas en muchas caractersticas fenotpi-
de la bacteria mediante una protena de unin, luego de lo que llevan el plsmido clasificacin, la formacin de grupos o taxones y su no-
cas independientes
cual entran o bien las dos hebras o previamente una nu- menclatura. La identificacin constituye el lado prctico
Figura 8- Transformacin por un plsmido definicin metodolgica:
cleasa degrada una de ellas y la otra entra en la clula. El de la taxonoma, tiende a caracterizar a un aislamiento
- % de hibridacin ADN -ADN > 70%
trozo de ADN se asocia a una protena especfica que evita por un nmero limitado de anlisis, seleccionados en ge- 1 2
neral para el problema en cuestin, efecta comparacin - Tm < 5C (estabilidad trmica del hbrido
el ataque por nucleasas hasta su integracin con el ADN Transduccin ADN -ADN )
con ayuda de una protena llamada RecA, mediante un pro- con especies conocidas y asigna el aislamiento a una es- 1 2
ceso de recombinacin. En la replicacin de este ADN se El ADN que se transfiere proviene de un virus y el proceso pecie conocida o aconseja un estudio taxonmico ms
forma una clula igual a la parental y otra recombinante. puede ocurrir en dos formas: profundo. En las bacterias se habla ms de taxones que de espe-
cies, por la continua evolucin de caracteres morfolgi-
Especie: es la unidad taxonmica bsica y se define como cos y genticos. Las unidades de clasificacin de las bac-
el grupo de organismos que tiene un alto grado de simili- terias o taxones presentan la siguiente jerarqua:
2) Cmo puede poner en evidencia la presencia de ellos 7) Las mutaciones pueden revertir? Transduccin generalizada (figura 9) (Madigan et al., ADN deriva del donante y la otra es recientemente sinteti-
especficos para Rhizobium loti, en un suelo? 8) Cundo un elemento gentico puede recombinarse 2000), en donde una porcin del ADN de una clula es zada en la clula receptora durante el proceso de transfe-
3) Cul es la etapa ms importante en el proceso de en una clula receptora? parte del genoma de un virus, reemplazando al genoma rencia. El proceso requiere contacto clula-clula para
infeccin? 9) Mencione similitudes entre los procesos de transforma- del mismo (error de copia), se trata ahora de un virus de- permitir el pasaje de una hebra del ADN de un plsmido
4) Razn por la cual el virus puede infectar slo huspe- cin y transduccin y sus diferencias con la conjugacin fectivo. Cuando la poblacin de una bacteria sensible es (se requiere una enzima que corte).
des especficos 11) Diferencias principales entre la transduccin generali- infectada por un fago, pueden iniciarse los eventos del
5) Relaciones entre los bacterifagos y las clulas bacte- zada y la especializada ciclo ltico. Durante este proceso, las enzimas responsa- Una molcula complementaria de ADN se sintetiza en-
rianas 12) Aplicaciones prcticas del proceso de conjugacin bles del empaquetamiento del ADN viral en la cpside, tonces en la clula receptora. El factor F es un plsmido
6) Concepto de mutacin en bacterias y cmo se pueden 13) Aplicaciones de estos mecanismos en ingeniera ge- pueden fallar y se encierra ADN del husped en algunos conjugativo muy conocido que presenta alta eficiencia
producir ntica para la obtencin de materiales transgnicos. de estos virus. Estas partculas se liberan junto a los virio- en la transferencia. Las clulas que portan el plsmido F
nes normales, de modo que el lisado contiene una mez- se denominan F+ y las cepas sin el plsmido F, o sea
cla de viriones normales y partculas transductoras. recipientes para ste, se denominan F. Cuando una
clula F+ transfiere el plsmido F a una receptora, sta
Transduccin especializada: en este proceso se gene- ltima se convierte en F+, o sea dadora en una conjuga-
ran partculas transductoras de un solo tipo, por que to- cin (figura 10).
das ellas contienen un mismo fragmento de ADN de la
bacteria. Se forman por la escisin imprecisa del genoma
F (femenino) F+(masculino)
fgico que lleva un segmento de ADN de la bacteria adya-
cente al sitio donde estaba integrado. tubo de
conjugacin
Clula bacteriana
Clulas conjugando
(transferencia de una
copia del factor F)
Ciclo ltico Transformacin de
Clula transducida clulas F en F+
Fago
Sntesis de ADN
Separacin de
Fago clulas F+
Partcula
transductora
Partcula - +
transductora
Figura 10- Transformacin de clulas F en F
Recombinacin
Clula bacteriana Transduccin gentica
La figura 11 (Madigan et al., 2000), muestra una microfo-
Figura 9- Transduccin generalizada tografa electrnica de dos clulas bacterianas unidas por
el pelo sexual o pili, que facilita la transferencia de mate-
rial gentico por conjugacin.
Conjugacin
Por este mecanismo ocurre la transferencia de resisten-
Es un proceso de transferencia gentica que involucra cia a biocidas, como los antibiticos, ocasionando serios
contacto clula a clula. Es un mecanismo codificado por problemas en la salud humana.
plsmidos. Un plsmido conjugativo emplea este meca-
nismo para transferir una copia del mismo a una nueva Formacin de cepas Hfr (alta frecuencia de recombina-
clula. La evidencia sugiere que una de las hebras del cin y movilizacin del cromosoma) (figura 12).
En resumen: la conjugacin es un mecanismo de trans- Mutantes nutricionales pueden ser detectados por la tc- genes que pueden ser luego insertados en clulas reci-
ferencia de ADN en procariotas que requiere contacto nica de replicacin en placa: se toma una copia de las pientes apropiadas. Las mutantes son seleccionadas y
clula a clula y est controlada por genes contenidos en colonias creciendo en medio completo con un disco de empleadas en estudios especficos.
ciertos plsmidos, como el llamado F e involucra la trans- terciopelo o de papel de filtro. Esta copia se replica tocan-
ferencia del plsmido de una clula dadora a una recep- do la superficie de cajas con medio mnimo. Las colonias Finalmente, la figura 13 presenta un esquema que mues-
tora. Pero, adems, otros elementos genticos, incluyen- del tipo parental crecen normalmente, mientras que las tra las posibilidades de variabilidad gentica entre bacte-
do el cromosoma de la clula dadora, puede, en ocasio- de las mutantes, no lo hacen. Su lugar vaco (en la rpli- rias lo que explica su inmensa adaptacin a distintos am-
nes, ser movilizado y transferido. La transferencia del cro- ca) es seal de que corresponde a una mutante en el medio bientes, condiciones ambientales y situaciones extremas.
mosoma del husped no es generalmente completa pero completo. Esta se marca y se busca su homloga en el Por su alta frecuencia de transferencia horizontal de ge-
este mecanismo result muy til en la construccin de los medio original, se repica, purifica y se caracteriza. nes todas las bacterias compartiran un conjunto comn
mapas genticos de las bacterias, asociando los genes de genes, que cada bacteria descarta o conserva segn
Figura 11- Conjugacin entre dos bacterias, transferidos a diferentes perodos de contacto. Se designa como: sus requerimientos. La ausencia de lmites claros de es-
va el pelo sexual o pili Prottrofa: a la cepa tipo salvaje de la cual deriv la pecie o de tiempo en la transferencia sexual permite una
mutante muy rpida adaptacin a cambios ambientales. Esta enor-
Mutaciones Auxtrofa: a la mutante nutricional que requiere facto- me plasticidad gentica gener la biosfera actual y posibi-
El plsmido F de E.coli es conjugativo (es un episoma, o res de crecimiento, ejemplo auxtrofa para el triptfano, lit la existencia de los eucariotas.
sea se puede integrar al cromosoma) y tambin puede Una mutacin es un cambio gentico heredable en la se- vitamina B12, etc.
movilizar el cromosoma durante el contacto clula-clula. cuencia de bases de los cidos nucleicos de doble hlice del
La conjugacin permitir la transferencia de grandes zo- genoma de un organismo. El mutante difiere de la clula pa- Las mutaciones pueden ser espontneas o inducidas.
nas de cromosoma del donante a la clula receptora. Las
HERENCIA VERTICAL
rental en su genotipo, es decir, en los genes que el organis- Las espontneas ocurren por errores en la replicacin
clulas que poseen el plsmido F integrado por recombi- mo posee. Pero adems, puede alterarse su fenotipo. del cromosoma, por recombinacin o por transposicin.
nacin a su cromosoma se denominan Hfr. Si bien su frecuencia es baja, en cultivos densos, con va-
TRANSFERENCIA
Una bacteria aislada de la naturaleza se refiere como tipo rios millones de clulas, varias clulas/mL pueden ser mu- MUTACIN
HORIZONTAL
La presencia de un plsmido F altera propiedades de la salvaje. Una mutante puede obtenerse a partir de estas tantes. Las mutaciones pueden implicar cambios de una DE GENES
clula: capacidad para sintetizar el pili llamado F, facilitan- cepas o de otras derivadas de ella, es decir de otra mu- o dos bases (mutaciones puntuales) o alteraciones que
do la movilizacin. tante. Se nombran por el: incluyan varias pares de bases (deleciones, inserciones,
inversiones).
Genotipo: ej: hisC indica uno de los genes de E. coli que

E. coli F E. coli F codifican para la sntesis de histidina, mutaciones en este Mutaciones inducidas: ocurren por la accin de agentes
cromosomas Figura 13- Variabilidad gentica en bacterias
(femenino)
bacterianos
(masculino) gen se refieren como hisC1, hisC2, etc. fsicos o qumicos que daan el ADN, induciendo la apari-
Fenotipo: E.coli His+, significa que esta cepa puede sin- cin de mutaciones. Se habla de agentes mutagnicos.
tubo de F (factor de tetizar histidina, mientras que E. coli His-, no. Muchos son homlogos de bases, se copian pero luego Bibliografa
conjugacin fertilidad)
surgen errores de copia (bromouracilo, aminopurina). Otras
clulas de
conjugacin
Aislamiento de cepas mutantes sustancias reaccionan con el ADN (cido nitroso, hidroxi- Madigan, Martinko y Parker. Brock, Biologa de los mi-
(copia de factor F) Algunas resultan fcilmente detectables, por aparicin de lamina), colorantes (acridinas, bromuro de etidio), radia- croorganismos, 2000 Prentice Hall International
transferida a clula F pigmentos, prdidas de vesculas de gas, de flagelos, ya ciones (UV, ionizantes, etc.). Prescott, Harley, Klein. Microbiologa, 1999 McGraw-
Hfr masculino F+ masculino que las colonias cambian de aspecto. Otras, como las que Hill.Interamericana
factor F
incorporacin doble hebra adquieren cierta resistencia, como a un antibitico, son Existe mutagnesis que ocurre sin el empleo de agentes www.fagro.edu.uy/microbiologia: Contenidos: Gentica de
del factor F fcilmente aisladas en cajas de Petri, en un medio con el fsicos o qumicos, a travs del proceso conocido como procariotas
cromosoma
doble hebra antibitico en cuestin. Los mtodos de seleccin de ce- mutagnesis con transposones, donde la insercin de un
pas mutantes se han desarrollado mucho y permiten su elemento transponible ocurre dentro de un gen, determi-
Figura 12- Formacin de clulas Hfr (alta frecuencia aislamiento a partir de una poblacin con millones de or- nando en general la prdida de su funcin. La tecnologa Preguntas de repaso
de recombinacin) ganismos parentales. actual del ADN recombinante permite inducir mutaciones
especficas (mutagnesis dirigida a un sitio), en ciertos 1) Concepto de bacterifago
En resumen: la conjugacin es un mecanismo de trans- Mutantes nutricionales pueden ser detectados por la tc- genes que pueden ser luego insertados en clulas reci-
ferencia de ADN en procariotas que requiere contacto nica de replicacin en placa: se toma una copia de las pientes apropiadas. Las mutantes son seleccionadas y
clula a clula y est controlada por genes contenidos en colonias creciendo en medio completo con un disco de empleadas en estudios especficos.
ciertos plsmidos, como el llamado F e involucra la trans- terciopelo o de papel de filtro. Esta copia se replica tocan-
ferencia del plsmido de una clula dadora a una recep- do la superficie de cajas con medio mnimo. Las colonias Finalmente, la figura 13 presenta un esquema que mues-
tora. Pero, adems, otros elementos genticos, incluyen- del tipo parental crecen normalmente, mientras que las tra las posibilidades de variabilidad gentica entre bacte-
do el cromosoma de la clula dadora, puede, en ocasio- de las mutantes, no lo hacen. Su lugar vaco (en la rpli- rias lo que explica su inmensa adaptacin a distintos am-
nes, ser movilizado y transferido. La transferencia del cro- ca) es seal de que corresponde a una mutante en el medio bientes, condiciones ambientales y situaciones extremas.
mosoma del husped no es generalmente completa pero completo. Esta se marca y se busca su homloga en el Por su alta frecuencia de transferencia horizontal de ge-
este mecanismo result muy til en la construccin de los medio original, se repica, purifica y se caracteriza. nes todas las bacterias compartiran un conjunto comn
mapas genticos de las bacterias, asociando los genes de genes, que cada bacteria descarta o conserva segn
Figura 11- Conjugacin entre dos bacterias, transferidos a diferentes perodos de contacto. Se designa como: sus requerimientos. La ausencia de lmites claros de es-
va el pelo sexual o pili Prottrofa: a la cepa tipo salvaje de la cual deriv la pecie o de tiempo en la transferencia sexual permite una
mutante muy rpida adaptacin a cambios ambientales. Esta enor-
Mutaciones Auxtrofa: a la mutante nutricional que requiere facto- me plasticidad gentica gener la biosfera actual y posibi-
El plsmido F de E.coli es conjugativo (es un episoma, o res de crecimiento, ejemplo auxtrofa para el triptfano, lit la existencia de los eucariotas.
sea se puede integrar al cromosoma) y tambin puede Una mutacin es un cambio gentico heredable en la se- vitamina B12, etc.
movilizar el cromosoma durante el contacto clula-clula. cuencia de bases de los cidos nucleicos de doble hlice del
La conjugacin permitir la transferencia de grandes zo- genoma de un organismo. El mutante difiere de la clula pa- Las mutaciones pueden ser espontneas o inducidas.
nas de cromosoma del donante a la clula receptora. Las
HERENCIA VERTICAL
rental en su genotipo, es decir, en los genes que el organis- Las espontneas ocurren por errores en la replicacin
clulas que poseen el plsmido F integrado por recombi- mo posee. Pero adems, puede alterarse su fenotipo. del cromosoma, por recombinacin o por transposicin.
nacin a su cromosoma se denominan Hfr. Si bien su frecuencia es baja, en cultivos densos, con va-
TRANSFERENCIA
Una bacteria aislada de la naturaleza se refiere como tipo rios millones de clulas, varias clulas/mL pueden ser mu- MUTACIN
HORIZONTAL
La presencia de un plsmido F altera propiedades de la salvaje. Una mutante puede obtenerse a partir de estas tantes. Las mutaciones pueden implicar cambios de una DE GENES
clula: capacidad para sintetizar el pili llamado F, facilitan- cepas o de otras derivadas de ella, es decir de otra mu- o dos bases (mutaciones puntuales) o alteraciones que
do la movilizacin. tante. Se nombran por el: incluyan varias pares de bases (deleciones, inserciones,
inversiones).
Genotipo: ej: hisC indica uno de los genes de E. coli que

E. coli F E. coli F codifican para la sntesis de histidina, mutaciones en este Mutaciones inducidas: ocurren por la accin de agentes
cromosomas Figura 13- Variabilidad gentica en bacterias
(femenino)
bacterianos
(masculino) gen se refieren como hisC1, hisC2, etc. fsicos o qumicos que daan el ADN, induciendo la apari-
Fenotipo: E.coli His+, significa que esta cepa puede sin- cin de mutaciones. Se habla de agentes mutagnicos.
tubo de F (factor de tetizar histidina, mientras que E. coli His-, no. Muchos son homlogos de bases, se copian pero luego Bibliografa
conjugacin fertilidad)
surgen errores de copia (bromouracilo, aminopurina). Otras
clulas de
conjugacin
Aislamiento de cepas mutantes sustancias reaccionan con el ADN (cido nitroso, hidroxi- Madigan, Martinko y Parker. Brock, Biologa de los mi-
(copia de factor F) Algunas resultan fcilmente detectables, por aparicin de lamina), colorantes (acridinas, bromuro de etidio), radia- croorganismos, 2000 Prentice Hall International
transferida a clula F pigmentos, prdidas de vesculas de gas, de flagelos, ya ciones (UV, ionizantes, etc.). Prescott, Harley, Klein. Microbiologa, 1999 McGraw-
Hfr masculino F+ masculino que las colonias cambian de aspecto. Otras, como las que Hill.Interamericana
factor F
incorporacin doble hebra adquieren cierta resistencia, como a un antibitico, son Existe mutagnesis que ocurre sin el empleo de agentes www.fagro.edu.uy/microbiologia: Contenidos: Gentica de
del factor F fcilmente aisladas en cajas de Petri, en un medio con el fsicos o qumicos, a travs del proceso conocido como procariotas
cromosoma
doble hebra antibitico en cuestin. Los mtodos de seleccin de ce- mutagnesis con transposones, donde la insercin de un
pas mutantes se han desarrollado mucho y permiten su elemento transponible ocurre dentro de un gen, determi-
Figura 12- Formacin de clulas Hfr (alta frecuencia aislamiento a partir de una poblacin con millones de or- nando en general la prdida de su funcin. La tecnologa Preguntas de repaso
de recombinacin) ganismos parentales. actual del ADN recombinante permite inducir mutaciones
especficas (mutagnesis dirigida a un sitio), en ciertos 1) Concepto de bacterifago
2) Cmo puede poner en evidencia la presencia de ellos 7) Las mutaciones pueden revertir? Transduccin generalizada (figura 9) (Madigan et al., ADN deriva del donante y la otra es recientemente sinteti-
especficos para Rhizobium loti, en un suelo? 8) Cundo un elemento gentico puede recombinarse 2000), en donde una porcin del ADN de una clula es zada en la clula receptora durante el proceso de transfe-
3) Cul es la etapa ms importante en el proceso de en una clula receptora? parte del genoma de un virus, reemplazando al genoma rencia. El proceso requiere contacto clula-clula para
infeccin? 9) Mencione similitudes entre los procesos de transforma- del mismo (error de copia), se trata ahora de un virus de- permitir el pasaje de una hebra del ADN de un plsmido
4) Razn por la cual el virus puede infectar slo huspe- cin y transduccin y sus diferencias con la conjugacin fectivo. Cuando la poblacin de una bacteria sensible es (se requiere una enzima que corte).
des especficos 11) Diferencias principales entre la transduccin generali- infectada por un fago, pueden iniciarse los eventos del
5) Relaciones entre los bacterifagos y las clulas bacte- zada y la especializada ciclo ltico. Durante este proceso, las enzimas responsa- Una molcula complementaria de ADN se sintetiza en-
rianas 12) Aplicaciones prcticas del proceso de conjugacin bles del empaquetamiento del ADN viral en la cpside, tonces en la clula receptora. El factor F es un plsmido
6) Concepto de mutacin en bacterias y cmo se pueden 13) Aplicaciones de estos mecanismos en ingeniera ge- pueden fallar y se encierra ADN del husped en algunos conjugativo muy conocido que presenta alta eficiencia
producir ntica para la obtencin de materiales transgnicos. de estos virus. Estas partculas se liberan junto a los virio- en la transferencia. Las clulas que portan el plsmido F
nes normales, de modo que el lisado contiene una mez- se denominan F+ y las cepas sin el plsmido F, o sea
cla de viriones normales y partculas transductoras. recipientes para ste, se denominan F. Cuando una
clula F+ transfiere el plsmido F a una receptora, sta
Transduccin especializada: en este proceso se gene- ltima se convierte en F+, o sea dadora en una conjuga-
ran partculas transductoras de un solo tipo, por que to- cin (figura 10).
das ellas contienen un mismo fragmento de ADN de la
bacteria. Se forman por la escisin imprecisa del genoma
F (femenino) F+(masculino)
fgico que lleva un segmento de ADN de la bacteria adya-
cente al sitio donde estaba integrado. tubo de
conjugacin
Clula bacteriana
Clulas conjugando
(transferencia de una
copia del factor F)
Ciclo ltico Transformacin de
Clula transducida clulas F en F+
Fago
Sntesis de ADN
Separacin de
Fago clulas F+
Partcula
transductora
Partcula - +
transductora
Figura 10- Transformacin de clulas F en F
Recombinacin
Clula bacteriana Transduccin gentica
La figura 11 (Madigan et al., 2000), muestra una microfo-
Figura 9- Transduccin generalizada tografa electrnica de dos clulas bacterianas unidas por
el pelo sexual o pili, que facilita la transferencia de mate-
rial gentico por conjugacin.
Conjugacin
Por este mecanismo ocurre la transferencia de resisten-
Es un proceso de transferencia gentica que involucra cia a biocidas, como los antibiticos, ocasionando serios
contacto clula a clula. Es un mecanismo codificado por problemas en la salud humana.
plsmidos. Un plsmido conjugativo emplea este meca-
nismo para transferir una copia del mismo a una nueva Formacin de cepas Hfr (alta frecuencia de recombina-
clula. La evidencia sugiere que una de las hebras del cin y movilizacin del cromosoma) (figura 12).
Transferencia horizontal de genes en Las bacterias son escasamente transformadas por pls-
bacterias midos, ya que stos deben permanecer con doble hlice
y circulares para replicarse. La figura 8 muestra la trans-
Ocurre por tres mecanismos (figura 7): formacin de una bacteria sensible a la ampicilina (Aps)
1. conjugacin: la transferencia es resultado de un con- que se convierte en resistente (ApR) por la adquisicin de
tacto clula-clula (se parece al proceso sexual en eu-
cariotas). El segmento de ADN transferido depende del
tiempo de contacto y se realiza a travs de un pelo
sexual.
un plsmido con esa resistencia.
Muchos ensayos se han realizado a los efectos de au-

mentar la competencia de ciertas bacterias de inters para
6 Taxonoma bacteriana y filogenia
2. transduccin, donde la transferencia est mediada por transformar, como por ejemplo tratarlas con altas concen-
partculas virales. traciones de iones calcio.
3. transformacin, donde participa el ADN libre en pe-
queos trozos que penetran por la membrana. La clu- La necesidad de agrupar y clasificar a los microorganis- tud en sus propiedades fenotpicas y que difieren de otros
la dadora en general se lisa y el ADN queda en la natu- mos surgi muy temprano en los estudios de la microbio- grupos de organismos o cepas en el caso de las bacte-
raleza expuesto a la biodegradacin, accin de la ApR loga. Los criterios empleados para agrupar, sobretodo con rias, en muchas caractersticas fenotpicas independien-
ADNasa, etc. Pero en ambientes muy colonizados, como ApR
las bacterias incluyeron categoras nutricionales (auttro- tes. En general presentan: % de hibridacin de sus ci-
la rizosfera (zona del suelo en contacto con las races) fas, hetertrofas), caractersticas tintoriales (Gram nega- dos nucleicos superior al 70% y el hbrido debe presentar
Transformacin
puede llegar a clulas receptoras que lo ingresan en su tivas y Gram positivas), respuestas al oxgeno (aerobias, una estabilidad trmica de menos de 5C (cuadro 1).
interior. anaerobias) rango de temperatura del crecimiento, etc.
Cuadro 1- Conceptos generales en
Cuando en la transferencia de genes se involucran as- La taxonoma (cuadro 1) clasifica a los organismos en taxonoma microbiana
pectos nutritivos, de resistencias a antibiticos, etc. es grupos (taxones) en base a similitudes, le asigna nom-
posible detectar los recombinantes por siembra en me- bres a los mismos e identifica organismos desconocidos Taxonoma o sistemtica:
dios selectivos donde no crece la clula receptora pero si Seleccin Ap
(los ubica en algunos de los taxones definidos). La expe- clasifica organismos en grupos (taxones) en base
la recombinante. Por ejemplo, si la clula receptora no riencia generada con la clasificacin de otros seres vivos, a su similitud
sintetiza triptofano (Trp-), no se desarrollar al sembrarla como los animales y los vegetales ayud a construir una asigna nombres a los taxones
en caja de Petri con medio sin ese aminocido, pero al Medio de cultivo con Ap aproximacin para el caso de los microorganismos y en identifica organismos desconocidos (determina si
recibir ADN de clulas Trp+, las recombinantes formarn especial para las bacterias. La taxonoma es una ciencia un organismo pertenece a alguno de los taxones
colonias en el medio sin el aminocido. que requiere la determinacin de numerosos caracteres y definidos antes).
luego una interpretacin rigurosa de los mismos.
Especie:
unidad taxonmica bsica
Transformacin Se debe distinguir entre taxonoma e identificacin de
grupo de cepas que tiene un alto grado de simili-
las bacterias. La primera conduce a una caracterizacin tud en sus propiedades y que difieren de otros gru-
El ADN libre (lisis celular) lineal se debe unir a la superficie Slo crecen clones transformados exhaustiva, con aplicacin de la teora y los mtodos de
pos de cepas en muchas caractersticas fenotpi-
de la bacteria mediante una protena de unin, luego de lo que llevan el plsmido clasificacin, la formacin de grupos o taxones y su no-
cas independientes
cual entran o bien las dos hebras o previamente una nu- menclatura. La identificacin constituye el lado prctico
Figura 8- Transformacin por un plsmido definicin metodolgica:
cleasa degrada una de ellas y la otra entra en la clula. El de la taxonoma, tiende a caracterizar a un aislamiento
- % de hibridacin ADN -ADN > 70%
trozo de ADN se asocia a una protena especfica que evita por un nmero limitado de anlisis, seleccionados en ge- 1 2
neral para el problema en cuestin, efecta comparacin - Tm < 5C (estabilidad trmica del hbrido
el ataque por nucleasas hasta su integracin con el ADN Transduccin ADN -ADN )
con ayuda de una protena llamada RecA, mediante un pro- con especies conocidas y asigna el aislamiento a una es- 1 2
ceso de recombinacin. En la replicacin de este ADN se El ADN que se transfiere proviene de un virus y el proceso pecie conocida o aconseja un estudio taxonmico ms
forma una clula igual a la parental y otra recombinante. puede ocurrir en dos formas: profundo. En las bacterias se habla ms de taxones que de espe-
cies, por la continua evolucin de caracteres morfolgi-
Especie: es la unidad taxonmica bsica y se define como cos y genticos. Las unidades de clasificacin de las bac-
el grupo de organismos que tiene un alto grado de simili- terias o taxones presentan la siguiente jerarqua:
Cuadro 2- Caracteres empleados en estudios fiere en una sola direccin, del donador al recipiente pasar virus pero no bacterias. Si no ocurre es que se
Dominio: Bacteria: ejemplo Eubacteria taxonmicos (se habla de formacin de diploides parciales). requiere contacto clula-clula (conjugacin).
Reino: Proteobacteria
Seccin: Proteobacterias Fenotpicos Los mecanismos son especializados. Puede haber o no En resumen: la variabilidad gentica en bacterias
Clase: Zymobacteria recombinacin de materiales genticos (incorporacin del se logra por:
Orden: Enterobacteriales caracteres culturales en: segmento transferido al material preexistente) (cuadro 1 y Recombinacin (transferencia horizontal de genes por
Famila:Enterobacteriaceae i) medio lquido (velo, turbidez uniforme, sedi- figura 7) (Madigan et al., 2000). transformacin, transduccin, conjugacin)
Gnero: Shigella mento) Mutaciones (transferencia vertical de genes)
Especie: S. flexneri ii) en medio slido (tamao, forma, bordes, de la
Cepa: poblacin que colonia) Transformacin
desciende de un cultivo puro, pueden diferenciarse
donador ADN libre receptor
unas de otras de varias maneras. caracteres morfolgicos Crecimiento Duplicacin del ADN
Biovariedad: varian- tamao, forma, forma de agruparse de las Divisin celular
tes de cepas caracterizadas por diferencias bioqu- clulas en medio lquido
micas y fisiolgicas. Las morfovariedades se dife- Figura 6- Ciclo celular en una clula procariota Transduccin
ADN en virus
rencian del punto de vista morfolgico y las serova- caracteres tintoriales
riedades, por sus caracteres antignicos. coloraciones simples, diferenciales (Gram), Cuadro 1- Transferencia horizontal de genes
especficas (esporas, flagelos, etc.) en bacterias Conjugacin
Una cepa de una especie se designa como cepa tipo. Fisiolgicos y metablicos tambin llamada sexualidad
Suele tratarse de uno de los primeros aislamientos y es- Empleo de fuentes de C, N, S, etc., formas de ob- se da en cualquier momento del ciclo de vida de
tar muy bien caracterizada. tencin de energa, produccin de sustancias biti- transferencia de transferencia de
la bacteria cromosoma plasmidios
cas (vitaminas) y abiticas (antibiticos) con mayor frecuencia entre bacterias relaciona-
Un gnero es un grupo bien definido de una o ms espe-
das, pero genes de una bacteria pueden integrar Figura 7- Mecanismos de transferencia horizontal
cies que est claramente separado de otros gneros. Serolgicos el genoma de otra bacteria muy alejada genti- de genes en bacterias
Reconocimiento por reacciones antgeno (somti- camente
La taxonoma toma en cuenta numerosos caracteres que cos o flagelares de la bacteria) y anticuerpos espe- por lo que el concepto de especie no se aplica
se resumen en el cuadro 2. cficos producidos contra esas molculas no presen- claramente en bacterias Recombinacin
tes en animales de sangre caliente: conejos, coba-
Los caracteres son evaluados en clave dicotmica y las yos, caballo Involucra intercambio fsico de material gentico entre
familias, gneros, especies, sub-especies, biovariedades,
Un dispositivo muy sencillo permite determinar el meca- elementos genticos. Se generan nuevas combinacio-
son descriptas en el Bergeys Manual of Systematic Bac- Ecolgicos, patolgicos y/o simbiticos nismo por el cul se formaron recombinantes cuando dos nes: se une lo que antes estaba separado y se separa
teriology (ltima edicin 2001) y en otras aproximaciones Asociaciones con animales, plantas, etc., efecto de cultivos se ponen en contacto: en un tubo doblado en U lo que antes estaba unido. Es un evento intracelular.
taxonmicas. factores del ambiente se siembran los cultivos, uno en cada rama, separados Se reconocen:
por un filtro bacteriolgico, que deja pasar los bacterifa-
El cuadro 3 (Prescott et al., 1999) muestra los niveles o Genticos gos, pero no a las clulas. a)Recombinacin homloga o general: el intercambio se
rangos empleados con mayor frecuencia: especies, g- Anlisis del nmero y tamao de los plsmidos, in- Si los cultivos se tratan previamente con ADNasa, realiza en segmentos extensos de secuencias homlo-
neros, familias, rdenes, clases y reinos. Los nombres tercambio de genes mediante los procesos de re- entonces el proceso no fue por transformacin ya gas o muy parecidas
de los grupos microbianos de cada nivel o rango tienen combinacin que el ADN libre est expuesto a la accin de la b)Recombinacin especfica de sitio: el intercambio se
terminaciones (sufijos) caractersticos: ales para rde-
enzima. Si igual ocurre recombinacin, debe ser por opera en segmentos muy cortos de secuencias espec-
nes, eae para familias. Obsrvese que las secciones son Moleculares alguno de los otros mecanismos de transferencia ficas (ejemplo integracin del genoma fgico al cromo-
categoras informales empleadas para dividir el Manual Estudio de protenas y cidos nucleicos, muy desa- horizontal. soma bacteriano).
en partes manejables (30 o ms secciones con ttulos rrollados en la actualidad, proporciona valiosa infor- Sin ADNasa, la recombinacin debe ocurrir por trans- c)Recombinacin ilegtima: es la transposicin: el inter-
formales como: metangenicos, Bacillus, Lactobacillus, macin sobre relaciones entre microorganismos duccin o por transformacin, ya que el filtro deja cambio se opera por salto a cualquier secuencia, al azar.
Halobacterias, Espiroquetas.
La figura 4 presenta un plsmido muy estudiado el R1 de 5ACTG CAGT 3 Cuadro 3- Jerarquas en taxonoma. En este caso simplificado se cita el ejemplo de los miembros del gnero
3TGAC GTCA 5
E. coli, del cual se conocen por clonacin, zonas como la tmp Shigella y sus rangos taxonmicos superiores.
regin tra, que asegura su transferencia conjugativa, la
regin determinante de resistencia (antibiticos, metales
pesados) R-det y la regin par, que asegura que las co-
pias del plsmido se repartan a las clulas hijas (parti-
cin).
copB copA ori replicn bsico
repA
(replicacin)
KmR (kanamicina) Figura 5- Transposones

ApR (ampicilina)
RTF R-det SmR (estreptomicina) En resumen: las bacterias presentan la informacin ge-
regin tra Resistance Resistance
(transferencia Transfer determinants ntica esencial en el nucleoide, falso ncleo tambin lla-
conjugativa Factor SuR (sulfonamida) mado cromosoma bacteriano y pueden contener infor-
CmR (cloranfenicol) macin gentica adicional, no fundamental, en plsmidos,
profagos y transposones. Estos ltimos, al no ser esen-
ciales, pueden variar mucho en nmero y contenido de
parA parB regin par (particin ADN y son responsables de la mayor parte de los cam-
bios genticos en bacterias. Evidentemente, sta constituye una clasificacin artificial microbiana desde hace mucho tiempo. Resultan tiles e
Figura 4- El plsmido R que no permite inferir relaciones filogenticos o evoluti- la identificacin microbiana y pueden brindar tambin in-
1
Las variaciones genticas en procariotas se pueden ge- vas entre microorganismos ni determinar evolucin de fun- formacin filogentica.
nerar por dos mecanismos: ciones (respiracin, fotosntesis, etc.). Tampoco dice nada
Los bacterifagos Transferencia horizontal de genes, entre bacterias prxi- de organismos no cultivables y por lo tanto aun no aislados
Son virus que atacan a bacterias (captulo 2) y su multipli- mas, por ejemplo por pasaje de un plsmido de una clu- en cultivo puro, que se sabe constituyen una importante Caracteres morfolgicos
cacin est asegurada por un ciclo ltico y otro lisognico. la dadora a una receptora (evento intercelular) fraccin del germoplasma microbiano en la naturaleza.
Intervienen por lo tanto en la lisis celular (ciclo ltico) o en Recombinacin gentica: reaccin de corte, intercam- Son muy empleados en taxonoma ya que resultan fciles
la incorporacin de material gentico a clulas bacteria- bio y unin de ADN, por ejemplo la incorporacin de un de estudiar, son bastante estables por ser la expresin de
nas (ciclo lisognico). plsmido al cromosoma (evento intracelular) Caracteres clsicos numerosos genes, suelen ser estables del punto de vista
gentico y en general, sobretodo en los eucariotas, no
Los elementos transponibles Los caracteres morfolgicos, fisiolgicos, bioqumicos, varan mucho con el ambiente. El cuadro 4 presenta algu-
Son segmentos de ADN de cientos o miles de pares de Ciclo celular bacteriano ecolgicos y genticos han sido empleados en taxonoma nos de los caracteres morfolgicos empleados.
bases, con extremos repetidos invertidos, (figura 5), nun-
ca independientes y que pueden saltar en la clula de un Comnmente las clulas bacterianas se dividen por Cuadro 4- Algunos caracteres morfolgicos empleados en la clasificacin e identificacin microbiana
lugar a otro del ADN con muy baja frecuencia. El sitio lo fisin binaria o biparticin: la membrana celular jue-
eligen al azar y dan motivo a mutaciones. No son replico- ga un importante rol separando las dos molculas de Carcter Grupos microbianos
nes, por lo que deben insertarse en uno. ADN y sintetizando a su paso la nueva pared. El septo Forma celular y tamao celular Muy empleados en todos los grupos microbianos
o tabique formado separa finalmente a las dos clulas Morfologa de las colonias Todos los grupos principales
Los ms conocidos son los: hijas (figura 6). No hay mitosis: se la designa tambin Estructuras subcelulares Todos los grupos principales
IS- secuencias de insercin, son los ms simples, slo como amittica Tinciones Bacterias, algunos hongos
saltan. transferencia horizontal de genes: existen mecanis- Cilias y flagelos Todos los grupos principales
Tn-transposones propiamente dichos, son ms comple- mos de intercambio gentico entre procariotas que es Movilidad Bacterias deslizantes, espiroquetas
jos y adems de saltar, llevan genes adicionales, por muy diferente al de los eucariotas: el proceso es frag- Forma y ubicacin de las endosporas Bacterias formadoras de endosporas
ejemplo de resistencia a antibiticos, metales pesa- mentario, no intervienen los complementos cromos- Morfologa y localizacin de conidios y esporas eucariotas Algas, hongos
dos, etc. micos completos de ambas clulas y el ADN se trans- Inclusiones celulares Todos los grupos principales
Color Todos los grupos principales
El aporte de estos caracteres se ha incrementado luego Los perfiles metablicos de poblaciones de inters se pue-
del empleo del microscopio electrnico de transmisin o den evaluar en sistemas comerciales como el Biolog, don-
de barrido, cuyo poder de resolucin (1nm) supera am- de se siembra el aislamiento en una placa con numero-
pliamente a los pticos (0,2 micras). sos orificios, cada uno con una fuente de carbono diferen-
te. Luego de la incubacin la placa se lee en un lector
Gentica de microorganismos
La coloracin de Gram contina siendo una importante
herramienta en la taxonoma bacteriana ya que permite
separar grupos segn composicin y estructura de la pa-
red celular procariota.
electrnico (aparece color donde hubo crecimiento y utili-
zacin del sustrato).
5 procariotas
Caracteres ecolgicos
Caracteres fisiolgicos y metablicos Son propiedades que afectan la relacin de los microor-
ganismos con el ambiente, como las relaciones simbiti- Elementos genticos en bacterias
Estos constituyen una importante contribucin en la taxo- cas, la produccin de enfermedades en un husped es-
noma ya que estn directamente relacionados con las pecfico, las preferencias de habitat, las necesidades de Los elementos genticos presentes en clulas bacteria-
enzimas microbianas y las protenas de transporte. Como ciertos rangos de temperatura, pH, O2, concentracin os- nas son:
las protenas son resultado de sntesis gnica, estos es- mtica. Algunas caractersticas de crecimiento se consi- a) cromosoma bacteriano
tudios metablicos permiten una comparacin indirecta deran tambin caracteres fisiolgicos. b) plsmidos
de los genomas microbianos. En el cuadro 5 se muestran c) cidos nucleicos de virus
algunas de determinaciones ms empleadas. d) elementos transponibles Figura 2- Esquema de una clula bacteriana con su
cromosoma y tres copias de un plsmido
Caracteres genticos
Cuadro 5- Caracteres fisiolgicos y metablicos Cromosoma bacteriano
usadas en la clasificacin microbiana Resultan de indudable aplicacin en la taxonoma de eu- El genoma bacteriano es haploide, est constituido por monocopia, oligocopia o multicopia. Sus principales fun-
cariotes, donde la especie se define en trminos de re- una molcula de ADN autorreplicativa (replicn), de 1.000 ciones no estn relacionadas a metabolismos fundamen-
Fuentes de carbono, nitrgeno, azufre, de energa, etc. produccin sexual. En procariotas, el fenmeno es frag- a 6.000Kb (4.700Kb en E. coli) y alberga la mayor infor- tales para la viabilidad de la clula, sino que albergan ge-
Componentes de la pared celular mentario, pero de todas formas se realizan grandes avan- macin gentica esencial de la clula (figura 1). nes que codifican para funciones accesorias como ser
Tipos de fermentacin y productos finales ces en el estudio de intercambio de genes mediante la resistencias a antibiticos, fungicidas, metales pesados,
Clasificacin nutricional recombinacin (transformacin, transduccin, conjuga- etc. Son empleados como vectores de informacin gen-
Efectos de factores del ambiente: temperatura, cin) (captulo 5). La primera ocurre principalmente entre tica y la clula al dividirse por fisin binaria asegura pre-
pH, gases, solutos, etc. Valores ptimos y rangos especies bacterianas diferentes, pero raramente entre viamente la duplicacin de sus plsmidos, ya que stos
Produccin de luz (luciferasa) gneros. Se han realizado estudios de transformacin con contienen un replicn bsico que hace posible que se
Metabolismos bioenergticos varios gneros: Bacillus, Micrococcus, Rhizobium y otros. dupliquen las copias plasmdicas antes de la divisin ce-
Pigmentos fotosintticos Pero, puede suceder que no ocurra transformacin por lular (figura 3).
Bases
Necesidades y tolerancia a la sal motivos diferentes a la homologa del ADN.
Metabolitos secundarios: antibiticos, toxinas, Replicacin Particin
pigmentos La conjugacin se ha empleado mucho en estudios taxo- Azcar
Sensibilidad a inhibidores metablicos y antibiticos nmicos. As entre las bacterias entricas, Escherichia
Inclusiones citoplasmticas: fosfatos, azufre, puede conjugar con los gneros Salmonella y Shigella,
fenoxialcanos pero no con Proteus ni Enterobacter, lo que concuerda Figura 1- Genoma bacteriano
con otros datos que muestran que los tres primeros gne-
Los estudios llevan en general tiempo ya que el microor- ros estn ms estrechamente relacionados entre si que
Los plsmidos estn formados por ADN circular, de do-
ganismo en estado puro se cultiva en medios con sustra- con los otros dos restantes.
ble hlice, son replicones, su nmero de copias es carc-
tos especficos. Se evala el empleo de algunos de ellos
terstico y vara de una clula a otra. El tamao de un
(azcares, nitratos, etc.) por la desaparicin del mismo y/ El nmero y tipo de plsmido presente en clulas bacte-
plsmido y su nmero por clula se usan como carcter
o por la aparicin de productos finales del metabolismo. rianas tambin se emplea con fines taxonmicos, ya que
taxonmico (figura 2).Una clula puede tener plsmidos Figura 3- Mantenimiento de plsmidos
8) Por qu es necesario racionalizar el uso de antibiti- 11) Como esterilizara: muchas veces codifican para un carcter de importancia En el ADN bicatenario tres puentes de H unen los pares
cos en sanidad humana? como la sensibilidad a antibiticos, metales pesados, etc. GC y dos los AT. De modo que cuanto mayor es la propor-
9) Cuesta mucho la bsqueda de nuevos antibiticos? i) cmara de siembra, ii) el ansa, iii) frascos y tubos de En general, conviene emplear en la clasificacin un grupo cin de GC que se encuentre en el ADN, sus cadenas se
Por qu? vidrio vacos, iv) medios de cultivo usuales, v) medios grandes de caracteres (ver taxonoma numrica). separarn a mayor temperatura. La fusin se puede se-
10)Accin de la penicilina sobre bacterias Gram positivas con antibiticos, vi) solucin de vitaminas, vii) leche y guir en espectrometra ya que la absorbancia a 260nm
y Gram negativas. Acta sobre cultivos viejos? cerveza (UV) del ADN aumenta durante la separacin de las ca-
Caractersticas moleculares denas (figura 1). Al calentar una muestra de ADN la tem-
peratura sube durante la separacin de las hebras, a me-
Los abordajes ms modernos en la taxonoma se basan dida que se van rompiendo los puentes de H. Se alcanza
en los anlisis de protenas y cidos nucleicos, que brin- una meseta cuando todo el ADN se convierte en monoca-
dan importante informacin sobre relaciones entre micro- tenario. El punto medio de la curva proporciona la tempe-
organismos. ratura de fusin, medida directa del contenido de GC.
Comparacin de protenas Tambin se obtiene este dato centrifugando el ADN en un

Las secuencias de aminocidos en las protenas son refle- gradiente de CsCl (la densidad del ADN aumenta propor-
jo de las secuencias de ARNm y por lo tanto estn relacio- cionalmente con el contenido de GC).
nados con los genes que las codifican. Se determina la se-
cuencia de aminocidos de protenas con la misma funcin Cuadro 6- Anlisis clsicos de ADN
(si stas son similares, es muy probable que los organis-
mos que las poseen estn estrechamente relacionados).
Composicin de bases
Como estos estudios son largos y caros, se han emplea-
% C+C = G + C x100
do tcnicas indirectas de comparacin de protenas, como
G+C+T+A
la movilidad electrofortica de las mismas, o el empleo de
anticuerpos especficos que permiten distinguir protenas
* gradiente de CsCl
muy similares.
* desnaturalizacin trmica
Composicin de cidos nucleicos criterio de exclusin: % GC > 3 dos especies
diferentes
Los genes microbianos se pueden comparar directamen- % GC > 10 dos gneros
te por anlisis de su genoma. En el cuadro 6 se resumen diferentes
las tcnicas empleadas que incluyen determinacin del
contenido de bases guanina y citosina (G+C) e hibrida- Hibridacin ADN-ADN
cin de sus cidos nucleicos. - depende de la secuencia
- determinacin por:
Composicin de bases del ADN, constituye una de las * % hibridacin de ADN1 marcado con ADN2
primeras tcnicas empleadas en el anlisis del genoma
* < T del hbrido y del cultivo puro
microbiano. Las 4 bases pricas y pirimdicas que inte- m
gran los cidos nucleicos son: adenina (A), guanina (G), - es el criterio actual de definicin de especie:
citosina (C) y timina (T), A se aparea con T y C con G. - > 70% de hibridizacin
- Tm < 5C
El porcentaje de G+C del ADN refleja la secuencia de
bases y se determina por anlisis cromatogrfico de las
bases luego de hidrlisis o en forma ms sencilla por la El cuadro 7 presenta algunos de los valores de GC en
temperatura de fusin (Tm) del ADN. diversos organismos.
ADN simple En general, el contenido de G+C de las cepas de una A-Filtros de membrana para los microorganismos de manera que pueda ser fcil-
misma especie es bastante constante. Si dos organismos Son discos de steres de celulosa con poros pequeos que mente eliminado del objeto esterilizado luego del trata-
difieren en ms del 10% en su contenido de G+C, sus evitan el paso de los microorganismos (0,45, 0,22 micras). miento. Normalmente se usa el xido de etileno, un lqui-
A genomas presentan secuencias de bases diferentes. Existen distintos tipos de filtro dependiendo del tamao del do que hierve a 10,7C y se usa en la industria para este-
ADN doble
b poro. Son desechables. Adems de usarse en la esteriliza- rilizar placas de Petri, jeringas y otros objetos de plstico
s.
Este mtodo debe complementarse con otros que evalan los cin de lquidos se usan en el anlisis microbiolgico de que se funden a temperaturas superiores a los 100C.
caracteres que apoyan a la taxonoma clsica, ya que aun con aguas ya que concentran los microorganismos existentes Debido a su alto poder de penetracin estos objetos se
220 260 300 contenidos de bases similares, las secuencias de las bases en grandes volmenes de agua (figura 22). empaquetan primero y luego se esterilizan. El xido de
Longitud de onda pueden ser diferentes. A la inversa, Staphylococcus presenta etileno acta inactivando enzimas y otras protenas con
un contenido de G+C de 30-38% y Micrococcus de 64 al 75%, B- Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) estn com- grupos sulfhidrilos (R-SH) en reaccin de alquilacin
sin embargo estos gneros de cocos Gram positivos tienen puestos por pliegues de acetato de celulosa que retienen (R-S-CH2CH2O-H).
Aumento de Absorbancia del
ADN a 260nm por
muchas caractersticas en comn. las partculas (incluidos los microorganismos) del aire que
desnaturalizacin sale de una cmara de flujo laminar (figura 23). 2- Glutaraldehdo: una solucin acuosa al 2% presenta
Hibridacin de cidos nucleicos, es la otra tcnica muy amplia actividad antimicrobiana. Es efectivo frente a vi-
empleada en los estudios taxonmicos. Si una mezcla de rus, clulas vegetativas y esporas de bacterias y hongos.
ADN monocatenario se enfra y se mantiene unos 25C Se usa en medicina para esterilizar instrumentos pticos
ADN simple debajo de la Tm, las cadenas con secuencias comple- y otros.
mentarias se reasociarn para formar una ADN de doble
desnaturaliza cadena estable, mientras que las cadenas no complemen-
A tarias permanecern sin aparearse. La incubacin a Bibliografa
b Tm =
10-15C por debajo de la Tm permite que se formen hbri-
s.
ADN doble dos slo con cadenas prcticamente idnticas. Se em- Madigan, Martinko y Parker. Brock, Biologa de los
plean segmentos de ADN monocatenario radiactivos, de Microorganismos, 2000. Prentice Hall International.
modo que luego de la hibridacin se mide la radiactividad Prescott, Harley, Klein. Microbiologia, 1999. McGraw-Hill.
80 90 100
temperatura
resultante que se expresa como % de la lograda con el Interamericana.
ADN de referencia (100%). www.fagro.edu.uy/microbiologia, Guia de prcticos, 2005.
Tm: punto medio del perfil de
desnaturalizacin trmica de Figura 22- Filtros bacteriolgicos descartables
Se considera que dos cepas cuyos ADN muestran al me-
ADN-ADN o de ADN-ARN
nos un 70% de similitud bajo condiciones de hibridacin Preguntas de repaso
Figura 1- Anlisis de ADN ptimas y menos de un 5% de diferencias en su Tm, son
miembros de la misma especie. Estos criterios van cam- 1) Cmo determinara el efecto de la temperatura en el
biando a medida que las tcnicas se perfeccionan. crecimiento de un microorganismo de inters?
Cuadro 7- Contenido de G+C en organismos 2) Por qu los factores del ambiente no actan solos?
Para organismos no tan relacionados se emplea la hibri- Cite ejemplos de potenciacin de efectos por accin
Animales y plantas superiores 30-50% (promedio 40%)
dacin del ARN (ribosomal o de transferencia, radiactivo) de dos o ms factores.
Microorganismos eucariotas: muy variable con ADN. Se usan los ARN ya que los genes que codifi- 3) Seale algn microorganismo anaerobio y cmo tra-
Algas 38-79 can a estas molculas no han evolucionado tan rpida- bajara con l?
Protozoos 20-60 mente como la mayora de los genes microbianos. 4) Cmo emplea las radiaciones en la prctica del labo-
Mohos mucosos 20-40 Figura 23- Filtros para aire ratorio?
Hongos 30-66
Secuenciacin de los cidos nucleicos: las estructu- 5) Cmo verificara que la cmara de siembra de flujo
Procariotas: 25-80 ras genmicas se comparan en la actualidad mediante la laminar est estril?
Actinomyces 59-73
Bacillus 32-62
secuenciacin del ADN y el ARN. La mayor atencin se Uso de agentes esterilizantes qumicos 6) Cmo desinfecta su mesada?
Escherichia 48-52 ha focalizado en la secuenciacin de fracciones conser- 7) Diferencias entre sustancias que actan como antisp-
Pseudomonas 58-70 vadas del ARN, como la 5S y 16S, aislados de las subuni- 1- Oxido de etileno: el requisito esencial para un agente ticos y como agentes quimioteraputicos. Ejemplos de
Salmonella 50-53 dades 50S y 30S de los ribosomas bacterianos. qumico esterilizante es que sea voltil, as como txico ambos tipos de sustancias
NOTA: La pasteurizacin no es procedimiento de es- mos, sino que pueden conservarlos durante largos pero- En los estudios de evolucin y parentesco microbianos se Cuadro 8- Filogenia bacteriana
terilizacin, pero se emplea mucho en leche, manteca y dos de tiempo. Se usa para conservar microorganismos analizan mucho los ARN ribosomales ya que se encuen-
ciertas bebidas alcohlicas (cerveza, vino) que se some- indefinidamente. Los cultivos se conservan congelados a tran en todos los organismos, su rol es tambin similar y * Es un mtodo de clasificacin que adems plan-
ten a tratamientos de calor controlado que slo matan a -70C o en recipientes con nitrgeno lquido a -196C. La su estructura se modifica muy lentamente debido precisa- tea una hiptesis de evolucin (determina relacio-
ciertos tipos de microorganismos y no a todos. La leche mezcla con 30-50% de glicerol, baja el punto de congela- mente a la importante funcin que desempean. Como nes de parentesco entre las especies)
pasteurizada queda libre de patgenos y de clulas via- miento de los cultivos y evita mortandad. contienen secuencias estables y variables, es posible com- * Compara secuencias de molculas (cronmetros
bles. Resisten los esporulados y los termfilos. Se usa parar tanto microorganismos estrechamente relacionados evolutivos) y establece las diferencias entre ellas
Mycobacterium tuberculosis como microorganismo test a como aquellos ms alejados filogenticamente. * Propiedades de un buen cronmetro evolutivo:
los efectos de evidenciar buena pasteurizacin. Este es Esterilizacin por radiaciones - distribucin universal en toda forma de vida
uno de los microorganismos patgenos ms resistentes La metodologa escapa a los lmites del texto pero incluye celular
en la leche y se destruye en 15 minutos a 60C. A- Ionizantes ruptura del ARN marcado con elementos radioactivos con - igual funcin en todos los organismos
Rayos gama: tienen mucha energa y son emitidos por ayuda de ribonuclasa, en fragmentos pequeos que se - cumplir una funcin celular central (replicacin,
Se usan 63C durante 30 72C durante 15 segun- ciertos istopos radiactivos como es el cobalto (60Co), pero separan y secuencian por su composicin en oligonucle- transcripcin, traduccin)
dos (pasteurizacin rpida), luego la leche se enfra r- son difciles de controlar ya que este istopo emite cons- tidos, que se comparan con ayuda de programas de com- - secuencia altamente conservada para distancias
pidamente. tantemente rayos gama en todas direcciones. Los mate- putacin y se calculan los coeficientes de asociacin. evolutivas grandes
riales se pueden empaquetar y luego esterilizar. - ausencia de transferencia horizontal (poco pro-
Calor seco (para materiales slidos estables al Tambin se fabrica el ADN complementario con ayuda de bable para funciones centrales)
calor) Rayos catdicos (haz de electrones): se usan para este- la transcriptasa inversa. Mediante la reaccin en cadena - cantidad de informacin suficiente (ser suficien-
Horno Pasteur: para materiales de vidrio y otros slidos rilizar material quirrgico, medicamentos y otros materia- de la polimerasa (PCR) se amplifica ese ADN y se se- temente grande)
estables al calor (arena, suelos, rastrojos, etc). Para males. Las radiaciones penetran las envolturas y actan a cuencia. Finalmente se deduce la secuencia del ARNr a
teriales de vidrio de laboratorio se consideran suficientes temperatura ambiente. partir de los resultados.
dos horas a 160-180C. Los materiales (pipetas, vasos, Cuadro 9- Segmentos de ARN en procariotas
cajas de Petri) deben envolverse de a grupos para evitar B- No ionizantes Actualmente la tcnica est muy evolucionada y se han usados en estudios filogenticos
su recontaminacin. Luz ultravioleta: La porcin UV del espectro incluye a secuenciado genomas bacterianos completos como los Nombre Tamao Ubicacin
radiaciones desde 15 a 390nm. Las radiaciones con lon- de Haemophilus influenzae y Micoplasma genitalium. (nucletidos)
Incineracin: Las ansas, puntas de bistur, varillas de vi- gitudes de onda de 265nm son las de mayor efecto bacte- El del primero contiene 1.743 genes en 1.830.137 pares
5S 120 Subunidad mayor del ribosoma
drio, etc. se calientan a la llama de mecheros Bunsen. Se ricida (200-295nm). Se usan en cmaras de siembra, en de bases y es mucho mayor que el genoma de un virus. 16S 1500 Subunidad menor
puede sumergirlos previamente en alcohol. Se coloca pri- cmaras de flujo laminar y para tratar superficies conta- 23S 2900 Subunidad mayor
mero la pieza en el cono amarillo y luego lentamente en el minadas en industrias de alimentos y leche. Posee poca
azul (mayor poder calorfico). Se enfra cerca de la llama capacidad para penetrar la materia por lo que slo los Filogenia bacteriana Secuencias de 16SrARN
antes de su uso. microorganismos que se encuentran en la superficie de Estructura primaria: mosaico de dominios que varan
los objetos son susceptibles de ser destruidos. La taxonoma bacteriana evoluciona muy rpidamente con en trminos del grado de conservacin de la secuencia
Preparacin del material para esterilizar: Un requisito los conocimientos sobre la biologa de las bacterias, la primaria de nucletidos.
indispensable en los laboratorios de Microbiologa es que aplicacin de mtodos moleculares al estudio de las rela- - Dominios de conservacin universal
- Dominios de nivel intermedio de conservacin, con cam-
los materiales y medios de cultivo utilizados estn estri- Esterilizacin por filtracin ciones filogenticas entre grupos bacterianos, ayudados
bios de secuencia, pero con conservacin de la estructu-
les y protegidos adecuadamente para conservar la esteri- con importantes aplicaciones de las tcnicas de la infor-
ra secundaria
lidad durante su almacenamiento. En la esterilizacin por Algunos materiales como los lquidos biolgicos (suero mtica. El cuadro 8 resumen estos avances y el cuadro 9 - Regiones altamente variables
calor hmedo es necesario envolver los objetos en un de animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas y presenta algunos de los segmentos de cidos nucleicos
Estructura secundaria:
material que permita el paso del vapor de agua y que ade- antibiticos) son termolbiles. Cuando no se puede usar empleados en estos estudios y la metodologa aplicada. similar en todos los organismos
ms los proteja posteriormente de la contaminacin am- las radiaciones, se procede a la filtracin a travs de fil- acotada por su funcin
biental (papel de aluminio). tros capaces de retener a los microorganismos, por el Se considera que la similitud en molculas implica simili- sntesis de protenas: funcin ancestral
pequeo tamao de los poros del filtro y en parte por la tud en los genes. Cuanto ms reciente es el ancestro co- Metodologa
Bajas temperaturas adsorcin a las paredes del poro debido a la carga elctri- mn, se encuentra mayor similitud y relaciones entre los transcriptasa reversa
Si bien el metabolismo microbiano est inhibido debajo ca del mismo y de los microorganismos. No se puede te- microorganismos segn la similitud en los genes. Se em- PCR
de 0C, estas temperaturas no matan a los microorganis- ner certeza de retener a los virus. plean tcnicas de hibridacin ADN-ADN y de compara- Secuencias de 16SrARN
cin de genes especficos.
El cuadro 10 resume algunas de las estructuras y/o fun- Cuadro 11- Caracteres que confirman el rbol Cuadro 12- Mtodos de esterilizacin Empleo de distintas procedimientos de
ciones que se emplean en estudios filogenticos dada su universal construido a partir del gen de la fraccin esterilizacin
estabilidad gentica y el cuadro 11 presenta las ventajas 16S de la subunidad menor del rARN Mtodos fsicos
del anlisis de la fraccin 16S del r ARN. Calor Altas temperaturas
Principales caractersticas diferenciales entre calor seco, en hornos, hornos o estufas con aire Calor hmedo en autoclave
Cuadro 10- Propiedades definidas genticamente dominios Bacteria, Archae y Eukarya caliente a 160-180C por dos horas El calor en forma de vapor en saturacin y a presin es el
que han cambiado poco en bacterias Caractersticas de los procariotas actuales ms calor hmedo, en autoclaves, a 115-120C agente ms prctico para esterilizar ya que el vapor a pre-
cercanos al ancestro relacionadas con las con- (1 atmsfera de sobrepresin) por 20 minutos sin proporciona temperaturas superiores a las que se
Estructura de la pared celular: peptidoglicano pre- diciones fisicoqumicas en el origen de la vida Filtracin: lminas de asbesto, filtros bacteriolgi- obtienen a presin normal. Los autoclaves (figura 21) son
sente solamente en bacterias coherentes filo- Caractersticas de los Eukarya ms cercanos a cos (0,22-0,45 ), filtros para aire recipientes hermticamente cerrados donde se regula la
genticamente los procariotas: Giardia y Microspiridia Radiaciones presin y el tiempo. En general su emplean a una presin
Lpidos de membrana (esteres o teres) Secuencias de otras molculas, especialmen- no ionizantes: rayos ultravioleta: lmparas para de vapor de una atmsfera por encima de la atmosfrica,
Fotosntesis oxignica: solo en Cianobacterias te las ligadas a la replicacin, transcripcin y cmaras de siembra lo que corresponde a una temperatura de 120C. Para
Metanognesis: todas estas bacterias pertene- traduccin. ionizantes: rayos gamma, rayos X y rayos cs- volmenes pequeos se usan 20 minutos, si stos son
cen a uno de los 4 linajes dentro de Archaea micos (electrones de alta energa) mayores se alarga el tiempo de exposicin.
Originaron organismos no metanognicos, pero Mtodos qumicos
Entre los Archaea se encuentran los termfilos extremos
el proceso surgi una sola vez Gases, ejemplo: xido de etileno, que pasa de lqui- No se pueden esterilizar en autoclave: sustancias que no se
(incluidos termfilos acidfilos), los sulfatorreductores,
do a vapor en autoclave (poco empleado por su alta disuelven en agua ya que el vapor no las alcanza, ni sustan-
metanognicos y halfitos extremos.
toxicidad) cias termolbiles (muchas protenas, vitaminas, algunos hi-
Arboles filogenticos dratos de carbono), destruidas a altas temperaturas.
Las relaciones filogenticas se representan en diagramas Efectos del ambiente en la esterilizacin Tindalizacin: se usa cuando las sustancias no pueden
ramificados o rboles, que son grficos compuestos por calentarse por encima de 100C. Se calienta el material
ramas que se conectan en nudos (unidades taxonmicas Temperatura: a mayor temperatura, mayor accin letal. (leche, por ejemplo) por media hora durante 3 das con-
como especies o gneros). Puede presentar raz o estar La alta temperatura combinada con alto grado de hume- secutivos Las esporas germinarn en la incubacin y en
desprovista de ella (figura 2). Los sin raz representan sim- dad es uno de los mtodos ms efectivos para destruir la siguiente exposicin al calor las clulas vegetativas re-
plemente relaciones evolutivas pero no brinda datos de microorganismos. El calor hmedo mata a los micoorga- sultantes sern destruidas. Es uno de los mtodos ms
vas evolutivas. nismos porque coagula sus protenas y otras macromol- antiguos de esterilizacin.
culas y es ms rpido y efectivo que el calor seco que los
La figura 2a (Prescott et al., 1999) muestra que el micro- destruye al oxidar a sus constituyentes qumicos. As, las
organismo A est ms relacionado con C que con D y B, esporas de Clostridium botulinum son destruidas entre 4
pero no da datos sobre un ancestro comn ni direcciones a 20 minutos a 120C con calor hmedo, mientras que se
de cambio. En b se muestra un rbol con raz que presen- necesitan alrededor de 2 horas de exposicin al calor seco.
ta un nudo que sirve de antecesor comn y muestra el
desarrollo de las cuatro especies desde esta raz. Tipo de microorganismo: las clulas vegetativas en de-
sarrollo son mucho ms susceptibles que las esporas.
Una pregunta que surgi tempranamente en estudios
filogenticos es por qu existen tantas diferencias entre Ambiente: el calor es ms eficaz en medios cidos que
los organismos procariotes (cuadro12). en alcalino. La consistencia del material, acuoso o visco-
so, influye en la penetracin del agente. Las concentra-
Algunas explicaciones se basan en el hecho de que son ciones altas de hidratos de carbono aumentan, por lo ge-
los organismos ms ancestrales, son muy ubicuistas, se neral, la resistencia trmica de los organismos. La pre-
encuentran en ambientes extremos, son parsitos o sim- sencia de materia orgnica extraa reduce notablemente
biontes de todos los Eukarya y representan la mayor di- Figura 2- Arboles filogenticos. a) sin raz que une la eficacia de los agentes qumicos antimicrobianos por
versidad de seres vivos, biodiversidad que aun no est 4 unidades taxonmicas y b) con raz inactivarlos a por proteger al microorganismo. Figura 21- Autoclave
completamente explorada.
Cuadro 12- Comparacin entre Bacterias, Archaea y Eucarya
Caracterstica Bacteria Archaea Eucarya
Peptidoglicano si no no
Lpidos de la membrana Enlaces ster Enlaces eter Enlaces ster
Ribososmas +ARN iniciador 70S 70S 80S
formilmetionina metionina metionina
Intrones en ARNt no si si
ARN polimerasa Una (4 subunidades) Varias (8-12 subunidades) Tres (12-14 sub-
unidades)
Ribosoma sensible a:
Toxina diftrica No Sensible Sensible
Cloranfenicol Sensible No No
Kanamicina
Estreptomicina
Otras aproximaciones taxonmicas Otra aproximacin ms moderna es la taxonoma polif-

sica que busca el consenso en la integracin de distintos
La taxonoma numrica, es empleada desde 1957 para tipos de caracteres:
efectuar agrupamientos entre vegetales, animales y se ex-
tendi rpidamente al estudio de las bacterias y se carac- * Fenotpicos: - clsicos (igual que en taxonoma
teriza por: clsica)
- marcadores quimiotaxonmicos (perfil
La agrupacin de unidades taxonmicas o taxones por de cidos grasos, de protenas, etc.)
mtodos numricos
Se basa en la determinacin de un gran nmero de * Genotpicos: - clsicos: % G+C, hibridacin
caracteres, todos ellos con el mismo peso relativo: DNA-DNA
flagelos, tipos de colonias, velocidad de crecimiento, - nuevos: perfiles moleculares por res-
pigmentos triccin o por amplificacin
La similitud es funcin de la proporcin de caracteres
comunes * Filogenticos: basados en el reconocimiento del gen
del fragmento 16S del rARN
Ejemplo de aplicacin de la taxonoma numrica en la
comparacin de dos cepas bacterianas por caracteres Marcadores taxoqumicos: La deteccin y cuantificacin
fenotpicos (determinacin de un gran nmero de ellos). de numerosas molculas presentes en los microorganis-
mos se han empleado mucho en estudios taxonmicos y
Se determina el coeficiente de semejanza = a + d filogenticos a pesar de que requieren anlisis qumicos
a+b+c +d con equipamiento especializado, no son universales, pero
resultan muy tiles dentro de algunos grupos y presentan
a: nmero de caracteres positivos en ambas cepas alto grado de discriminacin.
b: nmero de caracteres positivos slo en cepa 1
c: nmero de caracteres positivos slo en cepa 2 Estas molculas estn presentes en distintas estructuras
d: nmero de caracteres negativos en ambas cepas celulares, como son:
* pared: la molcula del peptidoglicano se encuentra yora de los microbilogos emplean rboles derivados de
presente en todas las bacterias excepto los grupos anlisis de secuencias de la fraccin 16S del ARN ribosomal.
Planctomyces y Mycoplamas Pero es necesario tener en cuenta que estos rboles pueden
* membrana externa de la pared procariota: el anlisis de cambiar a medida que se realicen y analicen nuevos datos.
sus lipopolisacridos es muy usado en la actualidad
* membrana citoplasmatica: los cidos grasos, acidos
miclicos presentes en un grupo de bacterias Gram Apndice
positivas (Actinomicetes), los pigmentos carotenoides
de las bacterias fototrofas anoxignicas La ltima edicin del Manual Bergey
* cadena de transporte electronico: citocromos, quinonas Ha habido un progreso considerable en el dominio de la
* sistema fotosintetico: bacterioclorofilas taxonoma bacteriana desde 1984, fecha de la publica-
* citoplasma: poliaminas en bacterias metanognicas y cin del primer volumen del Bergeys Manual of Systema-
Gram negativas, perfil proteico, perfil enzimtico (multi- tic Bacteriology. El nmero de especies descriptas se ha
locus). duplicado y hay ms de 170 gneros nuevos, gracias a la
secuenciacin del ARN ribosomal, del ADN y de las pro- Los microorganismos
En resumen: se han planteado algunas de las dificultades tenas.
encontradas en el desarrollo de un rbol filogentico univer-
sal. Los mejores resultados se obtendrn si se emplean to- La segunda edicin del Manual Bergey (2001) es funda-
en los ciclos biogeoqumicos
dos los datos posibles, tanto moleculares como fenotpicos, mentalmente filogentica en lugar de fnica (figura 3 y
para el anlisis (ejemplo en la taxonoma polifsica). La ma- resumen en cuadro 13) (Prescott et al., 1999).
8 Ecologa microbiana y mtodos de estudio .................................. 121
9 Ciclo biolgico del carbono ........................................................... 143
10 Ciclo biolgico del nitrgeno ......................................................... 169
11 Fijacin biolgica del nitrgeno (FBN) .......................................... 191
12 Ciclos biolgicos del azufre, fsforo, hierro. ................................. 211
Figura 3- Filogenia en Eubacteria: rbol basado en comparaciones del segmento 16S del ARN ribosomal
Bibliografa Cuadro 13- Esquema de la organizacin del Los 5 tomos presentan mucha informacin ecolgica y
Bergey Manual of Systematic Bacteriology (2001) las especies patgenas se encuentras dispersas en los 5
Dommergues, Y. y F. Mangenot, Ecologie Microbienne volmenes, en un ordenamiento filogentico. Un breve
Rango taxonmico y Seccin Gneros representativos
du Sol, 1970, Masson & Cie. Pars. Volumen 1: Archaea, Cianobacterias,
resumen incluye:
Frioni, L. Procesos Microbianos, 1999 Fundacin de la Prottrofos y gneros muy ramificados
Archaea, reino: Crenarchacota Volumen 1: Archaea, cianobacterias, prototrfos verdes
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina.
13 Secciones. Algunas de ellas: y gneros muy ramificados.
Madigan, Martinko y Parker. Brock, Biology of Microor- Metangenos Methanobacteruim
Halobacterias Halobactium, Halococcus
Volumen 2: Proteobacterias
ganisms 2000 Prentice Hall International.
Gneros muy ramificados Volumen 3: Gram positivos con bajo contenido en
Prescott-Harley-Klein, Microbiologa, 1999 Mc Graw-Hill Eubacterias
Seccin XIII: Prochloron y Cianobacterias Prochloron, Oscillatoria, Anabaena,
G+C
Interamericana.
Nostoc Volumen 4: Gram positivos con alto contenido de
www.fagro.edu.uy/microbiologa/protistas superiores Seccin XIV: Chlorobia Chlorobium. G+C
Volumen 5: Plantomicetes, Espiroquetas, Fibrobacter,
Preguntas de repaso Reino: Proteobacteria Rhodospirillum, Rickettsia, Cualo-
bacter, Rhizobium, Bacteroides, y Fusobacterias.
Seccin XV: -Proteobacteria Nitrobacter, Methylobacterium,
Figura 7- Clulas de levaduras gemando (seudomicelio) 1) Seale algunas importantes funciones que llevan Beijerinckia,Hyphomicrobium.
Seccin XVI: -Proteobacteria Neisseria, Burckholderia, Alcalige- Se incluye tambin en este volumen una seccin que ac-
a cabo las algas en los ecosistemas naturales. nes, Nitrosomonas, Thibacillus. tualiza las descripciones y las relaciones filogenticas re-
2) Idem para los protozoos. Seccin XVII: -Proteobacteria Chromatium, Leucothrix, Pseudo-
monas, Azotobacter visadas desde la publicacin del volumen 1.
Rol en el suelo 3) Idem para los hongos. Vibrio, Escherichia, Klebsiella,
No es bien conocido: se los considera como organismos 4) Relaciones de los hongos con la materia orgni- Proteus, Salmonella, Shigella,
Yersinia, Haemophilus.
glucoflicos relacionados a la materia orgnica poco trans- ca. Seccin XVIII: -Proteobacteria Desulfovibrio, Bdellovibrio, Myxoc- Bibliografa
formada, utilizan nitratos y azcares simples u oligosac- 5) Aplicaciones biotecnolgicas de los hongos. cus, Heliobacter.
Seccin XIX: - Proteobacteria Campylobacter, Helicobacter.
ridos, pero son incapaces de degradar glcidos comple- 6) Usos de las levaduras por el hombre. ASM Methods for General and Molecular Bacterio-
Volumen 3: Grampositivas de bajo
jos, tal vez con excepcin de las pectinas. Las levaduras 7) Cmo seran las relaciones evolutivas entre los contenido en G*C logy, 1994.
del gnero Lipomyces parecen una excepcin ya que pue- protistas eucariotas? Seccin XX: Clostridia y afines Clostridium, Eubacterium, Desul-
Madigan, Martinko y Parker. Brock, Biologa de los
fotomaculum,
den desarrollarse a dbiles dosis de nitrgeno, con lo que 8) Cul es el organelo considerado clave en la evo- Veinonella,Haloanaerobium. microorganismos, 2000. Prentice Hall International.
pueden degradar mucho ms carbono orgnico, y pare- lucin? Seccin XXI: Mollicutes Micoplasma, Ureaplasma, Spiro-
Bergeys Manual of Systematic Bacteriology, 2001.
plasma.
cen favorecidas por cidos hmicos. En la naturaleza se 9) Cmo cultivara algas a gran escala? Seccin XXII: Bacillus y Lactobacillus Bacillus, Thermoactinomyces, Prescott, Harley y Klein, Microbiologa, 1999 McGraw-
las encuentra frecuentemente asociadas a bacterias fija- 10) Cmo lo hara con protozoos? Lactobacillus,
Hill. Interamericana.
Streptococus, Enterococcus,
doras de N2 aerobias, sobre las que ejercen efecto esti- 11) Y con hongos? Listeria, Staphylococcus. The prokaryotes, 2nd ed. 1992.
mulante. Volumen 4: Grampositivos con alto
contenido en G+C
Seccin XXIII: Clase Actinobacteria Actinomyces, Micrococcus, Arthro-
bacter, Preguntas de repaso
Corynobacterium, Mycobacterium,
Nocardia,
Actinoplanes, Propionibacterium, 1) Resuma las ventajas de emplear las caractersticas
Streptomyces, Frankia, Bifidobac-
terium, Thermomonospora.
morfolgicas, fisiolgicas/metablicas, ecolgicas,
Volumen 5: Plantomicetos, Planctomyces, Chlamydia genticas y moleculares, en la clasificacin e iden-
Espiroquetas, Fibrobacter, tificacin.
Bacteroides y Fusobacterias
Seccin XXIV: Planctomicetes, 2) Se le presenta el caso de dilucidar si dos aislamientos
Clamidias y afines de bacterias aisladas de ndulos de trbol son de la
Seccin XXV: Espiroquetas Spirochaeta, Borrelia, Leptospira
Seccin XXVI: Fibrobacter Fibrobacter
misma especie. Qu caracteres les determinara?
Seccin XXVII: Bacteroides Bacteroirdes, Porphyromonas, En qu momento usara estudios de su ADN?
Prevotella 3) Conceptos de: taxonoma y filogenia.
Seccin XXVIII: Flavobacterias Flavobacterium
Seccin XXIX: Esfingobacterias, Sphingobacterium, Flexibacter, 4) Qu se entiende por caracteres morfolgicos?
Flexibacterias y Cytophaga Cytophaga Resultan ms tiles en estudios taxonmicos de
Seccin XXX: Fusobacterias Fusobacterium. bacterias o de hongos? Por qu?
5) Seale dos o tres caracteres fisiolgicos o bioqumicos 7) Qu importantes herramientas se emplean en estos del verano y los extremos de temperatura del invierno los poras. La formacin del zigote tiene lugar en un momento
que aplicara en el estudios de bacterias lcticas. estudios de anlisis de cidos nucleicos? afectan. particular de su ciclo de vida, inmediatamente despus
6) Por qu se usan fragmentos de ARN en estudios filo- 8) Por qu el concepto de especie resulta algo flexible de la germinacin de las ascosporas haploides: pares de
genticos? en el caso de bacterias? La materia orgnica flucta con la estacin, es ms abun- stas se fusionan para formar clulas vegetativas diploi-
dante en otoo, el recuento tiende a ser alto en esta po- des. El estado diploide se mantiene en todo perodo de
ca y en primavera y declina en perodos secos del vera- desarrollo vegetativo y la meiosis ocurre inmediatamente
no, aunque algunas localidades pueden tener ocasional- antes de la formacin de las ascosporas.
mente comunidades activas en verano. La accin de los
hongos es baja en regiones con inviernos fros. Otras levaduras ascomicetes forman zigotes por fusin
entre clulas vegetativas inmediatamente antes de la for-
La cubierta vegetal afecta cuali y cuantitativamente a la macin de ascosporas, que al germinar dan lugar a la pro-
ficoflora, algunas especies estn asociadas a ciertas co- genie vegetativa haploide.
munidades vegetales, mientras que otras no parecen afec-
tadas por ellas. Levaduras del gnero Sporobolomyces forman basidios-
poras y en este caso toda la clula vegetativa se transfor-
ma en un basidio. La descarga de basidiosporas es un
Levaduras proceso violento, y las colonias se detectan rpidamente
en cajas incubadas en posicin invertida, la tapa de la
Si bien el trmino levadura no tiene significado taxonmi- caja se cubre con las esporas descargadas formando una
co, es muy empleado para designar a aquellos hongos de imagen como el espejo de la colonia sobre el agar.
estructura unicelular y que se reproducen por fisin bina-
ria o gemacin. Los gneros ms encontrados en el suelo La mayora de las levaduras del suelo se multiplican sola-
son: Cndida, Hansenula, Lipomyces, Pichia, Pullularia, mente por gemacin: Cndida, Cryptococcus, Rhodoto-
Rhodotorula, Saccharomyces, Sporobolomyces, Torula, rula, Torulopsis, Trichosporon. Son poco numerosas en el
Zygosaccharomyces. (figura 7). suelo y para ponerlas en evidencia es necesario emplear
tcnicas de enriquecimiento en medios selectivos
Ciertas cepas tolerantes a altos niveles de azcares, ca- (103-104/g). Son abundantes en suelos con vid, llegan a
paces de realizar activas fermentaciones, se describieron ellos desde la superficie de frutos (especies activamente
en el suelo, pero no parecen ser habitantes normales, sino fermentadoras) y pueden subsistir poco tiempo en el sue-
que llegan a l con frutos y restos vegetales. Generalmente lo, excepto las ascosporas ms resistentes.
se describen poblaciones de 103/g en reas templadas, pero
no es posible correlacionar su nmero con caractersticas Las levaduras tpicas del suelo seran especies distintas
climticas o de suelo, y su rol en las transformaciones de a las epifitas, pero se conoce poco sobre sus fluctuacio-
la materia orgnica o mineral no est definido. nes y su reparticin; se sabe que son abundantes en sue-
los ricos en materia orgnica fresca o poco descompues-
Muchas levaduras realizan fermentacin alcohlica de ta, y tambin en los mantillos forestales. En suelos turbo-
azcares y han sido empleados desde la antigedad sos pueden representar hasta un 50% de la poblacin to-
por el hombre. Pertenecen a las tres clases de hongos tal (entre 20 y 50 cm de profundidad). Se explica esta dis-
superiores: Ascomycetes, Basidiomycetes y Deute- tribucin por la aptitud a desarrollarse en anaerobiosis
romycetes. (cuando fermentan).
Saccharomyces cerevisiae, principal agente de la fermen- El efecto de la vegetacin se manifiesta del punto de vista
tacin alcohlica, es una levadura ascomicete. En cierto cuali y cuantitativo; ciertos especies estimulan preferen-
estado de su desarrollo la gemacin cesa y la clula ve- cialmente a algunos gneros, la rizosfera es tambin un
getativa se transforma en un asco, cada una con 4 ascos- ambiente favorable a su multiplicacin.
predatores: muchos hongos se nutren de protozoos, (mtodo tambin empleado en la lucha contra fitopatge-
otros hongos, nemtodos. La hifa penetra en la presa, nos). Como se observa en el cuadro 4, en condiciones de
disminuyendo la movilidad, el hongo digiere el conteni- sequedad, las especies que pueden esporular, lo hacen y
do celular y asimila las sustancias liberadas. Estos hon- la mayor proporcin de estructuras fngicas las constitu-
gos participan en el equilibrio biolgico del suelo, limi- yen las esporas. La humedad favorece la germinacin de
tando el tamao y actividad de ciertos grupos.
Los hongos participan en la humificacin, degradando

restos de animales y vegetales. Contribuyen a la agrega-
stas y el desarrollo del micelio.
Aireacin: algunas especies pueden desarrollarse a ba-

jos niveles de O2, pero en general un extremo de la hifa
7 Los protistas superiores
cin del suelo; la penetracin de sus hifas permite com- accede al aire. Son aerobios y su dependencia frente a
pactar agregados, unir partculas. este gas explica su mayor concentracin en los primeros
centmetros del suelo y su ausencia en niveles inferiores
Algunos forman asociaciones simbiticas con races de en suelos mal drenados, en barros y estuarios. Las espo- Este grupo comprende a un conjunto muy diverso de or- hongos, sobre todo cenocticos, se desarrollan dando ori-
vegetales (micorrizas) que favorecen la nutricin vegetal. ras pueden soportar largos perodos de inundacin; al dre- ganismos cuyo estudio ha sido abordado por distintas dis- gen a una estructura filamentosa y ramificada, el micelio.
nar el suelo, los hongos retornan rpidamente a su posi- ciplinas: Ficologa, Micologa y Protozoologa. Esta diver-
Ecologa cin de importancia. sificacin se explica por el hecho de que los botnicos El cloroplasto es el organelo clave en las relaciones en-
Los factores ecolgicos ms importantes son: nivel y na- reconocieron a las algas y a los hongos como plantas y tre los tres grupos. Se puede perder irreversiblemente,
turaleza de la materia orgnica, pH, fertilizantes orgni- Cuadro 4 - Cambios poblacionales de hongos en los zologos a los protozoos como animales. La caracte- dando origen a las algas incoloras o leucocitos, que se
cos y minerales, humedad, aereacin, temperatura, pro- suelo de pastura a varios niveles de humedad rstica comn es la presencia de clula eucariota, son por desarrollan con nutrientes minerales simples, a la luz. As,
3
fundidad, estacin del ao y cubierta vegetal. hongos (10 /g) lo tanto microorganismos eucariotas. a partir de algas unicelulares, es fcil distinguir formas
que dependen de procesos fermentativos o respiratorios
El nmero de hongos filamentosos vara directamente con esporas Actualmente se reconocen como microorganismos, orga- para su nutricin, como los protozoos.
el contenido de materia orgnica. El agregado de restos H% total hifas esporas % del total nismos muy simples, que han permanecido a travs de la
vegetales estimula la poblacin fngica y altera la compo- 8,9 99 60 39 79 evolucin adaptndose a las condiciones modernas. Los La separacin es muy marcada entre algas y protozoos en
sicn de la flora; ciertos gneros se hacen dominantes: 18,9 142 113 29 20 representantes ms especializados, como un alga de mar, estructura celular y fisiologa, pero a los evolucionistas les
Penicillum, Trichoderma, Aspergillus, Fasarium, Mucor. 24,2 149 133 16 10 un ciliado, un moho, pueden ser asignados rpidamente resulta ms difcil vincular a los protozoos con los hongos:
Algunas especies mantienen su nmero alto por perodos 27,1 173 153 20 12 a las algas, protozoos y a los hongos, respectivamente. los primeros son uniformemente unicelulares y mviles y
relativamente largos, en medios cidos los hongos son la Sin embargo, existen numerosos protistas superiores in- los hongos predominantemente cenocticos e inmviles, y
microflora dominante cuando se agrega materia orgnica Temperatura: la mayora son mesfilos, pero el desarro- cluidos arbitrariamente en algn grupo, como el caso del su hbitat fundamental es el suelo. No obstante, es nece-
y el nivel de nitrgeno es adecuado. llo termfilo no es infrecuente. En el suelo los termfilos gnero Euglena, ubicado entre las algas y los protozoos. sario recordar que las formas primitivas son acuticas y
son escasos, pero son abundantes cuando la temperatu- poseen esporas flageladas (zoosporas). Para los hongos
El pH es uno de los factores principales que gobiernan su ra asciende por respiraciones (compost). En trminos generales: del suelo, el viento es la principal forma de propagacin.
actividad y composicin. Muchas especies se desarrollan Las algas pueden definirse como organismos con foto-
en amplio rango de pH, en medio de cultivo lo hacen des- Profundidad: en suelos cultivados, los hongos son ms sntesis oxignica y que poseen cloroplastos. Pueden ser
de pH 2-3 hasta 9,0 o superior. Dominan en ambientes abundantes en las capas superiores, pero pueden alcan- unicelulares, filamentosas o cenocticas, algunas poseen Las algas
cidos por falta de competencia de bacterias. Algunas zar gran densidad en los horizontes B de pasturas (ms aspecto de planta debido al extensivo desarrollo multice-
especies son ms sensibles a la acidez que el resto de la de 1 m), siguiendo la concentracin de la materia orgni- lular, pero no se diferencian en tejidos ni rganos; por lo El suelo no es un hbitat ptimo para las algas (figura 1),
comunidad y la acidificacin del suelo puede ser un mto- ca: son cepas adaptadas a bajas concentraciones de O2 general la especializacin celular se da en el caso de la que prefieren los ambientes acuticos. Sin embargo, la
do de lucha, cuando se trata de hongos fitopatgenos. o altas de CO2. El efecto de la profundidad sobre la abun- reproduccin. No deben confundirse con las cianobacte- ficoflora terrestre est integrada por numerosas especies
Otros hongos prefieren la neutralidad o bien ambientes dancia y composicin de la flora fngica est asociado rias, que tambin realizan fotosntesis oxignica, pero que unicelulares y filamentosas, cuya distribucin est ligada
alcalinos. El ptimo como grupo se sita en la vecindad con la concentracin de materia orgnica y la composi- son bacterias y evolucionaron como ellas. a tipos pedolgicos y a la cubierta vegetal. En condicio-
de pH 6. cin de la atmsfera del suelo. nes extremas, estos productores primarios (PP) de
Los protozoos y los hongos son organismos no fotosin- materia orgnica pueden desempear un rol fundamen-
Humedad: si sta es excesiva y la difusin del oxgeno Estacin del ao: los meses clidos de primavera son tticos y la diferencia entre ellos es de carcter estructural; tal. La taxonoma que se emplea es la de los botnicos
est limitada, los hongos son los primeros perjudicados usualmente benficos pero el excesivo calor y sequedad los protozoos son predominantemente unicelulares y los (Talofitas) y se basa en propiedades celulares:
multicelulares, de aspecto de planta. El mayor y ms va- 10 d. Trichomycetes: hongos con talo cenoctico filamento-
Esporangiosporas
naturaleza qumica de la pared, si est presente riado grupo es el de las algas verdes (Chlorophyta), de Oidios Clamidospora Ascospora
so simple o ramificado adherido al tracto digestivo y
Conidias
los materiales orgnicos de reserva los cuales se originaron probablemente las plantas, inclu- Basidiospora
cutcula externa de artrpodos vivos. Reproduccin
ye organismos unicelulares y hasta multicelulares con Aplanosporas asexual por variedad de esporas. Reproduccin sexual
la naturaleza de los pigmentos fotosintticos Zoosporas
aspecto de vegetal. conocida como en los Zygomicetes.
la naturaleza y posicin de los flagelos, en el caso Zoosporangio Esporangio e. Ascomycetes: hongos que forman esporas dentro de
de algas mviles Cuadro 1- Principales grupos de algas estructuras especiales en forma de saco (asca) como
estructuras reproductoras resultado de la cariogamia y meiosis. Las ascas se pre-
Grupo Caractersticas de los pigmentos, pared celular, materiales sentan libres o en fructificacin ms generalmente en
de reserva, n y tipos de flagelos, organizacin celular
El cuadro 1 muestra las divisiones de las algas. el tejido infectado.
Chlorophyta
algas verdes clorofila a y b, celulosa, almidn, 2 flagelos, unicelulares
f. Basidiomycetes: hongos que forman esporas resul-
Las divisiones no son equivalentes en lo relacionado al filamentosas, de gran tamao Esporangiforo Asca tantes de cariogamia y meiosis sobre la superficie de
Oidiforo Basidiospora
rango de estructura de sus integrantes. Por ejemplo, Eugle- Euglenophyta Hifa Conidiforo
estructuras especiales llamadas basidios.
nophyta consiste enteramente en organismos unicelula- euglenoides a y b, sin pared, paramiln y grasas, 1, 2, 3 flagelos por vegetativa g. Deuteromycetes: grupo en el cual se coloca a los hon-
fotosintticos clula, unicelulares 100
res organizados en colonias simples, mientras que las gos que por su estructura general y reproduccin
Phyrrophyta Figura 6- Esporas en hongos asexual se parecen a los Ascomycetes, pero no se ha
Phaeophyta (algas pardas) son enteramente organismos
dinoflagelados a y c y carotenoides especiales, celulosa, almidn y aceites,
2 flagelos diferentes en forma y posicin, la mayora observado el estado sexual. Tambin llamado Fungi
unicelulares, pocas filamentosas Myxomycota imperfecti, incluyen a numerosas levaduras.
Chrysophyta Subdivisiones: Myxomycotina: clases como Myxomyce-
Algas amarillo- a+/-c y carotenoides especiales, 2 mitades superpuestas tes, sin pared celular, cuerpo ameboide (plasmodios de Funcin en el suelo
verdosas, de slice, otras sin pared, aceites, 2 flagelos por clula,
diatomeas unicelulares, filamentosas, cenocticas
vida libre), masa multinuclear de protoplasma sin pare- Los hongos son activos degradadores de sustratos
des definidas. Diploides, fructifican dando oosporas fla- carbonados y su rol esencial es la mineralizacin de fuen-
Phaeophyta
algas pardas, a y c, carotenoides especiales, celulosa y algina, grasas y geladas en la meiosis. Parecidos a los protozoos con tes complejas de carbono, atacando gran volumen de re-
dinoflagelados luminarina, 2 flagelos de distinta longitud, pluricelulares nutricin holozoica. siduos con poco nitrgeno. Predominan as en suelos
Rhodophyta pobres, sobre restos vegetales frescos y sobre todo en
algas rojas a, ficobilinas, celulosa, almidn, s/flagelos, unicelulares, Eumycota plantas maduras donde la C/N puede ser muy alta.
(Plantae) pluricelulares con forma de planta
Hongos verdaderos, con paredes de celulosa o quitina,
estructura tpicamente filamentosa, algunos unicelulares. Segn los sustratos que emplean se distinguen los:
Es muy extensa la laguna biolgica que existe entre las Reproduccin sexual o asexual, esporas sin flagelos. Se hongos glucoflicos, sobre todo al estado de esporas
cianobacterias y las algas. En cambio, las plantas supe- distinguen las clases: con alto poder germinativo y rpido crecimiento. Son
riores presentan relacin con las algas verdes: la disposi- los primeros en atacar sustratos frescos; cuando las frac-
cin especfica de los pigmentos en el cloroplasto, las a. Chytridiomycetes: variedad de talos, clulas mviles ciones fcilmente atacadas se agotan, el hongo fructifi-
paredes celulares con celulosa y la capacidad de almace- con un solo flagelo posterior tipo ltigo, acuticos, ca y permanece en estado de latencia (Mucorales, Pe-
nar almidn. parsitos. nicillum).
b. Oomycetes: hongos con micelio cenoctico bien desa- hongos que degradan la lignina, las fracciones ms
La mayora de las algas multicelulares son inmviles en rrollado, cuyas clulas mviles poseen dos flagelos resistentes, sobre todo Basidiomycetes
estado maduro. Sin embargo en su reproduccin, frecuen- dirigidos en direcciones opuestas: uno de tipo ltigo y patgenos verdaderos; slo una fraccin pequea de
temente se forman esporas mviles, ya sea asexuales el otro cepillo. Reproduccin sexual: se forma una es- los hongos que crecen o sobreviven en el suelo, como
(zoosporas) o gametos, lo que revela su relacin con al- pora de resistencia (oospora) a partir de la osfera Fusarium, Phytium, Ophiobulus, Rhizoctonia, Sclero-
gn grupo particular de flagelados unicelulares. fecundada, con pared celulsica. Parsitos y saprfi- tium, Verticillum.
tos acuticos. Hongos patgenos del hombre pueden llegar al suelo,
Varias divisiones de algas poseen miembros unicelulares c. Zygomycetes: hongos saprfitos o parsitos con mi- sobre todo en la zona tropical y la infeccin se genera-
inmviles o que se desplazan por mecanismos diferentes celio cenoctico o septado bien desarrollado. Repro- liza fcilmente en la poblacin. Una tcnica comn para
a los flagelos. Los desmidios, miembros de las Chloro- duccin sexual por fusin de gametangios generalmen- detectarlos y aislarlos es colocar una hebra de cabello
Figura 1- Algas unicelulares y filamentosas phyta, presentan clulas grandes, aplanadas, con simetra te iguales que forma una espora de resistencia (zigos- estril en el suelo, el hongo lo coloniza, pues emplea la
pora). No producen clulas mviles. queratina.
Se distinguen las esporangiosporas, originadas dentro Por su compatibilidad en: bilateral. Las diatomeas (Chrysophyta) poseen paredes sinttica; si bien pueden obtener energa de su activi-
de estructuras especiales, el esporangio, como en Rhizo- homotlico, cada talo es sexualmente autofrtil y se orgnicas impregnadas con slice, de arquitectura muy com- dad fotosinttica, no pueden obtener el poder reductor
pus, Mucor y los conidios que se originan en extremos puede reproducir por s mismo pleja, con dos valvas superpuestas como las de una caja para convertir el CO2 en materiales celulares.
de las hifas (externas) o bien lateralmente. heterotlicos, que requieren la ayuda de otro talo com- de Petri. La divisin es longitudinal, cada clula hija retiene osmotrfas, muchas algas que realizan fotosntesis nor-
patible. la mitad de la vieja pared y sintetiza una nueva mitad. mal en la luz, pueden crecer en la oscuridad a expensas
Los conidios pueden encontrarse en estructuras especia- de variedad de compuestos orgnicos, derivando su me-
les (acrvula, esporodoquio) que los protegen dentro de La reproduccin sexual puede ser: A pesar de carecer de flagelos, estos organismos pueden tabolismo hacia la respiracin. Las algas completamente
tejidos vegetales (se dan en general en hongos patge- heterogmica, con gametos morfolgicamente diferen- moverse lentamente sobre sustratos slidos. El mecanis- encerradas en pared celular dependen exclusivamente de
nos). tes y homotlicos (autofrtil) mo en los desmidios no se conoce y en las diatomeas la sustratos orgnicos disueltos en la oscuridad
isogmica (gametos iguales) y heterotlica (ubicados locomocin se realiza por modificacin del movimiento fagotrfas, aquellas clulas desprovistas de pared o
Reproduccin sexual en talos distintos). ameboide. Poseen un orificio en la pared, el rafe, a travs que no estn completamente encerradas en ella, pue-
Comprende las tres etapas fundamentales: del cual el protoplasma se adhiere al sustrato, empujando den predar bacterias u otros microorganismos.
plasmogamia (unin de dos protoplastos y los ncleos Taxonoma a la clula. Grandes depsitos de paredes de diatomeas
haploides) Los criterios empleados en la clasificacin de este grupo se han acumulado y se usan como abrasivos y en filtros. No es correcto, entonces, describir a las algas como gru-
cariogamia (formacin de un zigote diploide) heterogneo incluyen caracteres morfolgicos casi exclu- po exclusivamente fotosinttico, ya que muchos de sus
divisin meitica (reduccin cromosmica). sivamente: Distribucin de las algas miembros unicelulares poseen las caractersticas nutricio-
naturaleza del micelio (tabicado o no) La mayora son organismos acuticos, en donde habitan nales de los protozoos y de los hongos. Los leucofitos
Los hongos se dividen por su sexualidad en: tipo de reproduccin sexual en vida libre o asociadas simbiticamente con invertebra- que se forman por la prdida irreversible del cloroplasto,
hermafroditas (rganos + y - en el mismo talo) naturaleza de las esporas asexuadas (internas en dos, como esponjas, corales, larvas, en cuyas clulas cre- son organismos no pigmentados derivados de grupos fla-
dioicos (en talos distintos) gametangio) y externas (conidios) (cuadro 3 y cen. En el suelo, su nmero es inferior al de las bacterias, gelados, de diatomeas y de formas inmviles de las algas
indiferenciados (no se diferencian los sexos). figura 6). actinomicetes u hongos. Es precisamente su bajo nme- verdes unicelulares. No pueden fotosintetizar.
ro, su nutricin autotrfica y su dependencia frente a la
luz, humedad y nutrientes minerales, que hicieron pensar En el laboratorio, esta transicin pudo ser demostrada
Cuadro 3- Taxonoma de los hongos
a los microbilogos que su rol en los ecosistemas agrco- experimentalmente, en ciertas cepas de Euglena, al ser
Divisin Subdivisin Clase las no era muy significativo. tratadas con estreptomicina o cuando son expuestas a
pequeas dosis de luz ultravioleta o a altas temperaturas.
Mixomycota (hongos sin pared) Mixomycotina Acrasiomycetes (mohos muscilaginosos
unicelulares) Su desarrollo es visible a simple vista en la superficie de La clasificacin de los leucofitos es un problema difcil:
Plasmodiophoromycetes (parsitos) suelos vrgenes o cultivados y su aislamiento es sencillo por su estructura pueden ser asignados a una divisin
Eumycota (hongos con pared) Mastigomycotina (esporas Chrytridiomycetes en medio lquido, con sales minerales, a la luz. El enri- particular de algas, como representantes no fotosintti-
asexuales flageladas) Oomycetes (antiguos Phycomycetes) quecimiento se puede seguir por el color de los pigmen- cos. Pero como son eucariotas unicelulares no fotosintti-
Zygomycotina (miceliales, Zygomycetes, por lo general saprofitas tos. Los recuentos en suelos superficiales pueden variar cos, pueden ser mirados como protozoos, y son incluidos
cenocticos, esporas asexuales Trichomycetes (parsitos en desde algunos miles a millones/gramo (biomasa entre 20- entre ellos por los zologos. Constituyen un grupo de tran-
en esporangio) intestino de artrpodos) 40 kg/ha). Valores ms altos se encuentran por perodos sicin entre las algas y los protozoos.
Ascomycotina (micelio septado Hemiascomycetes, levaduras o mice- breves, luego de una lluvia.
o levaduras, esporas asexuales liales, asca no encerrada en ascocarpo Ecologa
no se forman en esporangio, Euascomycetes: miceliales, ascas en
esporas sexuales en ascas ascocarpo Nutricin Los principales factores que inciden en la distribucin de
Hemiascomycetidae Basidiomycotina: micelio septado Teliomycetes, sin basidiocarpo: fototrfas, la fotosntesis es el mecanismo principal de las algas en el suelo son: la humedad, los nutrientes
o levaduras royas y carbones obtencin de energa. Algunas especies requieren vita- minerales, el CO2 y la luz. El CO2 y los elementos nutriti-
Esporas asexuales como Hymenomycetes: basidiocarpo, minas y en la naturaleza son las bacterias las que pro- vos no son limitantes. La luz determina la distribucin de
Ascomycotina. seta basidio descubierto
Gasteromycetes: basidiocarpos que
veen estos factores de crecimiento. Muchas algas tie- los organismos fototrofos: las algas son ms numerosas
encierran basidios nen un tipo mixto de metabolismo, pudiendo emplear en los 5-10 cm del perfil y disminuyen marcadamente con
Deuteromycotina: micelio septado Hyphomycetes antiguos fuentes orgnicas. Aun en la luz, ciertas algas no pue- la profundidad. Se pueden encontrar en horizontes ms
o levaduras, esporas asexuales Deuteromycetes den emplear CO2 como su principal fuente de carbono profundos (103/g) llevadas por las prcticas culturales
como Ascomycotina y dependen de acetato u otras formas orgnicas. Este (arrastre mecnico), por la fauna o el agua (nutricin he-
No hay reproduccin sexual
o se desconoce hecho es causado por un defecto en la maquinaria foto- tertrofa o permanecen en estado latente).
En ambientes con insolacin muy intensa, las algas tien- cianobacteria, incluso fijadora de nitrgeno, con lo cual Las fuentes de carbono son variables, emplean de prefe- pleo de distintas tcnicas varan mucho. Por recuentos en
den a concentrarse algunos centmetros debajo de la su- estos lquenes pueden ser fijadores de N2. rencia azcares, almidn y algunos celulosa y lignina. Con medio slido se tienen datos desde 20.000 hasta 106 o
perficie. All se protegen debajo de minerales translcidos Meteorizacin de rocas: una fina capa de clulas de respecto al nitrgeno, asimilan formas minerales y/o or- ms propgulos (hifas, esporas, fragmentos de hifas ca-
como cuarzo o dolomita, de las radiaciones solares y de algas recubre las rocas, y a la muerte de las algas, esta gnicas (las ltimas de preferencia). Almacenan glucge- paces de dar una colonia), por gramo de suelo seco.
la desecacin (sobre todo la ficoflora de los desiertos) y materia orgnica posibilita el desarrollo de bacterias y no y aceite. Especies de Penicillum (moho verde) y de
contra el fro intenso en las regiones polares. Las radia- ocasionalmente de hongos (los colonizadores secun- Rhizopus (moho negro) se desarrollan sobre cualquier tipo La biomasa puede ser mayor que la de las bacterias y su
ciones ultravioleta no son perjudiciales, de modo que son darios). La meteorizacin parece ser favorecida por la de sustrato hmedo (aun en el refrigerador a 5C); otros micelio se puede extender 10-100 m/g de suelo superfi-
empleadas en su aislamiento, eliminando los contaminan- formacin de bicarbonatos (del CO2 de la respiracin) o utilizan sustratos ms especficos, encontrndose en el cial. Valores hasta de 500 a 1000 m (500-5.000 kg/ha)
tes bacterianos. por metabolitos de los microorganismos hetertrofos y extremo de la escala a los parsitos obligados, que re- han sido citados, aunque muchas de las hifas pueden estar
de los lquenes. quieren determinada variedad vegetal. vacas (no viables). Los colorantes como el acetato de
La humedad: las algas verdes son muy exigentes en agua Fijacin del suelo: en suelos minerales sin estructura, fluorescena, que fluorescen por accin enzimtica, son
y a medida que aumenta la aridez, el nmero de especies las costras de lquenes y algas, fijan el suelo, retardan- Habitat muy empleados para evaluar los metros de micelio fngi-
y su densidad disminuyen. Otras algas, por el contrario, do la erosin y modificando el rgimen hdrico. Se redu- Los hongos estn muy distribuidos en todos los ecosiste- co viable/g de suelo, as como esporas viables para ser
soportan mal la inundacin. El ptimo se sita, como para ce la evaporacin y los musclagos contribuyen a au- mas, desde 0 a 25C, aunque pocos a 0C y con un mxi- empleadas en inoculantes.
otros grupos de microorganismos, alrededor del 40-60% mentar la estabilidad estructural. mo de 50C. Para los hongos del suelo el ptimo se ubica
de la capacidad de campo. En la superficie de suelos agr- Liberacin de oxgeno: por su fotosntesis oxignica entre 20-30C, en pH muy variados: el ptimo para el gru-
colas de la zona templada, la disponibilidad de agua para aumentan la aireacin en suelos inundados de arroza- po estara en la vecindad de pH 6 y dominan en ambien- Reproduccin
las algas suele ser limitante. Las clulas se recubren de les y en suelos pesados. Por el consumo del CO2 y la tes cidos, por falta de competencia por parte de las bac-
capa muscilaginosa muy higroscpica que puede retener liberacin de sustancias alcalinas, tienden a elevar el terias. La luz es esencial para la esporulacin de muchas Reproduccin asexual
10-15 veces su volumen en agua, la que es perdida muy pH combatiendo la acidez. Liberan vitaminas, auxinas, especies y para la dispersin de esporas fototrficas. Las Llamada tambin somtica se realiza por fragmentacin
lentamente. que favorecen a los cultivos as como sustancias inhibi- esporas permiten una amplia distribucin. Como grupo son del talo, por fisin binaria y gemacin (caso de las levadu-
doras sobre parte de la microflora del suelo. aerobios pero algunos soportan la anaerobiosis (los pa- ras) y por produccin de esporas. No incluye unin de
El efecto de la estacin del ao es marcado, en primave- Toxicidad: son conocidas las floraciones de algas txi- tgenos). ncleos y es la forma ms frecuente de reproduccin.
ra su nmero es bajo; el congelamiento las perjudica y en cas que matan peces y contaminan aguas. Se debe a El nmero, disposicin, forma, color y origen de las espo-
invierno la poblacin declina. un desarrollo explosivo de dinoflagelados que liberan Su rol es muy variado, desde la degradacin de molculas ras son caractersticos de las especies.
El efecto del pH vara con el tipo de suelo; en general las una poderosa neurotoxina, llamada saxitoxina. Los orgnicas muy complejas hasta la formacin de humus.
algas son poco sensibles a las variaciones de pH. Los moluscos que se alimentan de estos dinoflagelados no Por el lugar en donde se originan, se distinguen las:
valores prximos a la neutralidad o ligeramente alcalinos, pueden ingerirse. Mtodos de estudio: se emplean numerosas tcnicas,
son ms favorables. En suelos cidos dominan las clorof- pero ninguna puede englobar a todas las especies pre- 1. Talosporas , se forman en filamentos miceliales, no
ceas, que se pueden encontrar a pH 5,0 y aun 4,0 (el pti- sentes ni a su biomasa. El ms empleado es el recuento son caducas:
mo para su desarrollo se sita entre pH 6,8 y 8,5), aunque Los protozoarios en caja a partir de suspensiones-diluciones de suelo. Aci- artrosporas: se producen por desarticulacin de la
se encuentran en pH 9,3-10 y toleran hasta pH 13. dificando el medio con cidos orgnicos dbiles (pH 4,2) lmina media, los tabiques luego se gelifican simul-
Constituyen un grupo muy heterogneo de eucariotas, uni- o con el uso de agentes bacteriostticos (penicilina, novo- tneamente y los distintos filamentos se separan y
Antagonismos: muchas especies son susceptibles al ata- celulares y mviles, cuyo tamao vara entre algunas mi- biocina, rosa de Bengala, estreptomicina) se elimina la se redondean.
que por bacterias, hongos, estreptomices, que con enzi- cras hasta algunos centmetros (figura 2) (Madigan competencia de las bacterias. El problema radica en que blastosporas: se forman por brotacin de elemen-
mas especficas destruyen la pared celular. Otros antago- et al, 2000) y (figura 3). Los habitantes del suelo son de el hongo puede reproducirse a partir de fragmentos de tos preexistentes, se pueden separar y luego bro-
nismos ocurren con nemtodos, termites. talla ms pequea y aplanados, ya que deben moverse en micelio, y de esporas (asexuadas o sexuadas). Una sola tar; la separacin se efecta por constriccin del ist-
el film de agua que llena los poros. Presentan semejanzas pieza de micelio puede disgregarse en la agitacin en inmo y no del tabique (micelio levaduriforme).
Funciones con varias divisiones de algas de las cuales derivan. Los numerables porciones, cada una de las cuales dar ori- dictiosporas: son esporas pluricelulares, de ms
Aporte de materia orgnica, ya que son productores varios tipos de leucofitos proveen de pruebas sobre el origen a una colonia. Resulta as muy fcil aislar especies de 50 clulas, con apariencia reticulada.
primarios muy importantes en suelos desnudos, po- gen evolucionario de muchos grupos de protozoos. La pr- de Penicillum o Aspergillus que esporulan profusamente.
bres, erosionados, quemados, salinos o desrticos. Los dida de la capacidad fotosinttica reduce abruptamente la Los recuentos en caja deben ser tomados con precau- 2. Fialosporas, se originan en fructificaciones asexua-
lquenes (asociacin alga-hongo) constituyen el esta- potenciabilidad nutricional y es seguida de una serie de even- cin. La microscopa fluorescente ayuda mucho en la das bien definidas, son caducas y externas (terminales
do inicial de vegetacin sobre rocas o suelos minera- tos a nivel celular que posibilitan al organismo el desarrollo visualizacin en el suelo. Los datos obtenidos por el em- o laterales).
les. El componente fotosinttico puede ser tambin una de nuevos mecanismos de nutricin osmotrfico o fagotr-
fico. Estos cambios pueden impedir el reconocimiento del Los protozoarios de la clase Mastigophora poseen 1 a 4
origen algal de estos microorganismos, los que se ubican flagelos. En el suelo poseen pequea talla (5-20 micras) y
entonces, entre los protozoos. son los ms abundantes (3.000 a 200.000/g de suelo) y
los gneros ms comunes son: Allation, Bodo, Cercobo-
El ciclo de vida de estos organismos consiste en una do, Cercomonas, Entosiphon, Heteromita, Monas y los con
fase activa y una fase de reposo o cstica, en la que el clorofila Euglena y Chlamydomonas.
organismo segrega una espesa capa protectora, pudien-
do resistir por muchos aos en ambientes adversos. La Los Sarcodina o Rhizopoda emiten seudpodos que faci-
reproduccin es usualmente por fisin longitudinal o trans- litan su desplazamiento y por lo tanto la clula cambia
versal. Unas pocas especies poseen reproduccin sexual. constantemente de forma. Algunos poseen una envoltura
La clasificacin de los protozoarios ha variado mucho en rgida pero con orificio para emisin de los seudpodos.
los ltimos aos y en los esquemas moleculares de clasi- Los gneros ms comunes en el suelo son: Amaeba, Bio-
ficacin reciente no existen los protozoos como taxn in- myxa, Englypha, Hartmanella, Lecytium, Naegleria, Trine-
Figura 5 - Formacin de micelio a partir de una espora dependiente y se encuentran eucariotas anlogos a pro- ma, Nuclearia.
tozoos en todos los niveles evolutivos.
Las oosporas de Phytium permanecen en el suelo ms
Los ciliados se mueven por numerosos apndices (cilias).
de 16 meses y se producen slo en contadas ocasiones
Las especies terrestres son tambin menores que las
por los hongos. Hay evidencia de que gran nmero de
acuticas (10 a 80 micras) y los gneros ms comunes
hongos surgen de esporas durmientes (ascosporas), que
son: Balantiophorus, Colpidium, Colpoda, Enchelys, Hal-
son activadas por el calor. Ciertas sustancias previenen
teria, Pleurotricha, Tetrahymena, Vorticella.
la germinacin de conidios y otros tipos de esporas, fen-
meno conocido como fungiostasis.
Nutricin
Figura 2- Protozoo ciliado Se distinguen tres formas de nutricin:
En general, la espora germina cuando se libera algn tipo
de materia orgnica en su vecindad. La fungiostasis de-
pende tambin de la densidad de esporas. Entre los agen- Cuadro 2- Caractersticas de los principales grupos del subreino Protozoa
tes antifngicos, se cita el amonio en suelos alcalinos, los
Figura 4- Boletus appendiculatus (arriba) y Pleurotus sp. taninos del mantillo, el aluminio. Por este fenmeno la es-
Grupo taxonmico caractersticas ejemplos
(abajo) pora queda protegida, pues si germina en condiciones
desfavorables para su nutricin y desarrollo, es fcilmen-
Mastigophora (flagelados) Uno o ms flagelos, divisin por fisin binaria Trypanosoma, Giarda,
te atacada por otros microorganismos.
Resumiendo: las estructuras de resistencia incluyen a los longitudinal, reproduccin sexual en algunos. Trichomonas
conidios (esporas asexuadas externas), clamidosporas y Formas ameboides
Muchos hongos se protegen de la lisis provocada por en-
esclerocios, las oosporas (sexuadas), los esporangios y zimas liberadas por otros microorganismos, mediante la Euglenoides Flagelados fototrficos Euglena
esporangiosporas, ascosporas y los rizomorfos. Los co- produccin de pigmentos oscuros, del tipo de las melani- (grupo tambin considerado
nidios de muchas especies son de vida breve y pierden nas y con polisacridos formados por azcares resisten- con las algas)
viabilidad rpidamente cuando se forman o penetran en tes a la degradacin. Sarcodina (amebas) Seudpodos, son frecuentes los caparazones, Amoeba, Entamoeba
el suelo (caso de los patgenos) resultando difcil reais-
flagelos, en la etapa reproductiva
larlos luego de algunas semanas. Otras especies poseen Fisiologa y nutricin
conidios muy resistentes,pudiendo permanecer en suelo Se reconocen tres categoras de hongos por su relacin Ciliophora (ciliados) Cilias simples o compuestas. Dos tipos de Tetrahymena, Paramecium,
seco mucho tiempo y germinar cuando este se rehume- con la materia orgnica: ncleos, vacuola contrctil, fisin binaria trans- Vorticella, Didinium
dece. Algunas especies requieren para germinar sustan- versal, sexualidad por conjugacin. De vida
cias orgnicas o excreciones radicales.Este hecho tiene saprfitos, utilizan los sustratos orgnicos inanimados libre, muchos comensales, algunos parsitos
importancia en los hongos patgenos cuyas clamidospo- parsitos atacan organismos vivos
ras pueden sobrevivir hasta pocas favorables (Fusarium, simbiticos, asociados con otros organismos: alga o Apicomplexa (parsitos) Esporas en su ciclo sexual, con cistos, Plasmodium, Toxoplasma
Phytosphtora). Los esclerocios tienen un rol similar. vegetal, para su nutricin sin cilias, se llaman a menudo esporozoos
a. Fotosintticos: son los Phytomastigophora, con pig- pluricelularidad, e involucra la diferenciacin de clulas Rol en el suelo caso existe continuidad citoplasmtica por poros de co-
mentos clorofilianos difusos o localizados. en el desarrollo del organismo (animales o vegetales). Limitacin en el nmero de bacterias, se han reali- municacin.
Su importancia prctica es muy limitada, el gnero ms zado experiencias con modelos simplificados: suelo es-
extendido es Euglena y su aislamiento se realiza en los Los protozoos del rumen cumplen un rol muy importante tril con protozoos y con bacterias y protozoos conjun- Por su funcin se distinguen las hifas:
medios para algas y en muchas clasificaciones se reco- contribuyendo a la degradacin de sustancias orgnicas, tamente. Se demostr que la densidad bacteriana dis-
nocen como tales. como la celulosa, liberando cidos grasos voltiles que minuye en presencia de protozoos. Se pens que este vegetativas, que penetran a los sustratos para absor-
b. Saprofitos: su nutricin depende de la provisin de son absorbidos por el animal (captulo 18). hecho traera aparejada una disminucin en la fertilidad ber los nutrientes
sustancias orgnicas solubles (osmotrficos); incluyen del suelo, por disminucin de la actividad biolgica. Esta frtiles, que dan origen a estructuras de fructificacin.
a los flagelados y a algunos ciliados. Se pueden desa- Influencias del ambiente idea no es mantenida actualmente, sino que ms bien Los hongos primitivos tienen semejanzas con los proto-
rrollar en medios sintticos con peptona, glcidos, ami- Uno de los factores que limita el desarrollo de este grupo se piensa que la destruccin de una parte de la pobla- zoos flagelados, que luego han evolucionado a estruc-
nocidos o con extracto de suelo. en el suelo es la distribucin discontinua de la materia cin bacteriana estimula la actividad metablica de los turas biolgicas distintas, adaptadas al suelo. Su desa-
c. Holozoicos: representan sobre todo a los ciliados; se orgnica y de la microflora (nutrientes para los protozo- sobrevivientes, que compensaran la prdida del resto rrollo est slo limitado por la disponibilidad de nutrien-
nutren por ingestin de partculas slidas (fagotrficos) os) en la solucin del suelo dentro de los poros. El pe- de la poblacin. tes, pudiendo llegar en los Basidiomycetes hasta 10m
y otros microorganismos: bacterias, levaduras, algas, queo tamao de muchos puede reflejar esta deficiencia Una de las hiptesis ms aceptada postula un rejuve- de radio.
e incluso algunos protozoos. Es una de las formas pre- nutricional. necimiento celular, con sntesis de sustancias estimu-
dominantes de nutricin en el suelo. Muchas clulas lantes para las poblaciones de bacterias que resisten a Estructuras de resistencia: en condiciones desfavora-
bacterianas deben ingerirse en cada divisin celular. La mayora de los protozoos son cosmopolitas, distribui- la predacin. bles para la subsistencia o cuando los parsitos rodean al
Sarcodina requiere cerca de 40.000 clulas bacteria- dos en todos los suelos del mundo, y es difcil correlacio- organismo, aparecen estas estructuras especializadas:
nas/divisin. La bacteria debe multiplicarse rpidamente nar su presencia con reas geogrficas particulares. Se Diseminacin de esporas fngicas, ya que muchos
para no ser eliminada por los predatores. los encuentra en suelos de zonas rticas, templadas o son incapaces de digerirlas y las transportan en su su- esclerocios: bien delimitados, de corteza oscura, se-
tropicales. En suelos agrcolas el mximo nmero se en- perficie. gn el grado de cutinizacin, conjunto apretado de hi-
El significado en el suelo del modo de vida saprofita es contr a los 10-12 cm y pocas especies llegan al subsue- fas con materiales de reserva. En condiciones favora-
desconocido; los protozoos no se destacan en las translo. Los nutrientes que favorecen el desarrollo de las bac- Su rol efectivo en el suelo es entonces difcil de determi- bles, entran en germinacin dando origen a fructifica-
formaciones de la materia orgnica. Se considera que el terias, constituyen los factores ms importantes en la dis- nar: tienen poco efecto en las etapas de mineralizacin e ciones de menor tamao: son los bulbillos (menos de 1
modo dominante de nutricin es la fagocitosis, sobretodo tribucin de los protozoos. Su biomasa en bosques y pas- inmovilizacin de la materia orgnica. Muchas especies mm) y menos cutinizados.
entre los ciliados que representan la mxima diferencia- turas de la regin fra puede llegar a 20 g/m2, pero en son parsitas del hombre, aunque no encuentran en el
cin a nivel celular, y al mismo tiempo es un grupo evolu- zona templada no supera a los 5 g/m2. La humedad es suelo ambiente apropiado. clamidosporas: elementos asexuados, de paredes
cionario terminal. En efecto, el desarrollo de un sistema uno de los principales factores ecolgicos, esencial para gruesas, con materiales de reserva. Pueden presentar-
biolgico ms complejo ocurre con el establecimiento de su proliferacin, su fisiologa y desplazamientos, pero pue- se intercalares, laterales o terminales, de alto conteni-
den resistir la desecacin enquistndose. Los hongos do lipdico, de forma y tamao diverso (esporas asexua-
das).
cilias citofaringe En general, su metabolismo es aerobio, pero hay espe- Comprenden un grupo muy amplio de protistas superio-
fibras microncleo cies que soportan concentraciones bajas de oxgeno y aun res, incluidos por los botnicos entre las Talofitas (vegeta- Estructuras de fijacin: estolones y apresorios, el esto-
contrctiles macronleo
vacuolas la anaerobiosis (por ejemplo, los patgenos del hombre y les, sin clorofila) (figura 4). ln es una hifa area que se extiende a gran distancia,
vacuola alimenticias animales y los del rumen). luego por su peso se curva, encuentra un soporte con el
contrctil pelcula
Los principales grupos se reconocen como: mohos, leva- cual se pone en contacto y se convierte en rgano de fija-
citoprocto
El pH del suelo afecta poco el espectro de especies, los duras y setas. Son todos hetertrofos y representan la cin ms complicado, el apresorio, unido firmemente al
hay en ambientes cidos y tambin en extremos alcali- ltima etapa en la escala de evolucin de los protistas; su sustrato.
nos. hbitat ms frecuente es el suelo, aunque los hongos ms
Tetrahymena primitivos son acuticos. Haustorios: los hongos parsitos y simbiticos que pe-
Existe evidencia de predacin por parte de hongos fila- netran en las clulas vegetales aumentan la superficie
mentosos sobre amebas y de otros organismos que pue- El talo est constituido por el micelio (figura 5) agregado de absorcin, por ramificacin de las hifas. Su rol es
Sarcodina Trypanosoma den parasitar a los protozoos, pero su rol en la naturale- de hifas filiformes con tubos de paredes delgadas que muy importante en las micorrizas, asociaciones sim-
za, contribuyendo a la declinacin de este grupo, no est envuelven a la masa citoplasmtica continua (micelio ce- biticas entre races y hongos. Tambin se los llama
Figura 3- Representantes de tres clases de protozoos claramente establecido. noctico) y con tabiques (micelio tabicado) aunque en este arbsculos (captulo 16).
a. Fotosintticos: son los Phytomastigophora, con pig- pluricelularidad, e involucra la diferenciacin de clulas Rol en el suelo caso existe continuidad citoplasmtica por poros de co-
mentos clorofilianos difusos o localizados. en el desarrollo del organismo (animales o vegetales). Limitacin en el nmero de bacterias, se han reali- municacin.
Su importancia prctica es muy limitada, el gnero ms zado experiencias con modelos simplificados: suelo es-
extendido es Euglena y su aislamiento se realiza en los Los protozoos del rumen cumplen un rol muy importante tril con protozoos y con bacterias y protozoos conjun- Por su funcin se distinguen las hifas:
medios para algas y en muchas clasificaciones se reco- contribuyendo a la degradacin de sustancias orgnicas, tamente. Se demostr que la densidad bacteriana dis-
nocen como tales. como la celulosa, liberando cidos grasos voltiles que minuye en presencia de protozoos. Se pens que este vegetativas, que penetran a los sustratos para absor-
b. Saprofitos: su nutricin depende de la provisin de son absorbidos por el animal (captulo 18). hecho traera aparejada una disminucin en la fertilidad ber los nutrientes
sustancias orgnicas solubles (osmotrficos); incluyen del suelo, por disminucin de la actividad biolgica. Esta frtiles, que dan origen a estructuras de fructificacin.
a los flagelados y a algunos ciliados. Se pueden desa- Influencias del ambiente idea no es mantenida actualmente, sino que ms bien Los hongos primitivos tienen semejanzas con los proto-
rrollar en medios sintticos con peptona, glcidos, ami- Uno de los factores que limita el desarrollo de este grupo se piensa que la destruccin de una parte de la pobla- zoos flagelados, que luego han evolucionado a estruc-
nocidos o con extracto de suelo. en el suelo es la distribucin discontinua de la materia cin bacteriana estimula la actividad metablica de los turas biolgicas distintas, adaptadas al suelo. Su desa-
c. Holozoicos: representan sobre todo a los ciliados; se orgnica y de la microflora (nutrientes para los protozo- sobrevivientes, que compensaran la prdida del resto rrollo est slo limitado por la disponibilidad de nutrien-
nutren por ingestin de partculas slidas (fagotrficos) os) en la solucin del suelo dentro de los poros. El pe- de la poblacin. tes, pudiendo llegar en los Basidiomycetes hasta 10m
y otros microorganismos: bacterias, levaduras, algas, queo tamao de muchos puede reflejar esta deficiencia Una de las hiptesis ms aceptada postula un rejuve- de radio.
e incluso algunos protozoos. Es una de las formas pre- nutricional. necimiento celular, con sntesis de sustancias estimu-
dominantes de nutricin en el suelo. Muchas clulas lantes para las poblaciones de bacterias que resisten a Estructuras de resistencia: en condiciones desfavora-
bacterianas deben ingerirse en cada divisin celular. La mayora de los protozoos son cosmopolitas, distribui- la predacin. bles para la subsistencia o cuando los parsitos rodean al
Sarcodina requiere cerca de 40.000 clulas bacteria- dos en todos los suelos del mundo, y es difcil correlacio- organismo, aparecen estas estructuras especializadas:
nas/divisin. La bacteria debe multiplicarse rpidamente nar su presencia con reas geogrficas particulares. Se Diseminacin de esporas fngicas, ya que muchos
para no ser eliminada por los predatores. los encuentra en suelos de zonas rticas, templadas o son incapaces de digerirlas y las transportan en su su- esclerocios: bien delimitados, de corteza oscura, se-
tropicales. En suelos agrcolas el mximo nmero se en- perficie. gn el grado de cutinizacin, conjunto apretado de hi-
El significado en el suelo del modo de vida saprofita es contr a los 10-12 cm y pocas especies llegan al subsue- fas con materiales de reserva. En condiciones favora-
desconocido; los protozoos no se destacan en las translo. Los nutrientes que favorecen el desarrollo de las bac- Su rol efectivo en el suelo es entonces difcil de determi- bles, entran en germinacin dando origen a fructifica-
formaciones de la materia orgnica. Se considera que el terias, constituyen los factores ms importantes en la dis- nar: tienen poco efecto en las etapas de mineralizacin e ciones de menor tamao: son los bulbillos (menos de 1
modo dominante de nutricin es la fagocitosis, sobretodo tribucin de los protozoos. Su biomasa en bosques y pas- inmovilizacin de la materia orgnica. Muchas especies mm) y menos cutinizados.
entre los ciliados que representan la mxima diferencia- turas de la regin fra puede llegar a 20 g/m2, pero en son parsitas del hombre, aunque no encuentran en el
cin a nivel celular, y al mismo tiempo es un grupo evolu- zona templada no supera a los 5 g/m2. La humedad es suelo ambiente apropiado. clamidosporas: elementos asexuados, de paredes
cionario terminal. En efecto, el desarrollo de un sistema uno de los principales factores ecolgicos, esencial para gruesas, con materiales de reserva. Pueden presentar-
biolgico ms complejo ocurre con el establecimiento de su proliferacin, su fisiologa y desplazamientos, pero pue- se intercalares, laterales o terminales, de alto conteni-
den resistir la desecacin enquistndose. Los hongos do lipdico, de forma y tamao diverso (esporas asexua-
das).
cilias citofaringe En general, su metabolismo es aerobio, pero hay espe- Comprenden un grupo muy amplio de protistas superio-
fibras microncleo cies que soportan concentraciones bajas de oxgeno y aun res, incluidos por los botnicos entre las Talofitas (vegeta- Estructuras de fijacin: estolones y apresorios, el esto-
contrctiles macronleo
vacuolas la anaerobiosis (por ejemplo, los patgenos del hombre y les, sin clorofila) (figura 4). ln es una hifa area que se extiende a gran distancia,
vacuola alimenticias animales y los del rumen). luego por su peso se curva, encuentra un soporte con el
contrctil pelcula
Los principales grupos se reconocen como: mohos, leva- cual se pone en contacto y se convierte en rgano de fija-
citoprocto
El pH del suelo afecta poco el espectro de especies, los duras y setas. Son todos hetertrofos y representan la cin ms complicado, el apresorio, unido firmemente al
hay en ambientes cidos y tambin en extremos alcali- ltima etapa en la escala de evolucin de los protistas; su sustrato.
nos. hbitat ms frecuente es el suelo, aunque los hongos ms
Tetrahymena primitivos son acuticos. Haustorios: los hongos parsitos y simbiticos que pe-
Existe evidencia de predacin por parte de hongos fila- netran en las clulas vegetales aumentan la superficie
mentosos sobre amebas y de otros organismos que pue- El talo est constituido por el micelio (figura 5) agregado de absorcin, por ramificacin de las hifas. Su rol es
Sarcodina Trypanosoma den parasitar a los protozoos, pero su rol en la naturale- de hifas filiformes con tubos de paredes delgadas que muy importante en las micorrizas, asociaciones sim-
za, contribuyendo a la declinacin de este grupo, no est envuelven a la masa citoplasmtica continua (micelio ce- biticas entre races y hongos. Tambin se los llama
Figura 3- Representantes de tres clases de protozoos claramente establecido. noctico) y con tabiques (micelio tabicado) aunque en este arbsculos (captulo 16).
fico. Estos cambios pueden impedir el reconocimiento del Los protozoarios de la clase Mastigophora poseen 1 a 4
origen algal de estos microorganismos, los que se ubican flagelos. En el suelo poseen pequea talla (5-20 micras) y
entonces, entre los protozoos. son los ms abundantes (3.000 a 200.000/g de suelo) y
los gneros ms comunes son: Allation, Bodo, Cercobo-
El ciclo de vida de estos organismos consiste en una do, Cercomonas, Entosiphon, Heteromita, Monas y los con
fase activa y una fase de reposo o cstica, en la que el clorofila Euglena y Chlamydomonas.
organismo segrega una espesa capa protectora, pudien-
do resistir por muchos aos en ambientes adversos. La Los Sarcodina o Rhizopoda emiten seudpodos que faci-
reproduccin es usualmente por fisin longitudinal o trans- litan su desplazamiento y por lo tanto la clula cambia
versal. Unas pocas especies poseen reproduccin sexual. constantemente de forma. Algunos poseen una envoltura
La clasificacin de los protozoarios ha variado mucho en rgida pero con orificio para emisin de los seudpodos.
los ltimos aos y en los esquemas moleculares de clasi- Los gneros ms comunes en el suelo son: Amaeba, Bio-
ficacin reciente no existen los protozoos como taxn in- myxa, Englypha, Hartmanella, Lecytium, Naegleria, Trine-
Figura 5 - Formacin de micelio a partir de una espora dependiente y se encuentran eucariotas anlogos a pro- ma, Nuclearia.
tozoos en todos los niveles evolutivos.
Las oosporas de Phytium permanecen en el suelo ms
Los ciliados se mueven por numerosos apndices (cilias).
de 16 meses y se producen slo en contadas ocasiones
Las especies terrestres son tambin menores que las
por los hongos. Hay evidencia de que gran nmero de
acuticas (10 a 80 micras) y los gneros ms comunes
hongos surgen de esporas durmientes (ascosporas), que
son: Balantiophorus, Colpidium, Colpoda, Enchelys, Hal-
son activadas por el calor. Ciertas sustancias previenen
teria, Pleurotricha, Tetrahymena, Vorticella.
la germinacin de conidios y otros tipos de esporas, fen-
meno conocido como fungiostasis.
Nutricin
Figura 2- Protozoo ciliado Se distinguen tres formas de nutricin:
En general, la espora germina cuando se libera algn tipo
de materia orgnica en su vecindad. La fungiostasis de-
pende tambin de la densidad de esporas. Entre los agen- Cuadro 2- Caractersticas de los principales grupos del subreino Protozoa
tes antifngicos, se cita el amonio en suelos alcalinos, los
Figura 4- Boletus appendiculatus (arriba) y Pleurotus sp. taninos del mantillo, el aluminio. Por este fenmeno la es-
Grupo taxonmico caractersticas ejemplos
(abajo) pora queda protegida, pues si germina en condiciones
desfavorables para su nutricin y desarrollo, es fcilmen-
Mastigophora (flagelados) Uno o ms flagelos, divisin por fisin binaria Trypanosoma, Giarda,
te atacada por otros microorganismos.
Resumiendo: las estructuras de resistencia incluyen a los longitudinal, reproduccin sexual en algunos. Trichomonas
conidios (esporas asexuadas externas), clamidosporas y Formas ameboides
Muchos hongos se protegen de la lisis provocada por en-
esclerocios, las oosporas (sexuadas), los esporangios y zimas liberadas por otros microorganismos, mediante la Euglenoides Flagelados fototrficos Euglena
esporangiosporas, ascosporas y los rizomorfos. Los co- produccin de pigmentos oscuros, del tipo de las melani- (grupo tambin considerado
nidios de muchas especies son de vida breve y pierden nas y con polisacridos formados por azcares resisten- con las algas)
viabilidad rpidamente cuando se forman o penetran en tes a la degradacin. Sarcodina (amebas) Seudpodos, son frecuentes los caparazones, Amoeba, Entamoeba
el suelo (caso de los patgenos) resultando difcil reais-
flagelos, en la etapa reproductiva
larlos luego de algunas semanas. Otras especies poseen Fisiologa y nutricin
conidios muy resistentes,pudiendo permanecer en suelo Se reconocen tres categoras de hongos por su relacin Ciliophora (ciliados) Cilias simples o compuestas. Dos tipos de Tetrahymena, Paramecium,
seco mucho tiempo y germinar cuando este se rehume- con la materia orgnica: ncleos, vacuola contrctil, fisin binaria trans- Vorticella, Didinium
dece. Algunas especies requieren para germinar sustan- versal, sexualidad por conjugacin. De vida
cias orgnicas o excreciones radicales.Este hecho tiene saprfitos, utilizan los sustratos orgnicos inanimados libre, muchos comensales, algunos parsitos
importancia en los hongos patgenos cuyas clamidospo- parsitos atacan organismos vivos
ras pueden sobrevivir hasta pocas favorables (Fusarium, simbiticos, asociados con otros organismos: alga o Apicomplexa (parsitos) Esporas en su ciclo sexual, con cistos, Plasmodium, Toxoplasma
Phytosphtora). Los esclerocios tienen un rol similar. vegetal, para su nutricin sin cilias, se llaman a menudo esporozoos
En ambientes con insolacin muy intensa, las algas tien- cianobacteria, incluso fijadora de nitrgeno, con lo cual Las fuentes de carbono son variables, emplean de prefe- pleo de distintas tcnicas varan mucho. Por recuentos en
den a concentrarse algunos centmetros debajo de la su- estos lquenes pueden ser fijadores de N2. rencia azcares, almidn y algunos celulosa y lignina. Con medio slido se tienen datos desde 20.000 hasta 106 o
perficie. All se protegen debajo de minerales translcidos Meteorizacin de rocas: una fina capa de clulas de respecto al nitrgeno, asimilan formas minerales y/o or- ms propgulos (hifas, esporas, fragmentos de hifas ca-
como cuarzo o dolomita, de las radiaciones solares y de algas recubre las rocas, y a la muerte de las algas, esta gnicas (las ltimas de preferencia). Almacenan glucge- paces de dar una colonia), por gramo de suelo seco.
la desecacin (sobre todo la ficoflora de los desiertos) y materia orgnica posibilita el desarrollo de bacterias y no y aceite. Especies de Penicillum (moho verde) y de
contra el fro intenso en las regiones polares. Las radia- ocasionalmente de hongos (los colonizadores secun- Rhizopus (moho negro) se desarrollan sobre cualquier tipo La biomasa puede ser mayor que la de las bacterias y su
ciones ultravioleta no son perjudiciales, de modo que son darios). La meteorizacin parece ser favorecida por la de sustrato hmedo (aun en el refrigerador a 5C); otros micelio se puede extender 10-100 m/g de suelo superfi-
empleadas en su aislamiento, eliminando los contaminan- formacin de bicarbonatos (del CO2 de la respiracin) o utilizan sustratos ms especficos, encontrndose en el cial. Valores hasta de 500 a 1000 m (500-5.000 kg/ha)
tes bacterianos. por metabolitos de los microorganismos hetertrofos y extremo de la escala a los parsitos obligados, que re- han sido citados, aunque muchas de las hifas pueden estar
de los lquenes. quieren determinada variedad vegetal. vacas (no viables). Los colorantes como el acetato de
La humedad: las algas verdes son muy exigentes en agua Fijacin del suelo: en suelos minerales sin estructura, fluorescena, que fluorescen por accin enzimtica, son
y a medida que aumenta la aridez, el nmero de especies las costras de lquenes y algas, fijan el suelo, retardan- Habitat muy empleados para evaluar los metros de micelio fngi-
y su densidad disminuyen. Otras algas, por el contrario, do la erosin y modificando el rgimen hdrico. Se redu- Los hongos estn muy distribuidos en todos los ecosiste- co viable/g de suelo, as como esporas viables para ser
soportan mal la inundacin. El ptimo se sita, como para ce la evaporacin y los musclagos contribuyen a au- mas, desde 0 a 25C, aunque pocos a 0C y con un mxi- empleadas en inoculantes.
otros grupos de microorganismos, alrededor del 40-60% mentar la estabilidad estructural. mo de 50C. Para los hongos del suelo el ptimo se ubica
de la capacidad de campo. En la superficie de suelos agr- Liberacin de oxgeno: por su fotosntesis oxignica entre 20-30C, en pH muy variados: el ptimo para el gru-
colas de la zona templada, la disponibilidad de agua para aumentan la aireacin en suelos inundados de arroza- po estara en la vecindad de pH 6 y dominan en ambien- Reproduccin
las algas suele ser limitante. Las clulas se recubren de les y en suelos pesados. Por el consumo del CO2 y la tes cidos, por falta de competencia por parte de las bac-
capa muscilaginosa muy higroscpica que puede retener liberacin de sustancias alcalinas, tienden a elevar el terias. La luz es esencial para la esporulacin de muchas Reproduccin asexual
10-15 veces su volumen en agua, la que es perdida muy pH combatiendo la acidez. Liberan vitaminas, auxinas, especies y para la dispersin de esporas fototrficas. Las Llamada tambin somtica se realiza por fragmentacin
lentamente. que favorecen a los cultivos as como sustancias inhibi- esporas permiten una amplia distribucin. Como grupo son del talo, por fisin binaria y gemacin (caso de las levadu-
doras sobre parte de la microflora del suelo. aerobios pero algunos soportan la anaerobiosis (los pa- ras) y por produccin de esporas. No incluye unin de
El efecto de la estacin del ao es marcado, en primave- Toxicidad: son conocidas las floraciones de algas txi- tgenos). ncleos y es la forma ms frecuente de reproduccin.
ra su nmero es bajo; el congelamiento las perjudica y en cas que matan peces y contaminan aguas. Se debe a El nmero, disposicin, forma, color y origen de las espo-
invierno la poblacin declina. un desarrollo explosivo de dinoflagelados que liberan Su rol es muy variado, desde la degradacin de molculas ras son caractersticos de las especies.
El efecto del pH vara con el tipo de suelo; en general las una poderosa neurotoxina, llamada saxitoxina. Los orgnicas muy complejas hasta la formacin de humus.
algas son poco sensibles a las variaciones de pH. Los moluscos que se alimentan de estos dinoflagelados no Por el lugar en donde se originan, se distinguen las:
valores prximos a la neutralidad o ligeramente alcalinos, pueden ingerirse. Mtodos de estudio: se emplean numerosas tcnicas,
son ms favorables. En suelos cidos dominan las clorof- pero ninguna puede englobar a todas las especies pre- 1. Talosporas , se forman en filamentos miceliales, no
ceas, que se pueden encontrar a pH 5,0 y aun 4,0 (el pti- sentes ni a su biomasa. El ms empleado es el recuento son caducas:
mo para su desarrollo se sita entre pH 6,8 y 8,5), aunque Los protozoarios en caja a partir de suspensiones-diluciones de suelo. Aci- artrosporas: se producen por desarticulacin de la
se encuentran en pH 9,3-10 y toleran hasta pH 13. dificando el medio con cidos orgnicos dbiles (pH 4,2) lmina media, los tabiques luego se gelifican simul-
Constituyen un grupo muy heterogneo de eucariotas, uni- o con el uso de agentes bacteriostticos (penicilina, novo- tneamente y los distintos filamentos se separan y
Antagonismos: muchas especies son susceptibles al ata- celulares y mviles, cuyo tamao vara entre algunas mi- biocina, rosa de Bengala, estreptomicina) se elimina la se redondean.
que por bacterias, hongos, estreptomices, que con enzi- cras hasta algunos centmetros (figura 2) (Madigan competencia de las bacterias. El problema radica en que blastosporas: se forman por brotacin de elemen-
mas especficas destruyen la pared celular. Otros antago- et al, 2000) y (figura 3). Los habitantes del suelo son de el hongo puede reproducirse a partir de fragmentos de tos preexistentes, se pueden separar y luego bro-
nismos ocurren con nemtodos, termites. talla ms pequea y aplanados, ya que deben moverse en micelio, y de esporas (asexuadas o sexuadas). Una sola tar; la separacin se efecta por constriccin del ist-
el film de agua que llena los poros. Presentan semejanzas pieza de micelio puede disgregarse en la agitacin en inmo y no del tabique (micelio levaduriforme).
Funciones con varias divisiones de algas de las cuales derivan. Los numerables porciones, cada una de las cuales dar ori- dictiosporas: son esporas pluricelulares, de ms
Aporte de materia orgnica, ya que son productores varios tipos de leucofitos proveen de pruebas sobre el origen a una colonia. Resulta as muy fcil aislar especies de 50 clulas, con apariencia reticulada.
primarios muy importantes en suelos desnudos, po- gen evolucionario de muchos grupos de protozoos. La pr- de Penicillum o Aspergillus que esporulan profusamente.
bres, erosionados, quemados, salinos o desrticos. Los dida de la capacidad fotosinttica reduce abruptamente la Los recuentos en caja deben ser tomados con precau- 2. Fialosporas, se originan en fructificaciones asexua-
lquenes (asociacin alga-hongo) constituyen el esta- potenciabilidad nutricional y es seguida de una serie de even- cin. La microscopa fluorescente ayuda mucho en la das bien definidas, son caducas y externas (terminales
do inicial de vegetacin sobre rocas o suelos minera- tos a nivel celular que posibilitan al organismo el desarrollo visualizacin en el suelo. Los datos obtenidos por el em- o laterales).
les. El componente fotosinttico puede ser tambin una de nuevos mecanismos de nutricin osmotrfico o fagotr-
Se distinguen las esporangiosporas, originadas dentro Por su compatibilidad en: bilateral. Las diatomeas (Chrysophyta) poseen paredes sinttica; si bien pueden obtener energa de su activi-
de estructuras especiales, el esporangio, como en Rhizo- homotlico, cada talo es sexualmente autofrtil y se orgnicas impregnadas con slice, de arquitectura muy com- dad fotosinttica, no pueden obtener el poder reductor
pus, Mucor y los conidios que se originan en extremos puede reproducir por s mismo pleja, con dos valvas superpuestas como las de una caja para convertir el CO2 en materiales celulares.
de las hifas (externas) o bien lateralmente. heterotlicos, que requieren la ayuda de otro talo com- de Petri. La divisin es longitudinal, cada clula hija retiene osmotrfas, muchas algas que realizan fotosntesis nor-
patible. la mitad de la vieja pared y sintetiza una nueva mitad. mal en la luz, pueden crecer en la oscuridad a expensas
Los conidios pueden encontrarse en estructuras especia- de variedad de compuestos orgnicos, derivando su me-
les (acrvula, esporodoquio) que los protegen dentro de La reproduccin sexual puede ser: A pesar de carecer de flagelos, estos organismos pueden tabolismo hacia la respiracin. Las algas completamente
tejidos vegetales (se dan en general en hongos patge- heterogmica, con gametos morfolgicamente diferen- moverse lentamente sobre sustratos slidos. El mecanis- encerradas en pared celular dependen exclusivamente de
nos). tes y homotlicos (autofrtil) mo en los desmidios no se conoce y en las diatomeas la sustratos orgnicos disueltos en la oscuridad
isogmica (gametos iguales) y heterotlica (ubicados locomocin se realiza por modificacin del movimiento fagotrfas, aquellas clulas desprovistas de pared o
Reproduccin sexual en talos distintos). ameboide. Poseen un orificio en la pared, el rafe, a travs que no estn completamente encerradas en ella, pue-
Comprende las tres etapas fundamentales: del cual el protoplasma se adhiere al sustrato, empujando den predar bacterias u otros microorganismos.
plasmogamia (unin de dos protoplastos y los ncleos Taxonoma a la clula. Grandes depsitos de paredes de diatomeas
haploides) Los criterios empleados en la clasificacin de este grupo se han acumulado y se usan como abrasivos y en filtros. No es correcto, entonces, describir a las algas como gru-
cariogamia (formacin de un zigote diploide) heterogneo incluyen caracteres morfolgicos casi exclu- po exclusivamente fotosinttico, ya que muchos de sus
divisin meitica (reduccin cromosmica). sivamente: Distribucin de las algas miembros unicelulares poseen las caractersticas nutricio-
naturaleza del micelio (tabicado o no) La mayora son organismos acuticos, en donde habitan nales de los protozoos y de los hongos. Los leucofitos
Los hongos se dividen por su sexualidad en: tipo de reproduccin sexual en vida libre o asociadas simbiticamente con invertebra- que se forman por la prdida irreversible del cloroplasto,
hermafroditas (rganos + y - en el mismo talo) naturaleza de las esporas asexuadas (internas en dos, como esponjas, corales, larvas, en cuyas clulas cre- son organismos no pigmentados derivados de grupos fla-
dioicos (en talos distintos) gametangio) y externas (conidios) (cuadro 3 y cen. En el suelo, su nmero es inferior al de las bacterias, gelados, de diatomeas y de formas inmviles de las algas
indiferenciados (no se diferencian los sexos). figura 6). actinomicetes u hongos. Es precisamente su bajo nme- verdes unicelulares. No pueden fotosintetizar.
ro, su nutricin autotrfica y su dependencia frente a la
luz, humedad y nutrientes minerales, que hicieron pensar En el laboratorio, esta transicin pudo ser demostrada
Cuadro 3- Taxonoma de los hongos
a los microbilogos que su rol en los ecosistemas agrco- experimentalmente, en ciertas cepas de Euglena, al ser
Divisin Subdivisin Clase las no era muy significativo. tratadas con estreptomicina o cuando son expuestas a
pequeas dosis de luz ultravioleta o a altas temperaturas.
Mixomycota (hongos sin pared) Mixomycotina Acrasiomycetes (mohos muscilaginosos
unicelulares) Su desarrollo es visible a simple vista en la superficie de La clasificacin de los leucofitos es un problema difcil:
Plasmodiophoromycetes (parsitos) suelos vrgenes o cultivados y su aislamiento es sencillo por su estructura pueden ser asignados a una divisin
Eumycota (hongos con pared) Mastigomycotina (esporas Chrytridiomycetes en medio lquido, con sales minerales, a la luz. El enri- particular de algas, como representantes no fotosintti-
asexuales flageladas) Oomycetes (antiguos Phycomycetes) quecimiento se puede seguir por el color de los pigmen- cos. Pero como son eucariotas unicelulares no fotosintti-
Zygomycotina (miceliales, Zygomycetes, por lo general saprofitas tos. Los recuentos en suelos superficiales pueden variar cos, pueden ser mirados como protozoos, y son incluidos
cenocticos, esporas asexuales Trichomycetes (parsitos en desde algunos miles a millones/gramo (biomasa entre 20- entre ellos por los zologos. Constituyen un grupo de tran-
en esporangio) intestino de artrpodos) 40 kg/ha). Valores ms altos se encuentran por perodos sicin entre las algas y los protozoos.
Ascomycotina (micelio septado Hemiascomycetes, levaduras o mice- breves, luego de una lluvia.
o levaduras, esporas asexuales liales, asca no encerrada en ascocarpo Ecologa
no se forman en esporangio, Euascomycetes: miceliales, ascas en
esporas sexuales en ascas ascocarpo Nutricin Los principales factores que inciden en la distribucin de
Hemiascomycetidae Basidiomycotina: micelio septado Teliomycetes, sin basidiocarpo: fototrfas, la fotosntesis es el mecanismo principal de las algas en el suelo son: la humedad, los nutrientes
o levaduras royas y carbones obtencin de energa. Algunas especies requieren vita- minerales, el CO2 y la luz. El CO2 y los elementos nutriti-
Esporas asexuales como Hymenomycetes: basidiocarpo, minas y en la naturaleza son las bacterias las que pro- vos no son limitantes. La luz determina la distribucin de
Ascomycotina. seta basidio descubierto
Gasteromycetes: basidiocarpos que
veen estos factores de crecimiento. Muchas algas tie- los organismos fototrofos: las algas son ms numerosas
encierran basidios nen un tipo mixto de metabolismo, pudiendo emplear en los 5-10 cm del perfil y disminuyen marcadamente con
Deuteromycotina: micelio septado Hyphomycetes antiguos fuentes orgnicas. Aun en la luz, ciertas algas no pue- la profundidad. Se pueden encontrar en horizontes ms
o levaduras, esporas asexuales Deuteromycetes den emplear CO2 como su principal fuente de carbono profundos (103/g) llevadas por las prcticas culturales
como Ascomycotina y dependen de acetato u otras formas orgnicas. Este (arrastre mecnico), por la fauna o el agua (nutricin he-
No hay reproduccin sexual
o se desconoce hecho es causado por un defecto en la maquinaria foto- tertrofa o permanecen en estado latente).
multicelulares, de aspecto de planta. El mayor y ms va- 10 d. Trichomycetes: hongos con talo cenoctico filamento-
Esporangiosporas
naturaleza qumica de la pared, si est presente riado grupo es el de las algas verdes (Chlorophyta), de Oidios Clamidospora Ascospora
so simple o ramificado adherido al tracto digestivo y
Conidias
los materiales orgnicos de reserva los cuales se originaron probablemente las plantas, inclu- Basidiospora
cutcula externa de artrpodos vivos. Reproduccin
ye organismos unicelulares y hasta multicelulares con Aplanosporas asexual por variedad de esporas. Reproduccin sexual
la naturaleza de los pigmentos fotosintticos Zoosporas
aspecto de vegetal. conocida como en los Zygomicetes.
la naturaleza y posicin de los flagelos, en el caso Zoosporangio Esporangio e. Ascomycetes: hongos que forman esporas dentro de
de algas mviles Cuadro 1- Principales grupos de algas estructuras especiales en forma de saco (asca) como
estructuras reproductoras resultado de la cariogamia y meiosis. Las ascas se pre-
Grupo Caractersticas de los pigmentos, pared celular, materiales sentan libres o en fructificacin ms generalmente en
de reserva, n y tipos de flagelos, organizacin celular
El cuadro 1 muestra las divisiones de las algas. el tejido infectado.
Chlorophyta
algas verdes clorofila a y b, celulosa, almidn, 2 flagelos, unicelulares
f. Basidiomycetes: hongos que forman esporas resul-
Las divisiones no son equivalentes en lo relacionado al filamentosas, de gran tamao Esporangiforo Asca tantes de cariogamia y meiosis sobre la superficie de
Oidiforo Basidiospora
rango de estructura de sus integrantes. Por ejemplo, Eugle- Euglenophyta Hifa Conidiforo
estructuras especiales llamadas basidios.
nophyta consiste enteramente en organismos unicelula- euglenoides a y b, sin pared, paramiln y grasas, 1, 2, 3 flagelos por vegetativa g. Deuteromycetes: grupo en el cual se coloca a los hon-
fotosintticos clula, unicelulares 100
res organizados en colonias simples, mientras que las gos que por su estructura general y reproduccin
Phyrrophyta Figura 6- Esporas en hongos asexual se parecen a los Ascomycetes, pero no se ha
Phaeophyta (algas pardas) son enteramente organismos
dinoflagelados a y c y carotenoides especiales, celulosa, almidn y aceites,
2 flagelos diferentes en forma y posicin, la mayora observado el estado sexual. Tambin llamado Fungi
unicelulares, pocas filamentosas Myxomycota imperfecti, incluyen a numerosas levaduras.
Chrysophyta Subdivisiones: Myxomycotina: clases como Myxomyce-
Algas amarillo- a+/-c y carotenoides especiales, 2 mitades superpuestas tes, sin pared celular, cuerpo ameboide (plasmodios de Funcin en el suelo
verdosas, de slice, otras sin pared, aceites, 2 flagelos por clula,
diatomeas unicelulares, filamentosas, cenocticas
vida libre), masa multinuclear de protoplasma sin pare- Los hongos son activos degradadores de sustratos
des definidas. Diploides, fructifican dando oosporas fla- carbonados y su rol esencial es la mineralizacin de fuen-
Phaeophyta
algas pardas, a y c, carotenoides especiales, celulosa y algina, grasas y geladas en la meiosis. Parecidos a los protozoos con tes complejas de carbono, atacando gran volumen de re-
dinoflagelados luminarina, 2 flagelos de distinta longitud, pluricelulares nutricin holozoica. siduos con poco nitrgeno. Predominan as en suelos
Rhodophyta pobres, sobre restos vegetales frescos y sobre todo en
algas rojas a, ficobilinas, celulosa, almidn, s/flagelos, unicelulares, Eumycota plantas maduras donde la C/N puede ser muy alta.
(Plantae) pluricelulares con forma de planta
Hongos verdaderos, con paredes de celulosa o quitina,
estructura tpicamente filamentosa, algunos unicelulares. Segn los sustratos que emplean se distinguen los:
Es muy extensa la laguna biolgica que existe entre las Reproduccin sexual o asexual, esporas sin flagelos. Se hongos glucoflicos, sobre todo al estado de esporas
cianobacterias y las algas. En cambio, las plantas supe- distinguen las clases: con alto poder germinativo y rpido crecimiento. Son
riores presentan relacin con las algas verdes: la disposi- los primeros en atacar sustratos frescos; cuando las frac-
cin especfica de los pigmentos en el cloroplasto, las a. Chytridiomycetes: variedad de talos, clulas mviles ciones fcilmente atacadas se agotan, el hongo fructifi-
paredes celulares con celulosa y la capacidad de almace- con un solo flagelo posterior tipo ltigo, acuticos, ca y permanece en estado de latencia (Mucorales, Pe-
nar almidn. parsitos. nicillum).
b. Oomycetes: hongos con micelio cenoctico bien desa- hongos que degradan la lignina, las fracciones ms
La mayora de las algas multicelulares son inmviles en rrollado, cuyas clulas mviles poseen dos flagelos resistentes, sobre todo Basidiomycetes
estado maduro. Sin embargo en su reproduccin, frecuen- dirigidos en direcciones opuestas: uno de tipo ltigo y patgenos verdaderos; slo una fraccin pequea de
temente se forman esporas mviles, ya sea asexuales el otro cepillo. Reproduccin sexual: se forma una es- los hongos que crecen o sobreviven en el suelo, como
(zoosporas) o gametos, lo que revela su relacin con al- pora de resistencia (oospora) a partir de la osfera Fusarium, Phytium, Ophiobulus, Rhizoctonia, Sclero-
gn grupo particular de flagelados unicelulares. fecundada, con pared celulsica. Parsitos y saprfi- tium, Verticillum.
tos acuticos. Hongos patgenos del hombre pueden llegar al suelo,
Varias divisiones de algas poseen miembros unicelulares c. Zygomycetes: hongos saprfitos o parsitos con mi- sobre todo en la zona tropical y la infeccin se genera-
inmviles o que se desplazan por mecanismos diferentes celio cenoctico o septado bien desarrollado. Repro- liza fcilmente en la poblacin. Una tcnica comn para
a los flagelos. Los desmidios, miembros de las Chloro- duccin sexual por fusin de gametangios generalmen- detectarlos y aislarlos es colocar una hebra de cabello
Figura 1- Algas unicelulares y filamentosas phyta, presentan clulas grandes, aplanadas, con simetra te iguales que forma una espora de resistencia (zigos- estril en el suelo, el hongo lo coloniza, pues emplea la
pora). No producen clulas mviles. queratina.
predatores: muchos hongos se nutren de protozoos, (mtodo tambin empleado en la lucha contra fitopatge-
otros hongos, nemtodos. La hifa penetra en la presa, nos). Como se observa en el cuadro 4, en condiciones de
disminuyendo la movilidad, el hongo digiere el conteni- sequedad, las especies que pueden esporular, lo hacen y
do celular y asimila las sustancias liberadas. Estos hon- la mayor proporcin de estructuras fngicas las constitu-
gos participan en el equilibrio biolgico del suelo, limi- yen las esporas. La humedad favorece la germinacin de
tando el tamao y actividad de ciertos grupos.
Los hongos participan en la humificacin, degradando

restos de animales y vegetales. Contribuyen a la agrega-
stas y el desarrollo del micelio.
Aireacin: algunas especies pueden desarrollarse a ba-

jos niveles de O2, pero en general un extremo de la hifa
7 Los protistas superiores
cin del suelo; la penetracin de sus hifas permite com- accede al aire. Son aerobios y su dependencia frente a
pactar agregados, unir partculas. este gas explica su mayor concentracin en los primeros
centmetros del suelo y su ausencia en niveles inferiores
Algunos forman asociaciones simbiticas con races de en suelos mal drenados, en barros y estuarios. Las espo- Este grupo comprende a un conjunto muy diverso de or- hongos, sobre todo cenocticos, se desarrollan dando ori-
vegetales (micorrizas) que favorecen la nutricin vegetal. ras pueden soportar largos perodos de inundacin; al dre- ganismos cuyo estudio ha sido abordado por distintas dis- gen a una estructura filamentosa y ramificada, el micelio.
nar el suelo, los hongos retornan rpidamente a su posi- ciplinas: Ficologa, Micologa y Protozoologa. Esta diver-
Ecologa cin de importancia. sificacin se explica por el hecho de que los botnicos El cloroplasto es el organelo clave en las relaciones en-
Los factores ecolgicos ms importantes son: nivel y na- reconocieron a las algas y a los hongos como plantas y tre los tres grupos. Se puede perder irreversiblemente,
turaleza de la materia orgnica, pH, fertilizantes orgni- Cuadro 4 - Cambios poblacionales de hongos en los zologos a los protozoos como animales. La caracte- dando origen a las algas incoloras o leucocitos, que se
cos y minerales, humedad, aereacin, temperatura, pro- suelo de pastura a varios niveles de humedad rstica comn es la presencia de clula eucariota, son por desarrollan con nutrientes minerales simples, a la luz. As,
3
fundidad, estacin del ao y cubierta vegetal. hongos (10 /g) lo tanto microorganismos eucariotas. a partir de algas unicelulares, es fcil distinguir formas
que dependen de procesos fermentativos o respiratorios
El nmero de hongos filamentosos vara directamente con esporas Actualmente se reconocen como microorganismos, orga- para su nutricin, como los protozoos.
el contenido de materia orgnica. El agregado de restos H% total hifas esporas % del total nismos muy simples, que han permanecido a travs de la
vegetales estimula la poblacin fngica y altera la compo- 8,9 99 60 39 79 evolucin adaptndose a las condiciones modernas. Los La separacin es muy marcada entre algas y protozoos en
sicn de la flora; ciertos gneros se hacen dominantes: 18,9 142 113 29 20 representantes ms especializados, como un alga de mar, estructura celular y fisiologa, pero a los evolucionistas les
Penicillum, Trichoderma, Aspergillus, Fasarium, Mucor. 24,2 149 133 16 10 un ciliado, un moho, pueden ser asignados rpidamente resulta ms difcil vincular a los protozoos con los hongos:
Algunas especies mantienen su nmero alto por perodos 27,1 173 153 20 12 a las algas, protozoos y a los hongos, respectivamente. los primeros son uniformemente unicelulares y mviles y
relativamente largos, en medios cidos los hongos son la Sin embargo, existen numerosos protistas superiores in- los hongos predominantemente cenocticos e inmviles, y
microflora dominante cuando se agrega materia orgnica Temperatura: la mayora son mesfilos, pero el desarro- cluidos arbitrariamente en algn grupo, como el caso del su hbitat fundamental es el suelo. No obstante, es nece-
y el nivel de nitrgeno es adecuado. llo termfilo no es infrecuente. En el suelo los termfilos gnero Euglena, ubicado entre las algas y los protozoos. sario recordar que las formas primitivas son acuticas y
son escasos, pero son abundantes cuando la temperatu- poseen esporas flageladas (zoosporas). Para los hongos
El pH es uno de los factores principales que gobiernan su ra asciende por respiraciones (compost). En trminos generales: del suelo, el viento es la principal forma de propagacin.
actividad y composicin. Muchas especies se desarrollan Las algas pueden definirse como organismos con foto-
en amplio rango de pH, en medio de cultivo lo hacen des- Profundidad: en suelos cultivados, los hongos son ms sntesis oxignica y que poseen cloroplastos. Pueden ser
de pH 2-3 hasta 9,0 o superior. Dominan en ambientes abundantes en las capas superiores, pero pueden alcan- unicelulares, filamentosas o cenocticas, algunas poseen Las algas
cidos por falta de competencia de bacterias. Algunas zar gran densidad en los horizontes B de pasturas (ms aspecto de planta debido al extensivo desarrollo multice-
especies son ms sensibles a la acidez que el resto de la de 1 m), siguiendo la concentracin de la materia orgni- lular, pero no se diferencian en tejidos ni rganos; por lo El suelo no es un hbitat ptimo para las algas (figura 1),
comunidad y la acidificacin del suelo puede ser un mto- ca: son cepas adaptadas a bajas concentraciones de O2 general la especializacin celular se da en el caso de la que prefieren los ambientes acuticos. Sin embargo, la
do de lucha, cuando se trata de hongos fitopatgenos. o altas de CO2. El efecto de la profundidad sobre la abun- reproduccin. No deben confundirse con las cianobacte- ficoflora terrestre est integrada por numerosas especies
Otros hongos prefieren la neutralidad o bien ambientes dancia y composicin de la flora fngica est asociado rias, que tambin realizan fotosntesis oxignica, pero que unicelulares y filamentosas, cuya distribucin est ligada
alcalinos. El ptimo como grupo se sita en la vecindad con la concentracin de materia orgnica y la composi- son bacterias y evolucionaron como ellas. a tipos pedolgicos y a la cubierta vegetal. En condicio-
de pH 6. cin de la atmsfera del suelo. nes extremas, estos productores primarios (PP) de
Los protozoos y los hongos son organismos no fotosin- materia orgnica pueden desempear un rol fundamen-
Humedad: si sta es excesiva y la difusin del oxgeno Estacin del ao: los meses clidos de primavera son tticos y la diferencia entre ellos es de carcter estructural; tal. La taxonoma que se emplea es la de los botnicos
est limitada, los hongos son los primeros perjudicados usualmente benficos pero el excesivo calor y sequedad los protozoos son predominantemente unicelulares y los (Talofitas) y se basa en propiedades celulares:
5) Seale dos o tres caracteres fisiolgicos o bioqumicos 7) Qu importantes herramientas se emplean en estos del verano y los extremos de temperatura del invierno los poras. La formacin del zigote tiene lugar en un momento
que aplicara en el estudios de bacterias lcticas. estudios de anlisis de cidos nucleicos? afectan. particular de su ciclo de vida, inmediatamente despus
6) Por qu se usan fragmentos de ARN en estudios filo- 8) Por qu el concepto de especie resulta algo flexible de la germinacin de las ascosporas haploides: pares de
genticos? en el caso de bacterias? La materia orgnica flucta con la estacin, es ms abun- stas se fusionan para formar clulas vegetativas diploi-
dante en otoo, el recuento tiende a ser alto en esta po- des. El estado diploide se mantiene en todo perodo de
ca y en primavera y declina en perodos secos del vera- desarrollo vegetativo y la meiosis ocurre inmediatamente
no, aunque algunas localidades pueden tener ocasional- antes de la formacin de las ascosporas.
mente comunidades activas en verano. La accin de los
hongos es baja en regiones con inviernos fros. Otras levaduras ascomicetes forman zigotes por fusin
entre clulas vegetativas inmediatamente antes de la for-
La cubierta vegetal afecta cuali y cuantitativamente a la macin de ascosporas, que al germinar dan lugar a la pro-
ficoflora, algunas especies estn asociadas a ciertas co- genie vegetativa haploide.
munidades vegetales, mientras que otras no parecen afec-
tadas por ellas. Levaduras del gnero Sporobolomyces forman basidios-
poras y en este caso toda la clula vegetativa se transfor-
ma en un basidio. La descarga de basidiosporas es un
Levaduras proceso violento, y las colonias se detectan rpidamente
en cajas incubadas en posicin invertida, la tapa de la
Si bien el trmino levadura no tiene significado taxonmi- caja se cubre con las esporas descargadas formando una
co, es muy empleado para designar a aquellos hongos de imagen como el espejo de la colonia sobre el agar.
estructura unicelular y que se reproducen por fisin bina-
ria o gemacin. Los gneros ms encontrados en el suelo La mayora de las levaduras del suelo se multiplican sola-
son: Cndida, Hansenula, Lipomyces, Pichia, Pullularia, mente por gemacin: Cndida, Cryptococcus, Rhodoto-
Rhodotorula, Saccharomyces, Sporobolomyces, Torula, rula, Torulopsis, Trichosporon. Son poco numerosas en el
Zygosaccharomyces. (figura 7). suelo y para ponerlas en evidencia es necesario emplear
tcnicas de enriquecimiento en medios selectivos
Ciertas cepas tolerantes a altos niveles de azcares, ca- (103-104/g). Son abundantes en suelos con vid, llegan a
paces de realizar activas fermentaciones, se describieron ellos desde la superficie de frutos (especies activamente
en el suelo, pero no parecen ser habitantes normales, sino fermentadoras) y pueden subsistir poco tiempo en el sue-
que llegan a l con frutos y restos vegetales. Generalmente lo, excepto las ascosporas ms resistentes.
se describen poblaciones de 103/g en reas templadas, pero
no es posible correlacionar su nmero con caractersticas Las levaduras tpicas del suelo seran especies distintas
climticas o de suelo, y su rol en las transformaciones de a las epifitas, pero se conoce poco sobre sus fluctuacio-
la materia orgnica o mineral no est definido. nes y su reparticin; se sabe que son abundantes en sue-
los ricos en materia orgnica fresca o poco descompues-
Muchas levaduras realizan fermentacin alcohlica de ta, y tambin en los mantillos forestales. En suelos turbo-
azcares y han sido empleados desde la antigedad sos pueden representar hasta un 50% de la poblacin to-
por el hombre. Pertenecen a las tres clases de hongos tal (entre 20 y 50 cm de profundidad). Se explica esta dis-
superiores: Ascomycetes, Basidiomycetes y Deute- tribucin por la aptitud a desarrollarse en anaerobiosis
romycetes. (cuando fermentan).
Saccharomyces cerevisiae, principal agente de la fermen- El efecto de la vegetacin se manifiesta del punto de vista
tacin alcohlica, es una levadura ascomicete. En cierto cuali y cuantitativo; ciertos especies estimulan preferen-
estado de su desarrollo la gemacin cesa y la clula ve- cialmente a algunos gneros, la rizosfera es tambin un
getativa se transforma en un asco, cada una con 4 ascos- ambiente favorable a su multiplicacin.
Bibliografa Cuadro 13- Esquema de la organizacin del Los 5 tomos presentan mucha informacin ecolgica y
Bergey Manual of Systematic Bacteriology (2001) las especies patgenas se encuentras dispersas en los 5
Dommergues, Y. y F. Mangenot, Ecologie Microbienne volmenes, en un ordenamiento filogentico. Un breve
Rango taxonmico y Seccin Gneros representativos
du Sol, 1970, Masson & Cie. Pars. Volumen 1: Archaea, Cianobacterias,
resumen incluye:
Frioni, L. Procesos Microbianos, 1999 Fundacin de la Prottrofos y gneros muy ramificados
Archaea, reino: Crenarchacota Volumen 1: Archaea, cianobacterias, prototrfos verdes
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina.
13 Secciones. Algunas de ellas: y gneros muy ramificados.
Madigan, Martinko y Parker. Brock, Biology of Microor- Metangenos Methanobacteruim
Halobacterias Halobactium, Halococcus
ganisms 2000 Prentice Hall International.
Gneros muy ramificados Volumen 3: Gram positivos con bajo contenido en
Prescott-Harley-Klein, Microbiologa, 1999 Mc Graw-Hill Eubacterias
Seccin XIII: Prochloron y Cianobacterias Prochloron, Oscillatoria, Anabaena,
G+C
Interamericana.
Nostoc Volumen 4: Gram positivos con alto contenido de
www.fagro.edu.uy/microbiologa/protistas superiores Seccin XIV: Chlorobia Chlorobium. G+C
Volumen 5: Plantomicetes, Espiroquetas, Fibrobacter,
Preguntas de repaso Reino: Proteobacteria Rhodospirillum, Rickettsia, Cualo-
bacter, Rhizobium, Bacteroides, y Fusobacterias.
Seccin XV: -Proteobacteria Nitrobacter, Methylobacterium,
Figura 7- Clulas de levaduras gemando (seudomicelio) 1) Seale algunas importantes funciones que llevan Beijerinckia,Hyphomicrobium.
Seccin XVI: -Proteobacteria Neisseria, Burckholderia, Alcalige- Se incluye tambin en este volumen una seccin que ac-
a cabo las algas en los ecosistemas naturales. nes, Nitrosomonas, Thibacillus. tualiza las descripciones y las relaciones filogenticas re-
2) Idem para los protozoos. Seccin XVII: -Proteobacteria Chromatium, Leucothrix, Pseudo-
monas, Azotobacter visadas desde la publicacin del volumen 1.
Rol en el suelo 3) Idem para los hongos. Vibrio, Escherichia, Klebsiella,
No es bien conocido: se los considera como organismos 4) Relaciones de los hongos con la materia orgni- Proteus, Salmonella, Shigella,
Yersinia, Haemophilus.
glucoflicos relacionados a la materia orgnica poco trans- ca. Seccin XVIII: -Proteobacteria Desulfovibrio, Bdellovibrio, Myxoc- Bibliografa
formada, utilizan nitratos y azcares simples u oligosac- 5) Aplicaciones biotecnolgicas de los hongos. cus, Heliobacter.
Seccin XIX: - Proteobacteria Campylobacter, Helicobacter.
ridos, pero son incapaces de degradar glcidos comple- 6) Usos de las levaduras por el hombre. ASM Methods for General and Molecular Bacterio-
Volumen 3: Grampositivas de bajo
jos, tal vez con excepcin de las pectinas. Las levaduras 7) Cmo seran las relaciones evolutivas entre los contenido en G*C logy, 1994.
del gnero Lipomyces parecen una excepcin ya que pue- protistas eucariotas? Seccin XX: Clostridia y afines Clostridium, Eubacterium, Desul-
Madigan, Martinko y Parker. Brock, Biologa de los
fotomaculum,
den desarrollarse a dbiles dosis de nitrgeno, con lo que 8) Cul es el organelo considerado clave en la evo- Veinonella,Haloanaerobium. microorganismos, 2000. Prentice Hall International.
pueden degradar mucho ms carbono orgnico, y pare- lucin? Seccin XXI: Mollicutes Micoplasma, Ureaplasma, Spiro-
Bergeys Manual of Systematic Bacteriology, 2001.
plasma.
cen favorecidas por cidos hmicos. En la naturaleza se 9) Cmo cultivara algas a gran escala? Seccin XXII: Bacillus y Lactobacillus Bacillus, Thermoactinomyces, Prescott, Harley y Klein, Microbiologa, 1999 McGraw-
las encuentra frecuentemente asociadas a bacterias fija- 10) Cmo lo hara con protozoos? Lactobacillus,
Hill. Interamericana.
Streptococus, Enterococcus,
doras de N2 aerobias, sobre las que ejercen efecto esti- 11) Y con hongos? Listeria, Staphylococcus. The prokaryotes, 2nd ed. 1992.
mulante. Volumen 4: Grampositivos con alto
contenido en G+C
Seccin XXIII: Clase Actinobacteria Actinomyces, Micrococcus, Arthro-
bacter, Preguntas de repaso
Corynobacterium, Mycobacterium,
Nocardia,
Actinoplanes, Propionibacterium, 1) Resuma las ventajas de emplear las caractersticas
Streptomyces, Frankia, Bifidobac-
terium, Thermomonospora.
morfolgicas, fisiolgicas/metablicas, ecolgicas,
Volumen 5: Plantomicetos, Planctomyces, Chlamydia genticas y moleculares, en la clasificacin e iden-
Espiroquetas, Fibrobacter, tificacin.
Bacteroides y Fusobacterias
Seccin XXIV: Planctomicetes, 2) Se le presenta el caso de dilucidar si dos aislamientos
Clamidias y afines de bacterias aisladas de ndulos de trbol son de la
Seccin XXV: Espiroquetas Spirochaeta, Borrelia, Leptospira
Seccin XXVI: Fibrobacter Fibrobacter
misma especie. Qu caracteres les determinara?
Seccin XXVII: Bacteroides Bacteroirdes, Porphyromonas, En qu momento usara estudios de su ADN?
Prevotella 3) Conceptos de: taxonoma y filogenia.
Seccin XXVIII: Flavobacterias Flavobacterium
Seccin XXIX: Esfingobacterias, Sphingobacterium, Flexibacter, 4) Qu se entiende por caracteres morfolgicos?
Flexibacterias y Cytophaga Cytophaga Resultan ms tiles en estudios taxonmicos de
Seccin XXX: Fusobacterias Fusobacterium. bacterias o de hongos? Por qu?
* pared: la molcula del peptidoglicano se encuentra yora de los microbilogos emplean rboles derivados de
presente en todas las bacterias excepto los grupos anlisis de secuencias de la fraccin 16S del ARN ribosomal.
Planctomyces y Mycoplamas Pero es necesario tener en cuenta que estos rboles pueden
* membrana externa de la pared procariota: el anlisis de cambiar a medida que se realicen y analicen nuevos datos.
sus lipopolisacridos es muy usado en la actualidad
* membrana citoplasmatica: los cidos grasos, acidos
miclicos presentes en un grupo de bacterias Gram Apndice
positivas (Actinomicetes), los pigmentos carotenoides
de las bacterias fototrofas anoxignicas La ltima edicin del Manual Bergey
* cadena de transporte electronico: citocromos, quinonas Ha habido un progreso considerable en el dominio de la
* sistema fotosintetico: bacterioclorofilas taxonoma bacteriana desde 1984, fecha de la publica-
* citoplasma: poliaminas en bacterias metanognicas y cin del primer volumen del Bergeys Manual of Systema-
Gram negativas, perfil proteico, perfil enzimtico (multi- tic Bacteriology. El nmero de especies descriptas se ha
locus). duplicado y hay ms de 170 gneros nuevos, gracias a la
secuenciacin del ARN ribosomal, del ADN y de las pro- Los microorganismos
En resumen: se han planteado algunas de las dificultades tenas.
encontradas en el desarrollo de un rbol filogentico univer-
sal. Los mejores resultados se obtendrn si se emplean to- La segunda edicin del Manual Bergey (2001) es funda-
en los ciclos biogeoqumicos
dos los datos posibles, tanto moleculares como fenotpicos, mentalmente filogentica en lugar de fnica (figura 3 y
para el anlisis (ejemplo en la taxonoma polifsica). La ma- resumen en cuadro 13) (Prescott et al., 1999).
8 Ecologa microbiana y mtodos de estudio .................................. 121
9 Ciclo biolgico del carbono ........................................................... 143
10 Ciclo biolgico del nitrgeno ......................................................... 169
11 Fijacin biolgica del nitrgeno (FBN) .......................................... 191
12 Ciclos biolgicos del azufre, fsforo, hierro. ................................. 211
Figura 3- Filogenia en Eubacteria: rbol basado en comparaciones del segmento 16S del ARN ribosomal
Cuadro 12- Comparacin entre Bacterias, Archaea y Eucarya
Caracterstica Bacteria Archaea Eucarya
Peptidoglicano si no no
Lpidos de la membrana Enlaces ster Enlaces eter Enlaces ster
Ribososmas +ARN iniciador 70S 70S 80S
formilmetionina metionina metionina
Intrones en ARNt no si si
ARN polimerasa Una (4 subunidades) Varias (8-12 subunidades) Tres (12-14 sub-
unidades)
Ribosoma sensible a:
Toxina diftrica No Sensible Sensible
Cloranfenicol Sensible No No
Kanamicina
Estreptomicina
Otras aproximaciones taxonmicas Otra aproximacin ms moderna es la taxonoma polif-

sica que busca el consenso en la integracin de distintos
La taxonoma numrica, es empleada desde 1957 para tipos de caracteres:
efectuar agrupamientos entre vegetales, animales y se ex-
tendi rpidamente al estudio de las bacterias y se carac- * Fenotpicos: - clsicos (igual que en taxonoma
teriza por: clsica)
- marcadores quimiotaxonmicos (perfil
La agrupacin de unidades taxonmicas o taxones por de cidos grasos, de protenas, etc.)
mtodos numricos
Se basa en la determinacin de un gran nmero de * Genotpicos: - clsicos: % G+C, hibridacin
caracteres, todos ellos con el mismo peso relativo: DNA-DNA
flagelos, tipos de colonias, velocidad de crecimiento, - nuevos: perfiles moleculares por res-
pigmentos triccin o por amplificacin
La similitud es funcin de la proporcin de caracteres
comunes * Filogenticos: basados en el reconocimiento del gen
del fragmento 16S del rARN
Ejemplo de aplicacin de la taxonoma numrica en la
comparacin de dos cepas bacterianas por caracteres Marcadores taxoqumicos: La deteccin y cuantificacin
fenotpicos (determinacin de un gran nmero de ellos). de numerosas molculas presentes en los microorganis-
mos se han empleado mucho en estudios taxonmicos y
Se determina el coeficiente de semejanza = a + d filogenticos a pesar de que requieren anlisis qumicos
a+b+c +d con equipamiento especializado, no son universales, pero
resultan muy tiles dentro de algunos grupos y presentan
a: nmero de caracteres positivos en ambas cepas alto grado de discriminacin.
b: nmero de caracteres positivos slo en cepa 1
c: nmero de caracteres positivos slo en cepa 2 Estas molculas estn presentes en distintas estructuras
d: nmero de caracteres negativos en ambas cepas celulares, como son:
La mineralizacin, pasaje de formas orgnicas a minera- no disponibles para los cultivos e incluso conducirlos a
les, es un proceso muy general y ocurre prcticamente en gases, que se pierden en la atmsfera.
todas las condiciones ecolgicas. En efecto, no hay sus-
tancia orgnica de origen biolgico que no sea degrada- Ejemplos:
do por algn grupo de microorganismos en ambientes materia orgnica + NO3 CO2,H2O, N2 (N2O)
Ecologa microbiana y mtodos
naturales. Existen sustancias naturales de mineralizacin
muy lenta, llamadas recalcitrantes, caso de la lignina,
algunos biocidas naturales, el humus. Numerosas sustan-
cias orgnicas producto de las actividades del hombre lle-
Fijacin-volatilizacin
gases a la atmsfera
8 de estudio
gan a los ecosistemas naturales y son muy difcilmente Fijacin Procesos microbianos en los ciclos biogeoqumicos
degradadas, caso de los pesticidas. Estas sustancias que (f)
producen serias poluciones, se denominan xonobiticas Sustancia gaseosa Sustancia no gaseosa
La ecologa microbiana estudia las propiedades y el com- Cuadro 2- Temas de inters en ecologa
(captulo 22).
Volatilizacin portamiento de los microorganismos en su ambiente na- microbiana
Se habla de inmovilizacin cuando las sustancias inor- (v) tural, sea el suelo, aguas, alimentos, animales (cuadro 1)
gnicas son asimiladas por los microorganismos para y su estudio interesa a los investigadores por muchos as- Polucin ambiental
integrarlos a su biomasa (protenas, fosfolpidos, etc.). Se La fijacin es la conversin de sustancias voltiles en no pectos de dominio pblico (cuadro 2). Detergentes biodegradables, contaminacin
produce una competencia con las plantas y animales, voltiles y los ejemplos ms tpicos son: de canales, cauces de agua, derrames de petrleo
quienes pueden sufrir carencias temporales. La biomasa fijacin biolgica del C (fotosntesis o quimiosnte- Cuadro 1- Estudios en ecologa microbiana Polucin por nitratos en aguas subterrneas, abo-
microbiana a su turno ser biodegradada y los nutrientes sis) nos orgnicos, zonas de agotamientos de O2
vuelven a formas inorgnicas. fijacin biolgica del nitrgeno (FBN), muchas ve- amplio rango de organismos tanto macro como
Liberacin de microorganismos alterados por
ces realizados en la misma clula (cianobacteria y bac- microorganismos
ingeniera gentica
Oxidacin-reduccin terias fotosinttica fijadoras de N2): tipos encontrados en distintas situaciones, as
Daos por el congelamiento, biorremediacin,
como su nmero y diversidad
fijacin del nitrgeno
reduccin Fotosntesis bacteriana: CO2 + SH2(CH2O)n + S + H2O las actividades realizadas por los organismos en
Metano a partir de residuos
(r) gas no gaseoso el suelo y sus efectos en la fertilidad en el creci-
Resistencia a los antibiticos
Sustrato Sustrato reducido miento vegetal
Vida microbiana en ambientes inusuales
8e, 8H+ las interrelaciones entre organismos, con las plan-
FBN N2 Calentamiento global y sus consecuencias
= = + 2 NH3 + H2 tas y los animales y con el ambiente.
(SO , NO ,
4 3
oxidacin (S , NH4 , CH4, H2O gas nitrogenasa
CO2, c. org.) (o) azcares)
NH3 + esqueletos carbonados aa protenas
El trmino ambiente se refiere a todo lo que rodea a un Sinecologa: que analiza las interacciones en un

(no gaseosos) organismo: los factores fsicos, qumicos y biolgicos. Los determinado lugar, considerando las especies, los
Numerosos procesos de este tipo involucran a elemen- microorganismos desempean roles ms importantes de factores biticos y abiticos en ese lugar (suelo, mar,
tos importantes para ecosistemas naturales (C,N,S,P,Fe) La volatilizacin es un proceso fsico que puede llevar a lo que podra inferirse por su pequeo tamao. Desde una estanque).
como la nitrificacin, sulfooxidacin, desnitrificacin, la atmsfera productos formados por va biolgica. Un perspectiva ecolgica los microorganismos son parte de
sulfatorreduccin, metanognesis, oxidacin y reduccin ejemplo es el caso del amonio producido por amonifica- las comunidades de los llamados ecosistemas. Cada or- Autoecologa: en contraste con la anterior, comprende
de compuestos con hierro, carbonados, etc. Las plantas cin, que en suelos alcalinos, de baja capacidad de inter- ganismo en un ecosistema interacta con su entorno mo- el estudio de una especie y el efecto que sobre ella en
dependen de muchos de estos procesos para obtener cambio catinico, puede perderse a la atmsfera. Otros dificando marcadamente en algunos casos las caracte- particular ejerce el ambiente (ejemplo: estudio de una
los nutrientes asimilables a partir de la reserva orgnica ejemplos son las prdidas de nitrgeno como N2, N2O, rsticas del ecosistema. cepa de Rhizobium, de patgenos vegetales, etc.)
del suelo (humus), si no existen aportes exgenos. Es- por desnitrificacin. Compuestos azufrados se pueden
tos cambios en el estado de oxido-reduccin de ciertos perder tambin como H2S, mercaptanes, etc. La ecologa microbiana estudia las interrelaciones entre Nociones de jerarqua ecolgica
elementos, que pueden realizarse tanto en aerobiosis los microorganismos y el ambiente y determina las leyes Ecosistema: es el sistema limitado en el espacio consti-
como en anaerobiosis, son procesos muchas veces ge- Solubilizacin-precipitacin generales que gobiernan estas interacciones. Se puede tuido por el conjunto de condiciones energticas, fsicas,
neradores de energa para el microorganismo y en algu- La solubilizacin es un proceso muy importante ya que per- dividir en dos aspectos: qumicas y biolgicas que rodean a estos organismos
nos casos pueden convertir a los elementos en formas mite hacer disponible a muchos elementos insolubles, como
(ambiente). La energa penetra a los ecosistemas sobre- La proporcin relativa de las distintas especies est afec- con gran precisin, mientras que se requieren 102-103 que no obligatoriamente todas las etapas deben cumplir-
todo en forma de luz solar y los organismos fototrfos la tada en cierto grado por el ambiente: los hongos dominan clulas/g suelo para su deteccin por otras tcnicas. se en un ecosistema dado. As, la nitrificacin de sales
emplean para sintetizar nueva materia orgnica. Esta con- en medios cidos de bosques, las bacterias predominan amoniacales puede detenerse por falta de oxgeno, el pH
tiene todos los elementos (C, N, S, P, Fe, etc.) y cuando el en suelos inundados, los actinomicetes en ambientes se- Hibridacin con sondas marcadas puede limitar la entrada del N2 a la tierra por fijacin biol-
organismo muere se libera la energa de sus constituyen- cos, las algas son las primeras colonizadoras en suelos gica, la solubilizacin de fosfatos puede inhibirse por es-
tes qumicos que queda disponible para el ecosistema quemados, erosionados, cuando ste se humedece. ADN-ADN in situ casa actividad biolgica.
o ARN-ADN clulas
permitiendo el desarrollo de nuevos organismos. Estos Membrana
realizan importantes procesos de sntesis y degradacin, Cuadro 3- Actividades de los microorganismos con cidos Los microorganismos actan sobre la materia orgnica y
los auttrofos generan materia orgnica a partir de CO2 y del suelo nucleicos mineral con el propsito de obtener:
desnatura-
los otros son organtrofos y participan en la biodegrada- lizados energa
cin y reciclado de la materia orgnica e inorgnica. reciclan nutrientes unidos inicialmente a la frac- subunidades para sus macromolculas
ADN o ARN clulas
cin orgnica del suelo
hibridacin
Se define para los elementos un ciclo biogeoqumico, cambian el estado de disponibilidad de elemen- vegetales fijacin animales
ADN marcado - atmsfera
en el cual el elemento experimenta cambios en su estado tos especficos para las plantas simple hebra CO2, N2, N2O, CH4, H2
fsico y de de oxido-reduccin a medida que se mueve en compiten con las plantas y entre ellos por los nu- volatilizacin

el ecosistema. trientes esenciales para el crecimiento lavado
pueden realizar simbiosis con plantas, incremen- (elimina el ADN oxidacin
no fijado
minerales oxidados minerales reducidos
El trmino ecosistema puede aplicarse a conjuntos de tan la capacidad de stas para adquirir N o P reduccin
extensin variable: son importantes agentes de biorremediacin en precipitacin

minerales insolubles minerales solubles
microecosistema, como un cultivo microbiano, agrega- ambientes contaminados solubilizacin

Lectura de la
do de un suelo pueden actuar como agentes de biocontrol de fito- seal retenida inmovilizacin mineralizacin

macroecosistema complejo, por ejemplo, un ocano patgenos (radioactividad,
fluorescencia) fijacin materia orgnica
mesoecosistema, como el estudio de un suelo, un es- biomasa microbiana
tanque y su vegetacin A pesar de su gran ubicuidad (los microorganismos son cuantificacin Fluorescent In Situ Hybridization restos vegetales, animales
HUMUS
fcilmente transportados y dispersados, su tiempo de ge- (Fish)
Comunidad o biocenosis: est constituida por todos los neracin es generalmente corto y existen todos los tipos Figura 11- Esquema general de un ciclo biogeoqumico
Figura 10- Determinacin de la estructura de una comunidad
organismos que habitan el ecosistema. metablicos), las comunidades de un ecosistema son ca- bacteriana basada en el anlisis de los cidos nuclecos
ractersticas: el investigador, cuando busca un determi-
Poblacin: est formada por las especies u organismos nado microorganismo, no analiza todos los ecosistemas,
Procesos microbianos
de tipo distinguible, por ejemplo la poblacin de bacterias, sino que tiene idea aproximada sobre donde hallarlo. Esto
de esporulados. se debe a que el ambiente regula la composicin de la
Ciclos biogeoqumicos de los elementos
En las transformaciones microbianas de la materia org-
comunidad bajo la presin de los factores fsicos, qumi-
Los microorganismos participan en las transformaciones nica y mineral encontramos una serie de procesos simul-
Individuo: componentes nicos de la poblacin: clulas, cos y biolgicos.
de los elementos en la naturaleza. Si bien cuando un sus- tneos y opuestos que podemos resumir en los siguien-
hifa, cuerpo de reposo de hongo, espora microbiana.
trato complejo llega a un ambiente particular, aguas, sue- tes 4 pares de procesos.
El ambiente interacta con el microorganismo y se llega a
los, aire, comienza a degradarse en su globalidad, es
Resumiendo, un ecosistema est integrado por: un equilibrio dinmico, ya sea naturalmente, por cam-
frecuente realizar el estudio en base a los ciclos bio- Mineralizacin inmovilizacin
comunidad o biocenosis - poblaciones - individuos bio de estaciones, por ejemplo, o artificialmente, por prc-
geoqumicos de los distintos elementos. As, realiza-
factores abiticos ticas agrcolas como arado, aplicacin de pesticidas, abo-
remos esta abstraccin mental para estudiar las transfor- Mineralizacin
nos, etc. (m)
maciones que sufren los compuestos carbonados, nitro-
Los microorganismos se encuentran en ambientes extre-
genados, azufrados, fosforados, con hierro, etc., en com- Sustancia orgnica Sustancia inorgnica
mos, la diversidad es enorme y especies de bacterias, El ambiente selecciona a las especies que se adaptan a
binaciones orgnicas e inorgnicas, en ecosistemas natu-
algas, hongos, protozoos, se aslan en todos los tipos de las condiciones propias del ecosistema. inmovilizacin
rales, en particular en el ecosistema suelo-planta-hombre.
suelos, en alimentos, aguas, restos orgnicos, animales. (i) + =
(azcares, (CO2, NH4 , NO3 , SO4 , etc)
Sus funciones son variables, algunas se resumen en el Del punto de vista ecolgico, los habitantes de una comu- -
Un ciclo biolgico abarca todas las posibles vas que un Protenas, etc.)
cuadro 3. nidad se pueden agrupar en: indgenas o autctonos e
elemento puede seguir en la naturaleza (figura 11) aun-
duccin endgena de GUS. Puede utilizarse la hibridiza- La informacin sobre secuencias del ADN y del ARN de invasores o alctonos. Estos ltimos, llamados zim- Las superficies son de importancia considerable como
cin de ADN para detectar estos marcadores fenotpicos. numerosos organismos (bacterias, hongos y se extiende genos por Winogradsky (1924), crecen rpidamente cuan- habitats microbianos, los nutrientes se pueden concen-
a los virus) crece muy rpidamente, con el empleo de do estn disponibles sustratos ricos en energa (pajas, trar sobre ellas y estimular el desarrollo de numerosas
1 2 3 4 5 6 tcnicas basadas en empleo de sondas y tecnologas que abonos), los autctonos son los microorganismos que especies. Se emplean portaobjetos solos o con algn adi-
aplican PCR. colonizan los materiales ms recalcitrantes que quedan tivo nutritivo, enterradas en el suelo o sumergidas en
luego de un ataque primario. aguas. Luego de algn tiempo se aprecia en el microsco-
Se determinan tambin actividades enzimticas asocia- pio la formacin de microcolonias, que se adhieren a la
das a organismos particulares. Estas tcnicas permiten Criterio de autoctona: posibilidad de aislamiento repe- pelcula, muy semejantes a las que se forman en superfi-
tambin detectar organismos que no han podido ser ais- tido de la especie en distintas muestras de un mismo cies naturales (biofilms).
lados y cultivados en el laboratorio. Los procedimientos ecosistema, habilidad para usar los nutrientes comunes
en el suelo mismo traen aparejado problemas de conta- del medio y para soportar variaciones del ambiente, alta Nicho ecolgico: Interesa conocer las actividades de los
minacin con sustancias que interfieren en los anlisis. densidad del organismo, que ser mayor en lugares con microorganismos. El que un organismo est presente en
abundantes nutrientes y condiciones favorables como un ecosistema no quiere decir que est activo. As, una trans-
En resumen: algunas aplicaciones de anlisis molecular en el suelo en la vecindad de races (aspecto cuantitati- formacin bioqumica especfica es una buena prueba de
en microbiologa del suelo (Pepper y Josephson, 1998): vo). que el grupo existe y est activo. Se aplica el trmino nicho
a las funciones que el organismo realiza. El ambiente es
Figura 9- Perfil de plsmidos de rhizobios aislados Deteccin especfica de bacterias en el suelo: por Otra aproximacin de clasificacin basada en caracte- como la direccin y el nicho la funcin del organismo.
de ndulos (arriba) y las hibridizaciones PCR se pueden detectar bacterias especficas con gran rsticas de crecimiento es la de la escuela japonesa que
correspondientes (abajo). sensibilidad en ADN extrado directamente del suelo o distingue:
el mismo extrado de clulas aisladas. El uso de son- Los microorganismos en la naturaleza
El uso de marcadores que codifican para la protena luci- das facilita el anlisis, que confirma la identificacin por oligotrofos, que crecen mejor a bajas concentracio-
ferasa se ha extendido mucho ya que la formacin de luz mtodos convencionales. nes de sustrato que en altas. Estos microorganismos Los microorganismos se encuentran en todos ambientes
es fcilmente detectable. El gen lux emite luz va la activi- se distinguen de los que crecen usualmente en me- naturales. En muchos de ellos, donde los organismos supe-
dad luciferasa sobre el sustrato luciferina: la actividad pue- Deteccin especfica de poblaciones microbianas: dios de cultivo con altas concentraciones de nutrien- riores estn ausentes, debido a extremos fsicos o qumicos,
de medirse en medio de cultivo slido o lquido (Rhizo- muchos procesos microbianos son analizados en eco- tes, que se llaman, gran variedad de microorganismos existen y se desarrollan
bium meliloti por siembra de contenidos nodulares, auto- sistemas naturales mediante el uso de sondas especfi- copiotrofos, que en general coinciden con los zimge- como en los casos de acidez extrema, desecacin, salini-
radiografa y visualizacin directa de colonias luminiscen- cas para algunos grupos: nitrificantes, coliformes, de- nos. dad. Los factores del ambiente afectan a los microorganis-
tes), o an en muestras de suelo o aguas. gradadores de herbicidas, etc. (figura 10). mos en la naturaleza tanto como lo hacen en el laboratorio.
Una comunidad puede ser poli o monopoblacional. Por En ambientes naturales, en general, es el nivel y la naturale-
El avance en la puesta a punto de todas estas tcnicas Deteccin de virus en el suelo: son analizados por la ejemplo polipoblacional, en el suelo, en una laguna, en el za de los nutrientes disponibles, quien determinar los nive-
moleculares ha facilitado el seguimiento de un microorga- tcnica de PCR secuencias de virus, luego de su ex- desierto, en cambio, una comunidad integrada por un pales de crecimiento bacteriano. Como estos niveles son en
nismo en ambientes altamente colonizados, como la ri- traccin, lisis y purificacin por filtracin en geles. Los tgeno vegetal es monopoblacional; estas cualidades re- general mucho menores que en el laboratorio, la produccin
zosfera, restos orgnicos en degradacin y seguramente virus ARN deben ser primero transcriptos a ADN con la flejan el aspecto cualitativo de la comunidad. de clulas en la mayor parte de los ambientes naturales es
conducir a importantes avances en los estudios de inte- enzima transcriptasa reversa. menor que en los cultivos de laboratorio.
racciones entre microorganismos y entre microorganismos Especie dominante: es la que exhibe una alta poblacin
con plantas, animales y el hombre. Secuencias del ADN: las secuencias nicas de los mi- o abundancia de filamentos. En general, la comunidad En la naturaleza los microorganismos sufren perodos de
croorganismos son analizadas por varios procedimien- puede poseer dos o ms especies codominantes. abundancia (restos de cultivos, animales muertos), se-
Numerosas tcnicas se emplean para evaluar la actividad tos que amplifica estas secuencias: REP-PCR y ERIC- guido de perodos de limitacin, en los cuales aprove-
biolgica en ambientes naturales, algunas son aplicacio- PCR, analizan secuencias conservadas, repetitivas en Habitat : Es un rea que posee cierto grado de uniformi- chan de los polmeros intracelulares de reserva (cido poli
nes de determinaciones clsicas de la microbiologa y otras puntos diferentes de una bacteria en particular. dad y cuyas caractersticas se supone que son de signifi- -OH-butrico, polifosfatos, etc.). Son escasos los pero-
incursionan en tcnicas moleculares y taxoqumicas que cado ecolgico: superficie de una hoja, plantas o anima- dos de crecimiento exponencial.
permiten el anlisis de las comunidades de ecosistemas Deteccin de genes que codifican actividades miles, el mar, una parcela de suelo frtil, porcin de arena
sin el cultivo previo de los microorganismos activos. Es- crobianas: empleo de genes reporteros, extraccin de de desierto, etc. Su tamao vara. Denota un conjunto de Por ejemplo, el tiempo de generacin de Escherichia coli
tas tcnicas se correlacionan en general con parmetros ARNm, permiten estimar rangos especficos de biodegra- condiciones favorables o desfavorables para la vida, y es en el intestino es de unas 12 horas (dos duplicaciones por
fsicos, qumicos y biolgicos empleados. dacin de xenobiticos, genes lux pueden detectar E. coli, ms especfico que el trmino ambiente. da), mientras que en el laboratorio puede ser de slo 20
minutos. Se estima que ciertas bacterias del suelo se de- vegetales Perfil de plsmidos
sarrollan a menos del 1% de la tasa que muestran en 3 A pesar de que la mayora de la informacin gentica de
2
medios de laboratorio, como reflejo de: 4 microorganismo microorganismo una bacteria puede estar contenida en el cromosoma, al-
bajo suministro de nutrientes 1 gunas bacterias contienen material gentico denominado
la distribucin de los mismos no es uniforme suelo (condiciones fsicas y qumicas) plsmidos, que se pueden extraer. Por electroforesis en
los microorganismos no crecen solos, salvo excepcio- gel de agarosa y coloracin con bromuro de etidio, los
nes, en los ambientes naturales y sufren activa compe- Figura 2- Interacciones en el ecosistema suelo-planta plsmidos se evidencian por una o ms bandas en el gel.
tencia de otros microorganismos Esta tcnica se conoce como perfil plasmdico (figura 9)
que se puede complementar con la hibridizacin con son-
Los eclogos sostienen que un ecosistema estable tiene
das especficas. Dado que el nmero y el tamao de los
diversidad gentica alta de modo de poder tolerar fluctua-
Sucesiones microbianas plsmidos pueden ser caractersticos de un microorga-
ciones del ambiente. Muchos estudios estn dedicados a
nismo, su empleo brinda informacin til sobre la identi-
determinar si los cambios en la composicin de las pobla-
Un principio fundamental del desarrollo de un ecosistema dad de los mismos.
ciones microbianas y la cuantificacin de la diversidad
es la sucesin, o sea los cambios en las poblaciones que
gentica pueden ser empleados como indicadores sensi-
permiten el establecimiento de las llamadas comunida- Las secuencias de cidos nucleicos no slo detectan or-
bles del deterioro en propiedades de los suelos debido a
des climax. En lugar de competir por el mismo sustrato, ganismos especficos, sino que tambin evidencian acti-
prcticas de manejo, labranza, rotaciones, etc.
algunos microorganismos cooperan para realizar una vidades. Los genes reporteros, que indican la actividad
transformacin particular, que no realizaran si actuaran de un gen de inters asociado, estn tpicamente inserta-
solos. Se establece una progresin de cambios en las dos en un opern que contiene el gen que codifica la ac-
poblaciones microbianas a medida que el sustrato es
Ambientes microbianos Figura 8- Anlisis de fragmentos de restriccin en Rhizobium tividad de inters. Esta fusin de genes se logra a veces
metabolizado y las condiciones del ambiente (O2, pH, po- loti y Bradyrhizobium que nodulan Lotus (dendograma con las empleando un transposn, que inserta al azar el gen re-
Acuticos cepas ordenadas de 1 a 24)
tencial redox) cambian. portero en el genoma bacteriano. El proceso produce
Los entornos tpicos son los ocanos, estuarios, pantanos,
mutantes con diferentes fusiones de genes. La expresin
lagos, ros y manantiales. Difieren mucho entre s en pro-
La figura 1 ubica a los organismos productores, consumi- Polimorfismo de fragmentos de restriccin (RFLP) de los genes reporteros da una seal fcil de detectar,
piedades fsicas y qumicas y en las especies microbianas
dores y degradadores en el ecosistema suelo-planta y El mtodo emplea enzimas de restriccin que rompen el como la produccin de -galactosidasa (gen lac z), fcil
activas. Los organismos fotosintticos predominantes son
la figura 2 presenta un esquema de las interacciones en- ADN en determinados lugares produciendo lo que se lla- de detectar colorimtricamente en medio slido.
cianobacterias y algas en las zonas aerbicas y bacterias
tre los integrantes de la comunidad. Las del tipo 1 ocurren man fragmentos de restriccin. Estos numerosos frag-
fotosintticas en las anaerobias. Las algas que flotan reci-
entre la comunidad microbiana y los componentes del mentos pueden ser separados por su tamao mediante Un gran nmero de marcadores genticos se han descri-
ben el nombre de fitoplancton y las de los lechos son al-
suelo, las del tipo 2 entre los microorganismos entre si, electroforesis en gel de agarosa y ser comparados entre to, entre ellos genes de resistencia a antibiticos, como el
gas bentnicas. Son los productores primarios de estos
las del tipo 3 entre las comunidades vegetales y microbia- distintos microorganismos. Posteriormente pueden ser nptII que codifica resistencia a kanamicina, que fue el pri-
ambientes. Los ocanos abiertos son muy bajos en pro-
nas y finalmente las interacciones del tipo 4, que involu- transferidos a una membrana de nylon por la tcnica de mer gen usado como marcador. Este mtodo presenta el
ductividad primaria, mientras que las reas en los ocanos
cran al suelo y la vegetacin, interesan slo accesoria- Southern y uno o ms fragmentos pueden ser detecta- riesgo de expandir resistencias a otros organismos en la
interiores son altas, siendo los lagos y manantiales los de
mente al bilogo del suelo y son dominio de la fisiologa y dos por hibridizacin con una sonda especfica. Este frag- naturaleza.
mayor productividad, donde la concentracin de nutrientes
patologa vegetal. mento puede ser de tamao diferente en los individuos de
minerales requeridos por las algas es abundante y facilitan
una poblacin, caracterizando un polimorfismo. Las son- La sonda construida a partir de un plsmido de la cepa
energa solar el desarrollo de peces y mariscos.
herbvoros
das son diseadas para detectar determinados fragmen- Kim-5, confirma la presencia de la cepa Kim-5 en los ca-
productores primarios consumidores primarios tos polimrficos, asociados a ciertos genes. Algunas se- rriles 1,3, y 4.Las restantes no contienen el ADN Kim-5
vegetales Las relaciones del oxgeno en un ro son de inters, so-
bacterias fotosintticas cuencias polimrficas se repiten innumerables veces una (figura 9) (Pepper y Josephson, 1998) .
y quimioauttrofas bretodo cuando stos reciben mucha materia orgnica
algas restos vegetales luego de la otra a lo largo del ADN y el nmero de repeti-
como aguas servidas y desechos de la industria. Puede
cianobacterias materia orgnica consumidores ciones vara de cromosoma a cromosoma. Deteccin fenotpica de marcadores genticos
del suelo secundarios ocurrir un marcado dficit de O2, como se ve en la figura 3
Genes que codifican enzimas se usaron como marcado-
(Madigan et al., 2000), consecuencia del incremento en
sustancias solubles
Existen sondas especficas para estos loci que en an- res no selectivos, como el xylE que codifica catecol 2,3
microorganismos hombre bacterias hetertrofas. Si hay mucho amonio, ste es oxi-
degradadores consumidor lisis por RFLP proporcionan bandas de ADN en forma oxigenasa, el lacZY (codifica -galactosidasa y lactosa
terciario dado a nitratos por las bacterias nitrificantes. El incremento
de cdigo de barras (DNA fingerprinting) (Hungra, permeasa) y el gusA (-gluconidasa GUS) muy usado
en algas y cianobacterias es una respuesta primaria a los
Arajo, 1994). en estudios de rhizobios en ndulos donde no existe pro-
Figura 1- Organismos en el ecosistema suelo-planta nutrientes inorgnicos, sobretodo el fosfato.
bacterias genticamente diferentes existen en una mues- La enzima aislada de Thermus aquaticus (Taq polimera- culados a la degradacin de la materia orgnica, las
cantidad
tra de suelo (Torsvik et al, 1990). sa), permite amplificar eficientemente el ADN a 72C y no relativa
bacterias y C orgnico
transformaciones de los elementos minerales muy im-
de clulas,
se desnaturaliza a altas temperaturas. Esta enzima pue- concentracin O2 algas y
portantes para la nutricin de las plantas, como el N, P,
de nutrientes
Sondas gnicas de alargar in vitro un pequeo oligonucletido (primer), + -3
cianobacterias S, Fe, Mn, etc.
NH4 ,PO4
Su construccin resulta una tcnica muy especializada que adicionando nucletidos en su secuencia si ste est hi- O2
excede este texto. La metodologa especfica se puede bridizado a una hebra de ADN complementario llamado -
NO3 general, el suelo se describe como un organismo vivo,
consultar en manuales como el de Sambrook et al (1990). molde (template), siguiendo las reglas de complementa- ya que nace por la pedognesis de la roca madre, se
Para su construccin, la secuencia del gen de inters debe riedad de Watson y Crick. Para esto es necesario un ex- ingreso distancia corriente abajo desarrolla por mltiples procesos de degradacin y sn-
ser conocida y ser particular a una especie microbiana: ceso de nucletidos en la solucin que sirven de unida- Figura 3 - Efecto de la llegada de aguas con materia tesis, almacena reservas y puede llegar a morir por mi-
esta secuencia resultar muy til en la deteccin de ese des de montaje de la hlice a complementar en el molde. orgnica a un ro neralizacin gradual si no se conserva su reserva de
organismo. Otras pueden codificar enzimas involucradas El proceso de polimerizacin del ADN en el PCR com- materia orgnica: el humus.
en la fijacin del N2 y su uso puede indicar cuando un prende, por lo tanto, 3 pasos:
A medida que el agua se aleja de la entrada del drenaje,
suelo contiene bacterias con esos genes. Actualmente, Las actividades de los microorganismos en este ambien-
la materia orgnica se consume gradualmente y el conte-
muchas secuencias se encuentran descriptas en la web, El ADN contenido en la secuencia a ser amplificada te altamente heterogneo, difieren drsticamente del com-
nido de O2 regresa a la normalidad. La disminucin del
permitiendo al investigador obtener la que desea para sus es desnaturalizado por el calor, generalmente a portamiento manifestado en medios clsicos de laborato-
oxgeno es indeseable ya que la mayora de los organis-
estudios. La construccin de la sonda implica copiar la 95C rio. Los microorganismos no actan solos; otros microor-
mos superiores requieren este gas y mueren en anaero-
hebra complementaria. Su tamao puede variar de 30 a Los oligonucletidos (primers) se adhieren a secuen- ganismos, la micro y meso fauna, la vegetacin y las pro-
biosis. Se forman adems compuestos de mal olor (ami-
40 pb hasta varios cientos de pares de bases. Algunas de cias complementarias del ADN molde. Este paso se piedades fsicas y qumicas del suelo y la accin del clima
nas, amidas, mercaptanes, H2S) por bacterias anaerbi-
ellas se marcan con un radiactivo (P32 en el P-azcar del realiza a una temperatura menor, que varia segn el y el hombre, contribuirn a exaltar o a inhibir un determi-
cas, algunas de las cuales son tambin txicas para ani-
ADN) o no radiactivos, como resistencia a antibitico. primer utilizado nado proceso biolgico.
males y plantas.
La Taq polimerasa polimeriza el segmento flanqueado
La deteccin de un grupo particular de bacterias se hace por dos primers contiguos, siguiendo el orden dado por Descripcin general del suelo
en una membrana sobre la cual se lisaron las clulas aisla hebra complementaria, en el sentido 5-3 El suelo est compuesto de cinco componentes princi-
ladas antes de que se desnaturalicen ambas hlices. Lo
Terrestres pales: la fraccin mineral, la orgnica, agua, aire y orga-
mismo ocurre con la sonda, que luego de un tiempo en El ciclo se repite muchas veces hasta llegar al nivel de- nismos vivos. El esquema siguiente resume las propor-
El comportamiento de una poblacin microbiana y sus efec-
contacto se renen con la secuencia de bases comple- seado de amplificacin, la que ocurre exponencialmente. ciones de cada uno, aunque los valores varan con los
tos sobre el suelo estn gobernados en gran parte por las
mentaria de la bacteria en estudio, homologa evidencia- Un ADN de doble cadena producir dos hlices dobles suelos y con la profundidad. De la fraccin inanimada, la
caractersticas fsicas y qumicas de ste. El concepto sue-
da por radiofotografas (P32). luego de un ciclo, cuatro luego de 2 ciclos, 8 luego de 3, cantidad de materia orgnica y mineral es relativamente
lo se puede abordar desde distintos puntos de vista:
1024 luego de 10 ciclos y as sucesivamente. De esta for- constante en un sitio dado, mientras que el aire y agua
Southern blots/hibridacin ma se pueden conseguir muchas copias de una zona es- fluctan (representan aproximadamente la mitad del
edafolgico, el suelo es la capa ms externa de la su-
Esta tcnica permite identificar la localizacin de una se- pecfica de ADN. El producto de la amplificacin se so- volumen del suelo y constituyen el espacio poroso)
perficie de la tierra, diferente a la roca madre de la cual
cuencia de inters, por ejemplo, dentro de un plsmido. mete a separacin electrofortica en gel de agarosa, y es (figura 4).
tom origen, por la accin combinada de factores muy
Para ello, todos los plsmidos de la clula bacteriana son coloreado con bromuro de etidio, que al intercalarse entre
diversos como el clima, roca madre, vegetacin, micro-
extrados y separados en un gel de agarosa en electrofo- las bases del ADN puede ser fcilmente visualizado al
flora, en el transcurso del tiempo pedolgico
resis. Luego se transfieren a un membrana y se hibridizan ser expuesto a luz ultra-violeta. gases
con la sonda especfica. Slo aquellos plsmidos con la minerales
agrcola, el suelo es la regin de la tierra que permite la
secuencia homloga a la sonda sern revelados por el En el caso de bacterias, pueden utilizarse primers que
vida de las plantas, del cual obtienen el soporte mec-
marcador usado. reconocen secuencias repetidas en el genoma (rep-PCR). lquidos
nico y los nutrientes necesarios
Con esto se obtiene una serie de bandas de amplificacin
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR, de distinto tamao que son caractersticas de cada cepa
microbiolgico, el suelo constituye un medio nico, ya
Polymerase chain reaction) en particular. La distribucin de las mismas se analiza en
que contiene gran poblacin de bacterias, actinomice- materia orgnica
Constituye una poderosa tecnologa que ha revoluciona- programas de computacin que emplean el principio de la
tes, algas, hongos, protozoos, virus, es uno de los luga-
do las tcnicas en biologa molecular, de gran aplicacin taxonoma numrica, agrupando individuos segn relacio-

res en donde las interacciones biolgicas son ms in- biomasa microbiana (2-5% de C-total)
en: diagnstico clnico, microbiologa ambiental, inmuno- nes de homologa, que aparecen en dendogramas
tensas y donde ocurren los procesos bioqumicos vin- Figura 4- Principales componentes del suelo
loga y muchos otros campos de investigacin. (figura 8, Schneider y De Bruijn, 1996).
La fraccin mineral do por los coloides del suelo, pero los nitratos, formados Cuadro 9- Relacin entre propiedades fsicas, metablicas, protenas fluorescentes, perfil de cidos
Esta fraccin, generalmente menos que el 50% del vo- por la oxidacin biolgica de aquellos son, por el contra- qumicas y microbiolgicas en suelos con labranza grasos, etc.
lumen del suelo, se origin por desintegracin de la roca rio, muy mviles, desplazndose tanto lateralmente como mnima y convencional (LM/LC) (promedio de
madre, meteorizada en el curso del tiempo. Ejerce gran en profundidad. 6 localidades en dos profundidades)
importancia en la disponibilidad de nutrientes, la airea- Ecologa gentica
Parmetros LM/LC a LM/LC a
cin, la retencin y el movimiento del agua y afecta a la La fraccin orgnica
(0-7,5cm) (7,5-15cm)
microflora. Las partculas varan desde gravas de ms Materiales orgnicos de origen animal o vegetal llegan o En los ltimos aos ha habido una eclosin de metodolo-
de 2 mm hasta las arcillas, menores a 2 micras, visibles son formados en el suelo, donde son descompuestos por C-orgnico total 1,41 0,99 gas genticas para analizar las comunidades microbia-
slo al microscopio. Forman agregados con la materia las actividades microbianas. La materia orgnica que no N-total 1,29 1,01 nas a nivel de laboratorio y en ecosistemas naturales. Son
orgnica que contribuyen a la estructuracin del suelo. es completamente degradada contribuye a la formacin densidad 1,04 1,05 relativamente simples aunque el equipamiento y los reac-
espacio poroso con agua 1,28 1,11
Qumicamente estn constituidos por aluminosilicatos, del humus, material amorfo, formado por una mezcla com- tivos, pueden limitar su empleo masivo. Detectan peque-
aerobios totales 1,35 0,66
xidos y carbonatos. Las arcillas presentan la mayor pleja de sustancias altamente polimerizadas. Dentro de bacterias 1,41 0,68
as cantidades de material gentico y tambin permiten
reactividad ya que poseen una gran relacin superficie/ esta fraccin, una pequea proporcin es soluble en agua hongos 1,35 0,55 clasificar microorganismos en grupos filogenticos.
volumen. (azcares, aminocidos), pero la mayor parte consiste en anaerobios facultativos 1,31 0,96
materiales oscuros, insolubles. anaerobios totales 1,27 1,05 La doble hlice del ADN es la base de dos anlisis muy
La fraccin mineral presenta propiedades qumicas y acti- importantes:
vidades variables segn el tamao de las partculas. La El humus constituye la reserva nutritiva de un suelo, por sondas genticas, construidas para reconocer secuen-
arena y el limo estn formados por cuarzo, feldespatos, sus propiedades coloidales retiene e intercambia catio- Medida de la biodiversidad cias especficas de un microorganismo
micas, y otros silicatos. Su actividad qumica es casi nula nes bsicos, se asocia a minerales coloidales y puede ser la reaccin en cadena de la polimerasa, conocida por
a corto plazo. La arcilla est constituida por silicatos de adsorbido en la superficie de partculas minerales. Se ha recurrido a mtodos genticos y bioqumicos que su abreviatura en ingls (PCR)
estructura folacea semejante a las micas y se caracteri- no requieren el aislamiento y cultivo previo de los micro-
zan por presentar propiedades coloidales, con gran rela- Componentes lquidos y gaseosos organismos activos en un ecosistema. Estas tcnicas pueden tambin emplearse a secuencias
cin superficie a volumen con predominio de cargas elec- El agua del suelo est sujeta a fluctuaciones que afectan de ARN: ribosomal (rARN), mensajero (mARN) y de trans-
trostticas negativas. Estn formadas por minerales se- profundamente a las poblaciones microbianas y a las ra- Histricamente una variedad de mtodos bioqumicos, ferencia (tARN). Dos tipos, el rARN y el mARN se usan
cundarios del grupo de la montmorillonita, illita, caolinita, ces. Contiene solutos como sustancias minerales y org- serolgicos y fenotpicos se han empleado para caracteri- mucho en anlisis genticos, estudios filogenticos y en
etctera. nicas adems de gases y constituye el medio nutritivo l- zar bacterias, tales como rhizobios y otras asociadas a estimaciones de actividad metablica. La secuencia de
quido para los microorganismos. las plantas: perfil de protenas totales, de plsmidos, an- bases del ARN se transcribe a secuencias conservadas
Las arcillas y el complejo arcilla-humus retienen iones de lisis de cidos grasos, resistencia intrnseca a antibiti- del ADN.
signo contrario, generalmente cationes. Estos estn en equi- Si el suelo est saturado con agua, el exceso drenar por cos, sensibilidad a bacterifagos e isoenzimas.
librio con la solucin del suelo, con los que se pueden inter- gravedad. La cantidad de agua retenida luego de un es- Numerosos trabajos sealan la utilidad y las limitaciones
cambiar. Cuando aumenta la concentracin de un catin currimiento de 2-3 das se denomina capacidad de re- Ms recientemente el desarrollo y la aplicacin de mtodos de estos mtodos basados en caracteres genotpicos,
en la solucin, por ejemplo al agregar un fertilizante, el ca- tencin de agua o capacidad de campo y segn la tex- moleculares, basados en estudios de cidos nucleicos, han sobre todo en estudios de microorganismos asociados a
tin agregado desplaza una parte de los otros cationes re- tura, esta tensin puede variar entre 0,1 y 0,5 barias para permitido grandes avances en la identificacin y determi- plantas. El aislamiento del cido nucleico no siempre es
tenidos por el coloide, que a su turno pasan a la solucin. suelos de textura gruesa o fina, respectivamente. En genacin de relaciones filogenticas de organismos de im- requerido para la aplicacin de mtodos de deteccin
La cantidad total de cationes que puede retener un suelo neral, se toma como promedio una succin de 0,33 ba- portancia para la agricultura y el medio ambiente. molecular, que involucran tratamientos enzimticos o
constituye su capacidad de intercambio (CIC), que se ex- rias. Cuando el suelo se seca, los espacios porosos se amplificacin de trozos de ADN por la reaccin en cadena
presa en miliequivalentes/100 g de suelo. Los cationes se llenan progresivamente con aire, hasta que toda el agua Los mtodos ms recientes pueden agruparse en dos de la polimerasa (PCR). Para este estudio puede utilizar-
pueden ordenar por su capacidad de adsorcin: capilar es removida, quedando el agua ms fuertemente categoras (Bottomley, 1998): se una colonia bacteriana entera, un trozo de planta colo-
retenida: osmtica e higroscpica. nizada por un hongo micorrtico, o un ndulo entero en el
Al+3 > H+ > Ca+2 > Mg+2 > K+ = NH4+ > Na+ los basados en la caracterizacin de los cidos nuclei- caso de rhizobios (Schneider y De Bruijn, 1996).
A medida que el suelo se seca, resulta ms dificultoso cos, que permiten agrupar cepas en grupos coheren-
Muchas sustancias asimiladas por |os microorganismos remover el agua residual. Es posible medir, por variedad tes, pudiendo establecerse relaciones filogenticas y Algunas de las tcnicas utilizadas para caracterizar ci-
son aninicas, como los bicarbonatos, nitratos, fosfatos, de mtodos, la presin de succin necesaria para llevar diferenciar cepas de igual gnero y especie dos nucleicos incluyen: extraccin del ADN de una mues-
sulfatos, molibdatos, pero la capacidad de intercambio el suelo a un determinado nivel de humedad. Esta pre- los basados en la deteccin fenotpica de marcado- tra de suelo y determinacin del rango de reasociacin de
aninico no es apreciable. El amonio es fcilmente reteni- sin es normalmente medida en cm de succin de agua, res genticos, como resistencia a antibiticos, enzimas ese ADN. Se ha determinado que unas 4.000 tipos de
Este dato que representa 0,15% del peso del suelo, pue- establecimiento de los umbrales de equilibrio o desea- o ms convenientemente como su log10, conocida como ses, nutrientes minerales y orgnicos, y el suelo les sir-
de llevarse a kg/ha: una hectrea de suelo de 0,20 m de bles de un indicador, se efecta a partir de los valores escala de pF, cuyos valores varan entre 0 y 7. ve como tampn en los cambios bruscos que pueden
profundidad pesa: medios resultantes de estudios realizados con anteriori- ocurrir en el pH. Los microorganismos contribuyen, con
dad, en los mismos suelos. La determinacin de estos Algunos niveles de importancia biolgica: otros organismos, a la alteracin de la roca madre, for-
10.000 m2 x 0,2 m = 2.000 m3 (d aprox. = 1g/cm3), que lmites de comparacin constituye una limitante en mu- mando la reserva orgnica (humus), pero participan tam-
equivale a un peso de 2.000.000 kg de suelo. La biomasa chos estudios. 400 barias (aproximadamente 400 atmsferas, pF 5,6), bin a su degradacin.
bacteriana ser de: tensin sobre la cual cesa toda actividad microbiolgica
El cuadro 8 seala las determinaciones ms corrientes en el suelo el desarrollo microbiano ms extensivo ocurre como mi-
2,0 x 106kg x 1,5 x 10-3 kg = 3.000 kg/ha en la evaluacin de la actividad biolgica de suelos y 15 barias (aproximadamente 15 atm; pF 4,2), tensin crocolonias en la superficie de las partculas del suelo,
aguas, que incluyen anlisis fsicos, qumicos y biolgi- en la cual la mayora de los vegetales alcanza el punto como se aprecia en la figura 5 (Madigan et al.,2000).
El cuadro 7 presenta resultados de evaluaciones prome- cos, a los cuales se van agregando aquellos que anali- de marchitamiento permanente
dio del nmero y la biomasa de diferentes grupos de mizan presencia de microorganismos sin aislarlos (biodi- 1/3 de baria (aproximadamente 1/3 atm; pF 2,5), hume- Como resumen, el cuadro 4 resume los factores que inci-
croorganismos del suelo. Ntese la importancia de la bio- versidad). dad correspondiente a la humedad equivalente en sue- den en la actividad biolgica.
masa fngica, hecho no reflejado por el recuento de pro- los de textura media a gruesa, es decir la humedad de
pgalos/g de suelo. La seleccin de parmetros como indicadores biolgi- una muestra de suelo que luego de haber sido satura- Cuadro 4- Factores que afectan la actividad
cos de la calidad del suelo, sensibles a cambios en el do, se somete por 30 minutos a una fuerza centrfuga microbiana
Cuadro 7- Nmero aproximado y biomasa (kg/ha uso y manejo del mismo y que se correlacionen con las de 1000 g (aproximadamente 2.440 rpm).
de suelo) de organismos en el suelo clsicas determinaciones fsicas y qumicas, es motivo caractersticas de los propios microorganismos
de numerosos estudios (Pankhurst et al, 1997; Smith et La aireacin y la humedad estn directamente relacio- disponibilidad de nutrientes: materia orgnica, O ,
2
Grupo Nmero/g suelo Biomasa microbiana N, S, P, etc.
kg/ha
al, 2000, van Bruggen y Semenov, 2000, Frioni et al, nados ya que la porcin del espacio poroso que no con-
2003, Albanesi et al, 2003). tiene agua est ocupada por gases, que constituyen la factores fsicos: temperatura, aireacin humedad, pH
bacterias 3-500 millones 300-10.000
atmsfera del suelo. Comnmente, la concentracin de manejo: aireacin/compactacin; distribucin de
actinomicetes 1-20 300-3.000
hongos 5.000-100.000 500-5.000 CO2 excede a la atmosfrica en un factor de 10 o 100 y el la MO disponibilidad de agua; temperaturas en
levaduras 1.000-100.000 100-5.000 Cuadro 8- Parmetros empleados como O2 es menos abundante. primavera
algas 1.000-100.000 10-1.500 indicadores de la calidad del suelo residuos vegetales o aplicacin de abonos
protozoos 1.000-100.000 5-200
10 11
virus (bacterifagos) 10 -10 Estas variaciones estn relacionadas con la actividad res- sistemas de cultivo y rotaciones
nemtodos 10-100 1-100 Indicadores Indicadores Indicadores piratoria de la poblacin del suelo: vegetal y microbiana. interacciones con otros microorganismos
lombrices 10-1000 fsicos qumicos biolgicos interacciones con otros organismos (plantas, ani-
textura C-orgnico total recuentos, biomasa Un suelo bien aireado, desde el punto de vista micro- males)
microbiana biolgico, es aquel en el cual los procesos que requie-
Indicadores de la calidad del suelo capacidad pH enzimas, respiracin ren O2 proceden a rpida velocidad.
de campo Un suelo mal aireado est asociado a un mal drenaje y
Los cambios en la calidad del suelo son avaluados por profundidad conductividad medida de la biodiversi- saturacin como ocurre en general en suelos pesados,
indicadores y stos deben ser comparados con los valo- elctrica dad: perfil de cidos nu- con muchas arcillas que poseen gran proporcin de
res deseables (niveles umbral o lmites crticos) a diferen- cleicos, de cidos gra- microcolonia
microporos que retienen fuertemente el agua. El oxge- arcilla
tes intervalos de tiempo, en el agroecosistema seleccio- sos, perfiles metablicos
no es poco soluble en agua y nuevos procesos ocurren,
nado. El problema que se presenta, como se comprende- densidad N, P, K, extrables N-mineralizable muchos de ellos perjudiciales para los vegetales, por
r, es determinar cuales son los valores que se conside- aire materia
ejemplo, se libera N2 o CH4, aparecen inhibidores org- orgnica
ran deseables, los de un suelo saludable. En general el cuarzo
nicos y se acumulan S=, Fe++, Mn++.
umbral de comparacin se obtiene de los ecosistemas no El cuadro 9 es una tpica aplicacin de estos parmetros arcilla cuarzo
agua
perturbados, por ejemplo las actividades de un suelo bajo en la evaluacin del efecto de distintos sistemas de la- aire
Vemos as que las caractersticas del suelo determinan:
bosque se comparan con las del mismo suelo no alterado branzas en los suelos. Se aprecia una mayor acumula-
arcilla
(campo natural) (Sicardi et al., 2004). cin de materia orgnica, N% y grupos microbianos con
el ambiente donde se encuentran los microorganismos
prcticas que como las conservacionistas no exponen al
la composicin de la poblacin microscpica tanto cuali
En reas donde ya no existen ecosistemas naturales, el humus a la rpida biodegradacin.
como cuantitativamente. Toman del suelo el agua, ga- Figura 5- Agregado de suelo
Mtodos de estudio en ecologa microbiana La presencia de una alta poblacin de un determinado La biomasa microbiana se determina por: C-biomasa: F- NF/k
grupo fisiolgico no significa que el proceso se est reali- recuento del nmero de clulas o midiendo la longi- Donde: F-NF es la diferencia en los flujos de C-CO2 entre
Los mtodos que se aplican a estudios de ecologa mi- zando. Una poblacin abundante puede resultar inactiva, tud de micelio presente en una muestra, calculando el la muestra fumigada (F) y la no fumigada (NF) y k es la
crobiana se resumen en el cuadro 5: si no se renen las condiciones necesarias. Se determi- volumen y peso de tales propgulos al multiplicarlo fraccin del C de la biomasa mineralizado a CO2 en el
nan en el laboratorio, ii) reales, que se evalan en el por el peso especfico, se puede calcular el peso de curso del perodo de incubacin (usualmente entre 10 y
Cuadro 5- Tcnicas de estudio en ecologa terreno (in situ), donde interactan todos los factores los microhabitantes de una muestra de suelo, agua, 14 das).
microbiana abiticos. Resultan ms difciles de determinar: la respi- alimentos
racin en el terreno requiere la instalacin de campanas tcnica de fumigacin e inoculacin (FI) (Jenkinson Estos valores obtenidos a partir de cultivos puros de bac-
Forma y ordenamiento de los microorganismos para recoger el CO2. La evaluacin de la nitrificacin en y Powlson, 1976) al desinfectar el suelo con cloroformo terias y hongos enriquecidos con C14 varan entre 43 y
in-situ suelos luego del agregado de fertilizantes nitrogenados la mayora de los microorganismos muere y sus restos 50% (0,43 a 0,50) y la mayora de los autores emplean el
Lmina enterrada, microscopa ptica, fluorescen- en el campo, requiere medidas de la evolucin de son mineralizados al reinocularlo con suelo fresco. Se valor 0,45. En suelos minerales se suele emplear 0,33. El
te, anticuerpos fluorescentes, sondas marcadas N-(NH4+, NO2-, NO3-) por distintas tcnicas: desplazamiento miden los picos de CO2 de ambas muestras luego de desconocimiento de esta constante es una de las limita-
Aislamiento y recuentos y destilacin, por empleo de electrodos especficos, colo- un perodo de incubacin (Anexo prctico). ciones del mtodo.
Recuentos de viables: rimetra, etc. que se realizan en el laboratorio, pero los
microflora total, algas, hongos, etc. procesos ocurrieron en el campo. Una pequea fraccin de la materia orgnica es rpida- Idea de biomasa de los diferentes grupos micro-
grupos fisiolgicos: celulolticos, fijadores de N , mente convertida en CO2 (2,3-3,4% del carbono del sue- bianos
2
amilolticos, nitrificantes Los procesos que involucran prdidas de elementos se lo) y representa la biomasa. Este constituye uno de los Una forma til de expresar la densidad de los distintos
Biomasa microbiana C, N, P, de la biomasa (kg/ha) evalan por la liberacin de gases, en dispositivos cerra- mtodos ms interesantes propuestos en los ltimos aos grupos microbianos en el suelo, es sealando su bioma-
i) Recuentos y peso de cada microorganismo dos y anlisis en cromatografa gaseosa (N2, N2O, CH4, para evaluar la fraccin viva de la microflora del suelo y sa en kg materia viva/ha.
ii) Mtodo de fumigacin-incubacin: diferencias H2, CO2) refleja variaciones debidas a prcticas de manejo, uso de
en flujo de C-CO2 entre muestras fumigadas y pesticidas, etc. Ejemplo, por recuentos: 1g de suelo frtil puede con-
no fumigadas con cloroformo y reinoculadas con El empleo de elementos marcados: C14, N15, S32 etc. tener 5m de micelio fngico, 1x108 clulas bacterianas,
suelo fresco resulta muy til en estudios ecolgicos. tcnica de fumigacin-extraccin (FE): que consiste 1x106 esporas de actinomicetes. Si consideramos el peso
iii) Mtodo de fumigacin-extraccin: el C, N, P, de en extraer el carbono, el nitrgeno o el fsforo, lbiles de una bacteria o actinomicete como 1,5x10-12g y que
la biomasa muerta se extrae y se cuantifica Estos estudios brindan informacin sobre los tipos micro- de la microflora, que se valoran por tcnicas clsicas 1m de micelio fngico puede alcanzar 9,4x10-5g, la bio-
Actividad biolgica global bianos, biomasa (material vivo) y la funcin y se realizan (oxidacin con dicromato de potasio en caliente y valo- masa total de esta microflora llegara a 6,0x 10-4g, la que
Respiracin: aerobia (CO2, O2), anaerobia (N2, CH4, tanto en comunidades en su ambiente natural (sinecolo- racin espectrofotomtrica) (Schinner et al., 1996). representa menos del 0,06% del peso total del suelo
etc) ga) como sobre especies aisladas en condiciones de la- (1 g). Este dato puede ser en realidad menor, ya que el
Enzimas: deshidrogenasas, fosfatasas, ureasas, hi- boratorio (autoecologa). Pero, para lograr una compren- La tcnica de fumigacin presume: peso promedio celular se determin en ensayos de la-
drolasas sin completa de los microorganismos, se combinan am- 1- Que todos los microorganismos son muertos durante boratorio, en condiciones nutricionales ms favorables
Actividad metablica: evaluacin de productos fi- bas aproximaciones. el proceso y el C de los organismos muertos es ms que las de campo.
nales (CO2, amonio, nitrato) o iniciales (sustratos) fcilmente mineralizado que la de los vivos. La degra-
Medida de la bidiversidad: Estudios de los mi- El hombre no estudia estos temas por simple curiosidad, dacin del humus nativo ocurre al mismo ritmo en sue- Un suelo arenoso, con rea superficial de partculas baja
croorganismos sin aislamiento previo sino por su vinculacin con la fertilidad del suelo, depura- los fumigados y en no fumigados. (72 cm2/g), tendra slo el 0,02% de la superficie de sus
Extraccin de ADN y su reasociacin cin de aguas, deterioro de alimentos, biorremediacin 2- El solo efecto de la fumigacin es matar a los microor- partculas colonizadas por bacterias. Se comparan las
Secuenciacin del ARN ribosomal (16S y 23S) de ambientes. Estos conocimientos se emplean luego ganismos y la muerte de los mismos en las muestras imgenes al microscopio electrnico de partculas de suelo
Composicin de lpidos para dirigir estos procesos en forma beneficiosa. no fumigadas es despreciable. colonizadas con la observacin de la vegetacin desde
Perfiles metablicos: utilizacin de hidratos de C, 3- La fraccin del C de la biomasa muerta mineralizada un avin, en un desierto. En el ejemplo anterior vimos que
se evala diversidad fisiolgica o funcional en un perodo dado de tiempo es similar para todos los 1g de suelo frtil puede contener 109 bacterias/g; si el vo-
Determinacin de la forma y ordenamiento de suelos en estudio. lumen de cada una de ellas es de 1 micra3 y su densidad
Es necesario distinguir actividades: i) potenciales, que los microorganismos in situ media de 1,5 g/cm3, tenemos que su peso ser:
se evalan en el laboratorio (in-vitro) y tienen un valor re- Esta ltima presuncin no es enteramente vlida, en sue-
lativo de comparacin de situaciones (suelos, ecologa, El estudio de los microorganismos in-situ tiene la ventaja los que reciben grandes cantidades de sustratos frescos, P = V x d = 10-12 cm3 x 1,5g/cm3 = 1,5 x 10-12g
manejo) ya que reflejan lo que el ecosistema podra ren- de permitir al eclogo microbiano medir los efectos de o aquellos muy arcillosos que adsorben materiales libera-
dir si las condiciones fueran las ptimas (temperatura, ai- cambios fsicos y qumicos en una muestra aislada. Sin dos por las clulas lisadas. Biomasa de bacterias/g suelo = 1,5 x 10-12 x 109 =1,5 x 10-3g/g
reacin, nutrientes). embargo, los estudios efectuados en aislamientos de es-
Las enzimas del suelo no se recuperan fcilmente, y po- otra de las herramientas ms empleadas en la evaluacin pecies activas, contribuyen a completar la informacin tes, el investigador busca aquellos ambientes en donde el
cas veces son aisladas en forma pura. Ellas estn inmo- de transformaciones del N en ambientes naturales. sobre su nmero y actividades. Se emplean procedimien- organismo deseado predomina. La pasteurizacin del in-
bilizadas con arcillas y el humus. En el estudio de microambientes, se emplean micro- tos microscpicos para la observacin in-situ, incluso se culo (80C, 15 minutos) al matar clulas vegetativas per-
electrodos (de O2, S=, pH, amonio) para evaluar proce- filman eventos en el tiempo. mite aislar muchos organismos esporulados en distintos
La actividad enzimtica flucta, como las poblaciones mi- sos biolgicos en la naturaleza. medios de enriquecimiento.
crobianas con condiciones biticas y abiticas. Las activi- El suelo no debe alterarse y la estructura se mantiene por
dades son particularmente altas en suelos productivos ri- La tcnica de percolacin (Dommergues, Mangenot, impregnacin con gelatina o resinas. Cortes finos permi- Winogradsky (microbilogo sovitico, 1856-1953) fue el
cos en materia orgnica. Muchos factores como la hume- 1970), se emplea en evaluacin de la cintica de algunos ten la observacin al microscopio luminoso o en el elec- primero en evaluar la actividad de un grupo de especies
dad, temperatura, aireacin, cambios estacionales, prc- procesos de mineralizacin o de oxidorreduccin. Se si- trnico por transmisin o por barrido de superficies. en el suelo mismo, en lugar de hacerlo con una especie
ticas de manejo, la forestacin, etc. ejercen influencias en mula el perfil del suelo colocndolo en una columna de aislada, en medio artificial. El suelo se humedece conve-
la presencia y abundancia de enzimas. vidrio. El metabolito en estudio se recicla a travs del sue- La microscopa fluorescente permite visualizar las rela- nientemente hasta formar una pasta (tcnica de la tierra
lo (cclica o acclicamente) y la poblacin se investiga como ciones de bacterias y hongos con partculas orgnicas e empastada) con el agregado de alguna sustancia nutrien-
una unidad biolgica. Se emplea para el estudio de la hi- inorgnicas. Es posible efectuar aislamientos con micro- te para el grupo microbiano que se desea exaltar.
Actividad bioqumica global drlisis de numerosas sustancias, la oxidacin del amo- manipulador; las bacterias ofrecen ms dificultad por su
nio, de sulfuros, etc. Peridicamente se extraen muestras pequeo tamao y mayor espaciamiento. La rizsfera ofre- El suelo se incuba en cajas de Petri hasta el desarrollo de
Se compara la capacidad de degradacin de un sustrato del lquido percolante y se analizan los metabolitos, en ce un hbitat muy favorable para su proliferacin y se han colonias en su superficie. Esta tcnica se sigue emplean-
particular midiendo su desaparicin por prdida de peso funcin del tiempo. desarrollado tcnicas muy precisas que muestran la rela- do actualmente, por ejemplo, para poner en evidencia r-
o anlisis qumico o indirectamente siguiendo la produc- - -
cin de clulas de la raz con microorganismos de inters pidamente la carencia del suelo en ciertos nutrientes como
log N (NO + NO ) g/ml
cin de metabolitos, o por respirometra. La muestra (suelo, 2 3 (Rhizobium, Azotobacter, etc.) empleando anticuerpos fluo- fsforo o calcio. Azotobacter, muy exigente en fsforo, cre-
agua, restos orgnicos, alimentos) se incuba con la sus- 3,0 rescentes especficos. ce solo alrededor de las fuentes de este elemento, colo-
tancia cuya biodegradacin se desea evaluar: protena, 2,5
cadas sobre el suelo empastado.
cidos, hmicos, almidn, en condiciones controladas de La microscopa ptica: la clsica tcnica de Rossi y Cho-
laboratorio (actividad potencial) o en el campo (activi- 2,0 lodny, entierra un portaobjeto solo o con un film de nu- La columna de Winogradsky se emplea aun para el
dad real) y se sigue la desaparicin de la sustancia o la 1,5 trientes, permite observar cambios de la distribucin es- enriquecimiento de bacterias fotosintticas purpreas y
aparicin de productos del metabolismo: amonio, nitra- pacial de los microorganismos en el tiempo. Son emplea- verdes (capitulo 3). Este modelo se ha empleado mucho
tos, sulfatos. dos otros materiales transparentes como celulosa, cuti- para enriquecer variedad de procariotas, tanto aerobios
5 10 15 20 das na, quitina. como anaerobios: la columna se enriquece con un sus-
Estas tcnicas evalan la actividad de un grupo grande Figura 7- Actividad bioqumica en suelos: percolacin cclica trato particular cuya degradacin se desea estudiar y se
de microorganismos (grupos fisiolgicos) sin detener- de una sal de amonio deja un tiempo para que estos microorganismos se se-
se en la caracterizacin de gneros o especies respon- Aislamiento y recuento de los microorganis- leccionen. Al enriquecimiento en la columna sigue el ais-
sables. La figura 7 indica que la reaccin de oxidacin del amo- mos en medios selectivos lamiento en cultivo puro sobre agar, pudindose ob-
nio es una actividad bacteriana ya que los hongos o ac- tener especies de crecimiento lento, quiz ecolgicamen-
El empleo de modelos computabilizados constituye una tinomicetes no exhiben incrementos logartmicos en la Rara vez un ambiente natural contendr un slo tipo de te ms importantes. Todo aislamiento termina en medio
invalorable ayuda para el eclogo y su empleo facilita las actividad bioqumica. La velocidad de reaccin se pue- microorganismo, en la mayor parte de los casos existe slido, dando colonias originadas por la progenie a
interpretaciones. de medir mejor por la acumulacin de nitrito y nitrato, una gran variedad. Los microorganismos se aslan de la partir de una sola clula.
que por la desaparicin del amonio, que puede ser ad- naturaleza en cultivos puros para su identificacin y el
El empleo de radioistopos, microelectrodos e isto- sorbido a los coloides. estudio de su autoecologa. Los medios empleados son
pos estables ha contribuido mucho en la evaluacin de muy numerosos: generales, selectivos, diferenciales, etc. Recuentos
la actividad microbiana en ambientes naturales. Estos procedimientos permiten el aislamiento o bien el re-
Evaluacin de la biomasa microbiana cuento de viables (medios lquidos o slidos). El cuadro 5 Las densidades microbianas se evalan por diferentes
As, en evaluacin de la fotosntesis se mide la captacin presenta algunos ejemplos en el aislamiento de bacterias. mtodos de recuento:
del CO2-C14 en las clulas y con S35 los procesos de oxi- La fraccin de la materia orgnica que se encuentra en
do-reduccin del azufre. La metanognesis en ambientes clulas microbianas se emplea mucho como parmetro El xito del enriquecimiento requiere el uso de una fuente de viables en medios lquidos o slidos o en plantas en
naturales se puede evaluar por la conversin del CO2 de actividad biolgica ya que son los microorganismos apropiada de inculo. Si bien los microorganismos son caso de simbiosis. No existe un medio de cultivo que per-
marcado a metano marcado en presencia de H2. El N15 es los agentes que catalizan los procesos biolgicos. muy ubicuistas y se encuentran en casi todos los ambien- mita el desarrollo de la poblacin microbiana hetertrofa.
Se usa medio con extracto de suelo y una fuente de car- cromatografa gaseosa, con detector de conductividad La determinacin de la actividad deshidrogensica de los deshidrogenasa, que se relaciona con el nivel de materia
bono y energa (glucosa). Ms frecuentemente se deter- trmica. suelos es muy empleada por distintos grupos de trabajo, orgnica descomponible y con la biomasa microbiana del
minan las poblaciones de bacterias de acuerdo a los gru- eliminando completamente el oxgeno y reemplazndolo por suelo. La evolucin de las deshidrogenasas y el CO2 fue-
pos fisiolgicos de inters para el investigador, para los La absorcin del O2 se mide por electrodos especficos o un aceptor artificial de electrones, como el tricloro fenil ron las determinaciones que permitieron evaluar ms r-
cuales es posible formular medios y condiciones de culti- en modificaciones del aparato de Warburg, con recipien- tetrazolio (TTC) o el iodo nitrofenil tetrazolio (INT), que pidamente respuestas de la microflora del suelo frente a
vo selectivos. (Anexo prctico). tes internos que permiten muestras de suelos de 10-20 g, se reducen a tricloro fenil formazn (TPF) o iodo nitro- diferentes manejos del suelo.
los cambios de presin se miden a volumen constante, el formazn (INP), rojos, que se extraen con acetona o me- Un grupo importante de hidrolasas son evaluadas con el
de totales o microscpicos, evalan poblaciones viables CO2 se recoge en solucin alcalina. tanol y se evalan a 485 nm frente a curva patrn (figura 6). diacetato de fluorescena. Slo luego de la hidlisis bio-
y no viables de bacterias en suelos: en general 108-109 lgica se libera la fluorescena, que se evala en el es-
clulas/g de suelo seco. Los recuentos de viables no re- Es necesario trabajar al abrigo de la luz, pues estos acep- pectrofotmetro, frente a curva patrn.
presentan un 10% de estas cifras, y muchas veces me- Actividad enzimtica tores de electrones son fotosensibles.
nos del 1%. Es de hacer notar que las enzimas en suelos y aguas no
Las actividades de los microorganismos requieren la par- Se encontraron correlaciones significativas entre consu- se determinan directamente, por anlisis de sus molcu-
Las bacterias del suelo raramente se encuentran aisla- ticipacin de un conjunto de enzimas. La actividad de una mo de oxgeno y el nmero de bacterias con la actividad las, sino indirectamente por su capacidad de transformar
das, sino que se agrupan en colonias (figura 5) y muchas de ellas, bien escogida, puede reflejar la actividad biolgi- una cantidad dada de un sustrato orgnico en productos
H
veces resulta difcil separarlas al efectuar las suspensio- ca global. El cuadro 6 muestra algunas de las enzimas N N +
N N conocidos en un tiempo dado, bajo condiciones controla-
nes-diluciones, para los recuentos de viables. Otra limita- evaluadas en los suelos. + 2e + 2H +
+ H + Cl das, de temperatura, pH, concentracin inica. Se miden,
+
N N
cin es la adsorcin sobre partculas de humus o arcillas, N

N por lo tanto, actividades potenciales.
Cl
que disminuye los recuentos de bacterias. Agregando un antisptico, como el tolueno, se logra en TTC (incoloro) TPF (rojo)
parte detener la proliferacin microbiana durante el pero- Figura 6 - Actividad deshidrogenasa con triclorofeniltetrazolio Los mtodos de anlisis pueden encontrarse en: Schinner
do de incubacin y pueden evaluarse las enzimas libera- (TTC) como aceptor artificial de electrones et al., 1999, Tabatabai, 1994, Burns, 1978, Anexo prctico.
Actividad biolgica global das por los microorganismos, los vegetales y animales.
Son actividades potenciales, evaluadas en el laboratorio, Cuadro 6- Algunas enzimas en el suelo
Sin detenernos en el estudio de grupos particulares de bajo condiciones controladas.
organismos de un ecosistema dado, muchas veces inte- Sistema enzimtico Reaccin que cataliza
resa conocer globalmente su actividad mediante el em- Ciertas enzimas son ubicuistas, se encuentran virtualmen- y amilasa Hidrlisis de enlaces glucosdicos y 1-4
= + =
pleo de tcnicas que evalan la actividad de la micropo- te en todos los tipos de suelos, como la ureasa, catalasa, arilsulfatasas R-SO3 + H2O R-OH + H + SO4
blacin en su conjunto. Son tcnicas comparativas em- fosfatasas y los varios tipos de peptidasas. Otras pueden asparaginasa asparagina + H2O aspartato + NH3
pleadas para informar rpidamente sobre la potenciabili- producirse en el suelo bajo ciertas condiciones. catalasa 2 H2O2 2 H2O + O2
dad biolgica de estos ambientes. celulasa Hidrlisis de enlaces glucosdicos 1-4
Entre las hidrolasas se evalan la sacarasa, amilasa, quitinasa Hidolisis de enlaces 1-4 aminoglucanos
Actividad respiratoria celulasa, incorporando a muestras de suelo solucin con deaminasa Enlace amida + H2O cido carboxlico + NH3
- -
En el caso del suelo se correlaciona esta actividad con el el sustrato especfico. Luego de una incubacin apropia- deshidrogenasas X-2e + aceptor de electrones (colorante) X + aceptor-2e
contenido de materia orgnica, humedad y prcticas de da en condiciones controladas, se extraen los productos fenoloxidasas Difenol + 0,5 O2 quinona + H2O
-3
manejo. Pero se incluye el CO2 de la mesofauna y de las de la hidrlisis, determinndose los azcares reductores, fitasas Hexafosfato de inositol + 6 H2O inositol + 6 PO4
races, resultando difcil distinguir la contribucin de cada durante el tiempo de incubacin. Es muy empleado el ace- y galactosidasa Galactsido + H2O ROH + galactosa
uno en ensayos de campo. La actividad in situ se determi- tato de fluorescena como sustrato de numerosas hidrola- y glucosidasa Glucsido + H2O ROH + glucosa
Hidrolasas, en general Diacetato de fluorescena (DAF) fluorescena
na evaluando volmenes conocidos de la atmsfera so- sas, evalundose la fluorescena liberada.
lipasa Triglicrido + 3 H2O glicerol + 3 cidos grasos
bre una superficie determinada de terreno (m2).
ligninasa Liberacin de radicales libres de anillos de la lignina
Otras enzimas evaluadas son: fosfatasas, con glice-
nitrogenasa N2 NH3 aminocidos, uredos
La determinacin del CO2 se realiza por varias tcnicas: rofosfato como sustrato, proteasas, ureasas, ARNasa,
nucleotidasas Desfosforilacin de nucletidos
absorcin en solucin alcalina (KOH) y determinacin ADNasa. En la evaluacin de enzimas que catalizan
peptidasas Pptidos aminocidos
volumtrica o gravimtrica reacciones redox, se trabaja en ausencia de antispti- -3
pirofosfatasa Pirofosfato + H2O 2 PO4
conductividad elctrica en solucin alcalina co, pues las enzimas son endocelulares, como las des-
proteasas Proteinas pptidos y aminocidos
espectrometra en la zona del infrarrojo hidrogenasas. ureasa Urea 2 NH3 + CO2
Se usa medio con extracto de suelo y una fuente de car- cromatografa gaseosa, con detector de conductividad La determinacin de la actividad deshidrogensica de los deshidrogenasa, que se relaciona con el nivel de materia
bono y energa (glucosa). Ms frecuentemente se deter- trmica. suelos es muy empleada por distintos grupos de trabajo, orgnica descomponible y con la biomasa microbiana del
minan las poblaciones de bacterias de acuerdo a los gru- eliminando completamente el oxgeno y reemplazndolo por suelo. La evolucin de las deshidrogenasas y el CO2 fue-
pos fisiolgicos de inters para el investigador, para los La absorcin del O2 se mide por electrodos especficos o un aceptor artificial de electrones, como el tricloro fenil ron las determinaciones que permitieron evaluar ms r-
cuales es posible formular medios y condiciones de culti- en modificaciones del aparato de Warburg, con recipien- tetrazolio (TTC) o el iodo nitrofenil tetrazolio (INT), que pidamente respuestas de la microflora del suelo frente a
vo selectivos. (Anexo prctico). tes internos que permiten muestras de suelos de 10-20 g, se reducen a tricloro fenil formazn (TPF) o iodo nitro- diferentes manejos del suelo.
los cambios de presin se miden a volumen constante, el formazn (INP), rojos, que se extraen con acetona o me- Un grupo importante de hidrolasas son evaluadas con el
de totales o microscpicos, evalan poblaciones viables CO2 se recoge en solucin alcalina. tanol y se evalan a 485 nm frente a curva patrn (figura 6). diacetato de fluorescena. Slo luego de la hidlisis bio-
y no viables de bacterias en suelos: en general 108-109 lgica se libera la fluorescena, que se evala en el es-
clulas/g de suelo seco. Los recuentos de viables no re- Es necesario trabajar al abrigo de la luz, pues estos acep- pectrofotmetro, frente a curva patrn.
presentan un 10% de estas cifras, y muchas veces me- Actividad enzimtica tores de electrones son fotosensibles.
nos del 1%. Es de hacer notar que las enzimas en suelos y aguas no
Las actividades de los microorganismos requieren la par- Se encontraron correlaciones significativas entre consu- se determinan directamente, por anlisis de sus molcu-
Las bacterias del suelo raramente se encuentran aisla- ticipacin de un conjunto de enzimas. La actividad de una mo de oxgeno y el nmero de bacterias con la actividad las, sino indirectamente por su capacidad de transformar
das, sino que se agrupan en colonias (figura 5) y muchas de ellas, bien escogida, puede reflejar la actividad biolgi- una cantidad dada de un sustrato orgnico en productos
H
veces resulta difcil separarlas al efectuar las suspensio- ca global. El cuadro 6 muestra algunas de las enzimas N N +
N N conocidos en un tiempo dado, bajo condiciones controla-
nes-diluciones, para los recuentos de viables. Otra limita- evaluadas en los suelos. + 2e + 2H +
+ H + Cl das, de temperatura, pH, concentracin inica. Se miden,
+
N N
cin es la adsorcin sobre partculas de humus o arcillas, N

N por lo tanto, actividades potenciales.
Cl
que disminuye los recuentos de bacterias. Agregando un antisptico, como el tolueno, se logra en TTC (incoloro) TPF (rojo)
parte detener la proliferacin microbiana durante el pero- Figura 6 - Actividad deshidrogenasa con triclorofeniltetrazolio Los mtodos de anlisis pueden encontrarse en: Schinner
do de incubacin y pueden evaluarse las enzimas libera- (TTC) como aceptor artificial de electrones et al., 1999, Tabatabai, 1994, Burns, 1978, Anexo prctico.
Actividad biolgica global das por los microorganismos, los vegetales y animales.
Son actividades potenciales, evaluadas en el laboratorio, Cuadro 6- Algunas enzimas en el suelo
Sin detenernos en el estudio de grupos particulares de bajo condiciones controladas.
organismos de un ecosistema dado, muchas veces inte- Sistema enzimtico Reaccin que cataliza
resa conocer globalmente su actividad mediante el em- Ciertas enzimas son ubicuistas, se encuentran virtualmen- y amilasa Hidrlisis de enlaces glucosdicos y 1-4
= + =
pleo de tcnicas que evalan la actividad de la micropo- te en todos los tipos de suelos, como la ureasa, catalasa, arilsulfatasas R-SO3 + H2O R-OH + H + SO4
blacin en su conjunto. Son tcnicas comparativas em- fosfatasas y los varios tipos de peptidasas. Otras pueden asparaginasa asparagina + H2O aspartato + NH3
pleadas para informar rpidamente sobre la potenciabili- producirse en el suelo bajo ciertas condiciones. catalasa 2 H2O2 2 H2O + O2
dad biolgica de estos ambientes. celulasa Hidrlisis de enlaces glucosdicos 1-4
Entre las hidrolasas se evalan la sacarasa, amilasa, quitinasa Hidolisis de enlaces 1-4 aminoglucanos
Actividad respiratoria celulasa, incorporando a muestras de suelo solucin con deaminasa Enlace amida + H2O cido carboxlico + NH3
- -
En el caso del suelo se correlaciona esta actividad con el el sustrato especfico. Luego de una incubacin apropia- deshidrogenasas X-2e + aceptor de electrones (colorante) X + aceptor-2e
contenido de materia orgnica, humedad y prcticas de da en condiciones controladas, se extraen los productos fenoloxidasas Difenol + 0,5 O2 quinona + H2O
-3
manejo. Pero se incluye el CO2 de la mesofauna y de las de la hidrlisis, determinndose los azcares reductores, fitasas Hexafosfato de inositol + 6 H2O inositol + 6 PO4
races, resultando difcil distinguir la contribucin de cada durante el tiempo de incubacin. Es muy empleado el ace- y galactosidasa Galactsido + H2O ROH + galactosa
uno en ensayos de campo. La actividad in situ se determi- tato de fluorescena como sustrato de numerosas hidrola- y glucosidasa Glucsido + H2O ROH + glucosa
Hidrolasas, en general Diacetato de fluorescena (DAF) fluorescena
na evaluando volmenes conocidos de la atmsfera so- sas, evalundose la fluorescena liberada.
lipasa Triglicrido + 3 H2O glicerol + 3 cidos grasos
bre una superficie determinada de terreno (m2).
ligninasa Liberacin de radicales libres de anillos de la lignina
Otras enzimas evaluadas son: fosfatasas, con glice-
nitrogenasa N2 NH3 aminocidos, uredos
La determinacin del CO2 se realiza por varias tcnicas: rofosfato como sustrato, proteasas, ureasas, ARNasa,
nucleotidasas Desfosforilacin de nucletidos
absorcin en solucin alcalina (KOH) y determinacin ADNasa. En la evaluacin de enzimas que catalizan
peptidasas Pptidos aminocidos
volumtrica o gravimtrica reacciones redox, se trabaja en ausencia de antispti- -3
pirofosfatasa Pirofosfato + H2O 2 PO4
conductividad elctrica en solucin alcalina co, pues las enzimas son endocelulares, como las des-
proteasas Proteinas pptidos y aminocidos
espectrometra en la zona del infrarrojo hidrogenasas. ureasa Urea 2 NH3 + CO2
Las enzimas del suelo no se recuperan fcilmente, y po- otra de las herramientas ms empleadas en la evaluacin pecies activas, contribuyen a completar la informacin tes, el investigador busca aquellos ambientes en donde el
cas veces son aisladas en forma pura. Ellas estn inmo- de transformaciones del N en ambientes naturales. sobre su nmero y actividades. Se emplean procedimien- organismo deseado predomina. La pasteurizacin del in-
bilizadas con arcillas y el humus. En el estudio de microambientes, se emplean micro- tos microscpicos para la observacin in-situ, incluso se culo (80C, 15 minutos) al matar clulas vegetativas per-
electrodos (de O2, S=, pH, amonio) para evaluar proce- filman eventos en el tiempo. mite aislar muchos organismos esporulados en distintos
La actividad enzimtica flucta, como las poblaciones mi- sos biolgicos en la naturaleza. medios de enriquecimiento.
crobianas con condiciones biticas y abiticas. Las activi- El suelo no debe alterarse y la estructura se mantiene por
dades son particularmente altas en suelos productivos ri- La tcnica de percolacin (Dommergues, Mangenot, impregnacin con gelatina o resinas. Cortes finos permi- Winogradsky (microbilogo sovitico, 1856-1953) fue el
cos en materia orgnica. Muchos factores como la hume- 1970), se emplea en evaluacin de la cintica de algunos ten la observacin al microscopio luminoso o en el elec- primero en evaluar la actividad de un grupo de especies
dad, temperatura, aireacin, cambios estacionales, prc- procesos de mineralizacin o de oxidorreduccin. Se si- trnico por transmisin o por barrido de superficies. en el suelo mismo, en lugar de hacerlo con una especie
ticas de manejo, la forestacin, etc. ejercen influencias en mula el perfil del suelo colocndolo en una columna de aislada, en medio artificial. El suelo se humedece conve-
la presencia y abundancia de enzimas. vidrio. El metabolito en estudio se recicla a travs del sue- La microscopa fluorescente permite visualizar las rela- nientemente hasta formar una pasta (tcnica de la tierra
lo (cclica o acclicamente) y la poblacin se investiga como ciones de bacterias y hongos con partculas orgnicas e empastada) con el agregado de alguna sustancia nutrien-
una unidad biolgica. Se emplea para el estudio de la hi- inorgnicas. Es posible efectuar aislamientos con micro- te para el grupo microbiano que se desea exaltar.
Actividad bioqumica global drlisis de numerosas sustancias, la oxidacin del amo- manipulador; las bacterias ofrecen ms dificultad por su
nio, de sulfuros, etc. Peridicamente se extraen muestras pequeo tamao y mayor espaciamiento. La rizsfera ofre- El suelo se incuba en cajas de Petri hasta el desarrollo de
Se compara la capacidad de degradacin de un sustrato del lquido percolante y se analizan los metabolitos, en ce un hbitat muy favorable para su proliferacin y se han colonias en su superficie. Esta tcnica se sigue emplean-
particular midiendo su desaparicin por prdida de peso funcin del tiempo. desarrollado tcnicas muy precisas que muestran la rela- do actualmente, por ejemplo, para poner en evidencia r-
o anlisis qumico o indirectamente siguiendo la produc- - -
cin de clulas de la raz con microorganismos de inters pidamente la carencia del suelo en ciertos nutrientes como
log N (NO + NO ) g/ml
cin de metabolitos, o por respirometra. La muestra (suelo, 2 3 (Rhizobium, Azotobacter, etc.) empleando anticuerpos fluo- fsforo o calcio. Azotobacter, muy exigente en fsforo, cre-
agua, restos orgnicos, alimentos) se incuba con la sus- 3,0 rescentes especficos. ce solo alrededor de las fuentes de este elemento, colo-
tancia cuya biodegradacin se desea evaluar: protena, 2,5
cadas sobre el suelo empastado.
cidos, hmicos, almidn, en condiciones controladas de La microscopa ptica: la clsica tcnica de Rossi y Cho-
laboratorio (actividad potencial) o en el campo (activi- 2,0 lodny, entierra un portaobjeto solo o con un film de nu- La columna de Winogradsky se emplea aun para el
dad real) y se sigue la desaparicin de la sustancia o la 1,5 trientes, permite observar cambios de la distribucin es- enriquecimiento de bacterias fotosintticas purpreas y
aparicin de productos del metabolismo: amonio, nitra- pacial de los microorganismos en el tiempo. Son emplea- verdes (capitulo 3). Este modelo se ha empleado mucho
tos, sulfatos. dos otros materiales transparentes como celulosa, cuti- para enriquecer variedad de procariotas, tanto aerobios
5 10 15 20 das na, quitina. como anaerobios: la columna se enriquece con un sus-
Estas tcnicas evalan la actividad de un grupo grande Figura 7- Actividad bioqumica en suelos: percolacin cclica trato particular cuya degradacin se desea estudiar y se
de microorganismos (grupos fisiolgicos) sin detener- de una sal de amonio deja un tiempo para que estos microorganismos se se-
se en la caracterizacin de gneros o especies respon- Aislamiento y recuento de los microorganis- leccionen. Al enriquecimiento en la columna sigue el ais-
sables. La figura 7 indica que la reaccin de oxidacin del amo- mos en medios selectivos lamiento en cultivo puro sobre agar, pudindose ob-
nio es una actividad bacteriana ya que los hongos o ac- tener especies de crecimiento lento, quiz ecolgicamen-
El empleo de modelos computabilizados constituye una tinomicetes no exhiben incrementos logartmicos en la Rara vez un ambiente natural contendr un slo tipo de te ms importantes. Todo aislamiento termina en medio
invalorable ayuda para el eclogo y su empleo facilita las actividad bioqumica. La velocidad de reaccin se pue- microorganismo, en la mayor parte de los casos existe slido, dando colonias originadas por la progenie a
interpretaciones. de medir mejor por la acumulacin de nitrito y nitrato, una gran variedad. Los microorganismos se aslan de la partir de una sola clula.
que por la desaparicin del amonio, que puede ser ad- naturaleza en cultivos puros para su identificacin y el
El empleo de radioistopos, microelectrodos e isto- sorbido a los coloides. estudio de su autoecologa. Los medios empleados son
pos estables ha contribuido mucho en la evaluacin de muy numerosos: generales, selectivos, diferenciales, etc. Recuentos
la actividad microbiana en ambientes naturales. Estos procedimientos permiten el aislamiento o bien el re-
Evaluacin de la biomasa microbiana cuento de viables (medios lquidos o slidos). El cuadro 5 Las densidades microbianas se evalan por diferentes
As, en evaluacin de la fotosntesis se mide la captacin presenta algunos ejemplos en el aislamiento de bacterias. mtodos de recuento:
del CO2-C14 en las clulas y con S35 los procesos de oxi- La fraccin de la materia orgnica que se encuentra en
do-reduccin del azufre. La metanognesis en ambientes clulas microbianas se emplea mucho como parmetro El xito del enriquecimiento requiere el uso de una fuente de viables en medios lquidos o slidos o en plantas en
naturales se puede evaluar por la conversin del CO2 de actividad biolgica ya que son los microorganismos apropiada de inculo. Si bien los microorganismos son caso de simbiosis. No existe un medio de cultivo que per-
marcado a metano marcado en presencia de H2. El N15 es los agentes que catalizan los procesos biolgicos. muy ubicuistas y se encuentran en casi todos los ambien- mita el desarrollo de la poblacin microbiana hetertrofa.
Mtodos de estudio en ecologa microbiana La presencia de una alta poblacin de un determinado La biomasa microbiana se determina por: C-biomasa: F- NF/k
grupo fisiolgico no significa que el proceso se est reali- recuento del nmero de clulas o midiendo la longi- Donde: F-NF es la diferencia en los flujos de C-CO2 entre
Los mtodos que se aplican a estudios de ecologa mi- zando. Una poblacin abundante puede resultar inactiva, tud de micelio presente en una muestra, calculando el la muestra fumigada (F) y la no fumigada (NF) y k es la
crobiana se resumen en el cuadro 5: si no se renen las condiciones necesarias. Se determi- volumen y peso de tales propgulos al multiplicarlo fraccin del C de la biomasa mineralizado a CO2 en el
nan en el laboratorio, ii) reales, que se evalan en el por el peso especfico, se puede calcular el peso de curso del perodo de incubacin (usualmente entre 10 y
Cuadro 5- Tcnicas de estudio en ecologa terreno (in situ), donde interactan todos los factores los microhabitantes de una muestra de suelo, agua, 14 das).
microbiana abiticos. Resultan ms difciles de determinar: la respi- alimentos
racin en el terreno requiere la instalacin de campanas tcnica de fumigacin e inoculacin (FI) (Jenkinson Estos valores obtenidos a partir de cultivos puros de bac-
Forma y ordenamiento de los microorganismos para recoger el CO2. La evaluacin de la nitrificacin en y Powlson, 1976) al desinfectar el suelo con cloroformo terias y hongos enriquecidos con C14 varan entre 43 y
in-situ suelos luego del agregado de fertilizantes nitrogenados la mayora de los microorganismos muere y sus restos 50% (0,43 a 0,50) y la mayora de los autores emplean el
Lmina enterrada, microscopa ptica, fluorescen- en el campo, requiere medidas de la evolucin de son mineralizados al reinocularlo con suelo fresco. Se valor 0,45. En suelos minerales se suele emplear 0,33. El
te, anticuerpos fluorescentes, sondas marcadas N-(NH4+, NO2-, NO3-) por distintas tcnicas: desplazamiento miden los picos de CO2 de ambas muestras luego de desconocimiento de esta constante es una de las limita-
Aislamiento y recuentos y destilacin, por empleo de electrodos especficos, colo- un perodo de incubacin (Anexo prctico). ciones del mtodo.
Recuentos de viables: rimetra, etc. que se realizan en el laboratorio, pero los
microflora total, algas, hongos, etc. procesos ocurrieron en el campo. Una pequea fraccin de la materia orgnica es rpida- Idea de biomasa de los diferentes grupos micro-
grupos fisiolgicos: celulolticos, fijadores de N , mente convertida en CO2 (2,3-3,4% del carbono del sue- bianos
2
amilolticos, nitrificantes Los procesos que involucran prdidas de elementos se lo) y representa la biomasa. Este constituye uno de los Una forma til de expresar la densidad de los distintos
Biomasa microbiana C, N, P, de la biomasa (kg/ha) evalan por la liberacin de gases, en dispositivos cerra- mtodos ms interesantes propuestos en los ltimos aos grupos microbianos en el suelo, es sealando su bioma-
i) Recuentos y peso de cada microorganismo dos y anlisis en cromatografa gaseosa (N2, N2O, CH4, para evaluar la fraccin viva de la microflora del suelo y sa en kg materia viva/ha.
ii) Mtodo de fumigacin-incubacin: diferencias H2, CO2) refleja variaciones debidas a prcticas de manejo, uso de
en flujo de C-CO2 entre muestras fumigadas y pesticidas, etc. Ejemplo, por recuentos: 1g de suelo frtil puede con-
no fumigadas con cloroformo y reinoculadas con El empleo de elementos marcados: C14, N15, S32 etc. tener 5m de micelio fngico, 1x108 clulas bacterianas,
suelo fresco resulta muy til en estudios ecolgicos. tcnica de fumigacin-extraccin (FE): que consiste 1x106 esporas de actinomicetes. Si consideramos el peso
iii) Mtodo de fumigacin-extraccin: el C, N, P, de en extraer el carbono, el nitrgeno o el fsforo, lbiles de una bacteria o actinomicete como 1,5x10-12g y que
la biomasa muerta se extrae y se cuantifica Estos estudios brindan informacin sobre los tipos micro- de la microflora, que se valoran por tcnicas clsicas 1m de micelio fngico puede alcanzar 9,4x10-5g, la bio-
Actividad biolgica global bianos, biomasa (material vivo) y la funcin y se realizan (oxidacin con dicromato de potasio en caliente y valo- masa total de esta microflora llegara a 6,0x 10-4g, la que
Respiracin: aerobia (CO2, O2), anaerobia (N2, CH4, tanto en comunidades en su ambiente natural (sinecolo- racin espectrofotomtrica) (Schinner et al., 1996). representa menos del 0,06% del peso total del suelo
etc) ga) como sobre especies aisladas en condiciones de la- (1 g). Este dato puede ser en realidad menor, ya que el
Enzimas: deshidrogenasas, fosfatasas, ureasas, hi- boratorio (autoecologa). Pero, para lograr una compren- La tcnica de fumigacin presume: peso promedio celular se determin en ensayos de la-
drolasas sin completa de los microorganismos, se combinan am- 1- Que todos los microorganismos son muertos durante boratorio, en condiciones nutricionales ms favorables
Actividad metablica: evaluacin de productos fi- bas aproximaciones. el proceso y el C de los organismos muertos es ms que las de campo.
nales (CO2, amonio, nitrato) o iniciales (sustratos) fcilmente mineralizado que la de los vivos. La degra-
Medida de la bidiversidad: Estudios de los mi- El hombre no estudia estos temas por simple curiosidad, dacin del humus nativo ocurre al mismo ritmo en sue- Un suelo arenoso, con rea superficial de partculas baja
croorganismos sin aislamiento previo sino por su vinculacin con la fertilidad del suelo, depura- los fumigados y en no fumigados. (72 cm2/g), tendra slo el 0,02% de la superficie de sus
Extraccin de ADN y su reasociacin cin de aguas, deterioro de alimentos, biorremediacin 2- El solo efecto de la fumigacin es matar a los microor- partculas colonizadas por bacterias. Se comparan las
Secuenciacin del ARN ribosomal (16S y 23S) de ambientes. Estos conocimientos se emplean luego ganismos y la muerte de los mismos en las muestras imgenes al microscopio electrnico de partculas de suelo
Composicin de lpidos para dirigir estos procesos en forma beneficiosa. no fumigadas es despreciable. colonizadas con la observacin de la vegetacin desde
Perfiles metablicos: utilizacin de hidratos de C, 3- La fraccin del C de la biomasa muerta mineralizada un avin, en un desierto. En el ejemplo anterior vimos que
se evala diversidad fisiolgica o funcional en un perodo dado de tiempo es similar para todos los 1g de suelo frtil puede contener 109 bacterias/g; si el vo-
Determinacin de la forma y ordenamiento de suelos en estudio. lumen de cada una de ellas es de 1 micra3 y su densidad
Es necesario distinguir actividades: i) potenciales, que los microorganismos in situ media de 1,5 g/cm3, tenemos que su peso ser:
se evalan en el laboratorio (in-vitro) y tienen un valor re- Esta ltima presuncin no es enteramente vlida, en sue-
lativo de comparacin de situaciones (suelos, ecologa, El estudio de los microorganismos in-situ tiene la ventaja los que reciben grandes cantidades de sustratos frescos, P = V x d = 10-12 cm3 x 1,5g/cm3 = 1,5 x 10-12g
manejo) ya que reflejan lo que el ecosistema podra ren- de permitir al eclogo microbiano medir los efectos de o aquellos muy arcillosos que adsorben materiales libera-
dir si las condiciones fueran las ptimas (temperatura, ai- cambios fsicos y qumicos en una muestra aislada. Sin dos por las clulas lisadas. Biomasa de bacterias/g suelo = 1,5 x 10-12 x 109 =1,5 x 10-3g/g
reacin, nutrientes). embargo, los estudios efectuados en aislamientos de es-
Este dato que representa 0,15% del peso del suelo, pue- establecimiento de los umbrales de equilibrio o desea- o ms convenientemente como su log10, conocida como ses, nutrientes minerales y orgnicos, y el suelo les sir-
de llevarse a kg/ha: una hectrea de suelo de 0,20 m de bles de un indicador, se efecta a partir de los valores escala de pF, cuyos valores varan entre 0 y 7. ve como tampn en los cambios bruscos que pueden
profundidad pesa: medios resultantes de estudios realizados con anteriori- ocurrir en el pH. Los microorganismos contribuyen, con
dad, en los mismos suelos. La determinacin de estos Algunos niveles de importancia biolgica: otros organismos, a la alteracin de la roca madre, for-
10.000 m2 x 0,2 m = 2.000 m3 (d aprox. = 1g/cm3), que lmites de comparacin constituye una limitante en mu- mando la reserva orgnica (humus), pero participan tam-
equivale a un peso de 2.000.000 kg de suelo. La biomasa chos estudios. 400 barias (aproximadamente 400 atmsferas, pF 5,6), bin a su degradacin.
bacteriana ser de: tensin sobre la cual cesa toda actividad microbiolgica
El cuadro 8 seala las determinaciones ms corrientes en el suelo el desarrollo microbiano ms extensivo ocurre como mi-
2,0 x 106kg x 1,5 x 10-3 kg = 3.000 kg/ha en la evaluacin de la actividad biolgica de suelos y 15 barias (aproximadamente 15 atm; pF 4,2), tensin crocolonias en la superficie de las partculas del suelo,
aguas, que incluyen anlisis fsicos, qumicos y biolgi- en la cual la mayora de los vegetales alcanza el punto como se aprecia en la figura 5 (Madigan et al.,2000).
El cuadro 7 presenta resultados de evaluaciones prome- cos, a los cuales se van agregando aquellos que anali- de marchitamiento permanente
dio del nmero y la biomasa de diferentes grupos de mizan presencia de microorganismos sin aislarlos (biodi- 1/3 de baria (aproximadamente 1/3 atm; pF 2,5), hume- Como resumen, el cuadro 4 resume los factores que inci-
croorganismos del suelo. Ntese la importancia de la bio- versidad). dad correspondiente a la humedad equivalente en sue- den en la actividad biolgica.
masa fngica, hecho no reflejado por el recuento de pro- los de textura media a gruesa, es decir la humedad de
pgalos/g de suelo. La seleccin de parmetros como indicadores biolgi- una muestra de suelo que luego de haber sido satura- Cuadro 4- Factores que afectan la actividad
cos de la calidad del suelo, sensibles a cambios en el do, se somete por 30 minutos a una fuerza centrfuga microbiana
Cuadro 7- Nmero aproximado y biomasa (kg/ha uso y manejo del mismo y que se correlacionen con las de 1000 g (aproximadamente 2.440 rpm).
de suelo) de organismos en el suelo clsicas determinaciones fsicas y qumicas, es motivo caractersticas de los propios microorganismos
de numerosos estudios (Pankhurst et al, 1997; Smith et La aireacin y la humedad estn directamente relacio- disponibilidad de nutrientes: materia orgnica, O ,
2
Grupo Nmero/g suelo Biomasa microbiana N, S, P, etc.
kg/ha
al, 2000, van Bruggen y Semenov, 2000, Frioni et al, nados ya que la porcin del espacio poroso que no con-
2003, Albanesi et al, 2003). tiene agua est ocupada por gases, que constituyen la factores fsicos: temperatura, aireacin humedad, pH
bacterias 3-500 millones 300-10.000
atmsfera del suelo. Comnmente, la concentracin de manejo: aireacin/compactacin; distribucin de
actinomicetes 1-20 300-3.000
hongos 5.000-100.000 500-5.000 CO2 excede a la atmosfrica en un factor de 10 o 100 y el la MO disponibilidad de agua; temperaturas en
levaduras 1.000-100.000 100-5.000 Cuadro 8- Parmetros empleados como O2 es menos abundante. primavera
algas 1.000-100.000 10-1.500 indicadores de la calidad del suelo residuos vegetales o aplicacin de abonos
protozoos 1.000-100.000 5-200
10 11
virus (bacterifagos) 10 -10 Estas variaciones estn relacionadas con la actividad res- sistemas de cultivo y rotaciones
nemtodos 10-100 1-100 Indicadores Indicadores Indicadores piratoria de la poblacin del suelo: vegetal y microbiana. interacciones con otros microorganismos
lombrices 10-1000 fsicos qumicos biolgicos interacciones con otros organismos (plantas, ani-
textura C-orgnico total recuentos, biomasa Un suelo bien aireado, desde el punto de vista micro- males)
microbiana biolgico, es aquel en el cual los procesos que requie-
Indicadores de la calidad del suelo capacidad pH enzimas, respiracin ren O2 proceden a rpida velocidad.
de campo Un suelo mal aireado est asociado a un mal drenaje y
Los cambios en la calidad del suelo son avaluados por profundidad conductividad medida de la biodiversi- saturacin como ocurre en general en suelos pesados,
indicadores y stos deben ser comparados con los valo- elctrica dad: perfil de cidos nu- con muchas arcillas que poseen gran proporcin de
res deseables (niveles umbral o lmites crticos) a diferen- cleicos, de cidos gra- microcolonia
microporos que retienen fuertemente el agua. El oxge- arcilla
tes intervalos de tiempo, en el agroecosistema seleccio- sos, perfiles metablicos
no es poco soluble en agua y nuevos procesos ocurren,
nado. El problema que se presenta, como se comprende- densidad N, P, K, extrables N-mineralizable muchos de ellos perjudiciales para los vegetales, por
r, es determinar cuales son los valores que se conside- aire materia
ejemplo, se libera N2 o CH4, aparecen inhibidores org- orgnica
ran deseables, los de un suelo saludable. En general el cuarzo
nicos y se acumulan S=, Fe++, Mn++.
umbral de comparacin se obtiene de los ecosistemas no El cuadro 9 es una tpica aplicacin de estos parmetros arcilla cuarzo
agua
perturbados, por ejemplo las actividades de un suelo bajo en la evaluacin del efecto de distintos sistemas de la- aire
Vemos as que las caractersticas del suelo determinan:
bosque se comparan con las del mismo suelo no alterado branzas en los suelos. Se aprecia una mayor acumula-
arcilla
(campo natural) (Sicardi et al., 2004). cin de materia orgnica, N% y grupos microbianos con
el ambiente donde se encuentran los microorganismos
prcticas que como las conservacionistas no exponen al
la composicin de la poblacin microscpica tanto cuali
En reas donde ya no existen ecosistemas naturales, el humus a la rpida biodegradacin.
como cuantitativamente. Toman del suelo el agua, ga- Figura 5- Agregado de suelo
La fraccin mineral do por los coloides del suelo, pero los nitratos, formados Cuadro 9- Relacin entre propiedades fsicas, metablicas, protenas fluorescentes, perfil de cidos
Esta fraccin, generalmente menos que el 50% del vo- por la oxidacin biolgica de aquellos son, por el contra- qumicas y microbiolgicas en suelos con labranza grasos, etc.
lumen del suelo, se origin por desintegracin de la roca rio, muy mviles, desplazndose tanto lateralmente como mnima y convencional (LM/LC) (promedio de
madre, meteorizada en el curso del tiempo. Ejerce gran en profundidad. 6 localidades en dos profundidades)
importancia en la disponibilidad de nutrientes, la airea- Ecologa gentica
Parmetros LM/LC a LM/LC a
cin, la retencin y el movimiento del agua y afecta a la La fraccin orgnica
(0-7,5cm) (7,5-15cm)
microflora. Las partculas varan desde gravas de ms Materiales orgnicos de origen animal o vegetal llegan o En los ltimos aos ha habido una eclosin de metodolo-
de 2 mm hasta las arcillas, menores a 2 micras, visibles son formados en el suelo, donde son descompuestos por C-orgnico total 1,41 0,99 gas genticas para analizar las comunidades microbia-
slo al microscopio. Forman agregados con la materia las actividades microbianas. La materia orgnica que no N-total 1,29 1,01 nas a nivel de laboratorio y en ecosistemas naturales. Son
orgnica que contribuyen a la estructuracin del suelo. es completamente degradada contribuye a la formacin densidad 1,04 1,05 relativamente simples aunque el equipamiento y los reac-
espacio poroso con agua 1,28 1,11
Qumicamente estn constituidos por aluminosilicatos, del humus, material amorfo, formado por una mezcla com- tivos, pueden limitar su empleo masivo. Detectan peque-
aerobios totales 1,35 0,66
xidos y carbonatos. Las arcillas presentan la mayor pleja de sustancias altamente polimerizadas. Dentro de bacterias 1,41 0,68
as cantidades de material gentico y tambin permiten
reactividad ya que poseen una gran relacin superficie/ esta fraccin, una pequea proporcin es soluble en agua hongos 1,35 0,55 clasificar microorganismos en grupos filogenticos.
volumen. (azcares, aminocidos), pero la mayor parte consiste en anaerobios facultativos 1,31 0,96
materiales oscuros, insolubles. anaerobios totales 1,27 1,05 La doble hlice del ADN es la base de dos anlisis muy
La fraccin mineral presenta propiedades qumicas y acti- importantes:
vidades variables segn el tamao de las partculas. La El humus constituye la reserva nutritiva de un suelo, por sondas genticas, construidas para reconocer secuen-
arena y el limo estn formados por cuarzo, feldespatos, sus propiedades coloidales retiene e intercambia catio- Medida de la biodiversidad cias especficas de un microorganismo
micas, y otros silicatos. Su actividad qumica es casi nula nes bsicos, se asocia a minerales coloidales y puede ser la reaccin en cadena de la polimerasa, conocida por
a corto plazo. La arcilla est constituida por silicatos de adsorbido en la superficie de partculas minerales. Se ha recurrido a mtodos genticos y bioqumicos que su abreviatura en ingls (PCR)
estructura folacea semejante a las micas y se caracteri- no requieren el aislamiento y cultivo previo de los micro-
zan por presentar propiedades coloidales, con gran rela- Componentes lquidos y gaseosos organismos activos en un ecosistema. Estas tcnicas pueden tambin emplearse a secuencias
cin superficie a volumen con predominio de cargas elec- El agua del suelo est sujeta a fluctuaciones que afectan de ARN: ribosomal (rARN), mensajero (mARN) y de trans-
trostticas negativas. Estn formadas por minerales se- profundamente a las poblaciones microbianas y a las ra- Histricamente una variedad de mtodos bioqumicos, ferencia (tARN). Dos tipos, el rARN y el mARN se usan
cundarios del grupo de la montmorillonita, illita, caolinita, ces. Contiene solutos como sustancias minerales y org- serolgicos y fenotpicos se han empleado para caracteri- mucho en anlisis genticos, estudios filogenticos y en
etctera. nicas adems de gases y constituye el medio nutritivo l- zar bacterias, tales como rhizobios y otras asociadas a estimaciones de actividad metablica. La secuencia de
quido para los microorganismos. las plantas: perfil de protenas totales, de plsmidos, an- bases del ARN se transcribe a secuencias conservadas
Las arcillas y el complejo arcilla-humus retienen iones de lisis de cidos grasos, resistencia intrnseca a antibiti- del ADN.
signo contrario, generalmente cationes. Estos estn en equi- Si el suelo est saturado con agua, el exceso drenar por cos, sensibilidad a bacterifagos e isoenzimas.
librio con la solucin del suelo, con los que se pueden inter- gravedad. La cantidad de agua retenida luego de un es- Numerosos trabajos sealan la utilidad y las limitaciones
cambiar. Cuando aumenta la concentracin de un catin currimiento de 2-3 das se denomina capacidad de re- Ms recientemente el desarrollo y la aplicacin de mtodos de estos mtodos basados en caracteres genotpicos,
en la solucin, por ejemplo al agregar un fertilizante, el ca- tencin de agua o capacidad de campo y segn la tex- moleculares, basados en estudios de cidos nucleicos, han sobre todo en estudios de microorganismos asociados a
tin agregado desplaza una parte de los otros cationes re- tura, esta tensin puede variar entre 0,1 y 0,5 barias para permitido grandes avances en la identificacin y determi- plantas. El aislamiento del cido nucleico no siempre es
tenidos por el coloide, que a su turno pasan a la solucin. suelos de textura gruesa o fina, respectivamente. En genacin de relaciones filogenticas de organismos de im- requerido para la aplicacin de mtodos de deteccin
La cantidad total de cationes que puede retener un suelo neral, se toma como promedio una succin de 0,33 ba- portancia para la agricultura y el medio ambiente. molecular, que involucran tratamientos enzimticos o
constituye su capacidad de intercambio (CIC), que se ex- rias. Cuando el suelo se seca, los espacios porosos se amplificacin de trozos de ADN por la reaccin en cadena
presa en miliequivalentes/100 g de suelo. Los cationes se llenan progresivamente con aire, hasta que toda el agua Los mtodos ms recientes pueden agruparse en dos de la polimerasa (PCR). Para este estudio puede utilizar-
pueden ordenar por su capacidad de adsorcin: capilar es removida, quedando el agua ms fuertemente categoras (Bottomley, 1998): se una colonia bacteriana entera, un trozo de planta colo-
retenida: osmtica e higroscpica. nizada por un hongo micorrtico, o un ndulo entero en el
Al+3 > H+ > Ca+2 > Mg+2 > K+ = NH4+ > Na+ los basados en la caracterizacin de los cidos nuclei- caso de rhizobios (Schneider y De Bruijn, 1996).
A medida que el suelo se seca, resulta ms dificultoso cos, que permiten agrupar cepas en grupos coheren-
Muchas sustancias asimiladas por |os microorganismos remover el agua residual. Es posible medir, por variedad tes, pudiendo establecerse relaciones filogenticas y Algunas de las tcnicas utilizadas para caracterizar ci-
son aninicas, como los bicarbonatos, nitratos, fosfatos, de mtodos, la presin de succin necesaria para llevar diferenciar cepas de igual gnero y especie dos nucleicos incluyen: extraccin del ADN de una mues-
sulfatos, molibdatos, pero la capacidad de intercambio el suelo a un determinado nivel de humedad. Esta pre- los basados en la deteccin fenotpica de marcado- tra de suelo y determinacin del rango de reasociacin de
aninico no es apreciable. El amonio es fcilmente reteni- sin es normalmente medida en cm de succin de agua, res genticos, como resistencia a antibiticos, enzimas ese ADN. Se ha determinado que unas 4.000 tipos de
bacterias genticamente diferentes existen en una mues- La enzima aislada de Thermus aquaticus (Taq polimera- culados a la degradacin de la materia orgnica, las
cantidad
tra de suelo (Torsvik et al, 1990). sa), permite amplificar eficientemente el ADN a 72C y no relativa
bacterias y C orgnico
transformaciones de los elementos minerales muy im-
de clulas,
se desnaturaliza a altas temperaturas. Esta enzima pue- concentracin O2 algas y
portantes para la nutricin de las plantas, como el N, P,
de nutrientes
Sondas gnicas de alargar in vitro un pequeo oligonucletido (primer), + -3
cianobacterias S, Fe, Mn, etc.
NH4 ,PO4
Su construccin resulta una tcnica muy especializada que adicionando nucletidos en su secuencia si ste est hi- O2
excede este texto. La metodologa especfica se puede bridizado a una hebra de ADN complementario llamado -
NO3 general, el suelo se describe como un organismo vivo,
consultar en manuales como el de Sambrook et al (1990). molde (template), siguiendo las reglas de complementa- ya que nace por la pedognesis de la roca madre, se
Para su construccin, la secuencia del gen de inters debe riedad de Watson y Crick. Para esto es necesario un ex- ingreso distancia corriente abajo desarrolla por mltiples procesos de degradacin y sn-
ser conocida y ser particular a una especie microbiana: ceso de nucletidos en la solucin que sirven de unida- Figura 3 - Efecto de la llegada de aguas con materia tesis, almacena reservas y puede llegar a morir por mi-
esta secuencia resultar muy til en la deteccin de ese des de montaje de la hlice a complementar en el molde. orgnica a un ro neralizacin gradual si no se conserva su reserva de
organismo. Otras pueden codificar enzimas involucradas El proceso de polimerizacin del ADN en el PCR com- materia orgnica: el humus.
en la fijacin del N2 y su uso puede indicar cuando un prende, por lo tanto, 3 pasos:
A medida que el agua se aleja de la entrada del drenaje,
suelo contiene bacterias con esos genes. Actualmente, Las actividades de los microorganismos en este ambien-
la materia orgnica se consume gradualmente y el conte-
muchas secuencias se encuentran descriptas en la web, El ADN contenido en la secuencia a ser amplificada te altamente heterogneo, difieren drsticamente del com-
nido de O2 regresa a la normalidad. La disminucin del
permitiendo al investigador obtener la que desea para sus es desnaturalizado por el calor, generalmente a portamiento manifestado en medios clsicos de laborato-
oxgeno es indeseable ya que la mayora de los organis-
estudios. La construccin de la sonda implica copiar la 95C rio. Los microorganismos no actan solos; otros microor-
mos superiores requieren este gas y mueren en anaero-
hebra complementaria. Su tamao puede variar de 30 a Los oligonucletidos (primers) se adhieren a secuen- ganismos, la micro y meso fauna, la vegetacin y las pro-
biosis. Se forman adems compuestos de mal olor (ami-
40 pb hasta varios cientos de pares de bases. Algunas de cias complementarias del ADN molde. Este paso se piedades fsicas y qumicas del suelo y la accin del clima
nas, amidas, mercaptanes, H2S) por bacterias anaerbi-
ellas se marcan con un radiactivo (P32 en el P-azcar del realiza a una temperatura menor, que varia segn el y el hombre, contribuirn a exaltar o a inhibir un determi-
cas, algunas de las cuales son tambin txicas para ani-
ADN) o no radiactivos, como resistencia a antibitico. primer utilizado nado proceso biolgico.
males y plantas.
La Taq polimerasa polimeriza el segmento flanqueado
La deteccin de un grupo particular de bacterias se hace por dos primers contiguos, siguiendo el orden dado por Descripcin general del suelo
en una membrana sobre la cual se lisaron las clulas aisla hebra complementaria, en el sentido 5-3 El suelo est compuesto de cinco componentes princi-
ladas antes de que se desnaturalicen ambas hlices. Lo
Terrestres pales: la fraccin mineral, la orgnica, agua, aire y orga-
mismo ocurre con la sonda, que luego de un tiempo en El ciclo se repite muchas veces hasta llegar al nivel de- nismos vivos. El esquema siguiente resume las propor-
El comportamiento de una poblacin microbiana y sus efec-
contacto se renen con la secuencia de bases comple- seado de amplificacin, la que ocurre exponencialmente. ciones de cada uno, aunque los valores varan con los
tos sobre el suelo estn gobernados en gran parte por las
mentaria de la bacteria en estudio, homologa evidencia- Un ADN de doble cadena producir dos hlices dobles suelos y con la profundidad. De la fraccin inanimada, la
caractersticas fsicas y qumicas de ste. El concepto sue-
da por radiofotografas (P32). luego de un ciclo, cuatro luego de 2 ciclos, 8 luego de 3, cantidad de materia orgnica y mineral es relativamente
lo se puede abordar desde distintos puntos de vista:
1024 luego de 10 ciclos y as sucesivamente. De esta for- constante en un sitio dado, mientras que el aire y agua
Southern blots/hibridacin ma se pueden conseguir muchas copias de una zona es- fluctan (representan aproximadamente la mitad del
edafolgico, el suelo es la capa ms externa de la su-
Esta tcnica permite identificar la localizacin de una se- pecfica de ADN. El producto de la amplificacin se so- volumen del suelo y constituyen el espacio poroso)
perficie de la tierra, diferente a la roca madre de la cual
cuencia de inters, por ejemplo, dentro de un plsmido. mete a separacin electrofortica en gel de agarosa, y es (figura 4).
tom origen, por la accin combinada de factores muy
Para ello, todos los plsmidos de la clula bacteriana son coloreado con bromuro de etidio, que al intercalarse entre
diversos como el clima, roca madre, vegetacin, micro-
extrados y separados en un gel de agarosa en electrofo- las bases del ADN puede ser fcilmente visualizado al
flora, en el transcurso del tiempo pedolgico
resis. Luego se transfieren a un membrana y se hibridizan ser expuesto a luz ultra-violeta. gases
con la sonda especfica. Slo aquellos plsmidos con la minerales
agrcola, el suelo es la regin de la tierra que permite la
secuencia homloga a la sonda sern revelados por el En el caso de bacterias, pueden utilizarse primers que
vida de las plantas, del cual obtienen el soporte mec-
marcador usado. reconocen secuencias repetidas en el genoma (rep-PCR). lquidos
nico y los nutrientes necesarios
Con esto se obtiene una serie de bandas de amplificacin
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR, de distinto tamao que son caractersticas de cada cepa
microbiolgico, el suelo constituye un medio nico, ya
Polymerase chain reaction) en particular. La distribucin de las mismas se analiza en
que contiene gran poblacin de bacterias, actinomice- materia orgnica
Constituye una poderosa tecnologa que ha revoluciona- programas de computacin que emplean el principio de la
tes, algas, hongos, protozoos, virus, es uno de los luga-
do las tcnicas en biologa molecular, de gran aplicacin taxonoma numrica, agrupando individuos segn relacio-

res en donde las interacciones biolgicas son ms in- biomasa microbiana (2-5% de C-total)
en: diagnstico clnico, microbiologa ambiental, inmuno- nes de homologa, que aparecen en dendogramas
tensas y donde ocurren los procesos bioqumicos vin- Figura 4- Principales componentes del suelo
loga y muchos otros campos de investigacin. (figura 8, Schneider y De Bruijn, 1996).
minutos. Se estima que ciertas bacterias del suelo se de- vegetales Perfil de plsmidos
sarrollan a menos del 1% de la tasa que muestran en 3 A pesar de que la mayora de la informacin gentica de
2
medios de laboratorio, como reflejo de: 4 microorganismo microorganismo una bacteria puede estar contenida en el cromosoma, al-
bajo suministro de nutrientes 1 gunas bacterias contienen material gentico denominado
la distribucin de los mismos no es uniforme suelo (condiciones fsicas y qumicas) plsmidos, que se pueden extraer. Por electroforesis en
los microorganismos no crecen solos, salvo excepcio- gel de agarosa y coloracin con bromuro de etidio, los
nes, en los ambientes naturales y sufren activa compe- Figura 2- Interacciones en el ecosistema suelo-planta plsmidos se evidencian por una o ms bandas en el gel.
tencia de otros microorganismos Esta tcnica se conoce como perfil plasmdico (figura 9)
que se puede complementar con la hibridizacin con son-
Los eclogos sostienen que un ecosistema estable tiene
das especficas. Dado que el nmero y el tamao de los
diversidad gentica alta de modo de poder tolerar fluctua-
Sucesiones microbianas plsmidos pueden ser caractersticos de un microorga-
ciones del ambiente. Muchos estudios estn dedicados a
nismo, su empleo brinda informacin til sobre la identi-
determinar si los cambios en la composicin de las pobla-
Un principio fundamental del desarrollo de un ecosistema dad de los mismos.
ciones microbianas y la cuantificacin de la diversidad
es la sucesin, o sea los cambios en las poblaciones que
gentica pueden ser empleados como indicadores sensi-
permiten el establecimiento de las llamadas comunida- Las secuencias de cidos nucleicos no slo detectan or-
bles del deterioro en propiedades de los suelos debido a
des climax. En lugar de competir por el mismo sustrato, ganismos especficos, sino que tambin evidencian acti-
prcticas de manejo, labranza, rotaciones, etc.
algunos microorganismos cooperan para realizar una vidades. Los genes reporteros, que indican la actividad
transformacin particular, que no realizaran si actuaran de un gen de inters asociado, estn tpicamente inserta-
solos. Se establece una progresin de cambios en las dos en un opern que contiene el gen que codifica la ac-
poblaciones microbianas a medida que el sustrato es
Ambientes microbianos Figura 8- Anlisis de fragmentos de restriccin en Rhizobium tividad de inters. Esta fusin de genes se logra a veces
metabolizado y las condiciones del ambiente (O2, pH, po- loti y Bradyrhizobium que nodulan Lotus (dendograma con las empleando un transposn, que inserta al azar el gen re-
Acuticos cepas ordenadas de 1 a 24)
tencial redox) cambian. portero en el genoma bacteriano. El proceso produce
Los entornos tpicos son los ocanos, estuarios, pantanos,
mutantes con diferentes fusiones de genes. La expresin
lagos, ros y manantiales. Difieren mucho entre s en pro-
La figura 1 ubica a los organismos productores, consumi- Polimorfismo de fragmentos de restriccin (RFLP) de los genes reporteros da una seal fcil de detectar,
piedades fsicas y qumicas y en las especies microbianas
dores y degradadores en el ecosistema suelo-planta y El mtodo emplea enzimas de restriccin que rompen el como la produccin de -galactosidasa (gen lac z), fcil
activas. Los organismos fotosintticos predominantes son
la figura 2 presenta un esquema de las interacciones en- ADN en determinados lugares produciendo lo que se lla- de detectar colorimtricamente en medio slido.
cianobacterias y algas en las zonas aerbicas y bacterias
tre los integrantes de la comunidad. Las del tipo 1 ocurren man fragmentos de restriccin. Estos numerosos frag-
fotosintticas en las anaerobias. Las algas que flotan reci-
entre la comunidad microbiana y los componentes del mentos pueden ser separados por su tamao mediante Un gran nmero de marcadores genticos se han descri-
ben el nombre de fitoplancton y las de los lechos son al-
suelo, las del tipo 2 entre los microorganismos entre si, electroforesis en gel de agarosa y ser comparados entre to, entre ellos genes de resistencia a antibiticos, como el
gas bentnicas. Son los productores primarios de estos
las del tipo 3 entre las comunidades vegetales y microbia- distintos microorganismos. Posteriormente pueden ser nptII que codifica resistencia a kanamicina, que fue el pri-
ambientes. Los ocanos abiertos son muy bajos en pro-
nas y finalmente las interacciones del tipo 4, que involu- transferidos a una membrana de nylon por la tcnica de mer gen usado como marcador. Este mtodo presenta el
ductividad primaria, mientras que las reas en los ocanos
cran al suelo y la vegetacin, interesan slo accesoria- Southern y uno o ms fragmentos pueden ser detecta- riesgo de expandir resistencias a otros organismos en la
interiores son altas, siendo los lagos y manantiales los de
mente al bilogo del suelo y son dominio de la fisiologa y dos por hibridizacin con una sonda especfica. Este frag- naturaleza.
mayor productividad, donde la concentracin de nutrientes
patologa vegetal. mento puede ser de tamao diferente en los individuos de
minerales requeridos por las algas es abundante y facilitan
una poblacin, caracterizando un polimorfismo. Las son- La sonda construida a partir de un plsmido de la cepa
energa solar el desarrollo de peces y mariscos.
herbvoros
das son diseadas para detectar determinados fragmen- Kim-5, confirma la presencia de la cepa Kim-5 en los ca-
productores primarios consumidores primarios tos polimrficos, asociados a ciertos genes. Algunas se- rriles 1,3, y 4.Las restantes no contienen el ADN Kim-5
vegetales Las relaciones del oxgeno en un ro son de inters, so-
bacterias fotosintticas cuencias polimrficas se repiten innumerables veces una (figura 9) (Pepper y Josephson, 1998) .
y quimioauttrofas bretodo cuando stos reciben mucha materia orgnica
algas restos vegetales luego de la otra a lo largo del ADN y el nmero de repeti-
como aguas servidas y desechos de la industria. Puede
cianobacterias materia orgnica consumidores ciones vara de cromosoma a cromosoma. Deteccin fenotpica de marcadores genticos
del suelo secundarios ocurrir un marcado dficit de O2, como se ve en la figura 3
Genes que codifican enzimas se usaron como marcado-
(Madigan et al., 2000), consecuencia del incremento en
sustancias solubles
Existen sondas especficas para estos loci que en an- res no selectivos, como el xylE que codifica catecol 2,3
microorganismos hombre bacterias hetertrofas. Si hay mucho amonio, ste es oxi-
degradadores consumidor lisis por RFLP proporcionan bandas de ADN en forma oxigenasa, el lacZY (codifica -galactosidasa y lactosa
terciario dado a nitratos por las bacterias nitrificantes. El incremento
de cdigo de barras (DNA fingerprinting) (Hungra, permeasa) y el gusA (-gluconidasa GUS) muy usado
en algas y cianobacterias es una respuesta primaria a los
Arajo, 1994). en estudios de rhizobios en ndulos donde no existe pro-
Figura 1- Organismos en el ecosistema suelo-planta nutrientes inorgnicos, sobretodo el fosfato.
duccin endgena de GUS. Puede utilizarse la hibridiza- La informacin sobre secuencias del ADN y del ARN de invasores o alctonos. Estos ltimos, llamados zim- Las superficies son de importancia considerable como
cin de ADN para detectar estos marcadores fenotpicos. numerosos organismos (bacterias, hongos y se extiende genos por Winogradsky (1924), crecen rpidamente cuan- habitats microbianos, los nutrientes se pueden concen-
a los virus) crece muy rpidamente, con el empleo de do estn disponibles sustratos ricos en energa (pajas, trar sobre ellas y estimular el desarrollo de numerosas
1 2 3 4 5 6 tcnicas basadas en empleo de sondas y tecnologas que abonos), los autctonos son los microorganismos que especies. Se emplean portaobjetos solos o con algn adi-
aplican PCR. colonizan los materiales ms recalcitrantes que quedan tivo nutritivo, enterradas en el suelo o sumergidas en
luego de un ataque primario. aguas. Luego de algn tiempo se aprecia en el microsco-
Se determinan tambin actividades enzimticas asocia- pio la formacin de microcolonias, que se adhieren a la
das a organismos particulares. Estas tcnicas permiten Criterio de autoctona: posibilidad de aislamiento repe- pelcula, muy semejantes a las que se forman en superfi-
tambin detectar organismos que no han podido ser ais- tido de la especie en distintas muestras de un mismo cies naturales (biofilms).
lados y cultivados en el laboratorio. Los procedimientos ecosistema, habilidad para usar los nutrientes comunes
en el suelo mismo traen aparejado problemas de conta- del medio y para soportar variaciones del ambiente, alta Nicho ecolgico: Interesa conocer las actividades de los
minacin con sustancias que interfieren en los anlisis. densidad del organismo, que ser mayor en lugares con microorganismos. El que un organismo est presente en
abundantes nutrientes y condiciones favorables como un ecosistema no quiere decir que est activo. As, una trans-
En resumen: algunas aplicaciones de anlisis molecular en el suelo en la vecindad de races (aspecto cuantitati- formacin bioqumica especfica es una buena prueba de
en microbiologa del suelo (Pepper y Josephson, 1998): vo). que el grupo existe y est activo. Se aplica el trmino nicho
a las funciones que el organismo realiza. El ambiente es
Figura 9- Perfil de plsmidos de rhizobios aislados Deteccin especfica de bacterias en el suelo: por Otra aproximacin de clasificacin basada en caracte- como la direccin y el nicho la funcin del organismo.
de ndulos (arriba) y las hibridizaciones PCR se pueden detectar bacterias especficas con gran rsticas de crecimiento es la de la escuela japonesa que
correspondientes (abajo). sensibilidad en ADN extrado directamente del suelo o distingue:
el mismo extrado de clulas aisladas. El uso de son- Los microorganismos en la naturaleza
El uso de marcadores que codifican para la protena luci- das facilita el anlisis, que confirma la identificacin por oligotrofos, que crecen mejor a bajas concentracio-
ferasa se ha extendido mucho ya que la formacin de luz mtodos convencionales. nes de sustrato que en altas. Estos microorganismos Los microorganismos se encuentran en todos ambientes
es fcilmente detectable. El gen lux emite luz va la activi- se distinguen de los que crecen usualmente en me- naturales. En muchos de ellos, donde los organismos supe-
dad luciferasa sobre el sustrato luciferina: la actividad pue- Deteccin especfica de poblaciones microbianas: dios de cultivo con altas concentraciones de nutrien- riores estn ausentes, debido a extremos fsicos o qumicos,
de medirse en medio de cultivo slido o lquido (Rhizo- muchos procesos microbianos son analizados en eco- tes, que se llaman, gran variedad de microorganismos existen y se desarrollan
bium meliloti por siembra de contenidos nodulares, auto- sistemas naturales mediante el uso de sondas especfi- copiotrofos, que en general coinciden con los zimge- como en los casos de acidez extrema, desecacin, salini-
radiografa y visualizacin directa de colonias luminiscen- cas para algunos grupos: nitrificantes, coliformes, de- nos. dad. Los factores del ambiente afectan a los microorganis-
tes), o an en muestras de suelo o aguas. gradadores de herbicidas, etc. (figura 10). mos en la naturaleza tanto como lo hacen en el laboratorio.
Una comunidad puede ser poli o monopoblacional. Por En ambientes naturales, en general, es el nivel y la naturale-
El avance en la puesta a punto de todas estas tcnicas Deteccin de virus en el suelo: son analizados por la ejemplo polipoblacional, en el suelo, en una laguna, en el za de los nutrientes disponibles, quien determinar los nive-
moleculares ha facilitado el seguimiento de un microorga- tcnica de PCR secuencias de virus, luego de su ex- desierto, en cambio, una comunidad integrada por un pales de crecimiento bacteriano. Como estos niveles son en
nismo en ambientes altamente colonizados, como la ri- traccin, lisis y purificacin por filtracin en geles. Los tgeno vegetal es monopoblacional; estas cualidades re- general mucho menores que en el laboratorio, la produccin
zosfera, restos orgnicos en degradacin y seguramente virus ARN deben ser primero transcriptos a ADN con la flejan el aspecto cualitativo de la comunidad. de clulas en la mayor parte de los ambientes naturales es
conducir a importantes avances en los estudios de inte- enzima transcriptasa reversa. menor que en los cultivos de laboratorio.
racciones entre microorganismos y entre microorganismos Especie dominante: es la que exhibe una alta poblacin
con plantas, animales y el hombre. Secuencias del ADN: las secuencias nicas de los mi- o abundancia de filamentos. En general, la comunidad En la naturaleza los microorganismos sufren perodos de
croorganismos son analizadas por varios procedimien- puede poseer dos o ms especies codominantes. abundancia (restos de cultivos, animales muertos), se-
Numerosas tcnicas se emplean para evaluar la actividad tos que amplifica estas secuencias: REP-PCR y ERIC- guido de perodos de limitacin, en los cuales aprove-
biolgica en ambientes naturales, algunas son aplicacio- PCR, analizan secuencias conservadas, repetitivas en Habitat : Es un rea que posee cierto grado de uniformi- chan de los polmeros intracelulares de reserva (cido poli
nes de determinaciones clsicas de la microbiologa y otras puntos diferentes de una bacteria en particular. dad y cuyas caractersticas se supone que son de signifi- -OH-butrico, polifosfatos, etc.). Son escasos los pero-
incursionan en tcnicas moleculares y taxoqumicas que cado ecolgico: superficie de una hoja, plantas o anima- dos de crecimiento exponencial.
permiten el anlisis de las comunidades de ecosistemas Deteccin de genes que codifican actividades miles, el mar, una parcela de suelo frtil, porcin de arena
sin el cultivo previo de los microorganismos activos. Es- crobianas: empleo de genes reporteros, extraccin de de desierto, etc. Su tamao vara. Denota un conjunto de Por ejemplo, el tiempo de generacin de Escherichia coli
tas tcnicas se correlacionan en general con parmetros ARNm, permiten estimar rangos especficos de biodegra- condiciones favorables o desfavorables para la vida, y es en el intestino es de unas 12 horas (dos duplicaciones por
fsicos, qumicos y biolgicos empleados. dacin de xenobiticos, genes lux pueden detectar E. coli, ms especfico que el trmino ambiente. da), mientras que en el laboratorio puede ser de slo 20
(ambiente). La energa penetra a los ecosistemas sobre- La proporcin relativa de las distintas especies est afec- con gran precisin, mientras que se requieren 102-103 que no obligatoriamente todas las etapas deben cumplir-
todo en forma de luz solar y los organismos fototrfos la tada en cierto grado por el ambiente: los hongos dominan clulas/g suelo para su deteccin por otras tcnicas. se en un ecosistema dado. As, la nitrificacin de sales
emplean para sintetizar nueva materia orgnica. Esta con- en medios cidos de bosques, las bacterias predominan amoniacales puede detenerse por falta de oxgeno, el pH
tiene todos los elementos (C, N, S, P, Fe, etc.) y cuando el en suelos inundados, los actinomicetes en ambientes se- Hibridacin con sondas marcadas puede limitar la entrada del N2 a la tierra por fijacin biol-
organismo muere se libera la energa de sus constituyen- cos, las algas son las primeras colonizadoras en suelos gica, la solubilizacin de fosfatos puede inhibirse por es-
tes qumicos que queda disponible para el ecosistema quemados, erosionados, cuando ste se humedece. ADN-ADN in situ casa actividad biolgica.
o ARN-ADN clulas
permitiendo el desarrollo de nuevos organismos. Estos Membrana
realizan importantes procesos de sntesis y degradacin, Cuadro 3- Actividades de los microorganismos con cidos Los microorganismos actan sobre la materia orgnica y
los auttrofos generan materia orgnica a partir de CO2 y del suelo nucleicos mineral con el propsito de obtener:
desnatura-
los otros son organtrofos y participan en la biodegrada- lizados energa
cin y reciclado de la materia orgnica e inorgnica. reciclan nutrientes unidos inicialmente a la frac- subunidades para sus macromolculas
ADN o ARN clulas
cin orgnica del suelo
hibridacin
Se define para los elementos un ciclo biogeoqumico, cambian el estado de disponibilidad de elemen- vegetales fijacin animales
ADN marcado - atmsfera
en el cual el elemento experimenta cambios en su estado tos especficos para las plantas simple hebra CO2, N2, N2O, CH4, H2
fsico y de de oxido-reduccin a medida que se mueve en compiten con las plantas y entre ellos por los nu- volatilizacin

el ecosistema. trientes esenciales para el crecimiento lavado
pueden realizar simbiosis con plantas, incremen- (elimina el ADN oxidacin
no fijado
minerales oxidados minerales reducidos
El trmino ecosistema puede aplicarse a conjuntos de tan la capacidad de stas para adquirir N o P reduccin
extensin variable: son importantes agentes de biorremediacin en precipitacin

minerales insolubles minerales solubles
microecosistema, como un cultivo microbiano, agrega- ambientes contaminados solubilizacin

Lectura de la
do de un suelo pueden actuar como agentes de biocontrol de fito- seal retenida inmovilizacin mineralizacin

macroecosistema complejo, por ejemplo, un ocano patgenos (radioactividad,
fluorescencia) fijacin materia orgnica
mesoecosistema, como el estudio de un suelo, un es- biomasa microbiana
tanque y su vegetacin A pesar de su gran ubicuidad (los microorganismos son cuantificacin Fluorescent In Situ Hybridization restos vegetales, animales
HUMUS
fcilmente transportados y dispersados, su tiempo de ge- (Fish)
Comunidad o biocenosis: est constituida por todos los neracin es generalmente corto y existen todos los tipos Figura 11- Esquema general de un ciclo biogeoqumico
Figura 10- Determinacin de la estructura de una comunidad
organismos que habitan el ecosistema. metablicos), las comunidades de un ecosistema son ca- bacteriana basada en el anlisis de los cidos nuclecos
ractersticas: el investigador, cuando busca un determi-
Poblacin: est formada por las especies u organismos nado microorganismo, no analiza todos los ecosistemas,
Procesos microbianos
de tipo distinguible, por ejemplo la poblacin de bacterias, sino que tiene idea aproximada sobre donde hallarlo. Esto
de esporulados. se debe a que el ambiente regula la composicin de la
Ciclos biogeoqumicos de los elementos
En las transformaciones microbianas de la materia org-
comunidad bajo la presin de los factores fsicos, qumi-
Los microorganismos participan en las transformaciones nica y mineral encontramos una serie de procesos simul-
Individuo: componentes nicos de la poblacin: clulas, cos y biolgicos.
de los elementos en la naturaleza. Si bien cuando un sus- tneos y opuestos que podemos resumir en los siguien-
hifa, cuerpo de reposo de hongo, espora microbiana.
trato complejo llega a un ambiente particular, aguas, sue- tes 4 pares de procesos.
El ambiente interacta con el microorganismo y se llega a
los, aire, comienza a degradarse en su globalidad, es
Resumiendo, un ecosistema est integrado por: un equilibrio dinmico, ya sea naturalmente, por cam-
frecuente realizar el estudio en base a los ciclos bio- Mineralizacin inmovilizacin
comunidad o biocenosis - poblaciones - individuos bio de estaciones, por ejemplo, o artificialmente, por prc-
geoqumicos de los distintos elementos. As, realiza-
factores abiticos ticas agrcolas como arado, aplicacin de pesticidas, abo-
remos esta abstraccin mental para estudiar las transfor- Mineralizacin
nos, etc. (m)
maciones que sufren los compuestos carbonados, nitro-
Los microorganismos se encuentran en ambientes extre-
genados, azufrados, fosforados, con hierro, etc., en com- Sustancia orgnica Sustancia inorgnica
mos, la diversidad es enorme y especies de bacterias, El ambiente selecciona a las especies que se adaptan a
binaciones orgnicas e inorgnicas, en ecosistemas natu-
algas, hongos, protozoos, se aslan en todos los tipos de las condiciones propias del ecosistema. inmovilizacin
rales, en particular en el ecosistema suelo-planta-hombre.
suelos, en alimentos, aguas, restos orgnicos, animales. (i) + =
(azcares, (CO2, NH4 , NO3 , SO4 , etc)
Sus funciones son variables, algunas se resumen en el Del punto de vista ecolgico, los habitantes de una comu- -
Un ciclo biolgico abarca todas las posibles vas que un Protenas, etc.)
cuadro 3. nidad se pueden agrupar en: indgenas o autctonos e
elemento puede seguir en la naturaleza (figura 11) aun-
La mineralizacin, pasaje de formas orgnicas a minera- no disponibles para los cultivos e incluso conducirlos a
les, es un proceso muy general y ocurre prcticamente en gases, que se pierden en la atmsfera.
todas las condiciones ecolgicas. En efecto, no hay sus-
tancia orgnica de origen biolgico que no sea degrada- Ejemplos:
do por algn grupo de microorganismos en ambientes materia orgnica + NO3 CO2,H2O, N2 (N2O)
Ecologa microbiana y mtodos
naturales. Existen sustancias naturales de mineralizacin
muy lenta, llamadas recalcitrantes, caso de la lignina,
algunos biocidas naturales, el humus. Numerosas sustan-
cias orgnicas producto de las actividades del hombre lle-
Fijacin-volatilizacin
gases a la atmsfera
8 de estudio
gan a los ecosistemas naturales y son muy difcilmente Fijacin Procesos microbianos en los ciclos biogeoqumicos
degradadas, caso de los pesticidas. Estas sustancias que (f)
producen serias poluciones, se denominan xonobiticas Sustancia gaseosa Sustancia no gaseosa
La ecologa microbiana estudia las propiedades y el com- Cuadro 2- Temas de inters en ecologa
(captulo 22).
Volatilizacin portamiento de los microorganismos en su ambiente na- microbiana
Se habla de inmovilizacin cuando las sustancias inor- (v) tural, sea el suelo, aguas, alimentos, animales (cuadro 1)
gnicas son asimiladas por los microorganismos para y su estudio interesa a los investigadores por muchos as- Polucin ambiental
integrarlos a su biomasa (protenas, fosfolpidos, etc.). Se La fijacin es la conversin de sustancias voltiles en no pectos de dominio pblico (cuadro 2). Detergentes biodegradables, contaminacin
produce una competencia con las plantas y animales, voltiles y los ejemplos ms tpicos son: de canales, cauces de agua, derrames de petrleo
quienes pueden sufrir carencias temporales. La biomasa fijacin biolgica del C (fotosntesis o quimiosnte- Cuadro 1- Estudios en ecologa microbiana Polucin por nitratos en aguas subterrneas, abo-
microbiana a su turno ser biodegradada y los nutrientes sis) nos orgnicos, zonas de agotamientos de O2
vuelven a formas inorgnicas. fijacin biolgica del nitrgeno (FBN), muchas ve- amplio rango de organismos tanto macro como
Liberacin de microorganismos alterados por
ces realizados en la misma clula (cianobacteria y bac- microorganismos
ingeniera gentica
Oxidacin-reduccin terias fotosinttica fijadoras de N2): tipos encontrados en distintas situaciones, as
Daos por el congelamiento, biorremediacin,
como su nmero y diversidad
fijacin del nitrgeno
reduccin Fotosntesis bacteriana: CO2 + SH2(CH2O)n + S + H2O las actividades realizadas por los organismos en
Metano a partir de residuos
(r) gas no gaseoso el suelo y sus efectos en la fertilidad en el creci-
Resistencia a los antibiticos
Sustrato Sustrato reducido miento vegetal
Vida microbiana en ambientes inusuales
8e, 8H+ las interrelaciones entre organismos, con las plan-
FBN N2 Calentamiento global y sus consecuencias
= = + 2 NH3 + H2 tas y los animales y con el ambiente.
(SO , NO ,
4 3
oxidacin (S , NH4 , CH4, H2O gas nitrogenasa
CO2, c. org.) (o) azcares)
NH3 + esqueletos carbonados aa protenas
El trmino ambiente se refiere a todo lo que rodea a un Sinecologa: que analiza las interacciones en un

(no gaseosos) organismo: los factores fsicos, qumicos y biolgicos. Los determinado lugar, considerando las especies, los
Numerosos procesos de este tipo involucran a elemen- microorganismos desempean roles ms importantes de factores biticos y abiticos en ese lugar (suelo, mar,
tos importantes para ecosistemas naturales (C,N,S,P,Fe) La volatilizacin es un proceso fsico que puede llevar a lo que podra inferirse por su pequeo tamao. Desde una estanque).
como la nitrificacin, sulfooxidacin, desnitrificacin, la atmsfera productos formados por va biolgica. Un perspectiva ecolgica los microorganismos son parte de
sulfatorreduccin, metanognesis, oxidacin y reduccin ejemplo es el caso del amonio producido por amonifica- las comunidades de los llamados ecosistemas. Cada or- Autoecologa: en contraste con la anterior, comprende
de compuestos con hierro, carbonados, etc. Las plantas cin, que en suelos alcalinos, de baja capacidad de inter- ganismo en un ecosistema interacta con su entorno mo- el estudio de una especie y el efecto que sobre ella en
dependen de muchos de estos procesos para obtener cambio catinico, puede perderse a la atmsfera. Otros dificando marcadamente en algunos casos las caracte- particular ejerce el ambiente (ejemplo: estudio de una
los nutrientes asimilables a partir de la reserva orgnica ejemplos son las prdidas de nitrgeno como N2, N2O, rsticas del ecosistema. cepa de Rhizobium, de patgenos vegetales, etc.)
del suelo (humus), si no existen aportes exgenos. Es- por desnitrificacin. Compuestos azufrados se pueden
tos cambios en el estado de oxido-reduccin de ciertos perder tambin como H2S, mercaptanes, etc. La ecologa microbiana estudia las interrelaciones entre Nociones de jerarqua ecolgica
elementos, que pueden realizarse tanto en aerobiosis los microorganismos y el ambiente y determina las leyes Ecosistema: es el sistema limitado en el espacio consti-
como en anaerobiosis, son procesos muchas veces ge- Solubilizacin-precipitacin generales que gobiernan estas interacciones. Se puede tuido por el conjunto de condiciones energticas, fsicas,
neradores de energa para el microorganismo y en algu- La solubilizacin es un proceso muy importante ya que per- dividir en dos aspectos: qumicas y biolgicas que rodean a estos organismos
nos casos pueden convertir a los elementos en formas mite hacer disponible a muchos elementos insolubles, como
CO
2
seca de vegetales (1-2%) pero son ms abundantes en el caso del fsforo. Por el contrario, la precipitacin elimina Cuadro 11- Procesos de oxidacin en los ciclos
CH
4
ciertos microorganismos (10%). de la solucin del suelo nutrientes de las plantas, como el del C, N y S
caso del hierro. Son tambin procesos fsico-qumicos pero
interfase
Las grasas son steres complejos de cidos grasos y involucran pasos previos de accin microbiolgica. Primariamente por bacterias auttrofas
aerobio humus lignina -celulosa
anaerobio suelo-sedimento glicerol, mientras que las ceras constituyen steres con <> Metilobacter: metano bicarbonato
alcoholes superiores. Aparecen rpidamente en el suelo Solubilizacin <> Nitrosomonas: amonio nitrito
turba CO los cidos y alcoholes por accin de esterasas (lipasas) (s) <> Nitrobacter: nitrito nitrato
lignito 2
de una variedad de microorganismos, sobre todo bacte- Sustancias insolubles Sustancias solubles
carbono <> Thiobacillus: S o tiosulfato sulfato
CH rias. Los productos de la degradacin son empleados como <> Chromatium: sulfuro S
4
fuentes de nutrientes y energa por los microorganismos, Precipitacin
Figura 10- Complejo lignocelulsico y sus transformaciones
pero muchos de los cidos grasos son incorporados como (p) Bacterias aerbicas/desnitrificantes, fototrofos
lpidos de reserva (cido poli -OH-buttico). Algunas pueden cometabolizar sustratos sin
Los taninos Estas reacciones se observan en el caso de compuestos obtener energa (Beggiatoa)
Ms informacin se posee en la degradacin de los lpi- con P, Fe, etc.
Son compuestos muy abundantes en ciertas plantas, so- dos de la superficie vegetal, como la cutina, que es se-
bre todo en las conferas. Son molculas de gran tamao cretada a partir de clulas epidrmicas oxidndose por el H+ (cidos de origen biolgico) Cuadro 12- Procesos reductivos en los ciclos
con mltiples funciones fenoles que les permiten formar O2 atmosfrico. Puede recubrirse con ceras. Tambin pue- P insoluble P soluble (PO4 H)Ca y (PO4H2)2 Ca del C, N, S
complejos estables con protenas, celulosa, etctera. de formarse sobre la lmina media pctica o estar mez- (PO4)2 Ca3
clada con la celulosa, protegiendo a esas sustancias de hidroxiapatita, etc. Ocurren tanto en condiciones aerobias como anaerobias
Los taninos pueden ser: la biodegradacin. polvo de huesos, etc. Procesos asimilativos: los productos son usados por la clu-
la: hetertrofos
solubles en agua: poseen molcula glucdica con fun- La composicin qumica de la cutina no se conoce acerta- Fe++ + O2 Fe(OH)3 (hidrxido frrico, puede reduccin de los NO3

amonio N-aa
ciones alcohlicas esterificadas por cido glico o sus damente, se sabe que la molcula contiene 16-18 cidos soluble obstruir caeras) reduccin del CO2 compuestos orgnicos
derivados; son hidrolizables qumica o enzimticamen- grasos unidos por enlaces ster y puentes de O. disponible insoluble reduccin de los sulfatos HS S-aa
2
te por tanasas
Procesos desasimilativos
condensados: son molculas de alto peso molecular, Se reconocen dos enzimas: la cutin-esterasa que ataca La metodologa empleada en el estudio de estos proce- Ocurren en condiciones anaerobias, compuestos de C, N y S
insolubles en agua, algunos resisten la hidrlisis cida los steres y la carboxicutina peroxidasa, que rompe sos se resume en el cuadro 5 y lo detalles de las tcnicas actan como aceptores de e- en respiraciones:
y recuerdan a los flavonoides que se polimerizan para los puentes de oxgeno. Levaduras y hongos son activos se encuentran en el Anexo prctico. desnitrificacin: NO3

N gas Pseudomonas
2
dar pigmentos pardos. degradadores en la filosfera, pero bacterias, includos los metanognesis: CO2 CH Methanobacterium
4
actinomicetes tambin participan. El cuadro 10 resume las formas orgnicas bajo la cual se sulfato reduccin: SO4= H2S Desulfovibrio,
Un alto nivel de taninos en el suelo puede disminuir la de- presentan sustancias con C, N, S. Los cuadros 11 y 12 mues- Desulfotomaculum
gradacin de molculas orgnicas, sea por toxicidad direc- tran procesos de oxidacin y de reduccin involucrados en
ta sobre la microflora activa o por la inactivacin de enzi- Los hidrocarburos transformaciones de estos tres principales elementos.
mas o formacin de complejos resistentes con el sustrato. Bibliografa
La sntesis de sustancias hidrocarbonadas y su degrada- Cuadro 10- Formas orgnicas del C, N y S
Su degradacin es obra sobre todo de los hongos y los cin en el suelo son etapas importantes del ciclo del car- en el suelo Albanesi, A. Calidad de suelo: propiedades biolgicas y
mecanismos enzimticos no han sido del todo dilucidados. bono. Muchos pesticidas estn formados por hidrocarbu- Carbono evolucin en ecosistemas semiridos. En: Microbio-
ros modificados y de su biodegradacin depende la dura- ~ 20% polisacridos ~ 75% humus loga Agrcola: Un aporte de la investigacin
cin de su accin biocida. Detergentes sintticos poseen ~ 5% amino azcares, amino cidos argentina. 2003 Universidad Nacional de Santiago del
Constituyentes hidrfobos tambin esta estructura molecular. Nitrgeno Estero, Argentina: 7-22
~ 40% humus ~ 35% amino cidos Bottomley, P. J. Microbial Ecology, En: Principles and
Numerosas sustancias de carcter lipdico llegan al suelo La formacin de metano (CH4) en los suelos es frecuente ~ 7% amino azcares ~ 18% N aromtico Applications of Soil Microbiology, 1998. Sylvia,
con los restos vegetales y animales: ceras, grasas, cuti- en la descomposicin anaerobia de rastrojos en donde se Azufre Fuhrmann, Hartel y Zuberer Prenctice Hall, N. Jersey:
na. En su conjunto se extraen con mezclas de alcohol- produce abundante cantidad de H2 empleado por las me- ~ 45% S-amino cidos (cistina, metionina) 149-185.
=
benceno, representan un escaso porcentaje de la materia tanobacterias como fuente de energa: SO4 orgnicos adenosina, protenas-S-Fe (N2asa), Burns, R.G. Enzyme Activity in Soil: Some Theoretical and
Practical Considerations. En: R. G. Burns, Ed. Soil Methods in Soil Analysis, Part 2: Microbiological and La figura 9 presenta las relaciones entre el crecimiento, el energa al microorganismo, suficiente para sobrevivir, pero
Enzymes, 1978, Academic Press, N. York:295-340. Biochemical Properties, 1994, Soil Science Society of agotamiento en las fuentes de nitrgeno y la actividad ligno para crecer. Esto explica la ausencia de un mecanis-
Dommergues, Y. y F. Mangenot, Ecologie Microbinne America, Madison, Wisconsin: 775-833. ninoltica de P. chrysosporium. El sistema ligninoltico de mo enzimtico especfico para la despolimerizacin de la
du Sol, 1970, Masson et Cie, Pars. Torsvik; V., Goksoyr, J. y Daae, F. L. High diversity in DNA of este hongo es: i) constitutivo, ii) se expresa slo en el lignina. Se piensa que tambin intervienen procesos de-
Frioni, L., Sicardi, M., Pereyra, C. Indicadores biolgicos soil bacteria. 1990, Appl. Environ. Microbiol. 56:782-787. metabolismo secundario, iii) es afectado por limitaciones gradativos de naturaleza qumica. El nivel de enzimas que
de la calidad del suelo sensibles a prcticas de mane- Van Bruggen, A. H. C., Semenov, A .M. In search of biolo- en carbono, sulfato y nitrgeno, iv) es marcadamente afec- participan es bajo y algunos autores comparan el proceso
jo. En: Microbiologa Agrcola: Un aporte de la in- gical indicators for soil health and desease suppres- tado por la concentracin de oxgeno, la degradacin de con una erosin del polmero mediatizada por enzimas:
vestigacin argentina, 2003, Universidad Nacional sion. 2000, Appl. Soil Ecol 15(1): 13-24. la lignina fue 2-3 veces superior a 100% de O2 que en el
de Santiago del Estero, Argentina: 23-37. aire (21%), lo que corrobora la creencia de que la degra- oxigenasas, que rompen anillos aromticos, fenol oxi-
Frioni, L. Procesos microbianos. 1999 Fundacin de la dacin es un proceso oxidativo. dasas, incluyendo lacasas, tirosinasas y peroxidasas.
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina. Preguntas de repaso La formacin de radicales libres por accin de fenol oxi-
Hungria, M. y R. S. Araujo Caracterizaao das estirpes dasas pueden ocasionar ruptura de enlaces entre ani-
variaciones relativas
por tcnicas moleculares: o uso del mtodos de PCR 1) Concepto general de ecologa microbiana. glucosa
llos aromticos y la cadena lateral con propano.
a RAPD, en: Manual de Mtodos Empregados em 2) Seale dos ecosistemas diferentes por su tamao y di- micelio celobiosa: quinona oxidorreductasa, activa en la de-
Estudos de Microbiologia Agrcola, 1994, EMBRA- versidad biolgica, analice las fuentes de energa y de gradacin de celulosa y lignina por hongos de la podre-
PA, Brasilia, DF, pp:183-199. nutrientes y las poblaciones microbianas dominantes. dumbre blanca.
Jenkinson, D. S. y D. S. Powlson, The effect of biocidal treat- 3) Por qu la poblacin microbiana del suelo es tan di- actividad
ligninoltica
ments on metabolism in soil, Method for measuring soil versa en composicin? No se conoce bien la naturaleza de las enzimas que son
biomass, 1976, Soil Biol. Biochem., 8: 209-213. 4) Seale ejemplos de poblaciones autctonas y zimge- N extracelular
activas en los enlaces C-C y C=O, que contribuyen a la
Pankhurst, C.E., Doube, B. M., Gupta, V.V.S.R. Biologi- nas en una campo con pradera natural y en otro suelo despolimerizacin.
cal Indicators of soil health. 1997, CAB Internatio- que recibe residuos de cosechas.
0 1 2 3 4 5 6 7
nal, USA, UK. 5) Analice las causas de las diferencias de las velocida- das Como resumen analizaremos la figura 10 donde se mues-
Pepper, I. L. y Josephson, K. L. Molecular Genetic Anli- des de crecimiento de un microorganismo (celuloltico) Figura 9- Agotamiento de nutrientes, crecimiento tra las relaciones del complejo lignocelulosa en el ciclo
sis in Soil Ecology. En: Principles and Applications en el suelo y en medio de cultivo. y degradacin de la lignina por el hongo del carbono. En efecto, la mayora del carbono orgnico
of Soil Microbiology, 1998, Sylvia, D. M. ; Fuhrmann, 6) Analice y de ejemplos de interacciones biolgicas en Phanerochaete chrysosporium de la tierra est en forma de compuestos lignocelulsi-
J. J., Hartel, P. G. and Zuberer, D. A. Prentice Hall, el ecosistema suelo-planta-microorganismos. cos, sintetizados a partir del CO2 y en productos de su
London. 7) Qu fraccin del suelo est en directa relacin con la degradacin (humus, turba, lignitos y carbn), lentamen-
Sambrook, J., Fritsch, E. F. Maniatis, T. Molecular clo- actividad biolgica y por qu? Como se observa, la lignina es descompuesta en la fase te mineralizada en la naturaleza ya que la lignina, compa-
ning. A Laboratory Manual. 1989, Cold Spring Har- 8) Seale tcnicas de estudio a aplicar para incluir a aque- estacionaria (crecimiento nulo), en presencia de un co- rada a un material plstico, aunque de naturaleza biolgi-
bor Press, New York. llos microorganismos no cultivables. sustrato, pero en ausencia de fuentes de nitrgeno (la ca, acta como efectiva barrera que impide la degrada-
Schinner, F.; hlinger, R. Kandeler, E., Margesin, R. Me- 9) En caso de la actividad respiratoria, cmo evaluara adicin de amonio retarda la aparicin de la actividad lig- cin de los otros componentes.
thods in Soil Biology, 1996, Springer-Verlag, Berln: las actividades reales y las potenciales? ninoltica).
426pp. 10) Biomasa microbiana: concepto y explique el funda- En ambientes aerbicos, el polmero de lignina es erosio-
Schneider, M. y F. J. De Bruijn Rep-PCR mediated geno- mento de dos tcnicas a aplicar para su evaluacin. El agotamiento de las fuentes de nitrgeno inicia un se- nado biolgicamente por enzimas microbianas no espe-
mic fingerprinting of rhizobia and computer-assisted 11) Indique alguna tcnica que permita determinar la es- gundo metabolismo en el hongo asociado a la degrada- cficas a productos ms simples y CO2 o sufre una com-
phylogenetic pattern analysis. 1996, World J. of Mi- tructura de una comunidad microbiana basada en el cin de la lignina. Se entiende por metabolismo prima- plexacin con otros constituyentes para formar humus.
crobiology & Biotechnology 12, pp: 163-164. anlisis de sus cidos nucleicos. rio el que est directamente acoplado a actividades del
Sicardi, M., Garca-Prechac, F., Frioni, L. Soil microbial 12) Ejemplos de procesos oxidativos en los ciclos bio- crecimiento, mientras que los denominados secundarios En ambientes anaerbicos, la lignina y el humus son
indicators sensitive to land use conversin from pas- geoqumicos y sus consecuencias ecolgicas. (cometabolismo) estn asociados a la sobrevivencia. productos difciles de degradar (recalcitrantes), se acu-
tures to commercial Eucalyptus grandis. (Hill ex Mai- 13) Idem con los procesos reductivos. mulan y contribuyen a la formacin de turbas, lignitos y
den) plantations in Uruguay. 2004. Appl. Soil Ecology 14) Qu procesos ocurren prcticamente en todas las Se ejemplifica muy bien el rol de la actividad ligninoltica carbn. La madera, producto de la fotosntesis en bos-
27:125-133. condiciones ambientales compatibles con la vida? Con- con una expresin que dice: los hongos degradan ligni- ques, posee tiempos de renovacin tan largos como 35-
Smith, O.H., Petersen, G.W., Needelman, B.A. Environ- secuencias en el ecosistema. na para alimentarse de la celulosa de la madera. Se 45 aos, ya que contiene un 25% en peso de lignina,
mental indicators of agroecosystems. 2000, Adv. Agron. 15) Indique procesos de solubilizacin y de precipitacin piensa que la degradacin de la lignina brinda muy poca que limita su biodegradacin.
69:75-97. de elementos realizados por los microorganismos y sus
Tabatabai, M. A., Soil Enzymes. En: R. W. Weaver, Ed. consecuencias en la nutricin vegetal.
Los organismos ms activos son los hongos responsa- Algunos actinomicetes poseen capacidad de degradar lig-
bles de las podredumbres de la madera: blanca, parda nina, rompen enlaces -aril ter, presentes en ligninas
y blanda, que han sido muy estudiadas por sus conse- naturales, pero se requieren mayores conocimientos so-
cuencias en el deterioro de postes, vigas de madera. Son bre los mecanismos de degradacin de estos organismos.
sobre todo Basidiomycetes y algunos Ascomycetes. Las bacterias atacan sobretodo las cadenas laterales ali-
Los hongos de la podredumbre blanca son los ms acti-

vos degradadores de la lignina, pudiendo convertir la ma-
dera en CO2 y H2O. Degradan lignina y otros polisacri-
fticas.
El rol que juegan los animales en la descomposicin de

la lignina no puede ser ignorado, aunque su principal acti-
9 Ciclo biolgico del carbono
dos, con prdida de peso rpida: Pleurotus ostreatus, vidad sea una disminucin del peso molecular como con-
Phanerochaete chrisosporium, Polyporus anceps. secuencia de destruccin mecnica. Insectos, inverte-
brados y rumiantes contribuyen a la despolimerizacin
Los hongos de la podredumbre parda degradan extensi- fsica de la lignina e incrementan la digestibilidad de la La figura 1 muestra las transformaciones que sufre este tuye un depsito muy importante, pero su tiempo de resi-
vamente polisacridos y causan modificaciones qumicas lignocelulosa, atacada por los microorganismos asocia- elemento en ecosistemas terrestres. dencia es muy corto.
limitadas de la lignina. Son incapaces de metabolizar ani- dos a sus tractos gastrointestinales (anaerobiosis).
llos aromticos y son ms eficientes en la degradacin de (CH2O)n
Cuadro 1- Flujos de carbono en ecosistemas
celulosa y hemicelulosas. Atacan cadenas laterales, de- Slo los microorganismos eucariotas son capaces de comp. orgnicos terrestres
jando fenoles que se oxidan dando pigmentos marrones degradar completamente este polmero. fotoauttrofos: respiracin
9
vegetales, algas plantas, animales X 10 toneladas Total Flujo
o pardos. Estudios con Lenzites trabea demostraron que cianobacterias microorganismos 6
la descomposicin es sobre todo oxidativa y que la deme- En resumen: son sobre todo los hongos imperfectos y los quimioauttrofos Reservas globales 1.000 x 10
tilacin de unidades fenlicas y no fenlicas de la madera basidiomicetes, los organismos ms activos en la degrada- nitrificantes, etc. Carbonatos en corteza
bacterias oxidan-
constituyen las principales reacciones degradativas. Otros cin de ligninas naturales. Algunas bacterias, incluidos los tes del metano
terrestre ~8
aerbicos
hongos activos: Poria cocos, Lentinus lepideus, Poria actinomicetes demostraron habilidad para atacar ligninas CO2 CH4 # # Terrestre
anaerbicos
monticola. sintticas marcadas (cadenas laterales). Las interaccio-

Combustibles fsiles 5.000
nes microbianas estimulan frecuentemente la degradacin bacterias Carbonatos del suelo 800
Los hongos de las podredumbres blandas degradan los y el proceso es realizado por poblaciones complejas. metanognicas Materia orgnica del suelo 1.500
respiracin anaerobia
principales componentes de la madera. El material se bact. fotosintticas anaerobias (CH2O)n Plantas/animales 830
transforma en una masa oscura, desorganizada, con poca Degradacin fermentacin comp. orgnicos Fotosntesis +120
prdida de peso y la ligmina sufre alteraciones parciales. La mayora de los estudios se realizaron con cultivos de Respiracin -60
Figura 1- Ciclo biolgico del carbono
Se comprob con algunas especies, como Preussia fles- hongos de la podredumbre blanca, por su reconocida Prdidas netas/vegetacin -2
hhkii y Chaetomium piluliferum, descomposicin de anillos habilidad de degradar completamente a este polmero. Los # # ocanos
marcados (3% a CO2 en 25 das) y demetoxilacin signifi- trabajos no son sencillos; se emplearon ligninas libres de A nivel mundial, el carbono se cicla a travs de los 4 de- sedimentos 36.700
cativa. Son sobretodo Ascomycetes y Hongos Imperfectos. otros compuestos carbonados, como madera molida, o psitos principales de C: la atmsfera, los suelos, los oca- carbonatos 725
ligninas sintticas marcadas. En Phanerochaete chrysos- nos y otros ambientes acuticos, as como los sedimen- Balance atmosfrico
El moho Fusarium solani crece sobre ligninas sintticas y porium, uno de los hongos mejor estudiados, se encontr tos y las rocas (cuadro 1). El mayor depsito se encuen- Atmsfera 720 -2
las degrada. Es interesante examinar la capacidad de otros que ste no crece con lignina sola y requiere un sustrato tra en los sedimentos y las rocas de la corteza terrestre,
hongos para degradar ligninas naturales o industriales. metabolizable, como celulosa o glucosa. Incluso en la pero el tiempo de renovacin es demasiado largo, insigni- Este ciclo no es muy complejo: la fotosntesis y la quimio-
naturaleza, la presencia de celulosa estimula la actividad ficante a escala humana. sntesis auttrofa y la respiracin y/o fermentacin son
Entre los organismos procariticos, algunas bacterias han ligninoltica de este hongo en mayor grado que el succi- los principales procesos en que estn involucrados los
sido referidas como ligninolticas, sobre todo en cultivos nato o glicerol. P. chrysosporium prefiere pH cidos: Desde el punto de vista de los organismos, una gran can- compuestos carbonados.
mixtos, en el suelo. Especies de Azotobacter son capa- 4,0-4,5, temperaturas ptimas relativamente altas, las tidad de carbono se encuentra en las plantas terrestres
ces de degradar tanto los anillos como los grupos metoxi- fuentes de nitrgeno pueden ser amonio, nitratos o ami- (fijacin del CO2). Sin embargo hay ms carbono en la
lo cuando crecen con compuestos aromticos solubles, nocidos, pero altas concentraciones en medio de cultivo materia orgnica muerta (humus) que en los organismos Carbono en suelos, agua y atmsfera
aunque a velocidad menor que la actividad de poblacio- inhiben la degradacin de la lignina y se requieren altas vivos. Las formas ms rpidas de transferencia global del
nes mixtas de bacterias. presiones parciales de O2. carbono son por va del CO2 de la atmsfera. Este consti- El contenido de carbono de los suelos vara, como es de
suponer, con los tipos pedolgicos, regiones climticas, Primera etapa del ciclo: fijacin del CO2 o CH4 Se designa como: ble por su alto PM y estructura tridimensional aromtica,
prcticas de manejo, vegetacin, etc. Los valores oscilan protolignina o lignina natural a los polmeros insolu- que en algunos ambientes origina lignitos y carbn, las
entre 1-3% en suelos minerales, entre 6-10% en praderas La reduccin del CO2 la realizan los organismos autotr- bles en agua formada por polimerizacin deshidroge- principales formas de materia orgnica fosilizada.
y en turbas, los valores superan 30-40% del peso seco. ficos: foto y quimiosintticos nativa de alcoholes coniferil, cumaril o sinapil, iniciada
En las clulas, el carbono constituye un 40 al 50% del por enzimas. Es tambin importante precursor de las molculas hmi-
peso seco de las mismas. en primer lugar los vegetales las ligninas industriales, maderas modificadas qumicas: al incorporarla a un slico-gel nutritivo, la lignina se
las algas ca o fsicamente, altamente polimerizadas. Difieren transforma espontneamente por desecacin en sustan-
La fuente principal de este elemento se encuentra en la las cianobacterias, las bacterias fotosintticas como sustratos de las naturales; poseen en general cias pardas, del tipo del humus.
atmsfera, la que a pesar de contener bajo nivel de CO2 bacterias quimioauttrofas menor peso molecular, mayor solubilidad, con lo que
(0,03%) alberga sobre la tierra cantidades enormes de aumenta su biodegradacin: los lignosulfonatos se ob- La lignina es considerada por algunos eclogos microbia-
este gas (7,0x1014 kg). El incremento sobre los valores Estas ltimas emplean la energa liberada en la oxidacin tienen por tratamientos con soluciones cidas de nos como un plstico natural ya que la polimerizacin
actuales preocupa por el hecho de que tanto el CO2 como de los compuestos minerales, como el amonio, sulfuros, NaHSO3, las lcali ligninas son el resultado de la de los precursores no est mediatizada por enzimas y el
el CH4 provocan incrementos de temperatura en la atms- iones ferrosos, H2, para reducir el CO2. Si el ambiente fue- extraccin con soda y sulfuro de sodio, las fenol ligni- polmero posee muchos enlaces intermonmeros, que no
fera (calentamiento global) (cuadro 2). ra rico en CH4 como consecuencia de procesos de anae- nas o etanol ligninas aluden al procedimiento de extrac- son directamente hidrolizables por enzimas. Se le consi-
robiosis, sern los microorganismos metanotrficos los cin, contienen una variedad de compuestos orgnicos dera como un producto de desecho que la clula deja
Cuadro 2- Calentamiento global encargados de convertirlo en metanol para luego asimi- (azcares, polisacridos, aldehidos, etc.) y pueden va- de eliminar y lo deposita en paredes secundarias y lmina
larlo en su biomasa (cuadro 3). riar considerablemente en estructura fsica. media de plantas superiores, como metabolito secun-
dario (no es esencial para el crecimiento, a pesar de be-
Desde 1900 los niveles atmosfricos de CO2 se
Cuadro 3- Oxidacin del metano en ecosistemas Los trabajos que estudian la degradacin de la lignina neficiar al organismo que lo posee). La lignina actuara de
han incrementado de 280 a 350 ppm, los de me-
-1 naturales emplean estos preparados, dada la imposibilidad de ob- un modo similar a las envolturas protectoras de la piel, de
tano 12-13 ppb ao y los fluorocarbonos sobre
-1 tener la protolignina en estado inalterado (en solucin los vegetales y animales y quiz como las capas protec-
3% ao
Representa el 44% del C del suelo acuosa y en autoclave a 100C se logr solubilizar slo toras de las esporas.
Consecuencias:
CH4 es 20 veces ms efectivo que el CO2 como un 10% en 50 das).
Mayores niveles de CO2 estimulan la productividad, gas con efecto invernadero: su oxidacin es muy Microflora ligninoltica
fijando C a residuos de suelo y materia orgnica importante los modelos de lignina, compuestos aromticos solu- Entre los organismos estudiados, slo los microorganis-
La continua deforestacin y la expansin agr- Mucho mayor si no actuaran los metanotrficos: bles en agua sintetizados a partir de derivados del alco- mos eucariticos mostraron capacidad para degradar
cola reducir el C en plantas y suelos oxidan el 90% del CH4 luego de su emisin hol cinamlico que poseen uniones intermonmeras pre- completamente a la protolignina. La accin de los distin-
Aumentos de temperatura favorecern la activi- Rellenos sanitarios generan el 10% del CH libe- sentes en la lignina natural. tos organismos en el proceso son variados. Los mtodos
4
dad metablica en suelos y prdidas de C rado. Al cubrir con suelo se requieren empleados para cuantificar la degradacin incluyen estu-
Rangos corrientes de prdidas en suelos tropi- 2-3 aos para desarrollar una fuerte poblacin Los residuos de industrias papeleras y de las que prepa- dios con especies aisladas sobre ligninas especficamen-
cales sern 10X que en los suelos templados metanotrfica ran pulpa para papel, las aguas servidas y los desechos te marcadas con C14 (en fracciones alqulicas, arlicas o
Cambios en la adaptacin de especies y uso de
Methylobacter: bacterias aerobias, Gram con sis- resultantes de una ganadera extensiva, presentan serios en los grupos metoxilo) y anlisis qumico y estructural de
la tierra tema de membranas internas. Colonias a veces problemas de polucin por su alto contenido en lignina, maderas en decaimiento inoculadas y no inoculadas con
Influencias en diferentes prcticas agrcolas rosadas lignocelulosa, celulosa, de lenta biodegradacin. especies fngicas de inters. La degradacin de la celu-
Metabolizan tanto metano (metanotrficas) o losa es cerca de tres veces superior a la de la lignina.
Carbono en aguas: su contenido vara con la naturaleza -CH2O (metilotrfica) como nica fuente de C Estos productos deben ser descompuestos antes de su
de los causes de aguas y con la deposicin que vierten Tambin oxidan NH , pero no como nica fuente deposicin en gran escala en el ambiente: los ros que Por la dificultad en la preparacin de medios selectivos, el
3
sobre ellos. As, en los ros la cantidad de materia orgni- de energa reciben afluentes de la industria del papel se colorean in- aislamiento de especies responsables es muy dificultoso.
ca puede ser muy grande y llegar a polucionarla si recibe Los pasos de oxidacin necesitan metil mono- tensamente y poseen grandes sedimentos de lignina (ca- Incluso, una disminucin en la concentracin del sustrato,
aguas servidas domiciliarias, efluentes de la industria, oxigenasa ptulo 21). no siempre es ndice de degradacin. La molcula puede
desechos agrcolas. Organismos de la rizosfera y de hojas en plantas ser adsorbida a micelios o clulas microbianas, e incluso
acuticas A diferencia de los otros biopolmeros, los estudios micro- la degradacin puede enmascararse por la sntesis de
Una parte del carbono puede depositarse como carbona- Contaminantes frecuentes en tejidos vegetales biolgicos han avanzado poco por la complejidad de esta sustancias del tipo de la lignina por numerosos hongos.
tos insolubles, constituyendo verdaderos depsitos de este molcula: en efecto la lignina constituye el producto natu- Los estudios se realizan inoculando trozos de madera
elemento, pero los procesos de solubilizacin son muy ral ms recalcitrante, es decir escasamente biodegrada- esterilizados.
lentos y estas fuentes no inciden en el ciclo global. Estos productores primarios (PP) de materia orgnica
to de otra-. Por ejemplo, pocos ppm de cumarina en el es un derivado modificado del benceno y contiene slo contribuyen a incrementar su nivel en ecosistemas natu- Se presume que la cantidad de materia orgnica prove-
suelo pueden inhibir el desarrollo de races de numero- 3 elementos: C, H y O. La estructura bsica es aromti- rales que constituye la fuente de nutrientes y de energa niente de animales y microorganismos es pequea en el
sas especies. Tambin ejercen efectos txicos sobre la ca, formada por polmeros de unidades de fenilpropano para la mayora de los habitantes del suelo, que son hete- suelo en relacin a la biomasa vegetal (cuadro 4). La bio-
microflora del suelo. (C6-C3) (figura 8), con grupos alifticos hidroxilos y carbo- rotrfos. Los valores citados sobre el aporte del carbono masa de los principales grupos de invertebrados en sue-
nilos. Pertenecen a la misma familia de compuestos que en la tierra por la fotosntesis vegetal (9,0x1013kg) son los de pastura ha sido calculada en unos 2.300 kg/ha,
+CO HC
HOOC OH HOOC COOH O 2
COOH COOH 2 COOH ciertos pigmentos flavonoides y antocianos en C6-C3-C6 y seguramente superados en lagos y ocanos. mientras que se ha estimado en 4.500 kg/ha la biomasa
+
OH COOH COOH COOH
de los aminocidos fenilalanina y tirosina. de bacterias u hongos en la capa arable.
cido protocatquico cido carboximucnico cido cetoadpico cido actico
N
cido succinico
La biosntesis de la lignina se realiza en tejidos jvenes Segunda etapa: mineralizacin La distribucin de estos grupos difiere; la microfauna se
COOH por hidrlisis de hetersidos aromticos con liberacin de localiza ms en el mantillo, mientras que los microorga-
CHO +NH
OH COOH
2 cido picolnico agliconas, las que se transforman en radicales libres por La materia orgnica que llega al suelo a travs de resi- nismos migran a todo el perfil.
HCOOH
OH OH + accin de oxidasas, condensndose al azar para dar com- duos de cosechas, la percolacin en el follaje, las races
CH COOH CH CHO plejos tridimensionales muy ramificados, de peso mole- y sus productos de descamacin y exudacin, los restos Resumiendo: los procesos microbianos que dominan en
HO 2 2
+
H
O CH -CO-COOH cular difcil de determinar, en general superior a los 10.000. animales y microbianos sufren una serie de procesos de las transformaciones del carbono en la naturaleza son:
H 2
H Se han publicado numerosos modelos tendientes a expli- degradacin, que aseguran la continuidad de los ciclos mineralizacin-inmovilizacin
cido frmico y acetaldehdo y
c. OH cetovalrico cido pirvico car la complejidad de estos compuestos con unidades geoqumicas (cuadro 4). Los procesos degradativos bio- xido-reduccin
Figura 7- Modalidades de apertura del anillo bencnico bsicas de fenilpropano, con ncleos aromticos, grupos energticos realizados por los microorganismos depen- solubilizacin-precipitacin (caso de los carbona-
metoxilo, puentes de oxgeno, ricos en C (67,5%), en gru- dern del nivel de O2 (cuadro 5). Los procesos se reali- tos en depsitos en suelos y aguas)
pos metoxilo (15-16% en conferas y ms de 25% en di- zan en:
Lignina cotiledneas) y en -OH alcohlicos y fenlicos. Cuadro 4- Naturaleza de compuestos orgnicos
aerobiosis: respiracin y algunas fermentaciones, carbonados en ecosistemas naturales
La lignina constituye otro polmero natural muy importan- como la lctica que no se afecta por el O2
te responsable del 25% de la fitomasa seca producida Restos vegetales
anualmente en la biosfera. Se encuentra en tejidos esen- anaerobiosis: fermentaciones y respiraciones anaero-
ciales como el xilema y el esclernquima y tambin en bias (sulfatos, nitratos, CO2, Fe+++, como aceptores de citoplasmticos: azcares, protenas y cidos
Anillo
hongos como Humcola, Aspergillus y Gliocladium. bencnico electrones). La actividad de los organismos del suelo nucleicos
devolveran a la atmsfera un 40-75% del carbono fija- reserva: protenas, grasas, almidn,glicgeno
Representa un 60% del peso de la celulosa, con la cual do. La diferencia con la productividad primaria, o sea la componentes estructurales: celulosa, pectina,
est ntimamente asociada. Las dificultades para su ex- productividad neta, podra llegar a 2,0 x 1013 kg de C lignina
traccin y purificacin son enormes por lo que los datos orgnico/ao. Restos animales
cuantitativos presentados en la bibliografa son aleatorios, citoplasmticos: como arriba
se citan valores de 18-35% en bosques, 21-31% en pa- Esta cifra debe mineralizarse en el mismo perodo, de otro
de reserva: almidn, protenas y grasas
jas, 10-24% y hasta 35% del peso seco en mantillos fo- modo la gran reserva de la atmsfera se agotara rpida-
estructurales: quitina. protenas de pelos y uas;
restales. Como se aprecia, importantes cantidades de esta mente (unos 7 aos, cuadro 1). Son los consumidores
mucopptidos; material fecal
sustancia fuertemente polimerizada e insoluble en agua, primarios (herbvoros) y los secundarios (carnvoros) y fi-
nalmente el hombre, los que aseguran una dbil minerali- Residuos microbianos: segn el organismo: pep-
deben ser degradadas cada ao.
zacin. Los consumidores primarios no mineralizan ms tidoglicano, mananos, protenas, etc.
Las ligninas no constituyen un grupo homogneo de com- de un 10% de la productividad primaria, devolviendo al
Materia orgnica del suelo
puestos y su estructura vara con los vegetales y dentro suelo importantes fracciones de materia orgnica, como cidos hmicos y flvicos, polisacridos, enzimas,
de una especie, con su grado de madurez. Resisten la producto de desecho, y los carnvoros, slo mineralizan
polucionantes
hidrlisis cida, en agua caliente y solventes orgnicos, 1/100 de ella.
pero se solubilizan en lcalis.
Carbn Carbn
El espectro de absorcin en el ultravioleta (mxima ab-
sorcin en la vecindad de los 280 nm) indica que la lignina Figura 8- Esquema de la molcula de lignina
Cuadro 5- Vas degradativas en compuestos qumica condicionar en parte la actividad biolgica y por glucosa. Constituye un elemento importante del exoes- do cidos alifticos que sern metabolizados en el ciclo
carbonados lo tanto, su biodegradacin y ms adelante aspectos de queleto de artrpodos, paredes de hongos y de algunas de los cidos tricarboxlicos (figura 7)
la humificacin y mineralizacin de estas molculas com- algas y huevos de nemtodos. La degradacin no est su condensacin da lugar a la formacin de sustancias
plejas. limitada como en los polisacridos anteriores por el nitr- coloreadas, del tipo del humus
Polmeros: celulosa, protenas,
geno, ya que su molcula posee 6,9% de este elemento.
lignina, almidn, pesticidas
El cuadro 6 presenta composicin qumica de algunos Se obtiene fcilmente glucosa y amonio. Las enzimas son oxigenasas que catalizan la fijacin del
organismos y tejidos. Las mayores diferencias se encuen- oxgeno al sustrato y oxidasas que transfieren al oxgeno

Enzimas tran entre las sustancias encargadas de mantener la es- Los quitosanos han perdido los grupos acetilos -COCH3 y los electrones del sustrato con formacin de agua. Los com-
tructura celular y el cuadro 7 muestra las fracciones de la estn formados por largas cadenas glucosamina puestos aromticos simples son llevados al estado de dife-

Oligmeros, monmeros materia orgnica, las enzimas y productos finales en su (C6H9O4NH2). La quitina llega al suelo por aporte de in- noles. La degradacin de flavonoides en C6-C3-C6 es me-
degradacin. sectos, hongos y otros integrantes de la comunidad. Si se nos conocida y son ms resistentes a la degradacin.
compara el ataque de pelculas de quitina y celofn se
Anaerobiosis Cuadro 6- Composicin qumica de algunos observa que este ltimo permanece sin degradar por lar- La apertura del anillo est asegurada por dioxigenasas
Aerobiosis (fermentaciones, organismos y tejidos gos perodos de tiempo, mientras que la quitina es coloni- que fijan los tomos de una molcula de oxgeno al sus-
(ciclo ATC, respiraciones zada rpidamente (12 das en medio acutico y 12-32 trato; la ruptura puede hacerse entre dos funciones fenol
respiracin) anaerobias) g/100 g peso seco semanas en suelo de bosque). en posicin orta o bien en meta. La figura 7 muestra algu-

Clulas Tejido Msculo Tegumento nos de los posibles caminos en la degradacin.

CO2, H2O, CO2, H2, H2O, CH4 levadura vegetal mamfero insecto Numerosos hongos, bacterias y actinomicetes son res-
biomasa menos biomasa Mananos ponsables de la degradacin. Los actinomicetes dominan Los procesos de condensacin oxidativa son de impor-
microbiana microbiana y glucanos 28 ? - - en suelos agrcolas, las bacterias en los inundados y los tancia considerable pues conducen a la formacin de ta-
Quitina ? - - 25-55 hongos en clima templado y ligera acidez. ninos, melaninas, sustancias hmicas. Las enzimas, no
Celulosa - 15-60 - -
bien caracterizadas, se clasifican en dos grupos: la laca-
Hemicelulosas - 10-30 - -
sa y la tirosinasa que oxidan fenoles con formacin de
Biodegradacin de molculas orgnicas Lignina - 5-30 - -
Protenas y Las sustancias aromticas radicales libres que pueden condensarse entre ellos dan-
cidos nuclecos 24 2-15 80 25-37 do origen a productos oscuros, muy polimerizados. Bac-
Para facilidad en el estudio dividiremos a la materia org- Aminocidos 1,3 ? ? ? El suelo recibe cantidades importantes de sustancias aro- terias, levaduras, hongos filamentosos producen en el la-
nica en dos categoras. cidos alifticos ? 5-30 4,8 ?
Azcares solubles 0,5 ? ? ?
mticas que son aportadas por la vegetacin o sintetiza- boratorio sustancias condensadas del tipo de las molcu-
Glicgeno 18 - 2,0-7,2 - das por la microflora, sobre todo por hongos. Estas sus- las hmicas.
La materia orgnica fresca, constituida por los aportes
Lpidos 9 1-25 5,2 4-5 tancias estn constituidas por hetersidos con aglicona
de la vegetacin, hojas, tallos, races, exudados, clulas Cenizas 17 1-13 4,4 1 variada: En resumen: la apertura del ciclo conduce a mineraliza-
microbianas muertas y restos de animales. Todos estos no determinados 2,2 ? ? pigmentos,
con un solo anillo bencnico: fenoles, cidos benc- cin y la condensacin oxidativa a la acumulacin de po-
componentes, de origen biolgico, son sometidos a una fenoles,etc.
nicos de molcula tipo C6-C1 o C6-C3, como en cumari- lmeros resistentes que protegen a otras sustancias de la
serie de procesos que conducen a su biodegradacin con
nas y cidos cinmicos biodegradacin. El nivel de oxgeno es de gran importan-
participacin de equipos enzimticos especializados de
con dos anillos bencnicos unidos por una cadena cia: en anaerobiosis el anillo bencnico no es degradado,
los microorganismos. La fauna ejerce un efecto acelera- Mtodos de estudio
de tres carbonos o un heterociclo oxigenado (C6-C3-C6): Arthrobacter no produce pigmentos pardos si no es culti-
dor del proceso, reduciendo el tamao de las partculas
antocianos, flavonas, chalconas vado en baja presin de O2 en aerobiosis la degradacin
(accin abrasiva o de molienda). El anlisis de la biodegradacin de una sustancia orgni-
compuestos fenlicos condensados: lignina, taninos, puede ser completa.
ca se realiza por alguno de los mtodos de estudio discu-
sustancias hmicas.
La materia orgnica nativa o humus, formada por pro- tidos en el captulo 8 y en el Anexo prctico, es decir:
La importancia de los fenoles en el suelo es ms cuali
cesos de descomposicin y resntesis posee estructura actividad respiratoria, anlisis de enzimas involucradas en
Entre los productos de sntesis microbiana se encuentran que cuantitativa: el nivel de carbono involucrado en es-
diferente a la materia orgnica original. Su estabilidad fren- los procesos, prdida de peso de los sustratos incorpora-
fenoles simples, pigmentos de estructura variada y ciertas combinaciones es bajo, pero constituyen molculas
te a la descomposicin es mayor que los dems compo- dos al suelo, aparicin de productos del metabolismo, re-
tos antibiticos de gran actividad biolgica. Los polifenoles son respon-
nentes orgnicos del suelo. cuentos de grupos fisiolgicos.
. sables de la resistencia de vegetales a hongos parsi-
El anillo bencnico es una estructura bastante estable: tos y estn involucrados en fenmenos de alelopata -
Analizaremos las distintas categoras de molculas con- La figura 2 (Sylivia et al., 1998) muestra el incremento en
su oxidacin puede conducir a la apertura del ciclo dan- una especie vegetal inhibe la germinacin o el crecimien-
tenidas en la materia orgnica fresca, cuya complejidad poblaciones zimgenas de bacterias y hongos luego de la
gos, mananos en levaduras, glucanos y levanos en cp- cuando adems del polisacrido se incorporan azcares adicin de sustratos orgnicos carbonados a un suelo y el
sulas bacterianas, poliurnidos en Cytophaga. Esta sn- simples y la ecologa es similar a la de la celulolisis. desprendimiento de CO2 del sustrato, del suelo y a partir de
tesis microbiana puede reflejarse en una aparente dismi- la degradacin de la biomasa microbiana de clulas muer- Bacterias
nucin en la degradacin de los polisacridos vegetales. tas. Ntese que para discernir entre las tres fuentes es ne-
Nmero
La degradacin puede dificultarse cuando estn muy uni- Sustancias pcticas cesario marcar el sustrato por ejemplo con C14. A medida
das a otras sustancias como a la celulosa. que los sustratos se van agotando, la micropoblacin de- Hongos
Se encuentran en la lmina media de las paredes vegeta- cae y puede llegar al viejo equilibrio o a uno nuevo.
Muchas enzimas estn involucradas: les y su rol es unir las clulas, aunque tambin se locali-
Xilanasas, arabanasas, etc., actuando tanto sobre cual- zan en paredes primarias y secundarias. Existen diferen- Cuadro 7- Principales componentes de la fraccin
quier punto de la molcula (endoenzimas) o desde los ex- cias en longitud de la cadena y solubilidad: orgnica del suelo, las enzimas actuantes
tremos de aquella (exoenzima). Las xilanasas pueden libe- la protopectina, es insoluble en agua y los productos formados
rar el dmero xilobiosa o xilosa que penetra en las clulas. la pectina, soluble y parcialmente esterificada con metanol
los cidos pcticos, son solubles en agua pero no este- C-CO
Componentes Enzimas Productos 2
Glicosidasas actan sobre los disacridos u oligsidos rificados
resultantes de la accin de las enzimas anteriores, libe- Celulosa celulasa, glucosidasas c. orgnicos,
Cantidad de carbono
rando azcares simples o cidos urnicos metabolizables Tres enzimas estn involucradas en la degradacin de Hemicelulosa hemicelulasas azcares, Residuos
cidos urnicos de plantas
dentro de las clulas. estos materiales: animales y
protopectinasa, que convierte protopectina en pectina Pectina pectinmetilesterasa c. pctico, etanol microorganismos
galactouronasa c. galactournico,
La degradacin de estos polmeros est ms extendida soluble
glucosa, arabinosa
que la celulolisis. pectin-metil esterasa, que ataca las uniones metil ster Biomasa microbiana
de la pectina para dar cido pctico y metanol Almidn amilasas, glucosidasas glucosa, maltosa
Glucanasas, que han sido poco estudiadas a pesar de poligalactouronasa, que ataca uniones entre unidades Quitina quitinasa, quitinobiasa glucosamina, c.
su rol importante en la lisis de los micelios fngicos. Para de cido galactournico tanto de la pectina como de los ctico, glucosa, C- Humus
NH3
aislar a los microorganismos responsables se introducen cidos pcticos
Ac.nuclecos nucleasas, nucleosidasa bases nitrogenadas, Residuos frescos Tiempo Residuos
en el suelo trampas de caolinita con paredes de diversos agregados humificados
nucleotidasa, amino- PO4-3
hongos. La microflora dominante est formada por hon- Muchos organismos del suelo poseen estas enzimas: hidrolasa
gos y actinomicetes. Erwinia, Clostridium, Pseudomonas, Rhizobium y nume- Figura 2- Respuesta microbiana y evolucin del CO luego
2
Protenas y pptidos proteinasa, peptidasa, aminocidos, de la adicin de materiales carbonados
rosos patgenos que pueden penetrar los tejidos.
deshidrogenasas cidos orgnicos,
Mananasas, son producidas extracelularmente por hon- y oxidasas NH3
gos y bacterias, en algunos es constitutiva, en otros indu- La diversidad de grupos microbianos y la habilidad para Cuadro 8- Factores que afectan la degradacin de
steres fosfatados fosfatasas, fitasas alcohol, inositol, materiales carbonados orgnicos
cible y atacan a heteroglicanos con manosa. colonizar una variedad de suelos y sustratos, indica que HPO4-2
la microflora pectinoltica es amplia (105-06/g de suelo),
steres sulfatados arilsulfatasa alcohol, SO4= Composicin del sustrato: los microorganismos
Estas enzimas extracelulares sufren degradacin biolgica aerobia y anaerobia.
y son altamente inhibidas por adsorcin a arcillas y como Lignina lacasa, peroxidasa cidos aromticos, emplean compuestos solubles de N, S y micronu-
fenoloxidasa compuestos fenli- trientes para su sntesis. Necesidad de relaciones
las celulasas, estn sometidas a represin catablica cuan- Los hongos y actinomicetes parecen ser los grupos ms ex-
cos
do la hidrlisis excede la magnitud de asimilacin. tendidos. Estas sustancias son atacadas desde el momento C/N/S/P de 100/10/1/1 aproximadamente
en que los restos vegetales llegan al suelo por los primeros Prcticas agrcolas: fertilizacin incluyendo abo-
Microflora colonizadores. Su asociacin a otros constituyentes de las Los estudios se realizan en: nos verdes
Es muy variada: hongos, actinomicetes y bacterias tpi- paredes pueden protegerlos (celulosa, polifenoles). Cultivos/manejo, irrigacin, encalado
in vitro, en condiciones controladas, cuando se desea co-
cas atacan a alguna fraccin de este complejo grupo en Caractersticas fsicas y qumicas del suelo
nocer el efecto de algn factor de inters, en sistemas
cultivo puro, empleando el polisacrido como fuente de Disponibilidad de O
estticos o mediante la tcnica de percolacin y/o 2
carbono y/o energa. Trabajos que inoculan microorganis- Quitina Agua (exceso)
mos sobre materiales vegetales esterilizados demostra- pH

in situ, en el campo, siguiendo desaparicin de sustan-
ron que sta es una actividad muy extendida entre los Este polisacrido est constituido por largas cadenas de Temperatura
cias y/o aparicin de productos finales.
microorganismos del suelo. La actividad es estimulada glucosamina, a diferencia de la celulosa que contiene
Glcidos La biodegradacin en el suelo es rpida, superando a la tualmente se sabe que la presencia de otras fuentes de to digestivo puede iniciar la degradacin. En aguas el pro-
velocidad de la desaparicin de la celulosa, hemicelulosa y carbono ms simples favorece a estos microorganismos. ceso es activo.
Azcares simples y oligsidos otros polisacridos, y se realiza tanto en aerobiosis como Los azcares simples, los compuestos pcticos o las he-
Estos compuestos llegan al suelo o se originan en l por en anaerobiosis (liberacin de cidos orgnicos y metano). micelulosas, incrementan la actividad celuloltica. La mi-
sntesis y degradacin de polisidos. Representan me- croflora estimulada por el sustrato simple induce la celu- Otros polmeros: mananos, xilanos, pectinas
nos del 2% del carbono total del suelo y su presencia es Microflora lasa al agotarse el mismo.
muy efmera, excepto tal vez, en el caso de la sacarosa La microflora amiloltica de los suelos es abundante, los Este grupo incluye a las mal designadas hemicelulosas:
(remolacha o caa). recuentos en medio slido presentan valores de 105 a La proporcin de lignina en los restos es otro de los un conjunto heterogneo de compuestos formados por una
107/gramo de suelo. Una multiplicidad de bacterias po- factores que afectan a la celulolisis. El cuadro 12 presen- cadena principal polisida, ms o menos larga y en gene-
Su concentracin en el suelo refleja el equilibrio entre las seen las enzimas especficas, y son Gram positivas o neta el efecto de dosis crecientes de lignina. ral formada por una misma unidad elemental (pentosa,
velocidades de aparicin y degradacin. Distintas vas me- gativas, esporuladas o asporgenas, aerobias o anaero- hexosa). Puede haber ramificaciones en la molcula, a
tablicas han sido reconocidas en los suelos: la de la gli- bias. Numerosos actinomicetes pueden emplear este po- El efecto inhibidor sobre la celulolisis se debera al pro- veces muy numerosas, con unidades diferentes a las de
clisis (exosa di-fosfato), el ciclo de la exosa monofosfato lisacrido as como muchos hongos filamentosos. Otros blema fsico resultante de la estrecha unin entre estos la cadena principal (hexosas, pentosas, metiladas o no,
(Enter-Doudoroff), que originan azcares de 3, 4, 5 6 sustratos pueden ser empleados por estos microorganis- dos polisacridos en las paredes celulares. Las enzimas cidos urnicos).
carbonos. En la clula microbiana, los glcidos proveen mos, incluida la celulosa. encontraran una barrera mecnica. A medida que los
de energa y subunidades para su biosntesis. La gran restos se enriquecen en lignina la celulolisis se hace ms Es ms correcto hablar de: xilanos (unidades de xilopira-
mayora de los microorganismos del suelo pueden em- La hidrlisis es catalizada por amilasas ( glucosidasas) lenta. nosa con enlaces 1-4 con o sin cadenas laterales de
plear los cidos orgnicos producidos por oxidaciones inducibles: se reconocen tres tipos: la , la amilasa y arabinosa o cido glucnico unidas al carbono 3), mana-
de hidratos de carbono y protenas, de modo que el nivel una glucosidasa. Cuadro 12- Degradacin de preparaciones de nos, glucanos, galactanos, en lugar de emplear el tr-
de cidos orgnicos de cadena simple es muy bajo y slo yute con diferentes cantidades de celulosa mino hemicelulosas, y compuestos pcticos formados
pueden acumularse en condiciones de anaerobiosis. La amilasa es una endoenzima que acta al azar so- y lignina (a los 21 das) por unidades de cido galactournico unidos por unlaces
bre amilosa y amilopectina. Con amilosa se acumulan 1-4. Resulta difcil aislar y purificar cada uno de estos
Polisidos de reserva como almidn, glucgeno o los grandes cantidades de maltosa y pequeas cantidades Preparado Celulosa Lignina % celulosa compuestos por su ntima asociacin con otras sustan-
provenientes de paredes celulares: celulosa, hemicelulo- de glucosa y del trisacrido maltotriosa. En la amilopecti- descompuesta cias en los restos vegetales y son muy frecuentes las al-
sas y compuestos pcticos, polmeros de aminoazcares, na esta enzima detiene su hidrlisis en las ramificacio- teraciones en la estructura durante la extraccin. Cuando
como la quitina. nes, acumulndose fracciones de alto peso molecular (dex- A 99,2 0,0 100,0 restos vegetales se incorporan al suelo la fraccin hemi-
trinas). La amilasa es exoenzima, actuando desde los B 95,5 3,3 95,6 celulsica desaparece inicialmente a alta velocidad, pero
Sustancias aromticas: simples como los fenoles, o po- extremos de la molcula, liberndose maltosa y dextri- C 89,3 6,3 83,1 luego el proceso se hace ms lento (cuadro 13).
limerizadas como los taninos o la lignina. nas. Al llegar a una ramificacin se detiene la hidrlisis. D 82,7 11,9 37,9
Otros organismos poseen otra exoenzima, la amilo 1-6 E 75,6 12,6 17,7 Cuadro 13- % de descomposicin de algunos
Constituyentes hidrfobos: ceras, cutina, grasas. glucosidasa (glucoamilasa) capaz de hidrolizar la mo- constituyentes de la paja de cebada,
lcula en puntos de ramificacin, liberando al medio dex- En resumen: este importante proceso biolgico que ase- en aerobiosis
Almidn trinas y oligosacridos; los que no permanecen mucho gura la degradacin de la gran masa de celulosa que cada
Representa una reserva para los vegetales que se en- tiempo en el suelo pues otras enzimas los llevan a gluco- ao llega a suelos y aguas es realizado por una microflo-
Das Hemicelulosa Celulosa
cuentra transitoriamente en hojas y es movilizado hacia sa, asimilada por las clulas. ra variada (bacterias, incluidos los actinomicetes, hon-
los tallos, bulbos, rizomas, frutos y semillas. Integra en gos, protozoos), aunque el nmero de especies celulolti- 0-4 43,5 2,3
pequea proporcin las paredes de algas. Como es movi- Estas enzimas son inducibles, pero la habilidad para pro- cas no es muy amplio. El proceso ocurre en todos los 4-8 6,5 9,1
lizado en las clulas antes de la muerte llega al suelo en ducirlas depende del tipo de almidn de diferentes espe- ambientes tanto en condiciones de aerobiosis como de 8-16 5,4 25,0
poca cantidad. Est formado por amilosa y amilopecti- cies vegetales. La naturaleza exocelular las hace sensi- anegamiento. En ambientes cidos dominan los hongos;
na; el primer componente posee estructura lineal, con bles al ambiente y pueden ser muy adsorbidas por |os en los cultivados y neutros, las bacterias; bajo deseca- La heterogeneidad de esta fraccin puede explicar este
varios cientos de unidades glucosa unidas por enlaces coloides. Los azcares simples solubles penetran en la cin y ligera alcalinidad, los actinomicetes. hecho, las sustancias clasificadas como hemicelulosas no
glucosdicos 1-4. En la amilopectina se presenta esta clula donde son metabolizados. son igualmente lbiles: los xilanos y mananos desapare-
misma organizacin, pero la molcula es ramificada, con La fauna: caros, colmbolos, termites, actan moliendo cen primero, mientras que los galactanos son ms resis-
cadenas laterales unidas por enlaces 1-6. El almidn Ecologa y macerando a la celulosa nativa, lo que facilita su degra- tentes. Adems, la microflora sintetiza sustancias de este
contiene un 70-90% de amilosa, pero esta proporcin va- Fuera de los casos descriptos de inhibicin de la degradacin, pero no poseen celulasas. La microflora de su trac- tipo: glucanos y pentosanos en las paredes de los hon-
ra en distintas especies vegetales. dacin por adsorcin de enzimas, el almidn es descom-
O2 consumido Resulta evidente que el encalado de suelos cidos esti- puesto en todos los ambientes por accin de una micro- sitivas por steres fosfatados, los cidos teicoicos y lipo-
celulosa + amonio mula el proceso. flora poco especfica. Los productos finales dependern protenas y lipopolisacridos en las Gram negativas.
celulosa y c. hmicos
no solamente de la microflora dominante sino tambin de
Humedad y aireacin: como vimos, la microflora espec- las condiciones ecolgicas. Algunos autores han seala- Cuadro 9- Composicin qumica de distintos
celulosa sola
fica puede ser aerobia o anaerobia, de modo que el nivel do velocidades diferentes de degradacin segn el origen vegetales
hdrico de los suelos condicionar la actividad de cada del almidn: el de arroz parece ser atacado por un gran
suelo solo uno de estos grupos. Por su rendimiento energtico el nmero de microorganismos. % materia seca al aire
proceso es ms lento en ambientes anegados o en sue- Constituyentes centeno jven alfalfa acculas de pino
los con pobre intercambio de gases. Inulina Grasas y ceras 2,35 10,41 23,92
0 150 300 horas Constituye otro polisacrido de reserva, formado por uni- Solubles en agua 29,54 17,24 7,29
Figura 5- Efecto de agregado de nitrgeno en la celulolisis El cuadro 11 muestra el efecto del pH y de la aireacin del dades de fructosa (25-28), unidos a la cadena lateral por Hemicelulosas 12,67 13,14 18,98
suelo en el coeficiente de mineralizacin del carbono (a) y enlaces 2-1. Numerosos microorganismos: bacterias, ac- Celulosa 17,84 23,65 16,43
del cultivo y la profundidad (b). tinomicetes, hongos, poseen inulasa, exoenzima que li- Lignina 10,61 8,95 22,68
Temperatura: el proceso ocurre desde temperaturas cer- bera un disacrido de fructosa. Su degradacin ocurre si- Protenas 12,26 12,81 2,19
canas al punto de congelamiento hasta aproximadamen- Como puede apreciarse, un pH neutro y condiciones de multneamente con la del almidn. Cenizas 12,55 10,30 2,51
te 65C. Los aumentos de temperatura inducen variacio- buena aireacin en los suelos favorecen a este proceso.
nes en la composicin de la poblacin con incrementos Las bacterias sern en estas condiciones los agentes do-
de la velocidad de degradacin. En el rango termfilo son minantes de la celulolisis. El proceso disminuye con la Glcidos de paredes celulares
joven antes espigazn antes floracin casi maduro
Clostridium, actinomicetes y hongos, las poblaciones do- profundidad en correlacin directa con el descenso de la
minantes, aunque estos organismos son considerados actividad biolgica y del nivel de materia orgnica. Los Las paredes celulares de los vegetales superiores poseen
ms bien como mesfilos resistentes. En el suelo la ma- cultivos son fuente permanente de celulosa a nivel rizos- una estructura compleja que al ser tratada con leja de
yora de las especies son mesfilas. frico por la descamacin y muerte de tejidos. soda (NaOH al 17,5%) libera glcidos secundarios: las
mal llamadas hemicelulosas y compuestos pcticos, de-
Cuadro 11- Efecto de algunos factores en jando un residuo insoluble formado por celulosa y distin-
% celulosa degradada
hidrosoluble
pentosanos
soluble en
protenas
100
celulosa
la celulolisis tas proporciones de lignina, la que a medida que la planta
cenizas
eter
lignina
envejece va invadiendo las paredes primarias y secunda-
80
a) pH y aireacin rias a partir de la lmina media.
Figura 3- Efecto de la edad en la composicin qumica
pH aereacin % celulosa coeficiente de de la cebada
Los restos vegetales cuando llegan al suelo estn forma-
degradada mineralizacin
40 dos en gran parte, salvo en el caso de la incorporacin de
en 15 das
abonos verdes, por paredes celulares. La celulosa, he- Celulosa
0 20 40 60 80
4,5 aerobiosis 62,5 3,6 micelulosas, pectinas y lignina representan aproximada-
N-mineral (mg/kg) anaerobiosis 14,0 0,1 mente el 45% de la materia seca en centeno joven y alfal- Como vimos, la celulosa es uno de los constituyentes ve-
7,0 aerobiosis 81,2 11,2 fa en floracin, 55% en acculas de pino, alcanzando un getales ms importantes, representando un 15% del peso
anaerobiosis 21,0 0,15 75% en paja de centeno luego de la cosecha, como se seco de leguminosas y gramneas jvenes y ms de 50%
Figura 6- Efecto de dosis creciente de N mineral
en la celulolisis b) profundidad del suelo y cultivo aprecia en el cuadro 9 y en la figura 3. en materiales leosos (en promedio representa 1/3 del
% celulosa descompuesta CO2 fijado por las plantas). Sin embargo, los anlisis de
profundidad (cm) no cultivado cultivado Las paredes de los microorganismos contienen distintos suelos indican que slo representa una pequea fraccin
pH: los microorganismos celulolticos menos afectados por
polisacridos: los hongos primitivos poseen celulosa que (menos del 1%) de la materia orgnica.
los cambios de pH son las bacterias anaerobias. En ge- 0-20 48 91 luego es reemplazada por quitina y otros polisidos con o
neral se puede decir que la celulolisis es ms activa en 20-40 16 72
sin nitrgeno, comparables por su solubilidad a las hemice- La celulolisis tal vez constituya la etapa mejor conocida
suelos bien provistos de bases, neutros y que la composi- 40-60 0 34
lulosas de los vegetales. Especies filamentosas contienen del ciclo del carbono. Las investigaciones en estos as-
cin de especies dominantes vara con este factor. En
en sus paredes pigmentos amorfos y oscuros, las melani- pectos han sido estimuladas por los graves problemas oca-
ambientes cidos son las bacterias anaerobias y los hon- Otros nutrientes: se pensaba que los celulolticos verda-
nas. En las bacterias, el pptidoglicano formado por ami- sionados por los microorganismos celulolticos en la in-
gos los grupos dominantes, mientras que los actinomice- deros (con la enzima C1) no podan emplear otra fuente
noazcares y pptidos est acompaado en las Gram po- dustria textil y papelera. Se calcula que anualmente unas
tes prefieren la neutralidad o escasa basicidad. de carbono y energa que no fuera la celulosa. Pero ac-
10 millones de toneladas de carbono se fijan como celulo- Cuadro 10- Microflora celuloltica ponentes en el complejo enzimtico, organizados en cua- glucosidasa que cataliza la ltima etapa de la de-
sa, cantidad que los suelos deben degradar en el mismo tro tipos bsicos de enzimas: gradacin, es una hidrolasa que lleva la celobiosa, ce-
perodo. Grupo Orden Gnero Ecologa lotriosa y otros oligosacridos de bajo peso molecular
bacterias Pseudomonadales Vibrio aerobios, en mantillos, mesfilos C1, pobremente caracterizada, acta sobre la celulosa hasta glucosa. El antiguo trmino de celobiasa es in-
Cellvibrio termfilos, con pigmentos
La celulosa est constituida por unidades de glucosa, uni- Eubacteriales Cellulomonas aerobios, G-, bacilos pigmentados
nativa y la contienen los organismos denominados ce- apropiado pues la celobiosa no constituye su nico
das en largas cadenas por enlaces 1-4 glucosdicos. Bacillus aerobios, a veces pleomrficos lulolticos verdaderos. Est integrada por protenas con sustrato.
Clostridium anaerobios, suelos inundados, turbas
Pueden presentarse entre 2.000 a 10.000 y hasta a veces Mixobacteriales Cytophaga bacilos aerobios, en suelos con pajas ligeras diferencias estructurales entre los distintos gru-
ms de 15.000 unidades de glucosa en la molcula, se- Sporocytophaga o abonos orgnicos pos microbianos. En la mayora de los organismos el sistema celulasa
Actinomycetales Streptomyces crecen en agar mineral con celulosa,
gn la especie vegetal. La estructura fsica tambin vara, Micromonospora halo de hidrlisis, pigmentos Cx, complejo enzimtico de accin 1-4 glucanasa, no es inducible y se sintetiza en presencia de celulosa y
las cadenas se renen en microfibrillas entre las cuales Nocardia hidroliza la celulosa nativa sino que ataca a los polme- carbohidratos relacionados y est sometida a represin
se distinguen mallas cristalinas separadas por regiones protozoos Hertmella descomponen celulosa en cultivo ros parcialmente degradados y est muy distribuida entre catablica, los productos de la reaccin inhiben o repri-
puro. Importantes en el rumen,
amorfas. Las mallas estn fuertemente unidas por puen- menos en el suelo los hongos, bacterias y actinomicetes. La hidrlisis in- men la sntesis de la enzima. Por la accin extracelular,
tes H o por fuerzas de Van der Waals. Segn la estructu- hongos Ascomycetes Rhizoctonia, activos degradadores de la celulosa, cluye adicin de agua al sustrato insoluble con rupturas esta enzima est muy sometida a factores del medio.
ra, la orientacin de las fibrillas, la proporcin de constitu- Humicola, dominan en ambientes cidos, de enlaces entre azcares. Un alto contenido de arcillas puede inactivarla, fenme-
Botrytrichum en mantillos de bosques.
yentes secundarios, la celulosa se comporta diferentemen- Alternaria, Tambin se encuentran en el rumen no que junto a la adsorcin del sustrato puede explicar
Rhizopus
te frente a la biodegradacin. celulosa nativa steres celulsicos (celofn) en parte el efecto protector de la montmorillonita sobre
celulosa precipitada, molida
C1 materiales celulsicos.
Adems, los tratamientos mecnicos a que se somete a hidrlisis
oxidacin?
las preparaciones industriales afectan la biodegradacin: fuente de carbono y energa, pero actan como pobres Ecologa
papel, celofn, celulosa precipitada, carboximetilcelulosa competidores frente a otros grupos microbianos. celulosa activada Entre los factores ms importantes que afectan a este pro-
(CMC) son empleados en los medios de cultivo, o llegan Cx(CxA, CxB, CxC)
ceso en la naturaleza citaremos el nivel de nitrgeno dis-
al suelo. Estos preparados difieren en estructura y propie- Los hongos son activos degradadores en ambientes des- ponible, la temperatura, aireacin, humedad, pH, presen-
dades fsicas de la celulosa natural. favorables para las bacterias: pH cidos, alta humedad. celobiosa cia de otros carbohidratos en los restos.
celotriosa
Numerosas especies participan en la degradacin de la celotetralosa
Microorganismos fraccin lignocelulsica de restos vegetales. Nitrgeno: la aplicacin de N-inorgnico estimula la ce-
Este polisacrido es hidrolizado por un complejo enzim- beta glucosidasa lulolisis, hecho explicable ya que la celulosa no contiene
tico, no completamente caracterizado, conocido como ce- Los protozoos son activos degradadores en el rumen, en este elemento y la microflora lo requiere junto a otros mi-
lulasa, presente en una variedad de bacterias, actinomi- anaerobiosis; en el suelo y aguas prefieren la fagocitosis glucosa
nerales para satisfacer sus necesidades plsticas.
cetes, hongos y protozoos. Las especies celulolticas no de pequeos organismos. aerobiosis anaerobiosis
son muy numerosas dentro de cada grupo. El cuadro 10 La figura 5 muestra el empleo de diferentes fuentes de
biomasa microbiana, CO2 menos biomasa, CO2, CH4, H2, H2O
presenta las caractersticas de los microorganismos celu- Celulolisis: Las bacterias se observan a nivel de las re- cidos orgnicos (lctico, actico, etc.)
nitrgeno por la microflora celuloltica y la figura 6 el efec-
H2O, cidos urnicos, etc.
lolticos. giones amorfas, pero no penetran en el lumen de las fi- to de dosis crecientes de fertilizante nitrogenado. Altas
bras salvo que stas estn lesionadas. Los hongos pue- Figura 4- Celulolisis dosis, donde el nitrgeno agregado supera el requerido,
La celulosa es en ocasiones degradada ms rpidamente den atravesar las paredes a nivel de puntuaciones o fisu- no incrementan la degradacin, pues otros son los facto-
en cultivos mixtos, aun cuando los organismos asociados ras: las fibras se hinchan y se observan estras profun- La accin se realiza al azar (accin endoglucanasa), libe- res limitantes del proceso.
sean incapaces individualmente de atacar el polisacri- das. Cambia la reaccin frente al iodo, se altera la estruc- rndose productos solubles como la celobiosa, aunque
do. La microflora primaria se favorece por la remocin de tura fsica y el material se transforma en una masa musci- los productos finales dependen del tipo de organismo (otros Los microorganismos requieren una parte de nitrgeno
los productos de la degradacin o por la eliminacin de laginosa hasta su desaparicin total. oligosacridos y a veces glucosa). por cada 35 partes de celulosa, datos que reflejan el he-
sustancias inhibidoras (comensalismo). cho de que 3 partes de nitrgeno se incorporan al cito-
La celulasa cataliza la conversin de la celulosa insolu- Si el ataque se produce desde los extremos de la molcu- plasma microbiano por cada 100 partes de celulosa des-
Las bacterias son activas degradadoras, algunas espe- ble en mono, di, tri o tetrasacridos. Los dos primeros son la (accin exoenzimtica), la celobiosa es el producto do- compuesta (5-10% N) posibilitando la sntesis de 30-60
cies actan como celulolticos verdaderos (atacan a la solubles en agua y penetran en la clula integrando las minante. Estos trminos no deben confundirse con la ac- unidades de biomasa.
celulosa nativa) como los gneros Cytophaga y Sporo- vas metablicas que rinden energa o proveen de subu- cin a distancia de la clula productora (la C1 y Cx deben
cytophaga. Dentro de los Actinomycetales numerosos nidades para sus macromolculas. La figura 4 esquema- actuar extracelularmente dada la insolubilidad de los sus- En algunos suelos el fsforo puede ser factor limitante del
Streptomyces son capaces de emplear celulosa como tiza la degradacin. Se han determinado hasta 14 com- tratos y sus grandes dimensiones). proceso.
10 millones de toneladas de carbono se fijan como celulo- Cuadro 10- Microflora celuloltica ponentes en el complejo enzimtico, organizados en cua- glucosidasa que cataliza la ltima etapa de la de-
sa, cantidad que los suelos deben degradar en el mismo tro tipos bsicos de enzimas: gradacin, es una hidrolasa que lleva la celobiosa, ce-
perodo. Grupo Orden Gnero Ecologa lotriosa y otros oligosacridos de bajo peso molecular
bacterias Pseudomonadales Vibrio aerobios, en mantillos, mesfilos C1, pobremente caracterizada, acta sobre la celulosa hasta glucosa. El antiguo trmino de celobiasa es in-
Cellvibrio termfilos, con pigmentos
La celulosa est constituida por unidades de glucosa, uni- Eubacteriales Cellulomonas aerobios, G-, bacilos pigmentados
nativa y la contienen los organismos denominados ce- apropiado pues la celobiosa no constituye su nico
das en largas cadenas por enlaces 1-4 glucosdicos. Bacillus aerobios, a veces pleomrficos lulolticos verdaderos. Est integrada por protenas con sustrato.
Clostridium anaerobios, suelos inundados, turbas
Pueden presentarse entre 2.000 a 10.000 y hasta a veces Mixobacteriales Cytophaga bacilos aerobios, en suelos con pajas ligeras diferencias estructurales entre los distintos gru-
ms de 15.000 unidades de glucosa en la molcula, se- Sporocytophaga o abonos orgnicos pos microbianos. En la mayora de los organismos el sistema celulasa
Actinomycetales Streptomyces crecen en agar mineral con celulosa,
gn la especie vegetal. La estructura fsica tambin vara, Micromonospora halo de hidrlisis, pigmentos Cx, complejo enzimtico de accin 1-4 glucanasa, no es inducible y se sintetiza en presencia de celulosa y
las cadenas se renen en microfibrillas entre las cuales Nocardia hidroliza la celulosa nativa sino que ataca a los polme- carbohidratos relacionados y est sometida a represin
se distinguen mallas cristalinas separadas por regiones protozoos Hertmella descomponen celulosa en cultivo ros parcialmente degradados y est muy distribuida entre catablica, los productos de la reaccin inhiben o repri-
puro. Importantes en el rumen,
amorfas. Las mallas estn fuertemente unidas por puen- menos en el suelo los hongos, bacterias y actinomicetes. La hidrlisis in- men la sntesis de la enzima. Por la accin extracelular,
tes H o por fuerzas de Van der Waals. Segn la estructu- hongos Ascomycetes Rhizoctonia, activos degradadores de la celulosa, cluye adicin de agua al sustrato insoluble con rupturas esta enzima est muy sometida a factores del medio.
ra, la orientacin de las fibrillas, la proporcin de constitu- Humicola, dominan en ambientes cidos, de enlaces entre azcares. Un alto contenido de arcillas puede inactivarla, fenme-
Botrytrichum en mantillos de bosques.
yentes secundarios, la celulosa se comporta diferentemen- Alternaria, Tambin se encuentran en el rumen no que junto a la adsorcin del sustrato puede explicar
Rhizopus
te frente a la biodegradacin. celulosa nativa steres celulsicos (celofn) en parte el efecto protector de la montmorillonita sobre
celulosa precipitada, molida
C1 materiales celulsicos.
Adems, los tratamientos mecnicos a que se somete a hidrlisis
oxidacin?
las preparaciones industriales afectan la biodegradacin: fuente de carbono y energa, pero actan como pobres Ecologa
papel, celofn, celulosa precipitada, carboximetilcelulosa competidores frente a otros grupos microbianos. celulosa activada Entre los factores ms importantes que afectan a este pro-
(CMC) son empleados en los medios de cultivo, o llegan Cx(CxA, CxB, CxC)
ceso en la naturaleza citaremos el nivel de nitrgeno dis-
al suelo. Estos preparados difieren en estructura y propie- Los hongos son activos degradadores en ambientes des- ponible, la temperatura, aireacin, humedad, pH, presen-
dades fsicas de la celulosa natural. favorables para las bacterias: pH cidos, alta humedad. celobiosa cia de otros carbohidratos en los restos.
celotriosa
Numerosas especies participan en la degradacin de la celotetralosa
Microorganismos fraccin lignocelulsica de restos vegetales. Nitrgeno: la aplicacin de N-inorgnico estimula la ce-
Este polisacrido es hidrolizado por un complejo enzim- beta glucosidasa lulolisis, hecho explicable ya que la celulosa no contiene
tico, no completamente caracterizado, conocido como ce- Los protozoos son activos degradadores en el rumen, en este elemento y la microflora lo requiere junto a otros mi-
lulasa, presente en una variedad de bacterias, actinomi- anaerobiosis; en el suelo y aguas prefieren la fagocitosis glucosa
nerales para satisfacer sus necesidades plsticas.
cetes, hongos y protozoos. Las especies celulolticas no de pequeos organismos. aerobiosis anaerobiosis
son muy numerosas dentro de cada grupo. El cuadro 10 La figura 5 muestra el empleo de diferentes fuentes de
biomasa microbiana, CO2 menos biomasa, CO2, CH4, H2, H2O
presenta las caractersticas de los microorganismos celu- Celulolisis: Las bacterias se observan a nivel de las re- cidos orgnicos (lctico, actico, etc.)
nitrgeno por la microflora celuloltica y la figura 6 el efec-
H2O, cidos urnicos, etc.
lolticos. giones amorfas, pero no penetran en el lumen de las fi- to de dosis crecientes de fertilizante nitrogenado. Altas
bras salvo que stas estn lesionadas. Los hongos pue- Figura 4- Celulolisis dosis, donde el nitrgeno agregado supera el requerido,
La celulosa es en ocasiones degradada ms rpidamente den atravesar las paredes a nivel de puntuaciones o fisu- no incrementan la degradacin, pues otros son los facto-
en cultivos mixtos, aun cuando los organismos asociados ras: las fibras se hinchan y se observan estras profun- La accin se realiza al azar (accin endoglucanasa), libe- res limitantes del proceso.
sean incapaces individualmente de atacar el polisacri- das. Cambia la reaccin frente al iodo, se altera la estruc- rndose productos solubles como la celobiosa, aunque
do. La microflora primaria se favorece por la remocin de tura fsica y el material se transforma en una masa musci- los productos finales dependen del tipo de organismo (otros Los microorganismos requieren una parte de nitrgeno
los productos de la degradacin o por la eliminacin de laginosa hasta su desaparicin total. oligosacridos y a veces glucosa). por cada 35 partes de celulosa, datos que reflejan el he-
sustancias inhibidoras (comensalismo). cho de que 3 partes de nitrgeno se incorporan al cito-
La celulasa cataliza la conversin de la celulosa insolu- Si el ataque se produce desde los extremos de la molcu- plasma microbiano por cada 100 partes de celulosa des-
Las bacterias son activas degradadoras, algunas espe- ble en mono, di, tri o tetrasacridos. Los dos primeros son la (accin exoenzimtica), la celobiosa es el producto do- compuesta (5-10% N) posibilitando la sntesis de 30-60
cies actan como celulolticos verdaderos (atacan a la solubles en agua y penetran en la clula integrando las minante. Estos trminos no deben confundirse con la ac- unidades de biomasa.
celulosa nativa) como los gneros Cytophaga y Sporo- vas metablicas que rinden energa o proveen de subu- cin a distancia de la clula productora (la C1 y Cx deben
cytophaga. Dentro de los Actinomycetales numerosos nidades para sus macromolculas. La figura 4 esquema- actuar extracelularmente dada la insolubilidad de los sus- En algunos suelos el fsforo puede ser factor limitante del
Streptomyces son capaces de emplear celulosa como tiza la degradacin. Se han determinado hasta 14 com- tratos y sus grandes dimensiones). proceso.
O2 consumido Resulta evidente que el encalado de suelos cidos esti- puesto en todos los ambientes por accin de una micro- sitivas por steres fosfatados, los cidos teicoicos y lipo-
celulosa + amonio mula el proceso. flora poco especfica. Los productos finales dependern protenas y lipopolisacridos en las Gram negativas.
celulosa y c. hmicos
no solamente de la microflora dominante sino tambin de
Humedad y aireacin: como vimos, la microflora espec- las condiciones ecolgicas. Algunos autores han seala- Cuadro 9- Composicin qumica de distintos
celulosa sola
fica puede ser aerobia o anaerobia, de modo que el nivel do velocidades diferentes de degradacin segn el origen vegetales
hdrico de los suelos condicionar la actividad de cada del almidn: el de arroz parece ser atacado por un gran
suelo solo uno de estos grupos. Por su rendimiento energtico el nmero de microorganismos. % materia seca al aire
proceso es ms lento en ambientes anegados o en sue- Constituyentes centeno jven alfalfa acculas de pino
los con pobre intercambio de gases. Inulina Grasas y ceras 2,35 10,41 23,92
0 150 300 horas Constituye otro polisacrido de reserva, formado por uni- Solubles en agua 29,54 17,24 7,29
Figura 5- Efecto de agregado de nitrgeno en la celulolisis El cuadro 11 muestra el efecto del pH y de la aireacin del dades de fructosa (25-28), unidos a la cadena lateral por Hemicelulosas 12,67 13,14 18,98
suelo en el coeficiente de mineralizacin del carbono (a) y enlaces 2-1. Numerosos microorganismos: bacterias, ac- Celulosa 17,84 23,65 16,43
del cultivo y la profundidad (b). tinomicetes, hongos, poseen inulasa, exoenzima que li- Lignina 10,61 8,95 22,68
Temperatura: el proceso ocurre desde temperaturas cer- bera un disacrido de fructosa. Su degradacin ocurre si- Protenas 12,26 12,81 2,19
canas al punto de congelamiento hasta aproximadamen- Como puede apreciarse, un pH neutro y condiciones de multneamente con la del almidn. Cenizas 12,55 10,30 2,51
te 65C. Los aumentos de temperatura inducen variacio- buena aireacin en los suelos favorecen a este proceso.
nes en la composicin de la poblacin con incrementos Las bacterias sern en estas condiciones los agentes do-
de la velocidad de degradacin. En el rango termfilo son minantes de la celulolisis. El proceso disminuye con la Glcidos de paredes celulares
joven antes espigazn antes floracin casi maduro
Clostridium, actinomicetes y hongos, las poblaciones do- profundidad en correlacin directa con el descenso de la
minantes, aunque estos organismos son considerados actividad biolgica y del nivel de materia orgnica. Los Las paredes celulares de los vegetales superiores poseen
ms bien como mesfilos resistentes. En el suelo la ma- cultivos son fuente permanente de celulosa a nivel rizos- una estructura compleja que al ser tratada con leja de
yora de las especies son mesfilas. frico por la descamacin y muerte de tejidos. soda (NaOH al 17,5%) libera glcidos secundarios: las
mal llamadas hemicelulosas y compuestos pcticos, de-
Cuadro 11- Efecto de algunos factores en jando un residuo insoluble formado por celulosa y distin-
% celulosa degradada
hidrosoluble
pentosanos
soluble en
protenas
100
celulosa
la celulolisis tas proporciones de lignina, la que a medida que la planta
cenizas
eter
lignina
envejece va invadiendo las paredes primarias y secunda-
80
a) pH y aireacin rias a partir de la lmina media.
Figura 3- Efecto de la edad en la composicin qumica
pH aereacin % celulosa coeficiente de de la cebada
Los restos vegetales cuando llegan al suelo estn forma-
degradada mineralizacin
40 dos en gran parte, salvo en el caso de la incorporacin de
en 15 das
abonos verdes, por paredes celulares. La celulosa, he- Celulosa
0 20 40 60 80
4,5 aerobiosis 62,5 3,6 micelulosas, pectinas y lignina representan aproximada-
N-mineral (mg/kg) anaerobiosis 14,0 0,1 mente el 45% de la materia seca en centeno joven y alfal- Como vimos, la celulosa es uno de los constituyentes ve-
7,0 aerobiosis 81,2 11,2 fa en floracin, 55% en acculas de pino, alcanzando un getales ms importantes, representando un 15% del peso
anaerobiosis 21,0 0,15 75% en paja de centeno luego de la cosecha, como se seco de leguminosas y gramneas jvenes y ms de 50%
Figura 6- Efecto de dosis creciente de N mineral
en la celulolisis b) profundidad del suelo y cultivo aprecia en el cuadro 9 y en la figura 3. en materiales leosos (en promedio representa 1/3 del
% celulosa descompuesta CO2 fijado por las plantas). Sin embargo, los anlisis de
profundidad (cm) no cultivado cultivado Las paredes de los microorganismos contienen distintos suelos indican que slo representa una pequea fraccin
pH: los microorganismos celulolticos menos afectados por
polisacridos: los hongos primitivos poseen celulosa que (menos del 1%) de la materia orgnica.
los cambios de pH son las bacterias anaerobias. En ge- 0-20 48 91 luego es reemplazada por quitina y otros polisidos con o
neral se puede decir que la celulolisis es ms activa en 20-40 16 72
sin nitrgeno, comparables por su solubilidad a las hemice- La celulolisis tal vez constituya la etapa mejor conocida
suelos bien provistos de bases, neutros y que la composi- 40-60 0 34
lulosas de los vegetales. Especies filamentosas contienen del ciclo del carbono. Las investigaciones en estos as-
cin de especies dominantes vara con este factor. En
en sus paredes pigmentos amorfos y oscuros, las melani- pectos han sido estimuladas por los graves problemas oca-
ambientes cidos son las bacterias anaerobias y los hon- Otros nutrientes: se pensaba que los celulolticos verda-
nas. En las bacterias, el pptidoglicano formado por ami- sionados por los microorganismos celulolticos en la in-
gos los grupos dominantes, mientras que los actinomice- deros (con la enzima C1) no podan emplear otra fuente
noazcares y pptidos est acompaado en las Gram po- dustria textil y papelera. Se calcula que anualmente unas
tes prefieren la neutralidad o escasa basicidad. de carbono y energa que no fuera la celulosa. Pero ac-
Glcidos La biodegradacin en el suelo es rpida, superando a la tualmente se sabe que la presencia de otras fuentes de to digestivo puede iniciar la degradacin. En aguas el pro-
velocidad de la desaparicin de la celulosa, hemicelulosa y carbono ms simples favorece a estos microorganismos. ceso es activo.
Azcares simples y oligsidos otros polisacridos, y se realiza tanto en aerobiosis como Los azcares simples, los compuestos pcticos o las he-
Estos compuestos llegan al suelo o se originan en l por en anaerobiosis (liberacin de cidos orgnicos y metano). micelulosas, incrementan la actividad celuloltica. La mi-
sntesis y degradacin de polisidos. Representan me- croflora estimulada por el sustrato simple induce la celu- Otros polmeros: mananos, xilanos, pectinas
nos del 2% del carbono total del suelo y su presencia es Microflora lasa al agotarse el mismo.
muy efmera, excepto tal vez, en el caso de la sacarosa La microflora amiloltica de los suelos es abundante, los Este grupo incluye a las mal designadas hemicelulosas:
(remolacha o caa). recuentos en medio slido presentan valores de 105 a La proporcin de lignina en los restos es otro de los un conjunto heterogneo de compuestos formados por una
107/gramo de suelo. Una multiplicidad de bacterias po- factores que afectan a la celulolisis. El cuadro 12 presen- cadena principal polisida, ms o menos larga y en gene-
Su concentracin en el suelo refleja el equilibrio entre las seen las enzimas especficas, y son Gram positivas o neta el efecto de dosis crecientes de lignina. ral formada por una misma unidad elemental (pentosa,
velocidades de aparicin y degradacin. Distintas vas me- gativas, esporuladas o asporgenas, aerobias o anaero- hexosa). Puede haber ramificaciones en la molcula, a
tablicas han sido reconocidas en los suelos: la de la gli- bias. Numerosos actinomicetes pueden emplear este po- El efecto inhibidor sobre la celulolisis se debera al pro- veces muy numerosas, con unidades diferentes a las de
clisis (exosa di-fosfato), el ciclo de la exosa monofosfato lisacrido as como muchos hongos filamentosos. Otros blema fsico resultante de la estrecha unin entre estos la cadena principal (hexosas, pentosas, metiladas o no,
(Enter-Doudoroff), que originan azcares de 3, 4, 5 6 sustratos pueden ser empleados por estos microorganis- dos polisacridos en las paredes celulares. Las enzimas cidos urnicos).
carbonos. En la clula microbiana, los glcidos proveen mos, incluida la celulosa. encontraran una barrera mecnica. A medida que los
de energa y subunidades para su biosntesis. La gran restos se enriquecen en lignina la celulolisis se hace ms Es ms correcto hablar de: xilanos (unidades de xilopira-
mayora de los microorganismos del suelo pueden em- La hidrlisis es catalizada por amilasas ( glucosidasas) lenta. nosa con enlaces 1-4 con o sin cadenas laterales de
plear los cidos orgnicos producidos por oxidaciones inducibles: se reconocen tres tipos: la , la amilasa y arabinosa o cido glucnico unidas al carbono 3), mana-
de hidratos de carbono y protenas, de modo que el nivel una glucosidasa. Cuadro 12- Degradacin de preparaciones de nos, glucanos, galactanos, en lugar de emplear el tr-
de cidos orgnicos de cadena simple es muy bajo y slo yute con diferentes cantidades de celulosa mino hemicelulosas, y compuestos pcticos formados
pueden acumularse en condiciones de anaerobiosis. La amilasa es una endoenzima que acta al azar so- y lignina (a los 21 das) por unidades de cido galactournico unidos por unlaces
bre amilosa y amilopectina. Con amilosa se acumulan 1-4. Resulta difcil aislar y purificar cada uno de estos
Polisidos de reserva como almidn, glucgeno o los grandes cantidades de maltosa y pequeas cantidades Preparado Celulosa Lignina % celulosa compuestos por su ntima asociacin con otras sustan-
provenientes de paredes celulares: celulosa, hemicelulo- de glucosa y del trisacrido maltotriosa. En la amilopecti- descompuesta cias en los restos vegetales y son muy frecuentes las al-
sas y compuestos pcticos, polmeros de aminoazcares, na esta enzima detiene su hidrlisis en las ramificacio- teraciones en la estructura durante la extraccin. Cuando
como la quitina. nes, acumulndose fracciones de alto peso molecular (dex- A 99,2 0,0 100,0 restos vegetales se incorporan al suelo la fraccin hemi-
trinas). La amilasa es exoenzima, actuando desde los B 95,5 3,3 95,6 celulsica desaparece inicialmente a alta velocidad, pero
Sustancias aromticas: simples como los fenoles, o po- extremos de la molcula, liberndose maltosa y dextri- C 89,3 6,3 83,1 luego el proceso se hace ms lento (cuadro 13).
limerizadas como los taninos o la lignina. nas. Al llegar a una ramificacin se detiene la hidrlisis. D 82,7 11,9 37,9
Otros organismos poseen otra exoenzima, la amilo 1-6 E 75,6 12,6 17,7 Cuadro 13- % de descomposicin de algunos
Constituyentes hidrfobos: ceras, cutina, grasas. glucosidasa (glucoamilasa) capaz de hidrolizar la mo- constituyentes de la paja de cebada,
lcula en puntos de ramificacin, liberando al medio dex- En resumen: este importante proceso biolgico que ase- en aerobiosis
Almidn trinas y oligosacridos; los que no permanecen mucho gura la degradacin de la gran masa de celulosa que cada
Representa una reserva para los vegetales que se en- tiempo en el suelo pues otras enzimas los llevan a gluco- ao llega a suelos y aguas es realizado por una microflo-
Das Hemicelulosa Celulosa
cuentra transitoriamente en hojas y es movilizado hacia sa, asimilada por las clulas. ra variada (bacterias, incluidos los actinomicetes, hon-
los tallos, bulbos, rizomas, frutos y semillas. Integra en gos, protozoos), aunque el nmero de especies celulolti- 0-4 43,5 2,3
pequea proporcin las paredes de algas. Como es movi- Estas enzimas son inducibles, pero la habilidad para pro- cas no es muy amplio. El proceso ocurre en todos los 4-8 6,5 9,1
lizado en las clulas antes de la muerte llega al suelo en ducirlas depende del tipo de almidn de diferentes espe- ambientes tanto en condiciones de aerobiosis como de 8-16 5,4 25,0
poca cantidad. Est formado por amilosa y amilopecti- cies vegetales. La naturaleza exocelular las hace sensi- anegamiento. En ambientes cidos dominan los hongos;
na; el primer componente posee estructura lineal, con bles al ambiente y pueden ser muy adsorbidas por |os en los cultivados y neutros, las bacterias; bajo deseca- La heterogeneidad de esta fraccin puede explicar este
varios cientos de unidades glucosa unidas por enlaces coloides. Los azcares simples solubles penetran en la cin y ligera alcalinidad, los actinomicetes. hecho, las sustancias clasificadas como hemicelulosas no
glucosdicos 1-4. En la amilopectina se presenta esta clula donde son metabolizados. son igualmente lbiles: los xilanos y mananos desapare-
misma organizacin, pero la molcula es ramificada, con La fauna: caros, colmbolos, termites, actan moliendo cen primero, mientras que los galactanos son ms resis-
cadenas laterales unidas por enlaces 1-6. El almidn Ecologa y macerando a la celulosa nativa, lo que facilita su degra- tentes. Adems, la microflora sintetiza sustancias de este
contiene un 70-90% de amilosa, pero esta proporcin va- Fuera de los casos descriptos de inhibicin de la degradacin, pero no poseen celulasas. La microflora de su trac- tipo: glucanos y pentosanos en las paredes de los hon-
ra en distintas especies vegetales. dacin por adsorcin de enzimas, el almidn es descom-
gos, mananos en levaduras, glucanos y levanos en cp- cuando adems del polisacrido se incorporan azcares adicin de sustratos orgnicos carbonados a un suelo y el
sulas bacterianas, poliurnidos en Cytophaga. Esta sn- simples y la ecologa es similar a la de la celulolisis. desprendimiento de CO2 del sustrato, del suelo y a partir de
tesis microbiana puede reflejarse en una aparente dismi- la degradacin de la biomasa microbiana de clulas muer- Bacterias
nucin en la degradacin de los polisacridos vegetales. tas. Ntese que para discernir entre las tres fuentes es ne-
Nmero
La degradacin puede dificultarse cuando estn muy uni- Sustancias pcticas cesario marcar el sustrato por ejemplo con C14. A medida
das a otras sustancias como a la celulosa. que los sustratos se van agotando, la micropoblacin de- Hongos
Se encuentran en la lmina media de las paredes vegeta- cae y puede llegar al viejo equilibrio o a uno nuevo.
Muchas enzimas estn involucradas: les y su rol es unir las clulas, aunque tambin se locali-
Xilanasas, arabanasas, etc., actuando tanto sobre cual- zan en paredes primarias y secundarias. Existen diferen- Cuadro 7- Principales componentes de la fraccin
quier punto de la molcula (endoenzimas) o desde los ex- cias en longitud de la cadena y solubilidad: orgnica del suelo, las enzimas actuantes
tremos de aquella (exoenzima). Las xilanasas pueden libe- la protopectina, es insoluble en agua y los productos formados
rar el dmero xilobiosa o xilosa que penetra en las clulas. la pectina, soluble y parcialmente esterificada con metanol
los cidos pcticos, son solubles en agua pero no este- C-CO
Componentes Enzimas Productos 2
Glicosidasas actan sobre los disacridos u oligsidos rificados
resultantes de la accin de las enzimas anteriores, libe- Celulosa celulasa, glucosidasas c. orgnicos,
Cantidad de carbono
rando azcares simples o cidos urnicos metabolizables Tres enzimas estn involucradas en la degradacin de Hemicelulosa hemicelulasas azcares, Residuos
cidos urnicos de plantas
dentro de las clulas. estos materiales: animales y
protopectinasa, que convierte protopectina en pectina Pectina pectinmetilesterasa c. pctico, etanol microorganismos
galactouronasa c. galactournico,
La degradacin de estos polmeros est ms extendida soluble
glucosa, arabinosa
que la celulolisis. pectin-metil esterasa, que ataca las uniones metil ster Biomasa microbiana
de la pectina para dar cido pctico y metanol Almidn amilasas, glucosidasas glucosa, maltosa
Glucanasas, que han sido poco estudiadas a pesar de poligalactouronasa, que ataca uniones entre unidades Quitina quitinasa, quitinobiasa glucosamina, c.
su rol importante en la lisis de los micelios fngicos. Para de cido galactournico tanto de la pectina como de los ctico, glucosa, C- Humus
NH3
aislar a los microorganismos responsables se introducen cidos pcticos
Ac.nuclecos nucleasas, nucleosidasa bases nitrogenadas, Residuos frescos Tiempo Residuos
en el suelo trampas de caolinita con paredes de diversos agregados humificados
nucleotidasa, amino- PO4-3
hongos. La microflora dominante est formada por hon- Muchos organismos del suelo poseen estas enzimas: hidrolasa
gos y actinomicetes. Erwinia, Clostridium, Pseudomonas, Rhizobium y nume- Figura 2- Respuesta microbiana y evolucin del CO luego
2
Protenas y pptidos proteinasa, peptidasa, aminocidos, de la adicin de materiales carbonados
rosos patgenos que pueden penetrar los tejidos.
deshidrogenasas cidos orgnicos,
Mananasas, son producidas extracelularmente por hon- y oxidasas NH3
gos y bacterias, en algunos es constitutiva, en otros indu- La diversidad de grupos microbianos y la habilidad para Cuadro 8- Factores que afectan la degradacin de
steres fosfatados fosfatasas, fitasas alcohol, inositol, materiales carbonados orgnicos
cible y atacan a heteroglicanos con manosa. colonizar una variedad de suelos y sustratos, indica que HPO4-2
la microflora pectinoltica es amplia (105-06/g de suelo),
steres sulfatados arilsulfatasa alcohol, SO4= Composicin del sustrato: los microorganismos
Estas enzimas extracelulares sufren degradacin biolgica aerobia y anaerobia.
y son altamente inhibidas por adsorcin a arcillas y como Lignina lacasa, peroxidasa cidos aromticos, emplean compuestos solubles de N, S y micronu-
fenoloxidasa compuestos fenli- trientes para su sntesis. Necesidad de relaciones
las celulasas, estn sometidas a represin catablica cuan- Los hongos y actinomicetes parecen ser los grupos ms ex-
cos
do la hidrlisis excede la magnitud de asimilacin. tendidos. Estas sustancias son atacadas desde el momento C/N/S/P de 100/10/1/1 aproximadamente
en que los restos vegetales llegan al suelo por los primeros Prcticas agrcolas: fertilizacin incluyendo abo-
Microflora colonizadores. Su asociacin a otros constituyentes de las Los estudios se realizan en: nos verdes
Es muy variada: hongos, actinomicetes y bacterias tpi- paredes pueden protegerlos (celulosa, polifenoles). Cultivos/manejo, irrigacin, encalado
in vitro, en condiciones controladas, cuando se desea co-
cas atacan a alguna fraccin de este complejo grupo en Caractersticas fsicas y qumicas del suelo
nocer el efecto de algn factor de inters, en sistemas
cultivo puro, empleando el polisacrido como fuente de Disponibilidad de O
estticos o mediante la tcnica de percolacin y/o 2
carbono y/o energa. Trabajos que inoculan microorganis- Quitina Agua (exceso)
mos sobre materiales vegetales esterilizados demostra- pH

in situ, en el campo, siguiendo desaparicin de sustan-
ron que sta es una actividad muy extendida entre los Este polisacrido est constituido por largas cadenas de Temperatura
cias y/o aparicin de productos finales.
microorganismos del suelo. La actividad es estimulada glucosamina, a diferencia de la celulosa que contiene
Cuadro 5- Vas degradativas en compuestos qumica condicionar en parte la actividad biolgica y por glucosa. Constituye un elemento importante del exoes- do cidos alifticos que sern metabolizados en el ciclo
carbonados lo tanto, su biodegradacin y ms adelante aspectos de queleto de artrpodos, paredes de hongos y de algunas de los cidos tricarboxlicos (figura 7)
la humificacin y mineralizacin de estas molculas com- algas y huevos de nemtodos. La degradacin no est su condensacin da lugar a la formacin de sustancias
plejas. limitada como en los polisacridos anteriores por el nitr- coloreadas, del tipo del humus
Polmeros: celulosa, protenas,
geno, ya que su molcula posee 6,9% de este elemento.
lignina, almidn, pesticidas
El cuadro 6 presenta composicin qumica de algunos Se obtiene fcilmente glucosa y amonio. Las enzimas son oxigenasas que catalizan la fijacin del
organismos y tejidos. Las mayores diferencias se encuen- oxgeno al sustrato y oxidasas que transfieren al oxgeno

Enzimas tran entre las sustancias encargadas de mantener la es- Los quitosanos han perdido los grupos acetilos -COCH3 y los electrones del sustrato con formacin de agua. Los com-
tructura celular y el cuadro 7 muestra las fracciones de la estn formados por largas cadenas glucosamina puestos aromticos simples son llevados al estado de dife-

Oligmeros, monmeros materia orgnica, las enzimas y productos finales en su (C6H9O4NH2). La quitina llega al suelo por aporte de in- noles. La degradacin de flavonoides en C6-C3-C6 es me-
degradacin. sectos, hongos y otros integrantes de la comunidad. Si se nos conocida y son ms resistentes a la degradacin.
compara el ataque de pelculas de quitina y celofn se
Anaerobiosis Cuadro 6- Composicin qumica de algunos observa que este ltimo permanece sin degradar por lar- La apertura del anillo est asegurada por dioxigenasas
Aerobiosis (fermentaciones, organismos y tejidos gos perodos de tiempo, mientras que la quitina es coloni- que fijan los tomos de una molcula de oxgeno al sus-
(ciclo ATC, respiraciones zada rpidamente (12 das en medio acutico y 12-32 trato; la ruptura puede hacerse entre dos funciones fenol
respiracin) anaerobias) g/100 g peso seco semanas en suelo de bosque). en posicin orta o bien en meta. La figura 7 muestra algu-

Clulas Tejido Msculo Tegumento nos de los posibles caminos en la degradacin.

CO2, H2O, CO2, H2, H2O, CH4 levadura vegetal mamfero insecto Numerosos hongos, bacterias y actinomicetes son res-
biomasa menos biomasa Mananos ponsables de la degradacin. Los actinomicetes dominan Los procesos de condensacin oxidativa son de impor-
microbiana microbiana y glucanos 28 ? - - en suelos agrcolas, las bacterias en los inundados y los tancia considerable pues conducen a la formacin de ta-
Quitina ? - - 25-55 hongos en clima templado y ligera acidez. ninos, melaninas, sustancias hmicas. Las enzimas, no
Celulosa - 15-60 - -
bien caracterizadas, se clasifican en dos grupos: la laca-
Hemicelulosas - 10-30 - -
sa y la tirosinasa que oxidan fenoles con formacin de
Biodegradacin de molculas orgnicas Lignina - 5-30 - -
Protenas y Las sustancias aromticas radicales libres que pueden condensarse entre ellos dan-
cidos nuclecos 24 2-15 80 25-37 do origen a productos oscuros, muy polimerizados. Bac-
Para facilidad en el estudio dividiremos a la materia org- Aminocidos 1,3 ? ? ? El suelo recibe cantidades importantes de sustancias aro- terias, levaduras, hongos filamentosos producen en el la-
nica en dos categoras. cidos alifticos ? 5-30 4,8 ?
Azcares solubles 0,5 ? ? ?
mticas que son aportadas por la vegetacin o sintetiza- boratorio sustancias condensadas del tipo de las molcu-
Glicgeno 18 - 2,0-7,2 - das por la microflora, sobre todo por hongos. Estas sus- las hmicas.
La materia orgnica fresca, constituida por los aportes
Lpidos 9 1-25 5,2 4-5 tancias estn constituidas por hetersidos con aglicona
de la vegetacin, hojas, tallos, races, exudados, clulas Cenizas 17 1-13 4,4 1 variada: En resumen: la apertura del ciclo conduce a mineraliza-
microbianas muertas y restos de animales. Todos estos no determinados 2,2 ? ? pigmentos,
con un solo anillo bencnico: fenoles, cidos benc- cin y la condensacin oxidativa a la acumulacin de po-
componentes, de origen biolgico, son sometidos a una fenoles,etc.
nicos de molcula tipo C6-C1 o C6-C3, como en cumari- lmeros resistentes que protegen a otras sustancias de la
serie de procesos que conducen a su biodegradacin con
nas y cidos cinmicos biodegradacin. El nivel de oxgeno es de gran importan-
participacin de equipos enzimticos especializados de
con dos anillos bencnicos unidos por una cadena cia: en anaerobiosis el anillo bencnico no es degradado,
los microorganismos. La fauna ejerce un efecto acelera- Mtodos de estudio
de tres carbonos o un heterociclo oxigenado (C6-C3-C6): Arthrobacter no produce pigmentos pardos si no es culti-
dor del proceso, reduciendo el tamao de las partculas
antocianos, flavonas, chalconas vado en baja presin de O2 en aerobiosis la degradacin
(accin abrasiva o de molienda). El anlisis de la biodegradacin de una sustancia orgni-
compuestos fenlicos condensados: lignina, taninos, puede ser completa.
ca se realiza por alguno de los mtodos de estudio discu-
sustancias hmicas.
La materia orgnica nativa o humus, formada por pro- tidos en el captulo 8 y en el Anexo prctico, es decir:
La importancia de los fenoles en el suelo es ms cuali
cesos de descomposicin y resntesis posee estructura actividad respiratoria, anlisis de enzimas involucradas en
Entre los productos de sntesis microbiana se encuentran que cuantitativa: el nivel de carbono involucrado en es-
diferente a la materia orgnica original. Su estabilidad fren- los procesos, prdida de peso de los sustratos incorpora-
fenoles simples, pigmentos de estructura variada y ciertas combinaciones es bajo, pero constituyen molculas
te a la descomposicin es mayor que los dems compo- dos al suelo, aparicin de productos del metabolismo, re-
tos antibiticos de gran actividad biolgica. Los polifenoles son respon-
nentes orgnicos del suelo. cuentos de grupos fisiolgicos.
. sables de la resistencia de vegetales a hongos parsi-
El anillo bencnico es una estructura bastante estable: tos y estn involucrados en fenmenos de alelopata -
Analizaremos las distintas categoras de molculas con- La figura 2 (Sylivia et al., 1998) muestra el incremento en
su oxidacin puede conducir a la apertura del ciclo dan- una especie vegetal inhibe la germinacin o el crecimien-
tenidas en la materia orgnica fresca, cuya complejidad poblaciones zimgenas de bacterias y hongos luego de la
to de otra-. Por ejemplo, pocos ppm de cumarina en el es un derivado modificado del benceno y contiene slo contribuyen a incrementar su nivel en ecosistemas natu- Se presume que la cantidad de materia orgnica prove-
suelo pueden inhibir el desarrollo de races de numero- 3 elementos: C, H y O. La estructura bsica es aromti- rales que constituye la fuente de nutrientes y de energa niente de animales y microorganismos es pequea en el
sas especies. Tambin ejercen efectos txicos sobre la ca, formada por polmeros de unidades de fenilpropano para la mayora de los habitantes del suelo, que son hete- suelo en relacin a la biomasa vegetal (cuadro 4). La bio-
microflora del suelo. (C6-C3) (figura 8), con grupos alifticos hidroxilos y carbo- rotrfos. Los valores citados sobre el aporte del carbono masa de los principales grupos de invertebrados en sue-
nilos. Pertenecen a la misma familia de compuestos que en la tierra por la fotosntesis vegetal (9,0x1013kg) son los de pastura ha sido calculada en unos 2.300 kg/ha,
+CO HC
HOOC OH HOOC COOH O 2
COOH COOH 2 COOH ciertos pigmentos flavonoides y antocianos en C6-C3-C6 y seguramente superados en lagos y ocanos. mientras que se ha estimado en 4.500 kg/ha la biomasa
+
OH COOH COOH COOH
de los aminocidos fenilalanina y tirosina. de bacterias u hongos en la capa arable.
cido protocatquico cido carboximucnico cido cetoadpico cido actico
N
cido succinico
La biosntesis de la lignina se realiza en tejidos jvenes Segunda etapa: mineralizacin La distribucin de estos grupos difiere; la microfauna se
COOH por hidrlisis de hetersidos aromticos con liberacin de localiza ms en el mantillo, mientras que los microorga-
CHO +NH
OH COOH
2 cido picolnico agliconas, las que se transforman en radicales libres por La materia orgnica que llega al suelo a travs de resi- nismos migran a todo el perfil.
HCOOH
OH OH + accin de oxidasas, condensndose al azar para dar com- duos de cosechas, la percolacin en el follaje, las races
CH COOH CH CHO plejos tridimensionales muy ramificados, de peso mole- y sus productos de descamacin y exudacin, los restos Resumiendo: los procesos microbianos que dominan en
HO 2 2
+
H
O CH -CO-COOH cular difcil de determinar, en general superior a los 10.000. animales y microbianos sufren una serie de procesos de las transformaciones del carbono en la naturaleza son:
H 2
H Se han publicado numerosos modelos tendientes a expli- degradacin, que aseguran la continuidad de los ciclos mineralizacin-inmovilizacin
cido frmico y acetaldehdo y
c. OH cetovalrico cido pirvico car la complejidad de estos compuestos con unidades geoqumicas (cuadro 4). Los procesos degradativos bio- xido-reduccin
Figura 7- Modalidades de apertura del anillo bencnico bsicas de fenilpropano, con ncleos aromticos, grupos energticos realizados por los microorganismos depen- solubilizacin-precipitacin (caso de los carbona-
metoxilo, puentes de oxgeno, ricos en C (67,5%), en gru- dern del nivel de O2 (cuadro 5). Los procesos se reali- tos en depsitos en suelos y aguas)
pos metoxilo (15-16% en conferas y ms de 25% en di- zan en:
Lignina cotiledneas) y en -OH alcohlicos y fenlicos. Cuadro 4- Naturaleza de compuestos orgnicos
aerobiosis: respiracin y algunas fermentaciones, carbonados en ecosistemas naturales
La lignina constituye otro polmero natural muy importan- como la lctica que no se afecta por el O2
te responsable del 25% de la fitomasa seca producida Restos vegetales
anualmente en la biosfera. Se encuentra en tejidos esen- anaerobiosis: fermentaciones y respiraciones anaero-
ciales como el xilema y el esclernquima y tambin en bias (sulfatos, nitratos, CO2, Fe+++, como aceptores de citoplasmticos: azcares, protenas y cidos
Anillo
hongos como Humcola, Aspergillus y Gliocladium. bencnico electrones). La actividad de los organismos del suelo nucleicos
devolveran a la atmsfera un 40-75% del carbono fija- reserva: protenas, grasas, almidn,glicgeno
Representa un 60% del peso de la celulosa, con la cual do. La diferencia con la productividad primaria, o sea la componentes estructurales: celulosa, pectina,
est ntimamente asociada. Las dificultades para su ex- productividad neta, podra llegar a 2,0 x 1013 kg de C lignina
traccin y purificacin son enormes por lo que los datos orgnico/ao. Restos animales
cuantitativos presentados en la bibliografa son aleatorios, citoplasmticos: como arriba
se citan valores de 18-35% en bosques, 21-31% en pa- Esta cifra debe mineralizarse en el mismo perodo, de otro
de reserva: almidn, protenas y grasas
jas, 10-24% y hasta 35% del peso seco en mantillos fo- modo la gran reserva de la atmsfera se agotara rpida-
estructurales: quitina. protenas de pelos y uas;
restales. Como se aprecia, importantes cantidades de esta mente (unos 7 aos, cuadro 1). Son los consumidores
mucopptidos; material fecal
sustancia fuertemente polimerizada e insoluble en agua, primarios (herbvoros) y los secundarios (carnvoros) y fi-
nalmente el hombre, los que aseguran una dbil minerali- Residuos microbianos: segn el organismo: pep-
deben ser degradadas cada ao.
zacin. Los consumidores primarios no mineralizan ms tidoglicano, mananos, protenas, etc.
Las ligninas no constituyen un grupo homogneo de com- de un 10% de la productividad primaria, devolviendo al
Materia orgnica del suelo
puestos y su estructura vara con los vegetales y dentro suelo importantes fracciones de materia orgnica, como cidos hmicos y flvicos, polisacridos, enzimas,
de una especie, con su grado de madurez. Resisten la producto de desecho, y los carnvoros, slo mineralizan
polucionantes
hidrlisis cida, en agua caliente y solventes orgnicos, 1/100 de ella.
pero se solubilizan en lcalis.
Carbn Carbn
El espectro de absorcin en el ultravioleta (mxima ab-
sorcin en la vecindad de los 280 nm) indica que la lignina Figura 8- Esquema de la molcula de lignina
suponer, con los tipos pedolgicos, regiones climticas, Primera etapa del ciclo: fijacin del CO2 o CH4 Se designa como: ble por su alto PM y estructura tridimensional aromtica,
prcticas de manejo, vegetacin, etc. Los valores oscilan protolignina o lignina natural a los polmeros insolu- que en algunos ambientes origina lignitos y carbn, las
entre 1-3% en suelos minerales, entre 6-10% en praderas La reduccin del CO2 la realizan los organismos autotr- bles en agua formada por polimerizacin deshidroge- principales formas de materia orgnica fosilizada.
y en turbas, los valores superan 30-40% del peso seco. ficos: foto y quimiosintticos nativa de alcoholes coniferil, cumaril o sinapil, iniciada
En las clulas, el carbono constituye un 40 al 50% del por enzimas. Es tambin importante precursor de las molculas hmi-
peso seco de las mismas. en primer lugar los vegetales las ligninas industriales, maderas modificadas qumicas: al incorporarla a un slico-gel nutritivo, la lignina se
las algas ca o fsicamente, altamente polimerizadas. Difieren transforma espontneamente por desecacin en sustan-
La fuente principal de este elemento se encuentra en la las cianobacterias, las bacterias fotosintticas como sustratos de las naturales; poseen en general cias pardas, del tipo del humus.
atmsfera, la que a pesar de contener bajo nivel de CO2 bacterias quimioauttrofas menor peso molecular, mayor solubilidad, con lo que
(0,03%) alberga sobre la tierra cantidades enormes de aumenta su biodegradacin: los lignosulfonatos se ob- La lignina es considerada por algunos eclogos microbia-
este gas (7,0x1014 kg). El incremento sobre los valores Estas ltimas emplean la energa liberada en la oxidacin tienen por tratamientos con soluciones cidas de nos como un plstico natural ya que la polimerizacin
actuales preocupa por el hecho de que tanto el CO2 como de los compuestos minerales, como el amonio, sulfuros, NaHSO3, las lcali ligninas son el resultado de la de los precursores no est mediatizada por enzimas y el
el CH4 provocan incrementos de temperatura en la atms- iones ferrosos, H2, para reducir el CO2. Si el ambiente fue- extraccin con soda y sulfuro de sodio, las fenol ligni- polmero posee muchos enlaces intermonmeros, que no
fera (calentamiento global) (cuadro 2). ra rico en CH4 como consecuencia de procesos de anae- nas o etanol ligninas aluden al procedimiento de extrac- son directamente hidrolizables por enzimas. Se le consi-
robiosis, sern los microorganismos metanotrficos los cin, contienen una variedad de compuestos orgnicos dera como un producto de desecho que la clula deja
Cuadro 2- Calentamiento global encargados de convertirlo en metanol para luego asimi- (azcares, polisacridos, aldehidos, etc.) y pueden va- de eliminar y lo deposita en paredes secundarias y lmina
larlo en su biomasa (cuadro 3). riar considerablemente en estructura fsica. media de plantas superiores, como metabolito secun-
dario (no es esencial para el crecimiento, a pesar de be-
Desde 1900 los niveles atmosfricos de CO2 se
Cuadro 3- Oxidacin del metano en ecosistemas Los trabajos que estudian la degradacin de la lignina neficiar al organismo que lo posee). La lignina actuara de
han incrementado de 280 a 350 ppm, los de me-
-1 naturales emplean estos preparados, dada la imposibilidad de ob- un modo similar a las envolturas protectoras de la piel, de
tano 12-13 ppb ao y los fluorocarbonos sobre
-1 tener la protolignina en estado inalterado (en solucin los vegetales y animales y quiz como las capas protec-
3% ao
Representa el 44% del C del suelo acuosa y en autoclave a 100C se logr solubilizar slo toras de las esporas.
Consecuencias:
CH4 es 20 veces ms efectivo que el CO2 como un 10% en 50 das).
Mayores niveles de CO2 estimulan la productividad, gas con efecto invernadero: su oxidacin es muy Microflora ligninoltica
fijando C a residuos de suelo y materia orgnica importante los modelos de lignina, compuestos aromticos solu- Entre los organismos estudiados, slo los microorganis-
La continua deforestacin y la expansin agr- Mucho mayor si no actuaran los metanotrficos: bles en agua sintetizados a partir de derivados del alco- mos eucariticos mostraron capacidad para degradar
cola reducir el C en plantas y suelos oxidan el 90% del CH4 luego de su emisin hol cinamlico que poseen uniones intermonmeras pre- completamente a la protolignina. La accin de los distin-
Aumentos de temperatura favorecern la activi- Rellenos sanitarios generan el 10% del CH libe- sentes en la lignina natural. tos organismos en el proceso son variados. Los mtodos
4
dad metablica en suelos y prdidas de C rado. Al cubrir con suelo se requieren empleados para cuantificar la degradacin incluyen estu-
Rangos corrientes de prdidas en suelos tropi- 2-3 aos para desarrollar una fuerte poblacin Los residuos de industrias papeleras y de las que prepa- dios con especies aisladas sobre ligninas especficamen-
cales sern 10X que en los suelos templados metanotrfica ran pulpa para papel, las aguas servidas y los desechos te marcadas con C14 (en fracciones alqulicas, arlicas o
Cambios en la adaptacin de especies y uso de
Methylobacter: bacterias aerobias, Gram con sis- resultantes de una ganadera extensiva, presentan serios en los grupos metoxilo) y anlisis qumico y estructural de
la tierra tema de membranas internas. Colonias a veces problemas de polucin por su alto contenido en lignina, maderas en decaimiento inoculadas y no inoculadas con
Influencias en diferentes prcticas agrcolas rosadas lignocelulosa, celulosa, de lenta biodegradacin. especies fngicas de inters. La degradacin de la celu-
Metabolizan tanto metano (metanotrficas) o losa es cerca de tres veces superior a la de la lignina.
Carbono en aguas: su contenido vara con la naturaleza -CH2O (metilotrfica) como nica fuente de C Estos productos deben ser descompuestos antes de su
de los causes de aguas y con la deposicin que vierten Tambin oxidan NH , pero no como nica fuente deposicin en gran escala en el ambiente: los ros que Por la dificultad en la preparacin de medios selectivos, el
3
sobre ellos. As, en los ros la cantidad de materia orgni- de energa reciben afluentes de la industria del papel se colorean in- aislamiento de especies responsables es muy dificultoso.
ca puede ser muy grande y llegar a polucionarla si recibe Los pasos de oxidacin necesitan metil mono- tensamente y poseen grandes sedimentos de lignina (ca- Incluso, una disminucin en la concentracin del sustrato,
aguas servidas domiciliarias, efluentes de la industria, oxigenasa ptulo 21). no siempre es ndice de degradacin. La molcula puede
desechos agrcolas. Organismos de la rizosfera y de hojas en plantas ser adsorbida a micelios o clulas microbianas, e incluso
acuticas A diferencia de los otros biopolmeros, los estudios micro- la degradacin puede enmascararse por la sntesis de
Una parte del carbono puede depositarse como carbona- Contaminantes frecuentes en tejidos vegetales biolgicos han avanzado poco por la complejidad de esta sustancias del tipo de la lignina por numerosos hongos.
tos insolubles, constituyendo verdaderos depsitos de este molcula: en efecto la lignina constituye el producto natu- Los estudios se realizan inoculando trozos de madera
elemento, pero los procesos de solubilizacin son muy ral ms recalcitrante, es decir escasamente biodegrada- esterilizados.
lentos y estas fuentes no inciden en el ciclo global. Estos productores primarios (PP) de materia orgnica
Los organismos ms activos son los hongos responsa- Algunos actinomicetes poseen capacidad de degradar lig-
bles de las podredumbres de la madera: blanca, parda nina, rompen enlaces -aril ter, presentes en ligninas
y blanda, que han sido muy estudiadas por sus conse- naturales, pero se requieren mayores conocimientos so-
cuencias en el deterioro de postes, vigas de madera. Son bre los mecanismos de degradacin de estos organismos.
sobre todo Basidiomycetes y algunos Ascomycetes. Las bacterias atacan sobretodo las cadenas laterales ali-
Los hongos de la podredumbre blanca son los ms acti-

vos degradadores de la lignina, pudiendo convertir la ma-
dera en CO2 y H2O. Degradan lignina y otros polisacri-
fticas.
El rol que juegan los animales en la descomposicin de

la lignina no puede ser ignorado, aunque su principal acti-
9 Ciclo biolgico del carbono
dos, con prdida de peso rpida: Pleurotus ostreatus, vidad sea una disminucin del peso molecular como con-
Phanerochaete chrisosporium, Polyporus anceps. secuencia de destruccin mecnica. Insectos, inverte-
brados y rumiantes contribuyen a la despolimerizacin
Los hongos de la podredumbre parda degradan extensi- fsica de la lignina e incrementan la digestibilidad de la La figura 1 muestra las transformaciones que sufre este tuye un depsito muy importante, pero su tiempo de resi-
vamente polisacridos y causan modificaciones qumicas lignocelulosa, atacada por los microorganismos asocia- elemento en ecosistemas terrestres. dencia es muy corto.
limitadas de la lignina. Son incapaces de metabolizar ani- dos a sus tractos gastrointestinales (anaerobiosis).
llos aromticos y son ms eficientes en la degradacin de (CH2O)n
Cuadro 1- Flujos de carbono en ecosistemas
celulosa y hemicelulosas. Atacan cadenas laterales, de- Slo los microorganismos eucariotas son capaces de comp. orgnicos terrestres
jando fenoles que se oxidan dando pigmentos marrones degradar completamente este polmero. fotoauttrofos: respiracin
9
vegetales, algas plantas, animales X 10 toneladas Total Flujo
o pardos. Estudios con Lenzites trabea demostraron que cianobacterias microorganismos 6
la descomposicin es sobre todo oxidativa y que la deme- En resumen: son sobre todo los hongos imperfectos y los quimioauttrofos Reservas globales 1.000 x 10
tilacin de unidades fenlicas y no fenlicas de la madera basidiomicetes, los organismos ms activos en la degrada- nitrificantes, etc. Carbonatos en corteza
bacterias oxidan-
constituyen las principales reacciones degradativas. Otros cin de ligninas naturales. Algunas bacterias, incluidos los tes del metano
terrestre ~8
aerbicos
hongos activos: Poria cocos, Lentinus lepideus, Poria actinomicetes demostraron habilidad para atacar ligninas CO2 CH4 # # Terrestre
anaerbicos
monticola. sintticas marcadas (cadenas laterales). Las interaccio-

Combustibles fsiles 5.000
nes microbianas estimulan frecuentemente la degradacin bacterias Carbonatos del suelo 800
Los hongos de las podredumbres blandas degradan los y el proceso es realizado por poblaciones complejas. metanognicas Materia orgnica del suelo 1.500
respiracin anaerobia
principales componentes de la madera. El material se bact. fotosintticas anaerobias (CH2O)n Plantas/animales 830
transforma en una masa oscura, desorganizada, con poca Degradacin fermentacin comp. orgnicos Fotosntesis +120
prdida de peso y la ligmina sufre alteraciones parciales. La mayora de los estudios se realizaron con cultivos de Respiracin -60
Figura 1- Ciclo biolgico del carbono
Se comprob con algunas especies, como Preussia fles- hongos de la podredumbre blanca, por su reconocida Prdidas netas/vegetacin -2
hhkii y Chaetomium piluliferum, descomposicin de anillos habilidad de degradar completamente a este polmero. Los # # ocanos
marcados (3% a CO2 en 25 das) y demetoxilacin signifi- trabajos no son sencillos; se emplearon ligninas libres de A nivel mundial, el carbono se cicla a travs de los 4 de- sedimentos 36.700
cativa. Son sobretodo Ascomycetes y Hongos Imperfectos. otros compuestos carbonados, como madera molida, o psitos principales de C: la atmsfera, los suelos, los oca- carbonatos 725
ligninas sintticas marcadas. En Phanerochaete chrysos- nos y otros ambientes acuticos, as como los sedimen- Balance atmosfrico
El moho Fusarium solani crece sobre ligninas sintticas y porium, uno de los hongos mejor estudiados, se encontr tos y las rocas (cuadro 1). El mayor depsito se encuen- Atmsfera 720 -2
las degrada. Es interesante examinar la capacidad de otros que ste no crece con lignina sola y requiere un sustrato tra en los sedimentos y las rocas de la corteza terrestre,
hongos para degradar ligninas naturales o industriales. metabolizable, como celulosa o glucosa. Incluso en la pero el tiempo de renovacin es demasiado largo, insigni- Este ciclo no es muy complejo: la fotosntesis y la quimio-
naturaleza, la presencia de celulosa estimula la actividad ficante a escala humana. sntesis auttrofa y la respiracin y/o fermentacin son
Entre los organismos procariticos, algunas bacterias han ligninoltica de este hongo en mayor grado que el succi- los principales procesos en que estn involucrados los
sido referidas como ligninolticas, sobre todo en cultivos nato o glicerol. P. chrysosporium prefiere pH cidos: Desde el punto de vista de los organismos, una gran can- compuestos carbonados.
mixtos, en el suelo. Especies de Azotobacter son capa- 4,0-4,5, temperaturas ptimas relativamente altas, las tidad de carbono se encuentra en las plantas terrestres
ces de degradar tanto los anillos como los grupos metoxi- fuentes de nitrgeno pueden ser amonio, nitratos o ami- (fijacin del CO2). Sin embargo hay ms carbono en la
lo cuando crecen con compuestos aromticos solubles, nocidos, pero altas concentraciones en medio de cultivo materia orgnica muerta (humus) que en los organismos Carbono en suelos, agua y atmsfera
aunque a velocidad menor que la actividad de poblacio- inhiben la degradacin de la lignina y se requieren altas vivos. Las formas ms rpidas de transferencia global del
nes mixtas de bacterias. presiones parciales de O2. carbono son por va del CO2 de la atmsfera. Este consti- El contenido de carbono de los suelos vara, como es de
Practical Considerations. En: R. G. Burns, Ed. Soil Methods in Soil Analysis, Part 2: Microbiological and La figura 9 presenta las relaciones entre el crecimiento, el energa al microorganismo, suficiente para sobrevivir, pero
Enzymes, 1978, Academic Press, N. York:295-340. Biochemical Properties, 1994, Soil Science Society of agotamiento en las fuentes de nitrgeno y la actividad ligno para crecer. Esto explica la ausencia de un mecanis-
Dommergues, Y. y F. Mangenot, Ecologie Microbinne America, Madison, Wisconsin: 775-833. ninoltica de P. chrysosporium. El sistema ligninoltico de mo enzimtico especfico para la despolimerizacin de la
du Sol, 1970, Masson et Cie, Pars. Torsvik; V., Goksoyr, J. y Daae, F. L. High diversity in DNA of este hongo es: i) constitutivo, ii) se expresa slo en el lignina. Se piensa que tambin intervienen procesos de-
Frioni, L., Sicardi, M., Pereyra, C. Indicadores biolgicos soil bacteria. 1990, Appl. Environ. Microbiol. 56:782-787. metabolismo secundario, iii) es afectado por limitaciones gradativos de naturaleza qumica. El nivel de enzimas que
de la calidad del suelo sensibles a prcticas de mane- Van Bruggen, A. H. C., Semenov, A .M. In search of biolo- en carbono, sulfato y nitrgeno, iv) es marcadamente afec- participan es bajo y algunos autores comparan el proceso
jo. En: Microbiologa Agrcola: Un aporte de la in- gical indicators for soil health and desease suppres- tado por la concentracin de oxgeno, la degradacin de con una erosin del polmero mediatizada por enzimas:
vestigacin argentina, 2003, Universidad Nacional sion. 2000, Appl. Soil Ecol 15(1): 13-24. la lignina fue 2-3 veces superior a 100% de O2 que en el
de Santiago del Estero, Argentina: 23-37. aire (21%), lo que corrobora la creencia de que la degra- oxigenasas, que rompen anillos aromticos, fenol oxi-
Frioni, L. Procesos microbianos. 1999 Fundacin de la dacin es un proceso oxidativo. dasas, incluyendo lacasas, tirosinasas y peroxidasas.
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina. Preguntas de repaso La formacin de radicales libres por accin de fenol oxi-
Hungria, M. y R. S. Araujo Caracterizaao das estirpes dasas pueden ocasionar ruptura de enlaces entre ani-
variaciones relativas
por tcnicas moleculares: o uso del mtodos de PCR 1) Concepto general de ecologa microbiana. glucosa
llos aromticos y la cadena lateral con propano.
a RAPD, en: Manual de Mtodos Empregados em 2) Seale dos ecosistemas diferentes por su tamao y di- micelio celobiosa: quinona oxidorreductasa, activa en la de-
Estudos de Microbiologia Agrcola, 1994, EMBRA- versidad biolgica, analice las fuentes de energa y de gradacin de celulosa y lignina por hongos de la podre-
PA, Brasilia, DF, pp:183-199. nutrientes y las poblaciones microbianas dominantes. dumbre blanca.
Jenkinson, D. S. y D. S. Powlson, The effect of biocidal treat- 3) Por qu la poblacin microbiana del suelo es tan di- actividad
ligninoltica
ments on metabolism in soil, Method for measuring soil versa en composicin? No se conoce bien la naturaleza de las enzimas que son
biomass, 1976, Soil Biol. Biochem., 8: 209-213. 4) Seale ejemplos de poblaciones autctonas y zimge- N extracelular
activas en los enlaces C-C y C=O, que contribuyen a la
Pankhurst, C.E., Doube, B. M., Gupta, V.V.S.R. Biologi- nas en una campo con pradera natural y en otro suelo despolimerizacin.
cal Indicators of soil health. 1997, CAB Internatio- que recibe residuos de cosechas.
0 1 2 3 4 5 6 7
nal, USA, UK. 5) Analice las causas de las diferencias de las velocida- das Como resumen analizaremos la figura 10 donde se mues-
Pepper, I. L. y Josephson, K. L. Molecular Genetic Anli- des de crecimiento de un microorganismo (celuloltico) Figura 9- Agotamiento de nutrientes, crecimiento tra las relaciones del complejo lignocelulosa en el ciclo
sis in Soil Ecology. En: Principles and Applications en el suelo y en medio de cultivo. y degradacin de la lignina por el hongo del carbono. En efecto, la mayora del carbono orgnico
of Soil Microbiology, 1998, Sylvia, D. M. ; Fuhrmann, 6) Analice y de ejemplos de interacciones biolgicas en Phanerochaete chrysosporium de la tierra est en forma de compuestos lignocelulsi-
J. J., Hartel, P. G. and Zuberer, D. A. Prentice Hall, el ecosistema suelo-planta-microorganismos. cos, sintetizados a partir del CO2 y en productos de su
London. 7) Qu fraccin del suelo est en directa relacin con la degradacin (humus, turba, lignitos y carbn), lentamen-
Sambrook, J., Fritsch, E. F. Maniatis, T. Molecular clo- actividad biolgica y por qu? Como se observa, la lignina es descompuesta en la fase te mineralizada en la naturaleza ya que la lignina, compa-
ning. A Laboratory Manual. 1989, Cold Spring Har- 8) Seale tcnicas de estudio a aplicar para incluir a aque- estacionaria (crecimiento nulo), en presencia de un co- rada a un material plstico, aunque de naturaleza biolgi-
bor Press, New York. llos microorganismos no cultivables. sustrato, pero en ausencia de fuentes de nitrgeno (la ca, acta como efectiva barrera que impide la degrada-
Schinner, F.; hlinger, R. Kandeler, E., Margesin, R. Me- 9) En caso de la actividad respiratoria, cmo evaluara adicin de amonio retarda la aparicin de la actividad lig- cin de los otros componentes.
thods in Soil Biology, 1996, Springer-Verlag, Berln: las actividades reales y las potenciales? ninoltica).
426pp. 10) Biomasa microbiana: concepto y explique el funda- En ambientes aerbicos, el polmero de lignina es erosio-
Schneider, M. y F. J. De Bruijn Rep-PCR mediated geno- mento de dos tcnicas a aplicar para su evaluacin. El agotamiento de las fuentes de nitrgeno inicia un se- nado biolgicamente por enzimas microbianas no espe-
mic fingerprinting of rhizobia and computer-assisted 11) Indique alguna tcnica que permita determinar la es- gundo metabolismo en el hongo asociado a la degrada- cficas a productos ms simples y CO2 o sufre una com-
phylogenetic pattern analysis. 1996, World J. of Mi- tructura de una comunidad microbiana basada en el cin de la lignina. Se entiende por metabolismo prima- plexacin con otros constituyentes para formar humus.
crobiology & Biotechnology 12, pp: 163-164. anlisis de sus cidos nucleicos. rio el que est directamente acoplado a actividades del
Sicardi, M., Garca-Prechac, F., Frioni, L. Soil microbial 12) Ejemplos de procesos oxidativos en los ciclos bio- crecimiento, mientras que los denominados secundarios En ambientes anaerbicos, la lignina y el humus son
indicators sensitive to land use conversin from pas- geoqumicos y sus consecuencias ecolgicas. (cometabolismo) estn asociados a la sobrevivencia. productos difciles de degradar (recalcitrantes), se acu-
tures to commercial Eucalyptus grandis. (Hill ex Mai- 13) Idem con los procesos reductivos. mulan y contribuyen a la formacin de turbas, lignitos y
den) plantations in Uruguay. 2004. Appl. Soil Ecology 14) Qu procesos ocurren prcticamente en todas las Se ejemplifica muy bien el rol de la actividad ligninoltica carbn. La madera, producto de la fotosntesis en bos-
27:125-133. condiciones ambientales compatibles con la vida? Con- con una expresin que dice: los hongos degradan ligni- ques, posee tiempos de renovacin tan largos como 35-
Smith, O.H., Petersen, G.W., Needelman, B.A. Environ- secuencias en el ecosistema. na para alimentarse de la celulosa de la madera. Se 45 aos, ya que contiene un 25% en peso de lignina,
mental indicators of agroecosystems. 2000, Adv. Agron. 15) Indique procesos de solubilizacin y de precipitacin piensa que la degradacin de la lignina brinda muy poca que limita su biodegradacin.
69:75-97. de elementos realizados por los microorganismos y sus
Tabatabai, M. A., Soil Enzymes. En: R. W. Weaver, Ed. consecuencias en la nutricin vegetal.
CO
2
seca de vegetales (1-2%) pero son ms abundantes en el caso del fsforo. Por el contrario, la precipitacin elimina Cuadro 11- Procesos de oxidacin en los ciclos
CH
4
ciertos microorganismos (10%). de la solucin del suelo nutrientes de las plantas, como el del C, N y S
caso del hierro. Son tambin procesos fsico-qumicos pero
interfase
Las grasas son steres complejos de cidos grasos y involucran pasos previos de accin microbiolgica. Primariamente por bacterias auttrofas
aerobio humus lignina -celulosa
anaerobio suelo-sedimento glicerol, mientras que las ceras constituyen steres con <> Metilobacter: metano bicarbonato
alcoholes superiores. Aparecen rpidamente en el suelo Solubilizacin <> Nitrosomonas: amonio nitrito
turba CO los cidos y alcoholes por accin de esterasas (lipasas) (s) <> Nitrobacter: nitrito nitrato
lignito 2
de una variedad de microorganismos, sobre todo bacte- Sustancias insolubles Sustancias solubles
carbono <> Thiobacillus: S o tiosulfato sulfato
CH rias. Los productos de la degradacin son empleados como <> Chromatium: sulfuro S
4
fuentes de nutrientes y energa por los microorganismos, Precipitacin
Figura 10- Complejo lignocelulsico y sus transformaciones
pero muchos de los cidos grasos son incorporados como (p) Bacterias aerbicas/desnitrificantes, fototrofos
lpidos de reserva (cido poli -OH-buttico). Algunas pueden cometabolizar sustratos sin
Los taninos Estas reacciones se observan en el caso de compuestos obtener energa (Beggiatoa)
Ms informacin se posee en la degradacin de los lpi- con P, Fe, etc.
Son compuestos muy abundantes en ciertas plantas, so- dos de la superficie vegetal, como la cutina, que es se-
bre todo en las conferas. Son molculas de gran tamao cretada a partir de clulas epidrmicas oxidndose por el H+ (cidos de origen biolgico) Cuadro 12- Procesos reductivos en los ciclos
con mltiples funciones fenoles que les permiten formar O2 atmosfrico. Puede recubrirse con ceras. Tambin pue- P insoluble P soluble (PO4 H)Ca y (PO4H2)2 Ca del C, N, S
complejos estables con protenas, celulosa, etctera. de formarse sobre la lmina media pctica o estar mez- (PO4)2 Ca3
clada con la celulosa, protegiendo a esas sustancias de hidroxiapatita, etc. Ocurren tanto en condiciones aerobias como anaerobias
Los taninos pueden ser: la biodegradacin. polvo de huesos, etc. Procesos asimilativos: los productos son usados por la clu-
la: hetertrofos
solubles en agua: poseen molcula glucdica con fun- La composicin qumica de la cutina no se conoce acerta- Fe++ + O2 Fe(OH)3 (hidrxido frrico, puede reduccin de los NO3

amonio N-aa
ciones alcohlicas esterificadas por cido glico o sus damente, se sabe que la molcula contiene 16-18 cidos soluble obstruir caeras) reduccin del CO2 compuestos orgnicos
derivados; son hidrolizables qumica o enzimticamen- grasos unidos por enlaces ster y puentes de O. disponible insoluble reduccin de los sulfatos HS S-aa
2
te por tanasas
Procesos desasimilativos
condensados: son molculas de alto peso molecular, Se reconocen dos enzimas: la cutin-esterasa que ataca La metodologa empleada en el estudio de estos proce- Ocurren en condiciones anaerobias, compuestos de C, N y S
insolubles en agua, algunos resisten la hidrlisis cida los steres y la carboxicutina peroxidasa, que rompe sos se resume en el cuadro 5 y lo detalles de las tcnicas actan como aceptores de e- en respiraciones:
y recuerdan a los flavonoides que se polimerizan para los puentes de oxgeno. Levaduras y hongos son activos se encuentran en el Anexo prctico. desnitrificacin: NO3

N gas Pseudomonas
2
dar pigmentos pardos. degradadores en la filosfera, pero bacterias, includos los metanognesis: CO2 CH Methanobacterium
4
actinomicetes tambin participan. El cuadro 10 resume las formas orgnicas bajo la cual se sulfato reduccin: SO4= H2S Desulfovibrio,
Un alto nivel de taninos en el suelo puede disminuir la de- presentan sustancias con C, N, S. Los cuadros 11 y 12 mues- Desulfotomaculum
gradacin de molculas orgnicas, sea por toxicidad direc- tran procesos de oxidacin y de reduccin involucrados en
ta sobre la microflora activa o por la inactivacin de enzi- Los hidrocarburos transformaciones de estos tres principales elementos.
mas o formacin de complejos resistentes con el sustrato. Bibliografa
La sntesis de sustancias hidrocarbonadas y su degrada- Cuadro 10- Formas orgnicas del C, N y S
Su degradacin es obra sobre todo de los hongos y los cin en el suelo son etapas importantes del ciclo del car- en el suelo Albanesi, A. Calidad de suelo: propiedades biolgicas y
mecanismos enzimticos no han sido del todo dilucidados. bono. Muchos pesticidas estn formados por hidrocarbu- Carbono evolucin en ecosistemas semiridos. En: Microbio-
ros modificados y de su biodegradacin depende la dura- ~ 20% polisacridos ~ 75% humus loga Agrcola: Un aporte de la investigacin
cin de su accin biocida. Detergentes sintticos poseen ~ 5% amino azcares, amino cidos argentina. 2003 Universidad Nacional de Santiago del
Constituyentes hidrfobos tambin esta estructura molecular. Nitrgeno Estero, Argentina: 7-22
~ 40% humus ~ 35% amino cidos Bottomley, P. J. Microbial Ecology, En: Principles and
Numerosas sustancias de carcter lipdico llegan al suelo La formacin de metano (CH4) en los suelos es frecuente ~ 7% amino azcares ~ 18% N aromtico Applications of Soil Microbiology, 1998. Sylvia,
con los restos vegetales y animales: ceras, grasas, cuti- en la descomposicin anaerobia de rastrojos en donde se Azufre Fuhrmann, Hartel y Zuberer Prenctice Hall, N. Jersey:
na. En su conjunto se extraen con mezclas de alcohol- produce abundante cantidad de H2 empleado por las me- ~ 45% S-amino cidos (cistina, metionina) 149-185.
=
benceno, representan un escaso porcentaje de la materia tanobacterias como fuente de energa: SO4 orgnicos adenosina, protenas-S-Fe (N2asa), Burns, R.G. Enzyme Activity in Soil: Some Theoretical and
Inhibidores de la nitrificacin minerales, los que van siendo gradualmente liberados para CO2 + 4H2 CH4 + 2H2O desde un extremo de la cadena por -oxidacin. Pue-
Para disminuir prdidas de nitrgeno por lavado o desni- los vegetales. den acumularse tambin cetonas.
trificacin en suelos sin cubierta vegetal importante o que Los cidos orgnicos simples acumulados en estos am-
sufre frecuentes perodos de anegamiento, se han desa- A las transformaciones cclicas de mineralizacin-inmovi- bientes anaerbicos son empleados tambin por las me- Los hidrocarburos aromticos benceno, tolueno, xileno
rrollado investigaciones tendientes a inhibir la nitrificacin. lizacin que ocurren simultneamente se les agrupa en el tanobacterias. La biosntesis de metano est limitada a y sus derivados son atacados por numerosos microorga-
llamado ciclo interno del nitrgeno, ya que ocurren en un grupo especializado de bacterias anaerobias que ha- nismos del suelo. La ausencia de toxicidad en un ambien-
Es sabido que: el interior de los microorganismos, mientras que las trans- bitan suelos inundados, pantanos, abonos en fermenta- te dado indica que los organismos hetertrofos estn ac-
los herbicidas e insecticidas empleados en dosis nor- formaciones que ocurren con la participacin de los vege- cin, sedimentos marinos y tracto intestinal de animales tuando como agentes desintoxicantes. La evolucin del
males no afectan al proceso tales, la atmsfera, etc. se agrupan en el ciclo externo o superiores. Son difciles de aislar en cultivo puro y la pro- CO2 o la consumicin del O2 verifica estos hechos en
los fungicidas y fumigantes ejercen gran accin como ciclo biogeoqumico. La figura 5 presenta un esquema duccin de CH4 es muy activa en poblaciones mixtas. ensayos de laboratorio.
inhibidores de la nitrificacin, aun en dosis normales de las transformaciones de los nutrientes en ecosistemas Methanobacterium, Methanosarcina y Methanococcus,
otras sustancias son empleadas como el 2 Cl 6 terrestres. son los principales gneros encontrados en el suelo y ac- Una microflora ms especializada descompone molcu-
(tri Cl metil) piridina, conocido comercialmente como tan al final de una cadena trfica (captulo 21). las como fenol, naftaleno, antraceno, con 1, 2 y 3 ani-
N-serve; 2-amino-4 Cl-6 metilpiridina (AM); dicianodia- Mineralizacin bruta o real: es la cantidad total de ni- llos bencnicos. Son sobre todo bacterias tpicas y acti-
mida; tiourea; 2-sulfanilamidotiazol (ST); los tiazoles; trgeno mineral producido. Se puede evaluar tambin Otro hidrocarburo simple encontrado en ecosistemas na- nomicetes. Los organismos filamentosos son importantes
triazinas; isocianatos, etc. El N-serve es uno de los ms la amonificacin y/o nitrificacin bruta. Estos iones no turales es el etileno, liberado por numerosas especies de en la degradacin de constituyentes aromticos deriva-
frecuentemente empleados que inhibe a los auttrofos constituyen productos finales estables y pueden seguir hongos, bacterias esporuladas y actinomicetes. A bajas dos del humus. El O2 es fundamental en los procesos de
pero no a los nitrificantes hetertrofos y se usa mucho mltiples vas en el suelo (cuadro 7) y resulta difcil eva- concentraciones acta como una fitohormona: produce apertura del anillo.
en reas arroceras sometidas a alternancias de secado luar estos procesos si no se emplean elementos mar- elongacin de races y desarrollo de races laterales.
e inundacin. cados (N15). Las primeras etapas del metabolismo comprenden la re-
Mineralizacin neta: se evalan las cantidades pre- Otros hidrocarburos voltiles: etano, propano, propile- mocin de cadenas laterales y la introduccin de grupos -
El inhibidor es degradado con el tiempo y la nitrificacin sentes en el ecosistema en el momento del anlisis que no, son formados en atmsferas anaerobias, a partir de OH. Los grupos metilo se convierten en carboxilo antes
recomienza, con el activo desarrollo del vegetal. El xito resultan de la diferencia entre lo producido (mineraliza- miembros de la microflora del suelo. Los de mayor impor- de la apertura del anillo.
del mtodo est vinculado a la velocidad a la que la mi- cin bruta) y aquellos procesos que se detallan en el tancia son el metano y el etileno.
croflora degrada al inhibidor. cuadro 7. Globalmente, se puede representar el N mi-
neral evaluado como: Hidrocarburos de alto peso molecular Bioslidos y restos animales
Son formados por bacterias, algas y esporas fngicas, o
Ciclo interno del nitrgeno (mineralizacin- N mineral evaluado =N total producido -(Ni + Na + Nv +Nd +Nl + ...) llegan a los ecosistemas naturales con el petrleo, para- La aplicacin residuos animales al suelo es de prctica fre-
inmovilizacin). Biomasa microbiana finas y sus derivados. Los solventes de muchos pestici- cuente y su degradacin est asegurada por la actividad
donde: Ni = inmovilizado; a = lavado; v = volatilizado; das tienen estructura de hidrocarburos y llegan al suelo o biolgica del mismo, pero la acumulacin de grandes canti-
El nitrgeno mineral es asimilado por los microorganis- f = fijado; d= denitrificado; l = lavado aguas donde deben ser degradados. dades de ellos puede generar problemas en relacin a:
mos y pasa a formar parte de combinaciones orgnicas
en las clulas. Como deja de estar por un tiempo disponi- El N mineral disponible para los vegetales en un mo- Los compuestos de cadena aliftica son atacados por exceso de nitrgeno y riesgo de contaminacin de aguas
ble para los vegetales, se dice que ha sido inmovilizado. mento dado depende de la magnitud relativa de proce- una variada micropoblacin muy extendida en los sue- superficiales y subterrneas con nitratos, sobreviven-
Este bloqueo del N mineral es transitorio, ya que las mo- sos simultneos y opuestos: la mineralizacin y la in- los: se informaron densidades de 105/g suelo cuando se cia y transporte de patgenos microbianos
lculas orgnicas son liberadas al ecosistema por proce- movilizacin. La competencia entre vegetales y micro- emplea parafina como sustrato. La velocidad de la de- excesiva cantidad de fsforo que acompaa a muchos
sos de excrecin o a la muerte celular, donde son rpida- organismos por el N mineral es importante cuando s- gradacin est relacionada con la longitud de la cadena abonos y bioslidos (restos industriales y municipales)
mente mineralizadas. tos disponen de abundante sustrato energtico. La ma- y al grado de ramificacin de la molcula. Muchos mi- con riesgo de eutrofizacin de aguas
yor parte es entonces incorporado al ciclo interno (bio- croorganismos degradan hidrocarburos alifticos pero no materiales txicos (metales pesados y sustancias xe-
La biomasa microbiana producida representa una inmo- masa) ya que los microorganismos son activos compe- los pueden usar como fuentes de carbono. Este fen- nobiticas) pueden inhibir la degradacin de los restos
vilizacin temporaria de energa, carbono y elementos tidores de las plantas. meno conocido como cometabolismo implica que las carbonados.
clulas deben metabolizar una segunda fuente orgni-
ca. Los productos de la descomposicin del hidrocarbu- Es necesario regular la incorporacin al suelo de
ro, al no ser asimilados, quedan en el medio: alcoholes, estos restos y/o aconsejar un compostaje previo
aldehidos, cidos grasos. El cido actico se origina (captulo 21).
Humus Los anlisis elementales indican en promedio: Oxgeno: es un requerimiento obligado en el proceso. La ques de conferas, ricos en sustancias fenlicas. La inten-
estructura del suelo tiene gran efecto: la nitrificacin es sa inmovilizacin de formas minerales del nitrgeno por
La materia orgnica fresca desaparece rpidamente en 45-65% en carbono, 30-40% en oxgeno, gran abundan- inversamente proporcional al tamao de los agregados. microorganismos hetertrofos explica tambin la dismi-
ambientes naturales. El siguiente esquema muestra las cia de grupos metoxilo (-OCH3), fenoles (-OH), carboxilo nucin de nitratos en rizosferas. Se evitan as prdidas
posibles vas metablicas en el suelo (figura 11). (-COOH), poco nitrgeno (para algunos autores se trata- Humedad: es otro de los factores que afectan profunda- por lavado o desnitrificacin de los nitratos formados, en
ra de impurezas) y S, P, Fe, etc. mente a la nitrificacin auttrofa ya que regula el nivel de ambientes de baja tensin de O2.
El humus est constituido por mezcla de sustancias amor- oxigenacin del suelo. La formacin de nitratos cesa cuan-
=
fas, que es originado de la fitomasa parcialmente descom- mineralizacin rpida CO2, NH3, SO4 do el nivel de humedad es inferior al punto de marchita- Estacin del ao: el efecto de la estacin est condicio-
restos vegetales
puesta y de la sntesis microbiana. Son molculas elsti- -3
PO4 , Fe
++
miento permanente, mientras que la amonificacin es an nado por la interaccin de numerosos factores como la
N2 atmosfrico
cas, de carcter cido, de alto peso molecular y naturale- activa. La figura 4 presenta la nitrificacin en suelo franco disponibilidad de nutrientes, la temperatura, la humedad,
reorganizacin
za coloidal, de gran superficie interna y externa, origina- estructuras limoso con 500 mg/kg de N-NH4+ como fosfato diamnico la aireacin, etc. No puede predecirse en que pocas del
an organizadas
das por la accin de procesos fsico-qumicos y biolgi- y sometido a diversas tensiones de succin desde 0 ao el nivel de nitratos ser mayor. En general, en la re-
cos a expensas de productos de la degradacin de la sntesis de complejos (saturado) hasta 15 barias e incubado a 21C. En gene- gin templada la produccin de nitratos es ms activa en
hmicos coloidales mineralizacin lenta
materia orgnica. humificacin ral, se podra aceptar la siguiente escala de tensiones de primavera y otoo, ms lenta en verano e invierno. Pero
humedad para una mxima acumulacin de nitrato: las fluctuaciones de temperatura y humedad y las prcti-
Su lenta mineralizacin (1-2% al ao) hace de estas sus- Figura 11- Degradacin y humificacin de restos vegetales cas culturales pueden alterar este comportamiento.
tancias el verdadero reservorio de nutrientes del suelo, 0,1 > 0,33 > 1 > 5 > 15 > 50 > 0 barias
liberndose lentamente los iones minerales aprovecha- Esta composicin elemental se parece a la de la turba, En resumen: la nitrificacin auttrofa es rpida en suelos
bles por los vegetales. pero el origen y la actividad difieren mucho. N-NO

hmedos y aireados, bien drenados y de buena estructu-
3
mg/kg 0,1 ra, lenta en suelos pesados. El ptimo de humedad vara
El contenido y calidad de estas sustancias est en rela- Cuadro 14- Principales efectos del humus en 300 0,33 considerablemente con los suelos, se citan ptimos entre
cin directa con la fertilidad del suelo por sus propiedades el suelo y las plantas 200 1 1/2 y 2/3 de la capacidad de campo (cuadro 6).
y es inclusive empleado en formulaciones comerciales de 5
los llamados bioestimulantes orgnicos (cuadro 14). 100 Cuadro 6- Factores que afectan a la nitrificacin
mejora condiciones fsicas, como agregacin, 15
aireacin, retencin de agua, intercambio calri- 0 en suelos
saturado
Caracterizacin de las sustancias hmicas co y permeabilidad del suelo 0 5 10 15 20 das
La naturaleza de estas sustancias vara con los suelos, el aumenta la superficie espcifica, la CIC o el efecto
Contenido de agua: la estimula hasta un 60% de
clima, la cubierta vegetal, las prcticas agrcolas. La ex- tampn acta como agente de complexacin, que- Figura 4- Nitrificacin a diferentes tensiones CC, luego se limita
traccin del humus sin provocar alteraciones resulta muy de humedad (barias) La fertilizacin con amonio o abonos orgnicos
lacin y retencin de nutrientes y xenobiticos
difcil. Algunos autores emplean solventes de alta densi- ejerce efectos fisiolgicos, como permeabildiad de
la favorecen (alto nivel de NH4)
dad (bromoformo-benceno de densidad 2) para separar membranas, absorcin de nutrientes, actividad en- Temperatura: la temperatura ptima tanto en el suelo Humedad y temperatura: suelos hmedos y fros
la materia orgnica poco transformada y ms liviana, del zimtica y fotosntesis como en medios de cultivo se ubica entre 28 y 36C, aun- limitan el proceso y las prdidas de N se pueden
humus y la fraccin mineral, que decantan. Los compues- ejerce accin protectora y acta como fuente de
que pueden aparecer nitratos por encima de 40C por limitar fertilizando en otoo
tos hmicos se extraen con soluciones alcalinas, aunque nutrientes para los microorganismos accin de cepas adaptadas. Varios autores determinaron Poblacin nitrificante: para oxidar 1 mg N/kg sue-
se corre el riesgo de extraer tambin el humus libre que acta como reservorio de N, P, S, micronutrien- que an a temperaturas tan bajas como 2C la nitrifica- lo/da se necesitan 300.000 organismos. Suelos
4
puede condensarse (neoformacin). Otros solventes em- tes cin puede alcanzar valores considerables si el amonio y con bajo N pueden contener 1.10 nitrificantes/g.
pleados incluyen oxalato de amonio, FNa, pirofosfato de la densidad de microorganismos nitrificantes no son limi- El pH: favorable en el entorno del neutro (micro-
sodio. tantes. ambientes)
Se distinguen varias fracciones:
Por hidrlisis cida se liberan aminocidos, azcares, los cidos flvicos que quedan dispersos o disueltos Efecto rizosfrico: la atmsfera en la vecindad de las El rehumedecimiento de suelos secos estimula la nitrifi-
aminoazcares y una fraccin permanece no hidrolizable, luego de acidificar el extracto alcalino con HCl o H2SO4 races es ms pobre en O2 y ms rica en CO2 que la at- cacin. Se explica este hecho por la accin de enzimas
con ncleos parecidos a los de la lignina, slo degrada- los cidos hmicos, extrables en lcali pero que preci- msfera sobre el suelo, debido a la actividad respiratoria liberadas por clulas muertas en la desecacin, que per-
dos por tratamientos muy drsticos como pirlisis cida o pitan a pH 2,5 y dan una fraccin soluble en etanol de la mayora de los hetertrofos. La nitrificacin, por lo maneceran adsorbidas a la fraccin organo-mineral del
alcalina, fusin alcalina, H2O2 en caliente, etc. los cidos himatomelnicos tanto, ser menor. Se cita tambin la inhibicin de algu- suelo que se sumaran a las presentes en las clulas vi-
nos cultivos sobre este proceso, sobre todo de los bos- vas. La temperatura favorece el proceso.
Ecologa las de las arcillas. A medida que se incrementa el nivel de Los cidos hmicos pardos estn poco polimerizados y El carbono de clulas microbianas contribuye a la frac-
Se analizarn aspectos ecolgicos de la nitrificacin auttro- potasio agregado, disminuye la nitrificacin del amonio fi- dbilmente ligados a la fraccin mineral, los cidos hmi- cin ms simple del humus, los aminocidos.
fa por su importancia cuantitativa y por el hecho de estar ms jado. Los nutrientes que afectan a la amonificacin, como cos grises son muy polimerizados y estn ligados a los
afectada por las condiciones del medio. La gran similitud fi- el nivel y calidad de la materia orgnica, afectan indirecta- himatomelnicos. La figura 12 (Allison, 1973) presenta un esquema de for-
siolgica de las especies actuantes explica en parte la sensi- mente a la nitrificacin. macin de molculas hmicas. En los ltimos 50 aos
bilidad a condiciones del ambiente: el proceso puede no ocu- la humina residuo insoluble en cidos y bases, materia se han realizado numerosos estudios sobre la sntesis
rrir o ser extremadamente lento en suelos anegados, de pH pH: existe alta correlacin entre la nitrificacin y el pH del orgnica muy evolucionada y difcil de separar de la made la fraccin orgnica del suelo. En el laboratorio una
muy bajo, o bajo temperaturas muy altas. Como la amonifi- suelo. En medios cidos, la nitrificacin est inhibida o es teria orgnica fresca: una fraccin es soluble en HCl serie de reacciones condujeron a distintos tipos de hu-
cacin es un proceso menos especfico, en el suelo se acu- muy lenta (debajo de pH 6,0). Mientras que el pH ptimo 5N; el resto se une a arcillas, por lo que se requiere el mus artificial. Los microorganismos se consideran inter-
mular amonio. de Nitrosomonas se ubica en el rango de 7 a 9 y an ms empleo de HF para su extraccin. mediarios en estos procesos; los restos de sus clulas y
alcalino, para Nitrobacter se sita en la neutralidad o lige- sus productos metablicos constituyen etapas en una
Analizaremos el efecto de los principales factores: ramente alcalino. La nitrificacin a bajos pH se explica por: En las sustancias hmicas ms condensadas predomina- serie de reacciones. Los pigmentos microbianos como
Nivel de nutrientes: el sustrato energtico puede ser el ran los ncleos, con iso o heterociclos, como derivados las melaninas son muy estables a la degradacin, son
factor limitante: amonio o nitrito. Nitrosomonas general- cepas adaptadas a pH cidos del benceno, antraceno, furano, piridina, que pueden con- parcialmente solubles en soda y se extraen en la frac-
mente oxida 35 unidades de nitrgeno y Nitrobacter unas el proceso se realiza en microhabitats donde el pH es densarse por puentes alifticos, oxgeno, nitrgeno o por cin humus.
100 unidades de nitrgeno por cada C-CO2 asimilado. neutro a diferencia del resto del suelo. unin directa entre anillos. Estos enlaces le dan a la mo-
La produccin de nitratos es proporcional al amonio dis- lcula gran estabilidad qumica y biolgica. En el suelo los procesos son ms lentos que en el labora-
ponible. El carbono no es una limitante ya que lo toman La poblacin nitrificante auttrofa es mayor en suelos neu- torio, pero las reacciones se aceleran por:
del CO2, carbonatos, bicarbonatos. El nitrito puede acu- tros o ligeramente alcalinos y el encalado favorece el pro- El nitrgeno de las cadenas laterales representa un 30
mularse cuando se inhibe la actividad de los oxidantes ceso en suelos cidos, que presentan una gran fase de 35% del total, es fcilmente hidrolizable y es de origen la gran actividad superficial de las partculas (catlisis
del nitrito, como ocurre luego de aplicar altas dosis de latencia (varios das) en la aparicin de los nitratos (ejem- proteco, el resto de N del humus estara condensado como inorgnica)
urea, amonaco anhidro o sales de amonio, a pH alto. plo de la incidencia favorable del hombre sobre un proce- pirrol, indol,etc. o bien formara puentes entre bencenos y los sinergismos microbianos que posibilitan la forma-
La autoecologa de estos grupos nos explica ya esta inhi- so microbiano). es ms resistente a la degradacin. cin de los mismos productos finales.
bicin (cuadro 5).
La figura 3 esquematiza resultados de la percolacin cclica Precursores del humus y proceso de humifica- La estabilidad del humus es muy grande. En turbas con-
Se observa que el primer paso de la oxidacin es ms de distintas sustancias a travs de una columna de suelo. cin geladas de Alaska se estim la edad de estas molculas
verstil. Condiciones adversas de pH, temperatura o do- Varias hiptesis tratan de explicar los procesos que entre 1.775 +/- 110 y 11.005 +/-350 aos (a 1 m de
sis altas de fertilizantes amoniacales, conducen a la acu- un aminocido, que presenta una fase de latencia en conducen a la formacin de estas macromolculas: profundidad). A los 2 metros esta edad podra llegar a
mulacin de nitritos, txicos para los vegetales y la mayo- la aparicin de los nitratos requerida para la amonifica- 25.300+/-300 aos. En suelos templados esta edad es
ra de los microorganismos. cin previa Las sustancias rpidamente degradables como la ce- menor como consecuencia del mayor reciclamiento de la
la nitrificacin de sales amoniacales presenta un pe- lulosa, hidratos de carbono simples, juegan un impor- materia orgnica.
Cuadro 5- Autoecologa de Nitrosomonas rodo de corta latencia correspondiente a su oxidacin tante rol en la formacin del humus. Luego de 7 das
y Nitrobacter a nitrito en el suelo, un 70-75% del C14 de la glucosa se locali- En resumen, se piensa que el humus es el producto de
los nitritos son inmediatamente oxidados z en fracciones hmicas, mientras que el C14 de ace- neosntesis a partir de compuestos ms o menos solubles
pH Temperatura N- amoniacal tato se distribuy luego de 6-9 horas en la humina, ci- originados en la descomposicin de la materia orgnica fres-
dos flvicos y hmicos, en forma similar al carbono de ca, mediante la combinacin de procesos biolgicos y fsi-
Nitrosomonas tolera pH aun activo tolera altas dosis log N-NO
altos y bajos a bajas mg/litro
3 la paja. co-qumicos, durante un largo perodo de tiempo.
NaNO2
temperatura
3,0
Nitrobacter inhibido a pH: inactivo inhibido a altas NH4Cl aminocido La lignina se reconoce como precursora del humus que La adicin de materia orgnica al suelo puede provocar
dosis
2,0
se condensa con materiales protecos de origen micro- estimulacin de la descomposicin de la materia orgni-
superiores a 9,0 sobre 40 e biano. Su participacin ha sido sealada en numerosos ca nativa. Este fenmeno se refiere como efecto reno-
inferiores a 5,0 inferior a 5C 1,0 trabajos: un 34% de la radioactividad de los cidos hmi- vador (priming effect) y fue observado luego del enri-
cos se origin en la lignina, mientras que slo un 6% lo quecimiento del suelo con materia orgnica simple o res-
Muchos suelos fijan grandes cantidades de amonio en los 5 10 15 20 das
hizo a partir de la celulosa. tos vegetales.
coloides. El potasio, catin que tambin es fijado, interfie-
re en la nitrificacin del amonio atrapado entre las hojue- Figura 3- Nitrificacin de varios sustratos
hidratos de carbono sustancias aminadas lignina residuos no descompuestos Rol de los microorganismos El poder reductor (NADH) se genera en estas bacterias Sustratos: pueden ser amonio, nitrofenoles, oximas,
de restos vegetales 1-3% 10-30% Se seala la importancia de los microorganismos y de la fau- por transporte inverso de electrones en la cadena respira- amidas, hidroxilamina, nitropropionato. Algunos de ellos
50-60% de la MS na en los distintos procesos que conducen a la humificacin: toria, con consumo de ATP ya que el potencial redox de tienen carcter de factores de crecimiento, sobre todo los

oxidacin los pares amonio-nitrito y nitrito-nitrato no son suficiente- cidos hidroxmicos, involucrados en la toma de hierro, por
celulosa descomposicin apertura: mineralizacin de materiales originales, mente negativos para reducir el NAD+ (captulo 3). formacin de quelatos (siderforos). Otro grupo tiene ca-
hemicelulosa microbiana p-OH
aminocidos benzaldehido, ncleos formacin de subunidades estructurales y su rcter biocida como la actidiona, cido asperglico (lucha
c. vanillico del humus
aceites
ceras
cidos aa posterior condensacin. Nitrificacin hetertrofa biolgica) y otros poseen carcter mutagnico como nitrito,
azcares amonio
alcoholes
Los nitrificantes hetertrofos constituyen un grupo me- hidroxilamina y derivados nitrosos (Myrold, 1998).

sntesis microbiana
Especies de Penicillum, Aspergillus y Actimomyces en nos especializado que requieren medios con sustratos
medios con azcares acumulan sustancias oscuras del orgnicos con amonio o nitritos y pueden acumular nitri- El cuadro 4 resume datos sobre la nitrificacin hetertro-

compuestos con N compuestos hmicos tipo del humus, con pptidos y polifenoles. Los tipos ms tos o nitratos cuando el crecimiento ces. Los organis- fa, comparndola con la auttrofa. Como se aprecia, la
polisacridos
quinona melanina
heteropolicondensados maduros se formaran a partir de estas molculas por ac- mos son bacterias, incluidos los actinomicetes, y hongos. velocidad del proceso auttrofo es 103-104 veces mayor
cin microbiana y procesos qumicos y fisicoqumicos. Aspergillus flavus es reconocido en la oxidacin del amo- que el hetertrofo y la capacidad de formacin de produc-
Figura 12- Esquema del proceso de humificacin
nio hasta nitrato, a partir de nitropropionato con un equipo tos finales es del orden de 102 a 103 veces superior.
La condensacin es estimulada por oxidasas producidas enzimtico especializado, con nitrito intermediario:
Microbiologa de la humificacin por microorganismos del suelo o aguas o del tracto diges-
peroxidasa
El rol de los nitrificantes hetertrofos en la provisin de
Los microorganismos participan en la formacin de motivo de la fauna. La acumulacin de pigmentos marrones nitratos para los vegetales es controvertido. Si bien su efi-
3 nitropropionato NO2 + CO2 + H2O
lculas hmicas, catalizando distintas reacciones bioqu- oscuros es evidenciada en bacterias como Pseudomonas ciencia es baja, su densidad puede ser alta en ciertas con-
micas. Algunos autores discuten si su rol es directo o sp. en medio con extracto de levadura, glucosa y tirosina. Energa: su principal fuente proviene de sustratos orgni- diciones, acumulndose cantidades importantes de nitr-
indirecto y una de las preguntas es cmo se concilia la Sustancias fenlicas y quinonas se transforman en pol- cos pero la energa liberada es escasa y no satisface los geno mineral (suelos de bosque). Pueden adems, ac-
rpida mineralizacin de las sustancias vegetales con meros tipo humus en las mismas clulas bacterianas por requerimientos plsticos de los microorganismos (no est tuar cuando los auttrofos no pueden sobrevivir: altas tem-
su humificacin. accin de fenoloxidasas. El espectro IR de las mismas acoplada a procesos de biosntesis). peraturas, bajo nivel de O2, pH cidos.
es similar a los de los cidos hmicos sintticos y se frac-
Hiptesis: cionaron en cidos hmicos y flvicos. Cuadro 4- Nitrificacin auttrofa y hetertrofa
se postula la humificacin de los restos que quedan en
microporos donde no llegan las bacterias, pero s sus Tanto la biosntesis como la biodegradacin de molculas Organismo sustrato producto final velocidad concentracin
enzimas, aunque no se puede olvidar la adsorcin que del tipo de las del humus ocurren simultneamente por gN/da/g biomasa gN/mL
pueden sufrir las enzimas en su camino hacia el sustrato. accin de una variada micropoblacin que pone en juego Arthrobacter spp
+
NH succinato hidroxilamina, 12 0,2
las molculas son rpidamente policondensadas o poli- un complejo y no bien identificado equipo enzimtico. 4
nitrito 375
merizadas a partir de radicales libres formados por la nitrato 250
accin enzimtica a altas concentraciones de sustan- Factores que afectan a la humificacin NH
+
y N-orgnico nitrito - 1,6
cias monomricas, cuando los organismos capaces de Entre los principales factores que afectan el proceso cita- 4
nitrato - 14,1
atacarlos estn ausentes. Se puede seguir la humifica- remos: vegetacin, actividad biolgica del suelo, clima, +
NH y acetato hidroxilamina 4.500 15,0
cin de hojas al microscopio. tipos de suelos, actividad del hombre. 4
nitrito 9.000 18,0
se sostiene que la humificacin comienza en los restos
nitrato 660 2,0
inmediatamente luego de la muerte celular, cuando las La vegetacin: aporta materias primas y es fuente de c. hidroxmico 600 6,0
enzimas autolticas estn activas, pero la destruccin energa y nutrientes para los microorganismos. El cultivo 1-nitroetanol 300 10,0
an no ha comenzado (condensacin de aminocidos afecta el microclima del suelo, la estructura por accin de Pseudomonas acetaldoxina nitrito 2.000 150,0
de la hidrlisis proteca con quinonas y polifenoles). las races y la atmsfera del suelo, por respiracin de r- aeroginosa
ganos subterrneos. Hansenula marakii nitroetano nitrito 1.680 2,8
Las sustancias pardas aparecen en las clulas antes que nitropropano
los tejidos lignificados presenten alteraciones visibles. C/N de los restos: relaciones menores de 25/1 estimu- Aspergillus flavus c. 3 nitropropinico 1.400 45,0
Cuando las clulas se descomponen, estas sustancias se lan rpida mineralizacin, limitando el potencial de hu- +
NH y sacarosa nitrato 1.350 75.0
4
liberan al suelo, pudiendo adsorberse a arcillas y prote- mificacin, relaciones altas conducen a acumulacin de Nitrosomonas spp NH +
nitrito 1,3 x 106 2-4 x 10 3
4
gerse del ataque microbiano. humus libre. Nitrobacter NO2- nitrato 5,7 x 10 6 2-4 x 10 3
Cuadro 3- Bacterias nitrificantes auttrofas La relacin ms favorable para la formacin de humus Ocurrir mxima humificacin cuando los procesos ae-
estable parece ubicarse en la vecindad de 20/1 (los man- robios y anaerobios estn correctamente balanceados.
Gnero Morfologa ( G+C) Crecimiento Habitat tillos mejoradores, ricos en nitrgeno que se descompo- Si la anaerobiosis es permanente, la humificacin es
nen rpidamente). prcticamente nula y se conduce a la formacin de tur-
Oxidantes del amonio
bas. El proceso parece tener el ptimo en microaerofi-
Nitrosomonas Bacilos rectos, 1-2 47,4 - 51 5 - 40 aguas frescas Es necesario tambin tener en cuenta la relacin entre lia o en condiciones de alternancia de perodos de
flagelos, o inmviles los constituyentes lbiles y los estables, un predominio de aerobiosis y anaerobiosis.
Nitrosospira Espirilos, flagelos 54,1 25 - 30C suelo compuestos solubles estimulan una rpida mineralizacin,
perotricos o inmviles y altos contenidos de lignina facilitan la humificacin. Actividad del hombre: el laboreo disminuye el nivel de
Nitrosococcus Cocos en pares o 56,5 - 51 2 - 30C suelo materia orgnica al romper los agregados y exponer la
ttradas, mviles con pH 6,0 - 8,2 Los abonos verdes, ricos en nitrgeno y constituyentes materia orgnica a la biodegradacin, pero el efecto de
1 flagelo o peritricos solubles y pobres en lignina, son rpidamente metaboliza- mezclado favorece la calidad. Alternancias de cultivo y
o inmviles dos, enriqueciendo poco en carbono al suelo y activando la barbecho favorecen la humificacin. Los suelos cultiva-
Oxidantes del nitrito mineralizacin de la materia orgnica nativa. Los cultivos dos presentan un humus ms evolucionado, pero menos
anuales enriquecen menos al suelo en carbono que los abundante, que puede descender por debajo de niveles
Nitrobacter Bacilos cortos, mviles 60,7 - 61,7 5 - 40C suelo, mar,
perennes. Un monocultivo de maz posee menos poder de crticos. Enterrar restos vegetales activa su mineralizacin
con flagelo polar pH 5,7-10.2 aguas frescas
humificacin al compararlo con gramneas forrajeras. y una aplicacin ms profunda favorece la humificacin
o inmviles (condiciones micraeroflicas).
Nitrospira Bacilos largos, inmviles 57,7 20 - 30C mar Las pajas de cereales con alto contenido de lignina favo-
Nitrococcus Cocos con citomembranas 57,7 20 - 30C mar recen la humificacin.
muy ramificadas pH 7-8 Deshumificacin
El clima influye en la productividad (cantidad y calidad
del material vegetal) y directamente en la actividad biol- Se encuentran gran nmero de dificultades en la investi-
Aislamiento: resulta difcil y es frecuente la presencia de Mecanismo de la nitrificacin auttrofa gica. La degradacin del N del humus disminuye 2-3 ve- gacin de biodegradacin del humus: los microorganis-
contaminantes muy relacionados morfolgicamente como La oxidacin del amonio a nitrato implica la transferencia ces por cada 10C de disminucin de la temperatura. En mos pueden crecer con cidos hmicos pero emplean
Pseudomonas, Hyphomicrobium, Mycobactrium, Flavo- de 8 electrones (-3 a + 5). La conversin de amonio a regiones fras aumenta considerablemente el nivel de hu- solamente los compuestos asociados, como los amino-
bacterium. Su lento crecimiento dificulta la eliminacin de nitrito ocurre en por lo menos dos pasos: mus. El congelamiento y descongelamiento disminuyen cidos, dejando la estructura aromtica intacta, hecho que
estos contaminantes. la estabilidad de las molculas hmicas. Por el contrario, sumado a la falta de datos sobre la estructura exacta de
NH4+ + 0,5 O2 NH2OH + H
+
G = -0,7 kcal/mol
un congelamiento prolongado aumenta la estabilidad. La la molcula (si es que tienen una estructura bsica co-
El aislamiento puede realizarse en forma: NH2OH + O2
NO2 + H2O + H
+
G = -83,3 kcal/mol
desecacin favorece la polimerizacin de sustancias pre- mn), tornan las comparaciones muy difciles.
hmicas (maduracin). Suelos permanentemente hme-
Directa: por agotamiento en cajas de Petri con slico- Como se observa, la disminucin de la energa libre en la
dos presentan formas poco condensadas y mviles (ci- Adems, las zonas claras alrededor de las colonias de-
gel nutritivo: solucin salina, sales de amonio o nitritos, oxidacin del amonio es pequea comparada con la de dos flvicos). sarrolladas en medios con cidos hmicos no indican
carbonato de calcio. Las microcolonias se detectan por oxidacin de la hidroxilamina. El proceso se estudi en
necesariamente la degradacin de los mismos; muchas
el halo transparente por disolucin del carbonato por clulas intactas y en extractos libres de clulas. Se aisl
Suelos: el contenido y calidad de las arcillas facilita la veces, ellos son precipitados alrededor de las clulas.
los cidos producidos. una oxidasa de la hidroxilamina relacionada al citocromo humificacin. Un pH alto favorece la actividad minerali-
Por enriquecimiento previo en el mismo medio selec- c. Se sugiere que la hidroxilamina es convertida en un
zante y la humificacin por bacterias. El calcio facilita la A pesar de estos inconvenientes parece correcto afirmar
tivo lquido y varios pasajes en el mismo medio fresco, intermediario que se descompone espontneamente en
floculacin y maduracin de las molculas prehmicas. que ciertos hongos, sobre todo Ascomycetes y Basidio-
que facilita el aislamiento en medio slido. xido nitroso, no oxidado por N. europea. mycetes, pueden degradar cidos hmicos en el labora-
La humedad ms favorable para la humificacin se sita torio por reduccin enzimtica de grupos aromticos car-
La actividad es estimulada por burbujeo o agitacin de los En la nitratacin participa una nitrito oxidasa, inhibida por
en la vecindad del 60% de la capacidad de campo. La boxilo a aldehido y luego hasta alcoholes. Los sistemas
cultivos lquidos ya que son aerobios estrictos. El pH pti- cianuro e involucra el sistema citocromos: saturacin no favorece al proceso; los suelos saturados enzimticos son adaptativos. En filtrados de cultivos de
mo es ligeramente alcalino, pero pueden tolerar rangos son pobres en humus. Un insuficiente drenaje conduce a hongos creciendo sobre cidos hmicos se detectaron
cit c Fe+3 + NO2 cit c Fe+2 + NO2 (radical libre) cit a1 Fe+2 + NO2 +
ms amplios de pH en el suelo. Son mesfilos, la tempe- NO2 + 0,5 O2 cit a1 Fe+3 + NO3 humus bruto o a turba. alcohol saliclico y salicilaldehido.
ratura ptima se sita entre los 24 a 30C. globalmente: NO2 cit c cit a1 O2
Las tcnicas respiromtricas son muy tiles en el estudio aluminio refuerza el efecto estableciendo enlaces ms mos responsables. Confirm la naturaleza biolgica ca- Nitrificantes auttrofos
de la mineralizacin del humus. estrechos entre los coloides orgnicos y minerales. lentando una columna de suelo o tratndola con clorofor- Son bacterias muy relacionadas pertenecientes a la fa-
mo: el proceso cesaba y los nitratos volvan a formarse al milia Nitrobacteriaceae, gram negativas, que no forman
Se cuenta con poca informacin sobre la descomposicin La tasa anual de descomposicin de la materia orgnica reinocular este sistema con suspensin de suelo frtil. esporas, bacilos, cocos o espirilos, en general mviles por
de los cidos hmicos en la naturaleza. Intervienen po- es del orden de 1,8% en suelos pesados y de 2,2% en flagelos polares.
blaciones complejas con especies que atacan sustancias livianos. La nitrificacin afecta a:
aromticas, reuniendo en su conjunto al equipo enzimti- Los cultivos, ya que constituye un proceso fundamen- Auttrofos obligados, muchos compuestos orgnicos les
co necesario para degradar a las sustancias hmicas. tal para la nutricin vegetal, los nitratos son fcilmente resultan txicos, por alteraciones producidas en la esteri-
Modelos de simulacin absorbidos, en menor grado el amonio y los nitritos re- lizacin en autoclave. Fuentes de carbono: del CO2, bi-
Las bacterias son activas sobre todo atacando las cade- sultan txicos. carbonatos y carbonatos y de energa: de la oxidacin de
nas laterales alifticas. Los actinomicetes pueden adems Un importante objetivo en estudios de biodegracin es la Al ambiente, pues una intensa nitrificacin resulta mu- sales amoniacales o nitrosas.
degradar molculas aromticas provocando decoloracin organizacin de datos experimentales en modelos de si- chas veces perjudicial para el hombre. Los iones nitrito
del medio. mulacin a partir de los cuales se pueden efectuar predic- y nitrato son solubles y por lo tanto mviles con el agua El cuadro 3 resume las caractersticas de los 4 gneros
ciones en relacin a los ciclos de los nutrientes (C, N, P, que puede llevarlos lejos de la zona de absorcin radi- de bacterias oxidantes de amonio y de los 3 oxidantes del
Los hongos son activos degradadores de molculas h- S), al almacenamiento de materia orgnica y al impacto cal. El amonio, al ser fijado en el complejo de intercam- nitrito. Las especies ms representativas son Nitroso-
micas. Entre los productos de la degradacin de los cide prcticas de manejo de residuos en la calidad del am- bio, resulta menos mvil. La polucin de las aguas por monas europea y Nitrobacter winogradsky. Los nitrifican-
dos hmicos se han detectado residuos de la degrada- biente y en la productividad del suelo. Un paso importante los nitratos resulta un problema en los pases que em- tes autotrficos secundarios, es decir, el resto de los que
cin de la lignina bastante como cidos vanllico y sirngi- es la ubicacin de la materia orgnica y de sus nutrientes plean grandes dosis de fertilizantes. Los nitratos se re- figuran en el cuadro 3 aparecen en general en bajo nme-
co. En suelos donde la lignina est ausente, como los en compartimentos o pools, con distintos tiempos de reci- ducen a nitritos en la sangre, unindose a la hemoglo- ro y presentan rangos ms estrechos de temperatura y
antrticos cubiertos de helechos, no se encontraron estos clamiento o tiempos de residencia media (TRM) (Steven- bina que se convierte en metahemoglobina, molcula pH para su desarrollo. Otra importante diferencia la cons-
productos. Otras sustancias que aparecen en la degrada- son y Cole, 1999). que no funciona en la transferencia del O2. La enferme- tituye la habilidad para crecer heterotrficamente de algu-
cin, como flavonoides, pueden derivar de sntesis micro- dad es conocida como metahemoglobinemia (enfer- nas especies del segundo grupo. Nitrobacter agilis puede
biana o de la vegetacin. La materia orgnica ha sido fraccionada en: medad de los chicos azules). Los estndares para con- crecer con materia orgnica y es estimulado por extracto
sumo humano son inferiores a 10 mg/L de N-NO3 para de levadura. Nitrobacter winogradsky posee mayor poten-
Ecologa lbil, o activa que se degrada en pocas semanas o el agua potable. cial para crecer heterotrficamente que Nitrococcus y
Carbono: fuentes de carbono fcilmente degradables meses, formada por mantillos, fraccin liviana, la bio- Nitrospina. Piruvato y aminocidos estimulan el crecimien-
(0,5-2%) estimulan el crecimiento microbiano favorecien- masa microbiana, fauna muerta y sus residuos y sus- Nitrificacin auttrofa to de Nitrosomonas europea.
do la degradacin del humus en el laboratorio. Para otras tancias no hmicas unidas a minerales. Se usa como La nitrificacin auttrofa puede dividirse en dos pasos, cada
especies la celulosa es ms eficiente. El efecto sobre la fuente rpida de nutrientes para el desarrollo vegetal y uno realizado por un grupo particular de organismos: Velocidad de crecimiento: comparada con la de la ma-
humificacin es el mismo que analizamos en la degrada- la actividad microbiana y es muy importante para man- yora de las bacterias heterotrficas, la vc de las bacterias
I) Nitritacin: NH4+ + 1,5 O2 NO2 + 2H + H2O G = 84 cal/mol
+
cin de otros biopolmeros: el aumento microbiano provo- tener la productividad del suelo bajo agricultura susten- nitrificantes es baja. Tiempos de generacin de 8 horas
ca agotamiento de nutrientes y la poblacin induce el equi- table (manejo de los residuos, mnimo laboreo y escasa II) Nitratacin: NO2 + 0,5 O2 NO3

G = 17, 8 cal/mol han sido informados en medio de cultivo. Se piensa que
po enzimtico para degradar molculas ms complejas. fertilizacin). Esta fraccin est relacionada al aporte en la naturaleza se sobrepasan las 20-40 horas. El desa-
de restos y es afectada por los factores que inciden en Son procesos metablicos generadores de energa rrollo en medio de cultivo se acelera con sales de bicarbo-
Nitrgeno: el de las cadenas laterales es asimilado por los la actividad microbiana. (ATP): respiraciones aerobias con sustratos inorg- nato solubles o de lcali para contrarrestar la cada del
microorganismos aunque en menor grado que las formas estable, resistente a la descomposicin y que persiste nicos (amonio y/o nitrito). Los microorganismos son qui- pH. El rendimiento celular es tambin bajo (0,15 kg bio-
inorgnicas u orgnicas simples del suelo. Otras fuentes en el suelo por pocos aos o aun dcadas o ms tiem- miolitoauttrofos que aprovechan la energa y las coen- masa/kg N-NH4+ oxidado para la nitritacin y de 0,02kg de
nitrogenadas ejercen efecto variable segn las especies. po. Est integrada por el humus, funciona como reser- zimas reducidas en la cadena respiratoria para sus ne- biomasa/kg N-NO2 oxidado para la nitratacin).
vorio de nutrientes y es importante en el balance a lar- cesidades plsticas, sobre todo para reducir el CO2 a
Calcio: los humatos clcicos son ms fcilmente degra- go plazo del carbono en el suelo. material celular. Eficiencias bioqumicas (N inorgnico oxidado/C-CO2
dados in vitro que los de sodio (efecto tampn favorable asimilado) de 14-70/1 para Nitrosomonas y de 76-135/1
para la actividad enzimtica). Muchos modelos se han elaborado a partir de 5 comparti- Por los rendimientos energticos se aprecia que se pue- para Nitrobacter (gran capacidad sinttica, la mayora no
mientos que incluyen: la biomasa microbiana, dos formas de originar cuatro veces ms biomasa por la oxidacin de requieren factores de crecimiento). Como vimos, los oxi-
Arcillas: ejercen efecto protector: la oxidacin de los cide materia orgnica estabilizada (en forma fsica o qumi- la misma cantidad de N cuando sta es realizada por el dantes del amonio obtienen ms energa de la reaccin y
dos hmicos es ms lenta con illita y montmorillonita. El ca) y el componente de residuos vegetales, dividido en grupo I. En la naturaleza, en general, las densidades para deben metabolizar menos nitrgeno por unidad de carbo-
ambos grupos no difieren tanto. no asimilado.
cin a nitratos, muy mviles en suelos donde el rgimen en una estacin de crecimiento se mineraliza entre 1 y dos reservorios: rpidamente degradable y resistente. dad de materia orgnica aplicada, tipo de abono orgnico
hdrico es intenso. El amonio es adsorbido en forma inter- 5% del N total; pero al agregar al suelo una protena, ami- Ejemplo de estas predicciones en los TRM: empleado, duracin de la experiencia.
cambiable en el complejo coloidal del suelo, disminuyen- noazcar u otras formas de nitrgeno orgnico, stas des-
do su lixiviacin y resultan fertilizantes ms seguros que aparecen muy rpidamente. Diversas hiptesis tratan de material vegetal descomponible, vida media 0,16 aos A modo de resumen se presentan las figuras 13 y 14. La
los ntricos. explicar esta estabilidad (Dommergues, Mangenot, 1970). biomasa microbiana, vida media 1,69 aos figura 13 muestra las tasas de descomposicin de dife-
material vegetal resistente, vida media 2,31 aos rentes materiales orgnicos en el suelo y en la figura 14
Ecologa Formacin de complejos entre protenas y fraccio- MO estabilizada fsicamente, vida media 49-50 aos se esquematiza la cintica de esta degradacin. Se verifi-
Como hemos visto este es un proceso muy poco espec- nes orgnicas del suelo, como lignina, compuestos MO estabilizada qumicamente, vida media 1.980 aos ca que la fraccin activa del residuo, representada princi-
fico, realizado por gran nmero de microorganismos he- fenlicos o sustancias del tipo del humus palmente por azcares, protenas, amidas y celulosa es
tertrofos adaptados a las ms variadas condiciones eco- Complexacin con minerales arcillosos: la adsorcin Una aproximacin similar ha sido empleada para simular descompuesta en menos de un ao, en tanto que otras
lgicas. externa al complejo de intercambio del suelo (ms fir- la dinmica de la materia orgnica en pasturas naturales fracciones resisten la degradacin.
memente si en la protena dominan las cargas electro- y en suelos tropicales, con sub-modelos para transforma-
La amonificacin ocurre en todas aquellas condiciones positivas) o la inclusin dentro de las hojuelas, posibili- ciones del N, P y S.
* molculas recalcitrantes
compatibles con la vida (que aseguran que el agua se tan un retardo en la biodegradacin. Esta hiptesis ex-
encuentre en estado lquido). plica tambin la inhibicin de enzimas extracelulares Las limitaciones sealadas a estos modelos incluyen: 100
glucosa
Toxicidad del ambiente: la vegetacin o el metabolis-
% descomposicin
protenas
Temperatura: como con todas las reacciones biolgicas, mo microbiano producen sustancias inhibidoras cuya los componentes lbiles estn en estado de continuo 80
restos de leguminosas
una elevacin de temperatura estimula el proceso. El p- concentracin aumenta con la concentracin hidroge- cambio y su medida en un momento dado provee de un restos cereales
timo del amplio grupo de amonificantes se ubica en el ran- ninica del medio y la anaerobiosis: cumarinas, tani- ndice relativo de disponibilidad de nutrientes bajo un 60
go termfilo. nos, resinas, contribuyen a estabilizar la materia org- conjunto de condiciones estircol
lignina
nica en suelos forestales no todas las fracciones (pools) pueden medirse experi-
40
pH: puede llevarse a cabo desde pH muy bajos (3,5-4,0) mentalmente madera
a superiores a 9,0. Una fuerte acidez retarda el proceso y La liberacin se realiza gradualmente a medida que la en condiciones de inmovilizacin neta, la biomasa fun-
20 cido hmico*
son sobre todo las bacterias anaerobias y los hongos los vegetacin las requiere, evitando prdidas importantes por ciona como reservorio de nutrientes en detrimento de la
activos en esas condiciones. A pH superiores dominan lavado o desnitrificacin. Pero en algunos ecosistemas nutricin vegetal 0 2 4 8 12 28 semanas
los actinomicetes y algunas algas que pueden emplear este bloqueo puede ser negativo para la nutricin de las el concento de reservorios y de modelos basados en
Figura 13- Velocidad de degradacin de restos orgnicos
fuentes de nitrgeno orgnicas. plantas, como ocurre en horizontes superficiales (Ao) de ellos no coincidirn con la realidad fsica, qumica y bio- en el suelo
formaciones forestales. lgica
Cultivos vegetales: ejercen un doble efecto, por un lado
proveen restos orgnicos nitrogenados por descamacin Sin embargo, los avances logrados en mtodos compu-
de races, exudados, percolados a travs de las hojas y Nitrificacin tacionales y en las tcnicas analticas para la determina-
follaje, estimulan la amonificacin real o bruta, pero tam- cin de diferentes fracciones de la materia orgnica, ha-
bin absorbe a los iones amonio: la amonificacin neta se La nitrificacin se define como la conversin biolgica cen que estos modelos se vuelvan herramientas prcti- azcares
tasa de degradacin
ve as inhibida. del nitrgeno desde un estado reducido (NH4+, N-orgnicas que economizan tiempo y numerosos experimentos almidn protenas celulosa lignina
co) a otro ms oxidado (NO2, NO3), a partir de compues- de laboratorio y campo.
En resumen: el proceso se realiza en amplias condicio- tos orgnicos o inorgnicos, por una microflora auto y menos de 1 ao
nes ambientales, con innumerables sustratos y la micro- hetertrofa. En resumen: aumentar y/o mantener el nivel de materia
flora responsable incluye prcticamente a todos los mi- orgnica de un suelo es un objetivo prioritario en todo 6-8 aos
croorganismos hetertros. La actividad sera mxima en Es un proceso biolgico conocido desde hace mucho tiem- manejo agrcola. La aplicacin de abonos orgnicos (res- ms de 100 aos
aerobiosis, temperaturas en el rango termfilo, neutrofilia po que se realiza en el suelo, en ambientes marinos, abo- tos de cosechas, subproductos industriales) contribuye a
y humedades medias nos, y en los procesos de depuracin de aguas servidas. evitar la prdida de humus en suelos sometidos a intensa
Ya en la poca napolenica se produca el nitro de Chile explotacin. tiempo
Estabilidad de compuestos nitrogenados orgnicos en pilas de suelo, con abonos orgnicos y carbonato de
Numerosos investigadores han remarcado la estabilidad calcio. Pasteur postul la naturaleza microbiana del pro- Los principales factores a tener en cuenta para elevar el Figura 14- Cintica de la degradacin de restos vegetales
de la fraccin nitrogenada orgnica del suelo. En efecto, ceso y hacia 1890 Winogradsky aisl a los microorganis- contenido de materia orgnica de los suelos son: canti- en el suelo
Bibliografa Preguntas de repaso Energa: la desaminacin no provee de energa al micro- Se liberan fosfatos por accin de fosfatasas vegetales o
organismo, pero la misma puede obtenerse del catabolis- microbianas. Las bases pricas o pirimdicas y el azcar
Allison, F. E. Soil organic matter and its role in crop 1)Defina la primera etapa del ciclo del carbono, la que mo del esqueleto carbonado de la molcula: protena, resultante son empleados por una variada microflora apa-
production. 1973, Elsevier Science Publishing, asegura la sntesis de materia orgnica y los microor- cidos hmicos, etc. reciendo en el medio amonio, aminocidos, cidos org-
New York. ganismos que participan. nicos, urea, dependiendo de las condiciones y de los or-
Dommergues, Y., Mangenot, F. Ecologie microbienne du 2)Por qu el CO2 y el CH4 producen efecto invernadero? Evaluacin: La evolucin del amonio en suelos y aguas, ganismos dominantes. Acidos orgnicos y alcoholes acom-
sols., 1970, Masson & Cie. Pars. 3)Describa algn mtodo de evaluar la actividad minerali- enriquecidos o no con sustancias orgnicas nitrogenadas, paan a aminas, amidas, CO2 y agua, en anaerobiosis.
Frenchel, T., King, G. M. & Blackburn, T. H. Bacterial zante de un suelo. se determina en el campo o en el laboratorio. Como el
Biogeochemistry. The Ecophysiology of Mineral 4)Cules son los principales constituyentes de los resi- amonio puede seguir distintas vas en la naturaleza lo que Otros sustratos: urea, cianamida y fertilizantes de
Cycling, 1998, Academic Press, New York. duos vegetales y cmo difieren en la facilidad de degra- evaluamos es la amonificacin neta, o sea la diferencia amonificacin progresiva
Frioni, L. Procesos microbianos. 1999, Fundacin dacin por la microflora del suelo? entre el amonio producido y el que sigui otras vas en el La urea se encuentra frecuentemente en los ecosistemas
de la Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argenti- 5)Cmo distingue esta degradacin de la del humus? suelo. El empleo de compuestos con N15 permite evaluar naturales (fertilizantes, excreciones de animales o de la
na. 6)Explique la aplicacin de dos mtodos para evaluar la amonificacin real. hidrlisis de los cidos nucleicos). Su degradacin es muy
Stevenson, F. J. 1994 Humus chemistry: Genesis, degradacin de un compuesto orgnico en el suelo. rpida y la microflora ureoltica es muy numerosa: com-
composition, reactions. 2nd. Ed. John Wiley and 7)Qu vas pueden seguir los hidrocarburos aromticos Amonificacin de aminocidos y protenas prende aerobios y anaerobios facultativos, cocos y baci-
Sons, New York. en el suelo? Las protenas constituyen un buen sustrato para la micro- los que soportan pH elevados resultantes de la liberacin
Stevenson, F. J. & M. A. Cole Cycles of Soils: carbon, 8)Formacin y consumo de metano. Consecuencias para flora, a la que brindan la mayora de los elementos para la de amonaco:
nitrogen, phosphorus, sulphur, micronutrients, el ambiente sntesis de macromolculas: C, H, O, N, S. Son atacadas
1999, Wiley & Sons, New York. 9)Concepto de humificacin: como se determina la contri- por enzimas extracelulares segn el siguiente esquema. NH2 NH2
Sylvia, D. M., J. J. Fuhrmann, P. G. Hartel, D. A. bucin de sustancias precursoras?
aerobiosis:
Zuberer Principles and Applications of Soil 10) Por qu resulta difcil estudiar la degradacin del humus? NH3, CO2, agua, C= O + H2O COO 2NH3 + CO2
Microbiology, 1998, Prentice Hall, New jersey. 11) Analice el efecto de la incorporacin al suelo de: SO4=

i) abonos verdes y ii) pajas de cereales. protena peptona pptido aminocido
NH2 NH4

anaerobiosis: NH3,
CO2, aminas, cidos La cianamida clcica es otro fertilizante empleado comn-
orgnicos, indol mente. Por hidrlisis no biolgica se forma urea, la que es
mineralizada por la poblacin ureoltica:
Los aminocidos son degradados rpidamente en sue-
los y aguas. Se encuentran libres en pequea proporcin, CaCN2 + 2H2O H2CN2 + Ca(OH)2
producto de la actividad microbiana sobre protenas, o son + ureasa
excretados por las races. La actividad es mayor en ca- H2O CO(NH2)2 2NH3 + CO2
pas superficiales, en las ms profundas la adsorcin a
coloides puede ser importante y la nitrificacin menor. A los efectos de retardar esta hidrlisis y permitir que los
cultivos dispongan del nitrgeno a medida que lo requie-
Amonificacin de cidos nuclicos ren, se emplean complejos a base de urea; la urea-
Numerosos microorganismos del suelo poseen enzimas formaldehido es uno de ellos, la oxamida, otro:
extracelulares capaces de degradar cidos nucleicos,
ADNasa y ARNasa, provenientes de clulas vegetales, (HC = N - C - N = CH -) n H2N - C - C - NH2
animales y microbianas con liberacin de los mononucle-
tidos, que son fcilmente atacadas por la microflora. O O O
Pi urea-formaldehido oxamida

ARN, ADN mononucletido azcar NH3, aa La aplicacin de estos fertilizantes, as como el empleo
de inhibidores de la nitrificacin, posibilitan la toma gra-
purinas urea
pirimidinas
dual de amonio por los cultivos, evitando su rpida oxida-
bles en agua. El hombre incide en estas transformacio- croorganismos hetertrofos y animales del suelo que ata-
nes por el manejo que realiza de los ecosistemas, por la can distintas molculas orgnicas: urea, aminocidos, pro-
tecnologa de depuracin de efluentes altamente conta- tenas, aminoazcares, cidos nuclecos, sustancias h-
minados y en el caso de suelos, por la aplicacin de ferti- micas. La nitrificacin es la produccin biolgica de nitri-
lizantes y sustancias biocidas, la inoculacin de microor- tos o nitratos a partir de amonio o de combinaciones
ganismos fijadores de N2.
Mineralizacin-inmovilizacin
orgnicas.
La inmovilizacin es el proceso simultneo e inverso a

la mineralizacin, por la cual las formas minerales: amo-
10 Ciclo biolgico del nitrgeno
nio, nitrito o nitrato entran a formar parte de combinacio-
Las formas inorgnicas minerales amonio, nitrito y nitrato nes orgnicas en el citoplasma microbiano (ciclo interno
se producen continuamente en el suelo por procesos de de los elementos).
mineralizacin y son la fuentes de nutrientes para los ve- De los nutrientes fundamentales para el desarrollo vege- y ms de 2% en suelos muy orgnicos. En suelos minera-
getales amonio y nitratos, los nitritos resultan txicos. tal, el nitrgeno constituye uno de los elementos sobre les en clima templado con 2-3% de materia orgnica en el
La mayor parte es soluble en agua y son desplazados Amonificacin cuyas transformaciones en el suelo se han realizado ms horizonte 0-20 cm y 0,12-0,15% de nitrgeno, los valores
con sta a horizontes no alcanzados por las races. La investigaciones en los ltimos aos. Se presenta frecuen- de 2000-3000 kgN/ha aseguran las necesidades de los
fraccin ms retenida es el amonio que puede estar ad- Sustrato: es muy variado, cualquier tipo de molcula or- temente como limitante del crecimiento vegetal ya que es vegetales por muchos aos.
sorbido en forma intercambiable en el complejo arcilla- gnica nitrogenada. removido en cantidades superiores al resto de los nutrien-
humus o fijado dentro de las hojuelas de las arcillas y puede tes y adems su nivel en los suelos es generalmente bajo. Sin embargo el agregado de 100 kgNO3/ha, que corres-
representar una importante fraccin en horizontes inferio- Microflora: est integrada por innumerables especies de Se emplea en la sntesis proteica, de cidos nucleicos, ponde a menos del 1% del N de la capa arable, puede
res y hasta 3,5-8% del N total en la capa arable. bacterias, incluidos los actinomicetes, hongos, protozo- aminoazcares y de otras molculas de importancia en la favorecer el desarrollo vegetal. Este fenmeno se atribu-
os, algas, que poseen numerosas enzimas tanto extrace- clula. Favorece el crecimiento vegetativo, el tamao de ye al hecho de que la mayor parte del nitrgeno no puede
La determinacin de estos iones posee un valor relativo lulares como: proteinasas, peptidasas, quitinasas, lisozi- los granos y su porcentaje de protenas; aumenta la ab- ser asimilado directamente por los vegetales. Gran pro-
ya que son mltiples las vas que pueden seguir en el ma, ARNasa, etc. o intracelulares (asparaginasa, gluta- sorcin del fsforo y potasio. porcin del humus es resistente al ataque microbiano y
suelo: minasa, aminocido deshidrogenasas). solamente una pequea fraccin del N orgnico (1-3%)
volatilizacin del NH La importancia del nitrgeno se reconoce en: se mineraliza cada ao.
3
desnitrificacin de los nitratos Ambiente: como consecuencia de la falta de especifici- la agricultura, incrementando los rendimientos, modifi-
asimilacin por vegetales dad en los sustratos, la amonificacin es uno de los pro- cando la composicin qumica y calidad de los vegetales La estabilidad del nitrgeno del suelo se explica por
inmovilizacin en clulas microbianas cesos menos sensibles a los cambios del ambiente y se el ambiente: los problemas ambientales asociados a la formacin de compuestos con constituyentes org-
fijacin a coloides (amonio) realiza tanto en aerobiosis como en anaerobiosis, bajo un excesos de compuestos nitrogenados son muy conoci- nicos (taninos, fenoles, lignina) o por adsorcin a
lavado, erosin, quemado rango de pH compatible con actividad biolgica, en regio- dos. Las principales fuentes de contaminacin de aguas arcillas.
nes fras, como en el rango termfilo. y suelos son las prcticas agrcolas y las provenientes
Slo las mediciones peridicas pueden proveer informa- de la atmsfera. La industria vierte aguas con elevada La mayor proporcin del nitrgeno del suelo es orgnica
cin sobre la dinmica de las formas del nitrgeno en eco- Cmineralizado/Nmineralizado: en ecosistemas en equi- concentracin de xidos de N o amonaco que contami- (98% del total) y menos del 2% son formas minerales, N2,
sistemas naturales. librio, la relacin C-CO2/Nmineral es aproximadamente na los cursos de agua. Se puede llegar a la eutrificacin N2O, NO, amonio, nitritos y nitratos, de muchas de las
10/1. Con aportes de sustancias orgnicas, esta relacin (alta concentracin de sales, incluidas las nitrogenadas) cuales depende la nutricin vegetal. Esta pequea frac-
La mineralizacin del nitrgeno orgnico comprende se altera de acuerdo a la relacin C/N de las mismas: una de las mismas y a la contaminacin de fuentes de agua cin resulta muy importante porque es empleada como
dos etapas: relacin alta provocar ms liberacin de CO2, si el N% potable con nitratos, muy txicos. nutriente, intermediarios metablicos, donadores o acep-
amonificacin que libera NH a partir de molculas or- de los restos vegetales es alto, la proporcin de amonio y tores de electrones o son productos finales de muchas
3
gnicas nitrato ser mayor. Las transformaciones del nitrgeno en la naturaleza se transformaciones de este elemento.
nitrificacin, proceso por el cual se liberan nitritos o aprecian en la figura 1 y en el cuadro 1 se presentan las
nitratos, iones solubles en agua a partir de combinacio- Amonio: se considera un producto de desecho celular. reservas de nitrgeno en el planeta. La fraccin orgnica
nes minerales u orgnicas. Una vez satisfecha la demanda microbiolgica por el 20-40% se reconoce como aminocidos
nitrgeno, el resto metabolizado es eliminado como Formas de nitrgeno en el suelo 5-10% como aminoazcares
La amonificacin es realizada por un gran nmero de mi- NH3. En la capa arable se encuentran valores entre 0,02 a 0,4%, las bases pricas y pirimdicas no exceden al 1%
vegetales
chel et al, 1998) muestra los cambios en el estado de oxi- Reduccin esqueletos carbonados: requeridos para fijar el NH3
vegetales animales
do-reduccin de este elemento, que pasa de -3 en el amo- que no se detect libre ya que rpidamente pasa a ami-
N org.
fijacin
atmsfera
naco y en la materia orgnica, 0 en el N2 hasta + 5 en los nocidos o uredos. Tambin brindan la energa y poder
N2, N2O nitratos (cambio neto de 8 electrones). Como se aprecia reductor.
desnitrificacin volatilizacin el amonio puede ser convertido en un gran nmero de

nitrificacin productos. NH + NH OH N NO NO NO NO El proceso es patrimonio de algunas bacterias, que fijan
4 2 2 2 2 3
NO3

NO2

NH4
+ en vida libre o se asocian con races, tallos, hojas, en com-
Cuadro 1- Reservas de nitrgeno en binaciones simbiticas o en asociaciones rizosfricas y
inmovilizacin amonificacin
el ecosistema terrestre Oxidacin filosfricas.
-3 -1 0 +1 +2 +3 +5
biomasa
rocas primarias 40-190 x 10
15
ton N2 (97,8%) 2. De naturaleza no biolgica: las aguas de lluvia apor-
materia orgnica fresca Figura 2- Ciclo del nitrgeno: procesos de oxidacin tan nitrgeno combinado como amonio, nitrito, sustancias
15
humus atmsfera 3,9 x 10 ton N2 (2%) y reduccin. Las lneas punteadas indican que N albuminoides, que provienen del suelo o aguas, de la con-
2
rocas sedimentarias 0,8-4 x 10
14
ton N2 (0,2%) puede producirse por otras reacciones adems taminacin en zonas industriales o de la fijacin no biol-
Figura 1- Ciclo biolgico del nitrgeno de la clsica desnitrificacin gica por radiaciones o reacciones fotoqumicas.
12
mar 22 x 10 ton N2
11 Entradas de N a los ecosistemas
La naturaleza del resto del nitrgeno es difcil de determi- 5,4 x 10 ton N2 en sedimentos El hombre ha logrado la reduccin del N2 (proceso
11 1. De naturaleza biolgica: constituye la fijacin biolgi-
nar, integra los heterociclos de las molculas hmicas, 6,5 x 10 ton N-NO3 Haber-Bosch)
ca del nitrgeno (FBN), realizada por protistas inferiores
lentamente degradables. Es probable que el N-aminoci-
suelo 5,5 x 10 ton N en restos vegetales dotados de un complejo equipo enzimtico, la nitrogena-
dos provenga de peptidoglicanos y cidos teicoicos, cons- y animales Fijacin industrial del nitrgeno (FI)
sa, capaz de reducir los triples enlaces de la molcula del
tituyentes de paredes bacterianas y slo se detectan tra- 9
11 x 10 ton de N en vegetales N2 a amonio, el que luego es incorporado en cetocidos
zas en los suelos, pues son rpidamente biodegradados. N2 + 3H2 2NH
9
1 x 10 ton de N inorgnico soluble para formar aminocidos y luego protenas. 3
En la fraccin de los cidos hmicos, un 20-50% del N catlisis inorgnica, 200-300 atm, 1000C
est constituido por aminocidos, un 3-10% de aminoaz-
La ecuacin global no refleja los mecanismos involucra-
cares y una pequea cantidad de bases derivadas de ADN Este proceso se realiza a altas temperaturas y presiones
Cuadro 2- Procesos biolgicos y abiolgicos dos y los intermediarios entre el N2 y las formas orgnicas
y ARN bacteriano, sobre todo. En la fraccin flvica, un en plantas industriales muy sofisticadas que pueden pro-
que involucran al N en las clulas: los aminocidos, uredos, etc.
20-30% es N-aminocido y 8-10% son aminoazcares. ducir unas 1000 toneladas de N por da. Pero resulta un
Fijacin biolgica del nitrgeno (FBN) proceso oneroso para los pases sin reservas petroleras
La fuente primaria de nitrgeno para el suelo la constitu- Naturaleza Denominacin Estimacin cuantitativa
o de gas. El H2 proviene de reservas de gas natural, del
ye la atmsfera, en donde el N2 representa un 79%. En el del proceso
8e- 8H+ petrleo o del metano, que se agotan rpidamente.
cuadro 1 se observa que la mayor reserva de nitrgeno la 6
biolgico fijacin del N 175 x 10 ton N /ao N2 2 NH4+ + H2
constituyen las rocas primarias (98% de todo el N2), le 2 2 Salidas de N del ecosistema
asimilacin N2asa aminocidos
sigue la atmsfera, luego las rocas sedimentarias, los se- inmovilizacin La desnitrificacin es una de las causas ms importan-
dimentos marinos y el reservorio ms pequeo lo consti- mineralizacin tes de prdida de nitrgeno por va biolgica y consiste
Los requisitos para que el proceso ocurra se resumen:
tuye el suelo (sobre cada hectrea de suelo se acumulan desnitrificacin en una respiracin anaerobia de sustratos orgnicos o
nitrogenasa: enzima responsable de la reduccin
80.000 ton de N2), de la litsfera (37 kg/cm2) y de las ro- inorgnicos, con nitrato como aceptor de electrones en la
6 energa: en forma de ATP que el organismo debe gene-
cas sedimentarias (872 kg/cm2). fsico-qumico fijacin industrial 30-35 x 10 ton N/ao cadena respiratoria. El producto final gaseoso, N2, N2O,
lavado
6
15 x 10 ton N/ao
rar a partir de molculas orgnicas (hetertrofos) o de
6 la luz (fototrofos). En asociaciones simbiticas el hospe- se pierde a la atmsfera. El amonio tambin se puede
Como se observa, existe una gran masa de nitrgeno atra- sedimentacin 15 x 10 ton N/ao
6
dante fotosinttico brinda la energa y dems requisitos volatilizar en condiciones de pH y temperaturas altas.
pado en las rocas como N2 no directamente aprovecha- solubilizacin 5 x 10 ton N/ao
6
volatilizacin 5 x 10 ton N/ao minerales: la enzima posee Mo, Fe, se requiere tam-
ble por los vegetales. El cuadro 2 cuantifica procesos que 6 En resumen: este elemento sufre numerosas transforma-
precipitacin 60 x 10 ton N-NO3 /ao bin Mg para el complejo Mg-ATP
involucran a compuestos con nitrgeno y la figura 2 (Fen- ciones de origen biolgico: mineralizacin-inmovilizacin,
poder reductor: los electrones que salen del sustrato y
pasan por los distintos componentes de la N2asa para xido-reduccin, fijacin-volatilizacin. No se encuentran
reducir el triple enlace del N2 por pasos de 2 electrones las etapas de solubilizacin-precipitacin ya que la mayo-
por vez ra de los compuestos nitrogenados minerales son solu-
vegetales
chel et al, 1998) muestra los cambios en el estado de oxi- Reduccin esqueletos carbonados: requeridos para fijar el NH3
vegetales animales
do-reduccin de este elemento, que pasa de -3 en el amo- que no se detect libre ya que rpidamente pasa a ami-
N org.
fijacin
atmsfera
naco y en la materia orgnica, 0 en el N2 hasta + 5 en los nocidos o uredos. Tambin brindan la energa y poder
N2, N2O nitratos (cambio neto de 8 electrones). Como se aprecia reductor.
desnitrificacin volatilizacin el amonio puede ser convertido en un gran nmero de

nitrificacin productos. NH + NH OH N NO NO NO NO El proceso es patrimonio de algunas bacterias, que fijan
4 2 2 2 2 3
NO3

NO2

NH4
+ en vida libre o se asocian con races, tallos, hojas, en com-
Cuadro 1- Reservas de nitrgeno en binaciones simbiticas o en asociaciones rizosfricas y
inmovilizacin amonificacin
el ecosistema terrestre Oxidacin filosfricas.
-3 -1 0 +1 +2 +3 +5
biomasa
rocas primarias 40-190 x 10
15
ton N2 (97,8%) 2. De naturaleza no biolgica: las aguas de lluvia apor-
materia orgnica fresca Figura 2- Ciclo del nitrgeno: procesos de oxidacin tan nitrgeno combinado como amonio, nitrito, sustancias
15
humus atmsfera 3,9 x 10 ton N2 (2%) y reduccin. Las lneas punteadas indican que N albuminoides, que provienen del suelo o aguas, de la con-
2
rocas sedimentarias 0,8-4 x 10
14
ton N2 (0,2%) puede producirse por otras reacciones adems taminacin en zonas industriales o de la fijacin no biol-
Figura 1- Ciclo biolgico del nitrgeno de la clsica desnitrificacin gica por radiaciones o reacciones fotoqumicas.
12
mar 22 x 10 ton N2
11 Entradas de N a los ecosistemas
La naturaleza del resto del nitrgeno es difcil de determi- 5,4 x 10 ton N2 en sedimentos El hombre ha logrado la reduccin del N2 (proceso
11 1. De naturaleza biolgica: constituye la fijacin biolgi-
nar, integra los heterociclos de las molculas hmicas, 6,5 x 10 ton N-NO3 Haber-Bosch)
ca del nitrgeno (FBN), realizada por protistas inferiores
lentamente degradables. Es probable que el N-aminoci-
suelo 5,5 x 10 ton N en restos vegetales dotados de un complejo equipo enzimtico, la nitrogena-
dos provenga de peptidoglicanos y cidos teicoicos, cons- y animales Fijacin industrial del nitrgeno (FI)
sa, capaz de reducir los triples enlaces de la molcula del
tituyentes de paredes bacterianas y slo se detectan tra- 9
11 x 10 ton de N en vegetales N2 a amonio, el que luego es incorporado en cetocidos
zas en los suelos, pues son rpidamente biodegradados. N2 + 3H2 2NH
9
1 x 10 ton de N inorgnico soluble para formar aminocidos y luego protenas. 3
En la fraccin de los cidos hmicos, un 20-50% del N catlisis inorgnica, 200-300 atm, 1000C
est constituido por aminocidos, un 3-10% de aminoaz-
La ecuacin global no refleja los mecanismos involucra-
cares y una pequea cantidad de bases derivadas de ADN Este proceso se realiza a altas temperaturas y presiones
Cuadro 2- Procesos biolgicos y abiolgicos dos y los intermediarios entre el N2 y las formas orgnicas
y ARN bacteriano, sobre todo. En la fraccin flvica, un en plantas industriales muy sofisticadas que pueden pro-
que involucran al N en las clulas: los aminocidos, uredos, etc.
20-30% es N-aminocido y 8-10% son aminoazcares. ducir unas 1000 toneladas de N por da. Pero resulta un
Fijacin biolgica del nitrgeno (FBN) proceso oneroso para los pases sin reservas petroleras
La fuente primaria de nitrgeno para el suelo la constitu- Naturaleza Denominacin Estimacin cuantitativa
o de gas. El H2 proviene de reservas de gas natural, del
ye la atmsfera, en donde el N2 representa un 79%. En el del proceso
8e- 8H+ petrleo o del metano, que se agotan rpidamente.
cuadro 1 se observa que la mayor reserva de nitrgeno la 6
biolgico fijacin del N 175 x 10 ton N /ao N2 2 NH4+ + H2
constituyen las rocas primarias (98% de todo el N2), le 2 2 Salidas de N del ecosistema
asimilacin N2asa aminocidos
sigue la atmsfera, luego las rocas sedimentarias, los se- inmovilizacin La desnitrificacin es una de las causas ms importan-
dimentos marinos y el reservorio ms pequeo lo consti- mineralizacin tes de prdida de nitrgeno por va biolgica y consiste
Los requisitos para que el proceso ocurra se resumen:
tuye el suelo (sobre cada hectrea de suelo se acumulan desnitrificacin en una respiracin anaerobia de sustratos orgnicos o
nitrogenasa: enzima responsable de la reduccin
80.000 ton de N2), de la litsfera (37 kg/cm2) y de las ro- inorgnicos, con nitrato como aceptor de electrones en la
6 energa: en forma de ATP que el organismo debe gene-
cas sedimentarias (872 kg/cm2). fsico-qumico fijacin industrial 30-35 x 10 ton N/ao cadena respiratoria. El producto final gaseoso, N2, N2O,
lavado
6
15 x 10 ton N/ao
rar a partir de molculas orgnicas (hetertrofos) o de
6 la luz (fototrofos). En asociaciones simbiticas el hospe- se pierde a la atmsfera. El amonio tambin se puede
Como se observa, existe una gran masa de nitrgeno atra- sedimentacin 15 x 10 ton N/ao
6
dante fotosinttico brinda la energa y dems requisitos volatilizar en condiciones de pH y temperaturas altas.
pado en las rocas como N2 no directamente aprovecha- solubilizacin 5 x 10 ton N/ao
6
volatilizacin 5 x 10 ton N/ao minerales: la enzima posee Mo, Fe, se requiere tam-
ble por los vegetales. El cuadro 2 cuantifica procesos que 6 En resumen: este elemento sufre numerosas transforma-
precipitacin 60 x 10 ton N-NO3 /ao bin Mg para el complejo Mg-ATP
involucran a compuestos con nitrgeno y la figura 2 (Fen- ciones de origen biolgico: mineralizacin-inmovilizacin,
poder reductor: los electrones que salen del sustrato y
pasan por los distintos componentes de la N2asa para xido-reduccin, fijacin-volatilizacin. No se encuentran
reducir el triple enlace del N2 por pasos de 2 electrones las etapas de solubilizacin-precipitacin ya que la mayo-
por vez ra de los compuestos nitrogenados minerales son solu-
bles en agua. El hombre incide en estas transformacio- croorganismos hetertrofos y animales del suelo que ata-
nes por el manejo que realiza de los ecosistemas, por la can distintas molculas orgnicas: urea, aminocidos, pro-
tecnologa de depuracin de efluentes altamente conta- tenas, aminoazcares, cidos nuclecos, sustancias h-
minados y en el caso de suelos, por la aplicacin de ferti- micas. La nitrificacin es la produccin biolgica de nitri-
lizantes y sustancias biocidas, la inoculacin de microor- tos o nitratos a partir de amonio o de combinaciones
ganismos fijadores de N2.
Mineralizacin-inmovilizacin
orgnicas.
La inmovilizacin es el proceso simultneo e inverso a

la mineralizacin, por la cual las formas minerales: amo-
10 Ciclo biolgico del nitrgeno
nio, nitrito o nitrato entran a formar parte de combinacio-
Las formas inorgnicas minerales amonio, nitrito y nitrato nes orgnicas en el citoplasma microbiano (ciclo interno
se producen continuamente en el suelo por procesos de de los elementos).
mineralizacin y son la fuentes de nutrientes para los ve- De los nutrientes fundamentales para el desarrollo vege- y ms de 2% en suelos muy orgnicos. En suelos minera-
getales amonio y nitratos, los nitritos resultan txicos. tal, el nitrgeno constituye uno de los elementos sobre les en clima templado con 2-3% de materia orgnica en el
La mayor parte es soluble en agua y son desplazados Amonificacin cuyas transformaciones en el suelo se han realizado ms horizonte 0-20 cm y 0,12-0,15% de nitrgeno, los valores
con sta a horizontes no alcanzados por las races. La investigaciones en los ltimos aos. Se presenta frecuen- de 2000-3000 kgN/ha aseguran las necesidades de los
fraccin ms retenida es el amonio que puede estar ad- Sustrato: es muy variado, cualquier tipo de molcula or- temente como limitante del crecimiento vegetal ya que es vegetales por muchos aos.
sorbido en forma intercambiable en el complejo arcilla- gnica nitrogenada. removido en cantidades superiores al resto de los nutrien-
humus o fijado dentro de las hojuelas de las arcillas y puede tes y adems su nivel en los suelos es generalmente bajo. Sin embargo el agregado de 100 kgNO3/ha, que corres-
representar una importante fraccin en horizontes inferio- Microflora: est integrada por innumerables especies de Se emplea en la sntesis proteica, de cidos nucleicos, ponde a menos del 1% del N de la capa arable, puede
res y hasta 3,5-8% del N total en la capa arable. bacterias, incluidos los actinomicetes, hongos, protozo- aminoazcares y de otras molculas de importancia en la favorecer el desarrollo vegetal. Este fenmeno se atribu-
os, algas, que poseen numerosas enzimas tanto extrace- clula. Favorece el crecimiento vegetativo, el tamao de ye al hecho de que la mayor parte del nitrgeno no puede
La determinacin de estos iones posee un valor relativo lulares como: proteinasas, peptidasas, quitinasas, lisozi- los granos y su porcentaje de protenas; aumenta la ab- ser asimilado directamente por los vegetales. Gran pro-
ya que son mltiples las vas que pueden seguir en el ma, ARNasa, etc. o intracelulares (asparaginasa, gluta- sorcin del fsforo y potasio. porcin del humus es resistente al ataque microbiano y
suelo: minasa, aminocido deshidrogenasas). solamente una pequea fraccin del N orgnico (1-3%)
volatilizacin del NH La importancia del nitrgeno se reconoce en: se mineraliza cada ao.
3
desnitrificacin de los nitratos Ambiente: como consecuencia de la falta de especifici- la agricultura, incrementando los rendimientos, modifi-
asimilacin por vegetales dad en los sustratos, la amonificacin es uno de los pro- cando la composicin qumica y calidad de los vegetales La estabilidad del nitrgeno del suelo se explica por
inmovilizacin en clulas microbianas cesos menos sensibles a los cambios del ambiente y se el ambiente: los problemas ambientales asociados a la formacin de compuestos con constituyentes org-
fijacin a coloides (amonio) realiza tanto en aerobiosis como en anaerobiosis, bajo un excesos de compuestos nitrogenados son muy conoci- nicos (taninos, fenoles, lignina) o por adsorcin a
lavado, erosin, quemado rango de pH compatible con actividad biolgica, en regio- dos. Las principales fuentes de contaminacin de aguas arcillas.
nes fras, como en el rango termfilo. y suelos son las prcticas agrcolas y las provenientes
Slo las mediciones peridicas pueden proveer informa- de la atmsfera. La industria vierte aguas con elevada La mayor proporcin del nitrgeno del suelo es orgnica
cin sobre la dinmica de las formas del nitrgeno en eco- Cmineralizado/Nmineralizado: en ecosistemas en equi- concentracin de xidos de N o amonaco que contami- (98% del total) y menos del 2% son formas minerales, N2,
sistemas naturales. librio, la relacin C-CO2/Nmineral es aproximadamente na los cursos de agua. Se puede llegar a la eutrificacin N2O, NO, amonio, nitritos y nitratos, de muchas de las
10/1. Con aportes de sustancias orgnicas, esta relacin (alta concentracin de sales, incluidas las nitrogenadas) cuales depende la nutricin vegetal. Esta pequea frac-
La mineralizacin del nitrgeno orgnico comprende se altera de acuerdo a la relacin C/N de las mismas: una de las mismas y a la contaminacin de fuentes de agua cin resulta muy importante porque es empleada como
dos etapas: relacin alta provocar ms liberacin de CO2, si el N% potable con nitratos, muy txicos. nutriente, intermediarios metablicos, donadores o acep-
amonificacin que libera NH a partir de molculas or- de los restos vegetales es alto, la proporcin de amonio y tores de electrones o son productos finales de muchas
3
gnicas nitrato ser mayor. Las transformaciones del nitrgeno en la naturaleza se transformaciones de este elemento.
nitrificacin, proceso por el cual se liberan nitritos o aprecian en la figura 1 y en el cuadro 1 se presentan las
nitratos, iones solubles en agua a partir de combinacio- Amonio: se considera un producto de desecho celular. reservas de nitrgeno en el planeta. La fraccin orgnica
nes minerales u orgnicas. Una vez satisfecha la demanda microbiolgica por el 20-40% se reconoce como aminocidos
nitrgeno, el resto metabolizado es eliminado como Formas de nitrgeno en el suelo 5-10% como aminoazcares
La amonificacin es realizada por un gran nmero de mi- NH3. En la capa arable se encuentran valores entre 0,02 a 0,4%, las bases pricas y pirimdicas no exceden al 1%
Bibliografa Preguntas de repaso Energa: la desaminacin no provee de energa al micro- Se liberan fosfatos por accin de fosfatasas vegetales o
organismo, pero la misma puede obtenerse del catabolis- microbianas. Las bases pricas o pirimdicas y el azcar
Allison, F. E. Soil organic matter and its role in crop 1)Defina la primera etapa del ciclo del carbono, la que mo del esqueleto carbonado de la molcula: protena, resultante son empleados por una variada microflora apa-
production. 1973, Elsevier Science Publishing, asegura la sntesis de materia orgnica y los microor- cidos hmicos, etc. reciendo en el medio amonio, aminocidos, cidos org-
New York. ganismos que participan. nicos, urea, dependiendo de las condiciones y de los or-
Dommergues, Y., Mangenot, F. Ecologie microbienne du 2)Por qu el CO2 y el CH4 producen efecto invernadero? Evaluacin: La evolucin del amonio en suelos y aguas, ganismos dominantes. Acidos orgnicos y alcoholes acom-
sols., 1970, Masson & Cie. Pars. 3)Describa algn mtodo de evaluar la actividad minerali- enriquecidos o no con sustancias orgnicas nitrogenadas, paan a aminas, amidas, CO2 y agua, en anaerobiosis.
Frenchel, T., King, G. M. & Blackburn, T. H. Bacterial zante de un suelo. se determina en el campo o en el laboratorio. Como el
Biogeochemistry. The Ecophysiology of Mineral 4)Cules son los principales constituyentes de los resi- amonio puede seguir distintas vas en la naturaleza lo que Otros sustratos: urea, cianamida y fertilizantes de
Cycling, 1998, Academic Press, New York. duos vegetales y cmo difieren en la facilidad de degra- evaluamos es la amonificacin neta, o sea la diferencia amonificacin progresiva
Frioni, L. Procesos microbianos. 1999, Fundacin dacin por la microflora del suelo? entre el amonio producido y el que sigui otras vas en el La urea se encuentra frecuentemente en los ecosistemas
de la Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argenti- 5)Cmo distingue esta degradacin de la del humus? suelo. El empleo de compuestos con N15 permite evaluar naturales (fertilizantes, excreciones de animales o de la
na. 6)Explique la aplicacin de dos mtodos para evaluar la amonificacin real. hidrlisis de los cidos nucleicos). Su degradacin es muy
Stevenson, F. J. 1994 Humus chemistry: Genesis, degradacin de un compuesto orgnico en el suelo. rpida y la microflora ureoltica es muy numerosa: com-
composition, reactions. 2nd. Ed. John Wiley and 7)Qu vas pueden seguir los hidrocarburos aromticos Amonificacin de aminocidos y protenas prende aerobios y anaerobios facultativos, cocos y baci-
Sons, New York. en el suelo? Las protenas constituyen un buen sustrato para la micro- los que soportan pH elevados resultantes de la liberacin
Stevenson, F. J. & M. A. Cole Cycles of Soils: carbon, 8)Formacin y consumo de metano. Consecuencias para flora, a la que brindan la mayora de los elementos para la de amonaco:
nitrogen, phosphorus, sulphur, micronutrients, el ambiente sntesis de macromolculas: C, H, O, N, S. Son atacadas
1999, Wiley & Sons, New York. 9)Concepto de humificacin: como se determina la contri- por enzimas extracelulares segn el siguiente esquema. NH2 NH2
Sylvia, D. M., J. J. Fuhrmann, P. G. Hartel, D. A. bucin de sustancias precursoras?
aerobiosis:
Zuberer Principles and Applications of Soil 10) Por qu resulta difcil estudiar la degradacin del humus? NH3, CO2, agua, C= O + H2O COO 2NH3 + CO2
Microbiology, 1998, Prentice Hall, New jersey. 11) Analice el efecto de la incorporacin al suelo de: SO4=

i) abonos verdes y ii) pajas de cereales. protena peptona pptido aminocido
NH2 NH4

anaerobiosis: NH3,
CO2, aminas, cidos La cianamida clcica es otro fertilizante empleado comn-
orgnicos, indol mente. Por hidrlisis no biolgica se forma urea, la que es
mineralizada por la poblacin ureoltica:
Los aminocidos son degradados rpidamente en sue-
los y aguas. Se encuentran libres en pequea proporcin, CaCN2 + 2H2O H2CN2 + Ca(OH)2
producto de la actividad microbiana sobre protenas, o son + ureasa
excretados por las races. La actividad es mayor en ca- H2O CO(NH2)2 2NH3 + CO2
pas superficiales, en las ms profundas la adsorcin a
coloides puede ser importante y la nitrificacin menor. A los efectos de retardar esta hidrlisis y permitir que los
cultivos dispongan del nitrgeno a medida que lo requie-
Amonificacin de cidos nuclicos ren, se emplean complejos a base de urea; la urea-
Numerosos microorganismos del suelo poseen enzimas formaldehido es uno de ellos, la oxamida, otro:
extracelulares capaces de degradar cidos nucleicos,
ADNasa y ARNasa, provenientes de clulas vegetales, (HC = N - C - N = CH -) n H2N - C - C - NH2
animales y microbianas con liberacin de los mononucle-
tidos, que son fcilmente atacadas por la microflora. O O O
Pi urea-formaldehido oxamida

ARN, ADN mononucletido azcar NH3, aa La aplicacin de estos fertilizantes, as como el empleo
de inhibidores de la nitrificacin, posibilitan la toma gra-
purinas urea
pirimidinas
dual de amonio por los cultivos, evitando su rpida oxida-
cin a nitratos, muy mviles en suelos donde el rgimen en una estacin de crecimiento se mineraliza entre 1 y dos reservorios: rpidamente degradable y resistente. dad de materia orgnica aplicada, tipo de abono orgnico
hdrico es intenso. El amonio es adsorbido en forma inter- 5% del N total; pero al agregar al suelo una protena, ami- Ejemplo de estas predicciones en los TRM: empleado, duracin de la experiencia.
cambiable en el complejo coloidal del suelo, disminuyen- noazcar u otras formas de nitrgeno orgnico, stas des-
do su lixiviacin y resultan fertilizantes ms seguros que aparecen muy rpidamente. Diversas hiptesis tratan de material vegetal descomponible, vida media 0,16 aos A modo de resumen se presentan las figuras 13 y 14. La
los ntricos. explicar esta estabilidad (Dommergues, Mangenot, 1970). biomasa microbiana, vida media 1,69 aos figura 13 muestra las tasas de descomposicin de dife-
material vegetal resistente, vida media 2,31 aos rentes materiales orgnicos en el suelo y en la figura 14
Ecologa Formacin de complejos entre protenas y fraccio- MO estabilizada fsicamente, vida media 49-50 aos se esquematiza la cintica de esta degradacin. Se verifi-
Como hemos visto este es un proceso muy poco espec- nes orgnicas del suelo, como lignina, compuestos MO estabilizada qumicamente, vida media 1.980 aos ca que la fraccin activa del residuo, representada princi-
fico, realizado por gran nmero de microorganismos he- fenlicos o sustancias del tipo del humus palmente por azcares, protenas, amidas y celulosa es
tertrofos adaptados a las ms variadas condiciones eco- Complexacin con minerales arcillosos: la adsorcin Una aproximacin similar ha sido empleada para simular descompuesta en menos de un ao, en tanto que otras
lgicas. externa al complejo de intercambio del suelo (ms fir- la dinmica de la materia orgnica en pasturas naturales fracciones resisten la degradacin.
memente si en la protena dominan las cargas electro- y en suelos tropicales, con sub-modelos para transforma-
La amonificacin ocurre en todas aquellas condiciones positivas) o la inclusin dentro de las hojuelas, posibili- ciones del N, P y S.
* molculas recalcitrantes
compatibles con la vida (que aseguran que el agua se tan un retardo en la biodegradacin. Esta hiptesis ex-
encuentre en estado lquido). plica tambin la inhibicin de enzimas extracelulares Las limitaciones sealadas a estos modelos incluyen: 100
glucosa
Toxicidad del ambiente: la vegetacin o el metabolis-
% descomposicin
protenas
Temperatura: como con todas las reacciones biolgicas, mo microbiano producen sustancias inhibidoras cuya los componentes lbiles estn en estado de continuo 80
restos de leguminosas
una elevacin de temperatura estimula el proceso. El p- concentracin aumenta con la concentracin hidroge- cambio y su medida en un momento dado provee de un restos cereales
timo del amplio grupo de amonificantes se ubica en el ran- ninica del medio y la anaerobiosis: cumarinas, tani- ndice relativo de disponibilidad de nutrientes bajo un 60
go termfilo. nos, resinas, contribuyen a estabilizar la materia org- conjunto de condiciones estircol
lignina
nica en suelos forestales no todas las fracciones (pools) pueden medirse experi-
40
pH: puede llevarse a cabo desde pH muy bajos (3,5-4,0) mentalmente madera
a superiores a 9,0. Una fuerte acidez retarda el proceso y La liberacin se realiza gradualmente a medida que la en condiciones de inmovilizacin neta, la biomasa fun-
20 cido hmico*
son sobre todo las bacterias anaerobias y los hongos los vegetacin las requiere, evitando prdidas importantes por ciona como reservorio de nutrientes en detrimento de la
activos en esas condiciones. A pH superiores dominan lavado o desnitrificacin. Pero en algunos ecosistemas nutricin vegetal 0 2 4 8 12 28 semanas
los actinomicetes y algunas algas que pueden emplear este bloqueo puede ser negativo para la nutricin de las el concento de reservorios y de modelos basados en
Figura 13- Velocidad de degradacin de restos orgnicos
fuentes de nitrgeno orgnicas. plantas, como ocurre en horizontes superficiales (Ao) de ellos no coincidirn con la realidad fsica, qumica y bio- en el suelo
formaciones forestales. lgica
Cultivos vegetales: ejercen un doble efecto, por un lado
proveen restos orgnicos nitrogenados por descamacin Sin embargo, los avances logrados en mtodos compu-
de races, exudados, percolados a travs de las hojas y Nitrificacin tacionales y en las tcnicas analticas para la determina-
follaje, estimulan la amonificacin real o bruta, pero tam- cin de diferentes fracciones de la materia orgnica, ha-
bin absorbe a los iones amonio: la amonificacin neta se La nitrificacin se define como la conversin biolgica cen que estos modelos se vuelvan herramientas prcti- azcares
tasa de degradacin
ve as inhibida. del nitrgeno desde un estado reducido (NH4+, N-orgnicas que economizan tiempo y numerosos experimentos almidn protenas celulosa lignina
co) a otro ms oxidado (NO2, NO3), a partir de compues- de laboratorio y campo.
En resumen: el proceso se realiza en amplias condicio- tos orgnicos o inorgnicos, por una microflora auto y menos de 1 ao
nes ambientales, con innumerables sustratos y la micro- hetertrofa. En resumen: aumentar y/o mantener el nivel de materia
flora responsable incluye prcticamente a todos los mi- orgnica de un suelo es un objetivo prioritario en todo 6-8 aos
croorganismos hetertros. La actividad sera mxima en Es un proceso biolgico conocido desde hace mucho tiem- manejo agrcola. La aplicacin de abonos orgnicos (res- ms de 100 aos
aerobiosis, temperaturas en el rango termfilo, neutrofilia po que se realiza en el suelo, en ambientes marinos, abo- tos de cosechas, subproductos industriales) contribuye a
y humedades medias nos, y en los procesos de depuracin de aguas servidas. evitar la prdida de humus en suelos sometidos a intensa
Ya en la poca napolenica se produca el nitro de Chile explotacin. tiempo
Estabilidad de compuestos nitrogenados orgnicos en pilas de suelo, con abonos orgnicos y carbonato de
Numerosos investigadores han remarcado la estabilidad calcio. Pasteur postul la naturaleza microbiana del pro- Los principales factores a tener en cuenta para elevar el Figura 14- Cintica de la degradacin de restos vegetales
de la fraccin nitrogenada orgnica del suelo. En efecto, ceso y hacia 1890 Winogradsky aisl a los microorganis- contenido de materia orgnica de los suelos son: canti- en el suelo
Las tcnicas respiromtricas son muy tiles en el estudio aluminio refuerza el efecto estableciendo enlaces ms mos responsables. Confirm la naturaleza biolgica ca- Nitrificantes auttrofos
de la mineralizacin del humus. estrechos entre los coloides orgnicos y minerales. lentando una columna de suelo o tratndola con clorofor- Son bacterias muy relacionadas pertenecientes a la fa-
mo: el proceso cesaba y los nitratos volvan a formarse al milia Nitrobacteriaceae, gram negativas, que no forman
Se cuenta con poca informacin sobre la descomposicin La tasa anual de descomposicin de la materia orgnica reinocular este sistema con suspensin de suelo frtil. esporas, bacilos, cocos o espirilos, en general mviles por
de los cidos hmicos en la naturaleza. Intervienen po- es del orden de 1,8% en suelos pesados y de 2,2% en flagelos polares.
blaciones complejas con especies que atacan sustancias livianos. La nitrificacin afecta a:
aromticas, reuniendo en su conjunto al equipo enzimti- Los cultivos, ya que constituye un proceso fundamen- Auttrofos obligados, muchos compuestos orgnicos les
co necesario para degradar a las sustancias hmicas. tal para la nutricin vegetal, los nitratos son fcilmente resultan txicos, por alteraciones producidas en la esteri-
Modelos de simulacin absorbidos, en menor grado el amonio y los nitritos re- lizacin en autoclave. Fuentes de carbono: del CO2, bi-
Las bacterias son activas sobre todo atacando las cade- sultan txicos. carbonatos y carbonatos y de energa: de la oxidacin de
nas laterales alifticas. Los actinomicetes pueden adems Un importante objetivo en estudios de biodegracin es la Al ambiente, pues una intensa nitrificacin resulta mu- sales amoniacales o nitrosas.
degradar molculas aromticas provocando decoloracin organizacin de datos experimentales en modelos de si- chas veces perjudicial para el hombre. Los iones nitrito
del medio. mulacin a partir de los cuales se pueden efectuar predic- y nitrato son solubles y por lo tanto mviles con el agua El cuadro 3 resume las caractersticas de los 4 gneros
ciones en relacin a los ciclos de los nutrientes (C, N, P, que puede llevarlos lejos de la zona de absorcin radi- de bacterias oxidantes de amonio y de los 3 oxidantes del
Los hongos son activos degradadores de molculas h- S), al almacenamiento de materia orgnica y al impacto cal. El amonio, al ser fijado en el complejo de intercam- nitrito. Las especies ms representativas son Nitroso-
micas. Entre los productos de la degradacin de los cide prcticas de manejo de residuos en la calidad del am- bio, resulta menos mvil. La polucin de las aguas por monas europea y Nitrobacter winogradsky. Los nitrifican-
dos hmicos se han detectado residuos de la degrada- biente y en la productividad del suelo. Un paso importante los nitratos resulta un problema en los pases que em- tes autotrficos secundarios, es decir, el resto de los que
cin de la lignina bastante como cidos vanllico y sirngi- es la ubicacin de la materia orgnica y de sus nutrientes plean grandes dosis de fertilizantes. Los nitratos se re- figuran en el cuadro 3 aparecen en general en bajo nme-
co. En suelos donde la lignina est ausente, como los en compartimentos o pools, con distintos tiempos de reci- ducen a nitritos en la sangre, unindose a la hemoglo- ro y presentan rangos ms estrechos de temperatura y
antrticos cubiertos de helechos, no se encontraron estos clamiento o tiempos de residencia media (TRM) (Steven- bina que se convierte en metahemoglobina, molcula pH para su desarrollo. Otra importante diferencia la cons-
productos. Otras sustancias que aparecen en la degrada- son y Cole, 1999). que no funciona en la transferencia del O2. La enferme- tituye la habilidad para crecer heterotrficamente de algu-
cin, como flavonoides, pueden derivar de sntesis micro- dad es conocida como metahemoglobinemia (enfer- nas especies del segundo grupo. Nitrobacter agilis puede
biana o de la vegetacin. La materia orgnica ha sido fraccionada en: medad de los chicos azules). Los estndares para con- crecer con materia orgnica y es estimulado por extracto
sumo humano son inferiores a 10 mg/L de N-NO3 para de levadura. Nitrobacter winogradsky posee mayor poten-
Ecologa lbil, o activa que se degrada en pocas semanas o el agua potable. cial para crecer heterotrficamente que Nitrococcus y
Carbono: fuentes de carbono fcilmente degradables meses, formada por mantillos, fraccin liviana, la bio- Nitrospina. Piruvato y aminocidos estimulan el crecimien-
(0,5-2%) estimulan el crecimiento microbiano favorecien- masa microbiana, fauna muerta y sus residuos y sus- Nitrificacin auttrofa to de Nitrosomonas europea.
do la degradacin del humus en el laboratorio. Para otras tancias no hmicas unidas a minerales. Se usa como La nitrificacin auttrofa puede dividirse en dos pasos, cada
especies la celulosa es ms eficiente. El efecto sobre la fuente rpida de nutrientes para el desarrollo vegetal y uno realizado por un grupo particular de organismos: Velocidad de crecimiento: comparada con la de la ma-
humificacin es el mismo que analizamos en la degrada- la actividad microbiana y es muy importante para man- yora de las bacterias heterotrficas, la vc de las bacterias
I) Nitritacin: NH4+ + 1,5 O2 NO2 + 2H + H2O G = 84 cal/mol
+
cin de otros biopolmeros: el aumento microbiano provo- tener la productividad del suelo bajo agricultura susten- nitrificantes es baja. Tiempos de generacin de 8 horas
ca agotamiento de nutrientes y la poblacin induce el equi- table (manejo de los residuos, mnimo laboreo y escasa II) Nitratacin: NO2 + 0,5 O2 NO3

G = 17, 8 cal/mol han sido informados en medio de cultivo. Se piensa que
po enzimtico para degradar molculas ms complejas. fertilizacin). Esta fraccin est relacionada al aporte en la naturaleza se sobrepasan las 20-40 horas. El desa-
de restos y es afectada por los factores que inciden en Son procesos metablicos generadores de energa rrollo en medio de cultivo se acelera con sales de bicarbo-
Nitrgeno: el de las cadenas laterales es asimilado por los la actividad microbiana. (ATP): respiraciones aerobias con sustratos inorg- nato solubles o de lcali para contrarrestar la cada del
microorganismos aunque en menor grado que las formas estable, resistente a la descomposicin y que persiste nicos (amonio y/o nitrito). Los microorganismos son qui- pH. El rendimiento celular es tambin bajo (0,15 kg bio-
inorgnicas u orgnicas simples del suelo. Otras fuentes en el suelo por pocos aos o aun dcadas o ms tiem- miolitoauttrofos que aprovechan la energa y las coen- masa/kg N-NH4+ oxidado para la nitritacin y de 0,02kg de
nitrogenadas ejercen efecto variable segn las especies. po. Est integrada por el humus, funciona como reser- zimas reducidas en la cadena respiratoria para sus ne- biomasa/kg N-NO2 oxidado para la nitratacin).
vorio de nutrientes y es importante en el balance a lar- cesidades plsticas, sobre todo para reducir el CO2 a
Calcio: los humatos clcicos son ms fcilmente degra- go plazo del carbono en el suelo. material celular. Eficiencias bioqumicas (N inorgnico oxidado/C-CO2
dados in vitro que los de sodio (efecto tampn favorable asimilado) de 14-70/1 para Nitrosomonas y de 76-135/1
para la actividad enzimtica). Muchos modelos se han elaborado a partir de 5 comparti- Por los rendimientos energticos se aprecia que se pue- para Nitrobacter (gran capacidad sinttica, la mayora no
mientos que incluyen: la biomasa microbiana, dos formas de originar cuatro veces ms biomasa por la oxidacin de requieren factores de crecimiento). Como vimos, los oxi-
Arcillas: ejercen efecto protector: la oxidacin de los cide materia orgnica estabilizada (en forma fsica o qumi- la misma cantidad de N cuando sta es realizada por el dantes del amonio obtienen ms energa de la reaccin y
dos hmicos es ms lenta con illita y montmorillonita. El ca) y el componente de residuos vegetales, dividido en grupo I. En la naturaleza, en general, las densidades para deben metabolizar menos nitrgeno por unidad de carbo-
ambos grupos no difieren tanto. no asimilado.
Cuadro 3- Bacterias nitrificantes auttrofas La relacin ms favorable para la formacin de humus Ocurrir mxima humificacin cuando los procesos ae-
estable parece ubicarse en la vecindad de 20/1 (los man- robios y anaerobios estn correctamente balanceados.
Gnero Morfologa ( G+C) Crecimiento Habitat tillos mejoradores, ricos en nitrgeno que se descompo- Si la anaerobiosis es permanente, la humificacin es
nen rpidamente). prcticamente nula y se conduce a la formacin de tur-
Oxidantes del amonio
bas. El proceso parece tener el ptimo en microaerofi-
Nitrosomonas Bacilos rectos, 1-2 47,4 - 51 5 - 40 aguas frescas Es necesario tambin tener en cuenta la relacin entre lia o en condiciones de alternancia de perodos de
flagelos, o inmviles los constituyentes lbiles y los estables, un predominio de aerobiosis y anaerobiosis.
Nitrosospira Espirilos, flagelos 54,1 25 - 30C suelo compuestos solubles estimulan una rpida mineralizacin,
perotricos o inmviles y altos contenidos de lignina facilitan la humificacin. Actividad del hombre: el laboreo disminuye el nivel de
Nitrosococcus Cocos en pares o 56,5 - 51 2 - 30C suelo materia orgnica al romper los agregados y exponer la
ttradas, mviles con pH 6,0 - 8,2 Los abonos verdes, ricos en nitrgeno y constituyentes materia orgnica a la biodegradacin, pero el efecto de
1 flagelo o peritricos solubles y pobres en lignina, son rpidamente metaboliza- mezclado favorece la calidad. Alternancias de cultivo y
o inmviles dos, enriqueciendo poco en carbono al suelo y activando la barbecho favorecen la humificacin. Los suelos cultiva-
Oxidantes del nitrito mineralizacin de la materia orgnica nativa. Los cultivos dos presentan un humus ms evolucionado, pero menos
anuales enriquecen menos al suelo en carbono que los abundante, que puede descender por debajo de niveles
Nitrobacter Bacilos cortos, mviles 60,7 - 61,7 5 - 40C suelo, mar,
perennes. Un monocultivo de maz posee menos poder de crticos. Enterrar restos vegetales activa su mineralizacin
con flagelo polar pH 5,7-10.2 aguas frescas
humificacin al compararlo con gramneas forrajeras. y una aplicacin ms profunda favorece la humificacin
o inmviles (condiciones micraeroflicas).
Nitrospira Bacilos largos, inmviles 57,7 20 - 30C mar Las pajas de cereales con alto contenido de lignina favo-
Nitrococcus Cocos con citomembranas 57,7 20 - 30C mar recen la humificacin.
muy ramificadas pH 7-8 Deshumificacin
El clima influye en la productividad (cantidad y calidad
del material vegetal) y directamente en la actividad biol- Se encuentran gran nmero de dificultades en la investi-
Aislamiento: resulta difcil y es frecuente la presencia de Mecanismo de la nitrificacin auttrofa gica. La degradacin del N del humus disminuye 2-3 ve- gacin de biodegradacin del humus: los microorganis-
contaminantes muy relacionados morfolgicamente como La oxidacin del amonio a nitrato implica la transferencia ces por cada 10C de disminucin de la temperatura. En mos pueden crecer con cidos hmicos pero emplean
Pseudomonas, Hyphomicrobium, Mycobactrium, Flavo- de 8 electrones (-3 a + 5). La conversin de amonio a regiones fras aumenta considerablemente el nivel de hu- solamente los compuestos asociados, como los amino-
bacterium. Su lento crecimiento dificulta la eliminacin de nitrito ocurre en por lo menos dos pasos: mus. El congelamiento y descongelamiento disminuyen cidos, dejando la estructura aromtica intacta, hecho que
estos contaminantes. la estabilidad de las molculas hmicas. Por el contrario, sumado a la falta de datos sobre la estructura exacta de
NH4+ + 0,5 O2 NH2OH + H
+
G = -0,7 kcal/mol
un congelamiento prolongado aumenta la estabilidad. La la molcula (si es que tienen una estructura bsica co-
El aislamiento puede realizarse en forma: NH2OH + O2
NO2 + H2O + H
+
G = -83,3 kcal/mol
desecacin favorece la polimerizacin de sustancias pre- mn), tornan las comparaciones muy difciles.
hmicas (maduracin). Suelos permanentemente hme-
Directa: por agotamiento en cajas de Petri con slico- Como se observa, la disminucin de la energa libre en la
dos presentan formas poco condensadas y mviles (ci- Adems, las zonas claras alrededor de las colonias de-
gel nutritivo: solucin salina, sales de amonio o nitritos, oxidacin del amonio es pequea comparada con la de dos flvicos). sarrolladas en medios con cidos hmicos no indican
carbonato de calcio. Las microcolonias se detectan por oxidacin de la hidroxilamina. El proceso se estudi en
necesariamente la degradacin de los mismos; muchas
el halo transparente por disolucin del carbonato por clulas intactas y en extractos libres de clulas. Se aisl
Suelos: el contenido y calidad de las arcillas facilita la veces, ellos son precipitados alrededor de las clulas.
los cidos producidos. una oxidasa de la hidroxilamina relacionada al citocromo humificacin. Un pH alto favorece la actividad minerali-
Por enriquecimiento previo en el mismo medio selec- c. Se sugiere que la hidroxilamina es convertida en un
zante y la humificacin por bacterias. El calcio facilita la A pesar de estos inconvenientes parece correcto afirmar
tivo lquido y varios pasajes en el mismo medio fresco, intermediario que se descompone espontneamente en
floculacin y maduracin de las molculas prehmicas. que ciertos hongos, sobre todo Ascomycetes y Basidio-
que facilita el aislamiento en medio slido. xido nitroso, no oxidado por N. europea. mycetes, pueden degradar cidos hmicos en el labora-
La humedad ms favorable para la humificacin se sita torio por reduccin enzimtica de grupos aromticos car-
La actividad es estimulada por burbujeo o agitacin de los En la nitratacin participa una nitrito oxidasa, inhibida por
en la vecindad del 60% de la capacidad de campo. La boxilo a aldehido y luego hasta alcoholes. Los sistemas
cultivos lquidos ya que son aerobios estrictos. El pH pti- cianuro e involucra el sistema citocromos: saturacin no favorece al proceso; los suelos saturados enzimticos son adaptativos. En filtrados de cultivos de
mo es ligeramente alcalino, pero pueden tolerar rangos son pobres en humus. Un insuficiente drenaje conduce a hongos creciendo sobre cidos hmicos se detectaron
cit c Fe+3 + NO2 cit c Fe+2 + NO2 (radical libre) cit a1 Fe+2 + NO2 +
ms amplios de pH en el suelo. Son mesfilos, la tempe- NO2 + 0,5 O2 cit a1 Fe+3 + NO3 humus bruto o a turba. alcohol saliclico y salicilaldehido.
ratura ptima se sita entre los 24 a 30C. globalmente: NO2 cit c cit a1 O2
hidratos de carbono sustancias aminadas lignina residuos no descompuestos Rol de los microorganismos El poder reductor (NADH) se genera en estas bacterias Sustratos: pueden ser amonio, nitrofenoles, oximas,
de restos vegetales 1-3% 10-30% Se seala la importancia de los microorganismos y de la fau- por transporte inverso de electrones en la cadena respira- amidas, hidroxilamina, nitropropionato. Algunos de ellos
50-60% de la MS na en los distintos procesos que conducen a la humificacin: toria, con consumo de ATP ya que el potencial redox de tienen carcter de factores de crecimiento, sobre todo los

oxidacin los pares amonio-nitrito y nitrito-nitrato no son suficiente- cidos hidroxmicos, involucrados en la toma de hierro, por
celulosa descomposicin apertura: mineralizacin de materiales originales, mente negativos para reducir el NAD+ (captulo 3). formacin de quelatos (siderforos). Otro grupo tiene ca-
hemicelulosa microbiana p-OH
aminocidos benzaldehido, ncleos formacin de subunidades estructurales y su rcter biocida como la actidiona, cido asperglico (lucha
c. vanillico del humus
aceites
ceras
cidos aa posterior condensacin. Nitrificacin hetertrofa biolgica) y otros poseen carcter mutagnico como nitrito,
azcares amonio
alcoholes
Los nitrificantes hetertrofos constituyen un grupo me- hidroxilamina y derivados nitrosos (Myrold, 1998).

sntesis microbiana
Especies de Penicillum, Aspergillus y Actimomyces en nos especializado que requieren medios con sustratos
medios con azcares acumulan sustancias oscuras del orgnicos con amonio o nitritos y pueden acumular nitri- El cuadro 4 resume datos sobre la nitrificacin hetertro-

compuestos con N compuestos hmicos tipo del humus, con pptidos y polifenoles. Los tipos ms tos o nitratos cuando el crecimiento ces. Los organis- fa, comparndola con la auttrofa. Como se aprecia, la
polisacridos
quinona melanina
heteropolicondensados maduros se formaran a partir de estas molculas por ac- mos son bacterias, incluidos los actinomicetes, y hongos. velocidad del proceso auttrofo es 103-104 veces mayor
cin microbiana y procesos qumicos y fisicoqumicos. Aspergillus flavus es reconocido en la oxidacin del amo- que el hetertrofo y la capacidad de formacin de produc-
Figura 12- Esquema del proceso de humificacin
nio hasta nitrato, a partir de nitropropionato con un equipo tos finales es del orden de 102 a 103 veces superior.
La condensacin es estimulada por oxidasas producidas enzimtico especializado, con nitrito intermediario:
Microbiologa de la humificacin por microorganismos del suelo o aguas o del tracto diges-
peroxidasa
El rol de los nitrificantes hetertrofos en la provisin de
Los microorganismos participan en la formacin de motivo de la fauna. La acumulacin de pigmentos marrones nitratos para los vegetales es controvertido. Si bien su efi-
3 nitropropionato NO2 + CO2 + H2O
lculas hmicas, catalizando distintas reacciones bioqu- oscuros es evidenciada en bacterias como Pseudomonas ciencia es baja, su densidad puede ser alta en ciertas con-
micas. Algunos autores discuten si su rol es directo o sp. en medio con extracto de levadura, glucosa y tirosina. Energa: su principal fuente proviene de sustratos orgni- diciones, acumulndose cantidades importantes de nitr-
indirecto y una de las preguntas es cmo se concilia la Sustancias fenlicas y quinonas se transforman en pol- cos pero la energa liberada es escasa y no satisface los geno mineral (suelos de bosque). Pueden adems, ac-
rpida mineralizacin de las sustancias vegetales con meros tipo humus en las mismas clulas bacterianas por requerimientos plsticos de los microorganismos (no est tuar cuando los auttrofos no pueden sobrevivir: altas tem-
su humificacin. accin de fenoloxidasas. El espectro IR de las mismas acoplada a procesos de biosntesis). peraturas, bajo nivel de O2, pH cidos.
es similar a los de los cidos hmicos sintticos y se frac-
Hiptesis: cionaron en cidos hmicos y flvicos. Cuadro 4- Nitrificacin auttrofa y hetertrofa
se postula la humificacin de los restos que quedan en
microporos donde no llegan las bacterias, pero s sus Tanto la biosntesis como la biodegradacin de molculas Organismo sustrato producto final velocidad concentracin
enzimas, aunque no se puede olvidar la adsorcin que del tipo de las del humus ocurren simultneamente por gN/da/g biomasa gN/mL
pueden sufrir las enzimas en su camino hacia el sustrato. accin de una variada micropoblacin que pone en juego Arthrobacter spp
+
NH succinato hidroxilamina, 12 0,2
las molculas son rpidamente policondensadas o poli- un complejo y no bien identificado equipo enzimtico. 4
nitrito 375
merizadas a partir de radicales libres formados por la nitrato 250
accin enzimtica a altas concentraciones de sustan- Factores que afectan a la humificacin NH
+
y N-orgnico nitrito - 1,6
cias monomricas, cuando los organismos capaces de Entre los principales factores que afectan el proceso cita- 4
nitrato - 14,1
atacarlos estn ausentes. Se puede seguir la humifica- remos: vegetacin, actividad biolgica del suelo, clima, +
NH y acetato hidroxilamina 4.500 15,0
cin de hojas al microscopio. tipos de suelos, actividad del hombre. 4
nitrito 9.000 18,0
se sostiene que la humificacin comienza en los restos
nitrato 660 2,0
inmediatamente luego de la muerte celular, cuando las La vegetacin: aporta materias primas y es fuente de c. hidroxmico 600 6,0
enzimas autolticas estn activas, pero la destruccin energa y nutrientes para los microorganismos. El cultivo 1-nitroetanol 300 10,0
an no ha comenzado (condensacin de aminocidos afecta el microclima del suelo, la estructura por accin de Pseudomonas acetaldoxina nitrito 2.000 150,0
de la hidrlisis proteca con quinonas y polifenoles). las races y la atmsfera del suelo, por respiracin de r- aeroginosa
ganos subterrneos. Hansenula marakii nitroetano nitrito 1.680 2,8
Las sustancias pardas aparecen en las clulas antes que nitropropano
los tejidos lignificados presenten alteraciones visibles. C/N de los restos: relaciones menores de 25/1 estimu- Aspergillus flavus c. 3 nitropropinico 1.400 45,0
Cuando las clulas se descomponen, estas sustancias se lan rpida mineralizacin, limitando el potencial de hu- +
NH y sacarosa nitrato 1.350 75.0
4
liberan al suelo, pudiendo adsorberse a arcillas y prote- mificacin, relaciones altas conducen a acumulacin de Nitrosomonas spp NH +
nitrito 1,3 x 106 2-4 x 10 3
4
gerse del ataque microbiano. humus libre. Nitrobacter NO2- nitrato 5,7 x 10 6 2-4 x 10 3
Ecologa las de las arcillas. A medida que se incrementa el nivel de Los cidos hmicos pardos estn poco polimerizados y El carbono de clulas microbianas contribuye a la frac-
Se analizarn aspectos ecolgicos de la nitrificacin auttro- potasio agregado, disminuye la nitrificacin del amonio fi- dbilmente ligados a la fraccin mineral, los cidos hmi- cin ms simple del humus, los aminocidos.
fa por su importancia cuantitativa y por el hecho de estar ms jado. Los nutrientes que afectan a la amonificacin, como cos grises son muy polimerizados y estn ligados a los
afectada por las condiciones del medio. La gran similitud fi- el nivel y calidad de la materia orgnica, afectan indirecta- himatomelnicos. La figura 12 (Allison, 1973) presenta un esquema de for-
siolgica de las especies actuantes explica en parte la sensi- mente a la nitrificacin. macin de molculas hmicas. En los ltimos 50 aos
bilidad a condiciones del ambiente: el proceso puede no ocu- la humina residuo insoluble en cidos y bases, materia se han realizado numerosos estudios sobre la sntesis
rrir o ser extremadamente lento en suelos anegados, de pH pH: existe alta correlacin entre la nitrificacin y el pH del orgnica muy evolucionada y difcil de separar de la made la fraccin orgnica del suelo. En el laboratorio una
muy bajo, o bajo temperaturas muy altas. Como la amonifi- suelo. En medios cidos, la nitrificacin est inhibida o es teria orgnica fresca: una fraccin es soluble en HCl serie de reacciones condujeron a distintos tipos de hu-
cacin es un proceso menos especfico, en el suelo se acu- muy lenta (debajo de pH 6,0). Mientras que el pH ptimo 5N; el resto se une a arcillas, por lo que se requiere el mus artificial. Los microorganismos se consideran inter-
mular amonio. de Nitrosomonas se ubica en el rango de 7 a 9 y an ms empleo de HF para su extraccin. mediarios en estos procesos; los restos de sus clulas y
alcalino, para Nitrobacter se sita en la neutralidad o lige- sus productos metablicos constituyen etapas en una
Analizaremos el efecto de los principales factores: ramente alcalino. La nitrificacin a bajos pH se explica por: En las sustancias hmicas ms condensadas predomina- serie de reacciones. Los pigmentos microbianos como
Nivel de nutrientes: el sustrato energtico puede ser el ran los ncleos, con iso o heterociclos, como derivados las melaninas son muy estables a la degradacin, son
factor limitante: amonio o nitrito. Nitrosomonas general- cepas adaptadas a pH cidos del benceno, antraceno, furano, piridina, que pueden con- parcialmente solubles en soda y se extraen en la frac-
mente oxida 35 unidades de nitrgeno y Nitrobacter unas el proceso se realiza en microhabitats donde el pH es densarse por puentes alifticos, oxgeno, nitrgeno o por cin humus.
100 unidades de nitrgeno por cada C-CO2 asimilado. neutro a diferencia del resto del suelo. unin directa entre anillos. Estos enlaces le dan a la mo-
La produccin de nitratos es proporcional al amonio dis- lcula gran estabilidad qumica y biolgica. En el suelo los procesos son ms lentos que en el labora-
ponible. El carbono no es una limitante ya que lo toman La poblacin nitrificante auttrofa es mayor en suelos neu- torio, pero las reacciones se aceleran por:
del CO2, carbonatos, bicarbonatos. El nitrito puede acu- tros o ligeramente alcalinos y el encalado favorece el pro- El nitrgeno de las cadenas laterales representa un 30
mularse cuando se inhibe la actividad de los oxidantes ceso en suelos cidos, que presentan una gran fase de 35% del total, es fcilmente hidrolizable y es de origen la gran actividad superficial de las partculas (catlisis
del nitrito, como ocurre luego de aplicar altas dosis de latencia (varios das) en la aparicin de los nitratos (ejem- proteco, el resto de N del humus estara condensado como inorgnica)
urea, amonaco anhidro o sales de amonio, a pH alto. plo de la incidencia favorable del hombre sobre un proce- pirrol, indol,etc. o bien formara puentes entre bencenos y los sinergismos microbianos que posibilitan la forma-
La autoecologa de estos grupos nos explica ya esta inhi- so microbiano). es ms resistente a la degradacin. cin de los mismos productos finales.
bicin (cuadro 5).
La figura 3 esquematiza resultados de la percolacin cclica Precursores del humus y proceso de humifica- La estabilidad del humus es muy grande. En turbas con-
Se observa que el primer paso de la oxidacin es ms de distintas sustancias a travs de una columna de suelo. cin geladas de Alaska se estim la edad de estas molculas
verstil. Condiciones adversas de pH, temperatura o do- Varias hiptesis tratan de explicar los procesos que entre 1.775 +/- 110 y 11.005 +/-350 aos (a 1 m de
sis altas de fertilizantes amoniacales, conducen a la acu- un aminocido, que presenta una fase de latencia en conducen a la formacin de estas macromolculas: profundidad). A los 2 metros esta edad podra llegar a
mulacin de nitritos, txicos para los vegetales y la mayo- la aparicin de los nitratos requerida para la amonifica- 25.300+/-300 aos. En suelos templados esta edad es
ra de los microorganismos. cin previa Las sustancias rpidamente degradables como la ce- menor como consecuencia del mayor reciclamiento de la
la nitrificacin de sales amoniacales presenta un pe- lulosa, hidratos de carbono simples, juegan un impor- materia orgnica.
Cuadro 5- Autoecologa de Nitrosomonas rodo de corta latencia correspondiente a su oxidacin tante rol en la formacin del humus. Luego de 7 das
y Nitrobacter a nitrito en el suelo, un 70-75% del C14 de la glucosa se locali- En resumen, se piensa que el humus es el producto de
los nitritos son inmediatamente oxidados z en fracciones hmicas, mientras que el C14 de ace- neosntesis a partir de compuestos ms o menos solubles
pH Temperatura N- amoniacal tato se distribuy luego de 6-9 horas en la humina, ci- originados en la descomposicin de la materia orgnica fres-
dos flvicos y hmicos, en forma similar al carbono de ca, mediante la combinacin de procesos biolgicos y fsi-
Nitrosomonas tolera pH aun activo tolera altas dosis log N-NO
altos y bajos a bajas mg/litro
3 la paja. co-qumicos, durante un largo perodo de tiempo.
NaNO2
temperatura
3,0
Nitrobacter inhibido a pH: inactivo inhibido a altas NH4Cl aminocido La lignina se reconoce como precursora del humus que La adicin de materia orgnica al suelo puede provocar
dosis
2,0
se condensa con materiales protecos de origen micro- estimulacin de la descomposicin de la materia orgni-
superiores a 9,0 sobre 40 e biano. Su participacin ha sido sealada en numerosos ca nativa. Este fenmeno se refiere como efecto reno-
inferiores a 5,0 inferior a 5C 1,0 trabajos: un 34% de la radioactividad de los cidos hmi- vador (priming effect) y fue observado luego del enri-
cos se origin en la lignina, mientras que slo un 6% lo quecimiento del suelo con materia orgnica simple o res-
Muchos suelos fijan grandes cantidades de amonio en los 5 10 15 20 das
hizo a partir de la celulosa. tos vegetales.
coloides. El potasio, catin que tambin es fijado, interfie-
re en la nitrificacin del amonio atrapado entre las hojue- Figura 3- Nitrificacin de varios sustratos
Humus Los anlisis elementales indican en promedio: Oxgeno: es un requerimiento obligado en el proceso. La ques de conferas, ricos en sustancias fenlicas. La inten-
estructura del suelo tiene gran efecto: la nitrificacin es sa inmovilizacin de formas minerales del nitrgeno por
La materia orgnica fresca desaparece rpidamente en 45-65% en carbono, 30-40% en oxgeno, gran abundan- inversamente proporcional al tamao de los agregados. microorganismos hetertrofos explica tambin la dismi-
ambientes naturales. El siguiente esquema muestra las cia de grupos metoxilo (-OCH3), fenoles (-OH), carboxilo nucin de nitratos en rizosferas. Se evitan as prdidas
posibles vas metablicas en el suelo (figura 11). (-COOH), poco nitrgeno (para algunos autores se trata- Humedad: es otro de los factores que afectan profunda- por lavado o desnitrificacin de los nitratos formados, en
ra de impurezas) y S, P, Fe, etc. mente a la nitrificacin auttrofa ya que regula el nivel de ambientes de baja tensin de O2.
El humus est constituido por mezcla de sustancias amor- oxigenacin del suelo. La formacin de nitratos cesa cuan-
=
fas, que es originado de la fitomasa parcialmente descom- mineralizacin rpida CO2, NH3, SO4 do el nivel de humedad es inferior al punto de marchita- Estacin del ao: el efecto de la estacin est condicio-
restos vegetales
puesta y de la sntesis microbiana. Son molculas elsti- -3
PO4 , Fe
++
miento permanente, mientras que la amonificacin es an nado por la interaccin de numerosos factores como la
N2 atmosfrico
cas, de carcter cido, de alto peso molecular y naturale- activa. La figura 4 presenta la nitrificacin en suelo franco disponibilidad de nutrientes, la temperatura, la humedad,
reorganizacin
za coloidal, de gran superficie interna y externa, origina- estructuras limoso con 500 mg/kg de N-NH4+ como fosfato diamnico la aireacin, etc. No puede predecirse en que pocas del
an organizadas
das por la accin de procesos fsico-qumicos y biolgi- y sometido a diversas tensiones de succin desde 0 ao el nivel de nitratos ser mayor. En general, en la re-
cos a expensas de productos de la degradacin de la sntesis de complejos (saturado) hasta 15 barias e incubado a 21C. En gene- gin templada la produccin de nitratos es ms activa en
hmicos coloidales mineralizacin lenta
materia orgnica. humificacin ral, se podra aceptar la siguiente escala de tensiones de primavera y otoo, ms lenta en verano e invierno. Pero
humedad para una mxima acumulacin de nitrato: las fluctuaciones de temperatura y humedad y las prcti-
Su lenta mineralizacin (1-2% al ao) hace de estas sus- Figura 11- Degradacin y humificacin de restos vegetales cas culturales pueden alterar este comportamiento.
tancias el verdadero reservorio de nutrientes del suelo, 0,1 > 0,33 > 1 > 5 > 15 > 50 > 0 barias
liberndose lentamente los iones minerales aprovecha- Esta composicin elemental se parece a la de la turba, En resumen: la nitrificacin auttrofa es rpida en suelos
bles por los vegetales. pero el origen y la actividad difieren mucho. N-NO

hmedos y aireados, bien drenados y de buena estructu-
3
mg/kg 0,1 ra, lenta en suelos pesados. El ptimo de humedad vara
El contenido y calidad de estas sustancias est en rela- Cuadro 14- Principales efectos del humus en 300 0,33 considerablemente con los suelos, se citan ptimos entre
cin directa con la fertilidad del suelo por sus propiedades el suelo y las plantas 200 1 1/2 y 2/3 de la capacidad de campo (cuadro 6).
y es inclusive empleado en formulaciones comerciales de 5
los llamados bioestimulantes orgnicos (cuadro 14). 100 Cuadro 6- Factores que afectan a la nitrificacin
mejora condiciones fsicas, como agregacin, 15
aireacin, retencin de agua, intercambio calri- 0 en suelos
saturado
Caracterizacin de las sustancias hmicas co y permeabilidad del suelo 0 5 10 15 20 das
La naturaleza de estas sustancias vara con los suelos, el aumenta la superficie espcifica, la CIC o el efecto
Contenido de agua: la estimula hasta un 60% de
clima, la cubierta vegetal, las prcticas agrcolas. La ex- tampn acta como agente de complexacin, que- Figura 4- Nitrificacin a diferentes tensiones CC, luego se limita
traccin del humus sin provocar alteraciones resulta muy de humedad (barias) La fertilizacin con amonio o abonos orgnicos
lacin y retencin de nutrientes y xenobiticos
difcil. Algunos autores emplean solventes de alta densi- ejerce efectos fisiolgicos, como permeabildiad de
la favorecen (alto nivel de NH4)
dad (bromoformo-benceno de densidad 2) para separar membranas, absorcin de nutrientes, actividad en- Temperatura: la temperatura ptima tanto en el suelo Humedad y temperatura: suelos hmedos y fros
la materia orgnica poco transformada y ms liviana, del zimtica y fotosntesis como en medios de cultivo se ubica entre 28 y 36C, aun- limitan el proceso y las prdidas de N se pueden
humus y la fraccin mineral, que decantan. Los compues- ejerce accin protectora y acta como fuente de
que pueden aparecer nitratos por encima de 40C por limitar fertilizando en otoo
tos hmicos se extraen con soluciones alcalinas, aunque nutrientes para los microorganismos accin de cepas adaptadas. Varios autores determinaron Poblacin nitrificante: para oxidar 1 mg N/kg sue-
se corre el riesgo de extraer tambin el humus libre que acta como reservorio de N, P, S, micronutrien- que an a temperaturas tan bajas como 2C la nitrifica- lo/da se necesitan 300.000 organismos. Suelos
4
puede condensarse (neoformacin). Otros solventes em- tes cin puede alcanzar valores considerables si el amonio y con bajo N pueden contener 1.10 nitrificantes/g.
pleados incluyen oxalato de amonio, FNa, pirofosfato de la densidad de microorganismos nitrificantes no son limi- El pH: favorable en el entorno del neutro (micro-
sodio. tantes. ambientes)
Se distinguen varias fracciones:
Por hidrlisis cida se liberan aminocidos, azcares, los cidos flvicos que quedan dispersos o disueltos Efecto rizosfrico: la atmsfera en la vecindad de las El rehumedecimiento de suelos secos estimula la nitrifi-
aminoazcares y una fraccin permanece no hidrolizable, luego de acidificar el extracto alcalino con HCl o H2SO4 races es ms pobre en O2 y ms rica en CO2 que la at- cacin. Se explica este hecho por la accin de enzimas
con ncleos parecidos a los de la lignina, slo degrada- los cidos hmicos, extrables en lcali pero que preci- msfera sobre el suelo, debido a la actividad respiratoria liberadas por clulas muertas en la desecacin, que per-
dos por tratamientos muy drsticos como pirlisis cida o pitan a pH 2,5 y dan una fraccin soluble en etanol de la mayora de los hetertrofos. La nitrificacin, por lo maneceran adsorbidas a la fraccin organo-mineral del
alcalina, fusin alcalina, H2O2 en caliente, etc. los cidos himatomelnicos tanto, ser menor. Se cita tambin la inhibicin de algu- suelo que se sumaran a las presentes en las clulas vi-
nos cultivos sobre este proceso, sobre todo de los bos- vas. La temperatura favorece el proceso.
Inhibidores de la nitrificacin minerales, los que van siendo gradualmente liberados para CO2 + 4H2 CH4 + 2H2O desde un extremo de la cadena por -oxidacin. Pue-
Para disminuir prdidas de nitrgeno por lavado o desni- los vegetales. den acumularse tambin cetonas.
trificacin en suelos sin cubierta vegetal importante o que Los cidos orgnicos simples acumulados en estos am-
sufre frecuentes perodos de anegamiento, se han desa- A las transformaciones cclicas de mineralizacin-inmovi- bientes anaerbicos son empleados tambin por las me- Los hidrocarburos aromticos benceno, tolueno, xileno
rrollado investigaciones tendientes a inhibir la nitrificacin. lizacin que ocurren simultneamente se les agrupa en el tanobacterias. La biosntesis de metano est limitada a y sus derivados son atacados por numerosos microorga-
llamado ciclo interno del nitrgeno, ya que ocurren en un grupo especializado de bacterias anaerobias que ha- nismos del suelo. La ausencia de toxicidad en un ambien-
Es sabido que: el interior de los microorganismos, mientras que las trans- bitan suelos inundados, pantanos, abonos en fermenta- te dado indica que los organismos hetertrofos estn ac-
los herbicidas e insecticidas empleados en dosis nor- formaciones que ocurren con la participacin de los vege- cin, sedimentos marinos y tracto intestinal de animales tuando como agentes desintoxicantes. La evolucin del
males no afectan al proceso tales, la atmsfera, etc. se agrupan en el ciclo externo o superiores. Son difciles de aislar en cultivo puro y la pro- CO2 o la consumicin del O2 verifica estos hechos en
los fungicidas y fumigantes ejercen gran accin como ciclo biogeoqumico. La figura 5 presenta un esquema duccin de CH4 es muy activa en poblaciones mixtas. ensayos de laboratorio.
inhibidores de la nitrificacin, aun en dosis normales de las transformaciones de los nutrientes en ecosistemas Methanobacterium, Methanosarcina y Methanococcus,
otras sustancias son empleadas como el 2 Cl 6 terrestres. son los principales gneros encontrados en el suelo y ac- Una microflora ms especializada descompone molcu-
(tri Cl metil) piridina, conocido comercialmente como tan al final de una cadena trfica (captulo 21). las como fenol, naftaleno, antraceno, con 1, 2 y 3 ani-
N-serve; 2-amino-4 Cl-6 metilpiridina (AM); dicianodia- Mineralizacin bruta o real: es la cantidad total de ni- llos bencnicos. Son sobre todo bacterias tpicas y acti-
mida; tiourea; 2-sulfanilamidotiazol (ST); los tiazoles; trgeno mineral producido. Se puede evaluar tambin Otro hidrocarburo simple encontrado en ecosistemas na- nomicetes. Los organismos filamentosos son importantes
triazinas; isocianatos, etc. El N-serve es uno de los ms la amonificacin y/o nitrificacin bruta. Estos iones no turales es el etileno, liberado por numerosas especies de en la degradacin de constituyentes aromticos deriva-
frecuentemente empleados que inhibe a los auttrofos constituyen productos finales estables y pueden seguir hongos, bacterias esporuladas y actinomicetes. A bajas dos del humus. El O2 es fundamental en los procesos de
pero no a los nitrificantes hetertrofos y se usa mucho mltiples vas en el suelo (cuadro 7) y resulta difcil eva- concentraciones acta como una fitohormona: produce apertura del anillo.
en reas arroceras sometidas a alternancias de secado luar estos procesos si no se emplean elementos mar- elongacin de races y desarrollo de races laterales.
e inundacin. cados (N15). Las primeras etapas del metabolismo comprenden la re-
Mineralizacin neta: se evalan las cantidades pre- Otros hidrocarburos voltiles: etano, propano, propile- mocin de cadenas laterales y la introduccin de grupos -
El inhibidor es degradado con el tiempo y la nitrificacin sentes en el ecosistema en el momento del anlisis que no, son formados en atmsferas anaerobias, a partir de OH. Los grupos metilo se convierten en carboxilo antes
recomienza, con el activo desarrollo del vegetal. El xito resultan de la diferencia entre lo producido (mineraliza- miembros de la microflora del suelo. Los de mayor impor- de la apertura del anillo.
del mtodo est vinculado a la velocidad a la que la mi- cin bruta) y aquellos procesos que se detallan en el tancia son el metano y el etileno.
croflora degrada al inhibidor. cuadro 7. Globalmente, se puede representar el N mi-
neral evaluado como: Hidrocarburos de alto peso molecular Bioslidos y restos animales
Son formados por bacterias, algas y esporas fngicas, o
Ciclo interno del nitrgeno (mineralizacin- N mineral evaluado =N total producido -(Ni + Na + Nv +Nd +Nl + ...) llegan a los ecosistemas naturales con el petrleo, para- La aplicacin residuos animales al suelo es de prctica fre-
inmovilizacin). Biomasa microbiana finas y sus derivados. Los solventes de muchos pestici- cuente y su degradacin est asegurada por la actividad
donde: Ni = inmovilizado; a = lavado; v = volatilizado; das tienen estructura de hidrocarburos y llegan al suelo o biolgica del mismo, pero la acumulacin de grandes canti-
El nitrgeno mineral es asimilado por los microorganis- f = fijado; d= denitrificado; l = lavado aguas donde deben ser degradados. dades de ellos puede generar problemas en relacin a:
mos y pasa a formar parte de combinaciones orgnicas
en las clulas. Como deja de estar por un tiempo disponi- El N mineral disponible para los vegetales en un mo- Los compuestos de cadena aliftica son atacados por exceso de nitrgeno y riesgo de contaminacin de aguas
ble para los vegetales, se dice que ha sido inmovilizado. mento dado depende de la magnitud relativa de proce- una variada micropoblacin muy extendida en los sue- superficiales y subterrneas con nitratos, sobreviven-
Este bloqueo del N mineral es transitorio, ya que las mo- sos simultneos y opuestos: la mineralizacin y la in- los: se informaron densidades de 105/g suelo cuando se cia y transporte de patgenos microbianos
lculas orgnicas son liberadas al ecosistema por proce- movilizacin. La competencia entre vegetales y micro- emplea parafina como sustrato. La velocidad de la de- excesiva cantidad de fsforo que acompaa a muchos
sos de excrecin o a la muerte celular, donde son rpida- organismos por el N mineral es importante cuando s- gradacin est relacionada con la longitud de la cadena abonos y bioslidos (restos industriales y municipales)
mente mineralizadas. tos disponen de abundante sustrato energtico. La ma- y al grado de ramificacin de la molcula. Muchos mi- con riesgo de eutrofizacin de aguas
yor parte es entonces incorporado al ciclo interno (bio- croorganismos degradan hidrocarburos alifticos pero no materiales txicos (metales pesados y sustancias xe-
La biomasa microbiana producida representa una inmo- masa) ya que los microorganismos son activos compe- los pueden usar como fuentes de carbono. Este fen- nobiticas) pueden inhibir la degradacin de los restos
vilizacin temporaria de energa, carbono y elementos tidores de las plantas. meno conocido como cometabolismo implica que las carbonados.
clulas deben metabolizar una segunda fuente orgni-
ca. Los productos de la descomposicin del hidrocarbu- Es necesario regular la incorporacin al suelo de
ro, al no ser asimilados, quedan en el medio: alcoholes, estos restos y/o aconsejar un compostaje previo
aldehidos, cidos grasos. El cido actico se origina (captulo 21).
en las unicelulares, como Gloecapsa, aunque stas pue- Peltigera aphtosa). Son muy estudiados por su contribu- ganismos inmovilizarn el amonio y nitrato surgidos de la
CO descomposicin de los
den fijar N2 en el aire, existiendo una separacin tempo- cin en nitrgeno en suelos muy fros y en bosques tropi- 2
restos vegetales mineralizacin, que conjuntamente con formas minerales
luz
ral entre la liberacin fotosinttica del O2 y la actividad cales, donde especies de Stricta, Leptogium y Collema de S, P, Fe, etc. integrarn las molculas de las nuevas
lpidos hidratos de C protenas lignina
nitrogensica. pueden contribuir con 1 a 8 kg N/ha/ao. clulas.
azcares aminoazcares
Anaerobiosis es posible que tanto los heterocistos Las cianobacterias filamentosas asociadas cambian su rizosfera
compuestos Por algn tiempo no se detectar N mineral en el suelo ya
CO2 inorgnicos
como las clulas vegetativas fijen N2. Las cianobacte- forma filamentosa simple por la de filamentos altamente que la demanda biolgica excede al aporte (domina la
-3
rias fijadoras liberan al medio una fraccin del nitrge- contorneados, las clulas vegetativas se redondean y se PO4 NO3 CO2
inmovilizacin
inmovilizacin neta). Con la fraccin carbonada la situa-
no fijado, como amonio, amidas, pptidos, polippti- dividen escasamente. Los heterocistos aumentan de un = +2 temporaria en cin es diferente, pues ocurren prdidas gaseosas como
SO4 Mg
dos, que pueden representar un 20-30% del nitrgeno 3-5% al 20-60% en asociaciones con prototrofos, mien- CO2 la biomasa CO2, CH4, a partir de respiraciones, fermentaciones, de-
fijado. tras que en asociaciones con hetertrofos, la frecuencia K
+
nutrientes carboxilaciones.
permanece baja. disponibles
Las cianobacterias son responsables del nitrgeno fi- La figura 6 presenta la evolucin de la relacin C/N en
jado en reas marinas, en mayor medida por las hete- Otras asociaciones lavado
residuos pobres en N% a medida que se van degradan-
rocsticas. Las que no poseen estas clulas especiali- En zona tropical se describe una asociacin con una adsorcin do. La C/N disminuye y llega asintticamente a valores
zadas fijan N2 en zonas de bajo nivel de O2, aguas es- gimnosperma, la Cycadaceae, donde especies de Nos- del orden de las de la microflora dominante y del humus
tancadas y eutrofizadas, de importancia en algunos eco- toc forman estructuras parecidas a ndulos en las ra- Figura 5- Descomposicin de restos vegetales y ciclo interno de ese ambiente (10-15/ 1).
sistemas. ces. Aproximadamente un tercio de las 90 especies de los nutrientes en suelo agrcola N% en el
poseen estos ndulos, con aportes de unos 19 kg N/ C/N resto vegetal
Asociaciones con cianobacterias ha/ao en Macrozamia riedlei. Entre las angiospermas Cuadro 7- Procesos biolgicos y abiolgicos con 80/1 1,5
Estos diazotrofos fotosintticos se asocian con hongos, slo se conoce un representante subtropical, Gunne- N mineral 60/1
hepticas, helechos, gimnospermas y angiospermas. ra, que se asocia a Nostoc con heterocistos y que fija 40/1 1,0
+
Lo hacen con los representantes ms primitivos entre N 2 en glndulas de la base de las hojas. El nitrgeno NH4 NO2 NO3 20/1
los vegetales, mientras que Rhizobium y Frankia lo fijado es rpidamente transferido al eucariote, sobre nitrificacin(NO2 ,NO3 )
- -
nitratacin(NO3 )
-
desnitrificacin (N )
10/1
0,5
hacen con vegetales superiores: angiospermas dicoti- todo como amonio. inmovilizacin(N-org) idem idem
2
0 30 60 90 120 das
ledneas. asimilacin(N-org) idem idem
adsorcin a coloides lavado lavado
- +
fijacin a coloides reduccin(N2) idem (NO2 , NH4 ) Figura 6- Cambios en la relacin C/N y en el N% durante la
Azolla-Anabaena Bacterias hetertrofas lavado, menos lavado lavado descomposicin de paja de cebada
Muy estudiada es la simbiosis Azolla-Anabaena. La Azolla erosin idem idem
es un diminuto helecho de agua que se desarrolla en zonas El cuadro 4 presenta los ms importantes gneros de bac- volatilizacin - - El N% de los restos (vegetal y microbiano) aumenta a
tropicales en donde llega a cubrir enormes extensiones de terias hetertrofas fijadoras de nitrgeno. El grupo contie- medida que la degradacin procede, ya que no existen
arrozales inundados. Mide slo 2-3 mm de ancho y alberga ne organismos acuticos o terrestres de organismos ae- Agregado de restos vegetales prdidas importantes de este elemento que se mineraliza
a una cianobacteria del gnero Anabaena en poros ventra- robios, anaerobios y anaerobios facultativos. Las espe- y pasa inmediatamente a molculas orgnicas en las c-
les de los lbulos de las hojas, muy rica en heterocistos. La cies facultativas slo fijan N2 anaerbicamente y los aero- Pajas de cereales lulas de la poblacin que hizo eclosin con el agregado
planta le ofrece una proteccin adicional frente al O2 libera- bios presentan varios grados de sensibilidad frente al ox- Analizaremos los procesos que ocurren cuando se incor- del sustrato orgnico.
do en la fotosntesis propia y la de la planta. La cianobacte- geno. pora al suelo un resto vegetal con bajo nivel de N%, por
ria no crece bien fuera del husped. ejemplo una paja de cereal (C = 40% y N = 0,5%). La Relacin C/N de equilibrio o crtica, la degradacin
Su distribucin es muy variada, aunque slo alcanzan al- relacin C/N es alta, 80/1 y la microflora del suelo degra- de las fracciones carbonadas y nitrogenadas proceden
Esta asociacin ha sido empleada desde la antigedad como tas densidades cuando se renen ciertas condiciones, da este resto con el objeto de obtener subunidades para paralelamente, la demanda iguala a la oferta y en el
biofertilizante (azollizacin) en cultivos anegados, como el sobre todo sustratos carbonados, temperatura, pH, hu- sus macromolculas y energa. La velocidad de degrada- medio aparecen iones amonio y nitrato. Se citan rela-
arroz. En pocas secas el helecho es mineralizado y el nitr- medad. cin y los productos finales dependern de las condicio- ciones crticas de 20-25/1, es decir, ms altas que las
geno fijado se incorpora al suelo (Silver, Schrder, 1984). nes del suelo, clima, dosis, forma de aplicacin (en super- relaciones C/N frecuentes de los suelos.
Los gneros ms conocidos desde hace ms de 50 aos ficie, enterrado, picado, molido). Relaciones ms altas que la crtica favorecen la in-
Lquenes son Azotobacter y Clostridium, aerobio el primero y anae- movilizacin neta.
De las 17.000 especies conocidas, aproximadamente un robio el ltimo. Actualmente son muchos los gneros re- Como el nitrgeno est en baja proporcin, los microor- Relaciones ms bajas favorecen la mineralizacin neta.
8% posee una cianobacteria fijadora: (Peltigera canina, conocidos como activos en el suelo y en la rizosfera.
La naturaleza qumica de las fracciones carbonadas y ni- Cuadro 9- Clculo terico en la degradacin de Los heterocistos son clulas rodeadas de gruesas pa-
trogenadas puede hacer variar esta relacin. As, restos paja de cereal redes y parecen vacas al microscopio de luz. Son en
ricos en lignina, difcilmente degradables, pueden consi- (C=40% y N=0,5%), por cultivos puros de microorganismos general de mayor tamao que las clulas vegetativas y
derarse con relaciones crticas superiores. estn ubicadas a intervalos a lo largo del filamento o
Organismo EficienciaC/N C asim N asim Dficit/exceso pueden presentarse terminalmente. Presentan sistemas
En el cuadro 8 se muestra la relacin C/N tpica de algu- hongos 30-40% 10/1 12-16 1,2-1,6 -0,7, -1,1 membranosos muy desarrollados con invaginaciones.
nos materiales orgnicos (Stevenson y Cole, 1999). (i neta) Poseen abundantes ribosomas y han perdido los grnu-
bacterias
aerobias 10-30 10/1 los estructurales de glicgeno y polifosfato. Estn co-
Cuadro 8- C/N de materiales orgnicos actinomices 15-30 5/1 nectados a clulas adyacentes por un poro en la pared
celular (figura 4).
Material C/N Abonos verdes
Biomasa microbiana 6 - 12 Materiales ricos en N% como los abonos verdes, las legu-
Cuadro 5 - Fijacin de nitrgeno en cianobacterias
Aguas residuales 5 - 14 minosas (2-3% N%), no presentan esta limitante y el ni-
Humus 10 - 12 trgeno mineral puede aparecer en el suelo desde el co-
Abonos animales 9 - 25 mienzo de la degradacin. Estas consideraciones teri- Suborden Familia Gnero
Residuos de leguminosas y abonos verdes 13 - 25 cas basadas en datos de nutricin microbiana resultan
Residuos de cereales y pajas 60 - 80 difciles de aplicar a la poblacin microbiana en ambien- Chroococcales Chroococcaceae Gleocapsa (1)
Residuos de bosques (madera) 150 - 500 tes naturales ya que all la heterogeneidad es enorme, en Figura 4 - Cianobacterias filamentosas heterocisticas
Unicelulares
composts 15 - 20
tipos de organismos, estado fisiolgico y resulta difcil cal-
cular las relaciones C/N y la eficiencia media en la utiliza- Nostocales Nostocaceae Trichodesmiun (1) Segn algunos autores se originan en clulas preexisten-
En el cuadro 9 se efecta un clculo terico, para pre- cin del carbono. Oscillatoriaceae Oscillatoria (1) tes llamadas preheterocistos ubicadas a intervalos regula-
decir cul de los procesos (mineralizacin-inmoviliza- Plectonema (1) res del filamento, de tamao algo mayor que el resto de la
cin) dominar en un suelo cuando el resto de paja es En general se admite que sustratos con ms de 1,8% de Lynbgbya (1) clula y segn las condiciones ambientales pueden formar-
atacado por poblaciones puras, por ejemplo, por bac- Phormidium (1) se los heterocistos. Otros autores opinan que la posicin
N favorecen la mineralizacin neta; niveles entre 1,2 y 1,8%
terias aerobias, actinomicetes, u hongos, cuya C/N pro- Filamentosas sin de ellos est determinada por los ya preexistentes, origi-
representan relaciones C/N entre 20 y 30/1 y contenidos heterosistos
medio y la eficiencia en la asimilacin del carbono, se entre 0,5 y 1,2% N favorecen la inmovilizacin neta. nndose nuevos cuando algunas sustancias, como el amo-
determin: nio fijado en los heterocistos, alcanzan niveles muy bajos.
Nostocaceae Anabaena (12)
Como dato, recordemos que las maderas contienen entre Su desarrollo es inhibido por niveles elevados de nitrgeno
Eficiencia = (C celular formado/C total degradado) x 100 0,1-0,5% de nitrgeno, las pajas de cereales y tallos de maz Anabaenopsis (1) combinado.
entre 0,5 y 1,5% y restos de leguminosas entre 1,5 y 3%. Aulosira (1)
Las poblaciones ms ineficientes en la asimilacin del C Cylindrospermun (4) Fijacin en relacin al O2
son las bacterias anaerobias (liberan cidos, alcoholes, Nostoc (8) Aerobiosis: las cianobacterias filamentosas heterocsticas
gases). A partir de estos datos se pueden calcular las uni- Nodularia (1) (Anabaena, Nostoc) pueden fijar N2 en estas condiciones
inmovilizacin neta
dades de C asimiladas, las de N necesarias y si el resto del N (mgN/g vegetal Filamentosas ya que los heterocistos poseen activo fotosistema I, pue-
vegetal provee de este nitrgeno o si, por el contrario, las original con heterosistos den fotofosforilar, pero no liberan O2 ni reducen el CO2.
clulas deben tomarlo tambin del ambiente. 12 Poseen alta actividad reductora, recibiendo los compues-
maz Rivulariaceae Calothrix (5)
tos carbonados, el ATP y el poder reductor de clulas adya-
Scytonemataceae Scytonema (2)
Ejemplo: los hongos al atacar 100 partes de la paja asi- 10 centes a las cuales les brindan el nitrgeno combinado re-
Tolypothrix
milarn 30-40% del carbono que representa 40 partes en avena sultante de la fijacin. El sistema membranoso ofrece una
100 partes del resto (C= 40%). O sea que incorporarn 12 8 alfalfa proteccin estructural subcelular y la fotorrespiracin activa
Stigonematales Stigonemataceae Fischerella (2)
a 16 unidades de carbono al citoplasma, lo que requerir aserrn
Hapalosiphon (1) remueve excesos de O2 (proteccin fisiolgica).
1,2 a 1,6 partes de nitrgeno, si su C/N es en promedio 6
Stigonema (1)
10/1. La paja provee slo de 0,5 partes, de modo que ha- Westielipsis (1) Microaerofilia, las cianobacterias filamentosas sin he-
2 4 8 16 32 semanas
br dficit y el resto debe tomarse del ambiente. Domina- Mastigociadaceae Mastigociadus (1) terocistos como Plectonema pueden fijar N2, pero no en
r la inmovilizacin (i neta) del N y el proceso ser lento. Figura 7- N inmovilizado en el suelo en la descomposicin condiciones de intensa oxigenacin. Lo mismo ocurre
Como ejercicio complete el resto del cuadro. de algunos restos vegetales
Diazotrofos en vida libre Pueden desarrollarse en la oscuridad heterotrficamente, La figura 7 muestra los cambios de inmovilizacin neta en Factores que afectan el ciclo de mineralizacin-
pero entonces son incapaces de fijar N2. Aunque no han materiales descompuestos con distinto contenido de N%. inmovilizacin del nitrgeno
Por sus relaciones con el O2 los diazotrofos son (cuadro 4): sido estudiadas todas las especies de bacterias fotosintti- Para acelerar el proceso es frecuente fertilizar con nitr- Estado del resto orgnico: el material fresco y picado
cas por su capacidad de fijar nitrgeno, existe consenso de geno. favorece su mineralizacin mientras que el secado pro-
aerobios estrictas, como la familia Azotobacteriaceae que la mayora de ellas estn dotadas de esta capacidad. voca un aumento en la C/N de la fraccin soluble en
anaerobios facultativos, como los gneros Bacillus, Como consecuencia de la predominancia de la inmovili- agua.
Klebsiella, Enterobacter Pocas referencias se encuentran sobre su rol en ecosis- zacin sobre la mineralizacin en la primera etapa, el N Temperatura, las bajas temperaturas no afectan de la
microaeroflicos como Azospirillum, Thiobacillus, Myco-
temas agrcolas, en parte porque muchos trabajos eva- mineral desciende (inmovilizacin neta). Luego y a medi- misma manera las distintas etapas de la mineralizacin.
bacterium, Acetobacter. Estos dos ltimos grupos se lan la fijacin en suelos y aguas sin detallar las especies da que la C/N disminuye y se llega a la relacin crtica, el As, vimos que las bajas temperaturas afectan ms a la
comportan como aerobios cuando crecen con N combi- responsables. Es reconocido que las bacterias fotosint- N mineral comienza a aumentar, pudiendo incluso supe- nitrificacin que a la amonificacin, que puede ocurrir
nado ticas contribuyen a la depuracin de suelos y aguas al rar el nivel inicial (etapa de mineralizacin neta). Se acos- en suelos a 5C y se duplica a 10C.
anaerobios estrictos, que no crecen ni fijan en aero-
consumir los sulfuros y aminas que perjudican a los culti- tumbra a medir el tiempo de renovacin o reciclaje del La humedad: conjuntamente con la temperatura cons-
biosis, con representantes de los gneros Clostridium, vos, liberando adems uracilo y prolina, empleados por N mineral, o sea el tiempo que transcurre entre la inmovi- tituye una de las variables que ms afecta al ciclo de
Desulfovibrio, Desulfotomaculum y productores de me- muchos cultivos, entre ellos el arroz. lizacin y la aparicin de N mineral nuevamente en el suelo. mineralizacin-inmovilizacin del nitrgeno. La mayo-
tano. Este perodo es variable, se citan datos del orden de una ra de los estudios analizan aisladamente el efecto de
jornada hasta varios aos. estos factores sobre la nitrificacin y pocos sobre el pro-
La mayora de las bacterias son hetertrofas, slo ha sido ceso global de mineralizacin. La nitrificacin es muy
descrito Thiobacillus ferrooxidans, como fijador de N2, qui- Con los dems elementos minerales ocurren procesos si- lenta a humedades cercanas al punto de marchitamien-
mioauttrofo que crece en condiciones muy cidas. El resto milares, pero las relaciones crticas C/P, C/S son ms al- to donde se acumula amonio o nitrito. El ptimo se sita
de los diazotrofos son bacterias fotosintticas, con repre- tas que para el nitrgeno. La figura 8 esquematiza los flu- alrededor de 0,1 baria de tensin. El amonio se acumu-
sentantes de las cianobacterias y de bacterias sulfurosas jos de N, S, P en sustratos orgnicos ricos y pobres en la tanto en sequedad como en inundacin, mientras que
y no sulfurosas anaerobias. nutrientes, en la descomposicin y su disponibilidad para a valores intermedios la produccin de nitratos supera
los cultivos. a la de amonio.
Figura 3- Bacterias fotosintticas: izquierda: Rhodospirillum, En suelos secos, la menor actividad biolgica trae apa-
Diazotrofos fotosintticos derecha: Chlorobium La inmovilizacin de nutrientes en la biomasa microbiana rejada menor inmovilizacin, al igual que en suelos
puede alcanzar valores elevados, del orden de 100 kg de sumergidos.
Bacterias fotosintticas anaerobias N, 80 kg de P, 70kg de K y 11 kg de Ca por ha. Como la Fertilizacin nitrogenada: la inmovilizacin es mayor
Se ha determinado capacidad de reduccin del CO2 y del Cianobacterias biomasa es reciclada cerca de 10 veces ms rpido que en suelo cultivado dado que ms materiales energti-
N2 en muchos representantes de este grupo de procario- Este grupo posee todas las caractersticas subcelulares de la fraccin orgnica muerta, gran parte de estos nutrien- cos (races, exudados) y microorganismos, estn pre-
tas anaerobios, la mayora en ambientes acuticos o ba- los procariotas, excepto el tipo de fotosntesis, que es la de tes son liberados en su reciclamiento. sentes. Los primeros estudios con N15 ya mostraron que
rros y sedimentos ricos en sulfuros. Pertenecen al orden las algas y vegetales. Son capaces de desarrollarse en me- gran proporcin del fertilizante permaneca en el suelo
Rhodospirillales (captulo 3) y pueden realizar metabolis- dio mineral y obtienen su C y N de la fijacin fotosinttica del inmovilizado en combinaciones orgnicas. Es necesa-
mo fotolito o fotoorganotrofo. Las bacterias purpreas no CO2 y N2. Con la obtencin de cultivos libres de contaminan- O CO rio tener en cuenta la adsorcin del amonio a los coloi-
2 2
sulfurosas (Rhodospirillaceae) fotoasimilan sustancias enzimas enzimas
tes bacterianos (muchas veces los responsables de la fija- extracelulares biomasa extracelulares des del suelo; en muchos ensayos todo el amonio no
orgnicas simples, muchas son incapaces de crecer con cin) por radiacin U.V. o agregado de antibiticos o coloran- microbiana recuperado se atribuye a la inmovilizacin. El amonio
sulfuros como nico donador de electrones, y si lo em- sustrato compuestos compuestos sustrato
tes en los medios de cultivo, el nmero de especies fijadoras rico en N, P, S simples simples pobre en N,P,S es ms inmovilizado que el nitrato ya que es fuente pre-
plean no se acumula S en la clula. Rhodospirillum ru- se increment rpidamente: de aproximadamente 165 gne- C/N<20/1 C/N>30/1 ferencial de N para los microorganismos.
brum es una especie en la que se efectuaron numerosos ros, en 8 familias y 3 rdenes, se encontr fijacin en 46 C/P<200/1 m neta i m i neta C/P>300/1
pH: la inmovilizacin del nitrgeno es escasa en suelos
estudios sobre su nitrogenasa (figura 3). C/S<200/1 C/S>400/1
gneros, de 7 familias y 3 subrdenes (cuadro 5). disminuda cidos, en donde los procesos de mineralizacin se de-
aumentada disponibilidad de
nutrientes en el tienen en amonio. El encalado del suelo favorece la
Las bacterias sulfurosas purpreas (Chromatiaceae) y las Las cianobacterias presentan tres tipos de clulas: ve- +
ecosistema
-3 ++
mineralizacin en detrimento de los procesos de reor-
(NH4 , NO3 , PO4 , Fe )
sulfurosas verdes (Chlorobiaceae) crecen con S= o S getativas, esporas o acinetos y heterocistos. Una ganizacin, aunque es necesario tener en cuenta la in-
como nicos donadores externos de electrones. El S en clula vegetativa puede diferenciarse en esporas y he- teraccin de este factor con otros como la humedad, la
la clula puede ser luego oxidado a sulfatos. La fotosnte- terocistos y todas poseen la informacin gentica para Figura 8- Flujo de nutrientes a travs de la biomasa temperatura, etc. Los pH neutros favorecen ambas eta-
sis de estos organismos es anoxignica (no liberan O2) y la sntesis de la nitrogenasa, que como vimos es muy microbiana pas del ciclo de mineralizacin-inmovilizacin.
la fijacin del N2 se realiza en anaerobiosis a la luz. sensible al O2.
La vegetacin: es frecuente observar nivel de nitratos Las mayores prdidas ocurren en suelos livianos, areno- Cuadro 4 - Diazotrofos y sus asociaciones
inferior en la rizosfera en relacin al suelo sin cultivos. sos. Conviene mezclar los fertilizantes que liberan amo-
Los procesos de inmovilizacin son all estimulados por nio con los primeros 5cm del suelo. Heterotrofos
accin de la poblacin hetertrofa aumentada. Pero los Vida libre Asociaciones con nodulos
s/nodulos
nitratos tambin disminuyen por aumento de la activi- Reacciones que involucran a los nitritos

dad desnitrificante y la presencia de sustancias inhibi- aerobios Azotobacter leguminosas

doras de los nitrificantes excretadas por ciertos cultivos 3 HNO2 2 NO + HNO3 + H2O Azotococcus Rhizobium lupini
o producidas en la incubacin del suelo. Azomonas R. leguminosarum bv viciae,trifolii,phaseoli
Ciertos elementos, Cu y Mn, en suelos cidos, reaccio- Beijerinckia Sinorhizobium meliloti

En resumen: la degradacin de los restos vegetales en nan con los nitritos, liberando NO (xido nitrico), que es Derxia rizosfera S. fredii
S. terangae

el suelo es un fenmeno complejo y la dominancia de las bastante estable y puede pasar a la atmsfera:
etapas de mineralizacin o de inmovilizacin del nitrge- NO + O2 NO2 N2O4, o ser absorbido por el suelo. anaerobios Klebsiella Bradyrhizobium japonicum
no depende de muchos factores, entre ellos, de la com- Los xidos de nitrgeno reaccionan con el agua del aire, facultativos Bacillus B. elkani
(aerobios Enterobacter Azorhizobium cualinodans

plejidad qumica de los sustratos, de las interacciones de a pH inferior a 5,5:
cuando no Escherichia filosfera
la temperatura y la humedad, del tipo de suelo, del pH, de N2O4 + H2O + 0,5 O2 2 HNO3 Estas causas de
fijan N2) Propionibacterium

la incorporacin simultnea de fertilizantes nitrogenados prdidas de N no son importantes, ya que poco nitrito pue- no leguminosas
y otros nutrientes. de formarse a pH cido. Frankia, con:
HNO2 + RNH2 N2 + H2O + ROH (reaccin de Van Alnus, Casuarina

En el campo puede ocurrir inmovilizacin que afecta el Slyke). Tambin poco importante pues requiere acidez y microaerfilos Mycobacterium con animales Eleagnus, Myrica
desarrollo de cultivos posteriores, pero la magnitud y la aerobiosis. (aerobios Azospirillum Dryas, Ceanothus
duracin de la misma son menores que las evaluadas en HNO2 + NH3 NO2NH4 2 H2O + N 2 Reaccin cuando no Aquaspirillum
ensayos de laboratorio e invernculo, y el nitrgeno pue- importante a pH alcalino. fijan N2) Rhizobium
de ser aprovechado por los cultivos desde las primeras Frankia
etapas de la descomposicin. Lavado, como vimos, parte del amonio, los nitritos y ni-
Clostridium

tratos son solubles en agua y pueden por lo tanto ser lle-
vados a horizontes fuera del contacto con las races. anaerobios Desulfovibrio
Prdidas de nitrgeno estrictos
Erosin, constituye en ciertas zonas una causa importante Autotrofos
En esta seccin analizaremos las causas ms importan- de prdida de nitrgeno para el suelo, por voladura de sue- Vida libre Asociaciones con nodulos
tes por las cuales las distintas formas qumicas del nitr- los superficiales (erosin elica) o por anegamiento con el s/nodulos
geno son volatilizadas o convertidas en formas no apro- consiguiente lavado y/o desnitrificacin (erosin hdrica).

vechables por los vegetales y la mayora de los microor- cianobacterias Anabaena lquenes
ganismos. aerobias Nostoc

Biolgicas Calothrix Azolla Cycadacea
Abiolgicas
microaeroflicas Plectonema

Volatilizacin del NH3, puede ocurrir a partir del agrega- Los nitratos sufren una serie de procesos microbianos en
Lyngbya Gunnera
do de abonos a base de urea, amonio anhidro, sales amo- ambientes naturales (aguas, suelos, barros) conocidos ge-
Oscillatoria
niacales, pero tambin luego de la incorporacin de res- nricamente con el nombre de reduccin de los nitratos. Spirulina

tos vegetales. Las prdidas son particularmente impor- Briofitas
tantes en las siguientes situaciones: Pueden dividirse en dos grandes categoras: hepticas
pH superior a 8,0 (suelos calcreos o aquellos cuyo pH a. Reduccin asimilativa, realizada por microorganis-

Rhodospirillum
local se eleva por amonificacin intensa) mos y vegetales y que conduce a la formacin de amo- bacterias Rhodopseudomonas
temperatura elevada y desecacin nio empleado en la biosntesis de constituyentes nitro- fotoauttrofas Chromatium
aplicacin de fertilizantes en la superficie del suelo genados de la clula. No implica prdida de N para el Chlorobium
suelos de baja capacidad de intercambio catinico. ecosistema, sino una inmovilizacin transitoria hasta
quimioauttrofas Thiobacullus ferooxidans
se oxida este amonio a N2 el que se analiza en espectr- N2 + 8H+ + 8- 2NH3 + H2 C2H2 + 2H+ + 2e- C2H4 que se mineralicen las clulas o los productos nitroge- En suelos cidos de pH 5,0 o menor, los gases nitrogena-
metro de masa, que separa en un campo magntico los nados excretados. dos pueden producirse qumicamente, con NO a partir de
distintos istopos segn su masa (30, 29 ,28). El mtodo Los resultados se expresan en etileno formado o aceti- nitritos. En la mayora de los suelos, la desnitrificacin
posee escasa utilidad en condiciones naturales y limita- leno reducido sin efectuar extrapolaciones a nitrgeno b. Reduccin desasimilativa o respiracin de los ni- respiratoria constituye la principal causa de prdidas de
ciones en condiciones controladas. fijado. El mtodo se usa para comparar gran cantidad tratos: muchos microorganismos en anaerobiosis total o nitratos. En la llamada desnitrificacin no respiratoria
de muestras (cepas, suelos, plantas noduladas) pero no parcial sustituyen el O2 por los nitratos como aceptor de (Mayrold, 1998), los organismos producen xido nitroso
15
uso de fertilizantes o sustratos enriquecidos con N : hay que olvidar que la prueba ms concluyente de ca- electrones en respiraciones anaerobias, generando ATP en condiciones aerobias, pero no obtienen energa de este
I. tcnica de la dilucin isotpica, se acepta como el ms pacidad fijadora la constituye la incorporacin de to- y poder reductor. De acuerdo al organismo y a las condi- proceso que es realizado por numerosas bacterias, hon-
til para medir la FBN mos de N15. ciones del medio, los productos finales pueden ser: gos y algas. Con excepcin de pocos gneros, (Lactoba-
II. tcnica que usa el valor A (proporcin del N15 que la NH4+, NO, N2O, NO2, N2 y an otras formas del nitrgeno, cillus, Fusarium), la fraccin de nitratos convertida, es en
planta toma del fertilizante) que sern excretados por las clulas al medio. Otros pue- general menos de 25%, pero su importancia en la natura-
Los microorganismos fijadores de nitrgeno den reducirlos hasta amonio. leza no est bien determinada.
evaluacin de la diferencia que existe en la abun-
dancia natural en N15 entre la atmsfera y el suelo. Esta Los diazotrofos: el grupo est integrado como vimos por Si el N2 el N2O son los productos formados en la respi- Bacterias que respiran nitratos convirtindolo a nitrito
tcnica exige gran precisin y brinda datos de gran con- protistas inferiores: bacterias hetertrofas aerobias, racin de los nitratos, el proceso recibe el nombre de des- en condiciones anaerbicas, obtienen energa por fos-
fiabilidad. anaerobias y anaerobias facultativas, un representante de nitrificacin. forilizacin oxidativa (368kcal mol1 NO3). Bacterias en-
bacterias quimioauttrofas y microorganismos fotosintti- tricas, que son anaerobios facultativos, son ejemplos
Se evalan los incrementos en la abundancia en N15 cos: bacterias y cianobacterias. Metodologa: la cromatografa de gases permite seguir tpicos, a pesar de que muchos de ellas pueden tam-
sobre un valor promedio de 0,364% que representa la con mucha precisin el contenido de N2 y N2O en la at- bin reducir nitratos a amonio, proceso conocido como
abundancia natural de este istopo en la atmsfera. El cuadro 4 presenta a los microorganismos fijadores y msfera del suelo y el empleo de N15-NO3 permite eva- reduccin desasimilativa de nitratos a amonio, bajo
Valores superiores en 0,015% a ese promedio se acep- sus asociaciones con vegetales y animales, en combina- luar con exactitud estas causas de prdidas de nitrge- condiciones anaerobias por varios gneros bacteria-
tan como evidencia positiva de fijacin. Las tcnicas ciones simbiticas, nodulares y no nodulares y en asocia- no. Actualmente se trata de evaluar esta importante cau- nos:
isotpicas constituyen sin duda la herramienta ms ciones ms laxas y menos obligatorias, como son las aso- sa de prdida de fertilizantes en suelos y aguas, aplican-
importante en la evaluacin de la fijacin en todos los ciaciones rizosfricas, espermatosfricas y filosfricas, en do tcnicas de evaluacin tanto in-vitro como in-situ.
sistemas biolgicos, en el laboratorio o en el campo donde los organismos sobre todo hetertrofos se ven es- NO3 + 4H2 + 2H+ NH4+ + 3H2O
(Barea, 1991). timulados por la provisin de compuestos carbonados por Las reacciones pueden iniciarse con nitritos o nitratos y los
parte del vegetal. productos finales se pierden a la atmsfera (cuadro 10). Se transfieren un total de 8 electrones en la reduccin,
Determinacin de la actividad nitrogensica con rendimiento energtico de 143 kcal mol1 de nitrato.
El descubrimiento de que la nitrogenasa puede reducir Se analizarn los grupos ms importantes de diazotro- Cuadro 10- Procesos que involucran reduccin de La primera etapa es la reduccin de los nitratos a nitrito,
otros sustratos adems del N2 permiti desarrollar desde fos, comenzando por aquellos reconocidos como fijado- nitratos ligada a la produccin de energa por fosforilacin oxidati-
1966 un mtodo analtico rpido y eficaz que emplea ace- res en vida libre, es decir los que expresan su nitrogena- va por respiracin. Muchas especies bacterianas que rea-
tileno que inhibe la reduccin del N2 por la nitrogenasa y sa sin requerir la proteccin o la colaboracin de otro Procesos Productos Energa Regulada por Condiciones lizan este proceso no ganan energa adicional por la re-
conservada del suelo
es reducido a etileno. Ambos se evalan en cromatogra- organismo, aunque pueden ser favorecidos por los nu- duccin de los nitritos a amonio.
+ + +
fa en fase gaseosa con columna de resinas como el Po- trientes y el ambiente con baja pO2 que le ofrece la ri- Asimilativo NH4 no NH4 , N-org baja conc.NH
4
Asimilacin o
rapak, con N2 como gas transportador y detector de ioni- zosfera. inmovilizacin
Los investigadores se preguntan sobre las ventajas de
zacin de llama. de nitratos esta reduccin de los nitratos a amonio, dada la escasa
Ningn eucariota posee esta importante capacidad y Desasimilativo energa generada. Para algunos esta energa servira
*quimiodesni- NO ms que no cidas
Esta tcnica es muy usada por su rapidez, sensibili- los intentos de la ingeniera gentica tratando de trans- trificacin N2
para regenerar poder reductor reooxidando los NADH2.
dad y por la estabilidad del producto formado, el C2H4, ferir esta propiedad cuando los genes nif se encuen- *desnitrificacin NO no ? aerbica Estas observaciones en cultivos puros se correlacionan
2
que permite trasladarlo en frascos cerrados tipo anti- tran en plsmidos o estn integrados al cromosoma no respiratoria con estudios ecolgicos: las bacterias que reducen ni-
bitico hacia el laboratorio. La conversin terica en- bacteriano, son numerosos y se han logrado algunos * respiracin tratos a amonio predominan en ambientes ricos en car-
NO3 (*) NO2 si O2 anaerbica
tre moles de acetileno y de N2 reducidos por el inter- diazotrofos sintticos. Numerosos experimentos in- *NO3 reduccin
bono (mayor necesidad de poder reductor), como los
cambio de electrones es entre 4 y 3/1: N2/(C2H2) no tentan transferir esta propiedad a vegetales, sobre todo desasimilativa sedimentos y aguas servidas, mientras que los desni-
a NH4+ NH4+ N2O pocas cepas O2 anaerbica
es correcto, ya que la solubilidad en agua es superior a gramneas, pero el funcionamiento de estas plantas trificantes (reduccin de los nitratos a N2, N2O) dominan
*desnitrificacin
para el acetileno, y ste no constituye un sustrato fi- transgnicas en la naturaleza, es motivo de contro- respiratoria N2 N2O NO si O2 anaerbica
en ambientes pobres en carbono, como los suelos.
siolgico. versia.
Desnitrificacin mayora de las especies amonificantes, que tambin ATP y en perodos oscuros se activa la nitrogenasa y la de la sntesis de aminocidos. Alta concentracin de glu-
pueden reducir nitratos. Estos grupos no ocasionan pr- respiracin mantiene el nivel de O2 adecuado. La fijacin tamina o de algn otro aminocido disminuye la actividad
Efectos en la naturaleza didas de N, ya que nitrito y amonio son empleados por la en especies heterocsticas se puede realizar en el aire. de la enzima y suprime tambin la produccin de amino-
los vegetales se perjudican ya que los nitratos son su microflora. cidos adicionales.
principal fuente de nitrgeno Barreras a al difusin: los ndulos de leguminosas y
el ambiente se beneficia ya que los nitratos altamente Los desnitrificantes verdaderos que reducen nitratos actinorrizas ofrecen varios mecanismos de proteccin que
txicos y solubles son lavados del suelo y llevados a hasta N2 u xido nitroso, slo representan un 4% de las analizaremos en otro captulo, pero la barrera mecnica Mtodos para evaluar la FBN
cauces de agua. La desnitrificacin es vital en la conti- especies testadas y son bacterias tpicas. Ningn protista de las clulas de la corteza del ndulo limita la entrada
nuidad del ciclo del nitrgeno. Si no ocurriera este pro- superior es capaz de obtener energa de esta reaccin de O2 a la zona bacteriana. Sistemas membranosos in- Crecimiento y morfologa
ceso, el nitrgeno de la tierra, incluyendo el N2 atmosf- Son especies de pocos gneros: Pseudomonas, Achro- ternos de muchos diazotrofos, del tipo de los mesosomas, Si se logra incremento en la biomasa o en el nmero
rico, se acumulara en los ocanos, impidiendo la vida mobacter, Bacillus, Spirillum, Micrococcus. limitan la llegada del oxgeno a la enzima. de organismos inoculados en un medio de cultivo sin
terrestre. La desnitrificacin mantiene tambin la pota- nitrgeno combinado, puede afirmarse que el organis-
bilidad de las aguas, ya que altas concentraciones de Son anaerobias facultativas, que emplean nitratos en con- Regulacin de la nitrogenasa mo es un diazotrofo. Es necesario confirmar la capa-
nitratos son txicas. diciones de anaerobiosis o de muy baja concentracin de La figura 2 esquematiza los mecanismos de regulacin cidad fijadora, pues muchos organismos crecen a ex-
O2 (0,2 mg/L en medio lquido). El O2 reprime la formacin de la FBN. El nitrgeno combinado suprime la fijacin por pensas de pequeas impurezas de los medios de cul-
Microorganismos responsables nitrato, nitrito y xido nitroso reductasa y adems inhibe inhibicin de la sntesis de la nitrogenasa, mediante me- tivo, o crecen como contaminantes luego de un pe-
Los microorganismos vinculados a la desnitrificacin no la funcin de la que ya est sintetizada. canismos de represin de la expresin de los genes res- queo desarrollo de los diazotrofos.
dependen de los nitratos para su desarrollo. Muchos de ponsables de la sntesis de los componentes de la enzi-
ellos son tambin activos en la proteolisis, amonificacin Aislamiento: en condiciones de anaerobiosis, con nitrato ma (genes nif). En Klebsiella pneumoniae la represin ha La presencia de clulas especializadas en la fijacin del
y otras transformaciones biolgicas. La presencia de una y donadores de electrones, en general orgnicos, ya que sido estudiada en detalle y la molcula crucial es una en- N2, como los heterocistos en cianobacterias filamento-
alta poblacin desnitrificante en suelos, aguas, no implica la mayora de las especies son hetertrofas. Luego de un zima, la glutamino sintetasa, que cataliza el primer paso sas y las vesculas, en Frankia, es indicio de que el
que las condiciones sean las ptimas para el proceso; se enriquecimiento producen gran cantidad de gas y alcalini- en la sntesis de aminocidos: el amonio reacciona con el organismo puede fijar N2.
refleja solamente un gran potencial desnitrificante. zan la solucin. Muchas especies de Bacillus son termfi- glutamato formando otro aminocido: la glutamina.
las y se aislan a 55-65C. Contenido de nitrgeno
6 inhibicin por Se permite desarrollar al microorganismo o sistema sim-
As, la capa arable de suelos contiene ms de 10 desni- glutamato retroalimentacin
trificantes/g suelo seco. La poblacin es mayor en la Hetertrofos: CH3 COOH + NO3 CO2 + N2 + H2O + OH
bitico en un medio sin nitrgeno o con muy poca canti-
NH3 glutamato
vecindad de las races y el potencial de volatilizacin es N2 dad. Las medidas de este elemento por tcnicas conven-
sintetasa
grande, pero deben reunirse las condiciones para que Sustrato: innumerables molculas resultantes de la de- glutamina cionales como la de Kjeldahl (digestin cida en caliente
nitrogenasa
los organismos cambien su metabolismo aerobio por una gradacin de polmeros: celulosa, hemicelulosas, almidn de la materia orgnica, destilacin y titulacin del NH3),
respiracin anaerobia, con nitrato como aceptor final de se usan como fuente de carbono, asi como algunos com- permiten detectar fijacin si sta es de cierta magnitud
puestos aromticos y sintticos. comp. II otros
electrones. transporte reducido aminocidos (ms del 1% del N inicial). Los errores son altos y la mues-
de e-
cofactor Mo
tra se destruye en el anlisis.
Son bacterias auto y heterotrficas anaerobias Las asociaciones comensalsticas entre los degradado- proteinas
facultativas con dos cadenas transportadoras de elec- res de estos polisacridos y las bacterias desnitrificantes componente I comp. II oxidado Empleo de istopos del N
trones han sido descriptas como muy frecuentes. Con raras ex- La aplicacin del istopo radioactivo N13 es muy limita-
nif B nif F nif D nif H
en aerobiosis realizan respiraciones aerobias del sus- cepciones los desnitrificantes son incapaces de fermen- control de la expresin de los genes da por la corta vida media (11 minutos) y su elevado
trato, por ejemplo, glucosa tar azcares y no pueden crecer en anaerobiosis sin ni- costo. El uso del istopo estable N15 constituye una de
tratos ni nitritos. Ninguno es anaerobio estricto. Figura 2- Esquema del control de la nitrogenasa las mejores pruebas de la fijacin del N2. Es ms sensi-
en anaerobiosis degradan el mismo sustrato por res- ble que el Kjeldahl (1000X) (Stevenson y Cole, 1999).
piracin anaerobia con nitrato como aceptor de elec- Auttrofos: se citan en la bibliografa unas pocas espe-
trones cies de bacterias auttrofas facultativas, que realizan des- La mayora de los otros aminocidos se forman por trans- Las metodologas empleadas se basan en:
nitrificacin oxidando un sustrato mineral, H2, S, que se ferencia del nitrgeno desde la glutamina a otros com- 15
uso de N gas: la muestra se incuba en sistema cerra-
2
Un 85% de las especies testadas pueden reducir nitra- desarrollan en el aire o anaerbicamente con compues- puestos. do con N2 enriquecido con N15 y luego de un perodo apro-
tos a nitritos. El grupo que reduce los nitratos hasta amo- tos inorgnicos como fuente de energa y O2 o NO3 como piado se convierte todo el N de la muestra en NH3 por
nio es tambin amplio, un 45% del total, e incluye a la aceptores de electrones, respectivamente. La glutamino sintetasa es regulada por inhibicin feed digestin cida, se destila y se recoge el amonio formado,
back o retroalimentacin, por distintos productos finales por ejemplo en cido brico. En el momento del anlisis
cianuro, azidas, etc. (Zuberer, 1998). Se demostr que es- Proteccin frente al oxgeno Thiobacillus denitrificans oxida S, H2S y difiere de los otros Pero el oxgeno ejerce adems un rol indirecto, ya que es
tas molculas son sustratos que podan ser reducidas por La fijacin de N2 requiere un acoplamiento eficiente entre thiobacilos por su capacidad para crecer anaerbicamen- requerido para la produccin de nitratos. La desnitrifica-
la enzima (cuadro 3). El acetileno es un inhibidor no com- los sistemas generadores de ATP, que en muchos diazo- te cuando estn presentes los nitratos: cin se favorece en agregados de ms de 4 mm de di-
petitivo de la reduccin del N2 (figura 1), mientras que el N2 trofos es la fosforilacin oxidativa y la proteccin de la metro ya que resulta difcil al O2 llegar por difusin hasta
inhibe competitivamente la reduccin del acetileno nitrogenasa frente al oxgeno. Tericamente todos los dia- S, S2O3= + NO3 + H2O SO4= + N2 + H+ el centro donde ocurrir la desnitrificacin. El suelo est
zotrofos protegen a la enzima segn distintas estrategias. constituido por un mosaico de habitats, coexistiendo los
Inhibidores Hidrogenomonas agilis y Micrococcus denitrificans oxidan oxigenados para la oxidacin del amonio y los anaero-
El H2 es un inhibidor competitivo de la reduccin del N2, Polmeros extracelulares: cpsulas y capas mucosas li- el H2 con reduccin de nitratos. Sporovibrio ferrooxydans bios, donde se reducen los nitratos.
pero no de la de protones, ni de otra reduccin catalizada mitan el flujo de oxgeno a la clula. reduce nitrato en anaerobiosis, oxidando Fe++.
por la enzima. El O2 inactiva ambos componentes de la La alternancia de perodos de buena y mala aereacin, o
N2asa, acta como inhibidor no competitivo. El mecanis- Microaerofilia: diazotrofos aerobios migran hacia regio- El rol de estos organismos en naturaleza no se puede perodos de lluvia intermitentes pueden facilitar la forma-
mo no est totalmente dilucidado, puede relacionarse con nes de baja tensin de O2 donde pueden expresar la ni- inferir a partir de estudios en cultivo puro. De todos mocin y la reduccin consiguiente de los nitratos.
la expresin de los genes nif o con la formacin de radi- trogenasa. dos, su nmero no es nunca alto en ecosistemas natura-
cales libres (superxidos) generados en el ambiente al- les y las mayores prdidas de nitratos se producen por El cuadro 11 muestra la relacin entre el nitrgeno perdi-
tamente reductor donde funciona la enzima. Proteccin respiratoria: una intensificacin del proceso los hetertrofos. do como gas y la atmsfera de incubacin de los nitratos.
respiratorio permite la reduccin del O2 a concentracio-
N2 C2H2 nes inocuas para la enzima. Proceso descrito en Azoto- Ecologa Cuadro 11- Efecto de la composicin de la
e e H+
bacter, se induce un cambio en la actividad de los citocro- La restriccin de la actividad desnitrificante a pocos gne- atmsfera en la desnitrificacin

H2 mos de la CTE y un desvo del flujo de electrones que ros hace que la magnitud el proceso est marcadamente
C2H4 -
NH3+H2 estimulan el consumo de O2 hacia oxidasas terminales afectada por el ambiente. Los cambios en ste pueden N perdido como % del N-NO3 agregado
2MgATP 2MgADP
+2Pi alternativas. La respiracin es ms ineficiente y produce estimular o bien inhibir las prdidas de nitratos. atmsfera agitado estacionario
N2 menos ATP/mol de sustrato.
C2H2 aire 28,2 81,0
H+ Las condiciones que deben reunirse para que el proce-
e e oxgeno 0,0 28,0

Proteccin conformacional: cultivos de Azotobacter po- so hetertrofo sea estimulado:
H2 C2H6 nitrgeno 80,1 79,2
NH3+H2 C2H4 seen este mecanismo relacionado a modificaciones bio-
vaco 78,6 80,0
2MgATP 2MgADP qumicas de la enzima (se combina equimolecularmente alto nivel de nitratos,
+2Pi
con una tercera SFe-protena llamada SFeII en presencia sustancias donadoras de electrones (materia org-
Figura 1 - Representacin de la estructura de las nitrogenasas de iones Mg). nica) La materia orgnica estimula la desnitrificacin, pues
A) nitrogenasa dependiente del Mo. B) nitrogenasas anaerobiosis como ya vimos la mayora de las especies activas son
alternativas Inhibicin reversible: un mecanismo alternativo propues- hetertrofas. Ejerce doble rol:
Las subunidades forman parte de la Fe-protena, la es to para Klebsiella y Rhodopseudomonas est relaciona- Los nitratos se producen por nitrificacin o son aporta- directamente, acta como fuente de carbono y de electro-
especfica de las nitrogenasas alternativas, los centros 4Fe- do en la competencia entre dos sistemas enzimticos, nidos en fertilizantes ntricos, amoniacales u orgnicos que nes e indirectamente, provoca una eclosin de microor-
4S y cofactores se localizan en cada protena. trogenasa y cadena respiratoria por una reserva comn pueden ser llevados a nitratos. Tambin pueden provenir ganismos en su mayora aerobios, que disminuyen el nivel
de poder reductor. de otros horizontes arrastrados por el agua. Incluso en de oxgeno facilitando las prdidas por desnitrificacin.
suelos de arrozales donde en general se fertiliza con amo-
Cuadro 3 - Sustratos de la nitrogenasa
Las protenas como ferredoxina o flavodoxina, donadores nio, ste puede oxidarse a nitrato en las capas superiores La figura 9 presenta las prdidas de N en el suelo incuba-
Sustrato Km(mM) Productos de electrones a la N2asa, son tambin fcilmente oxida- del agua y luego ser desnitrificado ms abajo. do con nitratos (5 mg de N-NO3) en anaerobiosis a 25C
bles, generando radicales libres. Esta oxidacin podra y diferentes dosis de paja de trigo. Las sustancias rpida-
dinitrgeno 0,1 NH3, H2 mente descomponibles favorecen el proceso: azcares
relacionarse con la inhibicin reversible. La anaerobiosis se logra fcilmente en aguas, a unos
azida (NN-N-)- 1,0 N2, NH3, N2H4 simples, cidos orgnicos. Los abonos verdes estimulan
pocos centmetros de la superficie y en los suelos existen
cianuro (CN)- 0,4 CH3NH2, NH3, CH4 el proceso y las pajas en menor proporcin.
Separacin espacial de la nitrogenasa: en clulas es- microagregados en los cuales la demanda biolgica ago-
xido nitroso (N20) 1,0 N2, H20
pecializadas como los heterocistos en cianobacterias o ta rpidamente el O2 y como ste es un gas que difunde
acetileno CHCH 0,1 C2H4 Otros factores
las vesculas en Frankia, la separacin de la actividad lentamente por los poros del suelo y es poco soluble en
protones H+ - H2 Humedad: en suelos bien drenados la desnitrificacin se
nitrogenasa puede ser temporal o espacial. En cianobac- agua, se crean ambientes anaerobios en el seno de sue-
alquilcianuro correlaciona con el nivel de humedad. Los nitratos se re-
terias sin heterocistos los procesos son secuenciales: los bien estructurados.
(R-CN) 10 RCH3, NH3
durante el da se produce la fotlisis del agua y se genera
ducen en altos niveles de agua y en suelos mal drenados. serv que en ciclos de 10 das hmedos y 10 das secos En los organismos fotosintticos la fuente de poder reduc- distintos nombres segn los laboratorios que las purifi-
Pueden coexistir, como vimos, habitats anaerobios (inte- se pueden remover un 67% del N de la materia orgnica. tor proviene del flujo electrnico derivado de la clorofila. caron.
rior de agregados, rizosfera) en suelos aereados.
N perdido
pH: la desnitrificacin es sensible a la acidez y las prdi- Energa (ATP): en trminos fisiolgicos la fijacin del N2 El componente I, tambin denominado Mo-Fe prote-
das en ambientes muy cidos no pueden atriburse direc- es un proceso muy costoso para la clula. Se calculan na, Azofermo, dinitrogenasa y est formada por 4 subu-
100 entre 12 y 24 los ATP requeridos para reducir un mol de
1000 tamente a causas biolgicas. Sobre el pH 6,0 se forma nidades de cadenas polipeptdicas. En Azotobacter su PM
% del N-NO agregado
N2O pero se reduce a N2 que es el gas dominante. Debajo N2. Esta molcula se genera en la clula por los procedi- es de 220.000 y posee 22-24 tomos de Fe y 2 de Mo.
75 800 de pH 6,0 la reduccin es inhibida y predomina el xido mientos habituales: Vida media en el aire: hasta 20 minutos.
400
nitroso: la produccin de N2O es mxima en suelos ci-

50 200 dos y mnima en neutros. La reduccin ulterior N2O a N2 fosforilizaciones oxidativas en organismos aerobios El componente II, o Fe protena o Azofer, ferropro-
se produce en todos los casos. El ptimo del grupo se tena, dinitrogenasa reductasa, PM 55.000-66.000, po-
25 fosforilaciones a nivel del sustrato en anaerobios
sita en el rango neutrfilo: 7,0 - 8,2 coincidente con la see 2 subunidades proteicas con 4 tomos de Fe y unio-
mxima actividad bacteriana, pero los rangos se extien- fotooxidaciones en organismos fotosintticos nes sulfuro lbil., vida media en el aire 0,5-0,75 segun-
0
50 den desde pH 4,5 a 10,0. dos. El complejo estara en equilibrio dinmico con sus
0 10 14 18 22 das de incubacin dos componentes:
En estudios in vitro se han utilizado sistemas artificiales de
Figura 9- Efecto de la materia orgnica (mg/kg) Temperatura: el proceso ocurre lentamente a bajas tem- generacin de ATP, no empleando ATP puro, pues se com-
en la desnitrificacin peraturas (2C) y la velocidad de prdida de nitratos au- prob que la acumulacin de ADP inhibe a la nitrogenasa. Protena Mo-Fe + 2 Protena Fe N2asa
menta con la temperatura. El ptimo para algunos auto-
La alternancia de perodos de buena y mala aireacin ejer- res se sita en el rango termfilo (40-75C). La desnitrifi- Resumiendo: Extractos con actividad nitrogenasa se han preparado a
ce un efecto acelerador de las prdidas de N por desnitri- cacin a bajas temperaturas tiene gran significado agr- en los organismos hetertrofos los compuestos org- partir de organismos diferentes: aerobios, anaerobios,
ficacin. La figura 10 muestra la evolucin del nitrgeno cola ya que posibilita prdida de nitrgeno en las estacio- nicos son empleados como fuente de carbono, de po- microaeroflicos y algunas cianobacterias y sistemas sim-
total (Nt) y del N-NO3 en un suelo incubado a 35C du- nes fras cuando el suelo no posee una cubierta vegetal der reductor y de energa biticos con leguminosas y no leguminosas. Se han aisla-
rante 60 semanas en tres condiciones: que absorba a los nitratos. Es aconsejable mantener una do nitrogenasas que no dependen del Mo, sino del vana-
en los fotosintticos, es el flujo electrnico derivado
vegetacin extendida que puede luego ser enterrada evi- de los sistemas pigmentarios, el que llega a reducir si- dio (V) (nitrogenasa 2) y otra que no depende ni del Mo ni
a.mantenido constantemente a 16-20% de humedad tando prdidas de nitrgeno. del V, la nitrogenasa 3, que es una FeFe-protena, con
multneamente al N2 y al CO2
b.mantenido siempre saturado en agua propiedades y afinidades por los sustratos diferentes a la
c.saturado en agua la primera mitad del ciclo (3 sema- Metales: constituyen otro requerimiento imprescindible clsica nitrogenasa. Son las llamadas nitrogenasas al-
nas) y secado hasta 18% de humedad y mantenido as N-NO3 ternativas.
mg/kg para la nitrogenasa. El magnesio reacciona con el ATP
la segunda mitad del ciclo (3 semanas). para dar la sal monomagnsica, que reacciona con la ni-
150 1000 a La figura 1 (Gonzalez-Lopez, Lluch-Pl, 1992) presenta
a trogenasa, segn los modelos que explican el funciona-
Se repite el procedimiento en cada uno de los ciclos. El 100 800 miento de esta enzima. Otros minerales presentes en la modelo de flujo electrnico en esta enzima y otros sustra-
Nt b
suelo permanentemente saturado volatiliza los nitratos mg/kg nitrogenasa son el hierro y el molibdeno. Suelos carentes tos reducidos tambin por el complejo enzimtico.
pero no puede producirlos ms en anaerobiosis. La alter- 50 600
en estos elementos limitan la fijacin.
b c c
nancia de saturacin y drenaje causa la mayor prdida de 0 400 Sustratos de la enzima
Nt: en saturacin el humus se mineraliza lentamente a La nitrogenasa es la enzima responsable de la reduc- El dinitrgeno es el sustrato natural de la enzima, es re-
ciclos de 6 semanas ciclos de 6 semanas
amonio, que es oxidado a nitrato en la segunda parte del cin y dada su complejidad resulta muy difcil de purificar. ducido a amonio en una reaccin irreversible que va acom-
ciclo, perdindose en el perodo de anegamiento. Adems, por su extremada sensibilidad frente al O2 los paada de la liberacin de H2. La relacin entre H2 produ-
Figura 10- Prdidas de N en suelo sometido cido/N2 reducido puede variar segn las nitrogenasas de
trabajos in-vitro se han limitado en el tiempo. Recin en
Como consecuencia parte del N del humus se volatiliza. a distintos tratamientos los microorganismos, pero nunca es inferior a 1.
1960, se logr purificar la enzima a partir de un organis-
mo anaerobio, el Clostridium pasteurianum. Hacia 1974
Este principio se aplica en las plantas de tratamientos El cuadro 12 muestra el efecto de la temperatura de incu- se lograron aislamientos a partir de unos 25 microorga- N2 + 16 ATP + 8 e- + 10 H+ +
2NH4 + H2 + 16 Pi
de aguas servidas; ciclos de aerobiosis y anaerobiosis bacin en la desnitrificacin de nitratos en 30 das en sue- nismos, incluidos los aerobios, pero trabajando siempre
eliminan prcticamente todo el nitrgeno orgnico por ni- lo inundado con glucosa. Se verifica el ptimo en el rango en ausencia de O2. Hasta la dcada de 1960 se pensaba que el dinitrgeno era
trificacin y desnitrificacin. En columnas de suelo se ob- termfilo. el nico sustrato de la enzima, pero se evidenci que la
La enzima est integrada por dos componentes, dos reaccin era inhibida por determinados anlogos del N2,
metaloprotenas fcilmente separables que recibieron pequeas molculas con triple enlace, como el acetileno,
Este proceso representa menos del 30% de la fijacin to- Proceso bioqumico de la fijacin del N2 Cuadro 12- Prdidas de N en un suelo inundado NO3 NO2 NO

tal mundial. Vimos que otro 10% provendra de los proce- con nitratos y glucosa a distintas temperaturas
HNO H2N2O2 N2O
sos no biolgicos realizados en la atmsfera, es de supo- La fijacin biolgica del N2 consiste en la reduccin del

ner entonces que ms de un 60% del total de nitrgeno gas dinitrgeno hasta amonio; los intermediarios postu- (% N-NO3 agregado)
NO2NH2 N2
que se incorpora cada ao en el suelo y aguas provendra lados son diimida e hidrazina, aunque an no han sido temperaturaC 2 10 13 16 20 25 30 40 50 60 70
de la FBN. aislados. El amonio es rpidamente convertido en ami- N-perdido 20 80 80 83 85 87 92 91 90 92 0 La reduccin de nitrato a nitrito es catalizada por un nitra-
nocidos, protenas y luego en todas las molculas nitro-
to reductasa.
Cuadro 2 - Fijacin biolgica del nitrgeno atmos- genadas requeridas por la clula. El amonio formado se
combina con molculas carbonadas provistas por la clu- La vegetacin ejerce tambin un doble efecto sobre la
frico y flujo anual de N en trminos globales En bacterias esta conversin constituye la primera etapa
la fijadora en caso de fijacin por organismos en vida li- desnitrificacin: aporta donadores de electrones por exu-
dacin, restos de races, mantillo y, por otro lado, compite de dos vas metablicas diferentes: una respiratoria que
Fuente de fijacin x 106 toneladas/ao bre, o por la actividad fotosinttica del husped, en caso
con las bacterias por el nitrato disponible, reduciendo las conduce a N2O o N2 (desnitrificacin) y la otra asimilativa
de asociaciones con vegetales. Ocurren reacciones del
industrial (fertilizantes) 49 prdidas por volatilizacin. El efecto neto parece ser esti- que lleva a NH3. Algunas especies asimilan y respiran los
tipo de las siguientes:
atmosfrica (electroqumica) 10 mulante y el nmero de bacterias desnitrificantes es ele- nitratos: Aerobacter aerogenes, Micrococcus denitrificans.
otros procesos qumicos 35 vado en la rizosfera. La profundidad limita el proceso por La nitrato reductasa de P. aeruginosa es una sulfihidril
HOOC-CO-CH2--COOH + NH3 NH2-CHCOOH-CH2-CH2COOH + H2O
c. alfa-ceto c. glutmico c. glutmico disminucin de la materia orgnica. molibdo flavoprotena especfica para NADH y funciona
FBN total 170 glutrico deshidrogenasa con el citocromo c:
sistemas simbiticos 50 En resumen La desnitrificacin requiere aporte de com-
CH3-CO-COOH + NH3 CH3-CH-(NH2)-COOH + H2O NADH FAD citc

NO3 reductasa NO3

NO2
total en sistemas terrestres 139 puestos orgnicos rpidamente metabolizables como son
c. pirvico alanina
los azcares, o bien minerales para los auttrofos como

Leguminosas 35 S, Fe++, H2, alto nivel de nitratos y pobre drenaje. cit. oxidasa O2 H2O
arbreas (100-300 kg/ha/ao) Requisitos
granos (40-240 kg/ha/ao) Poder reductor: la fijacin biolgica del N2 es un proceso Pero la magnitud del proceso est tambin gobernada por La nitrato reductasa (Mo-Fe protena no hemnica) es inhibi-
abonos verdes (100-360 kg/Ha/ao) reductivo y numerosos compuestos orgnicos pueden ser la temperatura, el pH, la humedad, que regula la aireacin. da por el O2 que reprime su biosntesis. El paso siguiente:
empleados por los microorganismos fijadores hetertro- La volatilizacin es importante en aguas estancadas y en NO2 NO es mediatizado por una nitrito reductasa, que se-
cultivo de arroz (10-80 kg/ha/ao) 4 fos como fuente de carbono, energa y poder reductor. suelos bien drenados y con activa nitrificacin, que sufre gn el organismo es una hemoprotena con dos hemos de
pasturas (15kg/ha/ao) 45 perodos de anaerobiosis parcial en pocas de lluvias o lue- tipo c y d o una cuproprotena, ambas solubles, que emplean
otros cultivos (5kg/ha/ao) 5 La ferredoxina y la flavodoxina pueden actuar de dona- go de la aplicacin de restos orgnicos. Es menor en sue- el NADH o FADH. Se formara un intermediario hipottico, el
ecosistemas forestales (10kg/ha/ao) 5 dores de electrones in vivo y el metil violgeno y ditionito los permanentemente anegados por la imposibilidad de for- nitroxilo, tal vez en forma de complejo con la enzima.
otros ecosistemas (2kg/ha/ao) 10 de sodio se emplean como donadores no fisiolgicos en macin de nitratos. Las prdidas son importantes en zona
sistemas in vitro. tropical y en la zona templada en praderas. Cerca de la Resumen
cantidad N en suelos 105.000 superficie del suelo el nivel de materia orgnica, nitratos y Como vimos el ciclo del nitrgeno es complejo y el cono-
absorcin total de N 1.400 Las ferredoxinas son protenas-SFe, capaces de reducir microflora activa es mayor y es all donde se forma mayor cimiento de su funcionamiento en ecosistemas naturales
N mineralizado 3.500 la nitrogenasa cuyo potencial redox de -0,43 voltios pue- cantidad de nitratos que se pueden desnitrificar antes de es de sumo inters a los efectos de lograr mayor produc-
N desnitrificado 135 de variar en un determinado rango segn los componen- llegar a la zona radical, en anaerobiosis. tividad y sustentabilidad y para mejorar los problemas del
N perdido por erosin/lavado 85 tes de la protena. Las flavodoxinas son protenas sin ambiente. La mayora del N de los suelos se encuentra
hierro que poseen un flavin-mononucletido (FMN) como Como prctica agrcola conservacionista se aconseja en formas orgnicas que liberan lentamente las formas
grupo prosttico. Estn codificadas por el gen nifF y son agregar los donadores de electrones: materia orgnica minerales ms dinmicas. Los procesos de mineraliza-
La produccin de fertilizantes qumicos requiere una ener- capaces de transportar dos electrones. En Klebsiella pneu- como abonos verdes, rastrojos, etc. fraccionadamente en cin-inmobilizacin gobiernan el nivel de minerales y la
ga muy considerable para separar el H2 del gas natural o moniae, el donador de electrones a la enzima es una fla- el tiempo, evitando su acumulacin y el empleo de fertili- relacin C/N de la materia orgnica en descomposicin
del petrleo, menos cantidad para comprimir los reactivos vodoxina que es reducida directamente por la piruvato- zantes amoniacales y no ntricos e incluso el empleo de es uno de los factores que regulan estos procesos. La
y calentarlos y otra importante cantidad para el traslado reductasa, codificada por el gen nifJ. El formiato es un inhibidores de la nitrificacin. amonificacin es un proceso ms difundido y menos es-
y distribucin desde las plantas industriales al campo. La importante donador de electrones en organismos fijado- pecfico y exigente que el paso siguiente, la nitrificacin.
necesidad de conservar los combustibles fsiles, el car- res aerobios y anaerobios facultativos. El H2 ha sido des- Bioqumica de la desnitrificacin
bn, el metano y el petrleo incentiva las investigaciones crito como efectivo donador de electrones en extractos El esquema siguiente presenta los posibles mecanis- Los nitratos tienen mltiples destinos en la naturaleza: es
sobre la FBN. acelulares de Clostridium pasteurianum. mos: tomado por los vegetales y los microorganismos, es muy
mvil y se lava (prdidas y riesgos de polucin) y final- Stevenson, F. J. & M. A. Cole, (eds) Cycles of Soils: car-
mente se pierde en la atmsfera como gases, por la des- bon, nitrogen, phosphorus, sulphur, micronu-
nitrificacin (N2 y N2O). El xido nitroso es muy peligroso trients, 1999, Wiley & Sons, New York: 139-229
por su marcado efecto invernadero, con destruccin de la
capa de ozono. Esta ltima ocurre en anaerobiosis, pero
Fijacin biolgica del nitrgeno
tambin en suelos aireados, dentro de micrositios o agre-
gados donde se establece anaerobiosis. La alternancia
de ciclos de aireacin y saturacin estimulan estas prdi-
das. Las bacterias responsables son anaerobias facultati-
Preguntas de repaso
1) Dibuje su propio diagrama del ciclo terrestre del N,

incluyendo las principales fuentes y las transforma-
11 (FBN)
vas. ciones que puede sufrir.
2) Describa la composicin del N-orgnico y su relacin
Finalmente el ciclo del nitrgeno se cierra por el proceso con su biodegradacin.
de fijacin del N2, el cual es la fuente ltima de este ele- 3) A partir de los siguientes sustratos, analice las enzi- El nitrgeno es un elemento fundamental para los seres a. Esquema del proceso biolgico de fijacin biolgi-
mento en la naturaleza. mas involucradas en su mineralizacin, los produc- vivos y el desarrollo vegetal muchas veces se ve limitado ca del nitrgeno (FBN)
tos intermediarios y finales: porque los suelos contienen poco nitrgeno. La fertiliza-
cin con compuestos nitrogenados orgnicos o inorgni- 8 e-, 8 H+
El cuadro 13 resume algunas consideraciones sobre futu-
Sustrato enzimas productos cos es una prctica frecuente. N2 2NH3 + H2
ros desafos relacionados a este importante elemento.
Protenas El nitrgeno del suelo se origina a partir de la reserva N2asa aminocidos, uredos
Cuadro 13- Perspectivas y opciones de manejo en Pptidos inagotable que constituye la atmsfera, en donde se lo
donadores de e-
relacin al ciclo global del N Quitina encuentra como gas diatmico (N2) muy inerte debido a la
12-24 moles ATP/mol de N2
Peptidoglicano alta energa de enlace, superior a la que se presenta en-
Mg, Fe, Co
El uso de fertilizantes N en el 2020 podra alcan- ARN, ADN tre los compuestos del carbono (cuadro 1) (Frioni, 1999).
9 -1 proteccin frente al O2
zar 134.10 kg ao Urea
esqueletos carbonados
necesidad de mayor nfasis en utilizacin efi- Cuadro 1 - Energa de enlace en compuestos
ciente del N 4) Describa la formacin de nitratos y las vas que pue- con carbono y nitrgeno (kcal/mol) Se estima que por esta va se fijan al ao cerca de 170
reinstalar cultivos inundados para prever prdi- de seguir en el suelo. millones de toneladas de nitrgeno por organismos en vida
das de N hacia estuarios 5) Ciclo interno del nitrgeno. C-C 92 N-N 38 libre, asociados a vegetales no simbiticamente y en for-
El consumo de combustibles fsiles en el 2020 6) Compare los procesos de nitrificacin y desnitrifica- C=C 146 N=N 98 maciones nodulares simbiticas (cuadro 2).
9 -1
podra llegar a ~46. 10 kg N ao . cin en relacin a la microflora actuante y los meca- CC 192 NN 225
necesidad de consumo eficiente de combusti- nismos de obtencin de energa en cada caso. b. Procesos abilogicos en la atmsfera
bles fsiles 7) Por qu una alternancia de aerobiosis/anaerobiosis De importancia cuantitativa menor, se estiman unos 10-
otras alternativas energticas: biodiesel, H estimula la prdida de nitrgeno de los ecosistemas En la naturaleza el nitrgeno se presenta en numerosos com- 20 x 106 toneladas de N/ao, o sea un 10% del total fijado.
2
terrestres? puestos con estados de oxidacin que van desde (+5) a (-3):
8) Desnitrificacin en la rizosfera: es estimulada? Algunos de los procesos
Bibliografa Cmo evidenciara el efecto neto en este ambiente? (+ 5) cido ntrico (HNO3) (0) dinitrgeno (N2) N2 + O3 (ozono) N2O + O2 ozonizacin del N2
9) Un residuo vegetal (45%C y 1,5%N) es picado y mez- (+ 4) dixido de N (NO2) (- 1) diimida (N2H2) N2O NO + N fotlisis del N2O
Dommergues, Y., Mangenot, F. Ecologie microbienne du clado en el suelo. Asumiendo que la biomasa micro- (+ 3) cido nitroso (HNO2) (- 2) hidrazina (N2H4) NO + O3 NO2 + O2 ozonizacin del NO
sol, 1970, Masson, Pars biana tiene una relacin C/N de 8/1 y la eficiencia en (+ 2) xido ntrico (NO) (- 3) amonaco (NH3) 3NO2 + H2O 2HNO3 + NO hidratacin del NO2

Frioni, L. Procesos microbianos, 1999, Fundacin de la el uso del carbono de la poblacin es del 40%, calcu- (+ 1) xido nitroso (N2O) NH3 + O NO3 oxidacin del NH3
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina, le si dominar la mineralizacin o la inmovilizacin
Mayrold, D. D. Transformations of Nitrogen, En: Princi- neta. Explique sus resultados. Este proceso microbiano es realizado por un grupo limita- c. Procesos industriales, como el de Haber-Bosch
ples and Applications of Soil Microbiology 1998, 10) Analice las causas de prdidas de nitrgeno en eco- do de protistas inferiores llamados tambin diazotrofos (1914)
Sylvia, D. M., J. J. Fuhrmann, P. G. Hartel, D. A. sistemas naturales y formas a implementar para evi- (diazo=N2, trofo=nutricin) a temperaturas y presiones N2 + H2 2NH3
Zuberer, (eds), Prentice Hall, New Jersey, 259-294 tarlas. normales, gracias a la accin de una enzima muy com- 1000C
pleja, la nitrogenasa. El N2 se reduce tambin por vas 200-300 atmsferas
no biolgicas. catlisis inorgnica
mvil y se lava (prdidas y riesgos de polucin) y final- Stevenson, F. J. & M. A. Cole, (eds) Cycles of Soils: car-
mente se pierde en la atmsfera como gases, por la des- bon, nitrogen, phosphorus, sulphur, micronu-
nitrificacin (N2 y N2O). El xido nitroso es muy peligroso trients, 1999, Wiley & Sons, New York: 139-229
por su marcado efecto invernadero, con destruccin de la
capa de ozono. Esta ltima ocurre en anaerobiosis, pero
Fijacin biolgica del nitrgeno
tambin en suelos aireados, dentro de micrositios o agre-
gados donde se establece anaerobiosis. La alternancia
de ciclos de aireacin y saturacin estimulan estas prdi-
das. Las bacterias responsables son anaerobias facultati-
Preguntas de repaso
1) Dibuje su propio diagrama del ciclo terrestre del N,

incluyendo las principales fuentes y las transforma-
11 (FBN)
vas. ciones que puede sufrir.
2) Describa la composicin del N-orgnico y su relacin
Finalmente el ciclo del nitrgeno se cierra por el proceso con su biodegradacin.
de fijacin del N2, el cual es la fuente ltima de este ele- 3) A partir de los siguientes sustratos, analice las enzi- El nitrgeno es un elemento fundamental para los seres a. Esquema del proceso biolgico de fijacin biolgi-
mento en la naturaleza. mas involucradas en su mineralizacin, los produc- vivos y el desarrollo vegetal muchas veces se ve limitado ca del nitrgeno (FBN)
tos intermediarios y finales: porque los suelos contienen poco nitrgeno. La fertiliza-
cin con compuestos nitrogenados orgnicos o inorgni- 8 e-, 8 H+
El cuadro 13 resume algunas consideraciones sobre futu-
Sustrato enzimas productos cos es una prctica frecuente. N2 2NH3 + H2
ros desafos relacionados a este importante elemento.
Protenas El nitrgeno del suelo se origina a partir de la reserva N2asa aminocidos, uredos
Cuadro 13- Perspectivas y opciones de manejo en Pptidos inagotable que constituye la atmsfera, en donde se lo
donadores de e-
relacin al ciclo global del N Quitina encuentra como gas diatmico (N2) muy inerte debido a la
12-24 moles ATP/mol de N2
Peptidoglicano alta energa de enlace, superior a la que se presenta en-
Mg, Fe, Co
El uso de fertilizantes N en el 2020 podra alcan- ARN, ADN tre los compuestos del carbono (cuadro 1) (Frioni, 1999).
9 -1 proteccin frente al O2
zar 134.10 kg ao Urea
esqueletos carbonados
necesidad de mayor nfasis en utilizacin efi- Cuadro 1 - Energa de enlace en compuestos
ciente del N 4) Describa la formacin de nitratos y las vas que pue- con carbono y nitrgeno (kcal/mol) Se estima que por esta va se fijan al ao cerca de 170
reinstalar cultivos inundados para prever prdi- de seguir en el suelo. millones de toneladas de nitrgeno por organismos en vida
das de N hacia estuarios 5) Ciclo interno del nitrgeno. C-C 92 N-N 38 libre, asociados a vegetales no simbiticamente y en for-
El consumo de combustibles fsiles en el 2020 6) Compare los procesos de nitrificacin y desnitrifica- C=C 146 N=N 98 maciones nodulares simbiticas (cuadro 2).
9 -1
podra llegar a ~46. 10 kg N ao . cin en relacin a la microflora actuante y los meca- CC 192 NN 225
necesidad de consumo eficiente de combusti- nismos de obtencin de energa en cada caso. b. Procesos abilogicos en la atmsfera
bles fsiles 7) Por qu una alternancia de aerobiosis/anaerobiosis De importancia cuantitativa menor, se estiman unos 10-
otras alternativas energticas: biodiesel, H estimula la prdida de nitrgeno de los ecosistemas En la naturaleza el nitrgeno se presenta en numerosos com- 20 x 106 toneladas de N/ao, o sea un 10% del total fijado.
2
terrestres? puestos con estados de oxidacin que van desde (+5) a (-3):
8) Desnitrificacin en la rizosfera: es estimulada? Algunos de los procesos
Bibliografa Cmo evidenciara el efecto neto en este ambiente? (+ 5) cido ntrico (HNO3) (0) dinitrgeno (N2) N2 + O3 (ozono) N2O + O2 ozonizacin del N2
9) Un residuo vegetal (45%C y 1,5%N) es picado y mez- (+ 4) dixido de N (NO2) (- 1) diimida (N2H2) N2O NO + N fotlisis del N2O
Dommergues, Y., Mangenot, F. Ecologie microbienne du clado en el suelo. Asumiendo que la biomasa micro- (+ 3) cido nitroso (HNO2) (- 2) hidrazina (N2H4) NO + O3 NO2 + O2 ozonizacin del NO
sol, 1970, Masson, Pars biana tiene una relacin C/N de 8/1 y la eficiencia en (+ 2) xido ntrico (NO) (- 3) amonaco (NH3) 3NO2 + H2O 2HNO3 + NO hidratacin del NO2

Frioni, L. Procesos microbianos, 1999, Fundacin de la el uso del carbono de la poblacin es del 40%, calcu- (+ 1) xido nitroso (N2O) NH3 + O NO3 oxidacin del NH3
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina, le si dominar la mineralizacin o la inmovilizacin
Mayrold, D. D. Transformations of Nitrogen, En: Princi- neta. Explique sus resultados. Este proceso microbiano es realizado por un grupo limita- c. Procesos industriales, como el de Haber-Bosch
ples and Applications of Soil Microbiology 1998, 10) Analice las causas de prdidas de nitrgeno en eco- do de protistas inferiores llamados tambin diazotrofos (1914)
Sylvia, D. M., J. J. Fuhrmann, P. G. Hartel, D. A. sistemas naturales y formas a implementar para evi- (diazo=N2, trofo=nutricin) a temperaturas y presiones N2 + H2 2NH3
Zuberer, (eds), Prentice Hall, New Jersey, 259-294 tarlas. normales, gracias a la accin de una enzima muy com- 1000C
pleja, la nitrogenasa. El N2 se reduce tambin por vas 200-300 atmsferas
no biolgicas. catlisis inorgnica
Este proceso representa menos del 30% de la fijacin to- Proceso bioqumico de la fijacin del N2 Cuadro 12- Prdidas de N en un suelo inundado NO3 NO2 NO

tal mundial. Vimos que otro 10% provendra de los proce- con nitratos y glucosa a distintas temperaturas
HNO H2N2O2 N2O
sos no biolgicos realizados en la atmsfera, es de supo- La fijacin biolgica del N2 consiste en la reduccin del

ner entonces que ms de un 60% del total de nitrgeno gas dinitrgeno hasta amonio; los intermediarios postu- (% N-NO3 agregado)
NO2NH2 N2
que se incorpora cada ao en el suelo y aguas provendra lados son diimida e hidrazina, aunque an no han sido temperaturaC 2 10 13 16 20 25 30 40 50 60 70
de la FBN. aislados. El amonio es rpidamente convertido en ami- N-perdido 20 80 80 83 85 87 92 91 90 92 0 La reduccin de nitrato a nitrito es catalizada por un nitra-
nocidos, protenas y luego en todas las molculas nitro-
to reductasa.
Cuadro 2 - Fijacin biolgica del nitrgeno atmos- genadas requeridas por la clula. El amonio formado se
combina con molculas carbonadas provistas por la clu- La vegetacin ejerce tambin un doble efecto sobre la
frico y flujo anual de N en trminos globales En bacterias esta conversin constituye la primera etapa
la fijadora en caso de fijacin por organismos en vida li- desnitrificacin: aporta donadores de electrones por exu-
dacin, restos de races, mantillo y, por otro lado, compite de dos vas metablicas diferentes: una respiratoria que
Fuente de fijacin x 106 toneladas/ao bre, o por la actividad fotosinttica del husped, en caso
con las bacterias por el nitrato disponible, reduciendo las conduce a N2O o N2 (desnitrificacin) y la otra asimilativa
de asociaciones con vegetales. Ocurren reacciones del
industrial (fertilizantes) 49 prdidas por volatilizacin. El efecto neto parece ser esti- que lleva a NH3. Algunas especies asimilan y respiran los
tipo de las siguientes:
atmosfrica (electroqumica) 10 mulante y el nmero de bacterias desnitrificantes es ele- nitratos: Aerobacter aerogenes, Micrococcus denitrificans.
otros procesos qumicos 35 vado en la rizosfera. La profundidad limita el proceso por La nitrato reductasa de P. aeruginosa es una sulfihidril
HOOC-CO-CH2--COOH + NH3 NH2-CHCOOH-CH2-CH2COOH + H2O
c. alfa-ceto c. glutmico c. glutmico disminucin de la materia orgnica. molibdo flavoprotena especfica para NADH y funciona
FBN total 170 glutrico deshidrogenasa con el citocromo c:
sistemas simbiticos 50 En resumen La desnitrificacin requiere aporte de com-
CH3-CO-COOH + NH3 CH3-CH-(NH2)-COOH + H2O NADH FAD citc

NO3 reductasa NO3

NO2
total en sistemas terrestres 139 puestos orgnicos rpidamente metabolizables como son
c. pirvico alanina
los azcares, o bien minerales para los auttrofos como

Leguminosas 35 S, Fe++, H2, alto nivel de nitratos y pobre drenaje. cit. oxidasa O2 H2O
arbreas (100-300 kg/ha/ao) Requisitos
granos (40-240 kg/ha/ao) Poder reductor: la fijacin biolgica del N2 es un proceso Pero la magnitud del proceso est tambin gobernada por La nitrato reductasa (Mo-Fe protena no hemnica) es inhibi-
abonos verdes (100-360 kg/Ha/ao) reductivo y numerosos compuestos orgnicos pueden ser la temperatura, el pH, la humedad, que regula la aireacin. da por el O2 que reprime su biosntesis. El paso siguiente:
empleados por los microorganismos fijadores hetertro- La volatilizacin es importante en aguas estancadas y en NO2 NO es mediatizado por una nitrito reductasa, que se-
cultivo de arroz (10-80 kg/ha/ao) 4 fos como fuente de carbono, energa y poder reductor. suelos bien drenados y con activa nitrificacin, que sufre gn el organismo es una hemoprotena con dos hemos de
pasturas (15kg/ha/ao) 45 perodos de anaerobiosis parcial en pocas de lluvias o lue- tipo c y d o una cuproprotena, ambas solubles, que emplean
otros cultivos (5kg/ha/ao) 5 La ferredoxina y la flavodoxina pueden actuar de dona- go de la aplicacin de restos orgnicos. Es menor en sue- el NADH o FADH. Se formara un intermediario hipottico, el
ecosistemas forestales (10kg/ha/ao) 5 dores de electrones in vivo y el metil violgeno y ditionito los permanentemente anegados por la imposibilidad de for- nitroxilo, tal vez en forma de complejo con la enzima.
otros ecosistemas (2kg/ha/ao) 10 de sodio se emplean como donadores no fisiolgicos en macin de nitratos. Las prdidas son importantes en zona
sistemas in vitro. tropical y en la zona templada en praderas. Cerca de la Resumen
cantidad N en suelos 105.000 superficie del suelo el nivel de materia orgnica, nitratos y Como vimos el ciclo del nitrgeno es complejo y el cono-
absorcin total de N 1.400 Las ferredoxinas son protenas-SFe, capaces de reducir microflora activa es mayor y es all donde se forma mayor cimiento de su funcionamiento en ecosistemas naturales
N mineralizado 3.500 la nitrogenasa cuyo potencial redox de -0,43 voltios pue- cantidad de nitratos que se pueden desnitrificar antes de es de sumo inters a los efectos de lograr mayor produc-
N desnitrificado 135 de variar en un determinado rango segn los componen- llegar a la zona radical, en anaerobiosis. tividad y sustentabilidad y para mejorar los problemas del
N perdido por erosin/lavado 85 tes de la protena. Las flavodoxinas son protenas sin ambiente. La mayora del N de los suelos se encuentra
hierro que poseen un flavin-mononucletido (FMN) como Como prctica agrcola conservacionista se aconseja en formas orgnicas que liberan lentamente las formas
grupo prosttico. Estn codificadas por el gen nifF y son agregar los donadores de electrones: materia orgnica minerales ms dinmicas. Los procesos de mineraliza-
La produccin de fertilizantes qumicos requiere una ener- capaces de transportar dos electrones. En Klebsiella pneu- como abonos verdes, rastrojos, etc. fraccionadamente en cin-inmobilizacin gobiernan el nivel de minerales y la
ga muy considerable para separar el H2 del gas natural o moniae, el donador de electrones a la enzima es una fla- el tiempo, evitando su acumulacin y el empleo de fertili- relacin C/N de la materia orgnica en descomposicin
del petrleo, menos cantidad para comprimir los reactivos vodoxina que es reducida directamente por la piruvato- zantes amoniacales y no ntricos e incluso el empleo de es uno de los factores que regulan estos procesos. La
y calentarlos y otra importante cantidad para el traslado reductasa, codificada por el gen nifJ. El formiato es un inhibidores de la nitrificacin. amonificacin es un proceso ms difundido y menos es-
y distribucin desde las plantas industriales al campo. La importante donador de electrones en organismos fijado- pecfico y exigente que el paso siguiente, la nitrificacin.
necesidad de conservar los combustibles fsiles, el car- res aerobios y anaerobios facultativos. El H2 ha sido des- Bioqumica de la desnitrificacin
bn, el metano y el petrleo incentiva las investigaciones crito como efectivo donador de electrones en extractos El esquema siguiente presenta los posibles mecanis- Los nitratos tienen mltiples destinos en la naturaleza: es
sobre la FBN. acelulares de Clostridium pasteurianum. mos: tomado por los vegetales y los microorganismos, es muy
ducen en altos niveles de agua y en suelos mal drenados. serv que en ciclos de 10 das hmedos y 10 das secos En los organismos fotosintticos la fuente de poder reduc- distintos nombres segn los laboratorios que las purifi-
Pueden coexistir, como vimos, habitats anaerobios (inte- se pueden remover un 67% del N de la materia orgnica. tor proviene del flujo electrnico derivado de la clorofila. caron.
rior de agregados, rizosfera) en suelos aereados.
N perdido
pH: la desnitrificacin es sensible a la acidez y las prdi- Energa (ATP): en trminos fisiolgicos la fijacin del N2 El componente I, tambin denominado Mo-Fe prote-
das en ambientes muy cidos no pueden atriburse direc- es un proceso muy costoso para la clula. Se calculan na, Azofermo, dinitrogenasa y est formada por 4 subu-
100 entre 12 y 24 los ATP requeridos para reducir un mol de
1000 tamente a causas biolgicas. Sobre el pH 6,0 se forma nidades de cadenas polipeptdicas. En Azotobacter su PM
% del N-NO agregado
N2O pero se reduce a N2 que es el gas dominante. Debajo N2. Esta molcula se genera en la clula por los procedi- es de 220.000 y posee 22-24 tomos de Fe y 2 de Mo.
75 800 de pH 6,0 la reduccin es inhibida y predomina el xido mientos habituales: Vida media en el aire: hasta 20 minutos.
400
nitroso: la produccin de N2O es mxima en suelos ci-

50 200 dos y mnima en neutros. La reduccin ulterior N2O a N2 fosforilizaciones oxidativas en organismos aerobios El componente II, o Fe protena o Azofer, ferropro-
se produce en todos los casos. El ptimo del grupo se tena, dinitrogenasa reductasa, PM 55.000-66.000, po-
25 fosforilaciones a nivel del sustrato en anaerobios
sita en el rango neutrfilo: 7,0 - 8,2 coincidente con la see 2 subunidades proteicas con 4 tomos de Fe y unio-
mxima actividad bacteriana, pero los rangos se extien- fotooxidaciones en organismos fotosintticos nes sulfuro lbil., vida media en el aire 0,5-0,75 segun-
0
50 den desde pH 4,5 a 10,0. dos. El complejo estara en equilibrio dinmico con sus
0 10 14 18 22 das de incubacin dos componentes:
En estudios in vitro se han utilizado sistemas artificiales de
Figura 9- Efecto de la materia orgnica (mg/kg) Temperatura: el proceso ocurre lentamente a bajas tem- generacin de ATP, no empleando ATP puro, pues se com-
en la desnitrificacin peraturas (2C) y la velocidad de prdida de nitratos au- prob que la acumulacin de ADP inhibe a la nitrogenasa. Protena Mo-Fe + 2 Protena Fe N2asa
menta con la temperatura. El ptimo para algunos auto-
La alternancia de perodos de buena y mala aireacin ejer- res se sita en el rango termfilo (40-75C). La desnitrifi- Resumiendo: Extractos con actividad nitrogenasa se han preparado a
ce un efecto acelerador de las prdidas de N por desnitri- cacin a bajas temperaturas tiene gran significado agr- en los organismos hetertrofos los compuestos org- partir de organismos diferentes: aerobios, anaerobios,
ficacin. La figura 10 muestra la evolucin del nitrgeno cola ya que posibilita prdida de nitrgeno en las estacio- nicos son empleados como fuente de carbono, de po- microaeroflicos y algunas cianobacterias y sistemas sim-
total (Nt) y del N-NO3 en un suelo incubado a 35C du- nes fras cuando el suelo no posee una cubierta vegetal der reductor y de energa biticos con leguminosas y no leguminosas. Se han aisla-
rante 60 semanas en tres condiciones: que absorba a los nitratos. Es aconsejable mantener una do nitrogenasas que no dependen del Mo, sino del vana-
en los fotosintticos, es el flujo electrnico derivado
vegetacin extendida que puede luego ser enterrada evi- de los sistemas pigmentarios, el que llega a reducir si- dio (V) (nitrogenasa 2) y otra que no depende ni del Mo ni
a.mantenido constantemente a 16-20% de humedad tando prdidas de nitrgeno. del V, la nitrogenasa 3, que es una FeFe-protena, con
multneamente al N2 y al CO2
b.mantenido siempre saturado en agua propiedades y afinidades por los sustratos diferentes a la
c.saturado en agua la primera mitad del ciclo (3 sema- Metales: constituyen otro requerimiento imprescindible clsica nitrogenasa. Son las llamadas nitrogenasas al-
nas) y secado hasta 18% de humedad y mantenido as N-NO3 ternativas.
mg/kg para la nitrogenasa. El magnesio reacciona con el ATP
la segunda mitad del ciclo (3 semanas). para dar la sal monomagnsica, que reacciona con la ni-
150 1000 a La figura 1 (Gonzalez-Lopez, Lluch-Pl, 1992) presenta
a trogenasa, segn los modelos que explican el funciona-
Se repite el procedimiento en cada uno de los ciclos. El 100 800 miento de esta enzima. Otros minerales presentes en la modelo de flujo electrnico en esta enzima y otros sustra-
Nt b
suelo permanentemente saturado volatiliza los nitratos mg/kg nitrogenasa son el hierro y el molibdeno. Suelos carentes tos reducidos tambin por el complejo enzimtico.
pero no puede producirlos ms en anaerobiosis. La alter- 50 600
en estos elementos limitan la fijacin.
b c c
nancia de saturacin y drenaje causa la mayor prdida de 0 400 Sustratos de la enzima
Nt: en saturacin el humus se mineraliza lentamente a La nitrogenasa es la enzima responsable de la reduc- El dinitrgeno es el sustrato natural de la enzima, es re-
ciclos de 6 semanas ciclos de 6 semanas
amonio, que es oxidado a nitrato en la segunda parte del cin y dada su complejidad resulta muy difcil de purificar. ducido a amonio en una reaccin irreversible que va acom-
ciclo, perdindose en el perodo de anegamiento. Adems, por su extremada sensibilidad frente al O2 los paada de la liberacin de H2. La relacin entre H2 produ-
Figura 10- Prdidas de N en suelo sometido cido/N2 reducido puede variar segn las nitrogenasas de
trabajos in-vitro se han limitado en el tiempo. Recin en
Como consecuencia parte del N del humus se volatiliza. a distintos tratamientos los microorganismos, pero nunca es inferior a 1.
1960, se logr purificar la enzima a partir de un organis-
mo anaerobio, el Clostridium pasteurianum. Hacia 1974
Este principio se aplica en las plantas de tratamientos El cuadro 12 muestra el efecto de la temperatura de incu- se lograron aislamientos a partir de unos 25 microorga- N2 + 16 ATP + 8 e- + 10 H+ +
2NH4 + H2 + 16 Pi
de aguas servidas; ciclos de aerobiosis y anaerobiosis bacin en la desnitrificacin de nitratos en 30 das en sue- nismos, incluidos los aerobios, pero trabajando siempre
eliminan prcticamente todo el nitrgeno orgnico por ni- lo inundado con glucosa. Se verifica el ptimo en el rango en ausencia de O2. Hasta la dcada de 1960 se pensaba que el dinitrgeno era
trificacin y desnitrificacin. En columnas de suelo se ob- termfilo. el nico sustrato de la enzima, pero se evidenci que la
La enzima est integrada por dos componentes, dos reaccin era inhibida por determinados anlogos del N2,
metaloprotenas fcilmente separables que recibieron pequeas molculas con triple enlace, como el acetileno,
cianuro, azidas, etc. (Zuberer, 1998). Se demostr que es- Proteccin frente al oxgeno Thiobacillus denitrificans oxida S, H2S y difiere de los otros Pero el oxgeno ejerce adems un rol indirecto, ya que es
tas molculas son sustratos que podan ser reducidas por La fijacin de N2 requiere un acoplamiento eficiente entre thiobacilos por su capacidad para crecer anaerbicamen- requerido para la produccin de nitratos. La desnitrifica-
la enzima (cuadro 3). El acetileno es un inhibidor no com- los sistemas generadores de ATP, que en muchos diazo- te cuando estn presentes los nitratos: cin se favorece en agregados de ms de 4 mm de di-
petitivo de la reduccin del N2 (figura 1), mientras que el N2 trofos es la fosforilacin oxidativa y la proteccin de la metro ya que resulta difcil al O2 llegar por difusin hasta
inhibe competitivamente la reduccin del acetileno nitrogenasa frente al oxgeno. Tericamente todos los dia- S, S2O3= + NO3 + H2O SO4= + N2 + H+ el centro donde ocurrir la desnitrificacin. El suelo est
zotrofos protegen a la enzima segn distintas estrategias. constituido por un mosaico de habitats, coexistiendo los
Inhibidores Hidrogenomonas agilis y Micrococcus denitrificans oxidan oxigenados para la oxidacin del amonio y los anaero-
El H2 es un inhibidor competitivo de la reduccin del N2, Polmeros extracelulares: cpsulas y capas mucosas li- el H2 con reduccin de nitratos. Sporovibrio ferrooxydans bios, donde se reducen los nitratos.
pero no de la de protones, ni de otra reduccin catalizada mitan el flujo de oxgeno a la clula. reduce nitrato en anaerobiosis, oxidando Fe++.
por la enzima. El O2 inactiva ambos componentes de la La alternancia de perodos de buena y mala aereacin, o
N2asa, acta como inhibidor no competitivo. El mecanis- Microaerofilia: diazotrofos aerobios migran hacia regio- El rol de estos organismos en naturaleza no se puede perodos de lluvia intermitentes pueden facilitar la forma-
mo no est totalmente dilucidado, puede relacionarse con nes de baja tensin de O2 donde pueden expresar la ni- inferir a partir de estudios en cultivo puro. De todos mocin y la reduccin consiguiente de los nitratos.
la expresin de los genes nif o con la formacin de radi- trogenasa. dos, su nmero no es nunca alto en ecosistemas natura-
cales libres (superxidos) generados en el ambiente al- les y las mayores prdidas de nitratos se producen por El cuadro 11 muestra la relacin entre el nitrgeno perdi-
tamente reductor donde funciona la enzima. Proteccin respiratoria: una intensificacin del proceso los hetertrofos. do como gas y la atmsfera de incubacin de los nitratos.
respiratorio permite la reduccin del O2 a concentracio-
N2 C2H2 nes inocuas para la enzima. Proceso descrito en Azoto- Ecologa Cuadro 11- Efecto de la composicin de la
e e H+
bacter, se induce un cambio en la actividad de los citocro- La restriccin de la actividad desnitrificante a pocos gne- atmsfera en la desnitrificacin

H2 mos de la CTE y un desvo del flujo de electrones que ros hace que la magnitud el proceso est marcadamente
C2H4 -
NH3+H2 estimulan el consumo de O2 hacia oxidasas terminales afectada por el ambiente. Los cambios en ste pueden N perdido como % del N-NO3 agregado
2MgATP 2MgADP
+2Pi alternativas. La respiracin es ms ineficiente y produce estimular o bien inhibir las prdidas de nitratos. atmsfera agitado estacionario
N2 menos ATP/mol de sustrato.
C2H2 aire 28,2 81,0
H+ Las condiciones que deben reunirse para que el proce-
e e oxgeno 0,0 28,0

Proteccin conformacional: cultivos de Azotobacter po- so hetertrofo sea estimulado:
H2 C2H6 nitrgeno 80,1 79,2
NH3+H2 C2H4 seen este mecanismo relacionado a modificaciones bio-
vaco 78,6 80,0
2MgATP 2MgADP qumicas de la enzima (se combina equimolecularmente alto nivel de nitratos,
+2Pi
con una tercera SFe-protena llamada SFeII en presencia sustancias donadoras de electrones (materia org-
Figura 1 - Representacin de la estructura de las nitrogenasas de iones Mg). nica) La materia orgnica estimula la desnitrificacin, pues
A) nitrogenasa dependiente del Mo. B) nitrogenasas anaerobiosis como ya vimos la mayora de las especies activas son
alternativas Inhibicin reversible: un mecanismo alternativo propues- hetertrofas. Ejerce doble rol:
Las subunidades forman parte de la Fe-protena, la es to para Klebsiella y Rhodopseudomonas est relaciona- Los nitratos se producen por nitrificacin o son aporta- directamente, acta como fuente de carbono y de electro-
especfica de las nitrogenasas alternativas, los centros 4Fe- do en la competencia entre dos sistemas enzimticos, nidos en fertilizantes ntricos, amoniacales u orgnicos que nes e indirectamente, provoca una eclosin de microor-
4S y cofactores se localizan en cada protena. trogenasa y cadena respiratoria por una reserva comn pueden ser llevados a nitratos. Tambin pueden provenir ganismos en su mayora aerobios, que disminuyen el nivel
de poder reductor. de otros horizontes arrastrados por el agua. Incluso en de oxgeno facilitando las prdidas por desnitrificacin.
suelos de arrozales donde en general se fertiliza con amo-
Cuadro 3 - Sustratos de la nitrogenasa
Las protenas como ferredoxina o flavodoxina, donadores nio, ste puede oxidarse a nitrato en las capas superiores La figura 9 presenta las prdidas de N en el suelo incuba-
Sustrato Km(mM) Productos de electrones a la N2asa, son tambin fcilmente oxida- del agua y luego ser desnitrificado ms abajo. do con nitratos (5 mg de N-NO3) en anaerobiosis a 25C
bles, generando radicales libres. Esta oxidacin podra y diferentes dosis de paja de trigo. Las sustancias rpida-
dinitrgeno 0,1 NH3, H2 mente descomponibles favorecen el proceso: azcares
relacionarse con la inhibicin reversible. La anaerobiosis se logra fcilmente en aguas, a unos
azida (NN-N-)- 1,0 N2, NH3, N2H4 simples, cidos orgnicos. Los abonos verdes estimulan
pocos centmetros de la superficie y en los suelos existen
cianuro (CN)- 0,4 CH3NH2, NH3, CH4 el proceso y las pajas en menor proporcin.
Separacin espacial de la nitrogenasa: en clulas es- microagregados en los cuales la demanda biolgica ago-
xido nitroso (N20) 1,0 N2, H20
pecializadas como los heterocistos en cianobacterias o ta rpidamente el O2 y como ste es un gas que difunde
acetileno CHCH 0,1 C2H4 Otros factores
las vesculas en Frankia, la separacin de la actividad lentamente por los poros del suelo y es poco soluble en
protones H+ - H2 Humedad: en suelos bien drenados la desnitrificacin se
nitrogenasa puede ser temporal o espacial. En cianobac- agua, se crean ambientes anaerobios en el seno de sue-
alquilcianuro correlaciona con el nivel de humedad. Los nitratos se re-
terias sin heterocistos los procesos son secuenciales: los bien estructurados.
(R-CN) 10 RCH3, NH3
durante el da se produce la fotlisis del agua y se genera
Desnitrificacin mayora de las especies amonificantes, que tambin ATP y en perodos oscuros se activa la nitrogenasa y la de la sntesis de aminocidos. Alta concentracin de glu-
pueden reducir nitratos. Estos grupos no ocasionan pr- respiracin mantiene el nivel de O2 adecuado. La fijacin tamina o de algn otro aminocido disminuye la actividad
Efectos en la naturaleza didas de N, ya que nitrito y amonio son empleados por la en especies heterocsticas se puede realizar en el aire. de la enzima y suprime tambin la produccin de amino-
los vegetales se perjudican ya que los nitratos son su microflora. cidos adicionales.
principal fuente de nitrgeno Barreras a al difusin: los ndulos de leguminosas y
el ambiente se beneficia ya que los nitratos altamente Los desnitrificantes verdaderos que reducen nitratos actinorrizas ofrecen varios mecanismos de proteccin que
txicos y solubles son lavados del suelo y llevados a hasta N2 u xido nitroso, slo representan un 4% de las analizaremos en otro captulo, pero la barrera mecnica Mtodos para evaluar la FBN
cauces de agua. La desnitrificacin es vital en la conti- especies testadas y son bacterias tpicas. Ningn protista de las clulas de la corteza del ndulo limita la entrada
nuidad del ciclo del nitrgeno. Si no ocurriera este pro- superior es capaz de obtener energa de esta reaccin de O2 a la zona bacteriana. Sistemas membranosos in- Crecimiento y morfologa
ceso, el nitrgeno de la tierra, incluyendo el N2 atmosf- Son especies de pocos gneros: Pseudomonas, Achro- ternos de muchos diazotrofos, del tipo de los mesosomas, Si se logra incremento en la biomasa o en el nmero
rico, se acumulara en los ocanos, impidiendo la vida mobacter, Bacillus, Spirillum, Micrococcus. limitan la llegada del oxgeno a la enzima. de organismos inoculados en un medio de cultivo sin
terrestre. La desnitrificacin mantiene tambin la pota- nitrgeno combinado, puede afirmarse que el organis-
bilidad de las aguas, ya que altas concentraciones de Son anaerobias facultativas, que emplean nitratos en con- Regulacin de la nitrogenasa mo es un diazotrofo. Es necesario confirmar la capa-
nitratos son txicas. diciones de anaerobiosis o de muy baja concentracin de La figura 2 esquematiza los mecanismos de regulacin cidad fijadora, pues muchos organismos crecen a ex-
O2 (0,2 mg/L en medio lquido). El O2 reprime la formacin de la FBN. El nitrgeno combinado suprime la fijacin por pensas de pequeas impurezas de los medios de cul-
Microorganismos responsables nitrato, nitrito y xido nitroso reductasa y adems inhibe inhibicin de la sntesis de la nitrogenasa, mediante me- tivo, o crecen como contaminantes luego de un pe-
Los microorganismos vinculados a la desnitrificacin no la funcin de la que ya est sintetizada. canismos de represin de la expresin de los genes res- queo desarrollo de los diazotrofos.
dependen de los nitratos para su desarrollo. Muchos de ponsables de la sntesis de los componentes de la enzi-
ellos son tambin activos en la proteolisis, amonificacin Aislamiento: en condiciones de anaerobiosis, con nitrato ma (genes nif). En Klebsiella pneumoniae la represin ha La presencia de clulas especializadas en la fijacin del
y otras transformaciones biolgicas. La presencia de una y donadores de electrones, en general orgnicos, ya que sido estudiada en detalle y la molcula crucial es una en- N2, como los heterocistos en cianobacterias filamento-
alta poblacin desnitrificante en suelos, aguas, no implica la mayora de las especies son hetertrofas. Luego de un zima, la glutamino sintetasa, que cataliza el primer paso sas y las vesculas, en Frankia, es indicio de que el
que las condiciones sean las ptimas para el proceso; se enriquecimiento producen gran cantidad de gas y alcalini- en la sntesis de aminocidos: el amonio reacciona con el organismo puede fijar N2.
refleja solamente un gran potencial desnitrificante. zan la solucin. Muchas especies de Bacillus son termfi- glutamato formando otro aminocido: la glutamina.
las y se aislan a 55-65C. Contenido de nitrgeno
6 inhibicin por Se permite desarrollar al microorganismo o sistema sim-
As, la capa arable de suelos contiene ms de 10 desni- glutamato retroalimentacin
trificantes/g suelo seco. La poblacin es mayor en la Hetertrofos: CH3 COOH + NO3 CO2 + N2 + H2O + OH
bitico en un medio sin nitrgeno o con muy poca canti-
NH3 glutamato
vecindad de las races y el potencial de volatilizacin es N2 dad. Las medidas de este elemento por tcnicas conven-
sintetasa
grande, pero deben reunirse las condiciones para que Sustrato: innumerables molculas resultantes de la de- glutamina cionales como la de Kjeldahl (digestin cida en caliente
nitrogenasa
los organismos cambien su metabolismo aerobio por una gradacin de polmeros: celulosa, hemicelulosas, almidn de la materia orgnica, destilacin y titulacin del NH3),
respiracin anaerobia, con nitrato como aceptor final de se usan como fuente de carbono, asi como algunos com- permiten detectar fijacin si sta es de cierta magnitud
puestos aromticos y sintticos. comp. II otros
electrones. transporte reducido aminocidos (ms del 1% del N inicial). Los errores son altos y la mues-
de e-
cofactor Mo
tra se destruye en el anlisis.
Son bacterias auto y heterotrficas anaerobias Las asociaciones comensalsticas entre los degradado- proteinas
facultativas con dos cadenas transportadoras de elec- res de estos polisacridos y las bacterias desnitrificantes componente I comp. II oxidado Empleo de istopos del N
trones han sido descriptas como muy frecuentes. Con raras ex- La aplicacin del istopo radioactivo N13 es muy limita-
nif B nif F nif D nif H
en aerobiosis realizan respiraciones aerobias del sus- cepciones los desnitrificantes son incapaces de fermen- control de la expresin de los genes da por la corta vida media (11 minutos) y su elevado
trato, por ejemplo, glucosa tar azcares y no pueden crecer en anaerobiosis sin ni- costo. El uso del istopo estable N15 constituye una de
tratos ni nitritos. Ninguno es anaerobio estricto. Figura 2- Esquema del control de la nitrogenasa las mejores pruebas de la fijacin del N2. Es ms sensi-
en anaerobiosis degradan el mismo sustrato por res- ble que el Kjeldahl (1000X) (Stevenson y Cole, 1999).
piracin anaerobia con nitrato como aceptor de elec- Auttrofos: se citan en la bibliografa unas pocas espe-
trones cies de bacterias auttrofas facultativas, que realizan des- La mayora de los otros aminocidos se forman por trans- Las metodologas empleadas se basan en:
nitrificacin oxidando un sustrato mineral, H2, S, que se ferencia del nitrgeno desde la glutamina a otros com- 15
uso de N gas: la muestra se incuba en sistema cerra-
2
Un 85% de las especies testadas pueden reducir nitra- desarrollan en el aire o anaerbicamente con compues- puestos. do con N2 enriquecido con N15 y luego de un perodo apro-
tos a nitritos. El grupo que reduce los nitratos hasta amo- tos inorgnicos como fuente de energa y O2 o NO3 como piado se convierte todo el N de la muestra en NH3 por
nio es tambin amplio, un 45% del total, e incluye a la aceptores de electrones, respectivamente. La glutamino sintetasa es regulada por inhibicin feed digestin cida, se destila y se recoge el amonio formado,
back o retroalimentacin, por distintos productos finales por ejemplo en cido brico. En el momento del anlisis
se oxida este amonio a N2 el que se analiza en espectr- N2 + 8H+ + 8- 2NH3 + H2 C2H2 + 2H+ + 2e- C2H4 que se mineralicen las clulas o los productos nitroge- En suelos cidos de pH 5,0 o menor, los gases nitrogena-
metro de masa, que separa en un campo magntico los nados excretados. dos pueden producirse qumicamente, con NO a partir de
distintos istopos segn su masa (30, 29 ,28). El mtodo Los resultados se expresan en etileno formado o aceti- nitritos. En la mayora de los suelos, la desnitrificacin
posee escasa utilidad en condiciones naturales y limita- leno reducido sin efectuar extrapolaciones a nitrgeno b. Reduccin desasimilativa o respiracin de los ni- respiratoria constituye la principal causa de prdidas de
ciones en condiciones controladas. fijado. El mtodo se usa para comparar gran cantidad tratos: muchos microorganismos en anaerobiosis total o nitratos. En la llamada desnitrificacin no respiratoria
de muestras (cepas, suelos, plantas noduladas) pero no parcial sustituyen el O2 por los nitratos como aceptor de (Mayrold, 1998), los organismos producen xido nitroso
15
uso de fertilizantes o sustratos enriquecidos con N : hay que olvidar que la prueba ms concluyente de ca- electrones en respiraciones anaerobias, generando ATP en condiciones aerobias, pero no obtienen energa de este
I. tcnica de la dilucin isotpica, se acepta como el ms pacidad fijadora la constituye la incorporacin de to- y poder reductor. De acuerdo al organismo y a las condi- proceso que es realizado por numerosas bacterias, hon-
til para medir la FBN mos de N15. ciones del medio, los productos finales pueden ser: gos y algas. Con excepcin de pocos gneros, (Lactoba-
II. tcnica que usa el valor A (proporcin del N15 que la NH4+, NO, N2O, NO2, N2 y an otras formas del nitrgeno, cillus, Fusarium), la fraccin de nitratos convertida, es en
planta toma del fertilizante) que sern excretados por las clulas al medio. Otros pue- general menos de 25%, pero su importancia en la natura-
Los microorganismos fijadores de nitrgeno den reducirlos hasta amonio. leza no est bien determinada.
evaluacin de la diferencia que existe en la abun-
dancia natural en N15 entre la atmsfera y el suelo. Esta Los diazotrofos: el grupo est integrado como vimos por Si el N2 el N2O son los productos formados en la respi- Bacterias que respiran nitratos convirtindolo a nitrito
tcnica exige gran precisin y brinda datos de gran con- protistas inferiores: bacterias hetertrofas aerobias, racin de los nitratos, el proceso recibe el nombre de des- en condiciones anaerbicas, obtienen energa por fos-
fiabilidad. anaerobias y anaerobias facultativas, un representante de nitrificacin. forilizacin oxidativa (368kcal mol1 NO3). Bacterias en-
bacterias quimioauttrofas y microorganismos fotosintti- tricas, que son anaerobios facultativos, son ejemplos
Se evalan los incrementos en la abundancia en N15 cos: bacterias y cianobacterias. Metodologa: la cromatografa de gases permite seguir tpicos, a pesar de que muchos de ellas pueden tam-
sobre un valor promedio de 0,364% que representa la con mucha precisin el contenido de N2 y N2O en la at- bin reducir nitratos a amonio, proceso conocido como
abundancia natural de este istopo en la atmsfera. El cuadro 4 presenta a los microorganismos fijadores y msfera del suelo y el empleo de N15-NO3 permite eva- reduccin desasimilativa de nitratos a amonio, bajo
Valores superiores en 0,015% a ese promedio se acep- sus asociaciones con vegetales y animales, en combina- luar con exactitud estas causas de prdidas de nitrge- condiciones anaerobias por varios gneros bacteria-
tan como evidencia positiva de fijacin. Las tcnicas ciones simbiticas, nodulares y no nodulares y en asocia- no. Actualmente se trata de evaluar esta importante cau- nos:
isotpicas constituyen sin duda la herramienta ms ciones ms laxas y menos obligatorias, como son las aso- sa de prdida de fertilizantes en suelos y aguas, aplican-
importante en la evaluacin de la fijacin en todos los ciaciones rizosfricas, espermatosfricas y filosfricas, en do tcnicas de evaluacin tanto in-vitro como in-situ.
sistemas biolgicos, en el laboratorio o en el campo donde los organismos sobre todo hetertrofos se ven es- NO3 + 4H2 + 2H+ NH4+ + 3H2O
(Barea, 1991). timulados por la provisin de compuestos carbonados por Las reacciones pueden iniciarse con nitritos o nitratos y los
parte del vegetal. productos finales se pierden a la atmsfera (cuadro 10). Se transfieren un total de 8 electrones en la reduccin,
Determinacin de la actividad nitrogensica con rendimiento energtico de 143 kcal mol1 de nitrato.
El descubrimiento de que la nitrogenasa puede reducir Se analizarn los grupos ms importantes de diazotro- Cuadro 10- Procesos que involucran reduccin de La primera etapa es la reduccin de los nitratos a nitrito,
otros sustratos adems del N2 permiti desarrollar desde fos, comenzando por aquellos reconocidos como fijado- nitratos ligada a la produccin de energa por fosforilacin oxidati-
1966 un mtodo analtico rpido y eficaz que emplea ace- res en vida libre, es decir los que expresan su nitrogena- va por respiracin. Muchas especies bacterianas que rea-
tileno que inhibe la reduccin del N2 por la nitrogenasa y sa sin requerir la proteccin o la colaboracin de otro Procesos Productos Energa Regulada por Condiciones lizan este proceso no ganan energa adicional por la re-
conservada del suelo
es reducido a etileno. Ambos se evalan en cromatogra- organismo, aunque pueden ser favorecidos por los nu- duccin de los nitritos a amonio.
+ + +
fa en fase gaseosa con columna de resinas como el Po- trientes y el ambiente con baja pO2 que le ofrece la ri- Asimilativo NH4 no NH4 , N-org baja conc.NH
4
Asimilacin o
rapak, con N2 como gas transportador y detector de ioni- zosfera. inmovilizacin
Los investigadores se preguntan sobre las ventajas de
zacin de llama. de nitratos esta reduccin de los nitratos a amonio, dada la escasa
Ningn eucariota posee esta importante capacidad y Desasimilativo energa generada. Para algunos esta energa servira
*quimiodesni- NO ms que no cidas
Esta tcnica es muy usada por su rapidez, sensibili- los intentos de la ingeniera gentica tratando de trans- trificacin N2
para regenerar poder reductor reooxidando los NADH2.
dad y por la estabilidad del producto formado, el C2H4, ferir esta propiedad cuando los genes nif se encuen- *desnitrificacin NO no ? aerbica Estas observaciones en cultivos puros se correlacionan
2
que permite trasladarlo en frascos cerrados tipo anti- tran en plsmidos o estn integrados al cromosoma no respiratoria con estudios ecolgicos: las bacterias que reducen ni-
bitico hacia el laboratorio. La conversin terica en- bacteriano, son numerosos y se han logrado algunos * respiracin tratos a amonio predominan en ambientes ricos en car-
NO3 (*) NO2 si O2 anaerbica
tre moles de acetileno y de N2 reducidos por el inter- diazotrofos sintticos. Numerosos experimentos in- *NO3 reduccin
bono (mayor necesidad de poder reductor), como los
cambio de electrones es entre 4 y 3/1: N2/(C2H2) no tentan transferir esta propiedad a vegetales, sobre todo desasimilativa sedimentos y aguas servidas, mientras que los desni-
a NH4+ NH4+ N2O pocas cepas O2 anaerbica
es correcto, ya que la solubilidad en agua es superior a gramneas, pero el funcionamiento de estas plantas trificantes (reduccin de los nitratos a N2, N2O) dominan
*desnitrificacin
para el acetileno, y ste no constituye un sustrato fi- transgnicas en la naturaleza, es motivo de contro- respiratoria N2 N2O NO si O2 anaerbica
en ambientes pobres en carbono, como los suelos.
siolgico. versia.
La vegetacin: es frecuente observar nivel de nitratos Las mayores prdidas ocurren en suelos livianos, areno- Cuadro 4 - Diazotrofos y sus asociaciones
inferior en la rizosfera en relacin al suelo sin cultivos. sos. Conviene mezclar los fertilizantes que liberan amo-
Los procesos de inmovilizacin son all estimulados por nio con los primeros 5cm del suelo. Heterotrofos
accin de la poblacin hetertrofa aumentada. Pero los Vida libre Asociaciones con nodulos
s/nodulos
nitratos tambin disminuyen por aumento de la activi- Reacciones que involucran a los nitritos

dad desnitrificante y la presencia de sustancias inhibi- aerobios Azotobacter leguminosas

doras de los nitrificantes excretadas por ciertos cultivos 3 HNO2 2 NO + HNO3 + H2O Azotococcus Rhizobium lupini
o producidas en la incubacin del suelo. Azomonas R. leguminosarum bv viciae,trifolii,phaseoli
Ciertos elementos, Cu y Mn, en suelos cidos, reaccio- Beijerinckia Sinorhizobium meliloti

En resumen: la degradacin de los restos vegetales en nan con los nitritos, liberando NO (xido nitrico), que es Derxia rizosfera S. fredii
S. terangae

el suelo es un fenmeno complejo y la dominancia de las bastante estable y puede pasar a la atmsfera:
etapas de mineralizacin o de inmovilizacin del nitrge- NO + O2 NO2 N2O4, o ser absorbido por el suelo. anaerobios Klebsiella Bradyrhizobium japonicum
no depende de muchos factores, entre ellos, de la com- Los xidos de nitrgeno reaccionan con el agua del aire, facultativos Bacillus B. elkani
(aerobios Enterobacter Azorhizobium cualinodans

plejidad qumica de los sustratos, de las interacciones de a pH inferior a 5,5:
cuando no Escherichia filosfera
la temperatura y la humedad, del tipo de suelo, del pH, de N2O4 + H2O + 0,5 O2 2 HNO3 Estas causas de
fijan N2) Propionibacterium

la incorporacin simultnea de fertilizantes nitrogenados prdidas de N no son importantes, ya que poco nitrito pue- no leguminosas
y otros nutrientes. de formarse a pH cido. Frankia, con:
HNO2 + RNH2 N2 + H2O + ROH (reaccin de Van Alnus, Casuarina

En el campo puede ocurrir inmovilizacin que afecta el Slyke). Tambin poco importante pues requiere acidez y microaerfilos Mycobacterium con animales Eleagnus, Myrica
desarrollo de cultivos posteriores, pero la magnitud y la aerobiosis. (aerobios Azospirillum Dryas, Ceanothus
duracin de la misma son menores que las evaluadas en HNO2 + NH3 NO2NH4 2 H2O + N 2 Reaccin cuando no Aquaspirillum
ensayos de laboratorio e invernculo, y el nitrgeno pue- importante a pH alcalino. fijan N2) Rhizobium
de ser aprovechado por los cultivos desde las primeras Frankia
etapas de la descomposicin. Lavado, como vimos, parte del amonio, los nitritos y ni-
Clostridium

tratos son solubles en agua y pueden por lo tanto ser lle-
vados a horizontes fuera del contacto con las races. anaerobios Desulfovibrio
Prdidas de nitrgeno estrictos
Erosin, constituye en ciertas zonas una causa importante Autotrofos
En esta seccin analizaremos las causas ms importan- de prdida de nitrgeno para el suelo, por voladura de sue- Vida libre Asociaciones con nodulos
tes por las cuales las distintas formas qumicas del nitr- los superficiales (erosin elica) o por anegamiento con el s/nodulos
geno son volatilizadas o convertidas en formas no apro- consiguiente lavado y/o desnitrificacin (erosin hdrica).

vechables por los vegetales y la mayora de los microor- cianobacterias Anabaena lquenes
ganismos. aerobias Nostoc

Biolgicas Calothrix Azolla Cycadacea
Abiolgicas
microaeroflicas Plectonema

Volatilizacin del NH3, puede ocurrir a partir del agrega- Los nitratos sufren una serie de procesos microbianos en
Lyngbya Gunnera
do de abonos a base de urea, amonio anhidro, sales amo- ambientes naturales (aguas, suelos, barros) conocidos ge-
Oscillatoria
niacales, pero tambin luego de la incorporacin de res- nricamente con el nombre de reduccin de los nitratos. Spirulina

tos vegetales. Las prdidas son particularmente impor- Briofitas
tantes en las siguientes situaciones: Pueden dividirse en dos grandes categoras: hepticas
pH superior a 8,0 (suelos calcreos o aquellos cuyo pH a. Reduccin asimilativa, realizada por microorganis-

Rhodospirillum
local se eleva por amonificacin intensa) mos y vegetales y que conduce a la formacin de amo- bacterias Rhodopseudomonas
temperatura elevada y desecacin nio empleado en la biosntesis de constituyentes nitro- fotoauttrofas Chromatium
aplicacin de fertilizantes en la superficie del suelo genados de la clula. No implica prdida de N para el Chlorobium
suelos de baja capacidad de intercambio catinico. ecosistema, sino una inmovilizacin transitoria hasta
quimioauttrofas Thiobacullus ferooxidans
Diazotrofos en vida libre Pueden desarrollarse en la oscuridad heterotrficamente, La figura 7 muestra los cambios de inmovilizacin neta en Factores que afectan el ciclo de mineralizacin-
pero entonces son incapaces de fijar N2. Aunque no han materiales descompuestos con distinto contenido de N%. inmovilizacin del nitrgeno
Por sus relaciones con el O2 los diazotrofos son (cuadro 4): sido estudiadas todas las especies de bacterias fotosintti- Para acelerar el proceso es frecuente fertilizar con nitr- Estado del resto orgnico: el material fresco y picado
cas por su capacidad de fijar nitrgeno, existe consenso de geno. favorece su mineralizacin mientras que el secado pro-
aerobios estrictas, como la familia Azotobacteriaceae que la mayora de ellas estn dotadas de esta capacidad. voca un aumento en la C/N de la fraccin soluble en
anaerobios facultativos, como los gneros Bacillus, Como consecuencia de la predominancia de la inmovili- agua.
Klebsiella, Enterobacter Pocas referencias se encuentran sobre su rol en ecosis- zacin sobre la mineralizacin en la primera etapa, el N Temperatura, las bajas temperaturas no afectan de la
microaeroflicos como Azospirillum, Thiobacillus, Myco-
temas agrcolas, en parte porque muchos trabajos eva- mineral desciende (inmovilizacin neta). Luego y a medi- misma manera las distintas etapas de la mineralizacin.
bacterium, Acetobacter. Estos dos ltimos grupos se lan la fijacin en suelos y aguas sin detallar las especies da que la C/N disminuye y se llega a la relacin crtica, el As, vimos que las bajas temperaturas afectan ms a la
comportan como aerobios cuando crecen con N combi- responsables. Es reconocido que las bacterias fotosint- N mineral comienza a aumentar, pudiendo incluso supe- nitrificacin que a la amonificacin, que puede ocurrir
nado ticas contribuyen a la depuracin de suelos y aguas al rar el nivel inicial (etapa de mineralizacin neta). Se acos- en suelos a 5C y se duplica a 10C.
anaerobios estrictos, que no crecen ni fijan en aero-
consumir los sulfuros y aminas que perjudican a los culti- tumbra a medir el tiempo de renovacin o reciclaje del La humedad: conjuntamente con la temperatura cons-
biosis, con representantes de los gneros Clostridium, vos, liberando adems uracilo y prolina, empleados por N mineral, o sea el tiempo que transcurre entre la inmovi- tituye una de las variables que ms afecta al ciclo de
Desulfovibrio, Desulfotomaculum y productores de me- muchos cultivos, entre ellos el arroz. lizacin y la aparicin de N mineral nuevamente en el suelo. mineralizacin-inmovilizacin del nitrgeno. La mayo-
tano. Este perodo es variable, se citan datos del orden de una ra de los estudios analizan aisladamente el efecto de
jornada hasta varios aos. estos factores sobre la nitrificacin y pocos sobre el pro-
La mayora de las bacterias son hetertrofas, slo ha sido ceso global de mineralizacin. La nitrificacin es muy
descrito Thiobacillus ferrooxidans, como fijador de N2, qui- Con los dems elementos minerales ocurren procesos si- lenta a humedades cercanas al punto de marchitamien-
mioauttrofo que crece en condiciones muy cidas. El resto milares, pero las relaciones crticas C/P, C/S son ms al- to donde se acumula amonio o nitrito. El ptimo se sita
de los diazotrofos son bacterias fotosintticas, con repre- tas que para el nitrgeno. La figura 8 esquematiza los flu- alrededor de 0,1 baria de tensin. El amonio se acumu-
sentantes de las cianobacterias y de bacterias sulfurosas jos de N, S, P en sustratos orgnicos ricos y pobres en la tanto en sequedad como en inundacin, mientras que
y no sulfurosas anaerobias. nutrientes, en la descomposicin y su disponibilidad para a valores intermedios la produccin de nitratos supera
los cultivos. a la de amonio.
Figura 3- Bacterias fotosintticas: izquierda: Rhodospirillum, En suelos secos, la menor actividad biolgica trae apa-
Diazotrofos fotosintticos derecha: Chlorobium La inmovilizacin de nutrientes en la biomasa microbiana rejada menor inmovilizacin, al igual que en suelos
puede alcanzar valores elevados, del orden de 100 kg de sumergidos.
Bacterias fotosintticas anaerobias N, 80 kg de P, 70kg de K y 11 kg de Ca por ha. Como la Fertilizacin nitrogenada: la inmovilizacin es mayor
Se ha determinado capacidad de reduccin del CO2 y del Cianobacterias biomasa es reciclada cerca de 10 veces ms rpido que en suelo cultivado dado que ms materiales energti-
N2 en muchos representantes de este grupo de procario- Este grupo posee todas las caractersticas subcelulares de la fraccin orgnica muerta, gran parte de estos nutrien- cos (races, exudados) y microorganismos, estn pre-
tas anaerobios, la mayora en ambientes acuticos o ba- los procariotas, excepto el tipo de fotosntesis, que es la de tes son liberados en su reciclamiento. sentes. Los primeros estudios con N15 ya mostraron que
rros y sedimentos ricos en sulfuros. Pertenecen al orden las algas y vegetales. Son capaces de desarrollarse en me- gran proporcin del fertilizante permaneca en el suelo
Rhodospirillales (captulo 3) y pueden realizar metabolis- dio mineral y obtienen su C y N de la fijacin fotosinttica del inmovilizado en combinaciones orgnicas. Es necesa-
mo fotolito o fotoorganotrofo. Las bacterias purpreas no CO2 y N2. Con la obtencin de cultivos libres de contaminan- O CO rio tener en cuenta la adsorcin del amonio a los coloi-
2 2
sulfurosas (Rhodospirillaceae) fotoasimilan sustancias enzimas enzimas
tes bacterianos (muchas veces los responsables de la fija- extracelulares biomasa extracelulares des del suelo; en muchos ensayos todo el amonio no
orgnicas simples, muchas son incapaces de crecer con cin) por radiacin U.V. o agregado de antibiticos o coloran- microbiana recuperado se atribuye a la inmovilizacin. El amonio
sulfuros como nico donador de electrones, y si lo em- sustrato compuestos compuestos sustrato
tes en los medios de cultivo, el nmero de especies fijadoras rico en N, P, S simples simples pobre en N,P,S es ms inmovilizado que el nitrato ya que es fuente pre-
plean no se acumula S en la clula. Rhodospirillum ru- se increment rpidamente: de aproximadamente 165 gne- C/N<20/1 C/N>30/1 ferencial de N para los microorganismos.
brum es una especie en la que se efectuaron numerosos ros, en 8 familias y 3 rdenes, se encontr fijacin en 46 C/P<200/1 m neta i m i neta C/P>300/1
pH: la inmovilizacin del nitrgeno es escasa en suelos
estudios sobre su nitrogenasa (figura 3). C/S<200/1 C/S>400/1
gneros, de 7 familias y 3 subrdenes (cuadro 5). disminuda cidos, en donde los procesos de mineralizacin se de-
aumentada disponibilidad de
nutrientes en el tienen en amonio. El encalado del suelo favorece la
Las bacterias sulfurosas purpreas (Chromatiaceae) y las Las cianobacterias presentan tres tipos de clulas: ve- +
ecosistema
-3 ++
mineralizacin en detrimento de los procesos de reor-
(NH4 , NO3 , PO4 , Fe )
sulfurosas verdes (Chlorobiaceae) crecen con S= o S getativas, esporas o acinetos y heterocistos. Una ganizacin, aunque es necesario tener en cuenta la in-
como nicos donadores externos de electrones. El S en clula vegetativa puede diferenciarse en esporas y he- teraccin de este factor con otros como la humedad, la
la clula puede ser luego oxidado a sulfatos. La fotosnte- terocistos y todas poseen la informacin gentica para Figura 8- Flujo de nutrientes a travs de la biomasa temperatura, etc. Los pH neutros favorecen ambas eta-
sis de estos organismos es anoxignica (no liberan O2) y la sntesis de la nitrogenasa, que como vimos es muy microbiana pas del ciclo de mineralizacin-inmovilizacin.
la fijacin del N2 se realiza en anaerobiosis a la luz. sensible al O2.
La naturaleza qumica de las fracciones carbonadas y ni- Cuadro 9- Clculo terico en la degradacin de Los heterocistos son clulas rodeadas de gruesas pa-
trogenadas puede hacer variar esta relacin. As, restos paja de cereal redes y parecen vacas al microscopio de luz. Son en
ricos en lignina, difcilmente degradables, pueden consi- (C=40% y N=0,5%), por cultivos puros de microorganismos general de mayor tamao que las clulas vegetativas y
derarse con relaciones crticas superiores. estn ubicadas a intervalos a lo largo del filamento o
Organismo EficienciaC/N C asim N asim Dficit/exceso pueden presentarse terminalmente. Presentan sistemas
En el cuadro 8 se muestra la relacin C/N tpica de algu- hongos 30-40% 10/1 12-16 1,2-1,6 -0,7, -1,1 membranosos muy desarrollados con invaginaciones.
nos materiales orgnicos (Stevenson y Cole, 1999). (i neta) Poseen abundantes ribosomas y han perdido los grnu-
bacterias
aerobias 10-30 10/1 los estructurales de glicgeno y polifosfato. Estn co-
Cuadro 8- C/N de materiales orgnicos actinomices 15-30 5/1 nectados a clulas adyacentes por un poro en la pared
celular (figura 4).
Material C/N Abonos verdes
Biomasa microbiana 6 - 12 Materiales ricos en N% como los abonos verdes, las legu-
Cuadro 5 - Fijacin de nitrgeno en cianobacterias
Aguas residuales 5 - 14 minosas (2-3% N%), no presentan esta limitante y el ni-
Humus 10 - 12 trgeno mineral puede aparecer en el suelo desde el co-
Abonos animales 9 - 25 mienzo de la degradacin. Estas consideraciones teri- Suborden Familia Gnero
Residuos de leguminosas y abonos verdes 13 - 25 cas basadas en datos de nutricin microbiana resultan
Residuos de cereales y pajas 60 - 80 difciles de aplicar a la poblacin microbiana en ambien- Chroococcales Chroococcaceae Gleocapsa (1)
Residuos de bosques (madera) 150 - 500 tes naturales ya que all la heterogeneidad es enorme, en Figura 4 - Cianobacterias filamentosas heterocisticas
Unicelulares
composts 15 - 20
tipos de organismos, estado fisiolgico y resulta difcil cal-
cular las relaciones C/N y la eficiencia media en la utiliza- Nostocales Nostocaceae Trichodesmiun (1) Segn algunos autores se originan en clulas preexisten-
En el cuadro 9 se efecta un clculo terico, para pre- cin del carbono. Oscillatoriaceae Oscillatoria (1) tes llamadas preheterocistos ubicadas a intervalos regula-
decir cul de los procesos (mineralizacin-inmoviliza- Plectonema (1) res del filamento, de tamao algo mayor que el resto de la
cin) dominar en un suelo cuando el resto de paja es En general se admite que sustratos con ms de 1,8% de Lynbgbya (1) clula y segn las condiciones ambientales pueden formar-
atacado por poblaciones puras, por ejemplo, por bac- Phormidium (1) se los heterocistos. Otros autores opinan que la posicin
N favorecen la mineralizacin neta; niveles entre 1,2 y 1,8%
terias aerobias, actinomicetes, u hongos, cuya C/N pro- Filamentosas sin de ellos est determinada por los ya preexistentes, origi-
representan relaciones C/N entre 20 y 30/1 y contenidos heterosistos
medio y la eficiencia en la asimilacin del carbono, se entre 0,5 y 1,2% N favorecen la inmovilizacin neta. nndose nuevos cuando algunas sustancias, como el amo-
determin: nio fijado en los heterocistos, alcanzan niveles muy bajos.
Nostocaceae Anabaena (12)
Como dato, recordemos que las maderas contienen entre Su desarrollo es inhibido por niveles elevados de nitrgeno
Eficiencia = (C celular formado/C total degradado) x 100 0,1-0,5% de nitrgeno, las pajas de cereales y tallos de maz Anabaenopsis (1) combinado.
entre 0,5 y 1,5% y restos de leguminosas entre 1,5 y 3%. Aulosira (1)
Las poblaciones ms ineficientes en la asimilacin del C Cylindrospermun (4) Fijacin en relacin al O2
son las bacterias anaerobias (liberan cidos, alcoholes, Nostoc (8) Aerobiosis: las cianobacterias filamentosas heterocsticas
gases). A partir de estos datos se pueden calcular las uni- Nodularia (1) (Anabaena, Nostoc) pueden fijar N2 en estas condiciones
inmovilizacin neta
dades de C asimiladas, las de N necesarias y si el resto del N (mgN/g vegetal Filamentosas ya que los heterocistos poseen activo fotosistema I, pue-
vegetal provee de este nitrgeno o si, por el contrario, las original con heterosistos den fotofosforilar, pero no liberan O2 ni reducen el CO2.
clulas deben tomarlo tambin del ambiente. 12 Poseen alta actividad reductora, recibiendo los compues-
maz Rivulariaceae Calothrix (5)
tos carbonados, el ATP y el poder reductor de clulas adya-
Scytonemataceae Scytonema (2)
Ejemplo: los hongos al atacar 100 partes de la paja asi- 10 centes a las cuales les brindan el nitrgeno combinado re-
Tolypothrix
milarn 30-40% del carbono que representa 40 partes en avena sultante de la fijacin. El sistema membranoso ofrece una
100 partes del resto (C= 40%). O sea que incorporarn 12 8 alfalfa proteccin estructural subcelular y la fotorrespiracin activa
Stigonematales Stigonemataceae Fischerella (2)
a 16 unidades de carbono al citoplasma, lo que requerir aserrn
Hapalosiphon (1) remueve excesos de O2 (proteccin fisiolgica).
1,2 a 1,6 partes de nitrgeno, si su C/N es en promedio 6
Stigonema (1)
10/1. La paja provee slo de 0,5 partes, de modo que ha- Westielipsis (1) Microaerofilia, las cianobacterias filamentosas sin he-
2 4 8 16 32 semanas
br dficit y el resto debe tomarse del ambiente. Domina- Mastigociadaceae Mastigociadus (1) terocistos como Plectonema pueden fijar N2, pero no en
r la inmovilizacin (i neta) del N y el proceso ser lento. Figura 7- N inmovilizado en el suelo en la descomposicin condiciones de intensa oxigenacin. Lo mismo ocurre
Como ejercicio complete el resto del cuadro. de algunos restos vegetales
en las unicelulares, como Gloecapsa, aunque stas pue- Peltigera aphtosa). Son muy estudiados por su contribu- ganismos inmovilizarn el amonio y nitrato surgidos de la
CO descomposicin de los
den fijar N2 en el aire, existiendo una separacin tempo- cin en nitrgeno en suelos muy fros y en bosques tropi- 2
restos vegetales mineralizacin, que conjuntamente con formas minerales
luz
ral entre la liberacin fotosinttica del O2 y la actividad cales, donde especies de Stricta, Leptogium y Collema de S, P, Fe, etc. integrarn las molculas de las nuevas
lpidos hidratos de C protenas lignina
nitrogensica. pueden contribuir con 1 a 8 kg N/ha/ao. clulas.
azcares aminoazcares
Anaerobiosis es posible que tanto los heterocistos Las cianobacterias filamentosas asociadas cambian su rizosfera
compuestos Por algn tiempo no se detectar N mineral en el suelo ya
CO2 inorgnicos
como las clulas vegetativas fijen N2. Las cianobacte- forma filamentosa simple por la de filamentos altamente que la demanda biolgica excede al aporte (domina la
-3
rias fijadoras liberan al medio una fraccin del nitrge- contorneados, las clulas vegetativas se redondean y se PO4 NO3 CO2
inmovilizacin
inmovilizacin neta). Con la fraccin carbonada la situa-
no fijado, como amonio, amidas, pptidos, polippti- dividen escasamente. Los heterocistos aumentan de un = +2 temporaria en cin es diferente, pues ocurren prdidas gaseosas como
SO4 Mg
dos, que pueden representar un 20-30% del nitrgeno 3-5% al 20-60% en asociaciones con prototrofos, mien- CO2 la biomasa CO2, CH4, a partir de respiraciones, fermentaciones, de-
fijado. tras que en asociaciones con hetertrofos, la frecuencia K
+
nutrientes carboxilaciones.
permanece baja. disponibles
Las cianobacterias son responsables del nitrgeno fi- La figura 6 presenta la evolucin de la relacin C/N en
jado en reas marinas, en mayor medida por las hete- Otras asociaciones lavado
residuos pobres en N% a medida que se van degradan-
rocsticas. Las que no poseen estas clulas especiali- En zona tropical se describe una asociacin con una adsorcin do. La C/N disminuye y llega asintticamente a valores
zadas fijan N2 en zonas de bajo nivel de O2, aguas es- gimnosperma, la Cycadaceae, donde especies de Nos- del orden de las de la microflora dominante y del humus
tancadas y eutrofizadas, de importancia en algunos eco- toc forman estructuras parecidas a ndulos en las ra- Figura 5- Descomposicin de restos vegetales y ciclo interno de ese ambiente (10-15/ 1).
sistemas. ces. Aproximadamente un tercio de las 90 especies de los nutrientes en suelo agrcola N% en el
poseen estos ndulos, con aportes de unos 19 kg N/ C/N resto vegetal
Asociaciones con cianobacterias ha/ao en Macrozamia riedlei. Entre las angiospermas Cuadro 7- Procesos biolgicos y abiolgicos con 80/1 1,5
Estos diazotrofos fotosintticos se asocian con hongos, slo se conoce un representante subtropical, Gunne- N mineral 60/1
hepticas, helechos, gimnospermas y angiospermas. ra, que se asocia a Nostoc con heterocistos y que fija 40/1 1,0
+
Lo hacen con los representantes ms primitivos entre N 2 en glndulas de la base de las hojas. El nitrgeno NH4 NO2 NO3 20/1
los vegetales, mientras que Rhizobium y Frankia lo fijado es rpidamente transferido al eucariote, sobre nitrificacin(NO2 ,NO3 )
- -
nitratacin(NO3 )
-
desnitrificacin (N )
10/1
0,5
hacen con vegetales superiores: angiospermas dicoti- todo como amonio. inmovilizacin(N-org) idem idem
2
0 30 60 90 120 das
ledneas. asimilacin(N-org) idem idem
adsorcin a coloides lavado lavado
- +
fijacin a coloides reduccin(N2) idem (NO2 , NH4 ) Figura 6- Cambios en la relacin C/N y en el N% durante la
Azolla-Anabaena Bacterias hetertrofas lavado, menos lavado lavado descomposicin de paja de cebada
Muy estudiada es la simbiosis Azolla-Anabaena. La Azolla erosin idem idem
es un diminuto helecho de agua que se desarrolla en zonas El cuadro 4 presenta los ms importantes gneros de bac- volatilizacin - - El N% de los restos (vegetal y microbiano) aumenta a
tropicales en donde llega a cubrir enormes extensiones de terias hetertrofas fijadoras de nitrgeno. El grupo contie- medida que la degradacin procede, ya que no existen
arrozales inundados. Mide slo 2-3 mm de ancho y alberga ne organismos acuticos o terrestres de organismos ae- Agregado de restos vegetales prdidas importantes de este elemento que se mineraliza
a una cianobacteria del gnero Anabaena en poros ventra- robios, anaerobios y anaerobios facultativos. Las espe- y pasa inmediatamente a molculas orgnicas en las c-
les de los lbulos de las hojas, muy rica en heterocistos. La cies facultativas slo fijan N2 anaerbicamente y los aero- Pajas de cereales lulas de la poblacin que hizo eclosin con el agregado
planta le ofrece una proteccin adicional frente al O2 libera- bios presentan varios grados de sensibilidad frente al ox- Analizaremos los procesos que ocurren cuando se incor- del sustrato orgnico.
do en la fotosntesis propia y la de la planta. La cianobacte- geno. pora al suelo un resto vegetal con bajo nivel de N%, por
ria no crece bien fuera del husped. ejemplo una paja de cereal (C = 40% y N = 0,5%). La Relacin C/N de equilibrio o crtica, la degradacin
Su distribucin es muy variada, aunque slo alcanzan al- relacin C/N es alta, 80/1 y la microflora del suelo degra- de las fracciones carbonadas y nitrogenadas proceden
Esta asociacin ha sido empleada desde la antigedad como tas densidades cuando se renen ciertas condiciones, da este resto con el objeto de obtener subunidades para paralelamente, la demanda iguala a la oferta y en el
biofertilizante (azollizacin) en cultivos anegados, como el sobre todo sustratos carbonados, temperatura, pH, hu- sus macromolculas y energa. La velocidad de degrada- medio aparecen iones amonio y nitrato. Se citan rela-
arroz. En pocas secas el helecho es mineralizado y el nitr- medad. cin y los productos finales dependern de las condicio- ciones crticas de 20-25/1, es decir, ms altas que las
geno fijado se incorpora al suelo (Silver, Schrder, 1984). nes del suelo, clima, dosis, forma de aplicacin (en super- relaciones C/N frecuentes de los suelos.
Los gneros ms conocidos desde hace ms de 50 aos ficie, enterrado, picado, molido). Relaciones ms altas que la crtica favorecen la in-
Lquenes son Azotobacter y Clostridium, aerobio el primero y anae- movilizacin neta.
De las 17.000 especies conocidas, aproximadamente un robio el ltimo. Actualmente son muchos los gneros re- Como el nitrgeno est en baja proporcin, los microor- Relaciones ms bajas favorecen la mineralizacin neta.
8% posee una cianobacteria fijadora: (Peltigera canina, conocidos como activos en el suelo y en la rizosfera.
yen con ms de la mitad de los compuestos azufrados en La principal reserva de P en la tierra la constituyen los Aerobios contiene un complejo lipdico con lipoprotenas y lipo-
la atmsfera, con incrementos en los prximos aos. En sedimentos marinos (8,4 x 1014 ton), los suelos (0,96-1,6 x polisacridos, con calcio como principal componente
zonas industrializadas esta polucin superar a la origi- 1011 ton), fosfatos inorgnicos solubles (HPO4-2, PO4-3) en Azotobacteriaceae mineral. La intina posee ms carbohidratos y lpidos,
nada por va biolgica. el ocano (8 x 1010 ton), rocas con apatita (1,9 x 1010 ton) Es una familia curiosamente integrada exclusivamente con pero menos protenas, con alto nivel en calcio. Ade-
y en la biota o biomasa (2,7 x 109 ton). Los niveles de P en diazotrofos. Ya en 1901, el microbilogo holands Beije- ms de los cambios morfolgicos, en los cistos se acu-
En resumen: el azufre es un elemento esencial para la biomasa terrestre (2,6 x 109 ton) excede mucho a la rinck describi al Azotobacter chroococcum, luego que mula cido poli- OH-butrico (PHB). Parte de esta
todos los organismos, existe en gran nmero de esta- marina (5-12 x 107 ton) (Stevenson y Cole, 1999). Winogradsky, de la escuela rusa, describiera al anaerobio sustancia se emplea en la sntesis de los componen-
dos de oxido-reduccin en combinaciones orgnicas e Clostridium pasteurianum. Los integrantes de esta familia tes del saco del cisto.
inorgnicas. Sus transformaciones biticas y abiticas Los mayores depsitos ricos en apatita (como el sulfato se presentan con clulas grandes, predominantemente
pueden resultar benficas o perjudiciales para los eco- de roca) se encuentan en sedimentos en el fondo de oca- bacilos romos u ovales, pero cambian su morfologa con Estas estructuras, de muy baja actividad metablica, per-
sistemas. En los terrestres, son bien conocidos los pro- nos y antiguos mares (Amrtica del Norte). Los tratamien- el tiempo o las condiciones de desarrollo. En la figura 5 miten ventaja ecolgica a los azotobacter en el suelo. En
cesos que aseguran la provisin de sulfatos y otras for- tos del fosfato de roca con cidos inorgnicos (sulfrico y (Gonzalez-Lopez, Lluch-Pl, 1992) se aprecian las formas medio favorable, la germinacin y crecimiento activo ocu-
mas solubles para las plantas. Pero, en ciertas circuns- fosfrico) se emplean para producir fertilizantes ms so- bacilares y la formacin de estructuras de resistencia, rren rpidamente.
tancias, exceso de S puede ser polucionante, en aguas, lubles. El conocido como superfosfato resulta de la mez- menos resistentes que las endosporas bacterianas, lla-
o en la atmsfera cuando se liberan gases de la quema cla de aproximadamente cantidades iguales de fosfato de madas cistos. Otros cambios morfolgicos son la aparicin de clulas
de compuestos ricos en azufre (bitumen, lignita), res- roca con H2SO4 (de 60-70%) y contiene un 10% de P. La grandes, que recuerdan a levaduras, o de grandes baci-
ponsables luego de las lluvias cidas. El azufre es im- mayora del P aplicado al suelo como fertilizante, a veces Las clulas se presentan frecuentemente en pares, son los en A. paspali a las pocas horas de cultivo. La forma-
portante en muchos procesos industriales, como la pro- ms del 90%, no es tomado por los cultivos y es retenido Gram negativas, aunque pueden aparecer como Gram cin de conglomerados de clulas cocoides, rodeadas de
duccin de concreto, asfalto. en formas insolubles o fijadas. Este elemento se va acu- variables, aerobios estrictos, pero pueden crecer y fijar N2 espeso muclago, que recuerdan a ttradas, son comu-
mulando en los suelos, pero en forma no disponible para bajo presin reducida de O2. Son mviles por flagelos nes en A. macrocytogenes
los cultivos. peritricos o polares, o inmviles. Los gneros son:
Ciclo biolgico del fsforo
La toma anual por los vegetales en forma de (H2PO4- y I. Clulas grandes, ovoides, la mayora de las especies
La figura 4 presenta los procesos de origen biolgico in- HPO4-2) se calcula en 2 x 108 ton, presentes en la solucin producen sustancia viscosa extracelular, desarrollo r-
volucrados en las transformaciones de este elemento. A del suelo, proporcin extrada es menor en la parte cose- pido, catalasa positiva:
diferencia de los ciclos de C, N y S, el ciclo del P no pre- chada (4-7 x 106 ton), En ciertas ocasiones, los compues- a. forman cistos, (G + C)% 63-66: Azotobacter
senta componentes gaseosos, de modo que no son im- tos fosforados pueden migrar hacia el mar donde se de-
portantes los movimientos desde y hacia la atmsfera, positan como sedimentos insolubles (1,7 x 107 ton). b. no forman cistos, (G + C)% 53-59: Azomonas
aunque pequeas cantidades de fosfina gas (PH3), pue-
den detectarse en lagos o pantanos, bajo condiciones re- El P constituye el segundo elemento en importancia para II. Pequeos bacilos, producen mucha viscosidad extra-
celular y cuerpos lipdicos globulares internos. Desa- Figura 5- Caractersticas morfolgicas de Azotobacter vinelandii
ductoras. los vegetales y microorganismos, slo superado por el Izquierda: estados morfolgicos tpicos: clulas vegetativas, clulas
nitrgeno. Forma molculas ricas en energa (ATP, UTP, rrollo lento, pueden o no producir catalasa:
precsticas ricas en poli-- OH butirato y clulas filtrables. B) cisto
etc.). En el suelo es la fraccin orgnica la que contiene la a. cuerpos lipdicos bipolares, (G + C)% 5-59, cata- maduro, con las cubiertas intina y exina (A x 12.500, B x50.000).
vegetales animales
mayor proporcin de fsforo (30 al 85% del P total), ms lasa positiva: Beijerinckia .
alto en suelos cidos: b. numerosos cuerpos lipdicos, (G + C)% 70, cata-
-3
PO4 en -3 lasa negativa: Derxia Otras caractersticas
PO4 absorbido solubilizacin
solucin entre un 30-50% consiste en fitina, sobre todo como La formacin de depsitos intracelulares de lpidos (PHB)
inmovilizacin fsforo mineral fosfato de inositol (material de reserva vegetal) Como vimos, los cistos son estructuras caractersti- es caracterstica del grupo, sobre todo en cultivos viejos.
insoluble
cas de algunas especies y constituyen formas de re- En Beijerinckia indica se presentan dos glbulos por clu-
un 3% se encuentra en cidos nucleicos la, polares, pudiendo alcanzar en cultivos viejos ms del
mineralizacin sistencia a desecacin, radiaciones gamma, U.V. Res-
ponden rpidamente al agregado de sustancias ener- 50% del volumen celular.
un 1% en fosfolpidos, los ms comunes: lecitina, cefa-
materia orgnica-microfibra
lina, el fosfato es esterificado con una base. gticas, sustratos de las clulas vegetativas, reflejan-
do mayor permeabilidad que las paredes de las clu- Materiales mucosos extracelulares son tambin caracte-
las vegetativas. El microscopio electrnico reconoce rsticos de ciertas especies, incluyen azcares y cidos
Figura 4- Transformaciones biolgicas de compuestos con Los cultivos agrcolas contienen aproximadamente 0,05 a
dos capas en los citos: la exina y la intina. La exina urnicos. Muchas veces su excesiva acumulacin en Bei-
fsforo 0,5% de P en sus tejidos y alrededor del 1% de todo el P
jerinckia y Derxia, limita seriamente la movilidad de los car). Para obtener activa respiracin, los organismos anaerobiosis que se logran en suelos sometidos a hi- Cuadro 6- Importancia econmica de la sulfatorreduccin
cultivos y vuelve a los medios lquidos muy viscosos. deben producir grandes cantidades de poder reduc- dromorfismo muy reductor, en suelos salinos con alto
tor, particularmente NADH, que debe ser oxidado va nivel en sulfatos y en la rizosfera. En ocanos, lagos y ambientes inundados, el O del
Entre los azotobacter, es el grupo de los chroococcum- sistema citocromo. Se evita la produccin de gran can- sulfato excede al O2 libre y es crtico para la degra-
beijerincki y vinelandii, el que produce abundante musc- tidad de ATP, en exceso frente a los requerimientos Se aprecia el precipitado negro caracterstico del sul- dacin de la MO. En el ocano, el 50% de la degra-
lago, mientras que el grupo de los agilis e insignis, habi- celulares, porque utiliza una respiracin de baja efi- furo ferroso. El proceso es de consecuencias desfavo- dacin de los restos orgnicos ocurre por la sulfa-
tantes sobre todo de aguas, no los forman. Representa- ciencia, produciendo aproximadamente 1/3 del ATP rables para las plantas pues consume sulfatos, uno de to- reduccin. Depuracin de aguas
ran productos celulares de desecho, o bien materiales de por unidad de sustrato. los principales nutrientes y adems el H2S es txico La corrosin anaerbica de caeras de hierro en-
reserva en C y energa, y les permitira protegerse frente para la mayora de las especies. La precipitacin como terradas representa importantes prdidas
a la fagocitosis por protozoos. La nitrogenasa es adems Proteccin conformacional: la nitrogenasa se asocia SFe elimina esta toxicidad. El suelo se alcaliniza local- Aguas ennegrecidas por acumulacin de sulfuro
protegida del efecto inhibidor del O2. en las clulas a otras protenas en caso de intensa oxi- mente, los sulfuros dan origen a bases que forman car- ferroso, consecuencia de la actividad sulfatorre-
genacin, protegiendo sus sitios activos. En este esta- bonatos o bicarbonatos de sodio. En aguas, se favore- ductora
Los pigmentos son otra caracterstica de esta familia y su do la enzima no funciona (estado inactivo), pero una ce la eliminacin de sulfatos, depurando los cauces de Asociaciones entre bacterias sulfato reductoras y
produccin, color y solubilidad tienen carcter taxonmi- vez que se restablecen las condiciones de oxigenacin agua. fotosintticas pueden resultar en importantes de-
co. En A. chroococcum es caracterstico el pigmento ma- apropiadas, la fijacin se renueva rpidamente. psitos de azufre
rrn oscuro (melaninas) producido en cultivos viejos por La figura 3 presenta resultados en suelo no rizosfrico
oxidacin de la tirosina. Otros mecanismos: la produccin de polisacridos ex- salino y en la rizosfera de plntulas de maz creciendo
tracelulares ofrecera una barrera fsica a la difusin del en el mismo suelo (Dommergues, Mangenot, 1970). Se Volatilizacin de compuestos azufrados
Compuestos empleados en el metabolismo O2, el gran tamao de las clulas puede contribuir a que observa el efecto positivo en la interaccin de un fac-
Muchos compuestos carbonados se emplean por este gru- la relacin entre superficie y contenido celular sea baja, tor biolgico: presencia o ausencia de races y facto- La carencia de mtodos sensibles apropiados para la de-
po: azcares, polisacridos, alcoholes primarios y secun- impidiendo activa difusin del O2, la presencia de mem- res fsicos del suelo: saturacin y compactacin. Los terminacin de las distintas formas: H2S; SO2; metanotiol
darios, polialcoholes, cidos orgnicos, compuestos aro- branas intracelulares ha sido descripta como otra efi- donadores de electrones y las condiciones de anaero- (CH3SSCH3), etanotiol (CH3CH2SH), disulfuro de carbono
mticos (cido benzoico y fenoles), como fuente de car- ciente forma de proteccin de la nitrogenasa. Los azo- biosis se reunieron en el suelo rizosfrico, naturalmen- (CS2), carbonil sulfuro (COS) de origen microbiano a par-
bono, donadores de electrones y de energa para el creci- tobacter presentan sistemas membranosos altamente te salino. tir de descomposicin de restos vegetales, abono de gran-
miento y la fijacin del N2. La va principal de degradacin contorneados. ja, limitaron los estudios.
de los azcares es la de Enter-Doudoroff y los principales
productos formados son piruvato y gliceraldehido- 3- fos- Otros organismos fijadores de N2 aerobios incluyen suelo no rizosfrico suelo rizofrico La cromatografa de gases permite determinaciones y
fato. Las reservas intracelulares de lpidos (PHB) ejercen especies con poca significancia en los suelos, las cuales suelo saturado saturado y saturado saturado y mostr que la liberacin se produce sobretodo en condi-
tambin efecto en la fijacin, demostrado por la moviliza- por no poseer mecanismo de proteccin de la nitrogena- compactado compactado ciones de anaerobiosis y no en todos los suelos. Dimetil-
cin de esta reserva en cultivos en fase estacionaria, con sa eficientes, slo fijan en microaerofilia. Mycobacterium sulfuro y pequeas cantidades de carbonil sulfuro, S2C,
escasa cantidad de glucosa. flavum y otras micobacterias han sido descriptas como metilmercaptn y dimetildisulfuro, fueron los principales
fijadoras de nitrgeno. Como ya citamos, pertenece a esta productos.
4.2 4.0 4.6 5.7
La exigencia de un alto nivel de materiales carbonados categora el quimioauttrofo Thiobacilus ferrooxidans y
sera uno de los principales factores limitantes del desa- algunas bacterias oxidantes del metano. (0.1) (0.2) (0.1) (10.7) En condiciones normales de campo pequeas prdidas
rrollo de estos diazotrofos en suelos agrcolas pueden atribuirse a esta causa. Gran cantidad de SO2 lle-
( ) sulfuros (10-6 moles/g) ga a la atmsfera, pero proviene de fuentes de polucin,
en histograma: N* sulfato reductores (log 10/g de suelo)
Mecanismos de proteccin de la nitrogenasa Microaeroflicos industrias, automviles, etc. Algo de SO2 toma origen en
Los integrantes de esta familia presentan numerosos la oxidacin del H2S liberado biolgicamente.
mecanismos de proteccin de la nitrogenasa que le per- Azospirillaceae Figura 3- Sulfatorreduccin en la rizosfera de maz en suelo
miten fijar N2 en aerobiosis: Constituye un importante grupo de organismos aerobios salino Los gases con S son componentes indeseables de la at-
que se comportan como microaeroflicos cuando fijan N2. msfera por su intenso y desagradable olor y por sus efec-
Activa respiracin: remueve el oxgeno de las vecin- Fueron descriptos por Beijerinck desde 1922, pero reci- Este proceso es responsable tambin de la corrosin tos adversos en el ambiente y el clima.
dades de la nitrogenasa. La tasa de respiracin pue- bieron poca atencin hasta 1976 cuando Dbereiner y Day anaerobia de metales. Los desulfovibrios actuaran como
de incrementarse de 10 a 50 veces y A. chroococcum los aislaron de races de pasturas tropicales, en Brasil. agentes de despolarizacin, al consumir el H en las zo- El H2S en un gas muy txico para ciertas cianobacterias y
consume muchos hidratos de carbono en la fijacin Azospirillum es Gram negativo, con forma de vibrio o es- nas catdicas de los metales, facilitando la reduccin de lquenes, organismos empleados como indicadores bio-
del N2 (eficiencia baja, de 10-15 mg N2 fijado/g az- pirilo, de 1 m de dimetro, con flagelos peritricos de cor- los sulfatos a sulfuros (cuadro 6). lgicos de polucin. Las actividades del hombre contribu-
inhspita la regin para la vegetacin a causa de la toxici- Mecanismo enzimtico ta longitud de onda empleados para desplazarse en su- tectar Azospirillum. Las bacterias se ubican en el gradien-
dad del H2S. La rizosfera de muchos cultivos puede fa- perficies slidas o un flagelo polar, para nadar. te de oxgeno creado entre la superficie y el fondo del
vorecer el proceso por la exudacin de materiales carbo- La reduccin de SO4= a S= implica la transferencia de 4 tubo en el nivel adecuado para su metabolismo aerobio y
nados. Estos cultivos no se desarrollan normalmente en pares de electrones y en la va desasimilativa se recono- Depsitos de PHB pueden deformar las clulas. Se desa- para la proteccin de la nitrogenasa.
suelos salinos, con alto nivel de sulfatos, anegados y donde cen tres enzimas: rrollan tanto en condiciones aerbicas como anaerbicas
la temperatura es alta, y los pH neutros. El proceso es (con aporte de nitratos y una fuente de C orgnico). Son Esta bacteria es capaz de crecer y fijar N2 en pH cido y
retardado por aireacin o el agregado de nitratos, sales ATP sulfurilasa SO4= + ATP APS + P-P preferencialmente microaeroflicos en presencia o au- en presencia de altas concentraciones de azcar: gluco-
frricas o mangnicas, que permiten elevar el potencial sencia de N-combinado en el medio. sa y sacarosa pero no de gluconato. No posee nitrato re-
de xido-reduccin. pirofosforilasa P-P + H2O 2P ductasa y puede fijar N2 incluso con niveles de 10mM de
No poseen ningn mecanismo de proteccin nitrato. Aislada de caa de azcar, en Brasil, fue luego
- =
La microflora responsable est confinada a dos grupos APS reductasa APS + 2e AMP + SO 3
de la nitrogenasa frente al oxgeno encontrada en otros pases a partir de tallos, hojas, races
de anaerobios estrictos: formadores de esporas del gne- y en la savia del xilema de diferentes cultivos (sorgo, ba-
ro Desulfotomaculum y asporgenas del gnero Desulfo- La conversin es similar a la oxidacin de SO3= a SO4= El crecimiento es rpido con amonio y O2 y ms lento con tata dulce). Su crecimiento ptimo a pH 5,5 y 10% de az-
vibrio. Son tpicos habitantes de sedimentos anaerobios por thiobacilos y bacterias sulfurosas purpreas, con el N2 (5-7 horas de tiempo de generacin). Sin N combina- car, condiciones prevalentes en el caldo de caa, eviden-
con materia orgnica y sulfatos, resultando en una masi- APS intermediario, mientras que la va asimilativa em- do el desarrollo es rpido en medio semislido, forman- cia su adaptacin a la planta. Recuentos de 10 3-105
va generacin del gas H2S. Esta actividad permite, tam- plea adenilsulfato. La reduccin del SO3= a S= ha sido do una densa pelcula debajo de la superficie, donde en- bacterias.g-1 han sido informados en la rizosfera de caa
bin en anaerobiosis, la actividad de las bacterias fotosin- establecida recientemente con la identificacin de una cuentran la tensin de O2 apropiada. A medida que la de- de azcar Como no ha sido aislada del suelo, se piensa
tticas sulfurosas (prpuras o verdes) que emplean el H2S sulfito reductasa: manda de O2 se incrementa la pelcula se desplaza hacia en una bacteria endoftica, de gran inters ya que el nitr-
como donador de electrones en la fotosntesis, reoxidn- la superficie. Esta sensibilidad al O2 hizo que por mucho geno sera fijado dentro de la planta. Se ha determinado
dolo en anaerobiosis y a la luz, constituyendo un verda- 3 SO3= + 2e- S3O6= tiempo no fueran descriptos como activos fijadores. de que A. diazotrophicus produce cido indol-actico, pro-
dero ciclo. motor del crecimiento vegetal y puede excretar amonio,
Otras dos enzimas (tritionato y tiosulfato reductasas) re- En medio con malato y extracto de levadura o cloruro de hasta un 40% del fijado, lo que explicara los altos niveles
Los sulfatorreductores del gnero Desulfovibrio son Gram ducen tritionito a S= con produccin de sulfito: amonio, desarrollan colonias blancas o rosadas, peque- de fijacin en caa de azcar.
negativos, asporgenos, bacilos curvados o vibrioides, con as y secas, elevadas, circulares o irregulares.
flagelos polares. No pueden emplear el acetato, que se S3O6= + 2e- S2O3= + SO3=
acumula como producto final en la oxidacin de sustratos S2O3= + 2e- S= + SO3= Se han descripto 5 especies: A. brasilense, A. lipoferum,
orgnicos. Emplean malato y lactato, obtenienen energa A. amanzonense, A. halopreferans y A. irakens y su n-
por fosforilacin a nivel del sustrato con participacin de Los esporulados del gnero Desulfotomaculum realizan mero se incrementa (Gillis y Reinhold-Hurek, 1994).
la acetil Co-A. En ausencia de sulfatos, algunos de estos los mismos metabolismos, difiriendo solamente en la com-
microorganismos pueden fermentar piruvato, malato o fu- posicin qumica de la sulfito reductasa. La va que con- Algunos azospirilos son desnitrificantes, reduciendo los
marato. duce a la asimilacin de los sulfatos es ms sencilla y no nitratos a nitritos (nr+) y hasta productos gaseosos, N2 y
se acumulan intermediarios entre sulfito y sulfuro. La sn- N2O (nir+ y nir-) (Dbereiner, Pedrosa, 1987). En cereales
Las especies ms conocidas son D. desulfuricans; D. vul- tesis de ATP en la sulfatorreduccin desasimilativa se for- de clima templado parecen predominar cepas nir, indi-
garis; D. africans y algunos pueden emplear adems de los ma en una cadena transportadora de electrones de la cual cando ventajas evolutivas que favorecen a la planta, eli-
donadores de electrones orgnicos, el H2, aunque son in- se conocen varios componentes: citocromo c3, citocromo minando una causa de prdida del nitrgeno fijado.
capaces de crecer en medio estrictamente mineral con CO2 del tipo b, quinonas, una flavoprotena, la ferrodoxina.
y requieren adicin de acetato. La ecuacin general es: Estos organismos son considerados responsables de la
estimulacin del crecimiento en importantes cultivos y
2 CH3CHOH-COOH + SO4= 2 CH COOH +
3
2CO2 + S= + 2H2O Ecologa del proceso pasturas naturales (captulo 15)(Okon, 1994). La figura 6
muestra la morfologa tpica de estos organismos (Gon-
4 H2 + SO4= 4 H2O + S= Las condiciones que deben reunirse para que el proceso zalez-Lopez, Lluch-Pl, 1992). Figura 6- Morfologa de Azospirillum brasilense
ocurra son similares a las de la desnitrificacin: A) en medio con malato a las 48h, clara morfologa encurvada y
Los compuestos menos oxidados que los sulfatos (sulfi- Acetobacter ausencia de corpsculos de inclusin (x 8.000). B)
tos, politionatos, tiosulfatos, S) son reducidos ms fcil- microfotografa de la anterior (x 25.000).C) 48h en medio con
alto tenor en sulfato Acetobacter diazotrophicus una nueva bacteria Gram ne- fructosa, con mayor pleomorfismo y grnulos de PHB (x 45.000)
mente que los sulfatos, ya sea en la va asimilativa o en la gativa fijadora de N2 fue aislada en caa de azcar en y D) a los 7 das en el mismo medio, tpica forma C, con
desasimilativa. donadores de electrones orgnicos medio semislido, sin N combinado, empleado para de- cubiertas multilaminares (x 50.000)
Bacterias anaerobias facultativas Rhizobios El cuadro 3 resume algunas de las funciones benfi- Sulfatorreduccin
Con nitrgeno combinado, este grupo puede crecer con o sin Son bacilos Gram negativos, de 0,5 a 0,9 micras por 1,2 cas de este grupo bacteriano y el cuadro 4 seala al-
O2, pero slo pueden fijar N2 anaerbicamente, por lo que a 3,0 micras, aislados o de a pares, generalmente mvi- gunas de las contraindicaciones de la actividad sulfo- La reduccin asimilativa de sulfatos es similar a la de
result difcil establecer su contribucin en suelos y aguas. El les cuando jvenes por flagelos peritricos, polares o subpo- oxidante. los nitratos y es realizada en la biomasa microbiana.
grupo comprende bacterias pertenecientes a las Enterobac- lares. No forman endosporas, pero sus clulas contienen
teriaceae y al gnero Bacillus. Entre las primeras ha sido muy grnulos de cido poli- - hidroxibutrico (PHB) que se La reduccin desasimilativa la realizan las bacterias
estudiada Klebsiella pneumoniae, conocida antes como Ae- tien de negro con negro Sudn y aparecen refrctiles al Cuadro 3- Bacterias oxidantes del azufre en la sulfatorreductoras, que oxidan compuestos orgnicos e
robacter aerogenes, en la cual se han realizado experiencias microscopio de fase (figura 7,arriba)(Duhoux y Nicole, naturaleza H2 y emplean a los sulfatos como aceptores de electro-
de transferencia de genes fijadores. Pertenece a las bacte- 2004). nes en la cadena transportadora anaerobia. Su rol en el
rias coliformes por su parecido a Escherichia coli, habitante Ayuda a la extraccin de cobre, uranio, etc. por lava- ciclo del azufre es similar al de las bacterias desnitrifican-
del intestino del hombre y animales. Algunas cepas poseen grnulos metacromticos de poli- do cido de residuos de minas tes, con la diferencia que stas son estrictamente anaero-
fosfatos. Modificacin pH del suelo bias y aqullas, anaerobias facultativas. Esta actividad
Bacillus polymyxa, Bacillus macerans y Bacillus pas- Detoxificacin rizosfrica con H S, que lo oxidan a
2
(cuadro 5) es muy evidente en zonas de barros, en el fon-
teurianum son especies muy conocidas entre los dia- La mayora de las cepas producen abundantes polisac- sulfato do de estanques y lagos y a lo largo de la costa del mar.
zotrofos. Son bacilos Gram positivos, esporulados, ridos extracelulares mucilaginosos, de composicin va- Remocin de sulfuros, tiosulfato y tiocianato de re- Signos de este proceso son:
aerobios, que fijan en microaerofilia, de la familia Baci- riable segn la cepa y el medio de cultivo, que los prote- siduos fotogrficos
llaceae, cuyos representantes anaerobios fijadores gen de la sequedad. Algunas cepas desarrollan estructu- Fertilizacin con inoculantes como el Biosuper- fuerte olor a sulfhdrico
pertenecen al gnero Clostridium. Las bacterias pro- ras similares a cpsulas al envejecer, que representaran fosfato: S0 + fosfato de roca + thiobacilos
manchas negras de los barros y suelos donde ocurre a
pinicas citadas en el cuadro 4, se encuentran en le- acumulacin extracelular de antgeno de pared.
ches fermentadas y han sido descriptas como fijado- causa de la precipitacin del SFe
res de N2 en anaerobiosis. Cuadro 4- Problemas asociados a la actividad de
organismos sulfooxidantes
Bacterias anaerobias Cuadro 5- Reduccin de los sulfatos
Clostridium pasteurianum fue el primer diazotrofo descri- Acidificacin de residuos de minas de extraccin de
to por Winogradsky en 1893. Otras especies de este g- minerales Asimilativa
Se produce H S, pero se convierte rpida-
nero pueden tambin fijar nitrgeno y son habitantes de * por procesos qumicos como biolgicos 2
suelos, abonos en fermentacin, rumen, compost. Una * oxidantes tanto del S como del Fe++ mente en S-aa
Ocurre en aerobiosis y anaerobiosis y es
pasteurizacin previa de la muestra de suelo y otros ma- * se producen 12 moles H2SO4 por 3 moles SFe
teriales (10' a 80C) facilita el aislamiento al eliminar las oxidado realizado por amplio rango de organismos
Esencial en el crecimiento microbiano y ve-
formas no esporuladas. No pueden emplear el O2 bajo Corrosin de acero y concreto
ninguna circunstancia. * acidificacin de suelos con sulfatos getal donde los SO4= son asimilados
* lluvias cidas
Otros diazotrofos anaerobios son bacterias sulfatorre- * oxidacin del azufre favorece la solubiliza Desasimilativa
Se produce H S y se excreta
ductoras, que usan sulfatos como aceptores de electro- cin de metales pesados 2
Ocurre anaerbicamente en respiraciones
nes finales en la respiracin anaerobia. Frecuentemente
Limitada a pocos organismos que incluyen
se libera cido sulfhdrico (H2S), voltil, de olor desagra-
dable. Los gneros conocidos son Desulfovibrio y Desul- La sulfooxidacin tiene consecuencias nefastas en la co- Desulfovibrio, Desulfotomaculum
Acoplada a la oxidacin de acetato, etanol
fotomaculum. Entre los primeros, varias especies pueden rrosin aerobia de diversos materiales, como cemen-
fijar N2; algunas tienen importancia en el mar, fijando N2 to, piedra y metales por la intervencin de un conjunto o hidrgeno
en sedimentos. El segundo gnero posee menos repre- de especies que llevan la oxidacin hasta la formacin
sentantes diazotrofos. de cido sulfrico. Estos materiales se disuelven literal-
mente con el consiguiente deterioro en monumentos, edi- En ciertas zonas donde la acumulacin de materia org-
Figura 7- Arriba: Clula de rhizobio mostrando los nica es importante y el nivel de sulfatos en aguas freti-
Las bacterias productoras de metano son anaerobias exopolisacridos que rodean a la clula e internamente ficios, etc. Los sulfuros provienen del suelo o de la polu-
estrictas y son abundantes en ambientes en fermentacin cin atmosfrica. cas es muy alto, la sulfatorreduccin puede convertir en
grnulos de cido poli -OH-butrico, material carbonado de
y en el fondo de estanques. La cepa en la que se detect reserva. Abajo: Bacteroides en tejido central de ndulos de
fijacin, result ser una poblacin mixta. leguminosas incluidos en su membrana peribacteroide
los electrones en los organismos quimioauttrofos con La humedad debe favorecer los intercambios gaseosos Los rhizobios sufren cambios morfolgicos, fisiolgicos y mientras que las de crecimiento lento no exceden, dentro
excepcin de las bacterias del hidrgeno, entran en la ya que la microflora es aerobia, excepto el T. denitrificans bioqumicos en las clulas del ndulo dando lugar a clu- de un perodo de 10 das, un dimetro de 1 mm. Su forma
CTE por los citocromos con la intervencin de piridn que debe encontrar alto nivel de nitratos y anaerobiosis las pleomrficas, de formas muy irregulares, en X, Y, o de vara desde plana a convexa, su color puede ser blanco
nucletidos. La oxidacin de la mayora de los compara reducir sulfuros y otros compuestos reducidos. clava, denominadas bacteroides, que carecen de flage- opaco, poco gomosa, a blanco lechosa, translcidas, con
puestos orgnicos es va NADH, que podra estar im- los y no se dividen (figura 7). Estas formas retoman su abundante cantidad de polisacridos.
pedida en estos organismos. La cadena transporta- El encalado de suelos cidos favorece la accin de la morfologa y propiedades clsicas (bacilos, no fijadores
dora de electrones de los microorganismos auttro- poblacin sulfooxidante. En general el pH no desciende de N2), al sembrarse en medio de cultivo.
fos es poco conocida. demasiado en los suelos pues la vegetacin se encar- Aislamiento y medios de cultivo
ga de asimilar los sulfatos a medida que stos se van Se presentan en grupos aislados, encerrados en envol-
2. Las bacterias filamentosas deslizantes del grupo produciendo. Existen situaciones en las cuales la acu- turas membranosas originadas por la planta. Para algu- Los rhizobios son organismos hetertrofos exigentes que
Beggiatoa-Thiotrix son caractersticas de medios ambien- mulacin puede ser importante y entonces el pH puede nos autores estos cambios constituyen otro ejemplo de se desarrollan en medios ricos, con vitaminas y aminoci-
tes acuticos ricos en sulfuros o suelos hidromrficos. descender algunas unidades con el consiguiente incon- ciclo celular, que como el que incluye la formacin de dos, aunque existen gran variedad de cepas que difieren
Contienen frecuentemente inclusiones de azufre en sus veniente en el desarrollo vegetal. endosporas bacterianas, originan dentro de un mismo en sus requerimientos nutricionales.
clulas que pueden oxidar a sulfato. organismo estructuras con propiedades diferentes a las
El suelo puede recibir grandes cantidades de azufre en de las clulas que las originaron. Un conjunto de cam- A partir de ndulos
3. Las bacterias fotosintticas sulfurosas purpreas de polvo cuando se desea corregir suelos alcalinos o en la bios conducen en medios de cultivo a las formas vege- Como no presentan mecanismos de proteccin de la ni-
la familia Chromotiaceae y las sulfurosas verdes de la fa- lucha contra actinomicetes patgenos de papa o batata, tativas clsicas. trogenasa en vida libre, debe aislarse por siembra de con-
milia Chlorobiaceae emplean sulfuros y acumulan S en como el Streptomyces scabies. En ambos casos la activi- tenido nodular en medios ricos, como el EMA (extracto de
las clulas que puede ser luego oxidado a sulfatos. Domi- dad de los thiobacilos asegura rpida formacin de cido Los rhizobios son organismos aerbicos, los cuales, sin levadura-manitol-agar), con agua, sales, manitol como
nan en barros y en anaerobiosis donde se acumulan sul- sulfrico que baja el pH a niveles no soportados por estas embargo, son capaces de crecer a una tensin de oxge- fuente de carbono y energa, extracto de levadura, como
furos (captulo 3). especies. no menor de 0,001 atmsfera. No presentan ningn me- fuente de nitrgeno y de factores de crecimiento.
canismo de proteccin de la nitrogenasa frente al O2.
4. Microorganismos hetertrofos: numerosas especies Ciertos ambientes anegados, ricos en materia orgnica y Fuentes de carbono: los rhizobios de crecimiento rpi-
de bacterias aerobias, hongos y levaduras pueden oxi- sulfuros de pirita (FeS2), cuando son drenados y expues- En base a sus propiedades culturales los rhizobios se dido utilizan una mayor variedad de fuentes carbonadas,
dar formas reducidas de azufre, aunque la energa libe- tos al aire liberan sulfatos, el pH cae debajo de 4,0 y los ferencian en dos grupos, que dieron lugar a dos gneros: siendo la sacarosa y el manitol los sustratos de prefe-
rada slo representa una pequea porcin de la que la vegetales pueden perjudicarse. rencia. El glicerol y las pentosas (L-arabinosa, xilosa,
clula necesita. Numerosos hongos pueden liberar sul- de crecimiento rpido (CR), con tiempo de genera- ribosa) son preferidas por los rhizobios de crecimiento
+++ + =
fatos de molculas orgnicas como protena-tiourea, con 3FeS2 + 11O2 + 2H2O 3Fe + 4H + 6SO 4
cin entre 3 y 4,5 horas, acidifican el medio y liberan lento. El catabolismo de la glucosa, fructosa, sacarosa,
rendimiento energtico menor que los thiobacilos. Se abundante cantidad de polisacridos, gnero Rhizobium manosa, gluconato y arabinosa fue estudiado en dife-
discute el rol de los microorganismos hetertrofos en la La aplicacin de inoculantes granulados con azufre ele- (R.loti, R. leguminosarum) rentes especies demostrndose en extractos acelula-
oxidacin de compuestos azufrados pues si bien su ren- mental y fosfato de roca inoculado con thiobacilos res la presencia de enzimas de las vas de
dimiento es bajo, ste puede ser compensado por su permiten aportar a las pasturas sulfatos y fosfatos ms de crecimiento lento (CL), con tiempos de generacin Entner-Doudoroff (ED), de pentosa-fosfato (PF) y del
alta densidad en algunos ambientes. rpidamente en el trpico hmedo que en regiones tem- que oscilan entre 6 y 8 horas, producen menos polisa- ciclo de los cidos tricarboxlicos (CAT) en especies CR
pladas y ridas. El cido sulfrico formado ayuda en la cridos y alcalinizan el medio: gnero Bradyrhizobium: y de enzimas de la va ED y CAT en especies CL.
solubilizacin de: B. japonicum, B. spp.
Ecologa de la sulfooxidacin Fuentes de nitrgeno: no son especficas; el nitrato y
fosfatos triclcicos, llevndolos a fosfato di y monoclci-
El concepto de productores de cidos o producto- el amonio pueden ser empleados por la mayora de las
En suelos inundados son las bacterias fotosintticas y co, asimilables por las plantas res de lcalis depende de la composicin del medio, de cepas, pero a menudo se obtienen mejores crecimien-
las Beggiatoaceae los principales organismos en la oxi- la presencia de distintos hidratos de carbono y compuestos con aminocidos como glutamato y asparato. En
dacin del azufre compuestos de manganeso (a partir de Mn
+4
), K, Ca, Al, tos nitrogenados orgnicos y no se toma como carcter los medios de cultivo se usa el extracto de levadura.
Mg. Se requiere humedad (lluvias) y es ms efectivo en taxonmico exclusivo.
En aireacin estos grupos no son los dominantes y los suelos cidos. Estos inoculantes son usados cuando Fuentes de factores de crecimiento: muchas espe-
thiobacilos y los organismos hetertrofos son los res- fertilizantes como el superfosfato no estn disponibles El aspecto de las colonias depende del medio de cultivo y cies de rhizobio son estimuladas por factores de creci-
ponsables del proceso. y se cuentan con depsitos de fosfato de roca. de la especie. En medio de extracto de levadura-manitol- miento como biotina, tiamina, riboflavina o pantotenato
agar (EMA), las cepas de crecimiento rpido originan co- de calcio. El requerimiento es variable y algunas espe-
lonias de 1 a 5 mm luego de 3 a 5 das de incubacin, cies y cepas se desarrollan mejor sin su agregado. El
extracto de levadura provee de fuentes de N-combi- La carencia de tcnicas especficas y confiables limit tan azufre elemental (S) fuera de la clula. El gnero El pH ptimo de las especies vara:
nado y factores de crecimiento. bastante este estudio: en el suelo el rhizobio no se distin- comprende 9 especies, de las cuales 5 son bien cono-
gue del resto de la poblacin bacteriana, no fija N2 o lo cidas: para T. thiooxidans y T. ferroxidans en la vecindad de
Minerales: algunos aniones y cationes son tambin re- hace a niveles muy bajos, no posee requerimientos nutri- pH 2,0 a 3,5
queridos para el desarrollo bacteriano, como K+, Mg++, tivos especficos, ni morfologa caracterstica. 4 son auttrofas: T. thiooxidans, T. thioparus, T. denitrifi-
PO4-3, SO4=, Cl-, adems de trazas de Co++, Ca++ (rela- cans y T. ferroxidans para el resto predominan las preferencias en la neutra-
cionado con la estructura de la pared). Las tcnicas ms empleadas en el reconocimiento y se- lidad o ligeramente alcalino. Salvo el T. denitrificans son
guimiento de esta bacteria en ambientes naturales son: el T. novellus es auttrofo facultativo, que puede oxi- aerobios obligados
Medios de cultivo: segn la finalidad que se persiga, se recuentos, serologa, empleo de mutantes resistentes a dar compuestos orgnicos e inorgnicos con azufre.
emplean los: antibiticos, sondas de ADN especficas y aquellas que Se han propuesto diferentes esquemas metablicos en la
analizan la composicin del ADN o ARN (Anexo prctico). oxidacin de compuestos con azufre. Algunos autores
complejos, son los ms comnmente usados, sobre En general, la forma ms directa para identificar una cepa Cuadro 2- Transformaciones de compuestos suponen pasajes por politionatos:
todo en la preparacin de inoculantes: medio-79 o EMA de rhizobio es inducir la formacin de ndulos, reaisln- reducidos del azufre
(extracto de levadura-manitol-agar) dolo a partir de los mismos. El cuadro 6 presenta alguno S S O = S4O6= S3O6= SO3= SO4=
de los criterios empleados en la taxonoma de rhizobio. (kcal/mol) 2 3
tiosulfato tetrationato tritionato sulfito sulfato
definidos, en los cuales el extracto de levadura es reem- 1. H2S + 2 02 H2SO4 - 160
plazado por compuestos nitrogenados inorgnicos, ami- Cuadro 6- Caracterizacin fenotpica y filogentica 0 +
2. S + 1,5 O2 + 2H H2SO4 - 118 El rpido crecimiento de estos organismos, 2 horas de
nocidos y cofactores, se emplean para determinar los de rhizobio
tiempo de generacin cuando crecen a expensas de tio-
requerimientos nutritivos, los productos del catabolismo, 3. S2O3= + O2 + H2O 2SO4 = + 2H+ - 211
Caracteres fenotpicos sulfato, y la relativa versatilidad del grupo, los hacen muy
las vas metablicas y la identificacin de mutantes.
* Rango de leguminosas hospederas (infectividad, 4. 5S2O3= + 8NO3- + H2O 10SO4= + 4N2 + 2H+ - 893 tiles para estudios fisiolgicos asociados a modos qui-
efectividad) 5. SO3= + 0,5 O2 SO4= - 60 mioauttrofos de vida.
A partir de suelo (sin leguminosas) (Anexo prctico)
* Rango de sustratos empleados como fuentes de -
energa (azcares, alcoholes, hidratos de C com- 6. (R-S-S-R+HS +H2S) +3H2O+ 3NAD(P) SO3= + La autotrofia obligada, ms extendida entre los nitrifi-
* sembrar la leguminosa especfica en el suelo en cues-
plejos) 3NAD(P)H +5H +
+ 186 cantes, es una propiedad variable entre los oxidantes del
tin (campo, maceta, tubos) y esperar la aparicin de
* Rango de sustratos empleados como fuente de N azufre y est completamente ausente entre las bacterias
ndulos, para proceder como anteriormente 7. SO3= + H2O + NAD(P) SO4= + NAD(P) + H+ + 34
(aminocidos, urea, nitratos) del hidrgeno. Muchos estudios se realizan para tratar de
* Resistencia a antibiticos explicar esta caracterstica distribuida al azar entre los
* inocular muestras del suelo en estudio en suspensin
* Movilidad electrofortica de distintas enzimas principales grupos de procariotas:
con agua en tubos y/o macetas con soporte inerte (are-
* Tolerancia a situaciones de estrs (salinidad, tem- T. thiooxidans y T. novellus pueden realizar la reaccin 3),
na/vermiculita, agar, etc.) con plntulas creciendo asp-
peratura, pH) T. thiooxidans, la 2). T. denitrificans obtiene energa de la la incapacidad de estos organismos de emplear fuentes
ticamente (semillas desinfectadas previamente). El
reaccin 4) utilizando tambin en anaerobiosis el S como orgnicas exgenas puede deberse a la ausencia de
medio es para plantas: agua y sales, sin carbono (foto- Caracteres filogenticos
donador de electrones. En aerobiosis (es anaerobio fa- permeasas especficas que incorporen a las molcu-
sntesis) ni nitrgeno (fijacin de N2), ambos elementos * Modelos de bandeo de fragmentos de restriccin del
cultativo) puede oxidar segn las ecuaciones 2) y 3). las orgnicas. Pero esta teora ha sido cuestionada pues
son tomados del aire. ADN (RFLPs)
* Grado de hibridizacin con sondas especficas del se observ que muchos thiobacilos pueden incorporar
T. ferroxidans puede realizar las reacciones 2) y 3) pero el C14-acetato cuando metabolizan sulfuros, aunque esta
ADN
puede desarrollarse empleando la energa de la oxida- fuente contribuye con muy poco del carbono reciente-
Identificacin de rhizobios y taxonoma * Anlisis de secuencias del fragmento 16S del rARN
cin de sales ferrosas, en lugar de las formas reducidas mente sintetizado
del azufre:
Rhizobio es un habitante normal del suelo, aunque puede
la explicacin ms aceptada se basa en la ausencia de
presentarse muchas veces en baja densidad. Es capaz de Resumiremos algunos de los caracteres taxonmicos
12 FeSO4 + 3O2 + 6 H2O Fe (SO4)3 + 4 Fe(OH)3 un ciclo de cidos tricarboxlicos funcional por falta
sobrevivir, compitiendo efectivamente con el resto de la po- empleados:
blacin y haciendo uso eficiente de los nutrientes disponi- de la enzima -cetoglutarato deshidrogenasa y a ni-
Todos los thiobacilos, con excepcin del T. novellus, em- veles muy bajos de succnico y mlico deshidrogena-
bles. La vida saproftica de esta bacteria es tema de inters, inefectividad: capacidad de nodular: especies de legu-
plean CO2 como fuente de carbono y sales amoniacales sas. Al no poder mediatizar la oxidacin de la acetil-
incluso en cultivos que son ao a ao inoculados con altas minosas mutuamente susceptibles de nodular con un
como fuente de N, incluso el T. denitrificans que no es CoA, el ciclo funciona como dos metabolismos separa-
dosis de rhizobios especficos, como ocurre en casi 100% tipo particular de rhizobio, constituyeron un grupo de
capaz de asimilar nitratos. dos puramente biosintticos.
del rea sembrada de soja en Argentina, Uruguay y Brasil. inoculacin cruzada. Las cepas capaces de nodu-
nes crticas son altas y slo excepcionalmente los vegeta- A diferencia de lo que ocurre en la nitrificacin, en donde lar las plantas de uno de esos grupos se consideraban La taxonoma numrica ha permitido agrupar enorme
les se ven perjudicados por la accin microbiana. En ese slo un grupo pequeo de microorganismos auttrofos como especies, independientemente de la ocurrencia cantidad de caracteres bacterianos (morfolgicos, meta-
caso resulta favorable fertilizar con compuestos con azufre. muy eficientes y una multiplicidad de hetertrofos poco de la fijacin de N2. Pero numerosos ndulos son in- blicos, ecolgicos, genticos) determinando grados de
Algunos microorganismos, sobre todo los anaerobios, que eficientes son los responsables de la formacin de nitra- efectivos, no benefician el crecimiento de la legumino- similitud entre aislamientos.
no pueden emplear sulfatos, porque no son formados en tos, en la sulfooxidacin intervienen: sa y se consideran incluso como parsitos, ya que la
ambientes carentes de oxgeno, pueden asimilar formas planta provee energa para su desarrollo, sin recibir ni- En el Bergeys Manual of Determinative Bacteriology
orgnicas del azufre, como los aminocidos, protenas. 1. organismos quimioauttrofos del gnero Thiobaci- trgeno en cambio. La biodiversidad de cepas de rhizo- (2001) se encuentra la descripcin de los gneros de la
llus aerobios y anaerobios bios es considerable, como lo demuestran los estudios familia Rhizobiaceae y el cuadro 7 incluye algunas de las
Las condiciones que favorecen a la inmovilizacin son en rboles (Prosopis sp., Faidherlia albida, etc.). modificaciones recientes.
las mismas que afectan a la mineralizacin, pero en sen- 2. bacterias quimiolitotrofas filamentosas y sobre todo
tido inverso: acuticas de la familia Beggiatoaceae efectividad, (capacidad para fijar N ), la propiedad ms Cuadro 7 - Clasificacin de los rhizobios
2
importante en una seleccin de cepas para preparar un
pH y temperatura bajas, humedades elevadas, restos ve- 3. bacterias fotosintticas sulfurosas purpreas y ver- inoculante Gnero Especies Hospedantes
getales con menos de 0,1-0,2% de S des de las familias Chromatiaceae y Chlorobiaceae Bradyrhizobium B. japonicum Glycine max
caractersticas morfolgicas y culturales, crecimien-
B. elkanii Glycine max
La microflora activa en la mineralizacin es muy amplia, 4. un amplio nmero de microorganismos quimiohe- to con distintas fuentes de carbono, produccin de ci- Bradhyrhizobium spp. Vigna, Macroptilium
una multiplicidad de especies de bacterias, hongos, pro- tertrofos variados dos, resistencias a salinidad, acidez, antibiticos, etc. Arachis, Acacia
tozoos, algas. Es la misma poblacin que interviene en la Rhizobium R. leguminosarum
anlisis del genoma bacteriano han demostrado ser biovar viciae Vicia
mineralizacin de restos vegetales y animales que llegan En el suelo son los thiobacilos y los organismos heter-
importantes herramientas en los estudios de evolucin biovar trifolii Trifolium
al suelo y actan en todas las condiciones compatibles trofos los que desempean un rol cuantitativamente ms biovar phaseoli Phaseolus y
y han renovado el inters en estudios taxonmicos. La
con la actividad biolgica. Todos los factores que favore- importante, los otros dos grupos son sobre todo acuticos leguminosas templadas
composicin de bases del ADN (citosina+guanina)%,
cen el crecimiento microbiano, favorecern la liberacin y las bacterias fotosintticas requieren anaerobiosis y do- R. lupini Lupinus
plsmidios, el anlisis de las protenas totales por elec-
de sulfatos: sis altas de sulfuros. R. galegae Galega officinalis
troforesis, hibridacin de ADN y ARN o ARN-ARN, el R. etli Phaseolus vulgaris
polimorfismo de los fragmentos de restriccin del ADN R. tropici P. vulgaris y Leucaena
aumento de temperatura en el rango mesfilo, la libera- 1. Thiobacteriaceae: estas bacterias sulfooxidantes po-
(RFLP), la secuenciacin del ADN y otras aproximacio- Azorhizobium A. caulinodans Sesbania rostrata
cin de sulfatos es escasa debajo de 10C y se eleva seen la capacidad de obtener energa y poder reductor
nes como el anlisis electrofretico de enzimas y la (areos)
con la temperatura hasta 35C para su biosntesis celular de la oxidacin de compues-
taxonoma numrica han demostrado su utilidad en es- Sinorhizobium S. meliloti Medicago, Melilotus,
tos inorgnicos del azufre. La actividad metablica de
tudios de estas bacterias Trigonella
encalado en suelos cidos, una mejor aireacin y hu- las bacterias oxidantes del azufre y del hierro juega im-
S. fredii Glycine spp., Leucaena
medades medias portante rol en distintos campos de importancia econ- anlisis de ARN 16s ribosomal, tanto la conservacin leucocephala
mica como son la purificacin de minerales con uranio, del ARN ribosomal como la existencia de variabilidad S. saheli Sesbania cannabina,
la desecacin provoca liberacin de sulfatos de la ma- cobre y otros metales, la corrosin de caeras metli- en ciertos segmentos, hace que el estudio de la secuen- S. rostrata
teria orgnica por vas no biolgicas cas, en la tecnologa del petrleo, polucin de aguas y cia de los genes del rARN, constituyen importantes he- S. terangae Acacia, Sesbania
fertilidad de suelos. rramientas en la comparacin de organismos y en el Mesorhizobium M. loti Lotus, Lupinus
En general, se piensa que el azufre se mineraliza al mis- establecimiento de relaciones filogenticas M. huakuii Astragalus sinicus
mo rango que el nitrgeno, es decir entre un 1 al 3% al Adems de la habilidad para producir cido sulfrico, al- M. ciceri Cicer arietinum
ao en suelos de la zona templada gunos de sus integrantes son capaces de reducir nitratos M. hainanensis Leguminosas de
anlisis serolgico, estos estudios han sido relativa-
regiones ridas
y otros xidos del N hasta N2, limitando la provisin de mente poco utilizados para clasificar a los rhizobios de- M. tianshanense Leguminosas de
uno de los ms importantes nutrientes nitrogenados. Mu- bido a la variedad de antgenos que poseen estos orga- regiones tropicales
Sulfooxidacin cha atencin han recibido las transformaciones realiza- nismos. Allorhizobium A. undicola Neptunia natans
das por miembros del gnero Thiobacillus, pero an res-
Blastobacter B. denitrificans Aeschynomene
Numerosos compuestos inorgnicos del azufre con estan sin dilucidar mecanismos enzimticos y la naturaleza anlisis de la homologa de fragmentos de restric-
indica
tado de oxidacin menor que el sulfato (+6) pueden ser de muchos intermediarios en la oxidacin (cuadro 2). cin amplificados por la reaccin de la polimerasa
Methylobacterium M. nodulans Crotalaria
oxidados biolgicamente o qumicamente hasta sulfato: (RFLP/PCR). Estas tcnicas son muy empleadas y sus
resultados acuerdan con la filogenia derivada de estu- Burkholderia B. sp Aspalathus
sulfuros (-2); S (O); tiosulfato S2O3= (-2); sulfitos SO3= Los thiobacilos son bacterias Gram negativos, no es-
dios de enzimas multilocus (Martnez et al, 1996). Ralstonia R. taiwanensis Mimosa
(+ 4). porulados, algunos mviles por flagelo polar, y deposi-
Frankia i) infectividad y efectividad en distintos hospedantes del S asimilado por los vegetales y microorganismos productos finales estn en parte gobernados por las con-
ii) crecimiento y caractersticas fisiolgicas y tambin lavado. Muchos suelos lo retienen como diciones del medio:
El endofito de ndulos tipo Alnus ha sido frecuentemen- iii) estudios genticos: n y tipo de plsmidos, isoenzimas, minerales sulfatados insolubles (sulfatos de calcio y
te descrito como simbionte obligado y pocas referen- perfil de cidos grasos, polimorfismo de segmentos de magnesio). en aerobiosis el producto final es el sulfato, acompa-
cias a ellos se encuentran en los textos clsicos de restriccin del ADN (RFLP), secuencias del rARN 16S. ado de nitratos, CO2, H2O, fosfatos, etc.
microbiologa. Han sido introducidos en la 8 edicin Las regiones conservadas de este fragmento permiten el del azufre es considerado un ciclo ms complejo;
del Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, pero ubicar al gnero Frankia dentro de los Actinomicetales, muchas de las transformaciones, sobre todo la sul- en anaerobiosis, como ocurre en el caso de la putre-
no figuran muchos textos sobre actinomicetes. La cau- mientras que las regiones hipervariables son tiles para fooxidacin de innumerables compuestos con grado faccin de protenas, se acumula H2S y productos de
sa principal de esta omisin ha sido la incapacidad de la clasificacin filogentica a nivel de gnero y especie. de oxidacin intermedio entre sulfuros y sulfatos, no mal olor como los mercaptanes: metilmercaptn (CH3-
cultivarlos in-vitro. Este inconveniente ha sido supera- estn bien dilucidadas. El ciclo de este elemento in- SH), metil-etil-mercaptn (CH3-S-C2H5), txicos para los
do y se han aislado con xito endofitos de Comptonia cluye la mineralizacin de residuos vegetales, ani- vegetales, junto a aminas, amidas, NH3, fosfatos, sales
peregrina, de Alnus glutinosa, Colletia spinosissima Aislamiento males, fertilizantes, aportes por la lluvia y ciertos ferrosas, CO2, CH4, cidos orgnicos, alcoholes.
(Diem et a.l., 1982). gases, como SO2, H2S que llegan al suelo en canti-
Se han empleado distintas tcnicas para lograr el aisla- dades importantes en zonas fabriles, del orden de Los aminocidos son rpidamente degradados en sue-
Algunos autores presentaron evidencias para la subdivi- miento de Frankia: digestin enzimtica de macerados 100 kg/ha/ao en regiones industrializadas de Euro- los bien aereados, con liberacin de sulfatos. Los micro-
sin de los endofitos tipo Alnus basadas en las barreras de ndulos, microdiseccin, fraccionamiento en gradiente pa y Estados Unidos. organismos hetertrofos pueden tambin liberar sulfatos
de inoculacin cruzada entre especies vegetales. Las ex- de sacarosa, diluciones seriadas o aislamiento directo a de compuestos de estructura R-SH. La cistena desulfhi-
periencias se realizaron desde 1978 inoculando con culti- partir de trozos de ndulos desinfectados superficialmen- drasa es responsable de la liberacin de sulfuros a partir
vos puros de Frankia y se comprob que un mismo aisla- te. Se han desarrollado numerosos medios de cultivos. Mineralizacin-inmovilizacin de cistina:
miento poda nodular distintas especies, resultando difcil Las plntulas se desarrollan en medio sin nitrgeno en
la subdivisin en especies basada en la especificidad tubos, al mes se inoculan con macerado nodular y los Los vegetales requieren sulfatos como fuente de azufre, HSCH2CHNH2COOH + H2O CH3COCOOH + H2S + NH3
endofito-hospedante, como en el caso de los rhizobios. ndulos se hacen visibles entre 1 y 2 meses. A partir de el que deben reducir a forma sulfhidrilo (-SH) en sus
ellos se efecta el aislamiento de Frankia (Anexo prc- clulas. La mineralizacin de las formas orgnicas de En el caso de la metionina puede aparecer sulfato luego
Otros caracteres que se toman en cuenta para establecer tico). este elemento es un importante proceso microbiolgico de su incorporacin al suelo, o bien la degradacin puede
claves taxonmicas en Frankia incluyen: que asegura la provisin de sulfatos en la zona radical. ocurrir con formacin de productos finales voltiles, metil-
Morfologa Esta bacteria presenta distintas estructuras Formas orgnicas como protenas, aminocidos, anti- mercaptn (CH3-SH) y dimetildisulfuro (CH3SSCH3), reali-
la composicin qumica de las paredes celulares en medios de cultivo (figura 8) y en los ndulos biticos como la penicilina, compuestos hmicos, ste- zado por bacterias y hongos.
la capacidad para formar esporas en los ndulos hifas: en las colonias las hifas aparecen ramificadas, res sulfricos, etc. son transformados en compuestos
septadas, de unos 0,4 a 0,9 micras cada vez ms simples por una micropoblacin muy va- Las sulfatasas (sulfohidrolasas) como la arilsulfatasa, son
isoenzimas riada, en condiciones muy amplias de aireacin, tempe- enzimas que hidrolizan steres sulfricos, con enlaces tipo
taxonoma gentica los esporangios, pueden presentarse intercalarmente, ratura, pH, liberando finalmente compuestos inorgni- R-O-S:
con esporas de forma irregular: globulosas, o de masa, cos, sulfatos y/o sulfuros.
Frankia posee ciertos rasgos taxonmicos caractersticos: alargados o irregulares, con paredes gruesas, tamao R-O-SO3- + H2O R-OH + SO4= + H+
su pared posee cido diaminopimlico, cido glutmico, variable (0,5 a 1 micra), muy abundantemente empa- La inmovilizacin incorpora estos iones a las clulas
alanina, peptidoglicano. Sus cidos grasos son de cadena quetadas en la zona infectada. Su formacin puede ori- microbianas que compiten por ellos con los vegetales. La mineralizacin de compuestos azufrados y la libera-
normal, ramificados y monoinsaturados. Ciertos lpidos no ginarse en las clulas de la corteza a partir de cuerpos La biomasa microbiana del suelo regula las transfor- cin de formas minerales, reducidas u oxidadas (mine-
saponificables llamados hopanoides les confieren resis- esporgenos de las hifas, o en espacios intercelulares. maciones del azufre y la actividad microbiana regula ralizacin neta) depende, como en el caso del nitrge-
tencia en condiciones desfavorables, son usados en la taxo- La formacin de esporas puede estar ausente, los n- tanto los flujos de azufre entre las diferentes reservas no, del contenido de S%, de la relacin C/S y a veces de
noma. Tambin se han encontrado cepas genticamente dulos sin ellas se denominan Sp- y los que las presen- (sulfatos solubles, S-orgnico lbil y S-orgnico resis- la N/S.
diferentes en endofitos de Alnus: una produce esporas y la tan como ndulos Sp+. tente) y es responsable de la conversin de fracciones
otra no, aunque en cultivo puro esta ltima es capaz de pasivas a otras muy activas, como los aminocidos con La relacin crtica C/S debajo de la cual el azufre excede
esporular, indicando que la supresin de la esporulacin en vesculas, la presencia de estas estructuras esfricas cistena. las necesidades de la microflora y se libera al medio, vara
simbiosis est controlada por el hospedante. (2,6 micras) de paredes gruesas, en extremos de hifas como en el caso ya considerado del nitrgeno, con los ma-
cortas y ramificadas se visualizan en el microscopio Como en el caso del nitrgeno, las combinaciones del teriales orgnicos que llegan al suelo, pero se puede esta-
As, los intentos de clasificacin de Frankia (Lechevalier, ptico y son el asiento de la fijacin de nitrgeno (pro- azufre en el humus, conducen a una estabilizacin. Los blecer valores entre 100 a 150/1. En general, las relacio-
1994) incluyen estudios sobre: teccin de la N2asa) en aerobiosis
gica intensa. La figura 1 presenta las transformaciones reduccin de crecer con N2 en vida libre y emplear otras fuentes de
biolgicas que sufren los compuestos con azufre que in- S-org N: aminocidos, urea, nitrato, adenina, uracilo y amonio.
cluyen procesos de: Como en otros diazotrofos la glutamino sintetasa es la
enzima responsable de la asimilacin del amonio.
mineralizacin-inmovilizacin Azufre elemental Tiosulfato Sulfito
SO4=
SH2 S o
S2 O 3 =
SO3= Proteccin frente al oxgeno
xido-reduccin sulfato
Las cepas son aerobias o microaeroflicas y a diferencia
volatilizacin, de menor importancia, excepto las pr- de los rhizobios, frankia puede fijar N2 a diferentes con-
didas de H2S o anhidrdos de azufre, debido a activida- FeS oxidacin centraciones de O2 (Valdes et al, 1996).Su nitrogenasa
des del hombre.
Sulfuro
de hierro
est protegida en las vesculas, rodeadas de gruesas
-2 0 +2 +4 +8 capas lipdicas, integrados por hopanoides y triterpenos
pentaciclados, reconocidos en la alteracin de la permeabi-
Vegetales Animales Figura 2 Cambios en estados de oxido-reduccin en lidad de membranas en procariotes. Estas estructuras se
compuestos con azufre han comparado con los heterocistos de las cianobacte-
rias. La presencia de superxido dismutasa en el ndu-
SO4=, SO3=, S3O6=, S2O3= Su lo contribuira tambin a la proteccin. Los gruesos teji-
lfo
ox
ida
S0 Como se observa las transformaciones que sufre dos del ndulo y la hemoglobina contribuyen a la protec-
Su ci este elemento en el suelo tienen mucha similitud
SO2
lfat
orr n cin en simbiosis. La presencia de una hidrogenasa fun-
edu
atmosfrico
cci
n S=
con las del nitrgeno cional ha sido citada como un mecanismo adicional y
permitira en muchos casos un crecimiento autotrfico
Mineralizacin Inmovilizacin la reserva en el suelo es orgnica (75-90% del S-total)
Gentica de Frankia
Mineralizacin
la nutricin vegetal depende de la actividad minerali- Los estudios han avanzado lentamente por la baja velo-
Materia orgnica, fresca, zante de la microflora del suelo cidad de crecimiento, la escasa germinacin de las espo-
humificada, Figura 8 - Morfologa de Frankia con hifas, esporangios y
ras. Mucha de la informacin obtenida se ha logrado con
microorganismos la sulfooxidacin es un proceso similar a la nitrificacin vesculas. Arriba: aislamiento de Casuarina equisetifolia
las tcnicas usadas para los rhizobios y actinomicetes.
en el plano bioqumico y ecolgico (Frioni et al, 1991). Abajo: esporangios, estructuras de
Figura 1- Transformaciones biolgicas del azufre resistencia y de produccin de esporas y diazovesculas Se ha avanzado en la determinacin de los plsmidos y
la sulfhidrizacin, o mineralizacin de compuestos azu- (flechas) (Duhoux y Nicole, 2004). los genes nod, nif y genes que codifican la asimilacin del
frados orgnicos hasta sulfuros o H2S, es muy similar a amonio. Una herramienta muy til en el establecimiento
No son importantes las reacciones de precipitacin-solu- la amonificacin de relaciones filogenticas es el estudio de las secuen-
bilizacin de compuestos azufrados. El polimorfismo de Frankia dificulta los estudios fisiolgi- cias conservadas en los segmentos 16S de los rARN.
la sulfatorreduccin es una respiracin anaerobia, como
cos y la evaluacin del crecimiento, ya que no produce tur-
la desnitrificacin, con las mismas consecuencias ne- bidez uniforme como los microorganismos unicelulares. La Los diazotrofos asociados a los vegetales en relaciones
El azufre existe en varios estados de oxidoreduccin,
gativas en la nutricin vegetal pero importante para eli- curva de crecimiento se analiza por determinaciones de no simbiticas (rizosfricas, filosfricas) y simbiticas no-
desde -2 en los sulfuros voltiles o precipitados (H2S,
minar a la atmsfera sulfatos en aguas. biomasa por medio de diferentes tcnicas, como anlisis dulares, son analizados en el captulo 15.
FeS), hasta +6 en los sulfatos (figura 2) (Frenchel et al,
1998). del contenido de protenas, determinacin de actividad
Sin embargo, ambos ciclos presentan algunas deshidrogenasas (TTC, INT), turbidimetra luego de soni- Eficiencia de la fijacin del N2 por diazotrofos
Numerosas son la formas inorgnicas en el ambiente:
diferencias cacin de las hifas, actividad N2asa. Para la preparacin
sulfuros (-2), S (0), tiosulfatos (-2, +6), sulfitos (+4), de inoculantes y en estudios fisiolgicos se trabaja con cul- vida libre asociaciones asociaciones
la fuente primaria de nitrgeno disponible para la activos frescos, repicados varias veces en medios nuevos.
sulfatos (+6). Los estados de oxidacin ms comunes rizosfricas nodulares
tividad biolgica lo constituye la atmsfera y en el
en suelos y materiales orgnicos son: -2 en sulfuros y
caso del azufre es la roca madre. La principal fuente Fuentes de carbono y nitrgeno Causas:
en la mayora de compuestos orgnicos y +6 en los sul-
en el suelo es la pirita (FeS2) de las rocas gneas, Frankia emplea cidos grasos de cadena corta (propini- aportes constantes de nutrientes
fatos y molculas que los contienen. Los procesos de
que sufre oxidaciones liberando sulfato durante la me- co, actico) y sus derivados, intermediarios del ciclo de concentracin de O2 bajas
oxidacin y reduccin ocurren fcilmente en condicio-
teorizacin y la formacin del suelo. Esta es la forma Krebs (cidos succnico, mlico) y el cido pirvico. Pue- exportacin productos de la fijacin (inhiben a la FBN)
nes adecuadas.
Bibliografa Silver, W. S. y E.C. Schrder, Practical application of

Azolla for rice production. 1984, Martinus Nijhoff, J.
Barea, J. M. Cuantificacin de la fijacin biolgica de N Publish, Boston
mediante el uso de N 15 . En: Fijacin y moviliza- Stevenson, F. J. & Cole, M. A. Cycles of Soil, 1999, Wiley
cin de nutrientes, vol II, 1991, Olivares y Barea, & sons, New York Ciclos biolgicos del azufre, fsforo,
coordinadores. CSIC, Coleccin Nuevas Tendencias,
Madrid
Diem, H. G.; D. Gauthier y Y. Dommergues, Isolation of
Frankia from Nodules of Casuarina equisetifolia, 1982,
Valdes, M., J. Vazques Mendes y A.. Muos Garca La
biologa de Frankia, endosimbionte de rboles fijadores
de nitrgeno. 1996, Ciencia 47:51-67
Zuberer, D. A. Biological Dinitrogen Fixation: Introduction
12 hierro
Can. J. Microb., 28 (5), 526-530. and Nonsymbiotic. En: Principles and Applications of
Dbereiner, J. y F. P. Pedrosa, Nitrogen-fixing Bacteria Soil Microbiology, 1998, Sylvia, Fuhrmann, Hartel, Zu-
in Non-Legumes Cops Plants. 1987, Springer-Berlag, berer, (eds), Prentice Hall. International, London Ciclo biolgico del azufre 109kg) y en vegetales (7,6 x 1012kg) (Stevenson y Cole,
Berln 1999). El cuadro 1 muestra flujos de azufre entre los
Duhoux, E. y Nicole, M. Biologie Vgtale, Associatio- Preguntas de repaso El azufre es un elemento esencial para todos los orga- componentes ms importantes en suelos agrcolas tpi-
ns et interactions chez les plantes, 2003 IRD, Du- nismos, es uno de los 10 bioelementos requeridos en cos.
nod, Pars 1) Por qu resulta de difcil asimilacin el N contenido relativamente alta concentracin, e integra la composi-
Frioni, L. Procesos microbianos. 1999, Fundacin de la en el N2? cin de: Cuadro 1- Flujos de azufre en suelos agrcolas
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina 2) Organismos diazotrofos. Cmo pondra en eviden- (kg/ha/ao)
cia a estos organismos? protenas, en los aminocidos metionina (21% de S) y
Frioni, L.; Spinelli, A. y Maggi, A. Nodulacin y fijacin de
3) Cuales se consideran requisitos indispensables para cistina (27% de S), formando adems puentes de azu- Toma por vegetales 10-50
nitrgeno en Casuarina y Allocasuarina cultivadas en
que ocurra la FBN? fre. Los enlaces disulfuro estabilizan la estructura ter- Remocin por cosechas 5-20
el pas. 1991, Bol. Inv. Fac. Agronoma (Montevideo),
4) Puede comparar este proceso con la Fijacin Indus- ciaria de protenas Remocin en productos animales 0-5
N 30: 1-20
trial? Entradas de la atmsfera 2-20
Gillis, M, y B. Reinhold-Hurek Taxonomy of Azospirillum, en:
5) Si bien los costos de la sntesis qumica de fertilizan- factores de crecimiento, como la biotina y tiamina, hor- Lavado 0-50
Azospirillum-Plant Associations. 1994 Y.Okon (ed), CRC
tes nitrogenados est bajando, explique los motivos monas, coenzima A Meteorizacin de minerales 0-5
Press, Boca Raton, Florida
de continuar explotando la FBN. Emisiones voltiles desconocidas
Gonzalez-Lopez, J. Y Lluch Pl, C. (eds) Interaccin 6) Seale algn mtodo para evidenciar que una prade- fuente de energa para muchos microorganismos: la
Planta-Microorganismo, 1992, Biologa del Nitrgeno, ra natural (leguminosas, gramneas) est fijando N2. oxidacin de formas reducidas del azufre, importantes
Editorial Rueda, Madrid 7) Compare y explique las variaciones en la eficiencia de en ambientes a altas temperaturas, permite la fijacin El contenido de S en los suelos vara mucho, los rangos
Lechevalier, M.P. Taxonomy of the genus Frankia. 1994, la FBN en diazotrofos en vida libre, en asociaciones del carbono y el desarrollo microbiano ms frecuentes en suelos agrcolas de regiones hme-
Int. J. Syst. Bacteriol. 44: 1-8 rizosfricas y en simbiosis nodulares. das y semi-hmedas es de 100 a 500 mg/kg o 0,01 a 0,05%
Martinez, E., D. Romero y J. Caballero-Mellado, Rhizo- 8) Compare simbiosis con rhizobio y con frankia. Los vegetales contienen aproximadamente la misma (224-1.120kg/ha en la capa arable), los vegetales consu-
bium phylogenies and bacterial genetic diversity. 1996, 9) Compare las asociaciones entre diazotrofos fotosint- cantidad de S y de P (0,2-0,5%) de su peso seco y men una cantidad variable de este elemento, en general
Crit. Rev. Plant Sci. 15(2):113-140 ticos y hetertrofos con los vegetales. como sus funciones estn relacionadas con activida- se citan datos entre 10-30kg/ha. La mayor reserva de este
Okon, Y. (ed) Azospirillum-Plant Associations. 1994, 10) Cual es el proceso biolgico que contrarresta a la des enzimticas, como la ferredoxina, una protena Fe- elemento en el suelo es orgnica y en muchos casos cons-
CRS Press, Boca Raton, Florida FBN en la naturaleza? S, que participa en la fotosntesis y tambin en la fija- tituye un factor limitante al desarrollo vegetal, que presen-
cin del N2, las plantas deficientes en S muestran sn- tan claros sntomas de deficiencia. La respuesta a fertili-
tomas caractersticos de deficiencias: retardo en el cre- zantes azufrados es rpida en esos casos. Los fertilizan-
cimiento, amarillamiento de hojas, sobretodo en las le- tes fosfatados contienen CaSO4 que elevan el nivel de S
guminosas. del suelo. Los vegetales se nutren de preferencia de sul-
fatos, pero pueden asimilar tambin ciertos aminocidos
Los principales reservas de azufre se encuentran en la y formas voltiles de azufre por las hojas.
litsfera (rocas sedimentarias, gneas y metamrficas de
la corteza terrestre), con 24 x 10 18 kg y en la hidrsfera, La atmsfera puede contener compuestos con azufre: SO2,
1,3 x 1018 kg. En el suelo se encuentran cantidades mo- SH2, provenientes de la actividad industrial, de la polucin
deradas (2,6 x 1014kg), menos en la atmsfera (4,8 x en las grandes ciudades y tambin de una actividad biol-
Bibliografa Silver, W. S. y E.C. Schrder, Practical application of

Azolla for rice production. 1984, Martinus Nijhoff, J.
Barea, J. M. Cuantificacin de la fijacin biolgica de N Publish, Boston
mediante el uso de N 15 . En: Fijacin y moviliza- Stevenson, F. J. & Cole, M. A. Cycles of Soil, 1999, Wiley
cin de nutrientes, vol II, 1991, Olivares y Barea, & sons, New York Ciclos biolgicos del azufre, fsforo,
coordinadores. CSIC, Coleccin Nuevas Tendencias,
Madrid
Diem, H. G.; D. Gauthier y Y. Dommergues, Isolation of
Frankia from Nodules of Casuarina equisetifolia, 1982,
Valdes, M., J. Vazques Mendes y A.. Muos Garca La
biologa de Frankia, endosimbionte de rboles fijadores
de nitrgeno. 1996, Ciencia 47:51-67
Zuberer, D. A. Biological Dinitrogen Fixation: Introduction
12 hierro
Can. J. Microb., 28 (5), 526-530. and Nonsymbiotic. En: Principles and Applications of
Dbereiner, J. y F. P. Pedrosa, Nitrogen-fixing Bacteria Soil Microbiology, 1998, Sylvia, Fuhrmann, Hartel, Zu-
in Non-Legumes Cops Plants. 1987, Springer-Berlag, berer, (eds), Prentice Hall. International, London Ciclo biolgico del azufre 109kg) y en vegetales (7,6 x 1012kg) (Stevenson y Cole,
Berln 1999). El cuadro 1 muestra flujos de azufre entre los
Duhoux, E. y Nicole, M. Biologie Vgtale, Associatio- Preguntas de repaso El azufre es un elemento esencial para todos los orga- componentes ms importantes en suelos agrcolas tpi-
ns et interactions chez les plantes, 2003 IRD, Du- nismos, es uno de los 10 bioelementos requeridos en cos.
nod, Pars 1) Por qu resulta de difcil asimilacin el N contenido relativamente alta concentracin, e integra la composi-
Frioni, L. Procesos microbianos. 1999, Fundacin de la en el N2? cin de: Cuadro 1- Flujos de azufre en suelos agrcolas
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina 2) Organismos diazotrofos. Cmo pondra en eviden- (kg/ha/ao)
cia a estos organismos? protenas, en los aminocidos metionina (21% de S) y
Frioni, L.; Spinelli, A. y Maggi, A. Nodulacin y fijacin de
3) Cuales se consideran requisitos indispensables para cistina (27% de S), formando adems puentes de azu- Toma por vegetales 10-50
nitrgeno en Casuarina y Allocasuarina cultivadas en
que ocurra la FBN? fre. Los enlaces disulfuro estabilizan la estructura ter- Remocin por cosechas 5-20
el pas. 1991, Bol. Inv. Fac. Agronoma (Montevideo),
4) Puede comparar este proceso con la Fijacin Indus- ciaria de protenas Remocin en productos animales 0-5
N 30: 1-20
trial? Entradas de la atmsfera 2-20
Gillis, M, y B. Reinhold-Hurek Taxonomy of Azospirillum, en:
5) Si bien los costos de la sntesis qumica de fertilizan- factores de crecimiento, como la biotina y tiamina, hor- Lavado 0-50
Azospirillum-Plant Associations. 1994 Y.Okon (ed), CRC
tes nitrogenados est bajando, explique los motivos monas, coenzima A Meteorizacin de minerales 0-5
Press, Boca Raton, Florida
de continuar explotando la FBN. Emisiones voltiles desconocidas
Gonzalez-Lopez, J. Y Lluch Pl, C. (eds) Interaccin 6) Seale algn mtodo para evidenciar que una prade- fuente de energa para muchos microorganismos: la
Planta-Microorganismo, 1992, Biologa del Nitrgeno, ra natural (leguminosas, gramneas) est fijando N2. oxidacin de formas reducidas del azufre, importantes
Editorial Rueda, Madrid 7) Compare y explique las variaciones en la eficiencia de en ambientes a altas temperaturas, permite la fijacin El contenido de S en los suelos vara mucho, los rangos
Lechevalier, M.P. Taxonomy of the genus Frankia. 1994, la FBN en diazotrofos en vida libre, en asociaciones del carbono y el desarrollo microbiano ms frecuentes en suelos agrcolas de regiones hme-
Int. J. Syst. Bacteriol. 44: 1-8 rizosfricas y en simbiosis nodulares. das y semi-hmedas es de 100 a 500 mg/kg o 0,01 a 0,05%
Martinez, E., D. Romero y J. Caballero-Mellado, Rhizo- 8) Compare simbiosis con rhizobio y con frankia. Los vegetales contienen aproximadamente la misma (224-1.120kg/ha en la capa arable), los vegetales consu-
bium phylogenies and bacterial genetic diversity. 1996, 9) Compare las asociaciones entre diazotrofos fotosint- cantidad de S y de P (0,2-0,5%) de su peso seco y men una cantidad variable de este elemento, en general
Crit. Rev. Plant Sci. 15(2):113-140 ticos y hetertrofos con los vegetales. como sus funciones estn relacionadas con activida- se citan datos entre 10-30kg/ha. La mayor reserva de este
Okon, Y. (ed) Azospirillum-Plant Associations. 1994, 10) Cual es el proceso biolgico que contrarresta a la des enzimticas, como la ferredoxina, una protena Fe- elemento en el suelo es orgnica y en muchos casos cons-
CRS Press, Boca Raton, Florida FBN en la naturaleza? S, que participa en la fotosntesis y tambin en la fija- tituye un factor limitante al desarrollo vegetal, que presen-
cin del N2, las plantas deficientes en S muestran sn- tan claros sntomas de deficiencia. La respuesta a fertili-
tomas caractersticos de deficiencias: retardo en el cre- zantes azufrados es rpida en esos casos. Los fertilizan-
cimiento, amarillamiento de hojas, sobretodo en las le- tes fosfatados contienen CaSO4 que elevan el nivel de S
guminosas. del suelo. Los vegetales se nutren de preferencia de sul-
fatos, pero pueden asimilar tambin ciertos aminocidos
Los principales reservas de azufre se encuentran en la y formas voltiles de azufre por las hojas.
litsfera (rocas sedimentarias, gneas y metamrficas de
la corteza terrestre), con 24 x 10 18 kg y en la hidrsfera, La atmsfera puede contener compuestos con azufre: SO2,
1,3 x 1018 kg. En el suelo se encuentran cantidades mo- SH2, provenientes de la actividad industrial, de la polucin
deradas (2,6 x 1014kg), menos en la atmsfera (4,8 x en las grandes ciudades y tambin de una actividad biol-
gica intensa. La figura 1 presenta las transformaciones reduccin de crecer con N2 en vida libre y emplear otras fuentes de
biolgicas que sufren los compuestos con azufre que in- S-org N: aminocidos, urea, nitrato, adenina, uracilo y amonio.
cluyen procesos de: Como en otros diazotrofos la glutamino sintetasa es la
enzima responsable de la asimilacin del amonio.
mineralizacin-inmovilizacin Azufre elemental Tiosulfato Sulfito
SO4=
SH2 S o
S2 O 3 =
SO3= Proteccin frente al oxgeno
xido-reduccin sulfato
Las cepas son aerobias o microaeroflicas y a diferencia
volatilizacin, de menor importancia, excepto las pr- de los rhizobios, frankia puede fijar N2 a diferentes con-
didas de H2S o anhidrdos de azufre, debido a activida- FeS oxidacin centraciones de O2 (Valdes et al, 1996).Su nitrogenasa
des del hombre.
Sulfuro
de hierro
est protegida en las vesculas, rodeadas de gruesas
-2 0 +2 +4 +8 capas lipdicas, integrados por hopanoides y triterpenos
pentaciclados, reconocidos en la alteracin de la permeabi-
Vegetales Animales Figura 2 Cambios en estados de oxido-reduccin en lidad de membranas en procariotes. Estas estructuras se
compuestos con azufre han comparado con los heterocistos de las cianobacte-
rias. La presencia de superxido dismutasa en el ndu-
SO4=, SO3=, S3O6=, S2O3= Su lo contribuira tambin a la proteccin. Los gruesos teji-
lfo
ox
ida
S0 Como se observa las transformaciones que sufre dos del ndulo y la hemoglobina contribuyen a la protec-
Su ci este elemento en el suelo tienen mucha similitud
SO2
lfat
orr n cin en simbiosis. La presencia de una hidrogenasa fun-
edu
atmosfrico
cci
n S=
con las del nitrgeno cional ha sido citada como un mecanismo adicional y
permitira en muchos casos un crecimiento autotrfico
Mineralizacin Inmovilizacin la reserva en el suelo es orgnica (75-90% del S-total)
Gentica de Frankia
Mineralizacin
la nutricin vegetal depende de la actividad minerali- Los estudios han avanzado lentamente por la baja velo-
Materia orgnica, fresca, zante de la microflora del suelo cidad de crecimiento, la escasa germinacin de las espo-
humificada, Figura 8 - Morfologa de Frankia con hifas, esporangios y
ras. Mucha de la informacin obtenida se ha logrado con
microorganismos la sulfooxidacin es un proceso similar a la nitrificacin vesculas. Arriba: aislamiento de Casuarina equisetifolia
las tcnicas usadas para los rhizobios y actinomicetes.
en el plano bioqumico y ecolgico (Frioni et al, 1991). Abajo: esporangios, estructuras de
Figura 1- Transformaciones biolgicas del azufre resistencia y de produccin de esporas y diazovesculas Se ha avanzado en la determinacin de los plsmidos y
la sulfhidrizacin, o mineralizacin de compuestos azu- (flechas) (Duhoux y Nicole, 2004). los genes nod, nif y genes que codifican la asimilacin del
frados orgnicos hasta sulfuros o H2S, es muy similar a amonio. Una herramienta muy til en el establecimiento
No son importantes las reacciones de precipitacin-solu- la amonificacin de relaciones filogenticas es el estudio de las secuen-
bilizacin de compuestos azufrados. El polimorfismo de Frankia dificulta los estudios fisiolgi- cias conservadas en los segmentos 16S de los rARN.
la sulfatorreduccin es una respiracin anaerobia, como
cos y la evaluacin del crecimiento, ya que no produce tur-
la desnitrificacin, con las mismas consecuencias ne- bidez uniforme como los microorganismos unicelulares. La Los diazotrofos asociados a los vegetales en relaciones
El azufre existe en varios estados de oxidoreduccin,
gativas en la nutricin vegetal pero importante para eli- curva de crecimiento se analiza por determinaciones de no simbiticas (rizosfricas, filosfricas) y simbiticas no-
desde -2 en los sulfuros voltiles o precipitados (H2S,
minar a la atmsfera sulfatos en aguas. biomasa por medio de diferentes tcnicas, como anlisis dulares, son analizados en el captulo 15.
FeS), hasta +6 en los sulfatos (figura 2) (Frenchel et al,
1998). del contenido de protenas, determinacin de actividad
Sin embargo, ambos ciclos presentan algunas deshidrogenasas (TTC, INT), turbidimetra luego de soni- Eficiencia de la fijacin del N2 por diazotrofos
Numerosas son la formas inorgnicas en el ambiente:
diferencias cacin de las hifas, actividad N2asa. Para la preparacin
sulfuros (-2), S (0), tiosulfatos (-2, +6), sulfitos (+4), de inoculantes y en estudios fisiolgicos se trabaja con cul- vida libre asociaciones asociaciones
la fuente primaria de nitrgeno disponible para la activos frescos, repicados varias veces en medios nuevos.
sulfatos (+6). Los estados de oxidacin ms comunes rizosfricas nodulares
tividad biolgica lo constituye la atmsfera y en el
en suelos y materiales orgnicos son: -2 en sulfuros y
caso del azufre es la roca madre. La principal fuente Fuentes de carbono y nitrgeno Causas:
en la mayora de compuestos orgnicos y +6 en los sul-
en el suelo es la pirita (FeS2) de las rocas gneas, Frankia emplea cidos grasos de cadena corta (propini- aportes constantes de nutrientes
fatos y molculas que los contienen. Los procesos de
que sufre oxidaciones liberando sulfato durante la me- co, actico) y sus derivados, intermediarios del ciclo de concentracin de O2 bajas
oxidacin y reduccin ocurren fcilmente en condicio-
teorizacin y la formacin del suelo. Esta es la forma Krebs (cidos succnico, mlico) y el cido pirvico. Pue- exportacin productos de la fijacin (inhiben a la FBN)
nes adecuadas.
Frankia i) infectividad y efectividad en distintos hospedantes del S asimilado por los vegetales y microorganismos productos finales estn en parte gobernados por las con-
ii) crecimiento y caractersticas fisiolgicas y tambin lavado. Muchos suelos lo retienen como diciones del medio:
El endofito de ndulos tipo Alnus ha sido frecuentemen- iii) estudios genticos: n y tipo de plsmidos, isoenzimas, minerales sulfatados insolubles (sulfatos de calcio y
te descrito como simbionte obligado y pocas referen- perfil de cidos grasos, polimorfismo de segmentos de magnesio). en aerobiosis el producto final es el sulfato, acompa-
cias a ellos se encuentran en los textos clsicos de restriccin del ADN (RFLP), secuencias del rARN 16S. ado de nitratos, CO2, H2O, fosfatos, etc.
microbiologa. Han sido introducidos en la 8 edicin Las regiones conservadas de este fragmento permiten el del azufre es considerado un ciclo ms complejo;
del Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, pero ubicar al gnero Frankia dentro de los Actinomicetales, muchas de las transformaciones, sobre todo la sul- en anaerobiosis, como ocurre en el caso de la putre-
no figuran muchos textos sobre actinomicetes. La cau- mientras que las regiones hipervariables son tiles para fooxidacin de innumerables compuestos con grado faccin de protenas, se acumula H2S y productos de
sa principal de esta omisin ha sido la incapacidad de la clasificacin filogentica a nivel de gnero y especie. de oxidacin intermedio entre sulfuros y sulfatos, no mal olor como los mercaptanes: metilmercaptn (CH3-
cultivarlos in-vitro. Este inconveniente ha sido supera- estn bien dilucidadas. El ciclo de este elemento in- SH), metil-etil-mercaptn (CH3-S-C2H5), txicos para los
do y se han aislado con xito endofitos de Comptonia cluye la mineralizacin de residuos vegetales, ani- vegetales, junto a aminas, amidas, NH3, fosfatos, sales
peregrina, de Alnus glutinosa, Colletia spinosissima Aislamiento males, fertilizantes, aportes por la lluvia y ciertos ferrosas, CO2, CH4, cidos orgnicos, alcoholes.
(Diem et a.l., 1982). gases, como SO2, H2S que llegan al suelo en canti-
Se han empleado distintas tcnicas para lograr el aisla- dades importantes en zonas fabriles, del orden de Los aminocidos son rpidamente degradados en sue-
Algunos autores presentaron evidencias para la subdivi- miento de Frankia: digestin enzimtica de macerados 100 kg/ha/ao en regiones industrializadas de Euro- los bien aereados, con liberacin de sulfatos. Los micro-
sin de los endofitos tipo Alnus basadas en las barreras de ndulos, microdiseccin, fraccionamiento en gradiente pa y Estados Unidos. organismos hetertrofos pueden tambin liberar sulfatos
de inoculacin cruzada entre especies vegetales. Las ex- de sacarosa, diluciones seriadas o aislamiento directo a de compuestos de estructura R-SH. La cistena desulfhi-
periencias se realizaron desde 1978 inoculando con culti- partir de trozos de ndulos desinfectados superficialmen- drasa es responsable de la liberacin de sulfuros a partir
vos puros de Frankia y se comprob que un mismo aisla- te. Se han desarrollado numerosos medios de cultivos. Mineralizacin-inmovilizacin de cistina:
miento poda nodular distintas especies, resultando difcil Las plntulas se desarrollan en medio sin nitrgeno en
la subdivisin en especies basada en la especificidad tubos, al mes se inoculan con macerado nodular y los Los vegetales requieren sulfatos como fuente de azufre, HSCH2CHNH2COOH + H2O CH3COCOOH + H2S + NH3
endofito-hospedante, como en el caso de los rhizobios. ndulos se hacen visibles entre 1 y 2 meses. A partir de el que deben reducir a forma sulfhidrilo (-SH) en sus
ellos se efecta el aislamiento de Frankia (Anexo prc- clulas. La mineralizacin de las formas orgnicas de En el caso de la metionina puede aparecer sulfato luego
Otros caracteres que se toman en cuenta para establecer tico). este elemento es un importante proceso microbiolgico de su incorporacin al suelo, o bien la degradacin puede
claves taxonmicas en Frankia incluyen: que asegura la provisin de sulfatos en la zona radical. ocurrir con formacin de productos finales voltiles, metil-
Morfologa Esta bacteria presenta distintas estructuras Formas orgnicas como protenas, aminocidos, anti- mercaptn (CH3-SH) y dimetildisulfuro (CH3SSCH3), reali-
la composicin qumica de las paredes celulares en medios de cultivo (figura 8) y en los ndulos biticos como la penicilina, compuestos hmicos, ste- zado por bacterias y hongos.
la capacidad para formar esporas en los ndulos hifas: en las colonias las hifas aparecen ramificadas, res sulfricos, etc. son transformados en compuestos
septadas, de unos 0,4 a 0,9 micras cada vez ms simples por una micropoblacin muy va- Las sulfatasas (sulfohidrolasas) como la arilsulfatasa, son
isoenzimas riada, en condiciones muy amplias de aireacin, tempe- enzimas que hidrolizan steres sulfricos, con enlaces tipo
taxonoma gentica los esporangios, pueden presentarse intercalarmente, ratura, pH, liberando finalmente compuestos inorgni- R-O-S:
con esporas de forma irregular: globulosas, o de masa, cos, sulfatos y/o sulfuros.
Frankia posee ciertos rasgos taxonmicos caractersticos: alargados o irregulares, con paredes gruesas, tamao R-O-SO3- + H2O R-OH + SO4= + H+
su pared posee cido diaminopimlico, cido glutmico, variable (0,5 a 1 micra), muy abundantemente empa- La inmovilizacin incorpora estos iones a las clulas
alanina, peptidoglicano. Sus cidos grasos son de cadena quetadas en la zona infectada. Su formacin puede ori- microbianas que compiten por ellos con los vegetales. La mineralizacin de compuestos azufrados y la libera-
normal, ramificados y monoinsaturados. Ciertos lpidos no ginarse en las clulas de la corteza a partir de cuerpos La biomasa microbiana del suelo regula las transfor- cin de formas minerales, reducidas u oxidadas (mine-
saponificables llamados hopanoides les confieren resis- esporgenos de las hifas, o en espacios intercelulares. maciones del azufre y la actividad microbiana regula ralizacin neta) depende, como en el caso del nitrge-
tencia en condiciones desfavorables, son usados en la taxo- La formacin de esporas puede estar ausente, los n- tanto los flujos de azufre entre las diferentes reservas no, del contenido de S%, de la relacin C/S y a veces de
noma. Tambin se han encontrado cepas genticamente dulos sin ellas se denominan Sp- y los que las presen- (sulfatos solubles, S-orgnico lbil y S-orgnico resis- la N/S.
diferentes en endofitos de Alnus: una produce esporas y la tan como ndulos Sp+. tente) y es responsable de la conversin de fracciones
otra no, aunque en cultivo puro esta ltima es capaz de pasivas a otras muy activas, como los aminocidos con La relacin crtica C/S debajo de la cual el azufre excede
esporular, indicando que la supresin de la esporulacin en vesculas, la presencia de estas estructuras esfricas cistena. las necesidades de la microflora y se libera al medio, vara
simbiosis est controlada por el hospedante. (2,6 micras) de paredes gruesas, en extremos de hifas como en el caso ya considerado del nitrgeno, con los ma-
cortas y ramificadas se visualizan en el microscopio Como en el caso del nitrgeno, las combinaciones del teriales orgnicos que llegan al suelo, pero se puede esta-
As, los intentos de clasificacin de Frankia (Lechevalier, ptico y son el asiento de la fijacin de nitrgeno (pro- azufre en el humus, conducen a una estabilizacin. Los blecer valores entre 100 a 150/1. En general, las relacio-
1994) incluyen estudios sobre: teccin de la N2asa) en aerobiosis
nes crticas son altas y slo excepcionalmente los vegeta- A diferencia de lo que ocurre en la nitrificacin, en donde lar las plantas de uno de esos grupos se consideraban La taxonoma numrica ha permitido agrupar enorme
les se ven perjudicados por la accin microbiana. En ese slo un grupo pequeo de microorganismos auttrofos como especies, independientemente de la ocurrencia cantidad de caracteres bacterianos (morfolgicos, meta-
caso resulta favorable fertilizar con compuestos con azufre. muy eficientes y una multiplicidad de hetertrofos poco de la fijacin de N2. Pero numerosos ndulos son in- blicos, ecolgicos, genticos) determinando grados de
Algunos microorganismos, sobre todo los anaerobios, que eficientes son los responsables de la formacin de nitra- efectivos, no benefician el crecimiento de la legumino- similitud entre aislamientos.
no pueden emplear sulfatos, porque no son formados en tos, en la sulfooxidacin intervienen: sa y se consideran incluso como parsitos, ya que la
ambientes carentes de oxgeno, pueden asimilar formas planta provee energa para su desarrollo, sin recibir ni- En el Bergeys Manual of Determinative Bacteriology
orgnicas del azufre, como los aminocidos, protenas. 1. organismos quimioauttrofos del gnero Thiobaci- trgeno en cambio. La biodiversidad de cepas de rhizo- (2001) se encuentra la descripcin de los gneros de la
llus aerobios y anaerobios bios es considerable, como lo demuestran los estudios familia Rhizobiaceae y el cuadro 7 incluye algunas de las
Las condiciones que favorecen a la inmovilizacin son en rboles (Prosopis sp., Faidherlia albida, etc.). modificaciones recientes.
las mismas que afectan a la mineralizacin, pero en sen- 2. bacterias quimiolitotrofas filamentosas y sobre todo
tido inverso: acuticas de la familia Beggiatoaceae efectividad, (capacidad para fijar N ), la propiedad ms Cuadro 7 - Clasificacin de los rhizobios
2
importante en una seleccin de cepas para preparar un
pH y temperatura bajas, humedades elevadas, restos ve- 3. bacterias fotosintticas sulfurosas purpreas y ver- inoculante Gnero Especies Hospedantes
getales con menos de 0,1-0,2% de S des de las familias Chromatiaceae y Chlorobiaceae Bradyrhizobium B. japonicum Glycine max
caractersticas morfolgicas y culturales, crecimien-
B. elkanii Glycine max
La microflora activa en la mineralizacin es muy amplia, 4. un amplio nmero de microorganismos quimiohe- to con distintas fuentes de carbono, produccin de ci- Bradhyrhizobium spp. Vigna, Macroptilium
una multiplicidad de especies de bacterias, hongos, pro- tertrofos variados dos, resistencias a salinidad, acidez, antibiticos, etc. Arachis, Acacia
tozoos, algas. Es la misma poblacin que interviene en la Rhizobium R. leguminosarum
anlisis del genoma bacteriano han demostrado ser biovar viciae Vicia
mineralizacin de restos vegetales y animales que llegan En el suelo son los thiobacilos y los organismos heter-
importantes herramientas en los estudios de evolucin biovar trifolii Trifolium
al suelo y actan en todas las condiciones compatibles trofos los que desempean un rol cuantitativamente ms biovar phaseoli Phaseolus y
y han renovado el inters en estudios taxonmicos. La
con la actividad biolgica. Todos los factores que favore- importante, los otros dos grupos son sobre todo acuticos leguminosas templadas
composicin de bases del ADN (citosina+guanina)%,
cen el crecimiento microbiano, favorecern la liberacin y las bacterias fotosintticas requieren anaerobiosis y do- R. lupini Lupinus
plsmidios, el anlisis de las protenas totales por elec-
de sulfatos: sis altas de sulfuros. R. galegae Galega officinalis
troforesis, hibridacin de ADN y ARN o ARN-ARN, el R. etli Phaseolus vulgaris
polimorfismo de los fragmentos de restriccin del ADN R. tropici P. vulgaris y Leucaena
aumento de temperatura en el rango mesfilo, la libera- 1. Thiobacteriaceae: estas bacterias sulfooxidantes po-
(RFLP), la secuenciacin del ADN y otras aproximacio- Azorhizobium A. caulinodans Sesbania rostrata
cin de sulfatos es escasa debajo de 10C y se eleva seen la capacidad de obtener energa y poder reductor
nes como el anlisis electrofretico de enzimas y la (areos)
con la temperatura hasta 35C para su biosntesis celular de la oxidacin de compues-
taxonoma numrica han demostrado su utilidad en es- Sinorhizobium S. meliloti Medicago, Melilotus,
tos inorgnicos del azufre. La actividad metablica de
tudios de estas bacterias Trigonella
encalado en suelos cidos, una mejor aireacin y hu- las bacterias oxidantes del azufre y del hierro juega im-
S. fredii Glycine spp., Leucaena
medades medias portante rol en distintos campos de importancia econ- anlisis de ARN 16s ribosomal, tanto la conservacin leucocephala
mica como son la purificacin de minerales con uranio, del ARN ribosomal como la existencia de variabilidad S. saheli Sesbania cannabina,
la desecacin provoca liberacin de sulfatos de la ma- cobre y otros metales, la corrosin de caeras metli- en ciertos segmentos, hace que el estudio de la secuen- S. rostrata
teria orgnica por vas no biolgicas cas, en la tecnologa del petrleo, polucin de aguas y cia de los genes del rARN, constituyen importantes he- S. terangae Acacia, Sesbania
fertilidad de suelos. rramientas en la comparacin de organismos y en el Mesorhizobium M. loti Lotus, Lupinus
En general, se piensa que el azufre se mineraliza al mis- establecimiento de relaciones filogenticas M. huakuii Astragalus sinicus
mo rango que el nitrgeno, es decir entre un 1 al 3% al Adems de la habilidad para producir cido sulfrico, al- M. ciceri Cicer arietinum
ao en suelos de la zona templada gunos de sus integrantes son capaces de reducir nitratos M. hainanensis Leguminosas de
anlisis serolgico, estos estudios han sido relativa-
regiones ridas
y otros xidos del N hasta N2, limitando la provisin de mente poco utilizados para clasificar a los rhizobios de- M. tianshanense Leguminosas de
uno de los ms importantes nutrientes nitrogenados. Mu- bido a la variedad de antgenos que poseen estos orga- regiones tropicales
Sulfooxidacin cha atencin han recibido las transformaciones realiza- nismos. Allorhizobium A. undicola Neptunia natans
das por miembros del gnero Thiobacillus, pero an res-
Blastobacter B. denitrificans Aeschynomene
Numerosos compuestos inorgnicos del azufre con estan sin dilucidar mecanismos enzimticos y la naturaleza anlisis de la homologa de fragmentos de restric-
indica
tado de oxidacin menor que el sulfato (+6) pueden ser de muchos intermediarios en la oxidacin (cuadro 2). cin amplificados por la reaccin de la polimerasa
Methylobacterium M. nodulans Crotalaria
oxidados biolgicamente o qumicamente hasta sulfato: (RFLP/PCR). Estas tcnicas son muy empleadas y sus
resultados acuerdan con la filogenia derivada de estu- Burkholderia B. sp Aspalathus
sulfuros (-2); S (O); tiosulfato S2O3= (-2); sulfitos SO3= Los thiobacilos son bacterias Gram negativos, no es-
dios de enzimas multilocus (Martnez et al, 1996). Ralstonia R. taiwanensis Mimosa
(+ 4). porulados, algunos mviles por flagelo polar, y deposi-
extracto de levadura provee de fuentes de N-combi- La carencia de tcnicas especficas y confiables limit tan azufre elemental (S) fuera de la clula. El gnero El pH ptimo de las especies vara:
nado y factores de crecimiento. bastante este estudio: en el suelo el rhizobio no se distin- comprende 9 especies, de las cuales 5 son bien cono-
gue del resto de la poblacin bacteriana, no fija N2 o lo cidas: para T. thiooxidans y T. ferroxidans en la vecindad de
Minerales: algunos aniones y cationes son tambin re- hace a niveles muy bajos, no posee requerimientos nutri- pH 2,0 a 3,5
queridos para el desarrollo bacteriano, como K+, Mg++, tivos especficos, ni morfologa caracterstica. 4 son auttrofas: T. thiooxidans, T. thioparus, T. denitrifi-
PO4-3, SO4=, Cl-, adems de trazas de Co++, Ca++ (rela- cans y T. ferroxidans para el resto predominan las preferencias en la neutra-
cionado con la estructura de la pared). Las tcnicas ms empleadas en el reconocimiento y se- lidad o ligeramente alcalino. Salvo el T. denitrificans son
guimiento de esta bacteria en ambientes naturales son: el T. novellus es auttrofo facultativo, que puede oxi- aerobios obligados
Medios de cultivo: segn la finalidad que se persiga, se recuentos, serologa, empleo de mutantes resistentes a dar compuestos orgnicos e inorgnicos con azufre.
emplean los: antibiticos, sondas de ADN especficas y aquellas que Se han propuesto diferentes esquemas metablicos en la
analizan la composicin del ADN o ARN (Anexo prctico). oxidacin de compuestos con azufre. Algunos autores
complejos, son los ms comnmente usados, sobre En general, la forma ms directa para identificar una cepa Cuadro 2- Transformaciones de compuestos suponen pasajes por politionatos:
todo en la preparacin de inoculantes: medio-79 o EMA de rhizobio es inducir la formacin de ndulos, reaisln- reducidos del azufre
(extracto de levadura-manitol-agar) dolo a partir de los mismos. El cuadro 6 presenta alguno S S O = S4O6= S3O6= SO3= SO4=
de los criterios empleados en la taxonoma de rhizobio. (kcal/mol) 2 3
tiosulfato tetrationato tritionato sulfito sulfato
definidos, en los cuales el extracto de levadura es reem- 1. H2S + 2 02 H2SO4 - 160
plazado por compuestos nitrogenados inorgnicos, ami- Cuadro 6- Caracterizacin fenotpica y filogentica 0 +
2. S + 1,5 O2 + 2H H2SO4 - 118 El rpido crecimiento de estos organismos, 2 horas de
nocidos y cofactores, se emplean para determinar los de rhizobio
tiempo de generacin cuando crecen a expensas de tio-
requerimientos nutritivos, los productos del catabolismo, 3. S2O3= + O2 + H2O 2SO4 = + 2H+ - 211
Caracteres fenotpicos sulfato, y la relativa versatilidad del grupo, los hacen muy
las vas metablicas y la identificacin de mutantes.
* Rango de leguminosas hospederas (infectividad, 4. 5S2O3= + 8NO3- + H2O 10SO4= + 4N2 + 2H+ - 893 tiles para estudios fisiolgicos asociados a modos qui-
efectividad) 5. SO3= + 0,5 O2 SO4= - 60 mioauttrofos de vida.
A partir de suelo (sin leguminosas) (Anexo prctico)
* Rango de sustratos empleados como fuentes de -
energa (azcares, alcoholes, hidratos de C com- 6. (R-S-S-R+HS +H2S) +3H2O+ 3NAD(P) SO3= + La autotrofia obligada, ms extendida entre los nitrifi-
* sembrar la leguminosa especfica en el suelo en cues-
plejos) 3NAD(P)H +5H +
+ 186 cantes, es una propiedad variable entre los oxidantes del
tin (campo, maceta, tubos) y esperar la aparicin de
* Rango de sustratos empleados como fuente de N azufre y est completamente ausente entre las bacterias
ndulos, para proceder como anteriormente 7. SO3= + H2O + NAD(P) SO4= + NAD(P) + H+ + 34
(aminocidos, urea, nitratos) del hidrgeno. Muchos estudios se realizan para tratar de
* Resistencia a antibiticos explicar esta caracterstica distribuida al azar entre los
* inocular muestras del suelo en estudio en suspensin
* Movilidad electrofortica de distintas enzimas principales grupos de procariotas:
con agua en tubos y/o macetas con soporte inerte (are-
* Tolerancia a situaciones de estrs (salinidad, tem- T. thiooxidans y T. novellus pueden realizar la reaccin 3),
na/vermiculita, agar, etc.) con plntulas creciendo asp-
peratura, pH) T. thiooxidans, la 2). T. denitrificans obtiene energa de la la incapacidad de estos organismos de emplear fuentes
ticamente (semillas desinfectadas previamente). El
reaccin 4) utilizando tambin en anaerobiosis el S como orgnicas exgenas puede deberse a la ausencia de
medio es para plantas: agua y sales, sin carbono (foto- Caracteres filogenticos
donador de electrones. En aerobiosis (es anaerobio fa- permeasas especficas que incorporen a las molcu-
sntesis) ni nitrgeno (fijacin de N2), ambos elementos * Modelos de bandeo de fragmentos de restriccin del
cultativo) puede oxidar segn las ecuaciones 2) y 3). las orgnicas. Pero esta teora ha sido cuestionada pues
son tomados del aire. ADN (RFLPs)
* Grado de hibridizacin con sondas especficas del se observ que muchos thiobacilos pueden incorporar
T. ferroxidans puede realizar las reacciones 2) y 3) pero el C14-acetato cuando metabolizan sulfuros, aunque esta
ADN
puede desarrollarse empleando la energa de la oxida- fuente contribuye con muy poco del carbono reciente-
Identificacin de rhizobios y taxonoma * Anlisis de secuencias del fragmento 16S del rARN
cin de sales ferrosas, en lugar de las formas reducidas mente sintetizado
del azufre:
Rhizobio es un habitante normal del suelo, aunque puede
la explicacin ms aceptada se basa en la ausencia de
presentarse muchas veces en baja densidad. Es capaz de Resumiremos algunos de los caracteres taxonmicos
12 FeSO4 + 3O2 + 6 H2O Fe (SO4)3 + 4 Fe(OH)3 un ciclo de cidos tricarboxlicos funcional por falta
sobrevivir, compitiendo efectivamente con el resto de la po- empleados:
blacin y haciendo uso eficiente de los nutrientes disponi- de la enzima -cetoglutarato deshidrogenasa y a ni-
Todos los thiobacilos, con excepcin del T. novellus, em- veles muy bajos de succnico y mlico deshidrogena-
bles. La vida saproftica de esta bacteria es tema de inters, inefectividad: capacidad de nodular: especies de legu-
plean CO2 como fuente de carbono y sales amoniacales sas. Al no poder mediatizar la oxidacin de la acetil-
incluso en cultivos que son ao a ao inoculados con altas minosas mutuamente susceptibles de nodular con un
como fuente de N, incluso el T. denitrificans que no es CoA, el ciclo funciona como dos metabolismos separa-
dosis de rhizobios especficos, como ocurre en casi 100% tipo particular de rhizobio, constituyeron un grupo de
capaz de asimilar nitratos. dos puramente biosintticos.
del rea sembrada de soja en Argentina, Uruguay y Brasil. inoculacin cruzada. Las cepas capaces de nodu-
los electrones en los organismos quimioauttrofos con La humedad debe favorecer los intercambios gaseosos Los rhizobios sufren cambios morfolgicos, fisiolgicos y mientras que las de crecimiento lento no exceden, dentro
excepcin de las bacterias del hidrgeno, entran en la ya que la microflora es aerobia, excepto el T. denitrificans bioqumicos en las clulas del ndulo dando lugar a clu- de un perodo de 10 das, un dimetro de 1 mm. Su forma
CTE por los citocromos con la intervencin de piridn que debe encontrar alto nivel de nitratos y anaerobiosis las pleomrficas, de formas muy irregulares, en X, Y, o de vara desde plana a convexa, su color puede ser blanco
nucletidos. La oxidacin de la mayora de los compara reducir sulfuros y otros compuestos reducidos. clava, denominadas bacteroides, que carecen de flage- opaco, poco gomosa, a blanco lechosa, translcidas, con
puestos orgnicos es va NADH, que podra estar im- los y no se dividen (figura 7). Estas formas retoman su abundante cantidad de polisacridos.
pedida en estos organismos. La cadena transporta- El encalado de suelos cidos favorece la accin de la morfologa y propiedades clsicas (bacilos, no fijadores
dora de electrones de los microorganismos auttro- poblacin sulfooxidante. En general el pH no desciende de N2), al sembrarse en medio de cultivo.
fos es poco conocida. demasiado en los suelos pues la vegetacin se encar- Aislamiento y medios de cultivo
ga de asimilar los sulfatos a medida que stos se van Se presentan en grupos aislados, encerrados en envol-
2. Las bacterias filamentosas deslizantes del grupo produciendo. Existen situaciones en las cuales la acu- turas membranosas originadas por la planta. Para algu- Los rhizobios son organismos hetertrofos exigentes que
Beggiatoa-Thiotrix son caractersticas de medios ambien- mulacin puede ser importante y entonces el pH puede nos autores estos cambios constituyen otro ejemplo de se desarrollan en medios ricos, con vitaminas y aminoci-
tes acuticos ricos en sulfuros o suelos hidromrficos. descender algunas unidades con el consiguiente incon- ciclo celular, que como el que incluye la formacin de dos, aunque existen gran variedad de cepas que difieren
Contienen frecuentemente inclusiones de azufre en sus veniente en el desarrollo vegetal. endosporas bacterianas, originan dentro de un mismo en sus requerimientos nutricionales.
clulas que pueden oxidar a sulfato. organismo estructuras con propiedades diferentes a las
El suelo puede recibir grandes cantidades de azufre en de las clulas que las originaron. Un conjunto de cam- A partir de ndulos
3. Las bacterias fotosintticas sulfurosas purpreas de polvo cuando se desea corregir suelos alcalinos o en la bios conducen en medios de cultivo a las formas vege- Como no presentan mecanismos de proteccin de la ni-
la familia Chromotiaceae y las sulfurosas verdes de la fa- lucha contra actinomicetes patgenos de papa o batata, tativas clsicas. trogenasa en vida libre, debe aislarse por siembra de con-
milia Chlorobiaceae emplean sulfuros y acumulan S en como el Streptomyces scabies. En ambos casos la activi- tenido nodular en medios ricos, como el EMA (extracto de
las clulas que puede ser luego oxidado a sulfatos. Domi- dad de los thiobacilos asegura rpida formacin de cido Los rhizobios son organismos aerbicos, los cuales, sin levadura-manitol-agar), con agua, sales, manitol como
nan en barros y en anaerobiosis donde se acumulan sul- sulfrico que baja el pH a niveles no soportados por estas embargo, son capaces de crecer a una tensin de oxge- fuente de carbono y energa, extracto de levadura, como
furos (captulo 3). especies. no menor de 0,001 atmsfera. No presentan ningn me- fuente de nitrgeno y de factores de crecimiento.
canismo de proteccin de la nitrogenasa frente al O2.
4. Microorganismos hetertrofos: numerosas especies Ciertos ambientes anegados, ricos en materia orgnica y Fuentes de carbono: los rhizobios de crecimiento rpi-
de bacterias aerobias, hongos y levaduras pueden oxi- sulfuros de pirita (FeS2), cuando son drenados y expues- En base a sus propiedades culturales los rhizobios se dido utilizan una mayor variedad de fuentes carbonadas,
dar formas reducidas de azufre, aunque la energa libe- tos al aire liberan sulfatos, el pH cae debajo de 4,0 y los ferencian en dos grupos, que dieron lugar a dos gneros: siendo la sacarosa y el manitol los sustratos de prefe-
rada slo representa una pequea porcin de la que la vegetales pueden perjudicarse. rencia. El glicerol y las pentosas (L-arabinosa, xilosa,
clula necesita. Numerosos hongos pueden liberar sul- de crecimiento rpido (CR), con tiempo de genera- ribosa) son preferidas por los rhizobios de crecimiento
+++ + =
fatos de molculas orgnicas como protena-tiourea, con 3FeS2 + 11O2 + 2H2O 3Fe + 4H + 6SO 4
cin entre 3 y 4,5 horas, acidifican el medio y liberan lento. El catabolismo de la glucosa, fructosa, sacarosa,
rendimiento energtico menor que los thiobacilos. Se abundante cantidad de polisacridos, gnero Rhizobium manosa, gluconato y arabinosa fue estudiado en dife-
discute el rol de los microorganismos hetertrofos en la La aplicacin de inoculantes granulados con azufre ele- (R.loti, R. leguminosarum) rentes especies demostrndose en extractos acelula-
oxidacin de compuestos azufrados pues si bien su ren- mental y fosfato de roca inoculado con thiobacilos res la presencia de enzimas de las vas de
dimiento es bajo, ste puede ser compensado por su permiten aportar a las pasturas sulfatos y fosfatos ms de crecimiento lento (CL), con tiempos de generacin Entner-Doudoroff (ED), de pentosa-fosfato (PF) y del
alta densidad en algunos ambientes. rpidamente en el trpico hmedo que en regiones tem- que oscilan entre 6 y 8 horas, producen menos polisa- ciclo de los cidos tricarboxlicos (CAT) en especies CR
pladas y ridas. El cido sulfrico formado ayuda en la cridos y alcalinizan el medio: gnero Bradyrhizobium: y de enzimas de la va ED y CAT en especies CL.
solubilizacin de: B. japonicum, B. spp.
Ecologa de la sulfooxidacin Fuentes de nitrgeno: no son especficas; el nitrato y
fosfatos triclcicos, llevndolos a fosfato di y monoclci-
El concepto de productores de cidos o producto- el amonio pueden ser empleados por la mayora de las
En suelos inundados son las bacterias fotosintticas y co, asimilables por las plantas res de lcalis depende de la composicin del medio, de cepas, pero a menudo se obtienen mejores crecimien-
las Beggiatoaceae los principales organismos en la oxi- la presencia de distintos hidratos de carbono y compuestos con aminocidos como glutamato y asparato. En
dacin del azufre compuestos de manganeso (a partir de Mn
+4
), K, Ca, Al, tos nitrogenados orgnicos y no se toma como carcter los medios de cultivo se usa el extracto de levadura.
Mg. Se requiere humedad (lluvias) y es ms efectivo en taxonmico exclusivo.
En aireacin estos grupos no son los dominantes y los suelos cidos. Estos inoculantes son usados cuando Fuentes de factores de crecimiento: muchas espe-
thiobacilos y los organismos hetertrofos son los res- fertilizantes como el superfosfato no estn disponibles El aspecto de las colonias depende del medio de cultivo y cies de rhizobio son estimuladas por factores de creci-
ponsables del proceso. y se cuentan con depsitos de fosfato de roca. de la especie. En medio de extracto de levadura-manitol- miento como biotina, tiamina, riboflavina o pantotenato
agar (EMA), las cepas de crecimiento rpido originan co- de calcio. El requerimiento es variable y algunas espe-
lonias de 1 a 5 mm luego de 3 a 5 das de incubacin, cies y cepas se desarrollan mejor sin su agregado. El
Bacterias anaerobias facultativas Rhizobios El cuadro 3 resume algunas de las funciones benfi- Sulfatorreduccin
Con nitrgeno combinado, este grupo puede crecer con o sin Son bacilos Gram negativos, de 0,5 a 0,9 micras por 1,2 cas de este grupo bacteriano y el cuadro 4 seala al-
O2, pero slo pueden fijar N2 anaerbicamente, por lo que a 3,0 micras, aislados o de a pares, generalmente mvi- gunas de las contraindicaciones de la actividad sulfo- La reduccin asimilativa de sulfatos es similar a la de
result difcil establecer su contribucin en suelos y aguas. El les cuando jvenes por flagelos peritricos, polares o subpo- oxidante. los nitratos y es realizada en la biomasa microbiana.
grupo comprende bacterias pertenecientes a las Enterobac- lares. No forman endosporas, pero sus clulas contienen
teriaceae y al gnero Bacillus. Entre las primeras ha sido muy grnulos de cido poli- - hidroxibutrico (PHB) que se La reduccin desasimilativa la realizan las bacterias
estudiada Klebsiella pneumoniae, conocida antes como Ae- tien de negro con negro Sudn y aparecen refrctiles al Cuadro 3- Bacterias oxidantes del azufre en la sulfatorreductoras, que oxidan compuestos orgnicos e
robacter aerogenes, en la cual se han realizado experiencias microscopio de fase (figura 7,arriba)(Duhoux y Nicole, naturaleza H2 y emplean a los sulfatos como aceptores de electro-
de transferencia de genes fijadores. Pertenece a las bacte- 2004). nes en la cadena transportadora anaerobia. Su rol en el
rias coliformes por su parecido a Escherichia coli, habitante Ayuda a la extraccin de cobre, uranio, etc. por lava- ciclo del azufre es similar al de las bacterias desnitrifican-
del intestino del hombre y animales. Algunas cepas poseen grnulos metacromticos de poli- do cido de residuos de minas tes, con la diferencia que stas son estrictamente anaero-
fosfatos. Modificacin pH del suelo bias y aqullas, anaerobias facultativas. Esta actividad
Bacillus polymyxa, Bacillus macerans y Bacillus pas- Detoxificacin rizosfrica con H S, que lo oxidan a
2
(cuadro 5) es muy evidente en zonas de barros, en el fon-
teurianum son especies muy conocidas entre los dia- La mayora de las cepas producen abundantes polisac- sulfato do de estanques y lagos y a lo largo de la costa del mar.
zotrofos. Son bacilos Gram positivos, esporulados, ridos extracelulares mucilaginosos, de composicin va- Remocin de sulfuros, tiosulfato y tiocianato de re- Signos de este proceso son:
aerobios, que fijan en microaerofilia, de la familia Baci- riable segn la cepa y el medio de cultivo, que los prote- siduos fotogrficos
llaceae, cuyos representantes anaerobios fijadores gen de la sequedad. Algunas cepas desarrollan estructu- Fertilizacin con inoculantes como el Biosuper- fuerte olor a sulfhdrico
pertenecen al gnero Clostridium. Las bacterias pro- ras similares a cpsulas al envejecer, que representaran fosfato: S0 + fosfato de roca + thiobacilos
manchas negras de los barros y suelos donde ocurre a
pinicas citadas en el cuadro 4, se encuentran en le- acumulacin extracelular de antgeno de pared.
ches fermentadas y han sido descriptas como fijado- causa de la precipitacin del SFe
res de N2 en anaerobiosis. Cuadro 4- Problemas asociados a la actividad de
organismos sulfooxidantes
Bacterias anaerobias Cuadro 5- Reduccin de los sulfatos
Clostridium pasteurianum fue el primer diazotrofo descri- Acidificacin de residuos de minas de extraccin de
to por Winogradsky en 1893. Otras especies de este g- minerales Asimilativa
Se produce H S, pero se convierte rpida-
nero pueden tambin fijar nitrgeno y son habitantes de * por procesos qumicos como biolgicos 2
suelos, abonos en fermentacin, rumen, compost. Una * oxidantes tanto del S como del Fe++ mente en S-aa
Ocurre en aerobiosis y anaerobiosis y es
pasteurizacin previa de la muestra de suelo y otros ma- * se producen 12 moles H2SO4 por 3 moles SFe
teriales (10' a 80C) facilita el aislamiento al eliminar las oxidado realizado por amplio rango de organismos
Esencial en el crecimiento microbiano y ve-
formas no esporuladas. No pueden emplear el O2 bajo Corrosin de acero y concreto
ninguna circunstancia. * acidificacin de suelos con sulfatos getal donde los SO4= son asimilados
* lluvias cidas
Otros diazotrofos anaerobios son bacterias sulfatorre- * oxidacin del azufre favorece la solubiliza Desasimilativa
Se produce H S y se excreta
ductoras, que usan sulfatos como aceptores de electro- cin de metales pesados 2
Ocurre anaerbicamente en respiraciones
nes finales en la respiracin anaerobia. Frecuentemente
Limitada a pocos organismos que incluyen
se libera cido sulfhdrico (H2S), voltil, de olor desagra-
dable. Los gneros conocidos son Desulfovibrio y Desul- La sulfooxidacin tiene consecuencias nefastas en la co- Desulfovibrio, Desulfotomaculum
Acoplada a la oxidacin de acetato, etanol
fotomaculum. Entre los primeros, varias especies pueden rrosin aerobia de diversos materiales, como cemen-
fijar N2; algunas tienen importancia en el mar, fijando N2 to, piedra y metales por la intervencin de un conjunto o hidrgeno
en sedimentos. El segundo gnero posee menos repre- de especies que llevan la oxidacin hasta la formacin
sentantes diazotrofos. de cido sulfrico. Estos materiales se disuelven literal-
mente con el consiguiente deterioro en monumentos, edi- En ciertas zonas donde la acumulacin de materia org-
Figura 7- Arriba: Clula de rhizobio mostrando los nica es importante y el nivel de sulfatos en aguas freti-
Las bacterias productoras de metano son anaerobias exopolisacridos que rodean a la clula e internamente ficios, etc. Los sulfuros provienen del suelo o de la polu-
estrictas y son abundantes en ambientes en fermentacin cin atmosfrica. cas es muy alto, la sulfatorreduccin puede convertir en
grnulos de cido poli -OH-butrico, material carbonado de
y en el fondo de estanques. La cepa en la que se detect reserva. Abajo: Bacteroides en tejido central de ndulos de
fijacin, result ser una poblacin mixta. leguminosas incluidos en su membrana peribacteroide
inhspita la regin para la vegetacin a causa de la toxici- Mecanismo enzimtico ta longitud de onda empleados para desplazarse en su- tectar Azospirillum. Las bacterias se ubican en el gradien-
dad del H2S. La rizosfera de muchos cultivos puede fa- perficies slidas o un flagelo polar, para nadar. te de oxgeno creado entre la superficie y el fondo del
vorecer el proceso por la exudacin de materiales carbo- La reduccin de SO4= a S= implica la transferencia de 4 tubo en el nivel adecuado para su metabolismo aerobio y
nados. Estos cultivos no se desarrollan normalmente en pares de electrones y en la va desasimilativa se recono- Depsitos de PHB pueden deformar las clulas. Se desa- para la proteccin de la nitrogenasa.
suelos salinos, con alto nivel de sulfatos, anegados y donde cen tres enzimas: rrollan tanto en condiciones aerbicas como anaerbicas
la temperatura es alta, y los pH neutros. El proceso es (con aporte de nitratos y una fuente de C orgnico). Son Esta bacteria es capaz de crecer y fijar N2 en pH cido y
retardado por aireacin o el agregado de nitratos, sales ATP sulfurilasa SO4= + ATP APS + P-P preferencialmente microaeroflicos en presencia o au- en presencia de altas concentraciones de azcar: gluco-
frricas o mangnicas, que permiten elevar el potencial sencia de N-combinado en el medio. sa y sacarosa pero no de gluconato. No posee nitrato re-
de xido-reduccin. pirofosforilasa P-P + H2O 2P ductasa y puede fijar N2 incluso con niveles de 10mM de
No poseen ningn mecanismo de proteccin nitrato. Aislada de caa de azcar, en Brasil, fue luego
- =
La microflora responsable est confinada a dos grupos APS reductasa APS + 2e AMP + SO 3
de la nitrogenasa frente al oxgeno encontrada en otros pases a partir de tallos, hojas, races
de anaerobios estrictos: formadores de esporas del gne- y en la savia del xilema de diferentes cultivos (sorgo, ba-
ro Desulfotomaculum y asporgenas del gnero Desulfo- La conversin es similar a la oxidacin de SO3= a SO4= El crecimiento es rpido con amonio y O2 y ms lento con tata dulce). Su crecimiento ptimo a pH 5,5 y 10% de az-
vibrio. Son tpicos habitantes de sedimentos anaerobios por thiobacilos y bacterias sulfurosas purpreas, con el N2 (5-7 horas de tiempo de generacin). Sin N combina- car, condiciones prevalentes en el caldo de caa, eviden-
con materia orgnica y sulfatos, resultando en una masi- APS intermediario, mientras que la va asimilativa em- do el desarrollo es rpido en medio semislido, forman- cia su adaptacin a la planta. Recuentos de 10 3-105
va generacin del gas H2S. Esta actividad permite, tam- plea adenilsulfato. La reduccin del SO3= a S= ha sido do una densa pelcula debajo de la superficie, donde en- bacterias.g-1 han sido informados en la rizosfera de caa
bin en anaerobiosis, la actividad de las bacterias fotosin- establecida recientemente con la identificacin de una cuentran la tensin de O2 apropiada. A medida que la de- de azcar Como no ha sido aislada del suelo, se piensa
tticas sulfurosas (prpuras o verdes) que emplean el H2S sulfito reductasa: manda de O2 se incrementa la pelcula se desplaza hacia en una bacteria endoftica, de gran inters ya que el nitr-
como donador de electrones en la fotosntesis, reoxidn- la superficie. Esta sensibilidad al O2 hizo que por mucho geno sera fijado dentro de la planta. Se ha determinado
dolo en anaerobiosis y a la luz, constituyendo un verda- 3 SO3= + 2e- S3O6= tiempo no fueran descriptos como activos fijadores. de que A. diazotrophicus produce cido indol-actico, pro-
dero ciclo. motor del crecimiento vegetal y puede excretar amonio,
Otras dos enzimas (tritionato y tiosulfato reductasas) re- En medio con malato y extracto de levadura o cloruro de hasta un 40% del fijado, lo que explicara los altos niveles
Los sulfatorreductores del gnero Desulfovibrio son Gram ducen tritionito a S= con produccin de sulfito: amonio, desarrollan colonias blancas o rosadas, peque- de fijacin en caa de azcar.
negativos, asporgenos, bacilos curvados o vibrioides, con as y secas, elevadas, circulares o irregulares.
flagelos polares. No pueden emplear el acetato, que se S3O6= + 2e- S2O3= + SO3=
acumula como producto final en la oxidacin de sustratos S2O3= + 2e- S= + SO3= Se han descripto 5 especies: A. brasilense, A. lipoferum,
orgnicos. Emplean malato y lactato, obtenienen energa A. amanzonense, A. halopreferans y A. irakens y su n-
por fosforilacin a nivel del sustrato con participacin de Los esporulados del gnero Desulfotomaculum realizan mero se incrementa (Gillis y Reinhold-Hurek, 1994).
la acetil Co-A. En ausencia de sulfatos, algunos de estos los mismos metabolismos, difiriendo solamente en la com-
microorganismos pueden fermentar piruvato, malato o fu- posicin qumica de la sulfito reductasa. La va que con- Algunos azospirilos son desnitrificantes, reduciendo los
marato. duce a la asimilacin de los sulfatos es ms sencilla y no nitratos a nitritos (nr+) y hasta productos gaseosos, N2 y
se acumulan intermediarios entre sulfito y sulfuro. La sn- N2O (nir+ y nir-) (Dbereiner, Pedrosa, 1987). En cereales
Las especies ms conocidas son D. desulfuricans; D. vul- tesis de ATP en la sulfatorreduccin desasimilativa se for- de clima templado parecen predominar cepas nir, indi-
garis; D. africans y algunos pueden emplear adems de los ma en una cadena transportadora de electrones de la cual cando ventajas evolutivas que favorecen a la planta, eli-
donadores de electrones orgnicos, el H2, aunque son in- se conocen varios componentes: citocromo c3, citocromo minando una causa de prdida del nitrgeno fijado.
capaces de crecer en medio estrictamente mineral con CO2 del tipo b, quinonas, una flavoprotena, la ferrodoxina.
y requieren adicin de acetato. La ecuacin general es: Estos organismos son considerados responsables de la
estimulacin del crecimiento en importantes cultivos y
2 CH3CHOH-COOH + SO4= 2 CH COOH +
3
2CO2 + S= + 2H2O Ecologa del proceso pasturas naturales (captulo 15)(Okon, 1994). La figura 6
muestra la morfologa tpica de estos organismos (Gon-
4 H2 + SO4= 4 H2O + S= Las condiciones que deben reunirse para que el proceso zalez-Lopez, Lluch-Pl, 1992). Figura 6- Morfologa de Azospirillum brasilense
ocurra son similares a las de la desnitrificacin: A) en medio con malato a las 48h, clara morfologa encurvada y
Los compuestos menos oxidados que los sulfatos (sulfi- Acetobacter ausencia de corpsculos de inclusin (x 8.000). B)
tos, politionatos, tiosulfatos, S) son reducidos ms fcil- microfotografa de la anterior (x 25.000).C) 48h en medio con
alto tenor en sulfato Acetobacter diazotrophicus una nueva bacteria Gram ne- fructosa, con mayor pleomorfismo y grnulos de PHB (x 45.000)
mente que los sulfatos, ya sea en la va asimilativa o en la gativa fijadora de N2 fue aislada en caa de azcar en y D) a los 7 das en el mismo medio, tpica forma C, con
desasimilativa. donadores de electrones orgnicos medio semislido, sin N combinado, empleado para de- cubiertas multilaminares (x 50.000)
jerinckia y Derxia, limita seriamente la movilidad de los car). Para obtener activa respiracin, los organismos anaerobiosis que se logran en suelos sometidos a hi- Cuadro 6- Importancia econmica de la sulfatorreduccin
cultivos y vuelve a los medios lquidos muy viscosos. deben producir grandes cantidades de poder reduc- dromorfismo muy reductor, en suelos salinos con alto
tor, particularmente NADH, que debe ser oxidado va nivel en sulfatos y en la rizosfera. En ocanos, lagos y ambientes inundados, el O del
Entre los azotobacter, es el grupo de los chroococcum- sistema citocromo. Se evita la produccin de gran can- sulfato excede al O2 libre y es crtico para la degra-
beijerincki y vinelandii, el que produce abundante musc- tidad de ATP, en exceso frente a los requerimientos Se aprecia el precipitado negro caracterstico del sul- dacin de la MO. En el ocano, el 50% de la degra-
lago, mientras que el grupo de los agilis e insignis, habi- celulares, porque utiliza una respiracin de baja efi- furo ferroso. El proceso es de consecuencias desfavo- dacin de los restos orgnicos ocurre por la sulfa-
tantes sobre todo de aguas, no los forman. Representa- ciencia, produciendo aproximadamente 1/3 del ATP rables para las plantas pues consume sulfatos, uno de to- reduccin. Depuracin de aguas
ran productos celulares de desecho, o bien materiales de por unidad de sustrato. los principales nutrientes y adems el H2S es txico La corrosin anaerbica de caeras de hierro en-
reserva en C y energa, y les permitira protegerse frente para la mayora de las especies. La precipitacin como terradas representa importantes prdidas
a la fagocitosis por protozoos. La nitrogenasa es adems Proteccin conformacional: la nitrogenasa se asocia SFe elimina esta toxicidad. El suelo se alcaliniza local- Aguas ennegrecidas por acumulacin de sulfuro
protegida del efecto inhibidor del O2. en las clulas a otras protenas en caso de intensa oxi- mente, los sulfuros dan origen a bases que forman car- ferroso, consecuencia de la actividad sulfatorre-
genacin, protegiendo sus sitios activos. En este esta- bonatos o bicarbonatos de sodio. En aguas, se favore- ductora
Los pigmentos son otra caracterstica de esta familia y su do la enzima no funciona (estado inactivo), pero una ce la eliminacin de sulfatos, depurando los cauces de Asociaciones entre bacterias sulfato reductoras y
produccin, color y solubilidad tienen carcter taxonmi- vez que se restablecen las condiciones de oxigenacin agua. fotosintticas pueden resultar en importantes de-
co. En A. chroococcum es caracterstico el pigmento ma- apropiadas, la fijacin se renueva rpidamente. psitos de azufre
rrn oscuro (melaninas) producido en cultivos viejos por La figura 3 presenta resultados en suelo no rizosfrico
oxidacin de la tirosina. Otros mecanismos: la produccin de polisacridos ex- salino y en la rizosfera de plntulas de maz creciendo
tracelulares ofrecera una barrera fsica a la difusin del en el mismo suelo (Dommergues, Mangenot, 1970). Se Volatilizacin de compuestos azufrados
Compuestos empleados en el metabolismo O2, el gran tamao de las clulas puede contribuir a que observa el efecto positivo en la interaccin de un fac-
Muchos compuestos carbonados se emplean por este gru- la relacin entre superficie y contenido celular sea baja, tor biolgico: presencia o ausencia de races y facto- La carencia de mtodos sensibles apropiados para la de-
po: azcares, polisacridos, alcoholes primarios y secun- impidiendo activa difusin del O2, la presencia de mem- res fsicos del suelo: saturacin y compactacin. Los terminacin de las distintas formas: H2S; SO2; metanotiol
darios, polialcoholes, cidos orgnicos, compuestos aro- branas intracelulares ha sido descripta como otra efi- donadores de electrones y las condiciones de anaero- (CH3SSCH3), etanotiol (CH3CH2SH), disulfuro de carbono
mticos (cido benzoico y fenoles), como fuente de car- ciente forma de proteccin de la nitrogenasa. Los azo- biosis se reunieron en el suelo rizosfrico, naturalmen- (CS2), carbonil sulfuro (COS) de origen microbiano a par-
bono, donadores de electrones y de energa para el creci- tobacter presentan sistemas membranosos altamente te salino. tir de descomposicin de restos vegetales, abono de gran-
miento y la fijacin del N2. La va principal de degradacin contorneados. ja, limitaron los estudios.
de los azcares es la de Enter-Doudoroff y los principales
productos formados son piruvato y gliceraldehido- 3- fos- Otros organismos fijadores de N2 aerobios incluyen suelo no rizosfrico suelo rizofrico La cromatografa de gases permite determinaciones y
fato. Las reservas intracelulares de lpidos (PHB) ejercen especies con poca significancia en los suelos, las cuales suelo saturado saturado y saturado saturado y mostr que la liberacin se produce sobretodo en condi-
tambin efecto en la fijacin, demostrado por la moviliza- por no poseer mecanismo de proteccin de la nitrogena- compactado compactado ciones de anaerobiosis y no en todos los suelos. Dimetil-
cin de esta reserva en cultivos en fase estacionaria, con sa eficientes, slo fijan en microaerofilia. Mycobacterium sulfuro y pequeas cantidades de carbonil sulfuro, S2C,
escasa cantidad de glucosa. flavum y otras micobacterias han sido descriptas como metilmercaptn y dimetildisulfuro, fueron los principales
fijadoras de nitrgeno. Como ya citamos, pertenece a esta productos.
4.2 4.0 4.6 5.7
La exigencia de un alto nivel de materiales carbonados categora el quimioauttrofo Thiobacilus ferrooxidans y
sera uno de los principales factores limitantes del desa- algunas bacterias oxidantes del metano. (0.1) (0.2) (0.1) (10.7) En condiciones normales de campo pequeas prdidas
rrollo de estos diazotrofos en suelos agrcolas pueden atribuirse a esta causa. Gran cantidad de SO2 lle-
( ) sulfuros (10-6 moles/g) ga a la atmsfera, pero proviene de fuentes de polucin,
en histograma: N* sulfato reductores (log 10/g de suelo)
Mecanismos de proteccin de la nitrogenasa Microaeroflicos industrias, automviles, etc. Algo de SO2 toma origen en
Los integrantes de esta familia presentan numerosos la oxidacin del H2S liberado biolgicamente.
mecanismos de proteccin de la nitrogenasa que le per- Azospirillaceae Figura 3- Sulfatorreduccin en la rizosfera de maz en suelo
miten fijar N2 en aerobiosis: Constituye un importante grupo de organismos aerobios salino Los gases con S son componentes indeseables de la at-
que se comportan como microaeroflicos cuando fijan N2. msfera por su intenso y desagradable olor y por sus efec-
Activa respiracin: remueve el oxgeno de las vecin- Fueron descriptos por Beijerinck desde 1922, pero reci- Este proceso es responsable tambin de la corrosin tos adversos en el ambiente y el clima.
dades de la nitrogenasa. La tasa de respiracin pue- bieron poca atencin hasta 1976 cuando Dbereiner y Day anaerobia de metales. Los desulfovibrios actuaran como
de incrementarse de 10 a 50 veces y A. chroococcum los aislaron de races de pasturas tropicales, en Brasil. agentes de despolarizacin, al consumir el H en las zo- El H2S en un gas muy txico para ciertas cianobacterias y
consume muchos hidratos de carbono en la fijacin Azospirillum es Gram negativo, con forma de vibrio o es- nas catdicas de los metales, facilitando la reduccin de lquenes, organismos empleados como indicadores bio-
del N2 (eficiencia baja, de 10-15 mg N2 fijado/g az- pirilo, de 1 m de dimetro, con flagelos peritricos de cor- los sulfatos a sulfuros (cuadro 6). lgicos de polucin. Las actividades del hombre contribu-
yen con ms de la mitad de los compuestos azufrados en La principal reserva de P en la tierra la constituyen los Aerobios contiene un complejo lipdico con lipoprotenas y lipo-
la atmsfera, con incrementos en los prximos aos. En sedimentos marinos (8,4 x 1014 ton), los suelos (0,96-1,6 x polisacridos, con calcio como principal componente
zonas industrializadas esta polucin superar a la origi- 1011 ton), fosfatos inorgnicos solubles (HPO4-2, PO4-3) en Azotobacteriaceae mineral. La intina posee ms carbohidratos y lpidos,
nada por va biolgica. el ocano (8 x 1010 ton), rocas con apatita (1,9 x 1010 ton) Es una familia curiosamente integrada exclusivamente con pero menos protenas, con alto nivel en calcio. Ade-
y en la biota o biomasa (2,7 x 109 ton). Los niveles de P en diazotrofos. Ya en 1901, el microbilogo holands Beije- ms de los cambios morfolgicos, en los cistos se acu-
En resumen: el azufre es un elemento esencial para la biomasa terrestre (2,6 x 109 ton) excede mucho a la rinck describi al Azotobacter chroococcum, luego que mula cido poli- OH-butrico (PHB). Parte de esta
todos los organismos, existe en gran nmero de esta- marina (5-12 x 107 ton) (Stevenson y Cole, 1999). Winogradsky, de la escuela rusa, describiera al anaerobio sustancia se emplea en la sntesis de los componen-
dos de oxido-reduccin en combinaciones orgnicas e Clostridium pasteurianum. Los integrantes de esta familia tes del saco del cisto.
inorgnicas. Sus transformaciones biticas y abiticas Los mayores depsitos ricos en apatita (como el sulfato se presentan con clulas grandes, predominantemente
pueden resultar benficas o perjudiciales para los eco- de roca) se encuentan en sedimentos en el fondo de oca- bacilos romos u ovales, pero cambian su morfologa con Estas estructuras, de muy baja actividad metablica, per-
sistemas. En los terrestres, son bien conocidos los pro- nos y antiguos mares (Amrtica del Norte). Los tratamien- el tiempo o las condiciones de desarrollo. En la figura 5 miten ventaja ecolgica a los azotobacter en el suelo. En
cesos que aseguran la provisin de sulfatos y otras for- tos del fosfato de roca con cidos inorgnicos (sulfrico y (Gonzalez-Lopez, Lluch-Pl, 1992) se aprecian las formas medio favorable, la germinacin y crecimiento activo ocu-
mas solubles para las plantas. Pero, en ciertas circuns- fosfrico) se emplean para producir fertilizantes ms so- bacilares y la formacin de estructuras de resistencia, rren rpidamente.
tancias, exceso de S puede ser polucionante, en aguas, lubles. El conocido como superfosfato resulta de la mez- menos resistentes que las endosporas bacterianas, lla-
o en la atmsfera cuando se liberan gases de la quema cla de aproximadamente cantidades iguales de fosfato de madas cistos. Otros cambios morfolgicos son la aparicin de clulas
de compuestos ricos en azufre (bitumen, lignita), res- roca con H2SO4 (de 60-70%) y contiene un 10% de P. La grandes, que recuerdan a levaduras, o de grandes baci-
ponsables luego de las lluvias cidas. El azufre es im- mayora del P aplicado al suelo como fertilizante, a veces Las clulas se presentan frecuentemente en pares, son los en A. paspali a las pocas horas de cultivo. La forma-
portante en muchos procesos industriales, como la pro- ms del 90%, no es tomado por los cultivos y es retenido Gram negativas, aunque pueden aparecer como Gram cin de conglomerados de clulas cocoides, rodeadas de
duccin de concreto, asfalto. en formas insolubles o fijadas. Este elemento se va acu- variables, aerobios estrictos, pero pueden crecer y fijar N2 espeso muclago, que recuerdan a ttradas, son comu-
mulando en los suelos, pero en forma no disponible para bajo presin reducida de O2. Son mviles por flagelos nes en A. macrocytogenes
los cultivos. peritricos o polares, o inmviles. Los gneros son:
Ciclo biolgico del fsforo
La toma anual por los vegetales en forma de (H2PO4- y I. Clulas grandes, ovoides, la mayora de las especies
La figura 4 presenta los procesos de origen biolgico in- HPO4-2) se calcula en 2 x 108 ton, presentes en la solucin producen sustancia viscosa extracelular, desarrollo r-
volucrados en las transformaciones de este elemento. A del suelo, proporcin extrada es menor en la parte cose- pido, catalasa positiva:
diferencia de los ciclos de C, N y S, el ciclo del P no pre- chada (4-7 x 106 ton), En ciertas ocasiones, los compues- a. forman cistos, (G + C)% 63-66: Azotobacter
senta componentes gaseosos, de modo que no son im- tos fosforados pueden migrar hacia el mar donde se de-
portantes los movimientos desde y hacia la atmsfera, positan como sedimentos insolubles (1,7 x 107 ton). b. no forman cistos, (G + C)% 53-59: Azomonas
aunque pequeas cantidades de fosfina gas (PH3), pue-
den detectarse en lagos o pantanos, bajo condiciones re- El P constituye el segundo elemento en importancia para II. Pequeos bacilos, producen mucha viscosidad extra-
celular y cuerpos lipdicos globulares internos. Desa- Figura 5- Caractersticas morfolgicas de Azotobacter vinelandii
ductoras. los vegetales y microorganismos, slo superado por el Izquierda: estados morfolgicos tpicos: clulas vegetativas, clulas
nitrgeno. Forma molculas ricas en energa (ATP, UTP, rrollo lento, pueden o no producir catalasa:
precsticas ricas en poli-- OH butirato y clulas filtrables. B) cisto
etc.). En el suelo es la fraccin orgnica la que contiene la a. cuerpos lipdicos bipolares, (G + C)% 5-59, cata- maduro, con las cubiertas intina y exina (A x 12.500, B x50.000).
vegetales animales
mayor proporcin de fsforo (30 al 85% del P total), ms lasa positiva: Beijerinckia .
alto en suelos cidos: b. numerosos cuerpos lipdicos, (G + C)% 70, cata-
-3
PO4 en -3 lasa negativa: Derxia Otras caractersticas
PO4 absorbido solubilizacin
solucin entre un 30-50% consiste en fitina, sobre todo como La formacin de depsitos intracelulares de lpidos (PHB)
inmovilizacin fsforo mineral fosfato de inositol (material de reserva vegetal) Como vimos, los cistos son estructuras caractersti- es caracterstica del grupo, sobre todo en cultivos viejos.
insoluble
cas de algunas especies y constituyen formas de re- En Beijerinckia indica se presentan dos glbulos por clu-
un 3% se encuentra en cidos nucleicos la, polares, pudiendo alcanzar en cultivos viejos ms del
mineralizacin sistencia a desecacin, radiaciones gamma, U.V. Res-
ponden rpidamente al agregado de sustancias ener- 50% del volumen celular.
un 1% en fosfolpidos, los ms comunes: lecitina, cefa-
materia orgnica-microfibra
lina, el fosfato es esterificado con una base. gticas, sustratos de las clulas vegetativas, reflejan-
do mayor permeabilidad que las paredes de las clu- Materiales mucosos extracelulares son tambin caracte-
las vegetativas. El microscopio electrnico reconoce rsticos de ciertas especies, incluyen azcares y cidos
Figura 4- Transformaciones biolgicas de compuestos con Los cultivos agrcolas contienen aproximadamente 0,05 a
dos capas en los citos: la exina y la intina. La exina urnicos. Muchas veces su excesiva acumulacin en Bei-
fsforo 0,5% de P en sus tejidos y alrededor del 1% de todo el P
La filsfera hemos analizado, por el aporte al suelo de residuos vege- de un ecosistema se encuentra en componentes vivos. las orgnicas. Escasos estudios se han realizado con com-
tales subterrneos (races) o areos (hojas, ramas) o de En todas las combinaciones orgnicas e inorgnicas el P puestos individuales fosforados y se cuenta con pocos
As como las races estn rodeadas de una verdadera productos diversos arrastrados por el agua a travs del se encuentra oxidado como ortofosfato (P+5), la mayora detalles sobre la descripcin de la microflora involucrada.
vaina de microorganismos rizosfricos, las hojas de las follaje. Estos ltimos aportes contienen elementos mine- de las veces como complejos con Ca, Fe y Al y minerales Numerosas evidencias indican importante rol del P org-
plantas presentan en su superficie poblaciones muchas rales (K, Na, etc.) y orgnicos: hidratos de carbono, ami- silicato de modo que los vegetales, animales o microor- nico (P-org) en la nutricin vegetal, se ha observado que
veces importantes, de bacterias, levaduras, hongos fila- nocidos. ganismos no deben reducir a este elemento como lo ha- esta fraccin es la que disminuye en mayor proporcin,
mentosos, y, en regiones tropicales hmedas, algas, l- cen con compuestos oxidados de N o S. por procesos de mineralizacin.
quenes y hepticas. Este hbitat est sometido a hume- Resulta difcil separar el efecto rizosfrico del efecto de
dades fluctuantes, ligadas a las precipitaciones. La trans- los restos sobre el suelo, puede observarse que, en el En suelos con pH entre 5 y 8 la cantidad de fosfato no La parte del ciclo de mayor importancia para las plantas
piracin de las hojas puede mantener un microclima algo caso de bosques, los mantillos juegan un rol preponde- disociado H3PO4 y trivalente PO4-3 insoluble es mnima y est sumarizada en el siguiente equilibrio
ms hmedo que el del aire. rante. Esta capa constituye para la microflora del suelo la prevalecen las formas solubles (H2PO4- y HPO4-2):
principal fuente de: P-org del suelo Pi lbil P no lbil
El desarrollo de organismos es muy abundante en las hojas -H+ -H+ -H+ muy rpido muy lento
de las zonas tropicales hmedas, donde forman una pel- energa y de elementos nutritivos que en kg C/ha/ H3PO4 H2PO4- HPO4-2 PO4-3

cula mucilaginosa de varias micras de espesor. La inten- ao varan de 0,5 a 2 toneladas en bosques de zonas + H+ + H+ + H+ La mineralizacin del P-orgnico depende en primer lugar
sidad luminosa, la temperatura y la naturaleza de los exu- templadas y fras, para alcanzar 2 a 8 toneladas en bos- de la actividad de los microorganismos, pero tambin de
dados varan con el clima y la naturaleza de la planta. ques tropicales hmedos. Los mantillos en zona tropical los invertebrados, sobre todo lombrices, que ejercen im-
son ms ricos, adems, en elementos minerales y en ni- La mayora del P orgnico integra molculas hmicas portante funcin acelerando hasta 2-3 veces la liberacin
Las poblaciones bacterianas de la filosfera son ricas en trgeno que los de las regiones templadas. formadas a partir de fracciones orgnicas de la vegeta- de Pi en materiales vegetales por molienda y humectacin.
especies pigmentadas: Flavobacterium, Xanthomonas, cin, de los microorganismos y animales. En general se El flujo de P a travs de la biomasa microbiana ha sido
Pseudomonas. de sustancias estimulantes o inhibidoras: como vi- observa una buena correlacin en los suelos entre los calculado en 4,6 kg P ha-1 ao-1, del mismo orden del remo-
taminas y sustancias diversas an no bien determina- contenidos de C, N y P orgnicos (aproximadamente 100/ vido en grano y paja, en un suelo arable no abonado.
Levaduras, como la Rhodotorula, Sporobolomyces, po- das, que llegan al suelo. Inversamente, ciertos mantillos 10/1) y las relaciones C/P orgnicos varan entre 100-300/
seen pigmentos rosados y son muy numerosas las espe- liberan productos txicos frente a especies bacterianas 1 y el N/P vara entre 5-20/1. Se observa correlacin entre la conversin del N y P a
cies de hongos. Entre las funciones microbianas ms es- muy sensibles: bacterias nitrificantes auttrofas, fijado- formas inorgnicas (8-15 partes de N mineral/1 de fosfa-
timuladas en este hbitat se citan la amonificacin, la fija- res del N2, y otros organismos, como los celulolticos. La En ecosistemas naturales, el ciclo del P est prcticamente to) y tambin se correlacionan la liberacin de CO2 y la
cin del N2 y la lipolisis. La produccin de antibiticos es toxicidad frente a los nitrificantes se manifiesta en for- cerrado: la mayora del P de los vegetales es reciclado mineralizacin de P (100-300 / 1); valores vinculados a
frecuente en las poblaciones epifitas. maciones forestales de la zona tropical hmeda o regio- por degradacin microbiana del mantillo y restos orgni- las proporciones de estos elementos en el humus.
nes templadas (bosques de pino silvestre, cedro, con- cos. Es el caso de suelos forestales tropicales, casi todo
Los fenmenos que se desarrollan a nivel de la filosfera feras). Lo mismo puede ocurrir en ciertas praderas y el P se encuentra en la materia orgnica viva y muerta y Las fosfatasas catalizan reacciones cuyo esquema ge-
interesan mucho al fitopatlogo y al agrnomo, quienes bosques de conferas, de la zona templada. Las sustan- los suelos contienen muy baja cantidad de este elemento neral es:
tienen una puerta abierta a experiencias de inoculacin cias responsables seran esencialmente fenoles o com- que no permiten el desarrollo agrcola luego de la defo-
con fijadores de N2 o con microorganismos antagnicos puestos con radicales fenlicos: cido glico, floro- restacin. O O
de patgenos que protegen a la planta de las infeccio- glucinol.
nes. Los procesos microbianos involucrados en las transfor- ROPOH + H2O ROH + HOPOH
otros efectos: modificacin del pH del suelo: la ve- maciones del fsforo son:
getacin puede elevar el pH de los horizontes superficia- OH OH
Efecto de los restos vegetales les, por concentracin de sustancias bsicas. Pero ms mineralizacin-inmovilizacin
(efecto mantillo) frecuentemente, la vegetacin acidifica el suelo, caso de Los sustratos pueden ser: etilfosfato, glicerofosfato,
bosques de conferas. Si sta no es excesiva, la microflo- solubilizacin-precipitacin fenilfosfato. Las molculas con disteres (fosfolpidos,
Contrariamente a las formaciones vegetales anuales que ra fngica, que en conjunto es indiferente al pH, puede cidos nuclecos) requieren diferentes enzimas para su
ejercen sobre la microflora del suelo una influencia limita- indirectamente ser estimulada, por reduccin de la com- degradacin. Por comodidad, estas fosfatasas son desig-
da en el espacio y el tiempo, las formaciones vegetales petencia de otros organismos. Si se bajan una o dos uni- Mineralizacin-inmovilizacin nadas de acuerdo a los sustratos que atacan:
perennes (bosques, praderas permanentes) afectan mar- dades de pH, se puede observar efecto depresivo en la
cadamente a la microflora del suelo donde se desarrollan. actividad biolgica, ms marcado si se acompaa de sus- Un grupo amplio de microorganismos posee las enzimas Fitasas: hidrolizan la unin ster-fosfato de sales solu-
Esta accin se ejerce a nivel de los exudados, como ya tancias txicas hidrosolubles necesarias (fosfatasas) para liberar fosfatos de molcu- bles de cido ftico o de sus sales de Mg o Ca: la fitina,
liberando inositol y ortofosfato. Los fosfatos se liberan Las bacterias y actinomicetes acumulan mayor proporcin Especie vegetal: algunas especies pueden estimular o tuye el nico ambiente en donde los microorganismos
de a uno, dando penta, tetra, tri, di y monofosfato, para de P (1,5-2,5%) en peso seco que los hongos (0,5-1%) o suprimir a determinado grupo microbiano, aunque los ca- pueden desarrollarse y las relaciones R/S son all muy
liberar finalmente inositol libre. Esta actividad enzimti- los vegetales (0,05-0,5%). En suelos cultivados se estima sos de inhibicin son menos frecuentes. Las leguminosas importantes.
ca est ampliamente distribuda entre los microorganis- que las bacterias solas inmovilizan entre 4 y 10 kg P/ha. presentan, en general, mayor efecto rizosfrico que los
mos del suelo: hongos, bacterias, actinomicetes. Si se considera que tambin lo toman hongos y actinomi- cereales, pero pocos estudios han relacionado este efec-
cetes, se aprecia que los valores inmovilizados son simi- to con la naturaleza de los exudados radicales. Las dife- Cuadro8 - Efecto rizosfrico sobre bacterias y
6
La adicin de materia orgnica aumenta la actividad por lares a los que son removidos por los cultivos. rencias pueden ser muy marcadas segn la zona de la actinomicetes (x10 )
incremento de la poblacin especfica. El pH cido y la raz que se estudie. Los organismos que requieren ami-
adsorcin a arcillas limitan la degradacin. Fitasas vegeta- Las relaciones crticas C/P en los restos son altas, 100 a nocidos son ms numerosos en la zona apical, por tra- Cultivo Estado fenolgico S R R/S
les contribuyen a la degradacin de la fitina y cido ftico. 300/1, aproximadamente 0,2% en P. tarse de una regin que los libera. vegetativo (4 hojas) 5,2 5,3 1,0
Nucleasas: estn ampliamente distribuidas y la libera- La deficiencia puede aparecer en caso de incorporacin Estado fenolgico: el efecto rizosfrico comienza a ma- Trbol vegetativo (6-8 hojas) 6,1 8,1 1,3
cin de ortofosfato es rpida en el suelo a partir tanto de grandes cantidades de restos carbonados, en donde nifestarse desde la germinacin de las semillas, por apor- floracin 5,6 318,0 56,8
de ARN como de ADN. Para muchos microorganismos una fertilizacin puede evitar la falta de este nutriente en te de los microorganismos de la espermatsfera, los com- germinacin 5,2 6,8 1,3
hetertrofos los cidos nuclecos pueden ser emplea- los cultivos posteriores, pero en general los problemas ponentes de las envolturas del grano y por sus exudados. Trigo vegetativo 6,1 50,3 8,2
dos como nica fuente de nutrientes y de energa y la graves de inmovilizacin se presentan en contadas situa- Para algunos autores la colonizacin se realizar princi- grano en formacin 5,6 52,0 9,3
liberacin de Pi ocurre luego de la accin de enzimas ciones con la incorporacin masiva de rastrojos de muy palmente a partir de los microorganismos del suelo, ms
despolimerizantes. pobre contenido en fsforo. que por los de la semilla. vegetativo (6 hojas) 5,2 14,5 2,8
Colza floracin 6,1 310,5 50,9
Fosfolipasas: los fosfolpidos ms comunes en el sue- Los mximos de estimulacin se encontraron en la flora- fructificacin 5,6 491,0 87,7
lo como la lecitina (fosfatidil colina) y la fosfatidileta- Procesos de xido-reduccin cin y/o fructificacin, para luego declinar abruptamen-
nolamina, liberan Pi luego de hidrlisis enzimtica, la te cuando comienza la senescencia de las races. La com-
poblacin emplea el esqueleto orgnico de la molcula Poca atencin se ha prestado a los procesos de xido- posicin de la microflora vara, proliferando los microor- La incorporacin de restos vegetales o animales, la fertili-
y el P necesario, el que excede la demanda microbiol- reduccin llevados a cabo por la microflora del suelo en ganismos que participan en la descomposicin de los teji- zacin, causan menos efectos en la rizsfera, la que ma-
gica, es liberado. compuestos fosforados. Este elemento, como en nitrge- dos muertos. La poblacin no se distingue ya de la natu- nifiesta capacidad para mantener su equilibrio biolgico.
no, puede encontrarse en combinaciones desde fosfina ral del suelo y poco efecto residual se mantiene para el
Es frecuente evaluar la actividad fosfatasa incubando el ao prximo: el nuevo cultivo determinar la composicin
(P-3) a ortofosfato (P+5). Algunos microorganismos heter-
suelo con sustrato apropiado como glicerofosfato, fenil- de su poblacin rizosfrica.
trofos pueden asimilar fosfita (HPO3-2) y oxidarlo a fosfato.
fosfato y se determina el ortofosfato liberado por distintos
En suelos hmedos, Clostridium butyricum puede reducir
La espermatsfera
procedimientos, como por colorimetra. La actividad es El efecto de edad de la planta puede enmascararse por
fosfato a fosfita e hipofosfita. Estas reacciones son biol-
pronunciada en la rizosfera y es afectada tambin por la interacciones con el ambiente. As, variaciones en la in- Las semillas en germinacin no realizan fotosntesis pero
gicas ya que no ocurren al agregar inhibidores al suelo.
profundidad, la estacin. tensidad luminosa afectan la exudacin y por lo tanto la ejercen efecto en el suelo vecino al movilizar sus reser-
como el tolueno.
proliferacin de hongos, por inhibicin del grupo ms sen- vas. Se considera que la espermatsfera es el origen de
La presencia de fosfatasas y fitasas ha sido verificada en sible, las bacterias. iniciacin del efecto rizosfrico de las races en desarro-
ectomicorrizas de rboles y en endomicorrizas arbus- En presencia de nitrato o sulfato la reduccin de fosfato
llo. A su nivel ocurren mltiples interacciones entre la plan-
culares, que absorben ms P-orgnico a partir de suelos es ms lenta ya que los primeros iones son empleados de El cuadro 8 muestra el efecto de tres cultivos, en distintos ta, las poblaciones microbianas y el ambiente. Los pro-
deficientes en este elemento (captulo 16). preferencia como aceptores de electrones. Como estas estados fenolgicos, sobre el conjunto de bacterias y ac- ductos liberados por |os granos son de naturaleza varia-
reacciones no son importantes en la naturaleza, no han tinomicetes. Se observa efecto estimulante en los ltimos ble, segn la edad, la especie y las caractersticas del
Las formas ms solubles son directamente asimiladas por recibido mayor atencin y son muy pocas las referencias estados del desarrollo vegetal. medio (fuentes de C, N, sustancias biolgicamente acti-
las plantas. Los inositol-polifosfatos son considerados re- bibliogrficas.
En el caso del trbol, el efecto rizosfrico fue marcado en vas, como vitaminas, aminocidos, otras inhibidoras). La
sistentes al ataque enzimtico en el suelo por su capaci-
la floracin, en el trigo menos significativo y similar en los liberacin de exudados por las semillas es responsable
dad para formar derivados insolubles con hierro y alumi-
Solubilizacin estados vegetativo y de formacin del grano, mientras que de la alta mortalidad de las mismas a causa de la sulfato-
nio. Amonio y aminas pueden, sin embargo, formar com-
en la colza fue muy pronunciado desde la floracin. rreduccin, cuando cultivos, como el de maz, germinan
plejos solubles con fitatos frricos.
Una proporcin importante de fosfatos solubles agrega- en suelos ricos en sulfatos, compactados y saturados en
Los cidos orgnicos producidos por bacterias y otros dos a suelos cidos puede insolubilizarse o fijarse a coloi- Suelo y ambiente: el efecto rizosfrico es ms pronun- agua. Otras actividades biolgicas son estimuladas, como
microorganismos pueden ser tambin causa de liberacin des (adsorcin). Muchos suelos contienen minerales, ciado en suelos livianos, arenosos. En suelos desrticos, la solubilizacin de fosfatos, amonificacin, celulolisis, y
de fosfatos a partir de P-orgnico. como la fluorapatita (Ca10 (PO4)6F2) o hidroxiapatita que la rizosfera de la escasa vegetacin colonizadora consti- ciertas actividades enzimticas.
Algas cal y a cero a muy corta distancia dentro de la raz (no se usan como fertilizantes, como el polvo de huesos, roca Fsforo suelo +S
Este grupo ha sido poco estudiado, ya que por su carc- es endofito). molida. Sin embargo, estas formas insolubles del fsforo en los suelo con SO4(NH4)2
tejidos
ter auttrofo no es afectado directamente por los exuda- pueden ser aprovechables por los vegetales luego de la suelo solo
dos radicales. Sin embargo, numerosos trabajos sealan tipo C: organismo fsicamente excludo del rizoplano accin solubilizadora de una microflora variada.
estimulacin de algunas rizosferas sobre las algas; fen- por el tipo B), pero que emplea materiales orgnicos
meno que se ha tratado de explicar por la liberacin de originados en la raz o producidos por el organismo B), Gran nmero de especies bacterianas, de hongos y acti-
0 4 8 12 tiempo (das)
factores de crecimiento, el contenido de antibiticos en la o ambos. nomicetes son capaces de solubilizar fosfato triclcico y
rizosfera o por cambios en las propiedades fsicas del otras formas insolubles y su nmero puede alcanzar 105 - Figura 5 - Asimilacin de P por vegetales a partir de fosfato
medio. tipo D: organismo fsica o qumicamente excludo por 107/g. En la rizosfera la actividad puede ser muy intensa triclcico
los tipos B) y C), pero que emplea productos del C) o como consecuencia de la activa proliferacin microbiana
Las interacciones entre microorganismos tanto sinr- materiales complejos de la raz pero no usados por B) o que puede disolver los fosfatos a lo largo de la raz los La produccin de cido ntrico por los microorganismos
gicas como antagnicas son muy afectadas a nivel de este C) por su incapacidad de metabolizarlos o por repre- que son inmediatamente absorbidos. nitrificantes es otra manera de incrementar la solubiliza-
ambiente particular, ya que las poblaciones en altas den- sin catablica en esos organismos por molculas or- cin de fosfatos, como se observa en la experiencia de la
sidades se afectan intensamente compitiendo por los nu- gnicas ms simples, de las plantas. Los cidos pueden ser: figura 5. En condiciones anaerobias, el cido sulhdrico
trientes, el espacio. facilita la solubilizacin ya que se forma sulfuro ferroso
tipo E: utiliza productos secundarios de organismos ri- orgnicos y CO2 (cido carbnico) producidos por la insoluble y se libera cido fosfrico. Este proceso explica
La figura 5 (Lynch, 1990) muestra la posible distribucin zosfricos, pero en desventaja competitiva con respec- microflora y por las races la gran disponibilidad de fosfatos en suelos inundados de
de diferentes tipos de microorganismos rizosfricos. to a los tipos B, C y D y por lo tanto es incapaz de com- arroz.
petir por molculas originadas en las races inorgnicos, como ntrico, sulfrico, tambin produci-
Rizoplano Lmite dos por procesos microbianos El efecto rizosfrico favorable a la solubilizacin ha sido
Tejido radical Rizosfera tipo F: microorganismos tpicos del suelo, excluidos f- puesto en evidencia en numerosos trabajos. La inocula-
sicamente de los ambientes sobre o cerca de las ra- Se aislaron microorganismos solubilizadores de fosfatos cin de vegetales con microorganismos solubilizantes del
B ces, pero resistentes a productos o actividades de los en semillas y races de diferentes plantas. Un halo que fsforo ha sido aplicado en algunos pases que inoculan
C plantines con hongos micorrcicos y bacterias solubi-
D organismos rizosfricos (antibiticos, quelantes del hie- rodea a la fuente insoluble de Pi en la superficie de cajas
A rro, etc.) de Petri permite reconocer a los organismos solubilizan- lizadoras del fsforo. En Rusia y otros pases se em-
tes. La deteccin de la accin de hongos puede ser difi- ple mucho la inoculacin de cultivos con Bacillus mega-
N de microorganismos
Suelo sin reces
tipo G: microorganismos generales del suelo exclui- cultosa; el agregado de estreptomicina (50 mg/L) permite therium var phosphaticum (fosfobacteria) organismo con
dos de la rizosfera por actividades o productos de los evidenciarlos sin la interferencia de las bacterias. gran capacidad de mineralizar formas orgnicas de P,
E
otros tipos. sobre todo en Mollisoles, con incrementos en los rendi-
Mecanismos: la quelacin del calcio, hierro y aluminio mientos de 50-70%.
F
Este esquema trata de representar el comportamiento de por cidos orgnicos, la formacin de complejos fosfoh-
G Pero luego no se continu con esta prctica, en parte por
los microorganismos en los alrededores y dentro de las micos y la competencia entre iones humatos y fosfatos
Interior de la raz Distancia desde la raz races, pero es evidente que alguna especie puede mos- por superficies adsorbentes, explican la solubilizacin. el hecho de que los suelos contienen buen nivel de orga-
trar combinaciones de dos o ms tipos de modelos de nismos que liberan formas solubles de P a partir de for-
distribucin. La figura 5 muestra los resultados de una experiencia en mas orgnicas o inorgnicas y se hace innecesario la ino-
Figura 5 - Distribucin de diferentes tipos de
la que se incorpor a un suelo azufre elemental y sulfato culacin con microorganismos seleccionados.
microorganismos en las races
de amonio y se compar el nivel de fsforo soluble por la
Factores que afectan el efecto rizosfrico absorcin de este elemento en un cultivo. En resumen: este ciclo es complejo e incluye el almacena-
miento del P en organismos vivos, materia orgnica muerta
Se aprecia que el:
Los efectos sobre la poblacin del suelo varan con la es- Thiobacillus produce cido sulfrico a partir de azufre ele- y formas inorgnicas. Las plantas lo absorben como orto-
tipo A: crece en espacios intercelulares dentro de la
pecie o la variedad del vegetal. Si las lneas de una espe- mental y se emplea en la formulacin de un fertilizante fosfato, presente en la solucin del suelo. Por lo que la re-
raz y su concentracin cae abruptamente a niveles del
cie varan en un solo gen, sus caractersticas rizosfricas fosforado, el biosuper, en grnulos con 5 partes en novacin de esta fuente por procesos de mineralizacin y
suelo sin cultivo, inmediatamente fuera de la raz
pueden cambiar. La edad de la planta, su estado sanitario peso de fosfato de roca molida, una parte de S y un in- solubilizacin, es muy importante para la nutricin vegetal.
tipo B: crece en el rizoplano y su densidad cae a nive- y vigor, el tipo y posicin de la raz, y por supuesto, el tipo culo de thiobacilo (0,1%), de gran xito en climas muy Un concepto til lo constituye la particin del P en el suelo
les basales a muy corta distancia de la superficie radi- de suelo y el ambiente afectan al efecto rizosfrico. hmedos y resulta una alternativa en pases que no pue- en reservas o pools, relacionadas con la disponibilidad de
den preparar superfosfato en cantidades importantes. formas orgnica e inorgnicas para las plantas.
Como ms de dos tercios del P total de los suelos es or- frecuentemente en forma no disponible para los vegeta- anaerobios (fermentacin de pajas) y difunden a la ri- Los requerimientos nutricionales de las bacterias del
gnico, con picos mximos en turbas, suelos forestales les como (Fe+++) y los ejemplos de carencias son frecuen- zosfera. Sus efectos dependen de la longitud de la raz rizoplano y de la rizosfera difieren de las que habitan sue-
no cultivados y suelos tropicales, un ciclo muy activo ocu- tes. La figura 6 presenta las transformaciones de origen expuesta al txico. Por otro lado la acidez protegera a los sin vegetacin.
rre que posibilita el reciclaje de formas orgnicas e inor- biolgico que ocurren entre los compuestos con hierro. la planta de microorganismos perjudiciales. Los cidos
gnicas (mineralizacin-inmovilizacin). La mineraliza- aromticos son ms txicos Menos estudios se han realizado sobre los actinomi-
cin est asegurada por una micropoblacin poco espe- animales vegetales cetes, a pesar de que son muy abundantes y activos
cfica que emplea al P en sus necesidades plsticas y Antibiticos: numerosas molculas con carcter bios- en la superficie de las races. La mayora de los traba-
libera el exceso como ortofosfato. ttico y biocida son liberados por bacterias, actinomice- jos estn vinculados a la deteccin de antagonistas que
reduccin
Fe+++ Fe++ tes, hongos (patulina, gliovirina,etc). Algunos microor- producen antibiticos contra patgenos vegetales. En
La inmovilizacin, proceso simultneo y opuesto, no es oxidacin ganismos como Pseudomonas fluorescens, Trichoder- la rizosfera predominan especies de Streptomyces y
un peligro de competencia con los vegetales salvo en el ma viride se emplean a nivel experimental como pro- Nocardia.
m i m
caso de la incorporacin de grandes cantidades de motores del crecimiento vegetal y en el control biolgi-
rastrojos con muy bajo nivel de P%. El nivel crtico se con- co de microorganismos fitopatgenos. (captulo 17) Hongos
materia orgnica
sidera 0,2% en P total y las relaciones C/P crticas son microflora Las tcnicas de recuento muestran en general un efecto
altas (200-300/1). Un proceso muy importante lo consti- Aglutininas y agentes de agregacin del suelo: las rizosfrico positivo sobre este grupo (cuadro 7), aunque
tuye la solubilizacin de formas insolubles del P como Figura 6 - Transformaciones biolgicas del hierro lectinas son glicoprotenas que actan como recepto- menos marcado que para las bacterias. Muchos autores
fosfato triclcico, hidroxiapatita, etc., que es realizado por res reconociendo sitios de adhesin en la superficie de sostienen que si el efecto se expresa en funcin de la
una poblacin inespecfica por la liberacin de cidos or- la pared de races y de bacterias (rhizobios, azospiri- biomasa de ambos grupos y no en funcin del nmero de
gnicos o minerales. Los procesos biolgicos de compuestos con hierro pue- los). Los microorganismos liberan sustancias como go- individuos, los resultados se invertiran. En los ltimos aos
den resumirse: mas, exopolisacridos, capas mucosas, polmeros que se ha brindado gran atencin a los hongos que colonizan
Los procesos de oxidorreduccin no tienen gran impor- contribuyen a formar agregados entre partculas mine- la superficie de las races.
tancia en la naturaleza. mineralizacin inmovilizacin rales y el humus.
La colonizacin inicial sera realizada por una varie-
oxidacin reduccin
Las reacciones de fijacin son importantes en relacin a Enzimas: ms de 50 enzimas han sido detectadas en dad de especies fngicas, habitantes del suelo, que a
(el Fe+++ precipita como hidrxido)
la eficiencia de uso de los fertilizantes con P por las plan- la rizosfera: hidrolasas, pectinasas, ADNasas, oxidorre- los pocos das sera desplazada por una micoflora ms
tas. En suelos cidos, el fosfato es precipitado como fos- solubilizacin precipitacin ductasas, que regulan los procesos biolgicos en este especfica, formas tpicas de la superficie de las ra-
fatos insolubles de Fe o Al, o son adsorbidos en la super- habitat ces, que persisten hasta la senescencia. Para la de-
ficie de xidos. En suelos calcreos, dominan los fosfatos Resultante de la actividad biolgica el hierro puede ser: teccin de estos hongos es necesario lavar las races
de Ca insolubles. precipitado en la naturaleza por accin de bacterias oxi- vigorosamente, para eliminar las formas esporgenas,
dantes del Fe++, por la accin de hetertrofos que degra- Efecto rizosfrico sobre grupos microbianos dominantes.
Los hongos micorrcicos pueden jugar importante rol in- dan la fraccin orgnica de complejos organo metlicos,
crementando la disponibilidad de fosfatos a los vegetales por la liberacin de O2 por algas y por la creacin de me- Bacterias
(captulo 16). dios alcalinos o solubilizado por la formacin de cidos, Numerosas revisiones ilustran sobre efectos rizosfricos Cuadro 7- Efecto rizosfrico de trigo sobre grupos
-1
la presencia de condiciones de reduccin o por la forma- positivos. En general se admite, que son las bacterias no microbianos (ufc g suelo)
cin de ciertos complejos. esporuladas, Gram negativas, las ms favorecidas. La
Ciclo biolgico del hierro y otros elementos predominancia de especies de Pseudomonas en la rizos- Organismo Rizosfrico No rizosfrico R/S
La mineralizacin e inmovilizacin son procesos reali- fera se explica por su alta tasa de crecimiento, latencia
Las transformaciones microbiolgicas de gran nmero de reducida, por la aptitud a producir sustancias inhibidoras bacterias 120 x 107 5,3 x 107 24/1
zados por variada microflora hetertrofa activa en amplios
minerales tienen gran importancia en la recuperacin de en el curso del metabolismo de hidratos de carbono y por hongos 12 x 105 1 x 105 12/1
rangos de condiciones ambientales. No se sealan casos
subproductos de la minera, actuando como verdaderos la sntesis de pigmentos flurorescentes, frecuentemente actinomicetes 49 x 106 7 x 106 7/1
de problemas en la inmovilizacin de iones ferrosos en
concentradores de metales que se encuentran en peque- inhibidores de otras especies. protozoos 24 x 102 10 x 102 2,4/1
parte por el hecho de que los restos vegetales requieren
as dosis. Procesos microbianos transforman nutrientes amonificantes 500 x 106 4 x 106 125/1
este elemento en pequeas cantidades.
minerales en formas disponibles para otras formas de vida. Las formas filamentosas ramificadas son muy abundan- desnitrificantes 1,3 x 108 1 x 108 1.260/1
El hierro sufre una serie de procesos de naturaleza fsi- Oxidacin tes en la superficie de las races, como Corynebacterium,
ca, qumica o biolgica y a pesar de ser uno de los princi- Mycobacterium. ufc= unidades formadoras de colonias
Qumicamente, el in ferroso predomina en solucin de-
pales constituyentes de la corteza terrestre, se presenta bajo de pH 5 y el frrico sobre 6. Los cambios de pH de la
Cuadro 5- Rizodeposicin Las sustancias orgnicas liberadas por los vegetales se solucin del suelo pueden alterar el estado de oxidacin dor de electrones localizado en la membrana e incluye
resumen en el cuadro 6. de este elemento. El potencial de oxidorreduccin tam- citocromos del tipo c y a. No se sabe si la actividad est
Exudados (solubles en agua): azcares, aminocidos, bin determina la forma dominante: debajo de 0,2 voltios confinada en la membrana interna o si reside en ambas:
cidos orgnicos, hormonas, vitaminas Cuadro 6- Compuestos encontrados en la es el ion ferroso el que predomina. Es difcil entonces, en externa e interna. Ciertos thiobacilos (formalmente llama-
Secreciones HdeC, enzimas rizosfera de vegetales en condiciones axnicas este elemento, determinar cundo los procesos son bio- dos Ferrobacillus) son incapaces de oxidar tiosulfato, y
Lisados autolisis de clulas de paredes vegetales, lgicos o simplemente fsico-qumicos. otros son incapaces de oxidar S=. Otras cepas que apa-
de races, fauna, microorganismos Aminocidos: todos los naturales rentemente estn adaptadas a crecer con glucosa, pier-
Gases C2H2, CO2, H2 cidos orgnicos: actico, butrico, ctrico, fumri- Las llamadas bacterias del hierro oxidan sales ferrosas den la habilidad para crecer autotrficamente con hierro.
27% del total de la fotosntesis co, gliclico, lctico, oxlico, propinico, succnico, con generacin de ATP en CTE aerobia. Precipita hidrxi- Esta variabilidad entre bacterias relacionadas estara li-
Medidas en hidroponia: 700m3/ha/ao en trigo tartrico, valrico do frrico alrededor de las clulas, frecuentemente en gada a la presencia de un plsmido.
300m3/ha/ao en cebada Hidratos de carbono: arabinosa, desoxiribosa, fruc- cpsulas o vainas dando colonias floculentas que tpica-
1.250m3/ha/ao en maz tosa, galactosa, glucosa, maltosa, manosa, oligo- mente crecen adheridas a las paredes de tubos con me- Microorganismos hetertrofos estn tambin vinculados
sacridos, rafinosa, ramnosa, ribosa, sacarosa, xi- dio lquido. Se desarrollan de preferencia en aguas po- a la oxidacin y precipitacin del hierro, pero resulta difcil
losa. bres en materia orgnica soluble, provistas de O2 y con determinar si el proceso es biolgico o fsico-qumico. Poco
En estudios en hidroponia de cultivos estriles se ha cal- Derivados de cidos nuclicos: adenina, guanina, sales ferrosas o manganosas. o nada de la energa liberada es utilizada por los organis-
culado la cantidad de materiales liberados por las races, citosina, timina mos. Muchas veces el hidrxido frrico se deposita en la
los que extrapolados a campo dan valores muy altos. Es- Factores de crecimiento: biotina, tiamina, inositol, Los gneros ms conocidos son: Sphaerotilus en cuyas superficie creando una masa compacta mezclada con
tas cifras pueden representar un peso de entre 7,3 y 12,5 piridoxina, cido p-amino benzoico, cido nicotni- vainas se deposita xido frrico. Pueden crecer rpidamente materia orgnica en desages instalados en suelos mal
toneladas mtricas de materia orgnica, excediendo a los co como quimiohetertrofos y as se aslan en cultivo puro. No drenados. El mismo proceso ocurre en el interior de ga-
mejores rendimientos en grano. Para algunos autores Enzimas: amilasa, invertasa, fosfatasa, se conoce el rol de la deposicin de hidrxido frrico: si es soductos produciendo serias oclusiones.
pueden representar un 27% de la masa total de la planta proteasa,proteasa un proceso de significado fisiolgico y si pueden desarro-
(cuadro 5). En el suelo, su biodegradacin y la adsorcin Antiboticos llarse quimiautotrficamente. La quimioautotrofia es ms
a los coloides, disminuyen la produccin neta. Bacterias: Agrobacterium tumefaciens enfermedad evidente en otra bacteria no relacionada a la anterior: Ga- Reduccin
(agalla de corona) llionella que no crece en medios orgnicos y s en medio
La figura 4 resume los conceptos sobre las transferencias Agrobacterium rhizogenes, Agrocina (antibotico) mineral con depsito de SFe como fuente de Fe++. Resulta En suelos mal drenados o sometidos a perodos de anae-
del carbono y su utilizacin en la rizosfera. El CO2 asimila- Pseudomonas fluorescens: Fenazina, controla enfer- difcil obtenerla en cultivo puro. La mayora de las colonias robiosis el hierro al estado ferroso se hace predominante.
do es llevado de la parte area a las races para la snte- medad en trigo (phz- (Tn5): mutante no activa) algodonosas obtenidas estn formadas en su mayor parte El proceso de reduccin del ion frrico a ferroso es casi
sis de nuevas estructuras y puede tambin ser liberado Hongos Trichoderma spp muchos metabolitos acti- por hidrxido frrico y las bacterias estn localizadas en exclusivamente biolgico, ya que no se detectan mayores
como exudados: solubles, que difunden, o bien no difusi- vos, Gliocadium spp producen varios antibiticos ramificaciones terminales de los depsitos de Fe (OH)3. cambios en suelos estriles o con agregados de inhibido-
bles, que permanecen en el mucigel. La degradacin de (patulina, pioluteorina) res metablicos. La figura 7 muestra lo que ocurre en
estos compuestos ms resistentes explicara un segundo Otros compuestos: auxinas, glicsidos, cido cian- Otros microorganismos comprometidos en la oxidacin: ambientes sometidos a anegamiento: el potencial de xi-
pico en la liberacin del CO2. Un posible tercer pico en el hdrico, pptidos, saponinas, CO2, alcoholes, sus- Leptothix, quimioauttrofo facultativo, puede obtener ener- do-reduccin (Eh) desciende provocando la reduccin r-
flujo de CO2 sera resultante de la degradacin de restos tancias quelantes, etc. ga tambin de la oxidacin de compuestos orgnicos; pida del hierro y del manganeso. La materia orgnica es-
de clulas y tejidos y de la penetracin de microorganis- Thiobacillus y Ferrobacillus. Obtienen energa de la oxi- timula el proceso, comparable desde el punto de vista
mos en clulas corticales. dacin: metablico con la desnitrificacin y la sulfatorreduccin,
Los efectos de las mismas sobre los vegetales se pueden es decir respiraciones anaerobias con sustratos orgni-
CO2 resumir: 4 Fe+++ + O2 + 4 H+ 4 Fe+++ + 2 H2O cos. En medios cidos no se requieren potenciales redox

tan bajos para solubilizar el hierro.
CO2 microorganismo
races exudados libres compuestos simples
Reguladores de crecimiento vegetal: etileno, cido El organismo est frecuentemente recubierto por vaina

giberlico (AG), cido fusrico, cido indol actico (AIA), de Fe (OH)3 que se origina por va biolgica: Otro mecanismo biolgico indirecto est relacionado a la
mucigel tiempo microorganismos CO2

cido abcsico, citoquininas, que se suman a las produ- liberacin de sustancias orgnicas de carcter reductor

descamacin tiempo microorganismos CO2 cidas por las plantas Fe2 (SO4)3 + 6 H2O 2Fe (OH)3 + 3 H2SO4 por parte de los microorganismos del suelo: cidos org-
tejidos
nicos, aldehidos, que provocaran ligera reduccin del hie-

compuestos simples
Fitotoxinas: como cido para-amino-benzoico, cido Muchas cepas pueden emplear en lugar de sales ferro- rro. El consumo de O2 por microorganismos aerobios, pro-
cumrico, actico, butrico, HCN, H2S, cido benzico, sas, compuestos de azufre reducidos: S, S= o S2O3=. La voca descenso del potencial redox del suelo y reduccin
Figura 4 - Flujos de carbono en la rizosfera etc. Los cidos alifticos se acumulan en ambientes oxidacin del hierro es realizada por sistema transporta- del hierro.
Fe++ Mg++ Eh(v) El lquido toma las coloraciones tpicas del hierro al esta- Cuadro 4- Mtodos de estudio en la rizosfera 3. Muclagos vegetales, son originados en el pice de
(mg/100g) (mg/100g) do reducido y la velocidad de desaparicin del azcar y la la raz y segregados por el Golgi, o hidrolizados de po-
200 20
0.4 aparicin de Fe++ tienen la forma sigmoide tpica del creci- mutantes marcadas por resistencias a antibiticos, lisacridos de la pared primaria y de clulas del extre-
Mn
miento bacteriano. biocidas, o por caractersticas fisiolgicas mo de la raz, segregados por pelos capilares o produ-
cidos por degradacin bacteriana de clulas epidrmi-
0.2 recuentos de grupos fisiolgicos y relacin R/S (den-
100 10 Eh Fe cas muertas.
sidades en suelo rizosfrico/ densidades en sue-
Formacin de complejos orgnico-metlicos
lo sin efecto radical)
0.0 4. Mucigel, se restringe este trmino al material gelati-
Productos del metabolismo microbiano: cidos orgnicos, colonizacin de la raz: microscopa de luz, fluores- noso de la superficie de las races creciendo en suelos
-0.1 aminocidos, etc., metabolitos de origen vegetal y micro- cente, electrnica normales, no estriles. Incluye muclagos vegetales,
0 10 20 30 das
biano y molculas derivadas del humus pueden formar clulas bacterianas y sus productos metablicos (cp-
una variedad de complejos con iones metlicos entre ellos, determinaciones de biomasa microbiana, por re- sulas, capas mucosas, gliocalix) as como coloides mi-
++ ++
Figura 7 - Potencial redox e iones Fe y Mn en suelo con el hierro. Estas molculas tienen mucha importancia cuentos o muerte de propgulos y su mineraliza- nerales y materia orgnica del suelo. El mucigel es una
anegado en el plano pedolgico pues explican la migracin en el cin (CO2) zona muy importante que mantiene a las races y al sue-
perfil de ste y otros elementos. Las molculas como ci- empleo de elementos radioactivos: C, N, S, etc. lo en contacto y es un reservorio de nutrientes y agua de
La microflora responsable de la reduccin de iones frri- trato frrico, lactato o succinato frrico pueden migrar importancia para el vegetal en pocas de sequa. Se
cos en anaerobiosis es muy numerosa en el suelo y su modelizacin: diseos experimentales que predicen
en un suelo a pH 5,0 mientras que en estado libre, este encuentra presente siempre en las clulas de pice de
densidad puede alcanzar valores de 104 - 106 clulas/g. ion es insoluble. los efectos de cambios en exudados, agua, etc. la raz, pero su extensin a lo largo del sistema radical
Entre las bacterias se citan especies de Bacillus, Clostri- sobre la poblacin microbiana es variable.
dium, Klebsiella, Pseudomonas y Serratia. Muchas son Las sustancias complexantes de origen microbiano: cidos
anaerobias facultativas y pueden emplear adems del ctrico, oxlico, fumrico, 2-cetoglucnico, lctico, pueden 5. Lisados son los compuestos liberados por autli-
oxgeno, nitratos y manganatos como aceptores de elec- solubilizar diversos elementos, como el potasio, calcio, fs- sis de las clulas epidrmicas. Las paredes de estas
trones. foro, hierro y numerosos oligoelementos, sobre todo acu- Origen y naturaleza de clulas son digeridas por los microorganismos que li-
mulados en suelos en anaerobiosis o microaerofilia. los materiales orgnicos beran a la rizosfera los productos de su actividad mi-
Consecuencia de este fenmeno es la corrosin anae- crobiana.
robia de materiales de hierro o acero enterrados en pe- Los siderforos son molculas de gran afinidad por el Se reconocen varias categoras de compuestos orgni-
rodos de deficiencia en O2. Gasoductos, oleoductos y Fe+++ producidos por microorganismos y plantas y contri- cos en la vecindad de las races (figura 3 y cuadro 5). Es
caeras pueden inutilizarse en pocos aos. Cuando se buyen a la toma de este elemento en ambientes de baja necesario establecer si la sustancia en cuestin es pro- Raz Suelo Tipo de material
renen condiciones de anaerobiosis, temperaturas me- disponibilidad. Protenas de membrana permiten la entra- ducida por el microorganismo en cultivo puro y se en-
dias, pH superiores a 5,5 y presencia de sulfatos, las con- cuentra a concentracin fisiolgicamente activa en la ri- clulas epidrmicas y lisiados (5)
da del complejo organo-metlico. En la clula ste se des- corticales lisadas e
secuencias son ms graves. Bacterias anaerobias del dobla liberando el ion frrico que es oportunamente redu- zosfera. invadidas por bacterias micilagos de clulas
gnero Desulfovibrio contribuyen a la corrosin producien- cido por enzimas microbianas y asimilado como ion ferro-
epidrmicas degradadas por
bacterias
do H2 y electrones libres: so. Estas sustancias juegan importante rol en la lucha 1. Exudados: compuestos de bajo peso molecular en
biolgica, en la competencia por el hierro con microorga- general solubles en agua que liberan las clulas hacia
2mm exudados(1)
4 Fe + SO4= + 4H2O FeS + 3Fe (OH)2 + 2OH- nismos fotopatgenos (captulo 17). espacios intercelulares y luego al suelo. Su liberacin no
est mediatizada por un metabolismo. Son azcares, m.o. miclagos
micigel (4)
vegetales y
Otra consecuencia del proceso es la aparicin en sue- Cuando el complejo organo-metlico se mineraliza por aminocidos, cidos orgnicos, hormonas, vitaminas. La microbianos exudados y secreciones (1-2)
los hidromrficos de horizontes de reduccin, o gley, de accin de hetertrofos, el hierro es liberado y precipita exudacin radical se puso de manifiesto luego de aplica- muclago secretado por
coloracin gris verdosa o azulada, debida fundamen- como sales insolubles frricas. La reaccin puede ocurrir ciones foliares de sustancias con elementos radioactivos clulas epidrmicas
decamacin de clulas
talmente al hierro ferroso. Puede precipitar sulfuro ferro- tanto en anaerobiosis como en ausencia de aire y es rea- (P32, 14CO2, N15, etc.) muclago (hidrolizado de
pice de la raz
so, de color negro. La presencia de donadores de elec- polisacrido de clulas
lizada por un gran grupo de bacterias, actinomicetes y epidrmicas
trones orgnicos es necesaria en la reduccin. Este fe- hongos. 2. Secreciones, compuestos de bajo o alto peso molecu-
nmeno puede reproducirse en una columna de suelo lar liberados como resultado de procesos metablicos
enriquecida con un azcar en anaerobiosis parcial o com- En resumen: otros elementos adems del C, N, S, P, su- mediados por el aparato de Golgi (hidratos de carbono
pleta (columna de Winogradsky) (captulo 3). polimerizados, enzimas) Figura 3 - Materiales orgnicos en la rizosfera
fren transformaciones en el ambiente. Formas reducidas
Algunas de las tcnicas empleadas (resumen en cua- sencia y colonizacin del mucigel, sus relaciones con las de Fe+2 , Mn+2, Se+2, responsables de los colores grises nitrogen, phosphorus, sulphur, micronutrients, 1999,
dro 4) (captulo 8 y Anexo prctico): arcillas, la lisis de ciertas bacterias. tpicos de los suelos con pobre drenaje, pueden ser oxi- Wiley & sons, New York
dados por bacterias quimioautotrficos, liberando ener- Sylvia, D. M., J. J. Fuhrmann, P. G. Hartel, D. A. Zuberer,
seguimiento de microorganismos en este habitat: determinaciones de biomasa microbiana: por recuen- ga. Formas oxidadas (Fe+++, Mn+4), actan como acepto- Principles and Applications of Soil Microbiology,
se emplean mutantes marcadas por resistencia a an- tos o por la tcnica de fumigacin son muy empleadas res finales de electrones en respiraciones anaerobias. La 1998, Prentice Hall, New jersey
tibiticos o con caractersticas fisiolgicas que permi- para determinar los efectos estimulantes o inhibidores de reduccin provoca un incremento en la solubilidad de esos
ten reconocerlas fcilmente en aislamientos, en estu- distintas rizosferas. elementos. El mercurio es contaminante de muchos am-
dios de recuentos (NMP). Se obtienen con transpo- bientes, sobretodo de sedimentos acuticos, puede ser Preguntas de repaso
sones (Tn5), hibridizacin del ADN, empleo de son- El cuadro 3 (Frioni, 1990) muestra la fraccin de C orgni- metilado microbiolgicamente en sedimentos a metilmer-
das, etc. co presente en la biomasa del suelo rizosfrico de cuatro curio, altamente txico que se puede acumular en la ca- 1) Cmo se relaciona la quimiosntesis con las trans-
gramneas cultivadas en la zona de Ro Cuarto (Argenti- dena trfica. Las formas inicas pueden ser tambin re- formaciones del azufre?
recuentos de grupos fisiolgicos y clculo de la relacin na), evaluada en el estado de grano lechoso, en relacin ducidas a mercurio elemental, voltil, provocando la re- 2) Discuta cmo la oxidacin de compuestos reducidos
a la del suelo sin cultivar. mocin de este txico del suelo hacia la atmsfera. del azufre pueden permitir incrementar la productivi-
R/S = densidad de algn grupo por gramo de suelo rizosfrico dad primaria en el fondo de efluentes termales
densidad por gramo de suelo sin cultivo 3) Cmo se explican los depsitos negros alrededor de
Cuadro 3 - Carbono orgnico en la biomasa (%), Bibliografa races en suelos salinos anegados?
Permiten determinar efectos estimulantes o inhibidores en la rizosfera de gramneas (*) 4) Analice similitudes y diferencias entre los ciclos del S
de ciertos cultivos sobre procesos microbianos de inte- Dommergues, Y. , Mangenot, F. Ecologie microbienne y del N
rs, como celulolisis, fijacin del N2, nitrificacin, etc. maz sorgo mijo mijo suelo du sol. 1970, Masson, Pars. 5) En qu tipos de suelos puede encontrar bacterias
Resulta difcil comparar resultados de distintos autores perla comn solo Fenchel, T., King, G. M. & T. H. Blackburn, Bacterial Bio- sulfatorreductoras activas?
si no se han empleado tcnicas, sistemas radicales y geochemistry: The Ecophysiology of Mineral 6) Si un rastrojo con relaciones: C/N/P de 500/20/1 se
medios y condiciones de cultivo semejantes. (C- biomasa/ Cycling, 1998, Academic Press agrega al suelo, dominar la mineralizacin o la in-
C-orgnico 6,19a 5,99 5,35ab 5,64a 4,52b Frioni, L. Procesos microbianos. 1999, Fundacin de la movilizacin del P? Por qu?
colonizacin de la raz (microscopa de luz, fluores- total) % Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina 7) Puede un microorganismo facilitar la solubilizacin de
cente, electrnica) muy til para conocer la distribucin Stevenson, F. J. & M. A. Cole Cycles of Soils: carbon, compuestos con Fe y P simultneamente?
de los microorganismos y su grado de colonizacin. El (*) Dos o ms tratamientos sealados por la misma letra
microscopio ptico permiti mostrar que slo entre un no difieren significativamente por Tuckey al 1 %
5 a 10% de la superficie de la raz est cubierta de mi-
croorganismos, hecho que desmiente la creencia muy
extendida de que las races estaban cubiertas por un empleo de elementos radioactivos, C,N,S, etc. per-
espeso manto microbiano. Esta idea se sustent en los miten un estudio ms detallado de procesos microbia-
altos recuentos, al expresarlos por gramo de raz. nos en este ambiente
La microscopa fluorescente, con anticuerpos marca- modelizacin, diseos experimentales y matemticos

dos con sustancias que fluorescen en luz ultravioleta, per- son muy empleados y permiten predecir los efectos de
mite determinar la colonizacin de distintas porciones de variaciones en: el contenido de agua del suelo, la den-
la raz por cepas de inters agrcola, como los rhizobios, y sidad de las races, los niveles de exudacin, el agre-
brindan invalorable informacin sobre la distribucin de gado de distintos sustratos, el efecto rizosfrico a dis-
bacterias en el sistema radical. tancias variables de las superficies radicales. Estos
modelos sealaron marcada reduccin del efecto a
El microscopio electrnico de transmisin y de barrido medida que la distancia de la superficie de la raz au-
permiti grandes avances en el conocimiento de la distri- menta, como se observa en microscopa electrnica y
bucin espacial de los componentes de la interfase suelo- constituyen una herramienta invalorable en la predic-
raz, la forma de agrupacin de las poblaciones, la pre- cin de cambios en las poblaciones microbianas en res-
puesta a modificaciones de la interfase suelo-raz.
Conceptos generales sa de las mismas luego del tratamiento anterior. Si no se

indica expresamente, al hablar de rizosfera, se incluye en
Desde comienzos del siglo pasado se reconoci que la general a la rizosfera y al rizoplano.
zona del suelo vecina a las races induca, en general,
una mayor actividad de los microorganismos y se introdu- Muchos microorganismos colonizan la raz por heridas o
jo el trmino rizosfera, para definir a esta regin. Desde por accin enzimtica. Se habl un tiempo de endorri-
entonces, son numerosos los estudios sobre las activida- zosfera, pero se comprende que esta definicin no es
des microbianas en esta zona, que se define como el vo- correcta ya no est involucrado el suelo. Se habla de mi-
lumen de interaccin entre el sistema radical de los croorganismos endofticos: simbiticos, saprofitas o pa-
vegetales y su inmediato medio suelo. Su validez en rsitos.
trminos de gradientes microbiolgico y qumico ha sido
demostrada por varios autores, con un mximo de efecto Cuadro 2- Importancia de las races en el suelo
en la zona de contacto con las races, hasta distancias
variables que podran llegar a algunos milmetros. Luego Planta de centeno de 16 semanas
el efecto es despreciable. El cuadro 2 muestra la impor- 13.000.000 de races axiales y laterales
tancia de la masa radical y los aportes en forma de exu- 50 km de largo total, ms de 200 m2 de superficie
dados, lisados, secreciones, que resultan importantes in-
sumos para los microorganismos. Materiales depositados en la rizosfera: exudados- se-
creciones- muclagos- lisados
La microflora es afectada por los exudados radicales y importantes fuentes de carbono, nitrgeno, ener-
por los aportes de restos de tejidos y clulas. ga
varan en funcin de la especie vegetal y del eco-
Los microorganismos estimulados actan sobre la planta, sistema
poniendo a su disposicin molculas orgnicas que son pueden alcanzar ms de 500 mg/g de raz seca
absorbidas por las races, como aminocidos, vitaminas, (normal, entre 10 y 100 mg/g)
antibiticos, fitohormonas y contribuyen a su nutricin mi-
neral por los procesos de mineralizacin y solubilizacin,
de ciertos elementos. Mtodos de estudio
Las interacciones biolgicas son muy intensas en esta Las investigaciones en esta regin no son sencillas, es
regin y los fenmenos de sinergismo o de antagonismo necesario trabajar con plantas vivas, en medios artifi-
son exaltados. ciales: soluciones hidropnicas, cultivos sobre agar, ver-
miculita u otros soportes, o en el suelo mismo, en ma-
La rizosfera, en sentido amplio, se define como la fina cetas en invernculo o en el campo. Los datos obteni-
capa de suelo que se adhiere firmemente a las races, dos son puntuales y brindan informacin sobre las re-
pero que se puede separar por lavado y agitacin mode- laciones microflora-vegetal en un momento dado. Las
rada en agua. Se puede dividir en rizosfera prxima condiciones en este hbitat son muy dinmicas y los
y alejada, segn el tiempo y la intensidad de agitacin. productos liberados por |os vegetales son simultnea-
Es la zona del suelo con influencia de las races, con mxi- mente biodegradados o adsorbidos fuertemente a los
mo efecto desde la superficie de la raz hasta 1-3 mm coloides del suelo.
(pudiendo llegar a 5 mm). Constituye un microecosiste-
ma muy especializado que propicia el crecimiento de una Por este motivo, los estudios sobre exudacin se realizan
poblacin microbiana diversificada. en medios estriles y el nivel de produccin no pueden
extrapolarse a condiciones naturales y adems los datos
El rizoplano lo constituye el suelo en contacto ntimo con son puntuales: las sustancias son producidas y biode-
la superficie de las races y se extrae por agitacin vigoro- gradadas en forma simultnea.
Efecto de los microorganismos sobre los ve- aumento de la disponibilidad y toma de nutrientes mi-
getales nerales
Directos: por los compuestos liberados, minerales, fito- provisin de sustancias promotoras del crecimiento
hormonas
Indirectos: actuando como microorganismos deletreos supresin de microorganismos deletreos y patgenos
o fitopatgenos en la rizosfera.
Los efectos de los microorganismos rizosfricos sobre Deletreos: que pueden afectar negativamente el creci-
a las plantas pueden catalogarse (figura 2) (Kennedy, miento vegetal, sin necesariamente parasitar al tejido (al-
1998) como: teraciones en el aporte de agua, iones y sustancias pro-
motoras del crecimiento vegetal, cambiando las funcio-
Neutros: no afectan el crecimiento nes y/o limitando el crecimiento de races).
Los microorganismos
Benficos: existe creciente evidencia de que la microflo- Patgenos: disminuyen el rendimiento por produccin de
ra saprofita de la rizosfera incluye componentes benfi-
cos que pueden incrementar el crecimiento vegetal y los
enfermedades: numerosas bacterias, actinomicetes, hon-
gos, producen enfermedades que provocan importantes
y sus interacciones
rendimientos significativamente por: prdidas en los cultivos.
13 La rizosfera ................................................................................... 231

Benficos
14 Interacciones entre microorganismos .......................................... 243
Fijacin N2 15 Fijacin biolgica de N2 en la rizosfera

Promocin
crecimiento Biocontrol y en asociaciones nodulares ......................................................... 255
Estabilizacin
suelo Antibiosis 16 Las micorrizas ............................................................................... 291
Toma de 17 Microorganismos promotores del crecimiento vegetal .................. 309

agua Simbiosis
Flujo
18 Procesos microbianos en el rumen ............................................... 323
Enfermedad
nutrientes
les
icia
Liberacin Fitotoxicidad
jud
enzimas
Per
Ne Competencia
utr Adhesin
os
ov
ari Alelopata
ab
les
Figura 2- Efectos neutros, benficos, perjudiciales y variables de la comunidad microbiana rizosfrica sobre le crecimiento vegetal
13 La rizosfera
Los microorganismos interactan con las plantas a nivel El cuadro 1 resume los efectos recprocos entre vege-
del follaje y las hojas, en la superficie del suelo, alrededor tales y microorganismos y el cuadro 2 seala la impor-
de las races y semillas, donde encuentran abundantes tancia de las sustancias liberadas por los vegetales al
materiales carbonados y un ambiente particular con con- suelo.
diciones fsico-qumicas diferentes que las del suelo sin
cultivar. Las plantas, por su parte, reciben numerosos
metabolitos de la micropoblacin edfica, muchos de ellos Cuadro 1- Interacciones entre los
promotores de crecimiento. microorganismos y las plantas
La figura 1 muestra las principales zonas de interaccin Efecto de las plantas sobre los microorganismos
biolgica, conocidas como:
Directos
filosfera (ambiente sobre las hojas) (F) aporte de sustancias energticas, estimulantes o
inhibidoras, como molculas:
rizosfera (zona del suelo afectada por las races) (R) orgnicas, vitaminas, fitohormonas, sustancias
restos vegetales o mantillo (ramas, hojas, etc. sobre que producen agregados. Exudados, secrecio-
el suelo) (M) nes, restos de tejidos que actan como fuen-
tes de energa, C, N, S, etc. o como sustancias
espermatosfera (zona del suelo afectada por los exu- txicas
dados y descamaciones de las semillas) (E)
modificacin del medio fsico (estructura) o qu-
F mico (inmovilizacin), control biolgico de
microorganismos fitopatgenos
Indirectos
modificacin del medio qumico por los procesos
M de mineralizacin-inmovilizacin, precipitacin
solubilizacin, oxido-reduccin de materiales
orgnicos o minerales, el ambiente fsico alte-
R rando la estructura, el rgimen hdrico, el pH,
E
la composicin de la atmsfera del suelo y el
ambiente biolgico, estimulando las interac-
Figura 1- Zonas de interaccin entre microorganismos y ciones microbianas a ese nivel
vegetales
13 La rizosfera
Los microorganismos interactan con las plantas a nivel El cuadro 1 resume los efectos recprocos entre vege-
del follaje y las hojas, en la superficie del suelo, alrededor tales y microorganismos y el cuadro 2 seala la impor-
de las races y semillas, donde encuentran abundantes tancia de las sustancias liberadas por los vegetales al
materiales carbonados y un ambiente particular con con- suelo.
diciones fsico-qumicas diferentes que las del suelo sin
cultivar. Las plantas, por su parte, reciben numerosos
metabolitos de la micropoblacin edfica, muchos de ellos Cuadro 1- Interacciones entre los
promotores de crecimiento. microorganismos y las plantas
La figura 1 muestra las principales zonas de interaccin Efecto de las plantas sobre los microorganismos
biolgica, conocidas como:
Directos
filosfera (ambiente sobre las hojas) (F) aporte de sustancias energticas, estimulantes o
inhibidoras, como molculas:
rizosfera (zona del suelo afectada por las races) (R) orgnicas, vitaminas, fitohormonas, sustancias
restos vegetales o mantillo (ramas, hojas, etc. sobre que producen agregados. Exudados, secrecio-
el suelo) (M) nes, restos de tejidos que actan como fuen-
tes de energa, C, N, S, etc. o como sustancias
espermatosfera (zona del suelo afectada por los exu- txicas
dados y descamaciones de las semillas) (E)
modificacin del medio fsico (estructura) o qu-
F mico (inmovilizacin), control biolgico de
microorganismos fitopatgenos
Indirectos
modificacin del medio qumico por los procesos
M de mineralizacin-inmovilizacin, precipitacin
solubilizacin, oxido-reduccin de materiales
orgnicos o minerales, el ambiente fsico alte-
R rando la estructura, el rgimen hdrico, el pH,
E
la composicin de la atmsfera del suelo y el
ambiente biolgico, estimulando las interac-
Figura 1- Zonas de interaccin entre microorganismos y ciones microbianas a ese nivel
vegetales
Efecto de los microorganismos sobre los ve- aumento de la disponibilidad y toma de nutrientes mi-
getales nerales
Directos: por los compuestos liberados, minerales, fito- provisin de sustancias promotoras del crecimiento
hormonas
Indirectos: actuando como microorganismos deletreos supresin de microorganismos deletreos y patgenos
o fitopatgenos en la rizosfera.
Los efectos de los microorganismos rizosfricos sobre Deletreos: que pueden afectar negativamente el creci-
a las plantas pueden catalogarse (figura 2) (Kennedy, miento vegetal, sin necesariamente parasitar al tejido (al-
1998) como: teraciones en el aporte de agua, iones y sustancias pro-
motoras del crecimiento vegetal, cambiando las funcio-
Neutros: no afectan el crecimiento nes y/o limitando el crecimiento de races).
Los microorganismos
Benficos: existe creciente evidencia de que la microflo- Patgenos: disminuyen el rendimiento por produccin de
ra saprofita de la rizosfera incluye componentes benfi-
cos que pueden incrementar el crecimiento vegetal y los
enfermedades: numerosas bacterias, actinomicetes, hon-
gos, producen enfermedades que provocan importantes
y sus interacciones
rendimientos significativamente por: prdidas en los cultivos.
13 La rizosfera ................................................................................... 231

Benficos
14 Interacciones entre microorganismos .......................................... 243
Fijacin N2 15 Fijacin biolgica de N2 en la rizosfera

Promocin
crecimiento Biocontrol y en asociaciones nodulares ......................................................... 255
Estabilizacin
suelo Antibiosis 16 Las micorrizas ............................................................................... 291
Toma de 17 Microorganismos promotores del crecimiento vegetal .................. 309

agua Simbiosis
Flujo
18 Procesos microbianos en el rumen ............................................... 323
Enfermedad
nutrientes
les
icia
Liberacin Fitotoxicidad
jud
enzimas
Per
Ne Competencia
utr Adhesin
os
ov
ari Alelopata
ab
les
Figura 2- Efectos neutros, benficos, perjudiciales y variables de la comunidad microbiana rizosfrica sobre le crecimiento vegetal
Conceptos generales sa de las mismas luego del tratamiento anterior. Si no se

indica expresamente, al hablar de rizosfera, se incluye en
Desde comienzos del siglo pasado se reconoci que la general a la rizosfera y al rizoplano.
zona del suelo vecina a las races induca, en general,
una mayor actividad de los microorganismos y se introdu- Muchos microorganismos colonizan la raz por heridas o
jo el trmino rizosfera, para definir a esta regin. Desde por accin enzimtica. Se habl un tiempo de endorri-
entonces, son numerosos los estudios sobre las activida- zosfera, pero se comprende que esta definicin no es
des microbianas en esta zona, que se define como el vo- correcta ya no est involucrado el suelo. Se habla de mi-
lumen de interaccin entre el sistema radical de los croorganismos endofticos: simbiticos, saprofitas o pa-
vegetales y su inmediato medio suelo. Su validez en rsitos.
trminos de gradientes microbiolgico y qumico ha sido
demostrada por varios autores, con un mximo de efecto Cuadro 2- Importancia de las races en el suelo
en la zona de contacto con las races, hasta distancias
variables que podran llegar a algunos milmetros. Luego Planta de centeno de 16 semanas
el efecto es despreciable. El cuadro 2 muestra la impor- 13.000.000 de races axiales y laterales
tancia de la masa radical y los aportes en forma de exu- 50 km de largo total, ms de 200 m2 de superficie
dados, lisados, secreciones, que resultan importantes in-
sumos para los microorganismos. Materiales depositados en la rizosfera: exudados- se-
creciones- muclagos- lisados
La microflora es afectada por los exudados radicales y importantes fuentes de carbono, nitrgeno, ener-
por los aportes de restos de tejidos y clulas. ga
varan en funcin de la especie vegetal y del eco-
Los microorganismos estimulados actan sobre la planta, sistema
poniendo a su disposicin molculas orgnicas que son pueden alcanzar ms de 500 mg/g de raz seca
absorbidas por las races, como aminocidos, vitaminas, (normal, entre 10 y 100 mg/g)
antibiticos, fitohormonas y contribuyen a su nutricin mi-
neral por los procesos de mineralizacin y solubilizacin,
de ciertos elementos. Mtodos de estudio
Las interacciones biolgicas son muy intensas en esta Las investigaciones en esta regin no son sencillas, es
regin y los fenmenos de sinergismo o de antagonismo necesario trabajar con plantas vivas, en medios artifi-
son exaltados. ciales: soluciones hidropnicas, cultivos sobre agar, ver-
miculita u otros soportes, o en el suelo mismo, en ma-
La rizosfera, en sentido amplio, se define como la fina cetas en invernculo o en el campo. Los datos obteni-
capa de suelo que se adhiere firmemente a las races, dos son puntuales y brindan informacin sobre las re-
pero que se puede separar por lavado y agitacin mode- laciones microflora-vegetal en un momento dado. Las
rada en agua. Se puede dividir en rizosfera prxima condiciones en este hbitat son muy dinmicas y los
y alejada, segn el tiempo y la intensidad de agitacin. productos liberados por |os vegetales son simultnea-
Es la zona del suelo con influencia de las races, con mxi- mente biodegradados o adsorbidos fuertemente a los
mo efecto desde la superficie de la raz hasta 1-3 mm coloides del suelo.
(pudiendo llegar a 5 mm). Constituye un microecosiste-
ma muy especializado que propicia el crecimiento de una Por este motivo, los estudios sobre exudacin se realizan
poblacin microbiana diversificada. en medios estriles y el nivel de produccin no pueden
extrapolarse a condiciones naturales y adems los datos
El rizoplano lo constituye el suelo en contacto ntimo con son puntuales: las sustancias son producidas y biode-
la superficie de las races y se extrae por agitacin vigoro- gradadas en forma simultnea.
Algunas de las tcnicas empleadas (resumen en cua- sencia y colonizacin del mucigel, sus relaciones con las de Fe+2 , Mn+2, Se+2, responsables de los colores grises nitrogen, phosphorus, sulphur, micronutrients, 1999,
dro 4) (captulo 8 y Anexo prctico): arcillas, la lisis de ciertas bacterias. tpicos de los suelos con pobre drenaje, pueden ser oxi- Wiley & sons, New York
dados por bacterias quimioautotrficos, liberando ener- Sylvia, D. M., J. J. Fuhrmann, P. G. Hartel, D. A. Zuberer,
seguimiento de microorganismos en este habitat: determinaciones de biomasa microbiana: por recuen- ga. Formas oxidadas (Fe+++, Mn+4), actan como acepto- Principles and Applications of Soil Microbiology,
se emplean mutantes marcadas por resistencia a an- tos o por la tcnica de fumigacin son muy empleadas res finales de electrones en respiraciones anaerobias. La 1998, Prentice Hall, New jersey
tibiticos o con caractersticas fisiolgicas que permi- para determinar los efectos estimulantes o inhibidores de reduccin provoca un incremento en la solubilidad de esos
ten reconocerlas fcilmente en aislamientos, en estu- distintas rizosferas. elementos. El mercurio es contaminante de muchos am-
dios de recuentos (NMP). Se obtienen con transpo- bientes, sobretodo de sedimentos acuticos, puede ser Preguntas de repaso
sones (Tn5), hibridizacin del ADN, empleo de son- El cuadro 3 (Frioni, 1990) muestra la fraccin de C orgni- metilado microbiolgicamente en sedimentos a metilmer-
das, etc. co presente en la biomasa del suelo rizosfrico de cuatro curio, altamente txico que se puede acumular en la ca- 1) Cmo se relaciona la quimiosntesis con las trans-
gramneas cultivadas en la zona de Ro Cuarto (Argenti- dena trfica. Las formas inicas pueden ser tambin re- formaciones del azufre?
recuentos de grupos fisiolgicos y clculo de la relacin na), evaluada en el estado de grano lechoso, en relacin ducidas a mercurio elemental, voltil, provocando la re- 2) Discuta cmo la oxidacin de compuestos reducidos
a la del suelo sin cultivar. mocin de este txico del suelo hacia la atmsfera. del azufre pueden permitir incrementar la productivi-
R/S = densidad de algn grupo por gramo de suelo rizosfrico dad primaria en el fondo de efluentes termales
densidad por gramo de suelo sin cultivo 3) Cmo se explican los depsitos negros alrededor de
Cuadro 3 - Carbono orgnico en la biomasa (%), Bibliografa races en suelos salinos anegados?
Permiten determinar efectos estimulantes o inhibidores en la rizosfera de gramneas (*) 4) Analice similitudes y diferencias entre los ciclos del S
de ciertos cultivos sobre procesos microbianos de inte- Dommergues, Y. , Mangenot, F. Ecologie microbienne y del N
rs, como celulolisis, fijacin del N2, nitrificacin, etc. maz sorgo mijo mijo suelo du sol. 1970, Masson, Pars. 5) En qu tipos de suelos puede encontrar bacterias
Resulta difcil comparar resultados de distintos autores perla comn solo Fenchel, T., King, G. M. & T. H. Blackburn, Bacterial Bio- sulfatorreductoras activas?
si no se han empleado tcnicas, sistemas radicales y geochemistry: The Ecophysiology of Mineral 6) Si un rastrojo con relaciones: C/N/P de 500/20/1 se
medios y condiciones de cultivo semejantes. (C- biomasa/ Cycling, 1998, Academic Press agrega al suelo, dominar la mineralizacin o la in-
C-orgnico 6,19a 5,99 5,35ab 5,64a 4,52b Frioni, L. Procesos microbianos. 1999, Fundacin de la movilizacin del P? Por qu?
colonizacin de la raz (microscopa de luz, fluores- total) % Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina 7) Puede un microorganismo facilitar la solubilizacin de
cente, electrnica) muy til para conocer la distribucin Stevenson, F. J. & M. A. Cole Cycles of Soils: carbon, compuestos con Fe y P simultneamente?
de los microorganismos y su grado de colonizacin. El (*) Dos o ms tratamientos sealados por la misma letra
microscopio ptico permiti mostrar que slo entre un no difieren significativamente por Tuckey al 1 %
5 a 10% de la superficie de la raz est cubierta de mi-
croorganismos, hecho que desmiente la creencia muy
extendida de que las races estaban cubiertas por un empleo de elementos radioactivos, C,N,S, etc. per-
espeso manto microbiano. Esta idea se sustent en los miten un estudio ms detallado de procesos microbia-
altos recuentos, al expresarlos por gramo de raz. nos en este ambiente
La microscopa fluorescente, con anticuerpos marca- modelizacin, diseos experimentales y matemticos

dos con sustancias que fluorescen en luz ultravioleta, per- son muy empleados y permiten predecir los efectos de
mite determinar la colonizacin de distintas porciones de variaciones en: el contenido de agua del suelo, la den-
la raz por cepas de inters agrcola, como los rhizobios, y sidad de las races, los niveles de exudacin, el agre-
brindan invalorable informacin sobre la distribucin de gado de distintos sustratos, el efecto rizosfrico a dis-
bacterias en el sistema radical. tancias variables de las superficies radicales. Estos
modelos sealaron marcada reduccin del efecto a
El microscopio electrnico de transmisin y de barrido medida que la distancia de la superficie de la raz au-
permiti grandes avances en el conocimiento de la distri- menta, como se observa en microscopa electrnica y
bucin espacial de los componentes de la interfase suelo- constituyen una herramienta invalorable en la predic-
raz, la forma de agrupacin de las poblaciones, la pre- cin de cambios en las poblaciones microbianas en res-
puesta a modificaciones de la interfase suelo-raz.
Fe++ Mg++ Eh(v) El lquido toma las coloraciones tpicas del hierro al esta- Cuadro 4- Mtodos de estudio en la rizosfera 3. Muclagos vegetales, son originados en el pice de
(mg/100g) (mg/100g) do reducido y la velocidad de desaparicin del azcar y la la raz y segregados por el Golgi, o hidrolizados de po-
200 20
0.4 aparicin de Fe++ tienen la forma sigmoide tpica del creci- mutantes marcadas por resistencias a antibiticos, lisacridos de la pared primaria y de clulas del extre-
Mn
miento bacteriano. biocidas, o por caractersticas fisiolgicas mo de la raz, segregados por pelos capilares o produ-
cidos por degradacin bacteriana de clulas epidrmi-
0.2 recuentos de grupos fisiolgicos y relacin R/S (den-
100 10 Eh Fe cas muertas.
sidades en suelo rizosfrico/ densidades en sue-
Formacin de complejos orgnico-metlicos
lo sin efecto radical)
0.0 4. Mucigel, se restringe este trmino al material gelati-
Productos del metabolismo microbiano: cidos orgnicos, colonizacin de la raz: microscopa de luz, fluores- noso de la superficie de las races creciendo en suelos
-0.1 aminocidos, etc., metabolitos de origen vegetal y micro- cente, electrnica normales, no estriles. Incluye muclagos vegetales,
0 10 20 30 das
biano y molculas derivadas del humus pueden formar clulas bacterianas y sus productos metablicos (cp-
una variedad de complejos con iones metlicos entre ellos, determinaciones de biomasa microbiana, por re- sulas, capas mucosas, gliocalix) as como coloides mi-
++ ++
Figura 7 - Potencial redox e iones Fe y Mn en suelo con el hierro. Estas molculas tienen mucha importancia cuentos o muerte de propgulos y su mineraliza- nerales y materia orgnica del suelo. El mucigel es una
anegado en el plano pedolgico pues explican la migracin en el cin (CO2) zona muy importante que mantiene a las races y al sue-
perfil de ste y otros elementos. Las molculas como ci- empleo de elementos radioactivos: C, N, S, etc. lo en contacto y es un reservorio de nutrientes y agua de
La microflora responsable de la reduccin de iones frri- trato frrico, lactato o succinato frrico pueden migrar importancia para el vegetal en pocas de sequa. Se
cos en anaerobiosis es muy numerosa en el suelo y su modelizacin: diseos experimentales que predicen
en un suelo a pH 5,0 mientras que en estado libre, este encuentra presente siempre en las clulas de pice de
densidad puede alcanzar valores de 104 - 106 clulas/g. ion es insoluble. los efectos de cambios en exudados, agua, etc. la raz, pero su extensin a lo largo del sistema radical
Entre las bacterias se citan especies de Bacillus, Clostri- sobre la poblacin microbiana es variable.
dium, Klebsiella, Pseudomonas y Serratia. Muchas son Las sustancias complexantes de origen microbiano: cidos
anaerobias facultativas y pueden emplear adems del ctrico, oxlico, fumrico, 2-cetoglucnico, lctico, pueden 5. Lisados son los compuestos liberados por autli-
oxgeno, nitratos y manganatos como aceptores de elec- solubilizar diversos elementos, como el potasio, calcio, fs- sis de las clulas epidrmicas. Las paredes de estas
trones. foro, hierro y numerosos oligoelementos, sobre todo acu- Origen y naturaleza de clulas son digeridas por los microorganismos que li-
mulados en suelos en anaerobiosis o microaerofilia. los materiales orgnicos beran a la rizosfera los productos de su actividad mi-
Consecuencia de este fenmeno es la corrosin anae- crobiana.
robia de materiales de hierro o acero enterrados en pe- Los siderforos son molculas de gran afinidad por el Se reconocen varias categoras de compuestos orgni-
rodos de deficiencia en O2. Gasoductos, oleoductos y Fe+++ producidos por microorganismos y plantas y contri- cos en la vecindad de las races (figura 3 y cuadro 5). Es
caeras pueden inutilizarse en pocos aos. Cuando se buyen a la toma de este elemento en ambientes de baja necesario establecer si la sustancia en cuestin es pro- Raz Suelo Tipo de material
renen condiciones de anaerobiosis, temperaturas me- disponibilidad. Protenas de membrana permiten la entra- ducida por el microorganismo en cultivo puro y se en-
dias, pH superiores a 5,5 y presencia de sulfatos, las con- cuentra a concentracin fisiolgicamente activa en la ri- clulas epidrmicas y lisiados (5)
da del complejo organo-metlico. En la clula ste se des- corticales lisadas e
secuencias son ms graves. Bacterias anaerobias del dobla liberando el ion frrico que es oportunamente redu- zosfera. invadidas por bacterias micilagos de clulas
gnero Desulfovibrio contribuyen a la corrosin producien- cido por enzimas microbianas y asimilado como ion ferro-
epidrmicas degradadas por
bacterias
do H2 y electrones libres: so. Estas sustancias juegan importante rol en la lucha 1. Exudados: compuestos de bajo peso molecular en
biolgica, en la competencia por el hierro con microorga- general solubles en agua que liberan las clulas hacia
2mm exudados(1)
4 Fe + SO4= + 4H2O FeS + 3Fe (OH)2 + 2OH- nismos fotopatgenos (captulo 17). espacios intercelulares y luego al suelo. Su liberacin no
est mediatizada por un metabolismo. Son azcares, m.o. miclagos
micigel (4)
vegetales y
Otra consecuencia del proceso es la aparicin en sue- Cuando el complejo organo-metlico se mineraliza por aminocidos, cidos orgnicos, hormonas, vitaminas. La microbianos exudados y secreciones (1-2)
los hidromrficos de horizontes de reduccin, o gley, de accin de hetertrofos, el hierro es liberado y precipita exudacin radical se puso de manifiesto luego de aplica- muclago secretado por
coloracin gris verdosa o azulada, debida fundamen- como sales insolubles frricas. La reaccin puede ocurrir ciones foliares de sustancias con elementos radioactivos clulas epidrmicas
decamacin de clulas
talmente al hierro ferroso. Puede precipitar sulfuro ferro- tanto en anaerobiosis como en ausencia de aire y es rea- (P32, 14CO2, N15, etc.) muclago (hidrolizado de
pice de la raz
so, de color negro. La presencia de donadores de elec- polisacrido de clulas
lizada por un gran grupo de bacterias, actinomicetes y epidrmicas
trones orgnicos es necesaria en la reduccin. Este fe- hongos. 2. Secreciones, compuestos de bajo o alto peso molecu-
nmeno puede reproducirse en una columna de suelo lar liberados como resultado de procesos metablicos
enriquecida con un azcar en anaerobiosis parcial o com- En resumen: otros elementos adems del C, N, S, P, su- mediados por el aparato de Golgi (hidratos de carbono
pleta (columna de Winogradsky) (captulo 3). polimerizados, enzimas) Figura 3 - Materiales orgnicos en la rizosfera
fren transformaciones en el ambiente. Formas reducidas
Cuadro 5- Rizodeposicin Las sustancias orgnicas liberadas por los vegetales se solucin del suelo pueden alterar el estado de oxidacin dor de electrones localizado en la membrana e incluye
resumen en el cuadro 6. de este elemento. El potencial de oxidorreduccin tam- citocromos del tipo c y a. No se sabe si la actividad est
Exudados (solubles en agua): azcares, aminocidos, bin determina la forma dominante: debajo de 0,2 voltios confinada en la membrana interna o si reside en ambas:
cidos orgnicos, hormonas, vitaminas Cuadro 6- Compuestos encontrados en la es el ion ferroso el que predomina. Es difcil entonces, en externa e interna. Ciertos thiobacilos (formalmente llama-
Secreciones HdeC, enzimas rizosfera de vegetales en condiciones axnicas este elemento, determinar cundo los procesos son bio- dos Ferrobacillus) son incapaces de oxidar tiosulfato, y
Lisados autolisis de clulas de paredes vegetales, lgicos o simplemente fsico-qumicos. otros son incapaces de oxidar S=. Otras cepas que apa-
de races, fauna, microorganismos Aminocidos: todos los naturales rentemente estn adaptadas a crecer con glucosa, pier-
Gases C2H2, CO2, H2 cidos orgnicos: actico, butrico, ctrico, fumri- Las llamadas bacterias del hierro oxidan sales ferrosas den la habilidad para crecer autotrficamente con hierro.
27% del total de la fotosntesis co, gliclico, lctico, oxlico, propinico, succnico, con generacin de ATP en CTE aerobia. Precipita hidrxi- Esta variabilidad entre bacterias relacionadas estara li-
Medidas en hidroponia: 700m3/ha/ao en trigo tartrico, valrico do frrico alrededor de las clulas, frecuentemente en gada a la presencia de un plsmido.
300m3/ha/ao en cebada Hidratos de carbono: arabinosa, desoxiribosa, fruc- cpsulas o vainas dando colonias floculentas que tpica-
1.250m3/ha/ao en maz tosa, galactosa, glucosa, maltosa, manosa, oligo- mente crecen adheridas a las paredes de tubos con me- Microorganismos hetertrofos estn tambin vinculados
sacridos, rafinosa, ramnosa, ribosa, sacarosa, xi- dio lquido. Se desarrollan de preferencia en aguas po- a la oxidacin y precipitacin del hierro, pero resulta difcil
losa. bres en materia orgnica soluble, provistas de O2 y con determinar si el proceso es biolgico o fsico-qumico. Poco
En estudios en hidroponia de cultivos estriles se ha cal- Derivados de cidos nuclicos: adenina, guanina, sales ferrosas o manganosas. o nada de la energa liberada es utilizada por los organis-
culado la cantidad de materiales liberados por las races, citosina, timina mos. Muchas veces el hidrxido frrico se deposita en la
los que extrapolados a campo dan valores muy altos. Es- Factores de crecimiento: biotina, tiamina, inositol, Los gneros ms conocidos son: Sphaerotilus en cuyas superficie creando una masa compacta mezclada con
tas cifras pueden representar un peso de entre 7,3 y 12,5 piridoxina, cido p-amino benzoico, cido nicotni- vainas se deposita xido frrico. Pueden crecer rpidamente materia orgnica en desages instalados en suelos mal
toneladas mtricas de materia orgnica, excediendo a los co como quimiohetertrofos y as se aslan en cultivo puro. No drenados. El mismo proceso ocurre en el interior de ga-
mejores rendimientos en grano. Para algunos autores Enzimas: amilasa, invertasa, fosfatasa, se conoce el rol de la deposicin de hidrxido frrico: si es soductos produciendo serias oclusiones.
pueden representar un 27% de la masa total de la planta proteasa,proteasa un proceso de significado fisiolgico y si pueden desarro-
(cuadro 5). En el suelo, su biodegradacin y la adsorcin Antiboticos llarse quimiautotrficamente. La quimioautotrofia es ms
a los coloides, disminuyen la produccin neta. Bacterias: Agrobacterium tumefaciens enfermedad evidente en otra bacteria no relacionada a la anterior: Ga- Reduccin
(agalla de corona) llionella que no crece en medios orgnicos y s en medio
La figura 4 resume los conceptos sobre las transferencias Agrobacterium rhizogenes, Agrocina (antibotico) mineral con depsito de SFe como fuente de Fe++. Resulta En suelos mal drenados o sometidos a perodos de anae-
del carbono y su utilizacin en la rizosfera. El CO2 asimila- Pseudomonas fluorescens: Fenazina, controla enfer- difcil obtenerla en cultivo puro. La mayora de las colonias robiosis el hierro al estado ferroso se hace predominante.
do es llevado de la parte area a las races para la snte- medad en trigo (phz- (Tn5): mutante no activa) algodonosas obtenidas estn formadas en su mayor parte El proceso de reduccin del ion frrico a ferroso es casi
sis de nuevas estructuras y puede tambin ser liberado Hongos Trichoderma spp muchos metabolitos acti- por hidrxido frrico y las bacterias estn localizadas en exclusivamente biolgico, ya que no se detectan mayores
como exudados: solubles, que difunden, o bien no difusi- vos, Gliocadium spp producen varios antibiticos ramificaciones terminales de los depsitos de Fe (OH)3. cambios en suelos estriles o con agregados de inhibido-
bles, que permanecen en el mucigel. La degradacin de (patulina, pioluteorina) res metablicos. La figura 7 muestra lo que ocurre en
estos compuestos ms resistentes explicara un segundo Otros compuestos: auxinas, glicsidos, cido cian- Otros microorganismos comprometidos en la oxidacin: ambientes sometidos a anegamiento: el potencial de xi-
pico en la liberacin del CO2. Un posible tercer pico en el hdrico, pptidos, saponinas, CO2, alcoholes, sus- Leptothix, quimioauttrofo facultativo, puede obtener ener- do-reduccin (Eh) desciende provocando la reduccin r-
flujo de CO2 sera resultante de la degradacin de restos tancias quelantes, etc. ga tambin de la oxidacin de compuestos orgnicos; pida del hierro y del manganeso. La materia orgnica es-
de clulas y tejidos y de la penetracin de microorganis- Thiobacillus y Ferrobacillus. Obtienen energa de la oxi- timula el proceso, comparable desde el punto de vista
mos en clulas corticales. dacin: metablico con la desnitrificacin y la sulfatorreduccin,
Los efectos de las mismas sobre los vegetales se pueden es decir respiraciones anaerobias con sustratos orgni-
CO2 resumir: 4 Fe+++ + O2 + 4 H+ 4 Fe+++ + 2 H2O cos. En medios cidos no se requieren potenciales redox

tan bajos para solubilizar el hierro.
CO2 microorganismo
races exudados libres compuestos simples
Reguladores de crecimiento vegetal: etileno, cido El organismo est frecuentemente recubierto por vaina

giberlico (AG), cido fusrico, cido indol actico (AIA), de Fe (OH)3 que se origina por va biolgica: Otro mecanismo biolgico indirecto est relacionado a la
mucigel tiempo microorganismos CO2

cido abcsico, citoquininas, que se suman a las produ- liberacin de sustancias orgnicas de carcter reductor

descamacin tiempo microorganismos CO2 cidas por las plantas Fe2 (SO4)3 + 6 H2O 2Fe (OH)3 + 3 H2SO4 por parte de los microorganismos del suelo: cidos org-
tejidos
nicos, aldehidos, que provocaran ligera reduccin del hie-

compuestos simples
Fitotoxinas: como cido para-amino-benzoico, cido Muchas cepas pueden emplear en lugar de sales ferro- rro. El consumo de O2 por microorganismos aerobios, pro-
cumrico, actico, butrico, HCN, H2S, cido benzico, sas, compuestos de azufre reducidos: S, S= o S2O3=. La voca descenso del potencial redox del suelo y reduccin
Figura 4 - Flujos de carbono en la rizosfera etc. Los cidos alifticos se acumulan en ambientes oxidacin del hierro es realizada por sistema transporta- del hierro.
Como ms de dos tercios del P total de los suelos es or- frecuentemente en forma no disponible para los vegeta- anaerobios (fermentacin de pajas) y difunden a la ri- Los requerimientos nutricionales de las bacterias del
gnico, con picos mximos en turbas, suelos forestales les como (Fe+++) y los ejemplos de carencias son frecuen- zosfera. Sus efectos dependen de la longitud de la raz rizoplano y de la rizosfera difieren de las que habitan sue-
no cultivados y suelos tropicales, un ciclo muy activo ocu- tes. La figura 6 presenta las transformaciones de origen expuesta al txico. Por otro lado la acidez protegera a los sin vegetacin.
rre que posibilita el reciclaje de formas orgnicas e inor- biolgico que ocurren entre los compuestos con hierro. la planta de microorganismos perjudiciales. Los cidos
gnicas (mineralizacin-inmovilizacin). La mineraliza- aromticos son ms txicos Menos estudios se han realizado sobre los actinomi-
cin est asegurada por una micropoblacin poco espe- animales vegetales cetes, a pesar de que son muy abundantes y activos
cfica que emplea al P en sus necesidades plsticas y Antibiticos: numerosas molculas con carcter bios- en la superficie de las races. La mayora de los traba-
libera el exceso como ortofosfato. ttico y biocida son liberados por bacterias, actinomice- jos estn vinculados a la deteccin de antagonistas que
reduccin
Fe+++ Fe++ tes, hongos (patulina, gliovirina,etc). Algunos microor- producen antibiticos contra patgenos vegetales. En
La inmovilizacin, proceso simultneo y opuesto, no es oxidacin ganismos como Pseudomonas fluorescens, Trichoder- la rizosfera predominan especies de Streptomyces y
un peligro de competencia con los vegetales salvo en el ma viride se emplean a nivel experimental como pro- Nocardia.
m i m
caso de la incorporacin de grandes cantidades de motores del crecimiento vegetal y en el control biolgi-
rastrojos con muy bajo nivel de P%. El nivel crtico se con- co de microorganismos fitopatgenos. (captulo 17) Hongos
materia orgnica
sidera 0,2% en P total y las relaciones C/P crticas son microflora Las tcnicas de recuento muestran en general un efecto
altas (200-300/1). Un proceso muy importante lo consti- Aglutininas y agentes de agregacin del suelo: las rizosfrico positivo sobre este grupo (cuadro 7), aunque
tuye la solubilizacin de formas insolubles del P como Figura 6 - Transformaciones biolgicas del hierro lectinas son glicoprotenas que actan como recepto- menos marcado que para las bacterias. Muchos autores
fosfato triclcico, hidroxiapatita, etc., que es realizado por res reconociendo sitios de adhesin en la superficie de sostienen que si el efecto se expresa en funcin de la
una poblacin inespecfica por la liberacin de cidos or- la pared de races y de bacterias (rhizobios, azospiri- biomasa de ambos grupos y no en funcin del nmero de
gnicos o minerales. Los procesos biolgicos de compuestos con hierro pue- los). Los microorganismos liberan sustancias como go- individuos, los resultados se invertiran. En los ltimos aos
den resumirse: mas, exopolisacridos, capas mucosas, polmeros que se ha brindado gran atencin a los hongos que colonizan
Los procesos de oxidorreduccin no tienen gran impor- contribuyen a formar agregados entre partculas mine- la superficie de las races.
tancia en la naturaleza. mineralizacin inmovilizacin rales y el humus.
La colonizacin inicial sera realizada por una varie-
oxidacin reduccin
Las reacciones de fijacin son importantes en relacin a Enzimas: ms de 50 enzimas han sido detectadas en dad de especies fngicas, habitantes del suelo, que a
(el Fe+++ precipita como hidrxido)
la eficiencia de uso de los fertilizantes con P por las plan- la rizosfera: hidrolasas, pectinasas, ADNasas, oxidorre- los pocos das sera desplazada por una micoflora ms
tas. En suelos cidos, el fosfato es precipitado como fos- solubilizacin precipitacin ductasas, que regulan los procesos biolgicos en este especfica, formas tpicas de la superficie de las ra-
fatos insolubles de Fe o Al, o son adsorbidos en la super- habitat ces, que persisten hasta la senescencia. Para la de-
ficie de xidos. En suelos calcreos, dominan los fosfatos Resultante de la actividad biolgica el hierro puede ser: teccin de estos hongos es necesario lavar las races
de Ca insolubles. precipitado en la naturaleza por accin de bacterias oxi- vigorosamente, para eliminar las formas esporgenas,
dantes del Fe++, por la accin de hetertrofos que degra- Efecto rizosfrico sobre grupos microbianos dominantes.
Los hongos micorrcicos pueden jugar importante rol in- dan la fraccin orgnica de complejos organo metlicos,
crementando la disponibilidad de fosfatos a los vegetales por la liberacin de O2 por algas y por la creacin de me- Bacterias
(captulo 16). dios alcalinos o solubilizado por la formacin de cidos, Numerosas revisiones ilustran sobre efectos rizosfricos Cuadro 7- Efecto rizosfrico de trigo sobre grupos
-1
la presencia de condiciones de reduccin o por la forma- positivos. En general se admite, que son las bacterias no microbianos (ufc g suelo)
cin de ciertos complejos. esporuladas, Gram negativas, las ms favorecidas. La
Ciclo biolgico del hierro y otros elementos predominancia de especies de Pseudomonas en la rizos- Organismo Rizosfrico No rizosfrico R/S
La mineralizacin e inmovilizacin son procesos reali- fera se explica por su alta tasa de crecimiento, latencia
Las transformaciones microbiolgicas de gran nmero de reducida, por la aptitud a producir sustancias inhibidoras bacterias 120 x 107 5,3 x 107 24/1
zados por variada microflora hetertrofa activa en amplios
minerales tienen gran importancia en la recuperacin de en el curso del metabolismo de hidratos de carbono y por hongos 12 x 105 1 x 105 12/1
rangos de condiciones ambientales. No se sealan casos
subproductos de la minera, actuando como verdaderos la sntesis de pigmentos flurorescentes, frecuentemente actinomicetes 49 x 106 7 x 106 7/1
de problemas en la inmovilizacin de iones ferrosos en
concentradores de metales que se encuentran en peque- inhibidores de otras especies. protozoos 24 x 102 10 x 102 2,4/1
parte por el hecho de que los restos vegetales requieren
as dosis. Procesos microbianos transforman nutrientes amonificantes 500 x 106 4 x 106 125/1
este elemento en pequeas cantidades.
minerales en formas disponibles para otras formas de vida. Las formas filamentosas ramificadas son muy abundan- desnitrificantes 1,3 x 108 1 x 108 1.260/1
El hierro sufre una serie de procesos de naturaleza fsi- Oxidacin tes en la superficie de las races, como Corynebacterium,
ca, qumica o biolgica y a pesar de ser uno de los princi- Mycobacterium. ufc= unidades formadoras de colonias
Qumicamente, el in ferroso predomina en solucin de-
pales constituyentes de la corteza terrestre, se presenta bajo de pH 5 y el frrico sobre 6. Los cambios de pH de la
Algas cal y a cero a muy corta distancia dentro de la raz (no se usan como fertilizantes, como el polvo de huesos, roca Fsforo suelo +S
Este grupo ha sido poco estudiado, ya que por su carc- es endofito). molida. Sin embargo, estas formas insolubles del fsforo en los suelo con SO4(NH4)2
tejidos
ter auttrofo no es afectado directamente por los exuda- pueden ser aprovechables por los vegetales luego de la suelo solo
dos radicales. Sin embargo, numerosos trabajos sealan tipo C: organismo fsicamente excludo del rizoplano accin solubilizadora de una microflora variada.
estimulacin de algunas rizosferas sobre las algas; fen- por el tipo B), pero que emplea materiales orgnicos
meno que se ha tratado de explicar por la liberacin de originados en la raz o producidos por el organismo B), Gran nmero de especies bacterianas, de hongos y acti-
0 4 8 12 tiempo (das)
factores de crecimiento, el contenido de antibiticos en la o ambos. nomicetes son capaces de solubilizar fosfato triclcico y
rizosfera o por cambios en las propiedades fsicas del otras formas insolubles y su nmero puede alcanzar 105 - Figura 5 - Asimilacin de P por vegetales a partir de fosfato
medio. tipo D: organismo fsica o qumicamente excludo por 107/g. En la rizosfera la actividad puede ser muy intensa triclcico
los tipos B) y C), pero que emplea productos del C) o como consecuencia de la activa proliferacin microbiana
Las interacciones entre microorganismos tanto sinr- materiales complejos de la raz pero no usados por B) o que puede disolver los fosfatos a lo largo de la raz los La produccin de cido ntrico por los microorganismos
gicas como antagnicas son muy afectadas a nivel de este C) por su incapacidad de metabolizarlos o por repre- que son inmediatamente absorbidos. nitrificantes es otra manera de incrementar la solubiliza-
ambiente particular, ya que las poblaciones en altas den- sin catablica en esos organismos por molculas or- cin de fosfatos, como se observa en la experiencia de la
sidades se afectan intensamente compitiendo por los nu- gnicas ms simples, de las plantas. Los cidos pueden ser: figura 5. En condiciones anaerobias, el cido sulhdrico
trientes, el espacio. facilita la solubilizacin ya que se forma sulfuro ferroso
tipo E: utiliza productos secundarios de organismos ri- orgnicos y CO2 (cido carbnico) producidos por la insoluble y se libera cido fosfrico. Este proceso explica
La figura 5 (Lynch, 1990) muestra la posible distribucin zosfricos, pero en desventaja competitiva con respec- microflora y por las races la gran disponibilidad de fosfatos en suelos inundados de
de diferentes tipos de microorganismos rizosfricos. to a los tipos B, C y D y por lo tanto es incapaz de com- arroz.
petir por molculas originadas en las races inorgnicos, como ntrico, sulfrico, tambin produci-
Rizoplano Lmite dos por procesos microbianos El efecto rizosfrico favorable a la solubilizacin ha sido
Tejido radical Rizosfera tipo F: microorganismos tpicos del suelo, excluidos f- puesto en evidencia en numerosos trabajos. La inocula-
sicamente de los ambientes sobre o cerca de las ra- Se aislaron microorganismos solubilizadores de fosfatos cin de vegetales con microorganismos solubilizantes del
B ces, pero resistentes a productos o actividades de los en semillas y races de diferentes plantas. Un halo que fsforo ha sido aplicado en algunos pases que inoculan
C plantines con hongos micorrcicos y bacterias solubi-
D organismos rizosfricos (antibiticos, quelantes del hie- rodea a la fuente insoluble de Pi en la superficie de cajas
A rro, etc.) de Petri permite reconocer a los organismos solubilizan- lizadoras del fsforo. En Rusia y otros pases se em-
tes. La deteccin de la accin de hongos puede ser difi- ple mucho la inoculacin de cultivos con Bacillus mega-
N de microorganismos
Suelo sin reces
tipo G: microorganismos generales del suelo exclui- cultosa; el agregado de estreptomicina (50 mg/L) permite therium var phosphaticum (fosfobacteria) organismo con
dos de la rizosfera por actividades o productos de los evidenciarlos sin la interferencia de las bacterias. gran capacidad de mineralizar formas orgnicas de P,
E
otros tipos. sobre todo en Mollisoles, con incrementos en los rendi-
Mecanismos: la quelacin del calcio, hierro y aluminio mientos de 50-70%.
F
Este esquema trata de representar el comportamiento de por cidos orgnicos, la formacin de complejos fosfoh-
G Pero luego no se continu con esta prctica, en parte por
los microorganismos en los alrededores y dentro de las micos y la competencia entre iones humatos y fosfatos
Interior de la raz Distancia desde la raz races, pero es evidente que alguna especie puede mos- por superficies adsorbentes, explican la solubilizacin. el hecho de que los suelos contienen buen nivel de orga-
trar combinaciones de dos o ms tipos de modelos de nismos que liberan formas solubles de P a partir de for-
distribucin. La figura 5 muestra los resultados de una experiencia en mas orgnicas o inorgnicas y se hace innecesario la ino-
Figura 5 - Distribucin de diferentes tipos de
la que se incorpor a un suelo azufre elemental y sulfato culacin con microorganismos seleccionados.
microorganismos en las races
de amonio y se compar el nivel de fsforo soluble por la
Factores que afectan el efecto rizosfrico absorcin de este elemento en un cultivo. En resumen: este ciclo es complejo e incluye el almacena-
miento del P en organismos vivos, materia orgnica muerta
Se aprecia que el:
Los efectos sobre la poblacin del suelo varan con la es- Thiobacillus produce cido sulfrico a partir de azufre ele- y formas inorgnicas. Las plantas lo absorben como orto-
tipo A: crece en espacios intercelulares dentro de la
pecie o la variedad del vegetal. Si las lneas de una espe- mental y se emplea en la formulacin de un fertilizante fosfato, presente en la solucin del suelo. Por lo que la re-
raz y su concentracin cae abruptamente a niveles del
cie varan en un solo gen, sus caractersticas rizosfricas fosforado, el biosuper, en grnulos con 5 partes en novacin de esta fuente por procesos de mineralizacin y
suelo sin cultivo, inmediatamente fuera de la raz
pueden cambiar. La edad de la planta, su estado sanitario peso de fosfato de roca molida, una parte de S y un in- solubilizacin, es muy importante para la nutricin vegetal.
tipo B: crece en el rizoplano y su densidad cae a nive- y vigor, el tipo y posicin de la raz, y por supuesto, el tipo culo de thiobacilo (0,1%), de gran xito en climas muy Un concepto til lo constituye la particin del P en el suelo
les basales a muy corta distancia de la superficie radi- de suelo y el ambiente afectan al efecto rizosfrico. hmedos y resulta una alternativa en pases que no pue- en reservas o pools, relacionadas con la disponibilidad de
den preparar superfosfato en cantidades importantes. formas orgnica e inorgnicas para las plantas.
liberando inositol y ortofosfato. Los fosfatos se liberan Las bacterias y actinomicetes acumulan mayor proporcin Especie vegetal: algunas especies pueden estimular o tuye el nico ambiente en donde los microorganismos
de a uno, dando penta, tetra, tri, di y monofosfato, para de P (1,5-2,5%) en peso seco que los hongos (0,5-1%) o suprimir a determinado grupo microbiano, aunque los ca- pueden desarrollarse y las relaciones R/S son all muy
liberar finalmente inositol libre. Esta actividad enzimti- los vegetales (0,05-0,5%). En suelos cultivados se estima sos de inhibicin son menos frecuentes. Las leguminosas importantes.
ca est ampliamente distribuda entre los microorganis- que las bacterias solas inmovilizan entre 4 y 10 kg P/ha. presentan, en general, mayor efecto rizosfrico que los
mos del suelo: hongos, bacterias, actinomicetes. Si se considera que tambin lo toman hongos y actinomi- cereales, pero pocos estudios han relacionado este efec-
cetes, se aprecia que los valores inmovilizados son simi- to con la naturaleza de los exudados radicales. Las dife- Cuadro8 - Efecto rizosfrico sobre bacterias y
6
La adicin de materia orgnica aumenta la actividad por lares a los que son removidos por los cultivos. rencias pueden ser muy marcadas segn la zona de la actinomicetes (x10 )
incremento de la poblacin especfica. El pH cido y la raz que se estudie. Los organismos que requieren ami-
adsorcin a arcillas limitan la degradacin. Fitasas vegeta- Las relaciones crticas C/P en los restos son altas, 100 a nocidos son ms numerosos en la zona apical, por tra- Cultivo Estado fenolgico S R R/S
les contribuyen a la degradacin de la fitina y cido ftico. 300/1, aproximadamente 0,2% en P. tarse de una regin que los libera. vegetativo (4 hojas) 5,2 5,3 1,0
Nucleasas: estn ampliamente distribuidas y la libera- La deficiencia puede aparecer en caso de incorporacin Estado fenolgico: el efecto rizosfrico comienza a ma- Trbol vegetativo (6-8 hojas) 6,1 8,1 1,3
cin de ortofosfato es rpida en el suelo a partir tanto de grandes cantidades de restos carbonados, en donde nifestarse desde la germinacin de las semillas, por apor- floracin 5,6 318,0 56,8
de ARN como de ADN. Para muchos microorganismos una fertilizacin puede evitar la falta de este nutriente en te de los microorganismos de la espermatsfera, los com- germinacin 5,2 6,8 1,3
hetertrofos los cidos nuclecos pueden ser emplea- los cultivos posteriores, pero en general los problemas ponentes de las envolturas del grano y por sus exudados. Trigo vegetativo 6,1 50,3 8,2
dos como nica fuente de nutrientes y de energa y la graves de inmovilizacin se presentan en contadas situa- Para algunos autores la colonizacin se realizar princi- grano en formacin 5,6 52,0 9,3
liberacin de Pi ocurre luego de la accin de enzimas ciones con la incorporacin masiva de rastrojos de muy palmente a partir de los microorganismos del suelo, ms
despolimerizantes. pobre contenido en fsforo. que por los de la semilla. vegetativo (6 hojas) 5,2 14,5 2,8
Colza floracin 6,1 310,5 50,9
Fosfolipasas: los fosfolpidos ms comunes en el sue- Los mximos de estimulacin se encontraron en la flora- fructificacin 5,6 491,0 87,7
lo como la lecitina (fosfatidil colina) y la fosfatidileta- Procesos de xido-reduccin cin y/o fructificacin, para luego declinar abruptamen-
nolamina, liberan Pi luego de hidrlisis enzimtica, la te cuando comienza la senescencia de las races. La com-
poblacin emplea el esqueleto orgnico de la molcula Poca atencin se ha prestado a los procesos de xido- posicin de la microflora vara, proliferando los microor- La incorporacin de restos vegetales o animales, la fertili-
y el P necesario, el que excede la demanda microbiol- reduccin llevados a cabo por la microflora del suelo en ganismos que participan en la descomposicin de los teji- zacin, causan menos efectos en la rizsfera, la que ma-
gica, es liberado. compuestos fosforados. Este elemento, como en nitrge- dos muertos. La poblacin no se distingue ya de la natu- nifiesta capacidad para mantener su equilibrio biolgico.
no, puede encontrarse en combinaciones desde fosfina ral del suelo y poco efecto residual se mantiene para el
Es frecuente evaluar la actividad fosfatasa incubando el ao prximo: el nuevo cultivo determinar la composicin
(P-3) a ortofosfato (P+5). Algunos microorganismos heter-
suelo con sustrato apropiado como glicerofosfato, fenil- de su poblacin rizosfrica.
trofos pueden asimilar fosfita (HPO3-2) y oxidarlo a fosfato.
fosfato y se determina el ortofosfato liberado por distintos
En suelos hmedos, Clostridium butyricum puede reducir
La espermatsfera
procedimientos, como por colorimetra. La actividad es El efecto de edad de la planta puede enmascararse por
fosfato a fosfita e hipofosfita. Estas reacciones son biol-
pronunciada en la rizosfera y es afectada tambin por la interacciones con el ambiente. As, variaciones en la in- Las semillas en germinacin no realizan fotosntesis pero
gicas ya que no ocurren al agregar inhibidores al suelo.
profundidad, la estacin. tensidad luminosa afectan la exudacin y por lo tanto la ejercen efecto en el suelo vecino al movilizar sus reser-
como el tolueno.
proliferacin de hongos, por inhibicin del grupo ms sen- vas. Se considera que la espermatsfera es el origen de
La presencia de fosfatasas y fitasas ha sido verificada en sible, las bacterias. iniciacin del efecto rizosfrico de las races en desarro-
ectomicorrizas de rboles y en endomicorrizas arbus- En presencia de nitrato o sulfato la reduccin de fosfato
llo. A su nivel ocurren mltiples interacciones entre la plan-
culares, que absorben ms P-orgnico a partir de suelos es ms lenta ya que los primeros iones son empleados de El cuadro 8 muestra el efecto de tres cultivos, en distintos ta, las poblaciones microbianas y el ambiente. Los pro-
deficientes en este elemento (captulo 16). preferencia como aceptores de electrones. Como estas estados fenolgicos, sobre el conjunto de bacterias y ac- ductos liberados por |os granos son de naturaleza varia-
reacciones no son importantes en la naturaleza, no han tinomicetes. Se observa efecto estimulante en los ltimos ble, segn la edad, la especie y las caractersticas del
Las formas ms solubles son directamente asimiladas por recibido mayor atencin y son muy pocas las referencias estados del desarrollo vegetal. medio (fuentes de C, N, sustancias biolgicamente acti-
las plantas. Los inositol-polifosfatos son considerados re- bibliogrficas.
En el caso del trbol, el efecto rizosfrico fue marcado en vas, como vitaminas, aminocidos, otras inhibidoras). La
sistentes al ataque enzimtico en el suelo por su capaci-
la floracin, en el trigo menos significativo y similar en los liberacin de exudados por las semillas es responsable
dad para formar derivados insolubles con hierro y alumi-
Solubilizacin estados vegetativo y de formacin del grano, mientras que de la alta mortalidad de las mismas a causa de la sulfato-
nio. Amonio y aminas pueden, sin embargo, formar com-
en la colza fue muy pronunciado desde la floracin. rreduccin, cuando cultivos, como el de maz, germinan
plejos solubles con fitatos frricos.
Una proporcin importante de fosfatos solubles agrega- en suelos ricos en sulfatos, compactados y saturados en
Los cidos orgnicos producidos por bacterias y otros dos a suelos cidos puede insolubilizarse o fijarse a coloi- Suelo y ambiente: el efecto rizosfrico es ms pronun- agua. Otras actividades biolgicas son estimuladas, como
microorganismos pueden ser tambin causa de liberacin des (adsorcin). Muchos suelos contienen minerales, ciado en suelos livianos, arenosos. En suelos desrticos, la solubilizacin de fosfatos, amonificacin, celulolisis, y
de fosfatos a partir de P-orgnico. como la fluorapatita (Ca10 (PO4)6F2) o hidroxiapatita que la rizosfera de la escasa vegetacin colonizadora consti- ciertas actividades enzimticas.
La filsfera hemos analizado, por el aporte al suelo de residuos vege- de un ecosistema se encuentra en componentes vivos. las orgnicas. Escasos estudios se han realizado con com-
tales subterrneos (races) o areos (hojas, ramas) o de En todas las combinaciones orgnicas e inorgnicas el P puestos individuales fosforados y se cuenta con pocos
As como las races estn rodeadas de una verdadera productos diversos arrastrados por el agua a travs del se encuentra oxidado como ortofosfato (P+5), la mayora detalles sobre la descripcin de la microflora involucrada.
vaina de microorganismos rizosfricos, las hojas de las follaje. Estos ltimos aportes contienen elementos mine- de las veces como complejos con Ca, Fe y Al y minerales Numerosas evidencias indican importante rol del P org-
plantas presentan en su superficie poblaciones muchas rales (K, Na, etc.) y orgnicos: hidratos de carbono, ami- silicato de modo que los vegetales, animales o microor- nico (P-org) en la nutricin vegetal, se ha observado que
veces importantes, de bacterias, levaduras, hongos fila- nocidos. ganismos no deben reducir a este elemento como lo ha- esta fraccin es la que disminuye en mayor proporcin,
mentosos, y, en regiones tropicales hmedas, algas, l- cen con compuestos oxidados de N o S. por procesos de mineralizacin.
quenes y hepticas. Este hbitat est sometido a hume- Resulta difcil separar el efecto rizosfrico del efecto de
dades fluctuantes, ligadas a las precipitaciones. La trans- los restos sobre el suelo, puede observarse que, en el En suelos con pH entre 5 y 8 la cantidad de fosfato no La parte del ciclo de mayor importancia para las plantas
piracin de las hojas puede mantener un microclima algo caso de bosques, los mantillos juegan un rol preponde- disociado H3PO4 y trivalente PO4-3 insoluble es mnima y est sumarizada en el siguiente equilibrio
ms hmedo que el del aire. rante. Esta capa constituye para la microflora del suelo la prevalecen las formas solubles (H2PO4- y HPO4-2):
principal fuente de: P-org del suelo Pi lbil P no lbil
El desarrollo de organismos es muy abundante en las hojas -H+ -H+ -H+ muy rpido muy lento
de las zonas tropicales hmedas, donde forman una pel- energa y de elementos nutritivos que en kg C/ha/ H3PO4 H2PO4- HPO4-2 PO4-3

cula mucilaginosa de varias micras de espesor. La inten- ao varan de 0,5 a 2 toneladas en bosques de zonas + H+ + H+ + H+ La mineralizacin del P-orgnico depende en primer lugar
sidad luminosa, la temperatura y la naturaleza de los exu- templadas y fras, para alcanzar 2 a 8 toneladas en bos- de la actividad de los microorganismos, pero tambin de
dados varan con el clima y la naturaleza de la planta. ques tropicales hmedos. Los mantillos en zona tropical los invertebrados, sobre todo lombrices, que ejercen im-
son ms ricos, adems, en elementos minerales y en ni- La mayora del P orgnico integra molculas hmicas portante funcin acelerando hasta 2-3 veces la liberacin
Las poblaciones bacterianas de la filosfera son ricas en trgeno que los de las regiones templadas. formadas a partir de fracciones orgnicas de la vegeta- de Pi en materiales vegetales por molienda y humectacin.
especies pigmentadas: Flavobacterium, Xanthomonas, cin, de los microorganismos y animales. En general se El flujo de P a travs de la biomasa microbiana ha sido
Pseudomonas. de sustancias estimulantes o inhibidoras: como vi- observa una buena correlacin en los suelos entre los calculado en 4,6 kg P ha-1 ao-1, del mismo orden del remo-
taminas y sustancias diversas an no bien determina- contenidos de C, N y P orgnicos (aproximadamente 100/ vido en grano y paja, en un suelo arable no abonado.
Levaduras, como la Rhodotorula, Sporobolomyces, po- das, que llegan al suelo. Inversamente, ciertos mantillos 10/1) y las relaciones C/P orgnicos varan entre 100-300/
seen pigmentos rosados y son muy numerosas las espe- liberan productos txicos frente a especies bacterianas 1 y el N/P vara entre 5-20/1. Se observa correlacin entre la conversin del N y P a
cies de hongos. Entre las funciones microbianas ms es- muy sensibles: bacterias nitrificantes auttrofas, fijado- formas inorgnicas (8-15 partes de N mineral/1 de fosfa-
timuladas en este hbitat se citan la amonificacin, la fija- res del N2, y otros organismos, como los celulolticos. La En ecosistemas naturales, el ciclo del P est prcticamente to) y tambin se correlacionan la liberacin de CO2 y la
cin del N2 y la lipolisis. La produccin de antibiticos es toxicidad frente a los nitrificantes se manifiesta en for- cerrado: la mayora del P de los vegetales es reciclado mineralizacin de P (100-300 / 1); valores vinculados a
frecuente en las poblaciones epifitas. maciones forestales de la zona tropical hmeda o regio- por degradacin microbiana del mantillo y restos orgni- las proporciones de estos elementos en el humus.
nes templadas (bosques de pino silvestre, cedro, con- cos. Es el caso de suelos forestales tropicales, casi todo
Los fenmenos que se desarrollan a nivel de la filosfera feras). Lo mismo puede ocurrir en ciertas praderas y el P se encuentra en la materia orgnica viva y muerta y Las fosfatasas catalizan reacciones cuyo esquema ge-
interesan mucho al fitopatlogo y al agrnomo, quienes bosques de conferas, de la zona templada. Las sustan- los suelos contienen muy baja cantidad de este elemento neral es:
tienen una puerta abierta a experiencias de inoculacin cias responsables seran esencialmente fenoles o com- que no permiten el desarrollo agrcola luego de la defo-
con fijadores de N2 o con microorganismos antagnicos puestos con radicales fenlicos: cido glico, floro- restacin. O O
de patgenos que protegen a la planta de las infeccio- glucinol.
nes. Los procesos microbianos involucrados en las transfor- ROPOH + H2O ROH + HOPOH
otros efectos: modificacin del pH del suelo: la ve- maciones del fsforo son:
getacin puede elevar el pH de los horizontes superficia- OH OH
Efecto de los restos vegetales les, por concentracin de sustancias bsicas. Pero ms mineralizacin-inmovilizacin
(efecto mantillo) frecuentemente, la vegetacin acidifica el suelo, caso de Los sustratos pueden ser: etilfosfato, glicerofosfato,
bosques de conferas. Si sta no es excesiva, la microflo- solubilizacin-precipitacin fenilfosfato. Las molculas con disteres (fosfolpidos,
Contrariamente a las formaciones vegetales anuales que ra fngica, que en conjunto es indiferente al pH, puede cidos nuclecos) requieren diferentes enzimas para su
ejercen sobre la microflora del suelo una influencia limita- indirectamente ser estimulada, por reduccin de la com- degradacin. Por comodidad, estas fosfatasas son desig-
da en el espacio y el tiempo, las formaciones vegetales petencia de otros organismos. Si se bajan una o dos uni- Mineralizacin-inmovilizacin nadas de acuerdo a los sustratos que atacan:
perennes (bosques, praderas permanentes) afectan mar- dades de pH, se puede observar efecto depresivo en la
cadamente a la microflora del suelo donde se desarrollan. actividad biolgica, ms marcado si se acompaa de sus- Un grupo amplio de microorganismos posee las enzimas Fitasas: hidrolizan la unin ster-fosfato de sales solu-
Esta accin se ejerce a nivel de los exudados, como ya tancias txicas hidrosolubles necesarias (fosfatasas) para liberar fosfatos de molcu- bles de cido ftico o de sus sales de Mg o Ca: la fitina,
el empleo de N15 confirma los resultados y con el uso de Cuadro 3- Las leguminosas En resumen: la rizsfera, la espermatsfera y la filsfera Montevideo, 517 pp.
variedades no nodulantes de la leguminosa en estudio son reas donde se liberan materiales orgnicos que pue- Kennedy, A. C. The rhizosphere and spermosphere. en:
se puede conocer la fraccin de nitrgeno del cultivo 700 gneros, 16 a 19.000 spp distribucin cosmopolita den alterar la diversidad microbiana e incrementar el n- Principles and Applications of Soil Microbiology,
que proviene del aire, del suelo y de otras fuentes (Ba- Origen: trpico (120 millones de aos) mero de microorganismos, la actividad microbiana y las 1998, Sylvia, Fuhrmann, Hartel y Zuberer (eds), Prenti-
rea, 1991). En el campo, se incorpora un fertilizante rboles, arbustos o hierbas 3 subfamilias interacciones entre los microorganismos con las semillas, ce Hall, Londres
marcado (ejemplo sulfato de amonio enriquecido con Mimosoideae: leosas, zonas ridas, fras (menor tamao) las races y el suelo adyacente. La comunidad microbiana Lynch, J. M., The rizosphere, 1990, Wiley & Sons, En-
N15 y en lugar de isolneas no fijadoras se puede em- Madera (Prosopis), taninos (Acacia), ornamentales: Ca- en la rizsfera puede afectar el crecimiento vegetal en for- gland.
plear controles no fijadores (soja no inoculada en sue- lliandra, espinillo, mimosas, timb, forraje: Leucaena ma benfica, neutra o perjudicial, afectando la salud, vi- Martens, R, Apparatus to study the quantitative relations-
los sin rhizobio especfico, o sorgo). El N fijado se cal- Caesalpiniodeae: leosas Usos: taninos/tinturas (Caesal- gor y productividad vegetal. Los desafos implican com- hips between root exudates and microbial populations in
cula por la ecuacin: pinia); ornamentales (Cassia, Peltophorum dubium (ibira- prender el funcionamiento de la interfase suelo-raz, sue- the rhizoshpere. 1982, Soil Biol. Biochem., 14: 315-317
pit), Bauhinia lo-semillas, superficie de hojas, a los efectos de lograr Rovira, A. D.; R. C. Foster y J. K. Martin, Origin, nature
N fijado = 1 - % tomos N15 en exceso en plantas fijadoras Papilionoideae (Faboidea) 12.000spp economa humana, dominar el funcionamiento de los microorganismos, incre- and nomenclature of organic materials in the rizhosphe-
% tomos N15 en exceso en plantas no fijadoras de grano, forrajes, madera, medicina, industria, textiles mentar el desarrollo vegetal y reducir los impactos de los re, en: The soil-root interface, 1979, Harley, J. L. y R.
sistemas de manejo del suelo en el ambiente. Scott Russell (eds.), Academic Press, Londres: 1-4
la reduccin del acetileno a etileno por la nitrogenasa, Shippers, B.; A. W. Bakker y P. A. H. Bakker, Interactions
a pesar de las limitaciones sealadas en el captulo 11, El cuadro 4 muestra la caracterstica de nodulacin en las Se requieren avances en: la identificacin de los factores of deleterious and beneficial rhizosphere micoorganis-
se emplea para comparar sistemas simbiticos subfamilias. Se observa que el 48% de los gneros han que controlan la colonizacin radical, una mayor compren- ms and the effect of cropping practices. 1987, Ann. Rev.
sido examinados por la nodulacin, y el 86% se encontra- sin de la ecologa microbiana en estos ambientes, para Phytopathol, 25: 339-358
ron nodulados. lo cual las tcnicas de la llamada Ecologa Gentica, re-
Las leguminosas sultan muy tiles, en la identificacin y seguimiento de
En las Mimosoideae y Papilionoideae, el 90 y 97%, res- microorganismos en particular. Preguntas de repaso
Las plantas de la familia de las Leguminosas o Legumino- pectivamente, poseen especies noduladas, mientras que
seae (cuadro 3) son muy numerosas (entre 16.000 y 19.000 en Caesalpinioideae slo el 23% de los gneros exami- Las prcticas de inoculacin con numerosos microorga- 1) Seale dos ejemplos de efectos: i) benficos y ii) perju-
especies). Tambin se la designa como Fabaceae o Faba- nados evidenciaron habilidad para nodular. nismos que han logrado instalarse y actuar en la rizsfe- diciales, de los microorganismos sobre las plantas y
les. De origen tropical arborescente cuyos ms recientes ra, espermatsfera y en la superficie de las hojas, como cmo los pondra en evidencia
derivados son pequeas matas o hierbas de las regiones Los siguientes son los gneros que poseen el mayor n- los fijadores de nitrgeno libres y simbiticos, bacterias y 2) Idem, pero efectos de los vegetales sobre los microor-
templadas. Representan la tercera familia de plantas de flor, mero de especies noduladas: en Mimosoideae, Acacia hongos controladores de plagas vegetales, solubilizado- ganismos
superadas por las Compositae y las Orchidacea. Desde su (217); en Papilionoideae, Indigofera (194), Crotalaria res de fsforo, hongos micorrcicos, etc. demuestran que 3) Por qu es la rizosfera una regin del suelo con activi-
origen en el Cretceo superior, en condiciones tropicales h- (145),Trifolium (141), Astragalus (102), Tephrosia (95), es posible dirigir esta colonizacin con xito. dad microbiana incrementada?
medas, fueron extendindose a otras condiciones climticas. Desmodium (76), Vicia (65) y Aspalathus (60); en Caesal- 4) Por qu resulta la espermatsfera otra importante rea
pinioideae, Cassia (99). de estudio?
Grupo muy diversificado en el plano taxonmico con 3 Bibliografa 5) Rol de las distintas sustancias orgnicas liberadas en
sub-familias: Caesalpinoideae, Mimosoideae y Papilionoi- Una de las principales caractersticas que evidencian el cala rizosfera.
deae. No todas las especies estn noduladas: cerca del rcter evolutivo de la leguminosas se relaciona con las modi- Bazin, M. J., P. Markham y E. M. Scott Population dyna- 6) Cmo podemos distinguir la rizosfera, el rizoplano y
20% de las Papilionoideae (unas 3.400 especies) se han ficaciones en su forma y tamao: desde rboles tropicales mics and rhizosphere interactions, en the rhizosphe- la superficie de las races?
analizado por su aptitud para nodular. muy altos, pasando por arbustos , a trepadoras leosas, hier- re. 1990, J. M. Lynch (ed), Wiley Interscience, New York: 7) Mediante cuales mecanismos las poblaciones micro-
99-127 bianas pueden tener carcter benfico, neutro o per-
Dommergues, Y. y F. Mangenot, La rhizosphre, en: Eco- judicial?
Cuadro 4 - Nodulacin en las leguminosas
logie microbinne du sol, 1970, Dommergues, Man- 8) Qu factores afectan la colonizacin radical?
genot (eds.), Masson et Cie., Pars: 549-594. 9) Seale dos tcnicas para evaluar el efecto del cultivo
Subfamilia N gneros N gneros analizados N especies N especies analizadas
Frioni, L. Ecologa microbiana del suelo, 1990, Depto. de cierta variedad de tomate sobre los microorganis-
+ +/- - total + +/- - total
de Publicaciones de la Universidad de la Repblica, mos del suelo.
Mimosoideae 66 18 8 5 31 2900 351 37 388
Caesalpinoideae 177 13 13 39 65 2800 72 6 180 258
Papilionoideae 505 241 14 14 169 14000 2316 46 2462
Total 748 272 35 58 365 19700 2839 6 263 3108
Las clulas en simbiosis presentan tambin ms bajo con- leguminosas se han incrementado rpidamente. Boussin-
tenido de grnulos de cianoficina que representan reser- gault puso en evidencia en 1838 la capacidad de las legu-
vas de nitrgeno con cido asprtico y arginina en rela- minosas en emplear el N2 atmosfrico, pero, solamente
cin 1/1 molar. Los grnulos de polifosfatos son abun- 50 aos ms tarde, Hellriegel y Wilfarth demostraron de
dantes en simbiosis. Las ficobiliprotenas constituyen manera indiscutible que slo las leguminosas noduladas
reservas de nitrgeno, adems de actuar como pigmen- pueden hacerlo y que el lugar de fijacin eran los ndu-
tos accesorios en el fotosistema II. los. Luego de estas clsicas experiencias se pudo com-
probar fehacientemente que el lugar de fijacin son los
La luz es necesaria para la fijacin. Los lquenes toleran ndulos y que los microorganismos se encuentran en el
condiciones extremas: en regiones de Suecia y Noruega, suelo o deben inocularse.
la fijacin ocurre a OC y los organismos sobreviven a
heladas prolongadas y a la sequedad, aunque no fijan N2
hasta que se rehumedecen. Constituyen la vegetacin
principal de ambientes extremos como piedras, zonas are-
nosas, facilitando luego la colonizacin por otros microor-
ganismos. La cianobacteria posee escasa actividad de
glutamino sintetasa, bloqueando parcialmente la ruta
primaria de asimilacin de NH3, que es liberado y transfe-
rido al hongo.
Se citan niveles de fijacin de nitrgeno de 25-50kgN/ha/

ao para cianobacterias en vida libre, 12 a 21kgN/ha/ao
para asociaciones con Gunnera, 300 en Azolla y 40-40kgN/
ha/ao, en lquenes.
Fijacin de nitrgeno por simbiosis

nodulares
Asociaciones rhizobio-leguminosa
Bacterias hetertrofas conocidas como rhizobios se aso-
cian en estructuras nodulares fijadoras de N2 en legumi-
nosas (figura 2), contribuyendo de manera fundamental a
la fertilidad del suelo, a la produccin de alimentos para el
hombre y animales y a la economa de fertilizantes nitro-
genados, ya que muchas de las leguminosas son autosu- Figura 2- Leguminosa nodulada. Arriba: raz con numerosos
ficientes en sus requerimientos en nitrgeno. ndulos, Abajo: corte de ndulo con zona colonizada con
bacteroides, coloreada de rojo por la leghemoglobina
La bibliografa sobre este tema es enorme y los estudios se
amplan fuera de las leguminosas cultivadas: alfalfa, man,
soja, poroto, vicia, trboles, etc., hacia leguminosas indge- Para determinar la fijacin de N2 en un sistema simbi-
nas y hacia las arbreas, cuyo empleo en forestacin en tico de manera rpida y sencilla:
suelos degradados ofrece una enorme perspectiva.
se compara el tenor de nitrgeno en leguminosas no-
Luego del aislamiento del rhizobio por Beijerinck, en 1888, duladas con el de las no noduladas cultivadas en au-
los trabajos sobre esta bacteria y sus asociaciones con sencia de nitrgeno combinado
La evaluacin de la FBN por Azospirillum en la rizosfera (cuadro 2). La contribucin a la economa del nitrgeno
de numerosos cultivos de inters agronmico se ha incre- en suelos de la zona templada no sera tan importante,
mentado en los ltimos aos, pero su importancia agro- pues son muy afectadas por la desecacin.
nmica es actualmente menor que lo que se prevea.
En resumen Nostoc, Anabaena, mantienen su efecto estimulante lue-
14 Interacciones entre microorganismos

go de la esterilizacin, y se piensa que su accin se debe
La produccin de sustancias promotoras del crecimien- a sustancias del tipo de las citoquininas, ms que a auxi-
to vegetal parece ser el principal mecanismo. La coloni- nas y/o giberelinas, ms termolbiles.
zacin bacteriana ocurre principalmente en la mayora
de las especies vegetales estudiadas en la zona de elon- La prctica de la inoculacin se va popularizando, los
gacin de las races cultivos son fciles de propagar en agua con sales mine-
rales a la luz y su transporte se facilita si se mezclan con
Azospirillum estimula la densidad y longitud de pelos arena y se secan. Los productores comienzan a propagar En la naturaleza, las poblaciones microbianas raramente A pesar de la estrecha proximidad en que puedan encon-
capilares, la velocidad de aparicin de races latera- sus inculos en piletas vecinas a los cultivos de arroz. El se presentan aisladas. En ciertos hbitats, como por ejem- trarse dos o ms especies que coexisten en el espacio o
les y la superficie radical (Okon, 1994). La intensi- cuadro 2 muestra en a) el efecto de la inclusin de Azolla plo en la vecindad de las races, en restos de materia or- en el tiempo, pueden no afectarse mutuamente. El neu-
dad de estos efectos depende de la especie vegetal en el crecimiento y contenido de N en plantas de arroz, gnica, en aguas o cuando se incorporan al suelo restos tralismo es evidente in vitro cuando las velocidades de
y del cultivar y de la concentracin del inculo de con y sin perodo seco en el cual el helecho se seca y de cosechas, fertilizantes, etc., los componentes de la crecimiento y las densidades finales de dos poblaciones
Azospirillum. En muchos ensayos el ptimo fue de muere y en b) la inoculacin con Tolypothrix en el agua de comunidad son afectados significativamente por sus ve- son semejantes. La demostracin del neutralismo in vivo
alrededor de 1.l07 unidades formadoras de colonias riego en el mismo cultivo. cinos. Dada la proximidad estrecha de los organismos es ms difcil. Es probable que ocurra cuando las densi-
(ufc)/semilla-1 o plntula-1 cuando sus densidades son altas, las interacciones entre dades de las poblaciones son bajas, el aporte de nutrien-
En la mayora de los suelos agrcolas de zonas templa- organismos son importantes en esos ambientes. tes abundante y son satisfechos los requerimientos para
La inoculacin con Azospirillum afecta la concentradas, el aporte en N por cianobacterias no es muy alto, el desarrollo de las poblaciones, de modo que no interac-
cin de cido 3-indol actico y 3-indol butrico libres, as en parte por los requerimientos de luz y humedad. Ade- Son precisamente estas interacciones entre habitantes de ten para los nutrientes, el espacio, etctera, pero cuan-
como las velocidades especficas de respiracin y acti- ms muchas veces la superficie de los suelos se dese- una comunidad y las interrelaciones entre los organismos do el ambiente comienza a modificarse por la actividad
vidades de enzimas del ciclo de los cidos tricarboxli- ca por largos perodos de tiempo. Una irrigacin oportu- y su ambiente abitico qumico y fsico, las que regulan la biolgica o cuando el aporte de nutrientes comienza a dis-
cos y de la gliclisis en races de maz y otras plantas. na favorece la prctica de inoculacin. Son muy emplea- composicin de la microflora y la microfauna de un eco- minuir, las especies comienzan a interactuar.
Esto contribuye a que las races tomen ms agua y nu- das en cultivos inundables, como es el caso del arroz. sistema.
Se distinguen tres tipos de asociaciones sinrgicas, a
trientes minerales que favorecen un mayor crecimiento
Se establece un equilibrio dinmico, resultante de las pesar de que las lneas de demarcacin no son siempre
de las plantas inoculadas
interacciones biolgicas y no biolgicas. Este equilibrio ntidas y estn muy afectadas por el ambiente:
Cuadro 2 - Manejo del cultivo de arroz con Azolla (a) y
El efecto de la inoculacin parece evidenciarse princi- Tolyothrix (b) se mantiene en un ecosistema dado, y la capacidad para comensalismo : un organismo se beneficia mientras
palmente en los estados tempranos del desarrollo ve- mantener la estabilidad de una comunidad en un medio que el otro no es afectado
getal, durante las primeras semanas luego de una co- a) Arroz por maceta ambiente variable es denominada homeostasis. Al cam-
rrecta colonizacin de las races tratamiento agua peso seco (g) N total(mg) biar las condiciones del medio, entran en juego mecanis- protocooperacin, simbiosis nutricional, o mutua-
testigo continuo 37 221 mos autorreguladores o reacciones homeostsicas para lismo, en donde el beneficio es mutuo, sin llegar a pre-
La evaluacin de datos acumulados en los ltimos 20 c/sequa 40 240 reestablecer las relaciones existentes previamente. sentar carcter obligatorio
aos indica que la inoculacin a campo Azospirillum, c/Azolla continuo 43 316
simbiosis verdaderas, en las cuales los integrantes se
puede incrementar el crecimiento de importantes culti- c/sequa 49 465 Dos o ms poblaciones pueden interactuar con tres con-
secuencias: benefician en situaciones en que ninguno de ellos po-
vos (Okon y Labandera, 1994).
dra realizar una funcin vital o sobrevivir
b)
condicin rendimiento % de incremento Poblaciones Efecto Interaccin Las interacciones antagnicas presentan un carcter
Empleo de las cianobacterias como suelo mal testigo 45 perjudicial para una parte de la poblacin e incluyen la:
biofertilizantes drenado inoculado 60 33 A B 0 neutralismo
suelo drenado testigo 30 + sinergismo competencia por los nutrientes (C, N, S, P, etc.), el es-
Desde la dcada de los sesenta se informan en Japn inoculado 38 26 - antagonismo pacio, luz, O2, CO2
resultados de inoculacin en suelos inundados de arroz
el amensalismo: una especie es perjudicada por otra sustrato A sustrato B productos finales Nutrientes: el nivel de N combinado fcilmente asimi- Se observan: cambios en la morfologa radical de plan-
que libera sustancias qumicas como cidos orgni- lable en el suelo (amonio y/o nitrato) afecta este pro- tas inoculadas, aumento del nmero de races laterales
cos o minerales, toxinas, bacteriocinas, antibiticos, org. a org. b ceso. Se tiende a la seleccin y empleo de mutantes profusamente cubiertas con pelos radicales.
enzimas de diazotrofos resistentes a altos niveles de N mineral
y que adems excreten rpidamente el amonio fijado. Se han identificado giberelinas del tipo A1, A3 e iso-A3 en
Liberacin de sustancias biticas: los factores de cre-
predacin, que implica el ataque directo de una espe- Una ligera fertilizacin en la siembra (10-30 kg N/ha) cultivos de A. ipoferum (Bottini et al, 1989) y la inoculacin
cimiento son sintetizados por algunos microorganismos
cie sobre otra, con la muerte de la presa es empleada en gramneas, en suelos pobres. El esen maz increment el peso seco, la densidad de pelos
y su excrecin permite la proliferacin de auxtrofos (que
tablecimiento del cultivo estimula la FBN rizosfrica radicales y la longitud total de la raz, con efecto similar al
los requieren pero no los pueden sintetizar). As, mu-
parasitismo, por el cual un organismo se alimenta de que contribuye con parte de la demanda en nitrgeno. agregado de 40 pg/mL de GA3 y 2000 pg/mL de AIA.
chos aislamientos a partir del suelo o aguas no crecen
clulas, tejidos o fluidos de otro organismo, usualmente en los medios corrientes de laboratorio si no se los pro- Fsforo, molibdeno, hierro, inciden en el funcionamien-
Para verificar estos efectos se trabaja con mutantes de
mayor, llamado hospedante, el que es injuriado, pudien- vee de ciertos aminocidos, vitaminas, o bases pricas to de la nitrogenasa. El fsforo actuara ms bien a
espirilos sin nitrogenasa funcional, pero capaces de ela-
do incluso morir o pirimdicas. En el laboratorio se puede observar f- nivel del vegetal.
borar sustancias del tipo de las fitohormonas, para incluir-
cilmente este tipo de interaccin: en un medio nutricio- las en las parcelas control.
Gases: es bien conocido el efecto del O2 en la enzi-
nalmente inadecuado, las colonias de un organismo de
Interacciones sinrgicas ma. En general, la rizosfera de la mayora de los culti-
inters se desarrollan en la vecindad de colonias de Estos microorganismos son empleados como inoculan-
vos presenta baja pO2, alto nivel de CO2 y suficiente
especies que excretan los nutrientes requeridos por la tes en zonas agrcolas de distintas partes del mundo, en
Comensalismo N2, que nunca es limitante, como para favorecer la fi-
primera especie (colonias satlites). maz, arroz, cultivos hortcolas, trigo, yute, algodn, caa
Constituye una interaccin muy comn en la naturaleza, jacin.
de azcar (Urquiaga, Dbereiner, 1991), solos o en com-
en donde los procesos de degradacin de molculas com- org a vitamina B org b (comensal) pH: ciertas rizosferas presentan pH demasiado bajo binacin con fertilizantes (Gonzlez-Lopez, 1992).

plejas son realizados por lo general por poblaciones mix- para el desarrollo de diazotrofos neutrfilos, como el
tas (cadenas alimenticias), cada una de las cuales ofrece * En aguas: algas auxtrofas para numerosas vitaminas Azotobacter. El cuadro 1 muestra el efecto de inoculacin (I) de maz
a las otras un sustrato ms simple. El organismo que reci- se asocian con bacterias heterotrficas productoras de con tres cepas de Azospirillum en suelo Haplustol, de
be el beneficio se denomina comensal y la relacin es vitaminas Pesticidas, la aplicacin de altas dosis de herbicidas y Argentina. Adems de un incremento en los rendimien-
con frecuencia, pero no necesariamente, casual, ya que fungicidas puede afectar las densidades de estas bac- tos similar a la fertilizacin (N) con 60 kg N-urea/ha en
gran nmero de especies puede colaborar, existiendo poca * En el rumen, se da coexistencia de organismos exigen- terias. Alta inhibicin de la actividad nitrogenasa se en- los tratamientos inoculados, se apreci importante de-
especializacin entre los asociados. tes y otros que producen y liberan factores de creci- contr en rizosferas de numerosos cultivos. sarrollo de races y persistencia de altos niveles de in-
miento (captulo 18). culo (108 clulas.g-1 raz en la cosecha ) (Fulchieri y
Algunos ejemplos implican una estrecha unin fsica en- Frioni, 1994).
tre ellos, en otros casos no se requiere proximidad entre Remocin de factores inhibidores: una especie me- Inoculacin
los individuos. Ejemplos de esta asociacin: taboliza toxinas u otros factores inhibidores, permitien-
Desde la dcada de los sesenta, se citan en la bibliogra-
do, entonces, la multiplicacin de su asociado. Las va- Cuadro 1 - Inoculacin de maz con Azospirillum
fa incrementos en los rendimientos de maz y trigo de un
Modificacin de un sustrato: una poblacin convier- riaciones del pH o del Eh, la remocin del O2, la reducen Ro Cuarto, Argentina (datos en cosecha)
10 a un 20% al inocularlos con Azotobacter spp. El tema
te un sustrato no disponible para otra poblacin en un cin de la presin osmtica, los cambios en los niveles
ha sido retomado en la dcada de los setenta, donde se
producto que puede ser asimilado y usado como nu- de nutrientes por la actividad biolgica, son causas de N-urea Inoculada Testigo
citan aumentos de materia seca sobre el control de un
triente: beneficio para el comensal Peso seco parte 90,84a 79,16a 46,19b
66% al inocular Digitaria decumbens y Pannicum maxi-
mum con Azospirillum. En mijo perla, la inoculacin con area (g/planta)
bacterias celulolticas y Azotobacter spp en suelos que Ejemplos: Peso seco 34,00 65,50 26,93
han recibido aportes de restos vegetales 40 kg N/ha/ao produjo materia seca equivalente a una
organismo sensible a un biocida y otro que lo degrada raz (g/planta)
fertilizacin con 80 kg N/ha/ao, a los 70 das de creci-
Nitrosomonas y Nitrobacter, en medio rico en amonio miento. Una ligera fertilizacin nitrogenada en la siembra log10 N 5,82b 8,03a 4,55b
org. b Azospirillum/g raz
favorece la fijacin rizofrica.
degradacin de polmeros como celulosa, almidn, qui- N granos por espiga 333 359 109
tina, sustancias pcticas, lignina, pesticidas: intervienen org. a enzimas sustrato productos finales
En algunos ensayos se obtiene ms respuesta en los tes- Peso seco
primero poblaciones especializadas que permiten el de- antibitico inactivado tigos regados con el filtrado acelular de los diazotrofos, granos(kg/ha) 4122a 4447a 2792b
sarrollo posterior de otras que emplean molculas ms indicando que los efectos pueden explicarse por la pro- Dos o ms tratamientos sealados con la misma letra no di-
simples (cadena alimenticia). aerobio y anaerobio dentro de un agregado en suelo duccin de sustancias reguladoras del crecimiento vege- fieren por Tuckey 5%.
aireado tal por estos organismos.
nia, Argentina. Se determin efecto estimulante de la ri- reunirse para favorecer la fijacin del N2 en la rizosfera de mesfilo y alcalinizante en ambiente cido Crecen lentamente y esta ventaja les permite competir con
zosfera de sorgo, maz, mijo perla y mijo comn sobre arroz. otros quimihetertrofos en la naturaleza. Muchas veces se
Azotobacter, Azospirillum y Clostridium en el campo, so- superficies adecuadas para la proliferacin: un macro o observan al microscopio clulas bacterianas completamente
bre todo en los dos perodos ms crticos en N para los Algunos de los factores que afectan la fijacin del nitrge- microorganismo puede resultar una superficie adecua- rodeadas de un ectocomensal, que se adhiere especfica-
cultivos: floracin y grano al estado lechoso. no a nivel rizosfrico son: da para la colonizacin por el comensal, brindndole mente, en general en forma perpendicular a la clula (figu-
ventaja ecolgica. ra 1). Se fijan a organismos muy variados, como algas ver-
Se postula la existencia de lectinas que uniran especfi- Fotosntesis: la provisin de hidratos de carbono y otras des y cianobacterias, diatomeas y bacterias no relaciona-
es frecuente observar bacterias que se desarrollan so-
camente los espirilos a los pelos capilares de ciertas gra- sustancias a nivel radical est gobernada por el tipo y la das, de cuyas excreciones se nutren.
bre algas, adhirindose a los organismos fottrofos (ec-
mneas. En presencia de nitrgeno combinado, la bacte- intensidad de la fotosntesis. Experiencias con cultivos
tocomensalismo).
ria slo se asocia al mucigel del pice y a clulas epidr- evidencian abrupta cada de la actividad nitrogenasa
micas no diferenciadas. cuando las plantas se sombrean, o se corta la parte Un organismo puede proveer hbitat favorable para su Protocooperacin
area; aunque se ha observado en algunas experien- desarrollo a otro, el comensal no perjudica ni beneficia al
cias otro pico en horas de la noche, a expensas de las organismo que lo alberga (endocomensalismo). Estas Estas relaciones involucran beneficio mutuo para dos o
Ecologa de las asociaciones rizosfricas reservas carbonadas. relaciones derivan ocasionalmente hacia el parasitismo. ms especies y presentan carcter bastante laxo, es de-
cir que la existencia de cada integrante de la asociacin
A diferencia de las asociaciones nodulares, estas asocia- Factores fsicos: como es de suponer, una excesiva hu- Como se observa, estas asociaciones son muy frecuen- en un ambiente no requiere una especie particular, sino
ciones rizosfricas, llamadas tambin simbiosis asociati- medad o extrema desecacin afectarn de gran manera a tes en la naturaleza y explican la existencia de organis- que muchos integrantes de la poblacin pueden brindarle
vas o rizocenosis, se encuentran muy afectadas por las este proceso. La temperatura es otro de los factores que mos exigentes en el plano nutricional en ambientes po- los requisitos para su crecimiento. Los organismos que
fluctuaciones del ambiente, que impide muchas veces una inciden limitando el proceso cuando los umbrales trmicos bres, como en suelos o aguas. interactan bajo ciertas condiciones ambientales, pueden
fijacin acorde a las necesidades del vegetal. La figura 1 son muy bajos o muy altos. Rangos entre 18 y 30C se proliferar independientemente, en otras condiciones. Se
presenta la compleja serie de requerimientos que deben citan como ptimos para cultivos en zona templada. En medios acuticos, son muy importantes las asociacio- las denomina tambin mutualismo no obligatorio, simbio-
nes entre algas y otros microorganismos, como bacterias, sis nutricional o sintrofismo.
Aire Luz actinomicetes y hongos, quienes estimulan el desarrollo
O2 CO2 N2 H2 O de los fottrofos por la excrecin de factores de crecimien- Se reconocen algunas categoras de protocooperacin:
to, liberando CO2, o aportando productos de la minerali-
zacin del nitrgeno, etc. sntesis y degradacin de macromolculas: polisacri-
Fotosntesis
dos como la celulosa, lignina, etc. son degradados por
difusin O2 por la planta (luz, temperatura) potencial hdrico difusin N2 cultivos mixtos.
Planta translocacin un organismo provee una fuente de energa a su pareja
y sta le aporta algn nutriente esencial
Rizosfera aceptor de e-
redox alto exudacin cada integrante de la pareja excreta un factor de creci-
(C, energa) miento sin el cual el asociado no puede desarrollarse
FBN A tiamina- B tiamina+

redox ptimo (niveles ptimos de C, riboflavina+ riboflavina -
temperatura, exudacin , etc.)
Los organismos A y B pueden crecer juntos en ambientes
represin pobres ya que cada organismo excreta el factor de creci-
redox bajo NH4 P, etc. miento requerido por el otro. La figura 2 muestra el desa-
otros microorganismos rrollo de organismos aislados de la leche: en medio defi-
ciente en fenil-alanina (aminocido) y cido flico (vitami-
NO3 Figura 1- Comensalismo: adhesin de clulas de na), ni Streptococcus faecalis ni Lactobacillus arabinosus
materia orgnica mineralizacin de N Caulobacter a Bacillus (arriba) y con Azotobacter (abajo), se desarrollan, ya que el primero requiere cido flico y el
fertilizantes N suelo que usan materiales orgnicos segregados, en ambientes segundo fenilanina. El cultivo mixto permite el desarrollo
acuticos. de ambos.
Figura 1- Fijacin biolgica de N en la rizosfera de arroz y efecto de factores edficos, climticos y del cultivo
2
cada integrante puede aportar fragmentos de la mol- miento del biodigestor. Esta asociacin se denomina
cula de un factor de crecimiento, como la vitamina B1 o tambin sintrofia.
tiamina: A (tiazol+ y piramidina-) y B (tiazol- y pirimidi-
na+), la pareja sintetiza la tiamina formada por tiazol y
pirimidina, requerida por ambos. Cuadro 1- En biodigestores anaerobios (sintrofismo)
Fijacin biolgica de N2 en la rizosfera
un hetertrofo produce CO2 para un alga, quien a su

turno libera el O2 necesario para el primero
una poblacin destruye una toxina que perjudica a su
Syntrobacter c. proponico
Methanospirillum 4H2 + CO2
acetato + CO2 + H2
CH4 + 2 H20 15 y en asociaciones nodulares
asociado y ste, libre del inhibidor, aporta un compues- Simbiosis
to necesario para la especie
Azotobacter y celulolticos en ambientes pobres en ni- Involucran relaciones bastante duraderas en las cuales Fijacin de N2 en la rizosfera lum notatum de la variedad batatais realizado por el gru-
dos o ms especies viven en inmediata proximidad y ob- po de Dbereiner al comienzo de los aos 70, en Brasil,
trgeno y ricos en pajas. El primer organismo le brinda
tienen beneficios mutuos de su interaccin. En un hbi- La eficiencia de la fijacin de organismos hetertrofos numerosos trabajos sealan estimulacin en la rizosfera
el nitrgeno fijado va excrecin y el segundo hidratos
tat dado, la simbiosis resulta casi siempre de carcter evaluada en medios de cultivo estticos, es baja: 10 a de cultivos de inters econmico, como cereales, gram-
de carbono simples
obligatorio, para que los simbiontes realicen sus fun- 50 mg N fijado/g sustrato carbonado consumido. As, neas forrajeras, por especies de Azotobacter, Beijerinc-
ciones vitales. Algunos bilogos emplean el trmino mu- para fijar 100 kg N/ha/ao se requerira el metabolismo kia, Azospirillum, Bacillus, Clostridium, etc. (Dbereiner,
tualismo para referirse a estas asociaciones y recono- de aproximadamente 10 toneladas de materia orgnica, Pedrosa, 1987; Dbereiner et al, 1992).
Densidad ptica muy difcil de reunir en suelos sometidos a agricultura
cen las simbiosis mutualsticas, en donde ambos inte-
150 tradicional. Se reconocen varios mecanismos de promocin del cre-
grantes se benefician, y las simbiosis parsitas, en las
cuales un integrante se beneficia pero el otro no se afec- cimiento vegetal por estos organismos:
Cultivo mixto
ta, o a veces sufre perjuicio ms o menos severo (no La fijacin biolgica del nitrgeno (FBN ) es favorecida en
100 usaremos en este texto esta acepcin). Consideraremos ambientes como la rizosfera, regin del suelo donde la fijacin biolgica del N2
a las simbiosis cuando al menos un integrante de la aso- actividad microbiana es modificada por la presencia de
ciacin obtuvo algn beneficio. las races, la filosfera, superficie de las hojas y la esper- liberacin de fitohormonas y estimulacin de la ex-
L. arabinosus matosfera, zona del suelo afectada por la presencia de crecin de las mismas por la raz colonizada
50 Los lmites de separacin de ambas resultan a veces dif- semillas y granos. (captulo 13).
S. faecalis
ciles de determinar. Adems, el ambiente puede ejercer proteccin frente a microorganismos fitopatgenos
Tiempo La actividad de los diazotrofos es ms eficiente en estos
profundos cambios en las relaciones, de modo que una
asociacin que comenz siendo mutualstica puede vol- ambientes por: En las dcadas del 70 y del 80 se afirmaba que la FBN
Figura 2 - Asociacacin sinrgica entre Lactobacillus verse parsita, o viceversa. era la principal causa de estimulacin del crecimiento
arabinosus y Streptococcus faecalis * los aportes de sustratos carbonados a partir de los vegetal, pero las determinaciones de actividad de la nitro-
Algunas simbiosis involucran microorganismos entre s, productos de la fotosntesis que actan como esque- genasa no evidenciaron niveles muy altos en rizosferas
otras incluyen microorganismos con insectos, plantas y letos carbonados y fuentes de energa de cereales y otros cultivos y los ensayos con N15 sea-
El cuadro 1 seala la importancia de este tipo de asocia- animales superiores. Analizaremos solamente aquellas laron incrementos entre 10- 50 kgN.ha-1.ao-1.
ciones en biodigestores rurales, donde una sucesin de entre microorganismos, muchas veces no distinguibles * el microambiente con baja pO2, que permite el accio-
microorganismos asegura la degradacin de la materia fcilmente por el tamao submicroscpico de la mayora nar de la N2asa La contribucin de los otros mecanismos sealados es
orgnica en anaerobiosis y la liberacin final de metano de los integrantes. reconocida y evaluada en los ensayos de inoculacin.
(captulo 21). Un grupo de organismos libera hidrgeno, * la transferencia de los productos de la fijacin (ami- Otras bacterias han sido descriptas en la bibliografa como
necesario para el accionar del otro grupo, que lo consu- lquenes, la simbiosis ms conocida entre un alga o una nocidos, uredos, protenas) fuera de la zona de fija- estimuladas en la rizosfera: Bacillus spp., Clostridium spp.
me. A su vez, el segundo grupo mantiene concentracin cianobacteria y un hongo: ficobionte y micobionte. Los cin, hacia las hojas, frutos, evitando as los efectos en suelos de arroz y trigo; bacterias sulfatorreductoras,
baja de H2 y promueve la fermentacin de los cidos lquenes son considerados nuevos organismos con es- inhibitorios sobre el proceso. en suelos inundados de arroz; Bacillus y Enterobacter cloa-
grasos y la produccin de H2 que regula el funciona- tructura externa diferente a la de los simbiontes, con exis- cae en pasturas de Agrostis tenuis, trigo y festuca. Espe-
Desde el primer informe sobre la estrecha asociacin en- cies de Azotobacter fueron estimuladas en cultivos de maz
tre Azotobacter paspali y ecotipos tetraploides de Paspa- y trigo y Azospirillum en pasturas naturales de la Patago-
Bottomley, P. J. Microbial Ecology, En: Principles and gentes nutricionalmente en ambientes pobres como tencia independiente y funciones fisiolgicas propias. La algas y protozoarios: algunos fotoauttrofos viven y
Applications of Soil Microbiology, 1998, Sylvia, Fu- el agua del ocano? simbiosis ocurre bajo condiciones adversas para cada se mantienen como simbiontes en los protozoos, de
hrmann, Hartel y Zuberer: (eds), Prentice Hall, Lon- 2) A qu se denomina comensal? Explique la participacin uno de los integrantes: bajo contenido en materia orgni- los cuales obtienen nutrientes y un ambiente protec-
dres de estos microorganismos en el proceso de degradacin ca, temperaturas desfavorables, sequedad, etc.: el hon- tor, incluso algunos no pueden desarrollarse fuera del
Madigan, Martinko, Parker. Brock, Biologa de los mide macromolculas por un consorcio microbiano? go obtiene materia carbonada de la fotosntesis del alga, hospedante. Una pequea bacteria denominada Ka-
croorganismos. 2000. Prentice Hall International. 3) Por qu no son tan comunes las asociaciones simbi- y sta se beneficia con el aumento de la superficie de ppa ha sido descripta como endosimbionte de un pro-
Killham, K. Soil Ecology. 1994, Cambridge University ticas entre procariotas? Describa alguna absorcin y del agua retenida en la hifas (figura 3). tozoo Paramecium aurelia, es requerida para su mul-
Press. Cambridge, Londres 4) Al introducir un microorganismo en un suelo, ste pue- tiplicacin y ha sido liberada del hospedante por m-
Prescott, Harley, Klein. Microbiologa, 1999, Mc Graw- de desaparecer. Analice las causas de origen biolgi- alga todos fsicos o qumicos.
Hill Interamericana co y explique cmo podra determinar la causa real de
este fenmeno protozoarios flagelados (Cyanophora y Peliana) y el
5) Por qu un microorganismo puede llegar a producir ameboide Paulinella han sido descriptos en asociacin
Preguntas de repaso un antibitico? con una cianobacteria denominada Cyanellae, la cual
6) Cual es el mayor problema que enfrenta hoy da la se mantiene perfectamente regulada en el protozoo, con
1) Cmo se explica la presencia de microorganismos exi- industria farmacetica? hongo divisiones celulares balanceadas: el hospedante alber-
ga dos clulas de la cianobacteria (sin pared) que en la
divisin se reparten en cada clula hija.
El simbionte favorece a su pareja por varios mecanismos:
aumento de la velocidad de crecimiento: el protozoo

con el alga especfica crece ms rpidamente que slo.
Estimulacin de la actividad metablica (respiracin, etc.)
fuentes de C por la fotosntesis: las algas en simbio-

sis en lquenes, o en protozoos o invertebrados acuti-
cos o con plantas, fotosintetizan en exceso para sus
necesidades y satisfacen as los requerimientos de sus
asociados. La capacidad de muchos paramecios para
desarrollarse en medio inorgnico en la luz cuando es-
tn asociados a un alga clorofcea, explica esto
conversin de nutrientes no disponibles para el sim-

bionte en disponibles, por ejemplo los celulolticos en el
rumen, protozoos en el tracto digestivo de termites, que
se alimentan de los productos de las fermentaciones
Figura 3- Lquenes. Arriba: partes de un lquen, hifas fngicas microbianas
y componente algal, abajo: liquen sobre soporte slido.
generacin de CO2 para la fotosntesis, o la produc-
Muchos lquenes poseen una cianobacteria fijadora de N2, cin de O2 para el simbionte por accin de la actividad
constituyndose en importantes colonizadores de suelos fotosinttica.
pobres, desrticos, o muy fros.
provisin de factores de crecimiento, utilizacin de
levaduras como Lypomyces starkey estimulan el creci- metabolitos txicos, proteccin contra altas intensidades
miento y fijacin del N2 de Beijerinckia indica. Se des- luminosas, desecacin, parsitos, son otros de los me-
cribe esta asociacin como una simbiosis. canismos involucrados, en las asociaciones simbiticas.
Como vimos, las simbiosis varan segn los autores por pecfica, segn se realice entre organismos de la misma Fagos: son los ms conocidos parsitos de las bacterias, Existe evidencia de que los protozoos predatores acele-
el grado de unin entre los participantes (ecto o endosim- o diferente especie. actinomicetes, cianobacterias, que pueden causar su lisis ran procesos bioqumicos, incluyendo la descomposicin
biosis), el beneficio logrado, el grado de dependencia (sim- o lisogenizarlas al incorporarse a su ADN (captulo 5). de la materia orgnica, como consecuencia del hecho de
biosis facultativa-obligada) y la duracin de la misma: en La figura 4 esquematiza la competencia en medio lqui- que los protozoos evitan que las bacterias alcancen un
general involucran la mayor parte de la vida de los partici- do entre dos bacterias. El mejor competidor es en gene- Algunos virus son muy especficos, otros presentan un nmero muy grande que resultara autoinhibitorio. Se las
pantes. ral el que presenta menor tiempo de generacin, se mul- carcter ms polivalente. A pesar de ser aislados de la mantiene, adems, en estado prolongado de alta activi-
tiplica a la misma velocidad en cultivo puro y en mixto, mayora de los suelos agrcolas, es improbable que sean dad metablica.
La eleccin de la pareja no es en general un hecho ca- aunque su densidad final es frecuentemente menor en los responsables de la desaparicin de inculos impor-
sual, se reconoce cierta especificidad, distinguindola de cultivo mixto. El otro organismo crece a igual velocidad tantes de bacterias como rhizobios, cianobacterias, etc. Los protozoos pueden predar tambin a pequeas algas,
la protocooperacin. La asociacin es eminentemente en cultivo puro o mixto, pero su velocidad de crecimien- Los virus que atacan hongos han sido estudiados, aun- hongos, a pesar de que en este caso la presa es de ma-
exitosa y esto explica su amplia distribucin en ecosiste- to disminuye cuando la primera especie metaboliza el que se conoce menos su distribucin en la naturaleza. yor tamao. Se piensa que los protozoos consumen bac-
mas marinos, en el cuerpo de animales, en hojas, races, nutriente limitante. terias si stas estn suficientemente prximas, de modo
suelos, aunque algunos autores reconocen simbiosis con que la energa ganada en la predacin es mayor que la
efectos negativos (parasitismo). En el suelo, uno de los principales factores limitantes es Predacin requerida para predarlas. Cuando el nmero de bacterias
el carbono, y la competencia por este elemento se hace cae a valores en los que la energa requerida por el proto-
evidente cuando la densidad de la poblacin es alta. Al En este antagonismo el perodo de contacto es general- zoo para encontrar a su presa es igual o mayor que la que
Interacciones antagnicas agregar sustancias carbonadas fcilmente metabolizables, mente corto y la presa es muerta y digerida rpidamente. obtienen como alimento, entonces el protozoo cesa de
se observa el levantamiento de la inhibicin de la pobla- El predator vive, por lo general, libre, es mayor en tama- predar, y se reproduce.
Al introducir un inoculante biolgico, con rhizobios, Fran- cin de dbil poder competitivo. o que su presa y presenta menor especificidad en sus
kia, bacterias solubilizadoras de fosfatos, en ambientes hbitos alimenticios. Como vimos, las interacciones antagnicas pueden con-
densamente colonizados como el suelo, es frecuente ob- El cuadro 2 muestra el efecto del agregado de glucosa y ni- ducir a una disminucin importante e incluso al fracaso de
servar que la poblacin no logra sobrevivir y desaparece. trato de potasio en la competencia entre un hongo y una bac- Constituye una de las ms dramticas interacciones en- prcticas agrcolas, como la inoculacin de semillas y el
Como vimos, cada microorganismo requiere de un con- teria, en suelo neutro. Se aprecia que la competencia fue al tre microorganismos en la naturaleza. Las bacterias son suelo con organismos de inters en la fijacin del N2, so-
junto de condiciones nutricionales y ambientales que le inicio por el carbono, pero cuando ste es aportado se mani- los organismos ms expuestas al ataque de predatores, lubilizacin de fosfatos, control biolgico de microorganis-
permiten desarrollarse. fiesta la limitante del otro nutriente esencial, el nitrgeno. sobre todo protozoos, algas, hongos. El predator exhibe, mos fitopatgenos, etc. La predacin se encuentra entre
por lo general, hbitos alimenticios fagotrficos, ingiriendo las causas ms importantes.
Las interacciones antagnicas pueden explicar la desapa- En la figura 5 se esquematiza el desarrollo del hongo en organismos vivos, a pesar de que algunos predatores li-
ricin o disminucin significativa de algn organismo de el caso en que el carbono asimilable es suficiente. Como san la presa y asimilan slo los constituyentes solubles. En resumen: las relaciones tanto benficas como an-
inters cuando las condiciones fsico- qumicas son las se observa, en general aparece la deficiencia por el nitr- Muchos protozoos viven toda su vida como fagotrofos, tagnicas entre microorganismos permiten explicar he-
adecuadas. geno. El modelo experimental es suelo estril inoculado alimentndose de millones de bacterias por cada ciclo chos aparentemente contradictorios, como son la pre-
simultneamente con el hongo y la bacteria. celular. La presa, sin embargo, no desaparece completa- sencia de microorganismos exigentes nutricionalmen-
mente, existe un equilibrio dinmico: el cambio en un gru- te en ambientes pobres, como el agua de mar u oca-
Competencia log10 N
po conduce a cambios cuali y cuantitativos en el otro y la no, a supremaca de ciertos agentes en situaciones
Clulas/mL poblacin bacteriana atacada estimula su metabolismo y desfavorables, el control biolgico que se ejerce sobre
En ambientes naturales, suelo, aguas, los sustratos ener- Especie A sola o en mezcla se divide ms rpidamente, evitando en muchos casos su microorganismos patgenos o deletreos de plantas.
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gticos y los nutrientes son por lo general limitantes como total extincin. Los suelos contienen una enorme diversidad de pobla-
para mantener altas poblaciones microbianas, las que in- 8 ciones microbianas y aun ignoramos muchos de los
teractan compitiendo por los sustratos: se habla de com- Especie B sola Muchas bacterias son resistentes a la predacin, excre- factores que controlan la composicin de esas pobla-
petencia nutricional. Si, excepcionalmente, el ambiente 7 tando toxinas inhibidoras de los protozoos, pigmentos o ciones.
es rico en nutrientes, la competencia puede ejercerse por 6
formando estructuras ms resistentes a condiciones ad-
el espacio, la luz, etctera. B creciendo con A versas y a la predacin, como los cistos. La habilidad de
5 la bacteria para mantener sustanciales poblaciones de- Bibliografa
Este tipo de interaccin ejerce un profundo impacto en la pende de su constante multiplicacin en presencia del
3 6 9 12 Horas
sucesin de microorganismos, en la seleccin natural y protozoo, por lo que ciertas bacterias no se reducen por Atlas, R. M. y R. Bartha, Microbial Ecology: Fundamen-
en la composicin de las comunidades microbianas. Po- Figura 4 - Modelo de competencia entre bacterias en medio los protozoos debajo de cierta densidad crtica, en el sue- tals an Applications. 3 ed., 1993, Benjamin/Cum-
demos hablar de competencia interespecfica o intraes- lquido lo y en medio lquido. mings, Publishing Co. New York
Se distinguen los: biticos provocando heterolisis, o bien puede ocurrir una sin KNO3 0,1 g KNO3 0,5g KNO3 ras, altas intensidades luminosas, bajos niveles de hu-
autolisis, por enzimas producidas por la propia clula o medad, brindan al organismo ventaja ecolgica indu-
hifa parasitada. Fusarium solo dable
endoparsitos, que habitan dentro de un organismo, como
los bacterifagos, los actinfagos, etc., y otros microorga-
nismos que viven dentro de hongos, algas, etc. y los El agregado de materia orgnica promueve la germina- Fusarium y tolerancia a fluctuaciones del ambiente: de tempera-
cin de esporas y cuerpos en reposo, se favorece el de- Agrobacterium tura, niveles hdricos, intensidad luminosa, etc.
ectoparsitos que se localizan externamente en sus sarrollo de las hifas, las que son atacadas ms fcilmente
hospedantes, menos frecuentes entre microorganismos. por los antagonistas en el suelo, contribuyendo a la de- Figura 5- Competencia por el nitrgeno entre un hongo y una capacidad de multiplicarse a bajas concentraciones
clinacin de la infeccin por el fitopatgeno (lucha bio- bacteria de nutrientes limitantes, propiedad de pocas especies,
Una pequea bacteria, de forma de vibrio, llamada Bde- lgica). Asi, clamidosporas de Fusarium solani se lisan como algunas algas que crecen bien a concentraciones
llovibrio, es parsita obligada de bacterias Gram negati- en suelos enriquecidos con quitina y laminarina, al esti- muy bajas de nitratos o fosfatos, y hongos que apare-
vas, entre ellas rhizobios, llegando incluso a su lisis. Su mularse el desarrollo de bacterias y actinomicetes quiti- Cuadro 2 - Efecto de aportes de glucosa y nitrato cen como contaminantes en medios sin N combinado y
ciclo de vida es muy particular: se desplazan a gran velo- nolticos. en la asociacin Agrobacterium radiobacter y que pueden usar trazas de nitrgeno orgnico conteni-
cidad, colisionan con las clulas que van a atacar por su Bdellovibrio Fusarium oxysporum das en los productos qumicos.
extremo no flagelado y un orificio en la pared producido Bacteria
por enzimas permite al parsito penetrar, el que se ubica Pared Glucosa% KNO3% Fusarium solo Fusarium + eficiencia en el uso de nutrientes limitantes: son fa-
en el espacio entre pared y membrana (figura 8) (Prescott Agrobacterium vorecidos aquellos organismos que pueden sintetizar
et al., 1999). La rotacin permanente ayuda a debilitar la citoplasma con niveles bajos de nutrientes asimilables
pared. 0 0 2,8 1,2
Membrana 0,25 2,9 1,0 requerimientos de factores de crecimiento: en am-
20 minutos 10 minutos
La membrana no es atravesada por el parsito pero se 0,50 3,1 0,8 bientes pobres, organismos prototrofos poseern ven-
vuelve porosa y la clula se lisa. En la superficie de cajas 2,5 2,8 2,9 taja frente a un auxtrofo para estas sustancias
de Petri con la especie hospedante, Bdellovibrio forma capacidad para sintetizar y almacenar sustancias de
placas lticas, similares a las producidas por infeccin por 1 0 5,5 2,1
150-210 minutos reserva y emplearlas cuando el aporte de nutrientes dis-
fagos. 10 segundos 0,25 5,2 1,9
0,50 5,4 1,9 minuye
No han sido descriptos muchos parasitismos entre bacte- 2,5 5,4 5,0 capacidad de desplazarse hacia reas en donde el ni-
20 minutos
rias. 3,0 0 5,3 1,8 vel de nutrientes limitantes es mayor (quimiostasis)
0,25 5,2 1,8
Los hongos sufren el ataque de numerosos parsitos, 0,50 5,4 2,0 Cuando materiales orgnicos se incorporan al suelo o
sobre todo de otros hongos en estructuras como clami- 2,5 5,2 5,2 aguas, los primeros colonizadores son en general las
doesporas, esclerocios, oosporas de especies de Penici- bacterias con alta actividad metablica y los hongos,
llum, Rhizoctonia, Thrichoderma, Glioclodium. Muchas con esporas que germinan fcilmente.
especies sobreviven por su alta velocidad de reproduc- Los competidores ms efectivos de este hongo fitopa-
cin, aunque las esporas pueden sufrir graves daos cuan- tgeno son organismos con requerimientos nutritivos En ambientes acuticos, es posible observar competen-
do son atacadas durante largos perodos por los parsi- simples. cia por la luz; la masa de fitoplancton limita la difusin de
tos. las radiaciones. El CO2 y el O2, poco soluble en el agua,
La capacidad de un organismo para competir est go- provocan tambin fenmenos competitivos entre heter-
Muchos hongos pueden penetrar en lquenes, afectando bernada por una serie de factores: trofos aerobios, sobre todo en aguas contaminadas con
a los componentes de la asociacin. residuos orgnicos.
alta velocidad de crecimiento: las especies que usan
Los protozoos son parasitados tambin por varios tipos los nutrientes limitantes rpidamente poseen sin duda En regiones ridas, la competencia por el agua ejerce im-
de bacterias y algunos hongos, llegando a veces a su li- ventajas sobre las de crecimiento lento portante rol en la sucesin de especies. La competencia
sis, por digestin de las paredes celulares. Figura 8- Parasitismo por Bdellovibrio. Arriba, esquema del por el espacio resulta ms difcil de demostrar. Adems, las
proceso en una bacteria gram negativa. Abajo: microscopa tolerancia a factores abiticos: la facilidad de crecer observaciones en microscopia electrnica de barrido en fi-
En el parasitismo actan enzimas extracelulares o anti- electrnica de la bacteria y su parsito en condiciones extremas, en bajas o altas temperatu- nos cortes de suelo, muestran la existencia de amplias zo-
nas sin colonizar, indicando que aparentemente habran es- importante rol en la lucha biolgica en ambientes natura- Rol en la naturaleza: durante mucho tiempo se sostuvo
casas limitaciones espaciales para el desarrollo de microor- les (captulo 4). que los antibiticos eran un fenmeno de laboratorio ya
ganismos. Aunque esta limitacin podra ocurrir a nivel de que las concentraciones requeridas para daar a otro or- Sembrar microorganismo productor de
microporos, donde una pequea partcula de materia orgni- Brindan supremaca a la especie productora y contribu- ganismo se alcanzaban raramente en la naturaleza.La antibitico en un lado de la placa
ca estimula la proliferacin de clulas y micelio fngico que yen a determinar el tamao de una comunidad, gober- sustancia debe desplazarse desde el organismo produc- Incubar para permitir crecimiento y
puede obstruir rpidamente el microhabitat. nando adems la sucesin de especies. Estas interac- tor hacia la especie sensible, pudiendo ser degradada o produccin de antibitico
Antibitico difunde en agar
ciones explican la eliminacin de ciertos patgenos para adsorbida. Estas controversias han sido superadas y se
Este tipo de interaccin antagnica es una de las ms el hombre y vegetales, el control de hongos fitopatgenos piensa que los antibiticos juegan un rol muy importante Masa celular de Streptomyces
difciles de demostrar en comunidades naturales y se re- cuando se incorpora al suelo restos orgnicos, o la des- en el equilibrio biolgico del suelo, siendo sobre todo
curre a modelos con suelo estril y la inoculacin simult- aparicin de bacterias extraas que llegan al rumen. activos a nivel de microagregados, donde la densidad
nea de los organismos sospechosos de interactuar. microbiana puede ser muy alta y las clulas estn en es-
Deteccin: cuando una suspensin diluida de suelo o mues- trecha proximidad. Siembra entrecruzada con
tras de agua se siembran en la superficie de medio rico, microorganismos
Amensalismo muchas de las colonias aparecen rodeadas de un halo de Modo de accin: su composicin qumica y modo de
inhibicin, donde no crece otro organismo (figura 6) (Madi- accin son muy variados: actan a nivel de membranas, Incubar para permitir crecimiento
Zona donde hubo crecimiento
Resulta de la produccin por una especie microbiana, el gan et al., 2000). La colonia produce una sustancia difusi- pared, ribosomas, interfiriendo metabolismos bioenerg-
antagonista, de sustancias: ble en el agar, presumiblemente un antibitico, que inhibe o ticos o sintticos (actividad respiratoria, sntesis protei- Zonas de inhibicin del crecimiento
mata a especies sensibles a concentraciones muy bajas. ca, etc.). Es frecuente la aparicin de resistencias ende microorganismos sensibles al
antibitico
inhibidoras (microbiostticas) tre las especies sensibles, quienes mutan o cambian la
Se confirma esta presuncin aislando el microorganismo estructura sensible de modo que el antibitico no la re-
txicas (microbicidas) con o sin lisis (microlticas) de y sembrndolo en otra caja en forma de lnea recta. Lue- conoce, o sintetizan enzimas que rompen o desnaturali- Figura 7- Espectro de accin de un antibitico
clulas o filamentos de especies muy prximas. go de 2-3 das se siembran perpendicularmente a estas zan al antibitico, como la penicilinasa. En general, la
lneas, varios organismos para probar su especificidad. resistencia est codificada en plsmidos y puede per-
Las sustancias pueden ser de: La supresin del crecimiento a distancias variables de la derse con stos, que a su vez pueden transferirla a or- Parasitismo
cepa productora refleja la sensibilidad frente a la sustan- ganismos sensibles.
baja especificidad: actan sobre gran nmero de micro- cia inhibidora (figura 7) (Madigan et al., 2000). Un parsito es un organismo que se nutre a partir de clu-
organismos, como por ejemplo, los cidos minerales u Enzimas extracelulares producidas por muchos micro- las, tejidos o fluidos de otro organismo, usualmente mayor,
orgnicos, alcoholes, detergentes. Son efectivas a altas organismos que ocasionan la lisis de organismos sensi- llamado hospedante, el que generalmente es injuriado en
concentraciones. Inhibidores inorgnicos como el H2O2, Sembrar una dilucin de
bles. La quitinasa, producida por bacterias y actinomice- el proceso. El parsito es dependiente en alto grado del
suelo sobre una placa de
NH4+, NO2-, CO2, H2S, NO3- son producidos por procesos medio selectivo tes lisa las paredes de hongos al actuar sobre la quitina. hospedante, a expensas del cual se nutre y con el que se
biolgicos y pueden alcanzar concentraciones que lle- La glucanasa acta sobre la microflora y microfauna (ne- mantiene en contacto fsico y metablico ntimo durante
gan a ser inhibidoras o txicas para especies sensibles. mtodos). considerable fraccin de su vida. Muy pocos organismos
Incubar estn libres del ataque de parsitos microbianos. Resulta
Compuestos orgnicos como los cidos grasos, alcoho- Colonias de Streptomy-
les, son sintetizados por una multiplicidad de especies y ces spp. La competencia y la antibiosis explican el fenmeno muchas veces difcil determinar las lneas de demarcacin
pueden ser inhibidores, en ambientes donde su degra- de micostasis o inhibicin de la germinacin de espo- entre parasitismo e interacciones relacionadas, sobretodo
dacin es lenta (cido lctico en alimentos). ras fngicas. La fungiostasis es la inhibicin, sin lle- la predacin y el parasitismo, ya que ambos implican bene-
gar a la muerte, de hongos (hifas, conidios, esclero- ficio para unos y perjuicio para otros organismos.
altamente especficas, como en el caso de antibiti- Capa fina de agar con cios, ascosporas). Se han reconocido algunas toxinas,
cos, sulfas, toxinas, enzimas, las que actan a muy ba- Microorganismos no microorganismo indicador antibiticos y compuestos voltiles como responsables Numerosos parsitos mantienen contacto prolongado y
productores Incubar se alimentan por largo perodo de su hospedante y pue-
jas concentraciones. de la inhibicin de la proliferacin de estas estructu-
Zona de inhibicin ras, aun en condiciones de abundancia de nutrientes. den atacar un rango estrecho de organismos. Hay espe-
del crecimiento En ciertas situaciones este fenmeno puede resultar cies que viven independientemente, como saprofitas y en
Antibiticos Microorganismos beneficioso para muchos patgenos vegetales, ya que ciertas oportunidades como parsitas, son los parsitos
productores si germinaran cuando su hospedante no est prximo, facultativos. Los obligados, por el contrario, deben vivir
Son metabolitos secundarios, productos de desecho libe- seran eliminados por la poblacin nativa por compe- en las clulas, tejidos o fluidos de un organismo durante
Figura 6 - Microorganismos productores de antibiticos
rados por bacterias, actinomicetes, hongos, que juegan tencia o amensalismo. gran parte de su ciclo de vida.
evidenciados en medio de cultivo
nas sin colonizar, indicando que aparentemente habran es- importante rol en la lucha biolgica en ambientes natura- Rol en la naturaleza: durante mucho tiempo se sostuvo
casas limitaciones espaciales para el desarrollo de microor- les (captulo 4). que los antibiticos eran un fenmeno de laboratorio ya
ganismos. Aunque esta limitacin podra ocurrir a nivel de que las concentraciones requeridas para daar a otro or- Sembrar microorganismo productor de
microporos, donde una pequea partcula de materia orgni- Brindan supremaca a la especie productora y contribu- ganismo se alcanzaban raramente en la naturaleza.La antibitico en un lado de la placa
ca estimula la proliferacin de clulas y micelio fngico que yen a determinar el tamao de una comunidad, gober- sustancia debe desplazarse desde el organismo produc- Incubar para permitir crecimiento y
puede obstruir rpidamente el microhabitat. nando adems la sucesin de especies. Estas interac- tor hacia la especie sensible, pudiendo ser degradada o produccin de antibitico
Antibitico difunde en agar
ciones explican la eliminacin de ciertos patgenos para adsorbida. Estas controversias han sido superadas y se
Este tipo de interaccin antagnica es una de las ms el hombre y vegetales, el control de hongos fitopatgenos piensa que los antibiticos juegan un rol muy importante Masa celular de Streptomyces
difciles de demostrar en comunidades naturales y se re- cuando se incorpora al suelo restos orgnicos, o la des- en el equilibrio biolgico del suelo, siendo sobre todo
curre a modelos con suelo estril y la inoculacin simult- aparicin de bacterias extraas que llegan al rumen. activos a nivel de microagregados, donde la densidad
nea de los organismos sospechosos de interactuar. microbiana puede ser muy alta y las clulas estn en es-
Deteccin: cuando una suspensin diluida de suelo o mues- trecha proximidad. Siembra entrecruzada con
tras de agua se siembran en la superficie de medio rico, microorganismos
Amensalismo muchas de las colonias aparecen rodeadas de un halo de Modo de accin: su composicin qumica y modo de
inhibicin, donde no crece otro organismo (figura 6) (Madi- accin son muy variados: actan a nivel de membranas, Incubar para permitir crecimiento
Zona donde hubo crecimiento
Resulta de la produccin por una especie microbiana, el gan et al., 2000). La colonia produce una sustancia difusi- pared, ribosomas, interfiriendo metabolismos bioenerg-
antagonista, de sustancias: ble en el agar, presumiblemente un antibitico, que inhibe o ticos o sintticos (actividad respiratoria, sntesis protei- Zonas de inhibicin del crecimiento
mata a especies sensibles a concentraciones muy bajas. ca, etc.). Es frecuente la aparicin de resistencias ende microorganismos sensibles al
antibitico
inhibidoras (microbiostticas) tre las especies sensibles, quienes mutan o cambian la
Se confirma esta presuncin aislando el microorganismo estructura sensible de modo que el antibitico no la re-
txicas (microbicidas) con o sin lisis (microlticas) de y sembrndolo en otra caja en forma de lnea recta. Lue- conoce, o sintetizan enzimas que rompen o desnaturali- Figura 7- Espectro de accin de un antibitico
clulas o filamentos de especies muy prximas. go de 2-3 das se siembran perpendicularmente a estas zan al antibitico, como la penicilinasa. En general, la
lneas, varios organismos para probar su especificidad. resistencia est codificada en plsmidos y puede per-
Las sustancias pueden ser de: La supresin del crecimiento a distancias variables de la derse con stos, que a su vez pueden transferirla a or- Parasitismo
cepa productora refleja la sensibilidad frente a la sustan- ganismos sensibles.
baja especificidad: actan sobre gran nmero de micro- cia inhibidora (figura 7) (Madigan et al., 2000). Un parsito es un organismo que se nutre a partir de clu-
organismos, como por ejemplo, los cidos minerales u Enzimas extracelulares producidas por muchos micro- las, tejidos o fluidos de otro organismo, usualmente mayor,
orgnicos, alcoholes, detergentes. Son efectivas a altas organismos que ocasionan la lisis de organismos sensi- llamado hospedante, el que generalmente es injuriado en
concentraciones. Inhibidores inorgnicos como el H2O2, Sembrar una dilucin de
bles. La quitinasa, producida por bacterias y actinomice- el proceso. El parsito es dependiente en alto grado del
suelo sobre una placa de
NH4+, NO2-, CO2, H2S, NO3- son producidos por procesos medio selectivo tes lisa las paredes de hongos al actuar sobre la quitina. hospedante, a expensas del cual se nutre y con el que se
biolgicos y pueden alcanzar concentraciones que lle- La glucanasa acta sobre la microflora y microfauna (ne- mantiene en contacto fsico y metablico ntimo durante
gan a ser inhibidoras o txicas para especies sensibles. mtodos). considerable fraccin de su vida. Muy pocos organismos
Incubar estn libres del ataque de parsitos microbianos. Resulta
Compuestos orgnicos como los cidos grasos, alcoho- Colonias de Streptomy-
les, son sintetizados por una multiplicidad de especies y ces spp. La competencia y la antibiosis explican el fenmeno muchas veces difcil determinar las lneas de demarcacin
pueden ser inhibidores, en ambientes donde su degra- de micostasis o inhibicin de la germinacin de espo- entre parasitismo e interacciones relacionadas, sobretodo
dacin es lenta (cido lctico en alimentos). ras fngicas. La fungiostasis es la inhibicin, sin lle- la predacin y el parasitismo, ya que ambos implican bene-
gar a la muerte, de hongos (hifas, conidios, esclero- ficio para unos y perjuicio para otros organismos.
altamente especficas, como en el caso de antibiti- Capa fina de agar con cios, ascosporas). Se han reconocido algunas toxinas,
cos, sulfas, toxinas, enzimas, las que actan a muy ba- Microorganismos no microorganismo indicador antibiticos y compuestos voltiles como responsables Numerosos parsitos mantienen contacto prolongado y
productores Incubar se alimentan por largo perodo de su hospedante y pue-
jas concentraciones. de la inhibicin de la proliferacin de estas estructu-
Zona de inhibicin ras, aun en condiciones de abundancia de nutrientes. den atacar un rango estrecho de organismos. Hay espe-
del crecimiento En ciertas situaciones este fenmeno puede resultar cies que viven independientemente, como saprofitas y en
Antibiticos Microorganismos beneficioso para muchos patgenos vegetales, ya que ciertas oportunidades como parsitas, son los parsitos
productores si germinaran cuando su hospedante no est prximo, facultativos. Los obligados, por el contrario, deben vivir
Son metabolitos secundarios, productos de desecho libe- seran eliminados por la poblacin nativa por compe- en las clulas, tejidos o fluidos de un organismo durante
Figura 6 - Microorganismos productores de antibiticos
rados por bacterias, actinomicetes, hongos, que juegan tencia o amensalismo. gran parte de su ciclo de vida.
evidenciados en medio de cultivo
Se distinguen los: biticos provocando heterolisis, o bien puede ocurrir una sin KNO3 0,1 g KNO3 0,5g KNO3 ras, altas intensidades luminosas, bajos niveles de hu-
autolisis, por enzimas producidas por la propia clula o medad, brindan al organismo ventaja ecolgica indu-
hifa parasitada. Fusarium solo dable
endoparsitos, que habitan dentro de un organismo, como
los bacterifagos, los actinfagos, etc., y otros microorga-
nismos que viven dentro de hongos, algas, etc. y los El agregado de materia orgnica promueve la germina- Fusarium y tolerancia a fluctuaciones del ambiente: de tempera-
cin de esporas y cuerpos en reposo, se favorece el de- Agrobacterium tura, niveles hdricos, intensidad luminosa, etc.
ectoparsitos que se localizan externamente en sus sarrollo de las hifas, las que son atacadas ms fcilmente
hospedantes, menos frecuentes entre microorganismos. por los antagonistas en el suelo, contribuyendo a la de- Figura 5- Competencia por el nitrgeno entre un hongo y una capacidad de multiplicarse a bajas concentraciones
clinacin de la infeccin por el fitopatgeno (lucha bio- bacteria de nutrientes limitantes, propiedad de pocas especies,
Una pequea bacteria, de forma de vibrio, llamada Bde- lgica). Asi, clamidosporas de Fusarium solani se lisan como algunas algas que crecen bien a concentraciones
llovibrio, es parsita obligada de bacterias Gram negati- en suelos enriquecidos con quitina y laminarina, al esti- muy bajas de nitratos o fosfatos, y hongos que apare-
vas, entre ellas rhizobios, llegando incluso a su lisis. Su mularse el desarrollo de bacterias y actinomicetes quiti- Cuadro 2 - Efecto de aportes de glucosa y nitrato cen como contaminantes en medios sin N combinado y
ciclo de vida es muy particular: se desplazan a gran velo- nolticos. en la asociacin Agrobacterium radiobacter y que pueden usar trazas de nitrgeno orgnico conteni-
cidad, colisionan con las clulas que van a atacar por su Bdellovibrio Fusarium oxysporum das en los productos qumicos.
extremo no flagelado y un orificio en la pared producido Bacteria
por enzimas permite al parsito penetrar, el que se ubica Pared Glucosa% KNO3% Fusarium solo Fusarium + eficiencia en el uso de nutrientes limitantes: son fa-
en el espacio entre pared y membrana (figura 8) (Prescott Agrobacterium vorecidos aquellos organismos que pueden sintetizar
et al., 1999). La rotacin permanente ayuda a debilitar la citoplasma con niveles bajos de nutrientes asimilables
pared. 0 0 2,8 1,2
Membrana 0,25 2,9 1,0 requerimientos de factores de crecimiento: en am-
20 minutos 10 minutos
La membrana no es atravesada por el parsito pero se 0,50 3,1 0,8 bientes pobres, organismos prototrofos poseern ven-
vuelve porosa y la clula se lisa. En la superficie de cajas 2,5 2,8 2,9 taja frente a un auxtrofo para estas sustancias
de Petri con la especie hospedante, Bdellovibrio forma capacidad para sintetizar y almacenar sustancias de
placas lticas, similares a las producidas por infeccin por 1 0 5,5 2,1
150-210 minutos reserva y emplearlas cuando el aporte de nutrientes dis-
fagos. 10 segundos 0,25 5,2 1,9
0,50 5,4 1,9 minuye
No han sido descriptos muchos parasitismos entre bacte- 2,5 5,4 5,0 capacidad de desplazarse hacia reas en donde el ni-
20 minutos
rias. 3,0 0 5,3 1,8 vel de nutrientes limitantes es mayor (quimiostasis)
0,25 5,2 1,8
Los hongos sufren el ataque de numerosos parsitos, 0,50 5,4 2,0 Cuando materiales orgnicos se incorporan al suelo o
sobre todo de otros hongos en estructuras como clami- 2,5 5,2 5,2 aguas, los primeros colonizadores son en general las
doesporas, esclerocios, oosporas de especies de Penici- bacterias con alta actividad metablica y los hongos,
llum, Rhizoctonia, Thrichoderma, Glioclodium. Muchas con esporas que germinan fcilmente.
especies sobreviven por su alta velocidad de reproduc- Los competidores ms efectivos de este hongo fitopa-
cin, aunque las esporas pueden sufrir graves daos cuan- tgeno son organismos con requerimientos nutritivos En ambientes acuticos, es posible observar competen-
do son atacadas durante largos perodos por los parsi- simples. cia por la luz; la masa de fitoplancton limita la difusin de
tos. las radiaciones. El CO2 y el O2, poco soluble en el agua,
La capacidad de un organismo para competir est go- provocan tambin fenmenos competitivos entre heter-
Muchos hongos pueden penetrar en lquenes, afectando bernada por una serie de factores: trofos aerobios, sobre todo en aguas contaminadas con
a los componentes de la asociacin. residuos orgnicos.
alta velocidad de crecimiento: las especies que usan
Los protozoos son parasitados tambin por varios tipos los nutrientes limitantes rpidamente poseen sin duda En regiones ridas, la competencia por el agua ejerce im-
de bacterias y algunos hongos, llegando a veces a su li- ventajas sobre las de crecimiento lento portante rol en la sucesin de especies. La competencia
sis, por digestin de las paredes celulares. Figura 8- Parasitismo por Bdellovibrio. Arriba, esquema del por el espacio resulta ms difcil de demostrar. Adems, las
proceso en una bacteria gram negativa. Abajo: microscopa tolerancia a factores abiticos: la facilidad de crecer observaciones en microscopia electrnica de barrido en fi-
En el parasitismo actan enzimas extracelulares o anti- electrnica de la bacteria y su parsito en condiciones extremas, en bajas o altas temperatu- nos cortes de suelo, muestran la existencia de amplias zo-
Como vimos, las simbiosis varan segn los autores por pecfica, segn se realice entre organismos de la misma Fagos: son los ms conocidos parsitos de las bacterias, Existe evidencia de que los protozoos predatores acele-
el grado de unin entre los participantes (ecto o endosim- o diferente especie. actinomicetes, cianobacterias, que pueden causar su lisis ran procesos bioqumicos, incluyendo la descomposicin
biosis), el beneficio logrado, el grado de dependencia (sim- o lisogenizarlas al incorporarse a su ADN (captulo 5). de la materia orgnica, como consecuencia del hecho de
biosis facultativa-obligada) y la duracin de la misma: en La figura 4 esquematiza la competencia en medio lqui- que los protozoos evitan que las bacterias alcancen un
general involucran la mayor parte de la vida de los partici- do entre dos bacterias. El mejor competidor es en gene- Algunos virus son muy especficos, otros presentan un nmero muy grande que resultara autoinhibitorio. Se las
pantes. ral el que presenta menor tiempo de generacin, se mul- carcter ms polivalente. A pesar de ser aislados de la mantiene, adems, en estado prolongado de alta activi-
tiplica a la misma velocidad en cultivo puro y en mixto, mayora de los suelos agrcolas, es improbable que sean dad metablica.
La eleccin de la pareja no es en general un hecho ca- aunque su densidad final es frecuentemente menor en los responsables de la desaparicin de inculos impor-
sual, se reconoce cierta especificidad, distinguindola de cultivo mixto. El otro organismo crece a igual velocidad tantes de bacterias como rhizobios, cianobacterias, etc. Los protozoos pueden predar tambin a pequeas algas,
la protocooperacin. La asociacin es eminentemente en cultivo puro o mixto, pero su velocidad de crecimien- Los virus que atacan hongos han sido estudiados, aun- hongos, a pesar de que en este caso la presa es de ma-
exitosa y esto explica su amplia distribucin en ecosiste- to disminuye cuando la primera especie metaboliza el que se conoce menos su distribucin en la naturaleza. yor tamao. Se piensa que los protozoos consumen bac-
mas marinos, en el cuerpo de animales, en hojas, races, nutriente limitante. terias si stas estn suficientemente prximas, de modo
suelos, aunque algunos autores reconocen simbiosis con que la energa ganada en la predacin es mayor que la
efectos negativos (parasitismo). En el suelo, uno de los principales factores limitantes es Predacin requerida para predarlas. Cuando el nmero de bacterias
el carbono, y la competencia por este elemento se hace cae a valores en los que la energa requerida por el proto-
evidente cuando la densidad de la poblacin es alta. Al En este antagonismo el perodo de contacto es general- zoo para encontrar a su presa es igual o mayor que la que
Interacciones antagnicas agregar sustancias carbonadas fcilmente metabolizables, mente corto y la presa es muerta y digerida rpidamente. obtienen como alimento, entonces el protozoo cesa de
se observa el levantamiento de la inhibicin de la pobla- El predator vive, por lo general, libre, es mayor en tama- predar, y se reproduce.
Al introducir un inoculante biolgico, con rhizobios, Fran- cin de dbil poder competitivo. o que su presa y presenta menor especificidad en sus
kia, bacterias solubilizadoras de fosfatos, en ambientes hbitos alimenticios. Como vimos, las interacciones antagnicas pueden con-
densamente colonizados como el suelo, es frecuente ob- El cuadro 2 muestra el efecto del agregado de glucosa y ni- ducir a una disminucin importante e incluso al fracaso de
servar que la poblacin no logra sobrevivir y desaparece. trato de potasio en la competencia entre un hongo y una bac- Constituye una de las ms dramticas interacciones en- prcticas agrcolas, como la inoculacin de semillas y el
Como vimos, cada microorganismo requiere de un con- teria, en suelo neutro. Se aprecia que la competencia fue al tre microorganismos en la naturaleza. Las bacterias son suelo con organismos de inters en la fijacin del N2, so-
junto de condiciones nutricionales y ambientales que le inicio por el carbono, pero cuando ste es aportado se mani- los organismos ms expuestas al ataque de predatores, lubilizacin de fosfatos, control biolgico de microorganis-
permiten desarrollarse. fiesta la limitante del otro nutriente esencial, el nitrgeno. sobre todo protozoos, algas, hongos. El predator exhibe, mos fitopatgenos, etc. La predacin se encuentra entre
por lo general, hbitos alimenticios fagotrficos, ingiriendo las causas ms importantes.
Las interacciones antagnicas pueden explicar la desapa- En la figura 5 se esquematiza el desarrollo del hongo en organismos vivos, a pesar de que algunos predatores li-
ricin o disminucin significativa de algn organismo de el caso en que el carbono asimilable es suficiente. Como san la presa y asimilan slo los constituyentes solubles. En resumen: las relaciones tanto benficas como an-
inters cuando las condiciones fsico- qumicas son las se observa, en general aparece la deficiencia por el nitr- Muchos protozoos viven toda su vida como fagotrofos, tagnicas entre microorganismos permiten explicar he-
adecuadas. geno. El modelo experimental es suelo estril inoculado alimentndose de millones de bacterias por cada ciclo chos aparentemente contradictorios, como son la pre-
simultneamente con el hongo y la bacteria. celular. La presa, sin embargo, no desaparece completa- sencia de microorganismos exigentes nutricionalmen-
mente, existe un equilibrio dinmico: el cambio en un gru- te en ambientes pobres, como el agua de mar u oca-
Competencia log10 N
po conduce a cambios cuali y cuantitativos en el otro y la no, a supremaca de ciertos agentes en situaciones
Clulas/mL poblacin bacteriana atacada estimula su metabolismo y desfavorables, el control biolgico que se ejerce sobre
En ambientes naturales, suelo, aguas, los sustratos ener- Especie A sola o en mezcla se divide ms rpidamente, evitando en muchos casos su microorganismos patgenos o deletreos de plantas.
9
gticos y los nutrientes son por lo general limitantes como total extincin. Los suelos contienen una enorme diversidad de pobla-
para mantener altas poblaciones microbianas, las que in- 8 ciones microbianas y aun ignoramos muchos de los
teractan compitiendo por los sustratos: se habla de com- Especie B sola Muchas bacterias son resistentes a la predacin, excre- factores que controlan la composicin de esas pobla-
petencia nutricional. Si, excepcionalmente, el ambiente 7 tando toxinas inhibidoras de los protozoos, pigmentos o ciones.
es rico en nutrientes, la competencia puede ejercerse por 6
formando estructuras ms resistentes a condiciones ad-
el espacio, la luz, etctera. B creciendo con A versas y a la predacin, como los cistos. La habilidad de
5 la bacteria para mantener sustanciales poblaciones de- Bibliografa
Este tipo de interaccin ejerce un profundo impacto en la pende de su constante multiplicacin en presencia del
3 6 9 12 Horas
sucesin de microorganismos, en la seleccin natural y protozoo, por lo que ciertas bacterias no se reducen por Atlas, R. M. y R. Bartha, Microbial Ecology: Fundamen-
en la composicin de las comunidades microbianas. Po- Figura 4 - Modelo de competencia entre bacterias en medio los protozoos debajo de cierta densidad crtica, en el sue- tals an Applications. 3 ed., 1993, Benjamin/Cum-
demos hablar de competencia interespecfica o intraes- lquido lo y en medio lquido. mings, Publishing Co. New York
Bottomley, P. J. Microbial Ecology, En: Principles and gentes nutricionalmente en ambientes pobres como tencia independiente y funciones fisiolgicas propias. La algas y protozoarios: algunos fotoauttrofos viven y
Applications of Soil Microbiology, 1998, Sylvia, Fu- el agua del ocano? simbiosis ocurre bajo condiciones adversas para cada se mantienen como simbiontes en los protozoos, de
hrmann, Hartel y Zuberer: (eds), Prentice Hall, Lon- 2) A qu se denomina comensal? Explique la participacin uno de los integrantes: bajo contenido en materia orgni- los cuales obtienen nutrientes y un ambiente protec-
dres de estos microorganismos en el proceso de degradacin ca, temperaturas desfavorables, sequedad, etc.: el hon- tor, incluso algunos no pueden desarrollarse fuera del
Madigan, Martinko, Parker. Brock, Biologa de los mide macromolculas por un consorcio microbiano? go obtiene materia carbonada de la fotosntesis del alga, hospedante. Una pequea bacteria denominada Ka-
croorganismos. 2000. Prentice Hall International. 3) Por qu no son tan comunes las asociaciones simbi- y sta se beneficia con el aumento de la superficie de ppa ha sido descripta como endosimbionte de un pro-
Killham, K. Soil Ecology. 1994, Cambridge University ticas entre procariotas? Describa alguna absorcin y del agua retenida en la hifas (figura 3). tozoo Paramecium aurelia, es requerida para su mul-
Press. Cambridge, Londres 4) Al introducir un microorganismo en un suelo, ste pue- tiplicacin y ha sido liberada del hospedante por m-
Prescott, Harley, Klein. Microbiologa, 1999, Mc Graw- de desaparecer. Analice las causas de origen biolgi- alga todos fsicos o qumicos.
Hill Interamericana co y explique cmo podra determinar la causa real de
este fenmeno protozoarios flagelados (Cyanophora y Peliana) y el
5) Por qu un microorganismo puede llegar a producir ameboide Paulinella han sido descriptos en asociacin
Preguntas de repaso un antibitico? con una cianobacteria denominada Cyanellae, la cual
6) Cual es el mayor problema que enfrenta hoy da la se mantiene perfectamente regulada en el protozoo, con
1) Cmo se explica la presencia de microorganismos exi- industria farmacetica? hongo divisiones celulares balanceadas: el hospedante alber-
ga dos clulas de la cianobacteria (sin pared) que en la
divisin se reparten en cada clula hija.
El simbionte favorece a su pareja por varios mecanismos:
aumento de la velocidad de crecimiento: el protozoo

con el alga especfica crece ms rpidamente que slo.
Estimulacin de la actividad metablica (respiracin, etc.)
fuentes de C por la fotosntesis: las algas en simbio-

sis en lquenes, o en protozoos o invertebrados acuti-
cos o con plantas, fotosintetizan en exceso para sus
necesidades y satisfacen as los requerimientos de sus
asociados. La capacidad de muchos paramecios para
desarrollarse en medio inorgnico en la luz cuando es-
tn asociados a un alga clorofcea, explica esto
conversin de nutrientes no disponibles para el sim-

bionte en disponibles, por ejemplo los celulolticos en el
rumen, protozoos en el tracto digestivo de termites, que
se alimentan de los productos de las fermentaciones
Figura 3- Lquenes. Arriba: partes de un lquen, hifas fngicas microbianas
y componente algal, abajo: liquen sobre soporte slido.
generacin de CO2 para la fotosntesis, o la produc-
Muchos lquenes poseen una cianobacteria fijadora de N2, cin de O2 para el simbionte por accin de la actividad
constituyndose en importantes colonizadores de suelos fotosinttica.
pobres, desrticos, o muy fros.
provisin de factores de crecimiento, utilizacin de
levaduras como Lypomyces starkey estimulan el creci- metabolitos txicos, proteccin contra altas intensidades
miento y fijacin del N2 de Beijerinckia indica. Se des- luminosas, desecacin, parsitos, son otros de los me-
cribe esta asociacin como una simbiosis. canismos involucrados, en las asociaciones simbiticas.
cada integrante puede aportar fragmentos de la mol- miento del biodigestor. Esta asociacin se denomina
cula de un factor de crecimiento, como la vitamina B1 o tambin sintrofia.
tiamina: A (tiazol+ y piramidina-) y B (tiazol- y pirimidi-
na+), la pareja sintetiza la tiamina formada por tiazol y
pirimidina, requerida por ambos. Cuadro 1- En biodigestores anaerobios (sintrofismo)
Fijacin biolgica de N2 en la rizosfera
un hetertrofo produce CO2 para un alga, quien a su

turno libera el O2 necesario para el primero
una poblacin destruye una toxina que perjudica a su
Syntrobacter c. proponico
Methanospirillum 4H2 + CO2
acetato + CO2 + H2
CH4 + 2 H20 15 y en asociaciones nodulares
asociado y ste, libre del inhibidor, aporta un compues- Simbiosis
to necesario para la especie
Azotobacter y celulolticos en ambientes pobres en ni- Involucran relaciones bastante duraderas en las cuales Fijacin de N2 en la rizosfera lum notatum de la variedad batatais realizado por el gru-
dos o ms especies viven en inmediata proximidad y ob- po de Dbereiner al comienzo de los aos 70, en Brasil,
trgeno y ricos en pajas. El primer organismo le brinda
tienen beneficios mutuos de su interaccin. En un hbi- La eficiencia de la fijacin de organismos hetertrofos numerosos trabajos sealan estimulacin en la rizosfera
el nitrgeno fijado va excrecin y el segundo hidratos
tat dado, la simbiosis resulta casi siempre de carcter evaluada en medios de cultivo estticos, es baja: 10 a de cultivos de inters econmico, como cereales, gram-
de carbono simples
obligatorio, para que los simbiontes realicen sus fun- 50 mg N fijado/g sustrato carbonado consumido. As, neas forrajeras, por especies de Azotobacter, Beijerinc-
ciones vitales. Algunos bilogos emplean el trmino mu- para fijar 100 kg N/ha/ao se requerira el metabolismo kia, Azospirillum, Bacillus, Clostridium, etc. (Dbereiner,
tualismo para referirse a estas asociaciones y recono- de aproximadamente 10 toneladas de materia orgnica, Pedrosa, 1987; Dbereiner et al, 1992).
Densidad ptica muy difcil de reunir en suelos sometidos a agricultura
cen las simbiosis mutualsticas, en donde ambos inte-
150 tradicional. Se reconocen varios mecanismos de promocin del cre-
grantes se benefician, y las simbiosis parsitas, en las
cuales un integrante se beneficia pero el otro no se afec- cimiento vegetal por estos organismos:
Cultivo mixto
ta, o a veces sufre perjuicio ms o menos severo (no La fijacin biolgica del nitrgeno (FBN ) es favorecida en
100 usaremos en este texto esta acepcin). Consideraremos ambientes como la rizosfera, regin del suelo donde la fijacin biolgica del N2
a las simbiosis cuando al menos un integrante de la aso- actividad microbiana es modificada por la presencia de
ciacin obtuvo algn beneficio. las races, la filosfera, superficie de las hojas y la esper- liberacin de fitohormonas y estimulacin de la ex-
L. arabinosus matosfera, zona del suelo afectada por la presencia de crecin de las mismas por la raz colonizada
50 Los lmites de separacin de ambas resultan a veces dif- semillas y granos. (captulo 13).
S. faecalis
ciles de determinar. Adems, el ambiente puede ejercer proteccin frente a microorganismos fitopatgenos
Tiempo La actividad de los diazotrofos es ms eficiente en estos
profundos cambios en las relaciones, de modo que una
asociacin que comenz siendo mutualstica puede vol- ambientes por: En las dcadas del 70 y del 80 se afirmaba que la FBN
Figura 2 - Asociacacin sinrgica entre Lactobacillus verse parsita, o viceversa. era la principal causa de estimulacin del crecimiento
arabinosus y Streptococcus faecalis * los aportes de sustratos carbonados a partir de los vegetal, pero las determinaciones de actividad de la nitro-
Algunas simbiosis involucran microorganismos entre s, productos de la fotosntesis que actan como esque- genasa no evidenciaron niveles muy altos en rizosferas
otras incluyen microorganismos con insectos, plantas y letos carbonados y fuentes de energa de cereales y otros cultivos y los ensayos con N15 sea-
El cuadro 1 seala la importancia de este tipo de asocia- animales superiores. Analizaremos solamente aquellas laron incrementos entre 10- 50 kgN.ha-1.ao-1.
ciones en biodigestores rurales, donde una sucesin de entre microorganismos, muchas veces no distinguibles * el microambiente con baja pO2, que permite el accio-
microorganismos asegura la degradacin de la materia fcilmente por el tamao submicroscpico de la mayora nar de la N2asa La contribucin de los otros mecanismos sealados es
orgnica en anaerobiosis y la liberacin final de metano de los integrantes. reconocida y evaluada en los ensayos de inoculacin.
(captulo 21). Un grupo de organismos libera hidrgeno, * la transferencia de los productos de la fijacin (ami- Otras bacterias han sido descriptas en la bibliografa como
necesario para el accionar del otro grupo, que lo consu- lquenes, la simbiosis ms conocida entre un alga o una nocidos, uredos, protenas) fuera de la zona de fija- estimuladas en la rizosfera: Bacillus spp., Clostridium spp.
me. A su vez, el segundo grupo mantiene concentracin cianobacteria y un hongo: ficobionte y micobionte. Los cin, hacia las hojas, frutos, evitando as los efectos en suelos de arroz y trigo; bacterias sulfatorreductoras,
baja de H2 y promueve la fermentacin de los cidos lquenes son considerados nuevos organismos con es- inhibitorios sobre el proceso. en suelos inundados de arroz; Bacillus y Enterobacter cloa-
grasos y la produccin de H2 que regula el funciona- tructura externa diferente a la de los simbiontes, con exis- cae en pasturas de Agrostis tenuis, trigo y festuca. Espe-
Desde el primer informe sobre la estrecha asociacin en- cies de Azotobacter fueron estimuladas en cultivos de maz
tre Azotobacter paspali y ecotipos tetraploides de Paspa- y trigo y Azospirillum en pasturas naturales de la Patago-
nia, Argentina. Se determin efecto estimulante de la ri- reunirse para favorecer la fijacin del N2 en la rizosfera de mesfilo y alcalinizante en ambiente cido Crecen lentamente y esta ventaja les permite competir con
zosfera de sorgo, maz, mijo perla y mijo comn sobre arroz. otros quimihetertrofos en la naturaleza. Muchas veces se
Azotobacter, Azospirillum y Clostridium en el campo, so- superficies adecuadas para la proliferacin: un macro o observan al microscopio clulas bacterianas completamente
bre todo en los dos perodos ms crticos en N para los Algunos de los factores que afectan la fijacin del nitrge- microorganismo puede resultar una superficie adecua- rodeadas de un ectocomensal, que se adhiere especfica-
cultivos: floracin y grano al estado lechoso. no a nivel rizosfrico son: da para la colonizacin por el comensal, brindndole mente, en general en forma perpendicular a la clula (figu-
ventaja ecolgica. ra 1). Se fijan a organismos muy variados, como algas ver-
Se postula la existencia de lectinas que uniran especfi- Fotosntesis: la provisin de hidratos de carbono y otras des y cianobacterias, diatomeas y bacterias no relaciona-
es frecuente observar bacterias que se desarrollan so-
camente los espirilos a los pelos capilares de ciertas gra- sustancias a nivel radical est gobernada por el tipo y la das, de cuyas excreciones se nutren.
bre algas, adhirindose a los organismos fottrofos (ec-
mneas. En presencia de nitrgeno combinado, la bacte- intensidad de la fotosntesis. Experiencias con cultivos
tocomensalismo).
ria slo se asocia al mucigel del pice y a clulas epidr- evidencian abrupta cada de la actividad nitrogenasa
micas no diferenciadas. cuando las plantas se sombrean, o se corta la parte Un organismo puede proveer hbitat favorable para su Protocooperacin
area; aunque se ha observado en algunas experien- desarrollo a otro, el comensal no perjudica ni beneficia al
cias otro pico en horas de la noche, a expensas de las organismo que lo alberga (endocomensalismo). Estas Estas relaciones involucran beneficio mutuo para dos o
Ecologa de las asociaciones rizosfricas reservas carbonadas. relaciones derivan ocasionalmente hacia el parasitismo. ms especies y presentan carcter bastante laxo, es de-
cir que la existencia de cada integrante de la asociacin
A diferencia de las asociaciones nodulares, estas asocia- Factores fsicos: como es de suponer, una excesiva hu- Como se observa, estas asociaciones son muy frecuen- en un ambiente no requiere una especie particular, sino
ciones rizosfricas, llamadas tambin simbiosis asociati- medad o extrema desecacin afectarn de gran manera a tes en la naturaleza y explican la existencia de organis- que muchos integrantes de la poblacin pueden brindarle
vas o rizocenosis, se encuentran muy afectadas por las este proceso. La temperatura es otro de los factores que mos exigentes en el plano nutricional en ambientes po- los requisitos para su crecimiento. Los organismos que
fluctuaciones del ambiente, que impide muchas veces una inciden limitando el proceso cuando los umbrales trmicos bres, como en suelos o aguas. interactan bajo ciertas condiciones ambientales, pueden
fijacin acorde a las necesidades del vegetal. La figura 1 son muy bajos o muy altos. Rangos entre 18 y 30C se proliferar independientemente, en otras condiciones. Se
presenta la compleja serie de requerimientos que deben citan como ptimos para cultivos en zona templada. En medios acuticos, son muy importantes las asociacio- las denomina tambin mutualismo no obligatorio, simbio-
nes entre algas y otros microorganismos, como bacterias, sis nutricional o sintrofismo.
Aire Luz actinomicetes y hongos, quienes estimulan el desarrollo
O2 CO2 N2 H2 O de los fottrofos por la excrecin de factores de crecimien- Se reconocen algunas categoras de protocooperacin:
to, liberando CO2, o aportando productos de la minerali-
zacin del nitrgeno, etc. sntesis y degradacin de macromolculas: polisacri-
Fotosntesis
dos como la celulosa, lignina, etc. son degradados por
difusin O2 por la planta (luz, temperatura) potencial hdrico difusin N2 cultivos mixtos.
Planta translocacin un organismo provee una fuente de energa a su pareja
y sta le aporta algn nutriente esencial
Rizosfera aceptor de e-
redox alto exudacin cada integrante de la pareja excreta un factor de creci-
(C, energa) miento sin el cual el asociado no puede desarrollarse
FBN A tiamina- B tiamina+

redox ptimo (niveles ptimos de C, riboflavina+ riboflavina -
temperatura, exudacin , etc.)
Los organismos A y B pueden crecer juntos en ambientes
represin pobres ya que cada organismo excreta el factor de creci-
redox bajo NH4 P, etc. miento requerido por el otro. La figura 2 muestra el desa-
otros microorganismos rrollo de organismos aislados de la leche: en medio defi-
ciente en fenil-alanina (aminocido) y cido flico (vitami-
NO3 Figura 1- Comensalismo: adhesin de clulas de na), ni Streptococcus faecalis ni Lactobacillus arabinosus
materia orgnica mineralizacin de N Caulobacter a Bacillus (arriba) y con Azotobacter (abajo), se desarrollan, ya que el primero requiere cido flico y el
fertilizantes N suelo que usan materiales orgnicos segregados, en ambientes segundo fenilanina. El cultivo mixto permite el desarrollo
acuticos. de ambos.
Figura 1- Fijacin biolgica de N en la rizosfera de arroz y efecto de factores edficos, climticos y del cultivo
2
el amensalismo: una especie es perjudicada por otra sustrato A sustrato B productos finales Nutrientes: el nivel de N combinado fcilmente asimi- Se observan: cambios en la morfologa radical de plan-
que libera sustancias qumicas como cidos orgni- lable en el suelo (amonio y/o nitrato) afecta este pro- tas inoculadas, aumento del nmero de races laterales
cos o minerales, toxinas, bacteriocinas, antibiticos, org. a org. b ceso. Se tiende a la seleccin y empleo de mutantes profusamente cubiertas con pelos radicales.
enzimas de diazotrofos resistentes a altos niveles de N mineral
y que adems excreten rpidamente el amonio fijado. Se han identificado giberelinas del tipo A1, A3 e iso-A3 en
Liberacin de sustancias biticas: los factores de cre-
predacin, que implica el ataque directo de una espe- Una ligera fertilizacin en la siembra (10-30 kg N/ha) cultivos de A. ipoferum (Bottini et al, 1989) y la inoculacin
cimiento son sintetizados por algunos microorganismos
cie sobre otra, con la muerte de la presa es empleada en gramneas, en suelos pobres. El esen maz increment el peso seco, la densidad de pelos
y su excrecin permite la proliferacin de auxtrofos (que
tablecimiento del cultivo estimula la FBN rizosfrica radicales y la longitud total de la raz, con efecto similar al
los requieren pero no los pueden sintetizar). As, mu-
parasitismo, por el cual un organismo se alimenta de que contribuye con parte de la demanda en nitrgeno. agregado de 40 pg/mL de GA3 y 2000 pg/mL de AIA.
chos aislamientos a partir del suelo o aguas no crecen
clulas, tejidos o fluidos de otro organismo, usualmente en los medios corrientes de laboratorio si no se los pro- Fsforo, molibdeno, hierro, inciden en el funcionamien-
Para verificar estos efectos se trabaja con mutantes de
mayor, llamado hospedante, el que es injuriado, pudien- vee de ciertos aminocidos, vitaminas, o bases pricas to de la nitrogenasa. El fsforo actuara ms bien a
espirilos sin nitrogenasa funcional, pero capaces de ela-
do incluso morir o pirimdicas. En el laboratorio se puede observar f- nivel del vegetal.
borar sustancias del tipo de las fitohormonas, para incluir-
cilmente este tipo de interaccin: en un medio nutricio- las en las parcelas control.
Gases: es bien conocido el efecto del O2 en la enzi-
nalmente inadecuado, las colonias de un organismo de
Interacciones sinrgicas ma. En general, la rizosfera de la mayora de los culti-
inters se desarrollan en la vecindad de colonias de Estos microorganismos son empleados como inoculan-
vos presenta baja pO2, alto nivel de CO2 y suficiente
especies que excretan los nutrientes requeridos por la tes en zonas agrcolas de distintas partes del mundo, en
Comensalismo N2, que nunca es limitante, como para favorecer la fi-
primera especie (colonias satlites). maz, arroz, cultivos hortcolas, trigo, yute, algodn, caa
Constituye una interaccin muy comn en la naturaleza, jacin.
de azcar (Urquiaga, Dbereiner, 1991), solos o en com-
en donde los procesos de degradacin de molculas com- org a vitamina B org b (comensal) pH: ciertas rizosferas presentan pH demasiado bajo binacin con fertilizantes (Gonzlez-Lopez, 1992).

plejas son realizados por lo general por poblaciones mix- para el desarrollo de diazotrofos neutrfilos, como el
tas (cadenas alimenticias), cada una de las cuales ofrece * En aguas: algas auxtrofas para numerosas vitaminas Azotobacter. El cuadro 1 muestra el efecto de inoculacin (I) de maz
a las otras un sustrato ms simple. El organismo que reci- se asocian con bacterias heterotrficas productoras de con tres cepas de Azospirillum en suelo Haplustol, de
be el beneficio se denomina comensal y la relacin es vitaminas Pesticidas, la aplicacin de altas dosis de herbicidas y Argentina. Adems de un incremento en los rendimien-
con frecuencia, pero no necesariamente, casual, ya que fungicidas puede afectar las densidades de estas bac- tos similar a la fertilizacin (N) con 60 kg N-urea/ha en
gran nmero de especies puede colaborar, existiendo poca * En el rumen, se da coexistencia de organismos exigen- terias. Alta inhibicin de la actividad nitrogenasa se en- los tratamientos inoculados, se apreci importante de-
especializacin entre los asociados. tes y otros que producen y liberan factores de creci- contr en rizosferas de numerosos cultivos. sarrollo de races y persistencia de altos niveles de in-
miento (captulo 18). culo (108 clulas.g-1 raz en la cosecha ) (Fulchieri y
Algunos ejemplos implican una estrecha unin fsica en- Frioni, 1994).
tre ellos, en otros casos no se requiere proximidad entre Remocin de factores inhibidores: una especie me- Inoculacin
los individuos. Ejemplos de esta asociacin: taboliza toxinas u otros factores inhibidores, permitien-
Desde la dcada de los sesenta, se citan en la bibliogra-
do, entonces, la multiplicacin de su asociado. Las va- Cuadro 1 - Inoculacin de maz con Azospirillum
fa incrementos en los rendimientos de maz y trigo de un
Modificacin de un sustrato: una poblacin convier- riaciones del pH o del Eh, la remocin del O2, la reducen Ro Cuarto, Argentina (datos en cosecha)
10 a un 20% al inocularlos con Azotobacter spp. El tema
te un sustrato no disponible para otra poblacin en un cin de la presin osmtica, los cambios en los niveles
ha sido retomado en la dcada de los setenta, donde se
producto que puede ser asimilado y usado como nu- de nutrientes por la actividad biolgica, son causas de N-urea Inoculada Testigo
citan aumentos de materia seca sobre el control de un
triente: beneficio para el comensal Peso seco parte 90,84a 79,16a 46,19b
66% al inocular Digitaria decumbens y Pannicum maxi-
mum con Azospirillum. En mijo perla, la inoculacin con area (g/planta)
bacterias celulolticas y Azotobacter spp en suelos que Ejemplos: Peso seco 34,00 65,50 26,93
han recibido aportes de restos vegetales 40 kg N/ha/ao produjo materia seca equivalente a una
organismo sensible a un biocida y otro que lo degrada raz (g/planta)
fertilizacin con 80 kg N/ha/ao, a los 70 das de creci-
Nitrosomonas y Nitrobacter, en medio rico en amonio miento. Una ligera fertilizacin nitrogenada en la siembra log10 N 5,82b 8,03a 4,55b
org. b Azospirillum/g raz
favorece la fijacin rizofrica.
degradacin de polmeros como celulosa, almidn, qui- N granos por espiga 333 359 109
tina, sustancias pcticas, lignina, pesticidas: intervienen org. a enzimas sustrato productos finales
En algunos ensayos se obtiene ms respuesta en los tes- Peso seco
primero poblaciones especializadas que permiten el de- antibitico inactivado tigos regados con el filtrado acelular de los diazotrofos, granos(kg/ha) 4122a 4447a 2792b
sarrollo posterior de otras que emplean molculas ms indicando que los efectos pueden explicarse por la pro- Dos o ms tratamientos sealados con la misma letra no di-
simples (cadena alimenticia). aerobio y anaerobio dentro de un agregado en suelo duccin de sustancias reguladoras del crecimiento vege- fieren por Tuckey 5%.
aireado tal por estos organismos.
La evaluacin de la FBN por Azospirillum en la rizosfera (cuadro 2). La contribucin a la economa del nitrgeno
de numerosos cultivos de inters agronmico se ha incre- en suelos de la zona templada no sera tan importante,
mentado en los ltimos aos, pero su importancia agro- pues son muy afectadas por la desecacin.
nmica es actualmente menor que lo que se prevea.
En resumen Nostoc, Anabaena, mantienen su efecto estimulante lue-
14 Interacciones entre microorganismos

go de la esterilizacin, y se piensa que su accin se debe
La produccin de sustancias promotoras del crecimien- a sustancias del tipo de las citoquininas, ms que a auxi-
to vegetal parece ser el principal mecanismo. La coloni- nas y/o giberelinas, ms termolbiles.
zacin bacteriana ocurre principalmente en la mayora
de las especies vegetales estudiadas en la zona de elon- La prctica de la inoculacin se va popularizando, los
gacin de las races cultivos son fciles de propagar en agua con sales mine-
rales a la luz y su transporte se facilita si se mezclan con
Azospirillum estimula la densidad y longitud de pelos arena y se secan. Los productores comienzan a propagar En la naturaleza, las poblaciones microbianas raramente A pesar de la estrecha proximidad en que puedan encon-
capilares, la velocidad de aparicin de races latera- sus inculos en piletas vecinas a los cultivos de arroz. El se presentan aisladas. En ciertos hbitats, como por ejem- trarse dos o ms especies que coexisten en el espacio o
les y la superficie radical (Okon, 1994). La intensi- cuadro 2 muestra en a) el efecto de la inclusin de Azolla plo en la vecindad de las races, en restos de materia or- en el tiempo, pueden no afectarse mutuamente. El neu-
dad de estos efectos depende de la especie vegetal en el crecimiento y contenido de N en plantas de arroz, gnica, en aguas o cuando se incorporan al suelo restos tralismo es evidente in vitro cuando las velocidades de
y del cultivar y de la concentracin del inculo de con y sin perodo seco en el cual el helecho se seca y de cosechas, fertilizantes, etc., los componentes de la crecimiento y las densidades finales de dos poblaciones
Azospirillum. En muchos ensayos el ptimo fue de muere y en b) la inoculacin con Tolypothrix en el agua de comunidad son afectados significativamente por sus ve- son semejantes. La demostracin del neutralismo in vivo
alrededor de 1.l07 unidades formadoras de colonias riego en el mismo cultivo. cinos. Dada la proximidad estrecha de los organismos es ms difcil. Es probable que ocurra cuando las densi-
(ufc)/semilla-1 o plntula-1 cuando sus densidades son altas, las interacciones entre dades de las poblaciones son bajas, el aporte de nutrien-
En la mayora de los suelos agrcolas de zonas templa- organismos son importantes en esos ambientes. tes abundante y son satisfechos los requerimientos para
La inoculacin con Azospirillum afecta la concentradas, el aporte en N por cianobacterias no es muy alto, el desarrollo de las poblaciones, de modo que no interac-
cin de cido 3-indol actico y 3-indol butrico libres, as en parte por los requerimientos de luz y humedad. Ade- Son precisamente estas interacciones entre habitantes de ten para los nutrientes, el espacio, etctera, pero cuan-
como las velocidades especficas de respiracin y acti- ms muchas veces la superficie de los suelos se dese- una comunidad y las interrelaciones entre los organismos do el ambiente comienza a modificarse por la actividad
vidades de enzimas del ciclo de los cidos tricarboxli- ca por largos perodos de tiempo. Una irrigacin oportu- y su ambiente abitico qumico y fsico, las que regulan la biolgica o cuando el aporte de nutrientes comienza a dis-
cos y de la gliclisis en races de maz y otras plantas. na favorece la prctica de inoculacin. Son muy emplea- composicin de la microflora y la microfauna de un eco- minuir, las especies comienzan a interactuar.
Esto contribuye a que las races tomen ms agua y nu- das en cultivos inundables, como es el caso del arroz. sistema.
Se distinguen tres tipos de asociaciones sinrgicas, a
trientes minerales que favorecen un mayor crecimiento
Se establece un equilibrio dinmico, resultante de las pesar de que las lneas de demarcacin no son siempre
de las plantas inoculadas
interacciones biolgicas y no biolgicas. Este equilibrio ntidas y estn muy afectadas por el ambiente:
Cuadro 2 - Manejo del cultivo de arroz con Azolla (a) y
El efecto de la inoculacin parece evidenciarse princi- Tolyothrix (b) se mantiene en un ecosistema dado, y la capacidad para comensalismo : un organismo se beneficia mientras
palmente en los estados tempranos del desarrollo ve- mantener la estabilidad de una comunidad en un medio que el otro no es afectado
getal, durante las primeras semanas luego de una co- a) Arroz por maceta ambiente variable es denominada homeostasis. Al cam-
rrecta colonizacin de las races tratamiento agua peso seco (g) N total(mg) biar las condiciones del medio, entran en juego mecanis- protocooperacin, simbiosis nutricional, o mutua-
testigo continuo 37 221 mos autorreguladores o reacciones homeostsicas para lismo, en donde el beneficio es mutuo, sin llegar a pre-
La evaluacin de datos acumulados en los ltimos 20 c/sequa 40 240 reestablecer las relaciones existentes previamente. sentar carcter obligatorio
aos indica que la inoculacin a campo Azospirillum, c/Azolla continuo 43 316
simbiosis verdaderas, en las cuales los integrantes se
puede incrementar el crecimiento de importantes culti- c/sequa 49 465 Dos o ms poblaciones pueden interactuar con tres con-
secuencias: benefician en situaciones en que ninguno de ellos po-
vos (Okon y Labandera, 1994).
dra realizar una funcin vital o sobrevivir
b)
condicin rendimiento % de incremento Poblaciones Efecto Interaccin Las interacciones antagnicas presentan un carcter
Empleo de las cianobacterias como suelo mal testigo 45 perjudicial para una parte de la poblacin e incluyen la:
biofertilizantes drenado inoculado 60 33 A B 0 neutralismo
suelo drenado testigo 30 + sinergismo competencia por los nutrientes (C, N, S, P, etc.), el es-
Desde la dcada de los sesenta se informan en Japn inoculado 38 26 - antagonismo pacio, luz, O2, CO2
resultados de inoculacin en suelos inundados de arroz
Las clulas en simbiosis presentan tambin ms bajo con- leguminosas se han incrementado rpidamente. Boussin-
tenido de grnulos de cianoficina que representan reser- gault puso en evidencia en 1838 la capacidad de las legu-
vas de nitrgeno con cido asprtico y arginina en rela- minosas en emplear el N2 atmosfrico, pero, solamente
cin 1/1 molar. Los grnulos de polifosfatos son abun- 50 aos ms tarde, Hellriegel y Wilfarth demostraron de
dantes en simbiosis. Las ficobiliprotenas constituyen manera indiscutible que slo las leguminosas noduladas
reservas de nitrgeno, adems de actuar como pigmen- pueden hacerlo y que el lugar de fijacin eran los ndu-
tos accesorios en el fotosistema II. los. Luego de estas clsicas experiencias se pudo com-
probar fehacientemente que el lugar de fijacin son los
La luz es necesaria para la fijacin. Los lquenes toleran ndulos y que los microorganismos se encuentran en el
condiciones extremas: en regiones de Suecia y Noruega, suelo o deben inocularse.
la fijacin ocurre a OC y los organismos sobreviven a
heladas prolongadas y a la sequedad, aunque no fijan N2
hasta que se rehumedecen. Constituyen la vegetacin
principal de ambientes extremos como piedras, zonas are-
nosas, facilitando luego la colonizacin por otros microor-
ganismos. La cianobacteria posee escasa actividad de
glutamino sintetasa, bloqueando parcialmente la ruta
primaria de asimilacin de NH3, que es liberado y transfe-
rido al hongo.
Se citan niveles de fijacin de nitrgeno de 25-50kgN/ha/

ao para cianobacterias en vida libre, 12 a 21kgN/ha/ao
para asociaciones con Gunnera, 300 en Azolla y 40-40kgN/
ha/ao, en lquenes.
Fijacin de nitrgeno por simbiosis

nodulares
Asociaciones rhizobio-leguminosa
Bacterias hetertrofas conocidas como rhizobios se aso-
cian en estructuras nodulares fijadoras de N2 en legumi-
nosas (figura 2), contribuyendo de manera fundamental a
la fertilidad del suelo, a la produccin de alimentos para el
hombre y animales y a la economa de fertilizantes nitro-
genados, ya que muchas de las leguminosas son autosu- Figura 2- Leguminosa nodulada. Arriba: raz con numerosos
ficientes en sus requerimientos en nitrgeno. ndulos, Abajo: corte de ndulo con zona colonizada con
bacteroides, coloreada de rojo por la leghemoglobina
La bibliografa sobre este tema es enorme y los estudios se
amplan fuera de las leguminosas cultivadas: alfalfa, man,
soja, poroto, vicia, trboles, etc., hacia leguminosas indge- Para determinar la fijacin de N2 en un sistema simbi-
nas y hacia las arbreas, cuyo empleo en forestacin en tico de manera rpida y sencilla:
suelos degradados ofrece una enorme perspectiva.
se compara el tenor de nitrgeno en leguminosas no-
Luego del aislamiento del rhizobio por Beijerinck, en 1888, duladas con el de las no noduladas cultivadas en au-
los trabajos sobre esta bacteria y sus asociaciones con sencia de nitrgeno combinado
el empleo de N15 confirma los resultados y con el uso de Cuadro 3- Las leguminosas En resumen: la rizsfera, la espermatsfera y la filsfera Montevideo, 517 pp.
variedades no nodulantes de la leguminosa en estudio son reas donde se liberan materiales orgnicos que pue- Kennedy, A. C. The rhizosphere and spermosphere. en:
se puede conocer la fraccin de nitrgeno del cultivo 700 gneros, 16 a 19.000 spp distribucin cosmopolita den alterar la diversidad microbiana e incrementar el n- Principles and Applications of Soil Microbiology,
que proviene del aire, del suelo y de otras fuentes (Ba- Origen: trpico (120 millones de aos) mero de microorganismos, la actividad microbiana y las 1998, Sylvia, Fuhrmann, Hartel y Zuberer (eds), Prenti-
rea, 1991). En el campo, se incorpora un fertilizante rboles, arbustos o hierbas 3 subfamilias interacciones entre los microorganismos con las semillas, ce Hall, Londres
marcado (ejemplo sulfato de amonio enriquecido con Mimosoideae: leosas, zonas ridas, fras (menor tamao) las races y el suelo adyacente. La comunidad microbiana Lynch, J. M., The rizosphere, 1990, Wiley & Sons, En-
N15 y en lugar de isolneas no fijadoras se puede em- Madera (Prosopis), taninos (Acacia), ornamentales: Ca- en la rizsfera puede afectar el crecimiento vegetal en for- gland.
plear controles no fijadores (soja no inoculada en sue- lliandra, espinillo, mimosas, timb, forraje: Leucaena ma benfica, neutra o perjudicial, afectando la salud, vi- Martens, R, Apparatus to study the quantitative relations-
los sin rhizobio especfico, o sorgo). El N fijado se cal- Caesalpiniodeae: leosas Usos: taninos/tinturas (Caesal- gor y productividad vegetal. Los desafos implican com- hips between root exudates and microbial populations in
cula por la ecuacin: pinia); ornamentales (Cassia, Peltophorum dubium (ibira- prender el funcionamiento de la interfase suelo-raz, sue- the rhizoshpere. 1982, Soil Biol. Biochem., 14: 315-317
pit), Bauhinia lo-semillas, superficie de hojas, a los efectos de lograr Rovira, A. D.; R. C. Foster y J. K. Martin, Origin, nature
N fijado = 1 - % tomos N15 en exceso en plantas fijadoras Papilionoideae (Faboidea) 12.000spp economa humana, dominar el funcionamiento de los microorganismos, incre- and nomenclature of organic materials in the rizhosphe-
% tomos N15 en exceso en plantas no fijadoras de grano, forrajes, madera, medicina, industria, textiles mentar el desarrollo vegetal y reducir los impactos de los re, en: The soil-root interface, 1979, Harley, J. L. y R.
sistemas de manejo del suelo en el ambiente. Scott Russell (eds.), Academic Press, Londres: 1-4
la reduccin del acetileno a etileno por la nitrogenasa, Shippers, B.; A. W. Bakker y P. A. H. Bakker, Interactions
a pesar de las limitaciones sealadas en el captulo 11, El cuadro 4 muestra la caracterstica de nodulacin en las Se requieren avances en: la identificacin de los factores of deleterious and beneficial rhizosphere micoorganis-
se emplea para comparar sistemas simbiticos subfamilias. Se observa que el 48% de los gneros han que controlan la colonizacin radical, una mayor compren- ms and the effect of cropping practices. 1987, Ann. Rev.
sido examinados por la nodulacin, y el 86% se encontra- sin de la ecologa microbiana en estos ambientes, para Phytopathol, 25: 339-358
ron nodulados. lo cual las tcnicas de la llamada Ecologa Gentica, re-
Las leguminosas sultan muy tiles, en la identificacin y seguimiento de
En las Mimosoideae y Papilionoideae, el 90 y 97%, res- microorganismos en particular. Preguntas de repaso
Las plantas de la familia de las Leguminosas o Legumino- pectivamente, poseen especies noduladas, mientras que
seae (cuadro 3) son muy numerosas (entre 16.000 y 19.000 en Caesalpinioideae slo el 23% de los gneros exami- Las prcticas de inoculacin con numerosos microorga- 1) Seale dos ejemplos de efectos: i) benficos y ii) perju-
especies). Tambin se la designa como Fabaceae o Faba- nados evidenciaron habilidad para nodular. nismos que han logrado instalarse y actuar en la rizsfe- diciales, de los microorganismos sobre las plantas y
les. De origen tropical arborescente cuyos ms recientes ra, espermatsfera y en la superficie de las hojas, como cmo los pondra en evidencia
derivados son pequeas matas o hierbas de las regiones Los siguientes son los gneros que poseen el mayor n- los fijadores de nitrgeno libres y simbiticos, bacterias y 2) Idem, pero efectos de los vegetales sobre los microor-
templadas. Representan la tercera familia de plantas de flor, mero de especies noduladas: en Mimosoideae, Acacia hongos controladores de plagas vegetales, solubilizado- ganismos
superadas por las Compositae y las Orchidacea. Desde su (217); en Papilionoideae, Indigofera (194), Crotalaria res de fsforo, hongos micorrcicos, etc. demuestran que 3) Por qu es la rizosfera una regin del suelo con activi-
origen en el Cretceo superior, en condiciones tropicales h- (145),Trifolium (141), Astragalus (102), Tephrosia (95), es posible dirigir esta colonizacin con xito. dad microbiana incrementada?
medas, fueron extendindose a otras condiciones climticas. Desmodium (76), Vicia (65) y Aspalathus (60); en Caesal- 4) Por qu resulta la espermatsfera otra importante rea
pinioideae, Cassia (99). de estudio?
Grupo muy diversificado en el plano taxonmico con 3 Bibliografa 5) Rol de las distintas sustancias orgnicas liberadas en
sub-familias: Caesalpinoideae, Mimosoideae y Papilionoi- Una de las principales caractersticas que evidencian el cala rizosfera.
deae. No todas las especies estn noduladas: cerca del rcter evolutivo de la leguminosas se relaciona con las modi- Bazin, M. J., P. Markham y E. M. Scott Population dyna- 6) Cmo podemos distinguir la rizosfera, el rizoplano y
20% de las Papilionoideae (unas 3.400 especies) se han ficaciones en su forma y tamao: desde rboles tropicales mics and rhizosphere interactions, en the rhizosphe- la superficie de las races?
analizado por su aptitud para nodular. muy altos, pasando por arbustos , a trepadoras leosas, hier- re. 1990, J. M. Lynch (ed), Wiley Interscience, New York: 7) Mediante cuales mecanismos las poblaciones micro-
99-127 bianas pueden tener carcter benfico, neutro o per-
Dommergues, Y. y F. Mangenot, La rhizosphre, en: Eco- judicial?
Cuadro 4 - Nodulacin en las leguminosas
logie microbinne du sol, 1970, Dommergues, Man- 8) Qu factores afectan la colonizacin radical?
genot (eds.), Masson et Cie., Pars: 549-594. 9) Seale dos tcnicas para evaluar el efecto del cultivo
Subfamilia N gneros N gneros analizados N especies N especies analizadas
Frioni, L. Ecologa microbiana del suelo, 1990, Depto. de cierta variedad de tomate sobre los microorganis-
+ +/- - total + +/- - total
de Publicaciones de la Universidad de la Repblica, mos del suelo.
Mimosoideae 66 18 8 5 31 2900 351 37 388
Caesalpinoideae 177 13 13 39 65 2800 72 6 180 258
Papilionoideae 505 241 14 14 169 14000 2316 46 2462
Total 748 272 35 58 365 19700 2839 6 263 3108
aumentar la eficiencia en la toma de metales como el dos en el trpico, identificados primeramente como del bas perennes o hierbas anuales. Las especies adaptadas a y fijan N2 efectivamente en asociacin con estas cepas.
Mo y el Fe gnero Trema, como T. cannabina, cuyo endofito bacte- zonas templadas estn aclimatadas a desarrollarse en sue- Estas especies son: promiscuas en la nodulacin y
riano logr infectar varias leguminosas. los de alta fertilidad con elevados tenores en calcio y poseen en la efectividad, por ej. Vigna unguiculata, Macropti-
seleccionar genotipos del husped por su mayor acti- baja eficiencia en la extraccin del mismo y probablemente lium atropurpureum (siratro), Acacia crassicarpa (CL), A.
vidad reductora del acetileno en presencia de una mez- Cuadro 13 - Estrategias para optimizar la fijacin de otros nutrientes cuando crecen en suelos de baja fertili- auriculiformis (CL), Albizia lebbek (CL), Paraserianthes
cla comercial de cepas de rhizobio. Explorar especies del N2 dad. Presentan problemas de desarrollo y nodulacin en sue- falcataria (CL).
con ndulos en los tallos los cidos, a diferencia de las especies tropicales que pre-
1. Seleccin de la planta husped sentan alta capacidad de extraccin de nutrientes en suelos El segundo grupo esta formado por especies nodu-
transferir genes nif a mitocondrias o cloroplastos ve- criterios de seleccin cidos, aunque algunas como Desmodium e Indigofera res- ladas por un amplio rango de cepas genticamente
getales es otra de las aspiraciones de los genetistas. alto potencial de fijacin de N en simbiosis
2
ponden positivamente al encalado. diversas pero slo fijan N 2 con un limitado grupo de
Se piensa que los nif penetran en los vegetales fre- crecimiento rpido cepas especficas: promiscuas para la nodulacin
cuentemente por heridas o llevados por parsitos. El races profundas En el pas las leguminosas presentan gran potencial de y especficas para la efectividad, ej. Acacia man-
problema radica en el mantenimiento de estos genes competencia interespecfica reducida uso, como alimento, en especies de grano, forrajeras y gium (CL), Robinia pseudoacacia (CR), Acacia mear-
y su funcionamiento dentro del organismo superior. Se tolerancia limitaciones del ambiente: salinidad, rboles en los montes nativos y en asociaciones silvopas- nsii (CL).
piensa tambin en su introduccin en microorganis- sequedad toriles. Recientemente se han descrito las especies nati-
mos del rumen nodulacin area ( en casos especficos) vas de Uruguay y zonas vecinas (Izaguirre y Beyhaut, El tercer grupo est integrado por especies que son es-
mtodos de seleccin 1998, 2003) (cuadro 5). pecficas en sus requerimientos, por lo que nodulan efecti-
obtener hibridos por fusin somtica: clulas de una manejo para incrementar la FBN vamente con un pequeo rango de cepas: son especfi-
hoja pueden ser inducidas a fusionarse y regenerar ensayos de orgenes o individuos y su propa- cas para la nodulacin y tambin para la efectividad.
plantas completas. Est en la especulacin de muchos gacin vegetativa, Cuadro 5- Leguminosas en Uruguay Ejemplos: Leucaena leucocephala (CR), Gliricidia sepium
cientficos producir un cereal que forme ndulos fija- eleccin de las mejores combinaciones: (CR), Calliandra calothyrsus (CR)
dores de N2. rhizobio-leguminosa, Frankia- no-leguminosa 2.300 spp en la flora total 10% son leguminosas
transferencia de genes Una limitacin de esta clasificacin es que el carcter de
Pero, muy acertadamente, se seala las consecuencias 73 gneros 272 spp promiscuo o especfico depende del rango de cepas tes-
2. Seleccin de cepas compatibles de Rhizobium
de una alteracin tan brusca de los sistemas simbiticos 9 Mimosoideae 48 spp tadas por lo que deben realizarse gran nmero de ensa-
o Frankia
naturales. Los especialistas del ambiente temen que ma- 8 Caesalpiniodeae 23 spp yos de inoculacin.
criterios de seleccin
las hierbas exuberantes, fijadoras del N2, alteren el equi- 56 Papilionoideae 201 spp (130 nativas,
alta efectividad
librio biolgico. Otros elementos, adems, pasaran a ser 71 adventicias y/o cultivadas)
habilidad competitiva
limitantes: P, K, S, e incluso el CO2. Sera tambin peli- Gneros con mayor nmero de especies Nodulacin
tolerancia a limitantes del medio
grosa la propagacin de microorganismos patgenos con Adesmia Vicia Desmodium Lathyrus Galactia
capacidad de afectar la fisiologa de la planta
genes nif. La fijacin biolgica del N2 en los ndulos de leguminosas
mtodos de seleccin
es el resultado de complejas interacciones entre el hus-
estudios en cepas salvajes
Sin embargo, todos estos llamados de atencin no pue- ped y el endofito la instalacin de la simbiosis est contro-
construccin de nuevas cepas
den detener las investigaciones sobre aspectos vincula- Especificidad en la infectividad y en lada por un dialogo molecular entre ambos integrantes
inoculacin
dos a la FBN, ante la necesidad de alimentar a la crecien- la efectividad (Kondorosi, 1991). La eficiencia es mxima en estos sis-
cultivo de rhizobio o frankia
te poblacin mundial. El cuadro 13 seala algunas de los temas ya que existe:
procesamiento de inoculantes
enfoques en la investigacin en este tema. Algunas cepas de Rhizobium o Frankia poseen un amplio
3. Levantamiento de limitantes espectro de huspedes. Otras cepas poseen un pequeo 1. proteccin de variables ambientales y la FBN pue-
sequa espectro y se les dice especficas. Este tema de la espe- de funcionar bajo amplio rango de condiciones. As,
La simbiosis rhizobio-Parasponia irrigacin cificidad debe verse desde el punto de vista del micro y ndulos de soja, son relativamente insensibles a la tem-
deficiencia de nutrientes del macrosimbionte. Basados en sus caractersticas de peratura sobre un rango de 15C, y pueden fijar N2 a
Hasta no hace mucho tiempo se pensaba que los rhizo- fertilizacin y micorrizacin especificidad para la nodulacin y la fijacin, se recono- concentraciones externas de O2 entre 0,05 y 0,8 atm,
bios formaban ndulos solamente con leguminosas. En factores biolgicos desfavorables cen tres tipos de leguminosas: mientras que los bacteroides fijan N2 en rango ms
1973 se describi nodulacin en ciertas Ulmaceae, por control qumico ( pesticidas) o control biolgico estrecho (10-6, 10-4 atm). La proteccin frente al O2 es
rhizobios. Son rboles muy altos, ampliamente distribui- esterilizacin ( solarizacin) El primer grupo est integrado por especies nodula- una de las principales ventajas de los sistemas sim-
das por amplio rango de cepas genticamente diversas biticos
2. aporte de esqueletos carbonados por los vasos de munes A, B y C, encontrados en todas las especies de Rhi- Fijacin de nitrgeno por leguminosas excrecin de compuestos nitrogenados por los n-
la planta que le asegura la generacin de energa y zobium y genes especficos a una especie de Rhizobium. dulos y races
poder reductor para el endosimbionte y la actividad La cantidad de nitrgeno tomada por una leguminosa va-
pastoreo animal
nitrogenasa La expresin de genes estructurales conduce a la pro- ra considerablemente con la especie, la efectividad de la
duccin de seales bacterianas constituidas por lipo-oli- simbiosis, las condiciones del ambiente, del manejo, etc. descomposicin de parte area de la planta
3. transferencia del N fijado a la planta, disminuyendo gosacridos de glucosamina sulfatado, de PM 1.102, in-
el nivel de N combinado en la vecindad de nitrogenasa, ducido por flavonoides; stos son los factores de nodula- El cuadro 12 presenta valores sobre la fijacin en diferen- Se citan valores de N% en distintas partes de una legu-
principal causa de inhibicin del proceso. Las legumi- cin o factores Nod, que estimulan la curvatura de pelo y tes especies. La cantidad derivada del aire vara y repre- minosa, evaluado en floracin o hacia el final de sta:
nosas se clasifican segn la forma de exportar el N com- la divisin de las clulas corticales. senta en general un 50% del total en suelos frtiles, es mayor hojas (2,6-5,0); tallos (1,2-1,8), races (1,6-2,4), ndulos
binado: en suelos deficientes y menor con fertilizacin nitrogenada. (3,9-6,5), vainas (3,1-4,2) y en la planta entera en legu-
Los sustituyentes qumicos en la molcula base son los En asociaciones con gramneas la proporcin derivada de minosas tropicales (2,0-3,0).
productoras de amidas (asparagina, glutamina), so-
responsables en gran parte, de la especificidad hacia el la fijacin puede llegar al 80 o 90% pues el cultivo asociado
bretodo las leguminosas de zona templada
hospedante. toma la mayora del nitrgeno disponible en el suelo.
productoras de uredos (alantona, cido alantoco), Perspectivas
sobretodo en las leguminosas de zona tropical. En el curso de esta simbiosis, el programa gentico de la
planta hospedera es considerablemente modificado y Cuadro 12 - Nitrgeno fijado por leguminosas Algunos de las prioridades en la investigacin en el tema
La figura 3 (Dommergues et al., 1999) presenta un es- muchos genes de la planta se expresan en los ndulos. (kg/ha/ao) se pueden resumir:
quema que resume el dilogo molecular entre Sinorhizo-
bium y alfalfa que se traduce en intercambio de seales El cordn de infeccin se produce luego de invaginacin Forrajeras incorporar leguminosas no tradicionales en ensayos
que permiten distinguir tres niveles de especificidad indi- de la pared del pelo y crece a lo largo del mismo. Las Templadas de adaptacin como forrajeras perennes: Desmodium
cadas en el esquema por asteriscos. bacterias diferenciadas en bacteroides se rodean de una Medicago sativa (alfalfa) 177 intortum, Leucaena leucocephala, Lotenis bainesii,
membrana peribacterial que deriva de la membrana de Trifolium platense (trbol rojo) 115 Noenotonia wightii, Macroptilium atropurpureum
El proceso comienza con la exudacin de sustancias in- la clula vegetal. Trifolim repens (trbol blanco) 149
ductores (flavonoides, betanas) por la raz. En su presen- extender las investigaciones sobre la fijacin del N2 en
cia, las protenas reguladoras sintetizadas por los genes En la nodulacin se distinguen varias etapas resumidas legum.consociadas(pradera mixta) 125 leguminosas arbreas, importantes en la fijacin de
nodD de la bacteria son activadas e inducen los genes esen el cuadro 6 (Sprent y Sprent, 1990) y en la figura 4 (a, Melilotus alba (trbol de olor, blanco) 104 suelos arenosos, erosionados, con incremento del ni-
tructurales de la nodulacin. Estos incluyen los genes co- b y c, Wood y Newcomb, 1989; d, Truchet et al., 1989. Medicago polymorpha (trbol carretilla) 63 vel de materia orgnica (Dommergues, 1995, Frioni et
Trifolium subterraneum (trbol subterrneo) 24 al, 1998 a y b)
Alfalfa Lotus corniculatus(cuernecillo) 27
Sinorhizobium mililoti estudiar leguminosas indgenas, bien adaptadas a
Tropicales
Centrosema pubesens(centro) 112 determinadas zonas ecolgicas, pero no explotadas a
Protena NodD nivel agrcola
Stylosanthes guianensis 115
Neonotonia wightii 160-450 evaluar la simbiosis triple: leguminosa-rhizobio-hongo
nodD genes nod estructurales
precursores nod
Leguminosas de grano micorrtico
proteina nod H, acetato, templadas
sulfato, fucosa, Vicia 57-190 mejorar genticamente a los diazotrofos: el aumento
Seales excretadas por la metilfucosa,
Phaseolus vulgaris (poroto) 46 de la efectividad de los sistemas existentes se puede
grupo con: sulfometilfucosa,
planta (flavonoides, betanas) Lupinus sp.. (lupino) 128 alcanzar manipulando los genes nif responsables de la
acetil, acetil-metilfucosa,
carbonil D-arabinosa Tropicales fijacin del N2, construyendo nuevos organismos fijado-
Vigna unguiculata 35 - 77 res por transferencia de los genes
factores nod
H Glycine max (soja) 17-124
Induccin de ndulos radicales seleccionar mutantes de rhizobios que pueden fijar
H glicerol Arachis hipogea (mani) 33-117
carbonil
metil
N 2 en presencia de altos niveles de N combinado y
18C
16C
con una hidrogenasa funcional que le permita reci-
20C El N de las leguminosas puede transferirse a otros culti- clar los ATP, permiten mayores rendimientos en la
Figura 3- Esquema de la colonizacin de una leguminosa por rhizobio vos en mayor o menor grado por las siguientes vas: fijacin
historia previa y donde se inocula en un casi 100% pues cas referentes al control de calidad de estos productos Cuadro 6 - Interaccin entre rhizobio y leguminosa en la formacin de ndulos
B.japonicum no se encuentra o est presente en niveles biolgicos. Los principales puntos a tener en cuenta al
bajos. inocular una leguminosa son: Fases Requerimientos Observaciones
Multiplicacin en suelo y raz Secreciones radicales pueden Especificidad variable
poblacin nativa de cepas especficas de eficiencia empleo de inoculantes a base de turba que asegu-
estimular o inhibir
moderada, resulta muchas veces difcil incrementar los ran buena sobrevivencia en la semilla hasta la germi-
rendimientos por inoculacin. nacin. La esterilidad de la turba permite extender los Encurvamiento pelos radicales Compatibilidad entre planta Especificidad variable
plazos de vencimiento (cuadro 11). Las formas pildori- y rhizobio
alta poblacin nativa con baja especificidad, como zadas que emplean adhesivos como goma arbiga o
ocurre con cultivos de leguminosas tropicales arbreas derivados celulsicos, para lograr mayor contacto con Entrada de la bacteria Invaginacin y/o disolucin o La planta puede tener factor
que nodulan con el mismo tipo de rhizobio, de baja es- la semilla, que se recubre con carbonato de calcio y debilitamineto de la pared celular gentico no-nodulante. Muy
pecificidad. Este es el caso del man, que presenta abun- fosfato de roca, mejoran la inoculacin. de la planta (enzimas) afectada ambiente (temp, pH)
dante nodulacin nativa en amplias regiones del centro Cordn de infeccin Sincronismo entre crecimiento En ndulos perennes, los
de Argentina. La seleccin de cepas ms eficientes en- biocidas y fertilizantes: asegurarse que las semi- de la bacteria y pared celular de cordones son tambin perennes
tre las nativas, bien adaptadas a la zona y una inocula- llas no hayan sido tratadas con sustancias txicos y la planta
cin masiva puede redundar en incrementos en este fertilizantes y que los recipientes empleados en la ino-
importante cultivo oleaginoso. culacin estn libres de aceites, petrleo, metales pe- Formacin de ndulos Balance entre factores de Rh-bacteria especfico inhibido alta
sados, etc. crecimiento del rhizobio y la planta temperatura y nitratos
El cuadro 10 presenta los resultados de un ensayo de Formacin clulas infectadas Liberacin rh del cordn, sincronismo Inhibida por factores ambientales
campo donde se observa abundante nodulacin de las conservacin: mantener el inoculante en ambiente fres- en el crecimiento de la membrana y un nutricionales que afectan
parcelas testigo, reflejo de la alta densidad de cepas nati- co, en lo posible en el refrigerador hasta su uso. No de la clula vegetal y la multiplicacin crecimiento vegetal
vas. Sin embargo, en la cosecha se apreci efecto positi- emplear inoculantes vencidos. del rhizobio
vo de la inoculacin por cepas seleccionadas en el peso
de cajas y en la produccin de N. inoculacin y siembra simultneas: sembrar lo ms Formacin bacteroides, Intercambio de seales y comple- Combinacin planta y rhizobios
pronto posible luego de la inoculacin, y si se pildoriz, sntesis N2asa y leghemo mentacin gentica especficos
no ms de unos das despus. globina
Cuadro 10- Inoculacin en man (Arachis hypogea,L) Mantencin del tejido Intercambio de metabolitos Afectada por altas temperatura,
condiciones de siembra: sembrar en suelo hmedo y si nodular con bacteroides (HdeC, N-org) alto nitratos, baja H%
Tratamiento Peso cajas Grano N% kgN/ha la temperatura es muy alta, hacerlo al final de la tarde.
kg/ha
testigo 2.115b 1.379b 4,77 65.76b tetizan lectinas con diferente afinidad por azcares. Es-
Cuadro 11 - Efecto de la esterilizacin de la turba La falla en alguna de estas delicadas etapas conduce a
urea 3.590a 2.342a 4.34 101,64a 6
70kgN/ha en la sobrevivencia de rhizobio (x 10 /g), luego de simbiosis deficientes o abortivas. tas sustancias se encuentran en semillas, races, hojas o
M-4 2.853a 1.822a 4,74 86,36a 4 y 26 semanas tallos y se piensa que cumplen varias funciones
M-13 2.679a 1.500ab 4,61 69,56a Multiplicacin rizosfrica de los rhizobios, a partir
M-10 2.673a 1.560ab 4.62 72,07a 4 semanas 26 semanas de materiales excretados por las races. Este proceso Algunos autores comparan a estas molculas con los an-
Cultivo A B C A B C no es especfico y se citan estimulaciones de rhizobios ticuerpos: los sitios a unir, en la bacteria y la planta, po-
Dos o ms tratamientos sealados por la misma letra no difieren por rizosferas de gramneas y otras plantas seen afinidad por la misma molcula, llamada trifolina,
por Tuckey al 5%. M-4, M-10 y M-13 son aislamientos de la zona R. leguminosarum 660 990 110 6 79 2,8
en trboles.
bv trifolii TA1
Adhesin entre la bacteria y clulas superficiales de los
S. meliloti SU47 1500 1800 697 180 170 5,3 Funciones de las lectinas en la FBN:
pelos radicales. La marcada especificidad en esta sim-
Uso de los inoculantes Bradyrhizobium 1100 1200 16 25 190 1,0 biosis se ha explicado en parte, por la teora de las lecti- I. adsorcin no especfica entre rhizobio y races
Los aspectos relacionados a la seleccin de cepas para CB 756 nas, glucoprotenas especficas que se unen por un lado
recomendar en un inoculante para leguminosa, el cultivo A= esterilizacin en autoclave a hidratos de carbono producidos por el hospedante, y II. rol especfico en la nodulacin: se unen a receptores bac-
del inculo y la formulacin de distintos tipos de inoculan- B= esterilizacin por rayos gama por el otro a receptores moleculares de la bacteria. Legu- terianos travs de los exopolisacridos (EPS) o derivados
tes son tratados en el Anexo prctico, as como las prcti- C= turba no estril minosas de diferentes grupos de inoculacin cruzada sin- de EPS. Mutantes EPS- no nodulan a su hospedante.
otras regiones y de cepas seleccionadas por centros de rpido crecimiento en medios de cultivo simples y
a b coleccin del pas o del exterior (caso C) la sobrevivencia en los soportes ms empleados, son
importantes ventajas que facilitarn la preparacin de
Falta de nodulacin y pobre desarrollo vegetal en el tes- inoculantes
tigo, indican carencia de rhizobios nativos y si no hay
respuesta a los otros dos tratamientos se debe suponer estabilidad gentica, que no sufra frecuentes mutacio-
que otros factores, excluyendo el N, como el P, S, Fe, nes en la conservacin en el laboratorio
etc. limitan el crecimiento vegetal (caso D)
En la recomendacin de inoculantes se pueden dar alter-
Este mismo ensayo se emplea para evaluar el efecto de nativas:
otros nutrientes, como por ejemplo, el fsforo o microele-
mentos, mediante el diseo de parcelas divididas. El en- aconsejar el uso de varios inoculantes, cada uno con
sayo se instala en condiciones ptimas para el desarrollo una cepa altamente efectiva para especies individuales
vegetal, en general con una fertilizacin mnima basal. empleo de cepas de amplio espectro que fijan N2 con
amplio rango de leguminosas
Una vez establecida la necesidad de inoculacin, se de-
termina los criterios para la seleccin de cepas apro- aconsejar el uso de inoculantes con varias cepas, o
piadas para el husped en cuestin. Las cepas usadas polivalentes, que incluyan a las mejores cepas para
c d en los inoculantes deben ser cuidadosamente seleccio- cada especie del husped
nadas y mantenidas, deben probarse anualmente para
minimizar las posibilidades de cambios en las propieda- La tendencia en general es a la produccin de inoculantes
des simbiticas. con cepas de amplio espectro, de utilidad en vastas regio-
nes del pas e incluso a nivel regional. Esta prctica evita
Cualidades de una cepa de rhizobio para su recomen- tambin la introduccin de muchas cepas que con el tiempo
dacin en la fabricacin de inoculantes: se pueden volver ineficientes, pero manteniendo su infectivi-
dad, se comportan casi como parsitas. Pueden presentar-
efectividad en la fijacin del N2, la ms importante de se situaciones en las que se justifica la produccin de inocu-
las propiedades, las cepas deben superar significativa- lantes a nivel local, cuando las caractersticas de la zona y la
mente al testigo (T) en ensayos de laboratorio, invern- importancia de las variedades empleadas as lo justifiquen.
culo y campo
La inoculacin puede resultar imprescindible cuando se
competencia en la rizosfera o competencia saprofti- desea introducir una variedad o un cultivo nuevo en una
Figura 4 Etapas tempranas en la nodulacin en alfalfa: a) pelo absorbente no inoculado, n=ncleo, v=vacuola), ca, le permite a la bacteria soportar las condiciones regin. Resulta de importancia seleccionar cepas eficien-
b) encurvamiento del pelo, 8 horas luego de la inoculacin, la flecha grande muestra masa de bacterias en el bucle, fsico-qumicas del medio, emplear eficientemente los tes a partir de los rhizobios nativos, bien adaptados a
c) raz luego de 11 horas de la inoculacin, con cordn de infeccin, nutrientes disponibles y lograr imponerse a la poblacin las condiciones ecolgicas de la regin.
d) raz colonizada luego de 5 das de la inoculacin con un ndulo en formacin. nativa
La tarea de extensin es muy importante y el productor
otros requisitos: infectividad o sea buena capacidad debe conocer los beneficios que redundan de una buena
Encurvamiento de los pelos y marcada deforma- infeccin. Las giberelinas inhibiran el desarrollo de fu- para formar ndulos rpidamente, adaptacin a circuns- inoculacin.
cin de los mismos, constituyen los primeros pasos turos ndulos. tancias especiales, como bajos pH, tratamientos pesti-
de la infeccin. El pelo se encurva y encierra al rhizobio cidas, salinidad, capacidad para nodular a bajas tempe-
adherido. El fenotipo se designa como Hac+. Rhizobios Penetracin de la bacteria a travs de la pared de raturas, con altos niveles de nitrgeno combinado, etc. Respuesta a la inoculacin
heterlogos son incapaces de inducir encurvamiento de los pelos radicales y formacin de un cordn de
los pelos. La produccin de sustancias con caracter de infeccin tubular, intracelular que confina a las bac- hidrogenasa: le permite reciclar el H2 liberado en la poblacin nativa de rhizobios es escasa o nula o
fitohormonas como el AIA, debilitara las paredes de terias a medida que ellas penetran en las clulas del FBN, derivando los electrones liberados hacia la nitro- ineficiente, se obtienen en esta situacin muy buenos re-
los pelos, facilitando la deformacin que precede a la hospedante. En trbol blanco, se observ cordn de genasa sultados. Esto ocurre con el cultivo de soja en suelos sin
ducir las leguminosas. Esta tcnica resulta imprescindi- 2. inoculada con una cepa potencialmente eficiente y infeccin 2 das luego de la inoculacin con rhizobio ca que un mnimo de 16 ATP se requieren por molcula
ble cuando se introducen nuevas leguminosas, sobre todo seleccionada en ensayos te invernculo o que es emplea- infectivo. Exmenes en cultivos en hidroponia sugi- de N2 reducida.
si son huspedes de alta especificidad (Trifolium, Medi- da con xito en otra regin (I) rieron que se requiere estrecha proximidad del n-
cago, Glycine), cuando la poblacin nativa es ineficiente cleo de las clulas de los pelos radicales y el pice En la prctica el costo es ms alto, debido a la ineficiencia
o cuando la deficiencia en nitrgeno limita el desarrollo 3. fertilizada con dosis ptmas de N inorgnico (N), pue- del cordn, mientras ste avanza hacia la base del de la actividad de la N2asa y a costos asociados al desa-
vegetal. de ser incluso inoculada, donde se logra el mximo desa- pelo. All, se ramifica en la pared celular y penetra en rrollo y mantenimiento del ndulo a la asimilacin y el trans-
rrollo la corteza. porte del amonio.
Requisitos para el xito de la inoculacin:
Ejemplos de resultados Dos hiptesis explican la invasin: Las estimaciones en la literatura varan ampliamente, un
que la semilla inoculada posea la bacteria adecuada en
invaginacin de la pared vegetal ante la presin de las dato generalmente reconocido se sita en 28 mol ATP
nmero suficiente
La figura 9 presenta algunas de las respuestas posibles. bacterias y participacin de enzimas, las bacterias den- por mol de N2, excluyendo los costos adicionales y hasta
que el mtodo y las condiciones de inoculacin permi- tro del pelo capilar pueden degradar la pared por enzimas el 33% de la energa fijada fotosintticamente.
tan la sobrevivencia de las bacterias Rendimiento similar en los tres tratamientos y buena lticas: carboxicelulasa y poliugalatouronasa.
nodulacin en los testigos, indica abundante y eficiente Interacciones entre genes de la bacteria y de la planta
que las condiciones del suelo prximo a la semilla poblacin nativa de rhizobios especficos para la legu- Diferenciacin nodular, cuando el cordn llega a una La iniciacin y formacin de los ndulos son el resultado
permitan la colonizacin de los rhizobios en la rizos- minosa, no se aconseja la inoculacin (caso A) clula particular (poliploide en relacin al hospedante) de interacciones simultneas de los genes de la planta y
fera, la formacin de los ndulos y su funcionamien- cesa la sntesis de pared o sta es degradada por enzi- de las bacterias.
to efectivo. Los testigos crecen pobremente y con ndulos inefecti- mas lticas y la bacteria es liberada en clulas que for-
vos, mientras que los inoculados lo hacen bien y con marn la zona infectada del futuro ndulo. En respues- genes de la nodulacin, genotipo especficos, jue-
abundante nodulacin, indican buena respuesta a la ino- ta a esta invasin, ciertas clulas corticales son estimu- gan un importante rol. Por ejemplo el genotipo arveja,
Tcnicas de inoculacin culacin (caso B) ladas a proliferar, se alargan y emergen como tejido no- Pisium sativum bv Afghanistan es nodulada por cepas
dular diferenciado, infectado con los rhizobios, que se de Rhizobium TOM pero no lo es por cepas europeas
natural: en la antigedad, los agricultores mezclaban transforman en bacteroides. de rhizobio. Los genes que permiten a las cepas TOM a
las semillas con tierra de plantos de leguminosas, ase- N alto
nodular arveja Afghanistan se han localizado en el pls-
gurndose la nodulacin La membrana de la clula vegetal forma otro envolto- mido simbitico.
medio rio para saparar los rhizobios de la planta: es la mem-
inoculantes comerciales productos con alta densidad brana peribacterial. Otro mecanismo de infeccin es induccin de genes de la nodulacin por flavonoi-
de cultivos especficos de rhizobios en diversos sopor- por heridas, que se presenta en algunas simbiosis, des e isoflavonoides, seales de la planta que indu-
bajo A B
tes, en general turba estril o en cultivos lquidos. La como en rhizobio-mani y en el caso de Frankia-no le- cen los genes nod han sido mostradas como nece-
dificultad en algunos pases para obtener turbas de bue- alto guminosas. sarias para la induccin de los genes de la nodula-
na calidad, obliga a la bsqueda de sustitutos, como cin. Un hecho interesante es que los rhizobios de
tierra de diatomeas, bagazo de caa, grava, etc. Fijacin de N2, varios das despus la bacteria den- amplio rango de huspedes, responden a un amplia
medio
tro de las clulas hospedantes en ndulos efectivos gama de compuestos y aquellos con estrecho rango
Establecimiento de la necesidad de inoculacin C D comienzan a fijar nitrgeno y excretan amonio en el aceptan solamente un limitado nmero de flavonoi-
bajo
La coleccin y seleccin de cepas de rhizobio puede re- citosol de las clulas de la planta donde puede ser des. Pico moles (pmol = 10-12 moles) de estos com-
sin inocular inoculado alto N mineral
sultar intil si las leguminosas nodulan eficientemente con asimilado por accin de la glutamato deshidrogena- puestos pueden inducir la expresin de los genes nod
poblaciones nativas, situacin frecuentemente encontra- sa (GDH) y por accin de la glutamino sintetasa de rhizobio.
Figura 9- Ensayo de campo para determinar la necesidad de
da en leguminosas tropicales, que nodulan con el mismo inoculacin de leguminosas (GS) o de la glutamino-2-oxiglutarato-amino-trans-
tipo de rhizobio o si el suelo contiene alto nivel de nitrge- ferasa (GOGAT). Esta segunda ruta es empleada ms Genes de la nodulacin
no combinado. Se emplea un ensayo simple de campo en frecuentemente. Las secuencias de ADN bacteriano que se requieren para
parcelas con 3 tratamientos, para determinar la necesi- Poco desarrollo en el inoculado, pero buena respuesta la formacin de ndulos fijadores de N2 en races o tallos
dad de inoculacin: a la fertilizacin, se supone que la cepa no es la ade- El costo exacto en la simbiosis con leguminosas en tr- se refieren como genes nod. Ms de 30 genes nod han
cuada o que la calidad del inoculante no es buena. En minos de ATP empleado es motivo de polmica. Desde sido identificados y secuenciados, ms que las letras del
1. testigo sin inocular para evidenciar la presencia y efi- este caso es necesario plantearse una seleccin de que la transferencia de cada electrn de los 8 involucra- alfabeto (nod A, nod Z) los futuros loci de nodulacin son
ciencia de cepas nativas (T) cepas ya sea a partir de ndulos de buenas plantas de dos en la reaccin requiere la hidrlisis de 2 ATP, signifi- referidos como genes nol (nodulacin loci).
En la mayora de los miembros de los gneros: Bradyrhizobium japonicum, 3 diferencias separan a esas Factores biolgicos nosarum bv trifolii y S. meliloti en suelo estril y no est-
bacterias: Se han aislado de la rizosfera o del rizoplano cierto nme- ril. Se observa que estas bacterias mantienen alta den-
Rhizobium, los genes nod estn localizados en pls- ro de bacterias, hongos y sobre todo actinomicetes, que sidad en suelo estril y declinan lentamente en suelo no
En B. japonicum los genes de nodulacin no se locali-
midos (tambin llamados plsmidos simbiticos o se muestran antagnicos frente al rhizobio in vitro. Este estril, debido a interacciones biolgicas. La seleccin
zan en plsmidos sino que se distribuyen en el cromo-
sym) antagonismo puede deberse a competencia por los nu- de cepas buenas competidoras en los suelos donde va
soma.
trientes, acidificacin, produccin de antibiticos u otras a ser empleada, es un requisito importante cuando se
Bradyrhizobium y Azorhizobium, los genes nod se loca-
Los genes estructurales nif DK y H estn fsicamente sustancias, y aun a la predacin por protozoos o a la in- desea xito en la colonizacin temprana de races de
lizan en el cromosoma
separados por una distancia relativamente grande de feccin por fagos lticos. plntulas inoculadas.
los genes nod
Tres tipos de loci de nodulacin han sido identificados en
Muchas veces un inoculante desaparece en el suelo. La log10 N/g suelo
varios rhizobios: En el caso de rhizobios de crecimiento rpido las sus- causa precisa, de origen biolgico, es difcil de determi-
tancias que inducen los genes nod (molculas seal nar. Una bacteria predatora que lisa ciertas cepas de rhi-
genes nod comunes 9.0
derivadas de las plantas) pertenecen a la clase conoci- zobio ha sido identificada (Bdellovibrio bacteriovorus) (Ca-
genes nod especficos para el husped (hsn) estril
da como flavonoles, flavonas y flavanonas. En B. ja- ptulo 14). Este parsito afecta a los rhizobios en el suelo 8.0 no estril
genes nod genotipo especficos (GSN) ponicum las principales sustancias inductoras son iso- cuando la densidad de la presa es alta. La poblacin afec-
flavonas. tada puede aun mantenerse a niveles aceptables para
7.0 R. leguminosarum bv trifolii
Los genes nod comunes son funcionalmente similares
nodular leguminosas (104-105 clulas/ml), de modo que 9.0
entre especies de rhizobios. Incluyen nod ABC y son Genes de la fijacin del nitrgeno (cuadro 7) las frecuentes desapariciones de rhizobios introducidos
necesarios para la iniciacin y formacin del ndulo Dos grupos principales de genes han sido descriptos: 8.0
en el suelo, no pueden explicarse exclusivamente por las
(cuadro 7).
Los genes nif refieren a la secuencia gentica que es- actividades de este microparsito. S. meliloti
7.0
Los genes nod D estn estrechamente ligados a los ge- tn especficamente involucrados en el proceso de FBN
Los fagos lticos fueron motivo de numerosos estudios, 1 14 21 28 35 42 das
nes nod comunes. Poseen una funcin regulatoria, sus y que se correlacionan estructural y funcionalmente con
diazotrofos de vida libre, sobretodo Klebsiella pneumo- sobre todo en suelos donde las pasturas fracasaban en la Figura 8- Sobrevivencia de R. leguminosarum bv trifolii y S.
productos interactan con seales moleculares vegetales
niae. nodulacin luego del segundo ao de instaladas. El pro- meliloti en suelo estril y no estril
(flavonoides e isoflavonoides) y activan la transcripcin
blema de la decadencia de los alfalfares fue atribudo, en
de otros genes nod inducibles. Los genes nod ABC codi- Los genes fix (para la fijacin) estn tambin especfi- parte a la accin de estos parsitos intracelulares.
fican protenas que determinan factores extracelulares que camente involucrados en la FBN, pero no se correla-
causan deformacin de los pelos y divisin de clulas cor- Inoculacin de las leguminosas
cionan con los de K.pneumoniae. Esta fue la primera Las bacteriocinas constituyen un grupo de sustancias,
ticales de la raz. bacteria fijadora de N2 estudiada en detalle, por la sobre todo protenas, pptidos, producidas por muchas La fijacin biolgica del nitrgeno por la simbiosis
adaptacin de tcnicas empleadas primeramente en bacterias que afectan a organismos muy relacionados,
hsn (host specific nodulation) son los loci requeri- rhizobio-leguminosa compite econmicamente con la fer-
E.coli. incluso de la misma especie, a diferencia de los antibiti-
dos para nodulacin de una planta especfica en di- tilizacin nitrogenada. Si bien las gramneas fertilizadas
cos, que poseen un espectro de accin ms amplio. con nitrgeno producen ms materia seca por su mayor
ferentes gneros de leguminosas. Cuando un locus Los productos de los genes nif A y nif L controlan el ope-
de nodulacin de un organismo donador es transfe- eficiencia fotosinttica, la siembra de leguminosas se in-
rn de todos los otros genes nif. Las rhizobiocinas han sido descritas como elemento de
rido a una cepa recipiente apropiada, la inhabilita a crementa en el mundo, ya sea por la calidad nutritiva de
lucha biolgica que permite la supremaca de la clula sus granos (soja, man, leguminosas tropicales), por su
nodular la planta husped del donador, el gen es Genes fix junto a otros genes involucrados en la FBN productora frente a la poblacin de rhizobios nativos del aporte en forrajes y sobre todo cuando se desea recupe-
considerado hsn. son referidos colectivamente como genes sym, que in- suelo. Para algunos autores seran partculas defectuo- rar suelos muy degradados.
cluyen a los necesarios para las interacciones iniciales sas de fagos, pues se parecen a las colas de ciertos virus
GSN (genotype-specific nodulation) se refieren a ge- con la planta (reconocimiento, encurvamiento, forma- de E. coli, y su sntesis est muchas veces mediatizada En muchos suelos el nivel y la eficiencia de las cepas na-
nes que permiten la nodulacin de genotipos especfi- cin cordn de infeccin) y la formacin y mantenimien- por plsmidos. tivas pueden no ser los adecuados y la nodulacin y la
cos de plantas dentro de una especie de leguminosa to de los ndulos radicales o de tallos (nod, nol, GSN
dada. fijacin del N2 resultar insuficientes para satisfacer las
y hsn). Adems otro conjunto de genes bacterianos Distintos patgenos pueden afectar directamente a la demandas del cultivo.
estn involucrados en la biosntesis de la parte hemo FBN atacando ndulos (insectos) o indirectamente afec-
A pesar de que muchos de los mismos genes de nodula- de la nodulina leghemoglobina, necesaria para la tando el crecimiento de las plantas, como los nemto-
cin han sido encontrados en especies de Rhizobium y Desde muy antiguamente se practica la inoculacin arti-
proteccin del O2. dos. La figura 8 muestra la sobrevivencia de R. legumi- ficial de las semillas o del suelo en donde se van a intro-
cordones de infeccin y aumenta el nmero de abortos De manera general, los fungicidas son ms perjudiciales, Cuadro 7 - Genes simbiticos en Rhizobium y en distintas leguminosas: r r en Trifolium pratense, la
de eventos iniciales de la infeccin. Uno de los mecanis- seguido de los herbicidas y los insecticidas. Se seleccio- Bradyrhizobium bacteria no penetra en los pelos radicales; rj1 rj1 en
mos de inhibicin podra ser por inactivacin del cido nan mutantes de rhizobio altamente efectivas en la fija- Glycine max: la nodulacin es controlada en las races,
indol-actico (AIA), fitohormona involucrada en la colo- cin del N2, resistentes a altos niveles de pesticidas, so- Gen Concepto Funcin Sym-l en Pisum sativum, el hospedante no nodula a tem-
nizacin, por los nitritos producidos por reduccin biol- bre todo a los fungicidas que son aplicados directamente hac encurvamiento Encurvamiento de pelos
peraturas menores a 26C y Sym-2, la inoculacin con
gica de los nitratos. Los nitritos tambin inactivan a la sobre las semillas. capilares ciertas cepas de R. leguminosarum en el mismo hospe-
leghemoglobina. dante produce fallas en la nodulacin por aborto de los
Productos de la fotosntesis nod nodulacin Eventos en desarrollo de canales de infeccin.
El amonio es asimilado inmediatamente, pero el nitrato La fotosntesis provee energa y poder reductor para la ndulos
requiere un perodo de tiempo antes de ser asimilado, fijacin del N2 y los esqueletos carbonados para la for- hsn especficos del, Determinacin de especi- morfologa de los ndulos es controlada por el hos-
coincidente con su reduccin por nitrato reductasas. El macin de aminocidos, amidas, etc., fuentes de nitr- hospedante ficidad del hesped pedante. Se ha demostrado tambin que el genotipo
exceso de amonio, o de glutamina, reprime la produc- geno para la leguminosa. Las leguminosas noduladas del hospedante influye sobre la distribucin de los n-
efn eficiencia de la nodulacin Genes adicionales para
cin y actividad de la nitrogenasa. Con alta disponibil- requieren iluminacin adecuada para mantener una ac- eficiencia de la nodulacin dulos en el sistema radical, as como en el nmero de
diad de N en la parte area se disminuye el nivel de tiva fijacin. Son muy conocidos los experimentos que ndulos formados.
fotosintetizados que llegan al ndulo. Sesbania rostrata muestran las fluctuaciones de la actividad nitrogenasa ndv desarrollo ndulo Regulacin del desarrollo
es una leguminosa que produce ndulos en races y de ndulos por cambios en la iluminacin, o cuando se del ndulo, ej: glucanos nodulacin efectivas o inefectivas: el trmino inefec-
cclicos
tallos, present marcada inhibicin de los ndulos radi- corta la parte area o se sombrean los cultivos. tiva se aplica cuando la secuencia se interrumpe en
cales por la presencia de nitrato de amonio, pero los n- exop polisacridos extracelulares Regulacin de infeccin y algn momento. Varios genes del hospedante contro-
dulos del tallo no fueron afectados y redujeron activa- Si se incrementa el nivel de CO2 de la parte area de liberacin de bacteroides lan la nodulacin inefectiva.
mente el acetileno. Esta planta posee una alternativa para plantas de soja (con envoltorios transparentes) la fija- nif fijacin de N2 Involucrados en FBN
evitar la inhibicin de la nodulacin radical y se ampla cin del N2 a los 40 das de la siembra se estimul ms homogos a los eficiencia de la FBN. As, en soja variedad Peking
el conocimiento sobre especies de leguminosas y de de 4 veces (evaluada por reduccin del acetileno a etile- de Klebsiella inoculada con cepas de R. japonicum (serogrupo 123)
plantas actinorrticas (simbiosis con Frankia) que pue- no). Pero en la prctica resulta muy difcil regular el ni- se forman ndulos grandes de aspecto normal, aun-
den formar ndulos en tallos. vel de CO2 sobre un cultivo, salvo manejando las densi- fix fijacin Genes adicionales involu- que las plantas permanecen pequeas y clorticas,
crados en la FBN en esta-
dades de siembra, la competencia entre plantas. sntomas de deficiencia en N. Sin embargo, la misma
do simbitico (sin homolo-
Interesa en muchos casos complementar el aporte de N ga con los genes nif de variedad establece simbiosis eficientes con otras ce-
por FBN con una fertilizacin con N combinado. Es nece- Con elementos marcados se mostr la translocacin de Klebsiella) pas de R. japonicum y lo mismo ocurre con las cepas
sario analizar el perodo de mayor fijacin a los efectos de productos de la fotosntesis hacia los ndulos: sacarosa, del serogrupo-123 con otras variedades de soja.
incorporarlo antes o despus (evaluacin actividades de glucosa, cidos orgnicos y se calcul el costo respirato- dct transporte c. di carboxlicos Transporte de c. di
nitrogenasa y nitratoreductasa). La inhibicin por nitratos rio de la fijacin del N2 en soja, caup y trbol blanco, con COOH- como sustratos nodulinas, protenas especficas sintetizadas como res-
para la FBN en bacteroides
es afectada por la combinacin rhizobio-leguminosa. El mucha similitud en las tres leguminosas: entre 6,3 y 6,8 puesta a la invasin por rhizobios, como por ejemplo la
empleo de mutantes nitrato-reductasa negativas, inca- mg C/mg N fijado. Consideraciones bioqumicas y teri- (leghemoglobina) con secuencias de mARN cuyo ori-
paces de reducir nitratos, ofrecen la alternativa de seguir cas indican que la reduccin del N2 a NH3 resultara de un gen est en el hospedante.
fijando N2 en presencia de N-NO3- costo mnimo respiratorio de unos 2C/1N, excluyendo los Gentica del hospedante
gastos por la conversin del amonio en otros compuestos
Polucin y aquellos involucrados en el desarrollo y mantencin de Las leguminosas muestran gran variabilidad gentica Estructura nodular
El uso indiscriminado de herbicidas, fungicidas, la acu- los ndulos. en respuesta a la invasin por rhizobios. Varios auto-
mulacin de sales de metales pesados en suelos y aguas res, consideran que el hospedante es el que corriente- Se cree que la formacin de los ndulos est controla-
resulta perjudicial para el rhizobio. Se han descrito diver- Si se consideran los costos de la FBN y el transporte, mente desempea el rol principal en el control de la da por fitohormonas: citoquininas, auxinas, gibere-
sas tcnicas de incorporacin de biocidas a las semillas la cifra puede superar el 33% de los fotosintetizados simbiosis, afectando el tamao, la forma y el nmero linas, producidas no slo por los rhizobios, sino tam-
evitando su ntimo contacto con la bacteria. A pesar de la que son translocados hacia los ndulos: un 5% se em- de ndulos, as como la efectividad de los mismos. Se bin por el husped frente al estmulo de la bacteria.
multiplicidad de resultados obtenidos, se piensa que los plea en el desarrollo de los ndulos, un 12% se respira reconocen: Estas sustancias inducen repetidas divisiones celula-
pesticidas aplicados en dosis aconsejadas no perjudican como CO2 y un 15% se reexporta hacia el husped con res de clulas poliploides. El cido abssico exgeno
al rhizobio. el N fijado. genes de no nodulacin : ausencia de ndulos en ejerce una inhibicin especfica y detiene la iniciacin
plantas inoculadas con especie compatible de rhizobio, nodular.
En el futuro desarrollo del ndulo ocurren drsticos cam- dos los tipos, excepto caesalpinoides, se presentan de CO2 del suelo. Como regla general, en suelos frtiles El cobalto (Co), hierro (Fe) y magnesio (Mg) son impor-
bios anatmicos y citolgicos en clulas de la corteza. Pe- en las Papilionoideae. El descubrimiento de ndulos los rhizobios sobreviven por perodos considerables. Se tantes en el funcionamiento de la nitrogenasa y para la
queas clulas meristemticas se convierten en grandes en tallos de Sesbania rostrata permiti la inclusin informa una disminucin de 10 veces en el nmero de planta, por lo que los requerimientos en leguminosas no-
clulas con bacteroides. Su rpida senescencia una vez de un tercer tipo de ndulos determinados: sesba- R. meliloti luego de 14 aos y un nmero variable de duladas se incrementan.
cumplida la funcin de fijacin del N2 est tambin rela- noide clulas se encontraron en suelo estril, luego de ms de
cionada con cambios en el balance hormonal. Los ndu- 30 aos. El nitrgeno combinado afecta el desarrollo de los n-
los de leguminosas y los tumores de agallas de corona indeterminados: con meristema apical que contina dulos y la fijacin del N2. Es bien conocida la inhibicin de
estn inducidos por bacterias estrechamente relaciona- activo a travs de la vida del ndulo, dando nuevos l- La sobrevivencia de la bacteria depende del nivel introdu- la nodulacin por los iones nitrato o amonio, aunque las
das: Rhizobium o Bradhyrhizobium y Agrobacterium, y en bulos activos. Ejemplos: caesalpinoides (Mimosa, Albi- cido y del nivel de la poblacin nativa: si sta es alta, el leguminosas difieren en la susceptibilidad a estos com-
ambos casos se reconoce la induccin hormonal: en n- zia), crotalarioide (Vicia faba), lupinoide (Lupinus). Los inculo puede fallar debido a la mortandad natural y a la puestos. Se citan numerosas experiencias en la bibliogra-
dulos posiblemente por auxinas y citoquininas, liberadas ndulos perennes son del tipo indeterminado, el meris- competencia con la poblacin nativa por el alimento y el fa sobre los niveles mnimos de iones amonio que no in-
por los rhizobios, en las agallas, por hormonas que pro- tema persistente es capaz de reiniciar la actividad en espacio. hiben a la nitrogenasa; en general, 40 mg/kg de N-NH4+
ducen heridas. cada estacin de crecimiento. son tolerados, pero cantidades superiores a 100 mg/kg
Fertilidad del suelo inhiben la fijacin en la rizosfera, efecto que ha sido rela-
Dos tipos de estructura primaria se pueden describir En el ndulo maduro se diferencian las zonas: Las leguminosas noduladas presentan requerimientos cionado con inhibicin en la produccin de fitohormonas
(figura 5) (Duhoux y Nicole, 2004). mayores de nutrientes en relacin a las fertilizadas con cerca del sitio de infeccin.
a. cortical, formada por clulas no diferenciadas ni infec- nitrgeno combinado. Esto ocurre con los elementos que
Ndulo tadas. En especies perennes estas clulas pueden apa- se encuentran en la nitrogenasa y otros sistemas enzim- El crecimiento de los ndulos es ms sensible al exceso
recer suberificadas ticos, como el Mo, Fe, S, Cu, Mg, Co. La fertilizacin con de N que la nitrogenasa y ambos son ms sensibles que
meristema fsforo, potasio, azufre, microelementos, afectan la sola infeccin y los eventos iniciales de la nodulacin. La
nodular b. zona meristemtica, con activas divisiones celulares, brevivencia del rhizobio y la nodulacin y FBN. figura 7 muestra la sensibilidad al nitrato de amonio de
corteza con clulas no infectadas que darn origen a las otras algunas cepas de R. leguminosarum y la importancia de
externa zonas. En los ndulos efectivos la actividad meristem- El calcio es un elemento que se requiere en alto nivel la seleccin de cepas que mantengan la fijacin del N2 en
endodermis
tica es ms prolongada en leguminosas noduladas, sobre todo en las primeras presencia de N-combinado.
periciclo
haces etapas de la nodulacin. Si el nivel es bajo, se inhibe el
conductores c. zona vascular, constituye un sistema de vasos ligados encurvamiento de los pelos y la nodulacin. Al encalar mgN fijado/planta
corteza interna a los de la raz y por ellos la planta aporta los materiales suelos cidos, el calcio agregado aumenta el pH, dismi- 50
pelo energticos y retira los productos nitrogenados resul- nuyendo la solubilizacin de elementos txicos a altas
absorbente 40
endodermis
tantes de la fijacin concentraciones, como el Mn y el Al y se aumenta la
periciclo solubilidad del Mo. Se incrementan tambin los bicarbo- 30
floema d. zona bacteriana, o de infeccin, con clulas coloni- natos del suelo que favorecen el crecimiento del rhizo- V19
xilema zadas y otras no. Las primeras contienen a los bacte- bio en vida libre. 20 V200
roides y aparecen hipertrofiadas, alcanzando dimen-
Raz siones 4 a 8 veces superiores a las clulas sin bacte- El fsforo constituye un elemento necesario para la le- 10 V32
rias. El volumen de tejido infectado nos da un ndice guminosa y la FBN y como su disponibilidad es baja en
de la capacidad de fijacin. Los bacteroides apare- muchos suelos agrcolas; la incorporacin en la siembra 0
2,5 5,0 7,5 10,0
cen al microscopio electrnico individualmente o en es prctica corriente. Las micorrizas contribuyen a su
Figura 5 - Organizacin de ndulos indeterminados y mg N-NH4NO3/planta
grupo dentro de envolturas membranosas de origen absorcin y las races de la leguminosas son muy mico-
determinados de leguminosa vegetal. rrizadas.
Figura 7- Efecto del nitrato de amonio en la fijacin de N2 de
En las clulas colonizadas aparece una hemoprotena, El molibdeno (Mo) es un elemento clave en la nitrogena- Vicia atropurpurea inoculada con varias cepas de rhizobio
determinados: todas las partes se diferencian a la la leghemoglobina, que se une especficamente al O2 y sa, responsable de la transferencia de electrones de la
vez y la senescencia ocurre simultneamente, por lo lo libera a bajas concentraciones de O2. La concentra- reductasa de la nitrogenasa (Fe-protena) hacia el N2. Su
que estos ndulos tienen una existencia limitada. cin de esta sustancia slo encontrada en los ndulos nivel puede ser limitante en suelos tropicales y es acon- Un exceso de nitratos disminuye la deformacin de pe-
Ejemplos: aeschynomenoide (Aeschynomene, Ara- de leguminosas y no-leguminosas, se incrementa a me- sejable incluirlo en una fertilizacin basal. los capilares, la adhersin a sus paredes, el nmero de
chis), desmodoide (Arachis, Vigna unguiculata). To- dida que la fijacin progresa y su determinacin colori-
rante a temperaturas elevadas, R. leguminosarum lo es cepas superficiales del suelo disminuye rpidamente. Con mtrica se emplea como medida de la potencialidad de o caulinar). Es bien conocida en varias especies de
menos y los rhizobios de leguminosas tropicales soportan las lluvias, la recolonizacin puede ocurrir desde las ca- fijacin. Sesbania como S. rostrata, leguminosa arbustiva que
amplio rango de temperatura. pas ms profundas. habita regiones anegadas, en Aeschynomene, Nep-
Su principal funcin est relacionada con la provisin de tunia natans, Discolobium pulchellum, Eritrina crista-
La disminucin del potencial hdrico del suelo limita tam- adecuadas cantidades de O2 para el metabolismo respi- galli y en plantas actinorrticas (Casuarina equiseti-
Cuadro 9 - Efecto de la inoculacin en Phaseolus bin el transporte de los productos de la fijacin a la plan- ratorio de los bacteroides, manteniendo el nivel suficien- folia, C. glauca y C. cunninghamiana). El gnero Aes-
vulgaris con rhizobios en suelos cidos y ta y el flujo de fotosintetizados. Altas humedades limitan temente bajo, como para no daar el funcionamiento de chynomene posee unas 350 especies de origen tropi-
encalados la aireacin y la FBN. Algunos rhizobios con nitrato rela nitrogenasa. cal, muchos de ellos viven en ambientes semi ridos
ductasa desasimilativa (nir-) pueden sobrevivir en anae- y en suelos inundados en estacin de lluvias. Se han
cal ton/ha rhizobio/g suelo ndulos/ N% robiosis. Los ndulos soportan poco tiempo el enegamiento La constante de equilibrio para la oxigenacin de la descrito 22 especies con ndulos areos (Duhoux y
inoculados planta (aumentan las lenticelas: expansiones de clulas epidr- leghemoglobina (0,04. 10-6M) asegura que los bacte- Nicole, 2004).
micas que facilitan los intercambios gaseosos, o los es- roides suspendidos en solucin parcialmente oxigena-
0 - 20,2 1,4 pacios vacos, con gases). da de este pigmento, se encuentren en concentracin
0,5 - 19,0 1,3 de O2 libre en el rango para una ptima produccin de Cuadro 8 - Diferencias entre nodulacin efectiva e
2 - 22,7 2,0 Los ndulos en tallos presentes en ciertas leguminosas, ATP y para la fijacin del N2. En los ndulos, la con- inefectiva
como Sesbania rostrata, se independizan del problema centracin de leghemoglobina es del orden de 1 mM, o
6 - 67,8 3,5
del exceso de agua. sea 105 veces superior a la concentracin para su mxi- Ndulos efectivos Ndulos inefectivos
0 3,5. 104 23,1 2,5 ma actividad. El efecto tampn es muy grande, minimi-
0,5 23,4 2,4 Salinidad zando el efecto de concentraciones fluctuantes de O2. pocos y situados numerosos y repartidos
Los suelos se clasifican en salinos si su conductividad elc- sobretodo en la en todo el sistema
2 30,0 3,2
trica es mayor que 4dS/m. Contienen adems de sodio, La cantidad de nitrgeno fijado en los ndulos es fun- raz primaria radical
6 56,8 3,0
un pH desfavorable, un desbalance de iones esenciales cin de: voluminosos de pequeos, de super-
(P, Fe, Zn, Mn, Bo), una estructura y textura alterada que superficie lisa o rugosa ficie lisa
reduce la aireacin y la retencin de agua. el volumen del tejido con bacteroide
La seleccin de rhizobios tolerantes a altas temperaturas actividad meriste- actividad meristemtica
y a la desecacin es muy importante en la introduccin de La tolerancia de los rhizobios a las sales vara mucho y de su actividad especfica, es decir, la eficiencia en la mtica y nodular y nodular corta
leguminosas forrajeras en regiones ridas y semiridas, o hecho las leguminosas y las plantas actinorrticas son ms fijacin del N2 prolongada
de cultivos como soja o man, en zonas ridas con irriga- sensibles a la salinidad que la mayora de las bacterias.
cin. La unin con arcillas, como por ejemplo de mont- Los hongos ectomicorrcicos pueden incrementar la re- el tiempo en que permanece activo infeccin generalizada, pocas clulas infectadas,
morillonita, protege a las clulas y les confiere resistencia sistencia a la salinidad de leguminosas noduladas. zona bacteriana grande, pocos o sin bacteroides
a altas temperaturas y desecacin. Las relaciones entre la bacteria, el husped y su ambien- con bacteroides presencia de grnulos
Fuentes de carbono y energa te pueden afectar a la fijacin del N2. Usualmente, la res- de almidn
La simbiosis es ms sensible a extremos de tempera- Los rhizobios introducidos en el suelo deben competir por triccin en el nmero de ndulos es compensada por un
tura. Bajas temperaturas retardan la infeccin y forma- interior rojo por la no pigmentados de rojo
los nutrientes del suelo. El uso eficiente de las fuentes mayor tamao de los mismos. Para evaluar tempranamen- leghemoglobina
cin de ndulos, en tanto que las altas temperaturas pro- naturales de carbono, energa y dems nutrientes, es de te la fijacin se tiene ms en cuenta la masa de tejido
vocan ndulos poco eficientes. suma importancia para su persistencia. La competencia nodular, que su nmero.
saproftica es una de las cualidades que se les exige a Las bacterias simbiticas que nodulan tallos de Aes-
Para las leguminosas tropicales, temperaturas diurnas de las cepas para ser seleccionadas en la produccin de ino- El cuadro 8 presenta algunas de las caractersticas de
25 a 32C son ptimas para nodulacin, funcionamiento chynomene son Bradyrhizobium, fijadoras al estado
culantes. Las leguminosas ejercen efectos estimulantes los ndulos efectivos y de los inefectivos (que no fijan libre in-vitro, como Azorhizobium, algunos son ade-
de la simbiosis y crecimiento de las plantas, con gran va- sobre la poblacin de rhizobios, a travs de sus exudados cantidades detectables de N2). Entre ambos grupos
riacin entre especies. Los algarrobos exiben un ptimo ms fotosintticos con pigmentos como la bacterio-
y descamaciones de tejidos. existen varios grados de efectividad. clorofila, carotenoids y fotocromos. En la isla de La
de 35C para la FBN.
Reunin y en Mxico, casuarinas localizadas en lu-
El agregado al suelo de sustratos orgnicos, como abo- gares de mucha lluvia, presentan en sus troncos pro-
El nivel de agua debe ser tal que no origine problemas Ndulos areos
nos de granja estimulan a los rhizobios debido, tal vez, tuberancias con ndulos (figura 6 ) (Duhoux y Nico-
de presin osmtica en la clula. En regiones tropicales La interaccin rhizobio-leguminosa se da tambin en
al efecto combinado de los nutrientes orgnicos e inor- le, 2004).
con estaciones muy secas, el nmero de rhizobios en las ciertas plantas a nivel de los tallos (nodulacin area
gnicos, modificaciones del pH, o aumentos en el nivel
se detecta en la evolucin neta del H2. Se postula que la la hidrogenasa contribuye a la proteccin de la nitroge- co del microorganismo diazotrofo, del hospedante, o de
presencia de una hidrogenasa puede contribuir a incre- nasa al eliminar el H2 ambos (en caso de las simbiosis) y del ambiente (Gra-
mentar la eficiencia de la FBN en varias vas: ham, 1998).
provee una fuente de poder reductor que puede resul- Autoregulacin en la formacin de ndulos Fisico-qumicos
tar metablicamente til, por ejemplo en la regenera- pH
cin de ATP. Con mucho N combinado en el suelo, la planta regula
la nodulacin. La planta puede tambin controlar la for- Este factor afecta distintas etapas de la simbiosis:
la oxidacin del H
2
est acoplada a la consumicin del macin de ndulos en ausencia de nitrgeno combina-
O2, por lo tanto se protege a la N2asa. do: se habla de autoregulacin. La zona susceptible La bacteria es muy sensible a la acidez, aunque diferen-
de las races no puede soportar futuras nodulaciones tes cepas de una misma especie difieren marcadamente
Figura 6- Ndulos caulinares en Sesbania rostrata. el H es un inhibidor de la reduccin del N2 por la N2asa luego del establecimiento de la primera infeccin. Existe por su sensibilidad al pH. El encalado permite incremen-
2
Desarrollo del tallo, cada punto representa un sitio de y la actividad H2asa puede remover un potencial inhibi- evidencia de que la emergencia de ndulos en legumi- tos en la nodulacin. Se seleccionan rhizobios por su re-
nodulacin, los sitios de nodulacin son puntos de salida de dor de la reduccin del N2. nosas est controlada por mecanismo de seal y res- sistencia a pH cidos (pH 4,5).
races adventicias, ndulos ereos y corte de un ndulo. puesta. Las siguientes hiptesis pueden explicar la au-
Existe mucho debate sobre el hecho de que la presencia toregulacin: Las leguminosas se afectan directamente por accin de
de una activa H2asa (fenotipo Hup+) confiere un beneficio altas concentraciones de H+, o bien indirectamente por
Otras enzimas que poseen los rhizobios significativo a las leguminosas en el campo. Compara- los rhizobios inducen divisiones celulares en la cor- deficiencias (Ca, Mg) o toxicidad (Al, Mn). La FBN puede
cin entre simbiosis con Hup- y Hup+ han dado resultados teza ocurrir a pH menores que los necesarios para la persis-
Hidrogenasa: La nitrogenasa libera H2, que puede per- variables. La planta puede afectar la expresin de la acti- tencia de la bacteria y la infeccin.
derse o ser recapturado por una hidrogenasa: la reaccin vidad de la hidrogenasa, unas 128 cepas de B.japonicum estas divisiones producen una seal transtocable que
simplificada es expresan actividad H2asa en simbiosis con cowpea, pero acta directamente o por la parte area para suprimir la El encurvamiento de pelos capilares de Medicago sativa
no con soja. activiadad de divisin celular en la corteza. por S. meliloti se detuvo a pH 4,5 pero ocurri cuando ste
H2 + X H2X X es el aceptor final de electrones, se elev a 5,5. La iniciacin de los ndulos y del cordn de
usualmente el O2 Los problemas de la competencia de la cepa del inocu- infeccin son sensibles a la acidez algunas horas luego de
Proteccin de la nitrogenasa frente al lante con rhizobios nativos es motivo de estudios a nivel que el encurvamiento se ha completado. Los niveles crti-
El gran inters de la hidrogenasa se ha centrado en su oxgeno gentico y caracteres que favorecen la colonizacin como: cos de pH para la nodulacin varan con las especies y aun
posible rol en incrementar la eficiencia de la FBN. El tr- movilidad, produccin de antibiticos, caractersticas de dentro de estas, sitandose entre pH 3,5 y 5,5, con mayor
mino Eficiencia relativa (ER) ha sido definido como: En los sistemas simbiticos diferentes mecanismos de superficie para la adhesin, velocidad de nodulacin, se tolerancia en especies tropicales, como el caupi, producto-
proteccin estn involucrados: estn identificando e introduciendo en cepas altamente ra de granos y estilosante, forrajera. La leguminosa puede
ER= electrones usados en la reduccin del N2 fijadoras. El empleo de un par rhizobio-leguminosa con aumentar el pH de su rizosfera, favoreciendo al rhizobio y
flujo total de electrones a la nitrogenasa la corteza de los ndulos constituye una importante infectividad suficientemente restringida para prevenir la la nodulacin. La inoculacin con altas dosis de rhizobios
barrera fsica a la difusin del O2 nodulacin por la poblacin indgena ser una muy buena facilita la infeccin y la nodulacin.
Experimentalmente se determina: solucin, independizando al inoculante del nivel de rhizo-
la leghemoglobina en leguminosas o hemoglobina en bios del suelo. El encalado es el mtodo ms empleado para mejorar
ER= 1- H2 liberado en aire plantas actinorrticas. Este pigmento rojo se presenta estos suelos. En Brasil se lograron grandes aumentos en
H2 liberado en atm.sin N2 en el tejido central de ndulos fijadores, rodeando a los los rendimientos por el encalado y la inoculacin de legu-
bacteroides. Esta molcula es una nodulina, hemopro- Factores limitantes de la FBN en la simbiosis minosa. El cuadro 9 muestra este efecto y la inoculacin
ER = 1- H2 liberado en aire tena temprana sintetizada en los ndulos. La fraccin rhizobio-leguminosa con R. leguminosarum bv phaseoli en poroto en suelos
C2H2 reduccin proteica parece ser codificada por el vegetal, mientras altamente cidos de Colombia.
que los bacteroides seran los responsables de la snte- Los factores que afectan la sobrevivencia de la bacteria
Dado que hasta un 25% de los electrones destinados a sis de la fraccin hemo en el suelo y aquellos que afectan la iniciacin de los n- Temperatura y humedad
la N2asa se pueden perder en la evolucin del H2, el mxi- dulos, son sin duda decisivos en el xito de la simbiosis. Los rhizobios son organismos mesfilos pero estn sin
mo valor para la ER ser 0,75. En realidad se encontra- la respiracin de los bacteroides contribuye a la re- Por ser un proceso resultante de complejas reacciones embargo, distribuidos en todas las regiones del mundo.
ron valores entre 0,40 a 0,99. Valores superiores a 0,75 mocin del O2 (6 veces ms alta que en ndulos inefec- fisiolgicas y bioqumicas, que involucra especies distin- Difieren marcadamente en su tolerancia a elevadas tem-
son slo posibles si algo del H2 liberado por la N2asa no tivos) tas, la FBN depende de la expresin del potencial genti- peraturas. En general, S. meliloti es la especie ms tole-
se detecta en la evolucin neta del H2. Se postula que la la hidrogenasa contribuye a la proteccin de la nitroge- co del microorganismo diazotrofo, del hospedante, o de
presencia de una hidrogenasa puede contribuir a incre- nasa al eliminar el H2 ambos (en caso de las simbiosis) y del ambiente (Gra-
mentar la eficiencia de la FBN en varias vas: ham, 1998).
provee una fuente de poder reductor que puede resul- Autoregulacin en la formacin de ndulos Fisico-qumicos
tar metablicamente til, por ejemplo en la regenera- pH
cin de ATP. Con mucho N combinado en el suelo, la planta regula
la nodulacin. La planta puede tambin controlar la for- Este factor afecta distintas etapas de la simbiosis:
la oxidacin del H
2
est acoplada a la consumicin del macin de ndulos en ausencia de nitrgeno combina-
O2, por lo tanto se protege a la N2asa. do: se habla de autoregulacin. La zona susceptible La bacteria es muy sensible a la acidez, aunque diferen-
de las races no puede soportar futuras nodulaciones tes cepas de una misma especie difieren marcadamente
Figura 6- Ndulos caulinares en Sesbania rostrata. el H es un inhibidor de la reduccin del N2 por la N2asa luego del establecimiento de la primera infeccin. Existe por su sensibilidad al pH. El encalado permite incremen-
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Desarrollo del tallo, cada punto representa un sitio de y la actividad H2asa puede remover un potencial inhibi- evidencia de que la emergencia de ndulos en legumi- tos en la nodulacin. Se seleccionan rhizobios por su re-
nodulacin, los sitios de nodulacin son puntos de salida de dor de la reduccin del N2. nosas est controlada por mecanismo de seal y res- sistencia a pH cidos (pH 4,5).
races adventicias, ndulos ereos y corte de un ndulo. puesta. Las siguientes hiptesis pueden explicar la au-
Existe mucho debate sobre el hecho de que la presencia toregulacin: Las leguminosas se afectan directamente por accin de
de una activa H2asa (fenotipo Hup+) confiere un beneficio altas concentraciones de H+, o bien indirectamente por
Otras enzimas que poseen los rhizobios significativo a las leguminosas en el campo. Compara- los rhizobios inducen divisiones celulares en la cor- deficiencias (Ca, Mg) o toxicidad (Al, Mn). La FBN puede
cin entre simbiosis con Hup- y Hup+ han dado resultados teza ocurrir a pH menores que los necesarios para la persis-
Hidrogenasa: La nitrogenasa libera H2, que puede per- variables. La planta puede afectar la expresin de la acti- tencia de la bacteria y la infeccin.
derse o ser recapturado por una hidrogenasa: la reaccin vidad de la hidrogenasa, unas 128 cepas de B.japonicum estas divisiones producen una seal transtocable que
simplificada es expresan actividad H2asa en simbiosis con cowpea, pero acta directamente o por la parte area para suprimir la El encurvamiento de pelos capilares de Medicago sativa
no con soja. activiadad de divisin celular en la corteza. por S. meliloti se detuvo a pH 4,5 pero ocurri cuando ste
H2 + X H2X X es el aceptor final de electrones, se elev a 5,5. La iniciacin de los ndulos y del cordn de
usualmente el O2 Los problemas de la competencia de la cepa del inocu- infeccin son sensibles a la acidez algunas horas luego de
Proteccin de la nitrogenasa frente al lante con rhizobios nativos es motivo de estudios a nivel que el encurvamiento se ha completado. Los niveles crti-
El gran inters de la hidrogenasa se ha centrado en su oxgeno gentico y caracteres que favorecen la colonizacin como: cos de pH para la nodulacin varan con las especies y aun
posible rol en incrementar la eficiencia de la FBN. El tr- movilidad, produccin de antibiticos, caractersticas de dentro de estas, sitandose entre pH 3,5 y 5,5, con mayor
mino Eficiencia relativa (ER) ha sido definido como: En los sistemas simbiticos diferentes mecanismos de superficie para la adhesin, velocidad de nodulacin, se tolerancia en especies tropicales, como el caupi, producto-
proteccin estn involucrados: estn identificando e introduciendo en cepas altamente ra de granos y estilosante, forrajera. La leguminosa puede
ER= electrones usados en la reduccin del N2 fijadoras. El empleo de un par rhizobio-leguminosa con aumentar el pH de su rizosfera, favoreciendo al rhizobio y
flujo total de electrones a la nitrogenasa la corteza de los ndulos constituye una importante infectividad suficientemente restringida para prevenir la la nodulacin. La inoculacin con altas dosis de rhizobios
barrera fsica a la difusin del O2 nodulacin por la poblacin indgena ser una muy buena facilita la infeccin y la nodulacin.
Experimentalmente se determina: solucin, independizando al inoculante del nivel de rhizo-
la leghemoglobina en leguminosas o hemoglobina en bios del suelo. El encalado es el mtodo ms empleado para mejorar
ER= 1- H2 liberado en aire plantas actinorrticas. Este pigmento rojo se presenta estos suelos. En Brasil se lograron grandes aumentos en
H2 liberado en atm.sin N2 en el tejido central de ndulos fijadores, rodeando a los los rendimientos por el encalado y la inoculacin de legu-
bacteroides. Esta molcula es una nodulina, hemopro- Factores limitantes de la FBN en la simbiosis minosa. El cuadro 9 muestra este efecto y la inoculacin
ER = 1- H2 liberado en aire tena temprana sintetizada en los ndulos. La fraccin rhizobio-leguminosa con R. leguminosarum bv phaseoli en poroto en suelos
C2H2 reduccin proteica parece ser codificada por el vegetal, mientras altamente cidos de Colombia.
que los bacteroides seran los responsables de la snte- Los factores que afectan la sobrevivencia de la bacteria
Dado que hasta un 25% de los electrones destinados a sis de la fraccin hemo en el suelo y aquellos que afectan la iniciacin de los n- Temperatura y humedad
la N2asa se pueden perder en la evolucin del H2, el mxi- dulos, son sin duda decisivos en el xito de la simbiosis. Los rhizobios son organismos mesfilos pero estn sin
mo valor para la ER ser 0,75. En realidad se encontra- la respiracin de los bacteroides contribuye a la re- Por ser un proceso resultante de complejas reacciones embargo, distribuidos en todas las regiones del mundo.
ron valores entre 0,40 a 0,99. Valores superiores a 0,75 mocin del O2 (6 veces ms alta que en ndulos inefec- fisiolgicas y bioqumicas, que involucra especies distin- Difieren marcadamente en su tolerancia a elevadas tem-
son slo posibles si algo del H2 liberado por la N2asa no tivos) tas, la FBN depende de la expresin del potencial genti- peraturas. En general, S. meliloti es la especie ms tole-
rante a temperaturas elevadas, R. leguminosarum lo es cepas superficiales del suelo disminuye rpidamente. Con mtrica se emplea como medida de la potencialidad de o caulinar). Es bien conocida en varias especies de
menos y los rhizobios de leguminosas tropicales soportan las lluvias, la recolonizacin puede ocurrir desde las ca- fijacin. Sesbania como S. rostrata, leguminosa arbustiva que
amplio rango de temperatura. pas ms profundas. habita regiones anegadas, en Aeschynomene, Nep-
Su principal funcin est relacionada con la provisin de tunia natans, Discolobium pulchellum, Eritrina crista-
La disminucin del potencial hdrico del suelo limita tam- adecuadas cantidades de O2 para el metabolismo respi- galli y en plantas actinorrticas (Casuarina equiseti-
Cuadro 9 - Efecto de la inoculacin en Phaseolus bin el transporte de los productos de la fijacin a la plan- ratorio de los bacteroides, manteniendo el nivel suficien- folia, C. glauca y C. cunninghamiana). El gnero Aes-
vulgaris con rhizobios en suelos cidos y ta y el flujo de fotosintetizados. Altas humedades limitan temente bajo, como para no daar el funcionamiento de chynomene posee unas 350 especies de origen tropi-
encalados la aireacin y la FBN. Algunos rhizobios con nitrato rela nitrogenasa. cal, muchos de ellos viven en ambientes semi ridos
ductasa desasimilativa (nir-) pueden sobrevivir en anae- y en suelos inundados en estacin de lluvias. Se han
cal ton/ha rhizobio/g suelo ndulos/ N% robiosis. Los ndulos soportan poco tiempo el enegamiento La constante de equilibrio para la oxigenacin de la descrito 22 especies con ndulos areos (Duhoux y
inoculados planta (aumentan las lenticelas: expansiones de clulas epidr- leghemoglobina (0,04. 10-6M) asegura que los bacte- Nicole, 2004).
micas que facilitan los intercambios gaseosos, o los es- roides suspendidos en solucin parcialmente oxigena-
0 - 20,2 1,4 pacios vacos, con gases). da de este pigmento, se encuentren en concentracin
0,5 - 19,0 1,3 de O2 libre en el rango para una ptima produccin de Cuadro 8 - Diferencias entre nodulacin efectiva e
2 - 22,7 2,0 Los ndulos en tallos presentes en ciertas leguminosas, ATP y para la fijacin del N2. En los ndulos, la con- inefectiva
como Sesbania rostrata, se independizan del problema centracin de leghemoglobina es del orden de 1 mM, o
6 - 67,8 3,5
del exceso de agua. sea 105 veces superior a la concentracin para su mxi- Ndulos efectivos Ndulos inefectivos
0 3,5. 104 23,1 2,5 ma actividad. El efecto tampn es muy grande, minimi-
0,5 23,4 2,4 Salinidad zando el efecto de concentraciones fluctuantes de O2. pocos y situados numerosos y repartidos
Los suelos se clasifican en salinos si su conductividad elc- sobretodo en la en todo el sistema
2 30,0 3,2
trica es mayor que 4dS/m. Contienen adems de sodio, La cantidad de nitrgeno fijado en los ndulos es fun- raz primaria radical
6 56,8 3,0
un pH desfavorable, un desbalance de iones esenciales cin de: voluminosos de pequeos, de super-
(P, Fe, Zn, Mn, Bo), una estructura y textura alterada que superficie lisa o rugosa ficie lisa
reduce la aireacin y la retencin de agua. el volumen del tejido con bacteroide
La seleccin de rhizobios tolerantes a altas temperaturas actividad meriste- actividad meristemtica
y a la desecacin es muy importante en la introduccin de La tolerancia de los rhizobios a las sales vara mucho y de su actividad especfica, es decir, la eficiencia en la mtica y nodular y nodular corta
leguminosas forrajeras en regiones ridas y semiridas, o hecho las leguminosas y las plantas actinorrticas son ms fijacin del N2 prolongada
de cultivos como soja o man, en zonas ridas con irriga- sensibles a la salinidad que la mayora de las bacterias.
cin. La unin con arcillas, como por ejemplo de mont- Los hongos ectomicorrcicos pueden incrementar la re- el tiempo en que permanece activo infeccin generalizada, pocas clulas infectadas,
morillonita, protege a las clulas y les confiere resistencia sistencia a la salinidad de leguminosas noduladas. zona bacteriana grande, pocos o sin bacteroides
a altas temperaturas y desecacin. Las relaciones entre la bacteria, el husped y su ambien- con bacteroides presencia de grnulos
Fuentes de carbono y energa te pueden afectar a la fijacin del N2. Usualmente, la res- de almidn
La simbiosis es ms sensible a extremos de tempera- Los rhizobios introducidos en el suelo deben competir por triccin en el nmero de ndulos es compensada por un
tura. Bajas temperaturas retardan la infeccin y forma- interior rojo por la no pigmentados de rojo
los nutrientes del suelo. El uso eficiente de las fuentes mayor tamao de los mismos. Para evaluar tempranamen- leghemoglobina
cin de ndulos, en tanto que las altas temperaturas pro- naturales de carbono, energa y dems nutrientes, es de te la fijacin se tiene ms en cuenta la masa de tejido
vocan ndulos poco eficientes. suma importancia para su persistencia. La competencia nodular, que su nmero.
saproftica es una de las cualidades que se les exige a Las bacterias simbiticas que nodulan tallos de Aes-
Para las leguminosas tropicales, temperaturas diurnas de las cepas para ser seleccionadas en la produccin de ino- El cuadro 8 presenta algunas de las caractersticas de
25 a 32C son ptimas para nodulacin, funcionamiento chynomene son Bradyrhizobium, fijadoras al estado
culantes. Las leguminosas ejercen efectos estimulantes los ndulos efectivos y de los inefectivos (que no fijan libre in-vitro, como Azorhizobium, algunos son ade-
de la simbiosis y crecimiento de las plantas, con gran va- sobre la poblacin de rhizobios, a travs de sus exudados cantidades detectables de N2). Entre ambos grupos
riacin entre especies. Los algarrobos exiben un ptimo ms fotosintticos con pigmentos como la bacterio-
y descamaciones de tejidos. existen varios grados de efectividad. clorofila, carotenoids y fotocromos. En la isla de La
de 35C para la FBN.
Reunin y en Mxico, casuarinas localizadas en lu-
El agregado al suelo de sustratos orgnicos, como abo- gares de mucha lluvia, presentan en sus troncos pro-
El nivel de agua debe ser tal que no origine problemas Ndulos areos
nos de granja estimulan a los rhizobios debido, tal vez, tuberancias con ndulos (figura 6 ) (Duhoux y Nico-
de presin osmtica en la clula. En regiones tropicales La interaccin rhizobio-leguminosa se da tambin en
al efecto combinado de los nutrientes orgnicos e inor- le, 2004).
con estaciones muy secas, el nmero de rhizobios en las ciertas plantas a nivel de los tallos (nodulacin area
gnicos, modificaciones del pH, o aumentos en el nivel
En el futuro desarrollo del ndulo ocurren drsticos cam- dos los tipos, excepto caesalpinoides, se presentan de CO2 del suelo. Como regla general, en suelos frtiles El cobalto (Co), hierro (Fe) y magnesio (Mg) son impor-
bios anatmicos y citolgicos en clulas de la corteza. Pe- en las Papilionoideae. El descubrimiento de ndulos los rhizobios sobreviven por perodos considerables. Se tantes en el funcionamiento de la nitrogenasa y para la
queas clulas meristemticas se convierten en grandes en tallos de Sesbania rostrata permiti la inclusin informa una disminucin de 10 veces en el nmero de planta, por lo que los requerimientos en leguminosas no-
clulas con bacteroides. Su rpida senescencia una vez de un tercer tipo de ndulos determinados: sesba- R. meliloti luego de 14 aos y un nmero variable de duladas se incrementan.
cumplida la funcin de fijacin del N2 est tambin rela- noide clulas se encontraron en suelo estril, luego de ms de
cionada con cambios en el balance hormonal. Los ndu- 30 aos. El nitrgeno combinado afecta el desarrollo de los n-
los de leguminosas y los tumores de agallas de corona indeterminados: con meristema apical que contina dulos y la fijacin del N2. Es bien conocida la inhibicin de
estn inducidos por bacterias estrechamente relaciona- activo a travs de la vida del ndulo, dando nuevos l- La sobrevivencia de la bacteria depende del nivel introdu- la nodulacin por los iones nitrato o amonio, aunque las
das: Rhizobium o Bradhyrhizobium y Agrobacterium, y en bulos activos. Ejemplos: caesalpinoides (Mimosa, Albi- cido y del nivel de la poblacin nativa: si sta es alta, el leguminosas difieren en la susceptibilidad a estos com-
ambos casos se reconoce la induccin hormonal: en n- zia), crotalarioide (Vicia faba), lupinoide (Lupinus). Los inculo puede fallar debido a la mortandad natural y a la puestos. Se citan numerosas experiencias en la bibliogra-
dulos posiblemente por auxinas y citoquininas, liberadas ndulos perennes son del tipo indeterminado, el meris- competencia con la poblacin nativa por el alimento y el fa sobre los niveles mnimos de iones amonio que no in-
por los rhizobios, en las agallas, por hormonas que pro- tema persistente es capaz de reiniciar la actividad en espacio. hiben a la nitrogenasa; en general, 40 mg/kg de N-NH4+
ducen heridas. cada estacin de crecimiento. son tolerados, pero cantidades superiores a 100 mg/kg
Fertilidad del suelo inhiben la fijacin en la rizosfera, efecto que ha sido rela-
Dos tipos de estructura primaria se pueden describir En el ndulo maduro se diferencian las zonas: Las leguminosas noduladas presentan requerimientos cionado con inhibicin en la produccin de fitohormonas
(figura 5) (Duhoux y Nicole, 2004). mayores de nutrientes en relacin a las fertilizadas con cerca del sitio de infeccin.
a. cortical, formada por clulas no diferenciadas ni infec- nitrgeno combinado. Esto ocurre con los elementos que
Ndulo tadas. En especies perennes estas clulas pueden apa- se encuentran en la nitrogenasa y otros sistemas enzim- El crecimiento de los ndulos es ms sensible al exceso
recer suberificadas ticos, como el Mo, Fe, S, Cu, Mg, Co. La fertilizacin con de N que la nitrogenasa y ambos son ms sensibles que
meristema fsforo, potasio, azufre, microelementos, afectan la sola infeccin y los eventos iniciales de la nodulacin. La
nodular b. zona meristemtica, con activas divisiones celulares, brevivencia del rhizobio y la nodulacin y FBN. figura 7 muestra la sensibilidad al nitrato de amonio de
corteza con clulas no infectadas que darn origen a las otras algunas cepas de R. leguminosarum y la importancia de
externa zonas. En los ndulos efectivos la actividad meristem- El calcio es un elemento que se requiere en alto nivel la seleccin de cepas que mantengan la fijacin del N2 en
endodermis
tica es ms prolongada en leguminosas noduladas, sobre todo en las primeras presencia de N-combinado.
periciclo
haces etapas de la nodulacin. Si el nivel es bajo, se inhibe el
conductores c. zona vascular, constituye un sistema de vasos ligados encurvamiento de los pelos y la nodulacin. Al encalar mgN fijado/planta
corteza interna a los de la raz y por ellos la planta aporta los materiales suelos cidos, el calcio agregado aumenta el pH, dismi- 50
pelo energticos y retira los productos nitrogenados resul- nuyendo la solubilizacin de elementos txicos a altas
absorbente 40
endodermis
tantes de la fijacin concentraciones, como el Mn y el Al y se aumenta la
periciclo solubilidad del Mo. Se incrementan tambin los bicarbo- 30
floema d. zona bacteriana, o de infeccin, con clulas coloni- natos del suelo que favorecen el crecimiento del rhizo- V19
xilema zadas y otras no. Las primeras contienen a los bacte- bio en vida libre. 20 V200
roides y aparecen hipertrofiadas, alcanzando dimen-
Raz siones 4 a 8 veces superiores a las clulas sin bacte- El fsforo constituye un elemento necesario para la le- 10 V32
rias. El volumen de tejido infectado nos da un ndice guminosa y la FBN y como su disponibilidad es baja en
de la capacidad de fijacin. Los bacteroides apare- muchos suelos agrcolas; la incorporacin en la siembra 0
2,5 5,0 7,5 10,0
cen al microscopio electrnico individualmente o en es prctica corriente. Las micorrizas contribuyen a su
Figura 5 - Organizacin de ndulos indeterminados y mg N-NH4NO3/planta
grupo dentro de envolturas membranosas de origen absorcin y las races de la leguminosas son muy mico-
determinados de leguminosa vegetal. rrizadas.
Figura 7- Efecto del nitrato de amonio en la fijacin de N2 de
En las clulas colonizadas aparece una hemoprotena, El molibdeno (Mo) es un elemento clave en la nitrogena- Vicia atropurpurea inoculada con varias cepas de rhizobio
determinados: todas las partes se diferencian a la la leghemoglobina, que se une especficamente al O2 y sa, responsable de la transferencia de electrones de la
vez y la senescencia ocurre simultneamente, por lo lo libera a bajas concentraciones de O2. La concentra- reductasa de la nitrogenasa (Fe-protena) hacia el N2. Su
que estos ndulos tienen una existencia limitada. cin de esta sustancia slo encontrada en los ndulos nivel puede ser limitante en suelos tropicales y es acon- Un exceso de nitratos disminuye la deformacin de pe-
Ejemplos: aeschynomenoide (Aeschynomene, Ara- de leguminosas y no-leguminosas, se incrementa a me- sejable incluirlo en una fertilizacin basal. los capilares, la adhersin a sus paredes, el nmero de
chis), desmodoide (Arachis, Vigna unguiculata). To- dida que la fijacin progresa y su determinacin colori-
cordones de infeccin y aumenta el nmero de abortos De manera general, los fungicidas son ms perjudiciales, Cuadro 7 - Genes simbiticos en Rhizobium y en distintas leguminosas: r r en Trifolium pratense, la
de eventos iniciales de la infeccin. Uno de los mecanis- seguido de los herbicidas y los insecticidas. Se seleccio- Bradyrhizobium bacteria no penetra en los pelos radicales; rj1 rj1 en
mos de inhibicin podra ser por inactivacin del cido nan mutantes de rhizobio altamente efectivas en la fija- Glycine max: la nodulacin es controlada en las races,
indol-actico (AIA), fitohormona involucrada en la colo- cin del N2, resistentes a altos niveles de pesticidas, so- Gen Concepto Funcin Sym-l en Pisum sativum, el hospedante no nodula a tem-
nizacin, por los nitritos producidos por reduccin biol- bre todo a los fungicidas que son aplicados directamente hac encurvamiento Encurvamiento de pelos
peraturas menores a 26C y Sym-2, la inoculacin con
gica de los nitratos. Los nitritos tambin inactivan a la sobre las semillas. capilares ciertas cepas de R. leguminosarum en el mismo hospe-
leghemoglobina. dante produce fallas en la nodulacin por aborto de los
Productos de la fotosntesis nod nodulacin Eventos en desarrollo de canales de infeccin.
El amonio es asimilado inmediatamente, pero el nitrato La fotosntesis provee energa y poder reductor para la ndulos
requiere un perodo de tiempo antes de ser asimilado, fijacin del N2 y los esqueletos carbonados para la for- hsn especficos del, Determinacin de especi- morfologa de los ndulos es controlada por el hos-
coincidente con su reduccin por nitrato reductasas. El macin de aminocidos, amidas, etc., fuentes de nitr- hospedante ficidad del hesped pedante. Se ha demostrado tambin que el genotipo
exceso de amonio, o de glutamina, reprime la produc- geno para la leguminosa. Las leguminosas noduladas del hospedante influye sobre la distribucin de los n-
efn eficiencia de la nodulacin Genes adicionales para
cin y actividad de la nitrogenasa. Con alta disponibil- requieren iluminacin adecuada para mantener una ac- eficiencia de la nodulacin dulos en el sistema radical, as como en el nmero de
diad de N en la parte area se disminuye el nivel de tiva fijacin. Son muy conocidos los experimentos que ndulos formados.
fotosintetizados que llegan al ndulo. Sesbania rostrata muestran las fluctuaciones de la actividad nitrogenasa ndv desarrollo ndulo Regulacin del desarrollo
es una leguminosa que produce ndulos en races y de ndulos por cambios en la iluminacin, o cuando se del ndulo, ej: glucanos nodulacin efectivas o inefectivas: el trmino inefec-
cclicos
tallos, present marcada inhibicin de los ndulos radi- corta la parte area o se sombrean los cultivos. tiva se aplica cuando la secuencia se interrumpe en
cales por la presencia de nitrato de amonio, pero los n- exop polisacridos extracelulares Regulacin de infeccin y algn momento. Varios genes del hospedante contro-
dulos del tallo no fueron afectados y redujeron activa- Si se incrementa el nivel de CO2 de la parte area de liberacin de bacteroides lan la nodulacin inefectiva.
mente el acetileno. Esta planta posee una alternativa para plantas de soja (con envoltorios transparentes) la fija- nif fijacin de N2 Involucrados en FBN
evitar la inhibicin de la nodulacin radical y se ampla cin del N2 a los 40 das de la siembra se estimul ms homogos a los eficiencia de la FBN. As, en soja variedad Peking
el conocimiento sobre especies de leguminosas y de de 4 veces (evaluada por reduccin del acetileno a etile- de Klebsiella inoculada con cepas de R. japonicum (serogrupo 123)
plantas actinorrticas (simbiosis con Frankia) que pue- no). Pero en la prctica resulta muy difcil regular el ni- se forman ndulos grandes de aspecto normal, aun-
den formar ndulos en tallos. vel de CO2 sobre un cultivo, salvo manejando las densi- fix fijacin Genes adicionales involu- que las plantas permanecen pequeas y clorticas,
crados en la FBN en esta-
dades de siembra, la competencia entre plantas. sntomas de deficiencia en N. Sin embargo, la misma
do simbitico (sin homolo-
Interesa en muchos casos complementar el aporte de N ga con los genes nif de variedad establece simbiosis eficientes con otras ce-
por FBN con una fertilizacin con N combinado. Es nece- Con elementos marcados se mostr la translocacin de Klebsiella) pas de R. japonicum y lo mismo ocurre con las cepas
sario analizar el perodo de mayor fijacin a los efectos de productos de la fotosntesis hacia los ndulos: sacarosa, del serogrupo-123 con otras variedades de soja.
incorporarlo antes o despus (evaluacin actividades de glucosa, cidos orgnicos y se calcul el costo respirato- dct transporte c. di carboxlicos Transporte de c. di
nitrogenasa y nitratoreductasa). La inhibicin por nitratos rio de la fijacin del N2 en soja, caup y trbol blanco, con COOH- como sustratos nodulinas, protenas especficas sintetizadas como res-
para la FBN en bacteroides
es afectada por la combinacin rhizobio-leguminosa. El mucha similitud en las tres leguminosas: entre 6,3 y 6,8 puesta a la invasin por rhizobios, como por ejemplo la
empleo de mutantes nitrato-reductasa negativas, inca- mg C/mg N fijado. Consideraciones bioqumicas y teri- (leghemoglobina) con secuencias de mARN cuyo ori-
paces de reducir nitratos, ofrecen la alternativa de seguir cas indican que la reduccin del N2 a NH3 resultara de un gen est en el hospedante.
fijando N2 en presencia de N-NO3- costo mnimo respiratorio de unos 2C/1N, excluyendo los Gentica del hospedante
gastos por la conversin del amonio en otros compuestos
Polucin y aquellos involucrados en el desarrollo y mantencin de Las leguminosas muestran gran variabilidad gentica Estructura nodular
El uso indiscriminado de herbicidas, fungicidas, la acu- los ndulos. en respuesta a la invasin por rhizobios. Varios auto-
mulacin de sales de metales pesados en suelos y aguas res, consideran que el hospedante es el que corriente- Se cree que la formacin de los ndulos est controla-
resulta perjudicial para el rhizobio. Se han descrito diver- Si se consideran los costos de la FBN y el transporte, mente desempea el rol principal en el control de la da por fitohormonas: citoquininas, auxinas, gibere-
sas tcnicas de incorporacin de biocidas a las semillas la cifra puede superar el 33% de los fotosintetizados simbiosis, afectando el tamao, la forma y el nmero linas, producidas no slo por los rhizobios, sino tam-
evitando su ntimo contacto con la bacteria. A pesar de la que son translocados hacia los ndulos: un 5% se em- de ndulos, as como la efectividad de los mismos. Se bin por el husped frente al estmulo de la bacteria.
multiplicidad de resultados obtenidos, se piensa que los plea en el desarrollo de los ndulos, un 12% se respira reconocen: Estas sustancias inducen repetidas divisiones celula-
pesticidas aplicados en dosis aconsejadas no perjudican como CO2 y un 15% se reexporta hacia el husped con res de clulas poliploides. El cido abssico exgeno
al rhizobio. el N fijado. genes de no nodulacin : ausencia de ndulos en ejerce una inhibicin especfica y detiene la iniciacin
plantas inoculadas con especie compatible de rhizobio, nodular.
En la mayora de los miembros de los gneros: Bradyrhizobium japonicum, 3 diferencias separan a esas Factores biolgicos nosarum bv trifolii y S. meliloti en suelo estril y no est-
bacterias: Se han aislado de la rizosfera o del rizoplano cierto nme- ril. Se observa que estas bacterias mantienen alta den-
Rhizobium, los genes nod estn localizados en pls- ro de bacterias, hongos y sobre todo actinomicetes, que sidad en suelo estril y declinan lentamente en suelo no
En B. japonicum los genes de nodulacin no se locali-
midos (tambin llamados plsmidos simbiticos o se muestran antagnicos frente al rhizobio in vitro. Este estril, debido a interacciones biolgicas. La seleccin
zan en plsmidos sino que se distribuyen en el cromo-
sym) antagonismo puede deberse a competencia por los nu- de cepas buenas competidoras en los suelos donde va
soma.
trientes, acidificacin, produccin de antibiticos u otras a ser empleada, es un requisito importante cuando se
Bradyrhizobium y Azorhizobium, los genes nod se loca-
Los genes estructurales nif DK y H estn fsicamente sustancias, y aun a la predacin por protozoos o a la in- desea xito en la colonizacin temprana de races de
lizan en el cromosoma
separados por una distancia relativamente grande de feccin por fagos lticos. plntulas inoculadas.
los genes nod
Tres tipos de loci de nodulacin han sido identificados en
Muchas veces un inoculante desaparece en el suelo. La log10 N/g suelo
varios rhizobios: En el caso de rhizobios de crecimiento rpido las sus- causa precisa, de origen biolgico, es difcil de determi-
tancias que inducen los genes nod (molculas seal nar. Una bacteria predatora que lisa ciertas cepas de rhi-
genes nod comunes 9.0
derivadas de las plantas) pertenecen a la clase conoci- zobio ha sido identificada (Bdellovibrio bacteriovorus) (Ca-
genes nod especficos para el husped (hsn) estril
da como flavonoles, flavonas y flavanonas. En B. ja- ptulo 14). Este parsito afecta a los rhizobios en el suelo 8.0 no estril
genes nod genotipo especficos (GSN) ponicum las principales sustancias inductoras son iso- cuando la densidad de la presa es alta. La poblacin afec-
flavonas. tada puede aun mantenerse a niveles aceptables para
7.0 R. leguminosarum bv trifolii
Los genes nod comunes son funcionalmente similares
nodular leguminosas (104-105 clulas/ml), de modo que 9.0
entre especies de rhizobios. Incluyen nod ABC y son Genes de la fijacin del nitrgeno (cuadro 7) las frecuentes desapariciones de rhizobios introducidos
necesarios para la iniciacin y formacin del ndulo Dos grupos principales de genes han sido descriptos: 8.0
en el suelo, no pueden explicarse exclusivamente por las
(cuadro 7).
Los genes nif refieren a la secuencia gentica que es- actividades de este microparsito. S. meliloti
7.0
Los genes nod D estn estrechamente ligados a los ge- tn especficamente involucrados en el proceso de FBN
Los fagos lticos fueron motivo de numerosos estudios, 1 14 21 28 35 42 das
nes nod comunes. Poseen una funcin regulatoria, sus y que se correlacionan estructural y funcionalmente con
diazotrofos de vida libre, sobretodo Klebsiella pneumo- sobre todo en suelos donde las pasturas fracasaban en la Figura 8- Sobrevivencia de R. leguminosarum bv trifolii y S.
productos interactan con seales moleculares vegetales
niae. nodulacin luego del segundo ao de instaladas. El pro- meliloti en suelo estril y no estril
(flavonoides e isoflavonoides) y activan la transcripcin
blema de la decadencia de los alfalfares fue atribudo, en
de otros genes nod inducibles. Los genes nod ABC codi- Los genes fix (para la fijacin) estn tambin especfi- parte a la accin de estos parsitos intracelulares.
fican protenas que determinan factores extracelulares que camente involucrados en la FBN, pero no se correla-
causan deformacin de los pelos y divisin de clulas cor- Inoculacin de las leguminosas
cionan con los de K.pneumoniae. Esta fue la primera Las bacteriocinas constituyen un grupo de sustancias,
ticales de la raz. bacteria fijadora de N2 estudiada en detalle, por la sobre todo protenas, pptidos, producidas por muchas La fijacin biolgica del nitrgeno por la simbiosis
adaptacin de tcnicas empleadas primeramente en bacterias que afectan a organismos muy relacionados,
hsn (host specific nodulation) son los loci requeri- rhizobio-leguminosa compite econmicamente con la fer-
E.coli. incluso de la misma especie, a diferencia de los antibiti-
dos para nodulacin de una planta especfica en di- tilizacin nitrogenada. Si bien las gramneas fertilizadas
cos, que poseen un espectro de accin ms amplio. con nitrgeno producen ms materia seca por su mayor
ferentes gneros de leguminosas. Cuando un locus Los productos de los genes nif A y nif L controlan el ope-
de nodulacin de un organismo donador es transfe- eficiencia fotosinttica, la siembra de leguminosas se in-
rn de todos los otros genes nif. Las rhizobiocinas han sido descritas como elemento de
rido a una cepa recipiente apropiada, la inhabilita a crementa en el mundo, ya sea por la calidad nutritiva de
lucha biolgica que permite la supremaca de la clula sus granos (soja, man, leguminosas tropicales), por su
nodular la planta husped del donador, el gen es Genes fix junto a otros genes involucrados en la FBN productora frente a la poblacin de rhizobios nativos del aporte en forrajes y sobre todo cuando se desea recupe-
considerado hsn. son referidos colectivamente como genes sym, que in- suelo. Para algunos autores seran partculas defectuo- rar suelos muy degradados.
cluyen a los necesarios para las interacciones iniciales sas de fagos, pues se parecen a las colas de ciertos virus
GSN (genotype-specific nodulation) se refieren a ge- con la planta (reconocimiento, encurvamiento, forma- de E. coli, y su sntesis est muchas veces mediatizada En muchos suelos el nivel y la eficiencia de las cepas na-
nes que permiten la nodulacin de genotipos especfi- cin cordn de infeccin) y la formacin y mantenimien- por plsmidos. tivas pueden no ser los adecuados y la nodulacin y la
cos de plantas dentro de una especie de leguminosa to de los ndulos radicales o de tallos (nod, nol, GSN
dada. fijacin del N2 resultar insuficientes para satisfacer las
y hsn). Adems otro conjunto de genes bacterianos Distintos patgenos pueden afectar directamente a la demandas del cultivo.
estn involucrados en la biosntesis de la parte hemo FBN atacando ndulos (insectos) o indirectamente afec-
A pesar de que muchos de los mismos genes de nodula- de la nodulina leghemoglobina, necesaria para la tando el crecimiento de las plantas, como los nemto-
cin han sido encontrados en especies de Rhizobium y Desde muy antiguamente se practica la inoculacin arti-
proteccin del O2. dos. La figura 8 muestra la sobrevivencia de R. legumi- ficial de las semillas o del suelo en donde se van a intro-
ducir las leguminosas. Esta tcnica resulta imprescindi- 2. inoculada con una cepa potencialmente eficiente y infeccin 2 das luego de la inoculacin con rhizobio ca que un mnimo de 16 ATP se requieren por molcula
ble cuando se introducen nuevas leguminosas, sobre todo seleccionada en ensayos te invernculo o que es emplea- infectivo. Exmenes en cultivos en hidroponia sugi- de N2 reducida.
si son huspedes de alta especificidad (Trifolium, Medi- da con xito en otra regin (I) rieron que se requiere estrecha proximidad del n-
cago, Glycine), cuando la poblacin nativa es ineficiente cleo de las clulas de los pelos radicales y el pice En la prctica el costo es ms alto, debido a la ineficiencia
o cuando la deficiencia en nitrgeno limita el desarrollo 3. fertilizada con dosis ptmas de N inorgnico (N), pue- del cordn, mientras ste avanza hacia la base del de la actividad de la N2asa y a costos asociados al desa-
vegetal. de ser incluso inoculada, donde se logra el mximo desa- pelo. All, se ramifica en la pared celular y penetra en rrollo y mantenimiento del ndulo a la asimilacin y el trans-
rrollo la corteza. porte del amonio.
Requisitos para el xito de la inoculacin:
Ejemplos de resultados Dos hiptesis explican la invasin: Las estimaciones en la literatura varan ampliamente, un
que la semilla inoculada posea la bacteria adecuada en
invaginacin de la pared vegetal ante la presin de las dato generalmente reconocido se sita en 28 mol ATP
nmero suficiente
La figura 9 presenta algunas de las respuestas posibles. bacterias y participacin de enzimas, las bacterias den- por mol de N2, excluyendo los costos adicionales y hasta
que el mtodo y las condiciones de inoculacin permi- tro del pelo capilar pueden degradar la pared por enzimas el 33% de la energa fijada fotosintticamente.
tan la sobrevivencia de las bacterias Rendimiento similar en los tres tratamientos y buena lticas: carboxicelulasa y poliugalatouronasa.
nodulacin en los testigos, indica abundante y eficiente Interacciones entre genes de la bacteria y de la planta
que las condiciones del suelo prximo a la semilla poblacin nativa de rhizobios especficos para la legu- Diferenciacin nodular, cuando el cordn llega a una La iniciacin y formacin de los ndulos son el resultado
permitan la colonizacin de los rhizobios en la rizos- minosa, no se aconseja la inoculacin (caso A) clula particular (poliploide en relacin al hospedante) de interacciones simultneas de los genes de la planta y
fera, la formacin de los ndulos y su funcionamien- cesa la sntesis de pared o sta es degradada por enzi- de las bacterias.
to efectivo. Los testigos crecen pobremente y con ndulos inefecti- mas lticas y la bacteria es liberada en clulas que for-
vos, mientras que los inoculados lo hacen bien y con marn la zona infectada del futuro ndulo. En respues- genes de la nodulacin, genotipo especficos, jue-
abundante nodulacin, indican buena respuesta a la ino- ta a esta invasin, ciertas clulas corticales son estimu- gan un importante rol. Por ejemplo el genotipo arveja,
Tcnicas de inoculacin culacin (caso B) ladas a proliferar, se alargan y emergen como tejido no- Pisium sativum bv Afghanistan es nodulada por cepas
dular diferenciado, infectado con los rhizobios, que se de Rhizobium TOM pero no lo es por cepas europeas
natural: en la antigedad, los agricultores mezclaban transforman en bacteroides. de rhizobio. Los genes que permiten a las cepas TOM a
las semillas con tierra de plantos de leguminosas, ase- N alto
nodular arveja Afghanistan se han localizado en el pls-
gurndose la nodulacin La membrana de la clula vegetal forma otro envolto- mido simbitico.
medio rio para saparar los rhizobios de la planta: es la mem-
inoculantes comerciales productos con alta densidad brana peribacterial. Otro mecanismo de infeccin es induccin de genes de la nodulacin por flavonoi-
de cultivos especficos de rhizobios en diversos sopor- por heridas, que se presenta en algunas simbiosis, des e isoflavonoides, seales de la planta que indu-
bajo A B
tes, en general turba estril o en cultivos lquidos. La como en rhizobio-mani y en el caso de Frankia-no le- cen los genes nod han sido mostradas como nece-
dificultad en algunos pases para obtener turbas de bue- alto guminosas. sarias para la induccin de los genes de la nodula-
na calidad, obliga a la bsqueda de sustitutos, como cin. Un hecho interesante es que los rhizobios de
tierra de diatomeas, bagazo de caa, grava, etc. Fijacin de N2, varios das despus la bacteria den- amplio rango de huspedes, responden a un amplia
medio
tro de las clulas hospedantes en ndulos efectivos gama de compuestos y aquellos con estrecho rango
Establecimiento de la necesidad de inoculacin C D comienzan a fijar nitrgeno y excretan amonio en el aceptan solamente un limitado nmero de flavonoi-
bajo
La coleccin y seleccin de cepas de rhizobio puede re- citosol de las clulas de la planta donde puede ser des. Pico moles (pmol = 10-12 moles) de estos com-
sin inocular inoculado alto N mineral
sultar intil si las leguminosas nodulan eficientemente con asimilado por accin de la glutamato deshidrogena- puestos pueden inducir la expresin de los genes nod
poblaciones nativas, situacin frecuentemente encontra- sa (GDH) y por accin de la glutamino sintetasa de rhizobio.
Figura 9- Ensayo de campo para determinar la necesidad de
da en leguminosas tropicales, que nodulan con el mismo inoculacin de leguminosas (GS) o de la glutamino-2-oxiglutarato-amino-trans-
tipo de rhizobio o si el suelo contiene alto nivel de nitrge- ferasa (GOGAT). Esta segunda ruta es empleada ms Genes de la nodulacin
no combinado. Se emplea un ensayo simple de campo en frecuentemente. Las secuencias de ADN bacteriano que se requieren para
parcelas con 3 tratamientos, para determinar la necesi- Poco desarrollo en el inoculado, pero buena respuesta la formacin de ndulos fijadores de N2 en races o tallos
dad de inoculacin: a la fertilizacin, se supone que la cepa no es la ade- El costo exacto en la simbiosis con leguminosas en tr- se refieren como genes nod. Ms de 30 genes nod han
cuada o que la calidad del inoculante no es buena. En minos de ATP empleado es motivo de polmica. Desde sido identificados y secuenciados, ms que las letras del
1. testigo sin inocular para evidenciar la presencia y efi- este caso es necesario plantearse una seleccin de que la transferencia de cada electrn de los 8 involucra- alfabeto (nod A, nod Z) los futuros loci de nodulacin son
ciencia de cepas nativas (T) cepas ya sea a partir de ndulos de buenas plantas de dos en la reaccin requiere la hidrlisis de 2 ATP, signifi- referidos como genes nol (nodulacin loci).
otras regiones y de cepas seleccionadas por centros de rpido crecimiento en medios de cultivo simples y
a b coleccin del pas o del exterior (caso C) la sobrevivencia en los soportes ms empleados, son
importantes ventajas que facilitarn la preparacin de
Falta de nodulacin y pobre desarrollo vegetal en el tes- inoculantes
tigo, indican carencia de rhizobios nativos y si no hay
respuesta a los otros dos tratamientos se debe suponer estabilidad gentica, que no sufra frecuentes mutacio-
que otros factores, excluyendo el N, como el P, S, Fe, nes en la conservacin en el laboratorio
etc. limitan el crecimiento vegetal (caso D)
En la recomendacin de inoculantes se pueden dar alter-
Este mismo ensayo se emplea para evaluar el efecto de nativas:
otros nutrientes, como por ejemplo, el fsforo o microele-
mentos, mediante el diseo de parcelas divididas. El en- aconsejar el uso de varios inoculantes, cada uno con
sayo se instala en condiciones ptimas para el desarrollo una cepa altamente efectiva para especies individuales
vegetal, en general con una fertilizacin mnima basal. empleo de cepas de amplio espectro que fijan N2 con
amplio rango de leguminosas
Una vez establecida la necesidad de inoculacin, se de-
termina los criterios para la seleccin de cepas apro- aconsejar el uso de inoculantes con varias cepas, o
piadas para el husped en cuestin. Las cepas usadas polivalentes, que incluyan a las mejores cepas para
c d en los inoculantes deben ser cuidadosamente seleccio- cada especie del husped
nadas y mantenidas, deben probarse anualmente para
minimizar las posibilidades de cambios en las propieda- La tendencia en general es a la produccin de inoculantes
des simbiticas. con cepas de amplio espectro, de utilidad en vastas regio-
nes del pas e incluso a nivel regional. Esta prctica evita
Cualidades de una cepa de rhizobio para su recomen- tambin la introduccin de muchas cepas que con el tiempo
dacin en la fabricacin de inoculantes: se pueden volver ineficientes, pero manteniendo su infectivi-
dad, se comportan casi como parsitas. Pueden presentar-
efectividad en la fijacin del N2, la ms importante de se situaciones en las que se justifica la produccin de inocu-
las propiedades, las cepas deben superar significativa- lantes a nivel local, cuando las caractersticas de la zona y la
mente al testigo (T) en ensayos de laboratorio, invern- importancia de las variedades empleadas as lo justifiquen.
culo y campo
La inoculacin puede resultar imprescindible cuando se
competencia en la rizosfera o competencia saprofti- desea introducir una variedad o un cultivo nuevo en una
Figura 4 Etapas tempranas en la nodulacin en alfalfa: a) pelo absorbente no inoculado, n=ncleo, v=vacuola), ca, le permite a la bacteria soportar las condiciones regin. Resulta de importancia seleccionar cepas eficien-
b) encurvamiento del pelo, 8 horas luego de la inoculacin, la flecha grande muestra masa de bacterias en el bucle, fsico-qumicas del medio, emplear eficientemente los tes a partir de los rhizobios nativos, bien adaptados a
c) raz luego de 11 horas de la inoculacin, con cordn de infeccin, nutrientes disponibles y lograr imponerse a la poblacin las condiciones ecolgicas de la regin.
d) raz colonizada luego de 5 das de la inoculacin con un ndulo en formacin. nativa
La tarea de extensin es muy importante y el productor
otros requisitos: infectividad o sea buena capacidad debe conocer los beneficios que redundan de una buena
Encurvamiento de los pelos y marcada deforma- infeccin. Las giberelinas inhibiran el desarrollo de fu- para formar ndulos rpidamente, adaptacin a circuns- inoculacin.
cin de los mismos, constituyen los primeros pasos turos ndulos. tancias especiales, como bajos pH, tratamientos pesti-
de la infeccin. El pelo se encurva y encierra al rhizobio cidas, salinidad, capacidad para nodular a bajas tempe-
adherido. El fenotipo se designa como Hac+. Rhizobios Penetracin de la bacteria a travs de la pared de raturas, con altos niveles de nitrgeno combinado, etc. Respuesta a la inoculacin
heterlogos son incapaces de inducir encurvamiento de los pelos radicales y formacin de un cordn de
los pelos. La produccin de sustancias con caracter de infeccin tubular, intracelular que confina a las bac- hidrogenasa: le permite reciclar el H2 liberado en la poblacin nativa de rhizobios es escasa o nula o
fitohormonas como el AIA, debilitara las paredes de terias a medida que ellas penetran en las clulas del FBN, derivando los electrones liberados hacia la nitro- ineficiente, se obtienen en esta situacin muy buenos re-
los pelos, facilitando la deformacin que precede a la hospedante. En trbol blanco, se observ cordn de genasa sultados. Esto ocurre con el cultivo de soja en suelos sin
historia previa y donde se inocula en un casi 100% pues cas referentes al control de calidad de estos productos Cuadro 6 - Interaccin entre rhizobio y leguminosa en la formacin de ndulos
B.japonicum no se encuentra o est presente en niveles biolgicos. Los principales puntos a tener en cuenta al
bajos. inocular una leguminosa son: Fases Requerimientos Observaciones
Multiplicacin en suelo y raz Secreciones radicales pueden Especificidad variable
poblacin nativa de cepas especficas de eficiencia empleo de inoculantes a base de turba que asegu-
estimular o inhibir
moderada, resulta muchas veces difcil incrementar los ran buena sobrevivencia en la semilla hasta la germi-
rendimientos por inoculacin. nacin. La esterilidad de la turba permite extender los Encurvamiento pelos radicales Compatibilidad entre planta Especificidad variable
plazos de vencimiento (cuadro 11). Las formas pildori- y rhizobio
alta poblacin nativa con baja especificidad, como zadas que emplean adhesivos como goma arbiga o
ocurre con cultivos de leguminosas tropicales arbreas derivados celulsicos, para lograr mayor contacto con Entrada de la bacteria Invaginacin y/o disolucin o La planta puede tener factor
que nodulan con el mismo tipo de rhizobio, de baja es- la semilla, que se recubre con carbonato de calcio y debilitamineto de la pared celular gentico no-nodulante. Muy
pecificidad. Este es el caso del man, que presenta abun- fosfato de roca, mejoran la inoculacin. de la planta (enzimas) afectada ambiente (temp, pH)
dante nodulacin nativa en amplias regiones del centro Cordn de infeccin Sincronismo entre crecimiento En ndulos perennes, los
de Argentina. La seleccin de cepas ms eficientes en- biocidas y fertilizantes: asegurarse que las semi- de la bacteria y pared celular de cordones son tambin perennes
tre las nativas, bien adaptadas a la zona y una inocula- llas no hayan sido tratadas con sustancias txicos y la planta
cin masiva puede redundar en incrementos en este fertilizantes y que los recipientes empleados en la ino-
importante cultivo oleaginoso. culacin estn libres de aceites, petrleo, metales pe- Formacin de ndulos Balance entre factores de Rh-bacteria especfico inhibido alta
sados, etc. crecimiento del rhizobio y la planta temperatura y nitratos
El cuadro 10 presenta los resultados de un ensayo de Formacin clulas infectadas Liberacin rh del cordn, sincronismo Inhibida por factores ambientales
campo donde se observa abundante nodulacin de las conservacin: mantener el inoculante en ambiente fres- en el crecimiento de la membrana y un nutricionales que afectan
parcelas testigo, reflejo de la alta densidad de cepas nati- co, en lo posible en el refrigerador hasta su uso. No de la clula vegetal y la multiplicacin crecimiento vegetal
vas. Sin embargo, en la cosecha se apreci efecto positi- emplear inoculantes vencidos. del rhizobio
vo de la inoculacin por cepas seleccionadas en el peso
de cajas y en la produccin de N. inoculacin y siembra simultneas: sembrar lo ms Formacin bacteroides, Intercambio de seales y comple- Combinacin planta y rhizobios
pronto posible luego de la inoculacin, y si se pildoriz, sntesis N2asa y leghemo mentacin gentica especficos
no ms de unos das despus. globina
Cuadro 10- Inoculacin en man (Arachis hypogea,L) Mantencin del tejido Intercambio de metabolitos Afectada por altas temperatura,
condiciones de siembra: sembrar en suelo hmedo y si nodular con bacteroides (HdeC, N-org) alto nitratos, baja H%
Tratamiento Peso cajas Grano N% kgN/ha la temperatura es muy alta, hacerlo al final de la tarde.
kg/ha
testigo 2.115b 1.379b 4,77 65.76b tetizan lectinas con diferente afinidad por azcares. Es-
Cuadro 11 - Efecto de la esterilizacin de la turba La falla en alguna de estas delicadas etapas conduce a
urea 3.590a 2.342a 4.34 101,64a 6
70kgN/ha en la sobrevivencia de rhizobio (x 10 /g), luego de simbiosis deficientes o abortivas. tas sustancias se encuentran en semillas, races, hojas o
M-4 2.853a 1.822a 4,74 86,36a 4 y 26 semanas tallos y se piensa que cumplen varias funciones
M-13 2.679a 1.500ab 4,61 69,56a Multiplicacin rizosfrica de los rhizobios, a partir
M-10 2.673a 1.560ab 4.62 72,07a 4 semanas 26 semanas de materiales excretados por las races. Este proceso Algunos autores comparan a estas molculas con los an-
Cultivo A B C A B C no es especfico y se citan estimulaciones de rhizobios ticuerpos: los sitios a unir, en la bacteria y la planta, po-
Dos o ms tratamientos sealados por la misma letra no difieren por rizosferas de gramneas y otras plantas seen afinidad por la misma molcula, llamada trifolina,
por Tuckey al 5%. M-4, M-10 y M-13 son aislamientos de la zona R. leguminosarum 660 990 110 6 79 2,8
en trboles.
bv trifolii TA1
Adhesin entre la bacteria y clulas superficiales de los
S. meliloti SU47 1500 1800 697 180 170 5,3 Funciones de las lectinas en la FBN:
pelos radicales. La marcada especificidad en esta sim-
Uso de los inoculantes Bradyrhizobium 1100 1200 16 25 190 1,0 biosis se ha explicado en parte, por la teora de las lecti- I. adsorcin no especfica entre rhizobio y races
Los aspectos relacionados a la seleccin de cepas para CB 756 nas, glucoprotenas especficas que se unen por un lado
recomendar en un inoculante para leguminosa, el cultivo A= esterilizacin en autoclave a hidratos de carbono producidos por el hospedante, y II. rol especfico en la nodulacin: se unen a receptores bac-
del inculo y la formulacin de distintos tipos de inoculan- B= esterilizacin por rayos gama por el otro a receptores moleculares de la bacteria. Legu- terianos travs de los exopolisacridos (EPS) o derivados
tes son tratados en el Anexo prctico, as como las prcti- C= turba no estril minosas de diferentes grupos de inoculacin cruzada sin- de EPS. Mutantes EPS- no nodulan a su hospedante.
2. aporte de esqueletos carbonados por los vasos de munes A, B y C, encontrados en todas las especies de Rhi- Fijacin de nitrgeno por leguminosas excrecin de compuestos nitrogenados por los n-
la planta que le asegura la generacin de energa y zobium y genes especficos a una especie de Rhizobium. dulos y races
poder reductor para el endosimbionte y la actividad La cantidad de nitrgeno tomada por una leguminosa va-
pastoreo animal
nitrogenasa La expresin de genes estructurales conduce a la pro- ra considerablemente con la especie, la efectividad de la
duccin de seales bacterianas constituidas por lipo-oli- simbiosis, las condiciones del ambiente, del manejo, etc. descomposicin de parte area de la planta
3. transferencia del N fijado a la planta, disminuyendo gosacridos de glucosamina sulfatado, de PM 1.102, in-
el nivel de N combinado en la vecindad de nitrogenasa, ducido por flavonoides; stos son los factores de nodula- El cuadro 12 presenta valores sobre la fijacin en diferen- Se citan valores de N% en distintas partes de una legu-
principal causa de inhibicin del proceso. Las legumi- cin o factores Nod, que estimulan la curvatura de pelo y tes especies. La cantidad derivada del aire vara y repre- minosa, evaluado en floracin o hacia el final de sta:
nosas se clasifican segn la forma de exportar el N com- la divisin de las clulas corticales. senta en general un 50% del total en suelos frtiles, es mayor hojas (2,6-5,0); tallos (1,2-1,8), races (1,6-2,4), ndulos
binado: en suelos deficientes y menor con fertilizacin nitrogenada. (3,9-6,5), vainas (3,1-4,2) y en la planta entera en legu-
Los sustituyentes qumicos en la molcula base son los En asociaciones con gramneas la proporcin derivada de minosas tropicales (2,0-3,0).
productoras de amidas (asparagina, glutamina), so-
responsables en gran parte, de la especificidad hacia el la fijacin puede llegar al 80 o 90% pues el cultivo asociado
bretodo las leguminosas de zona templada
hospedante. toma la mayora del nitrgeno disponible en el suelo.
productoras de uredos (alantona, cido alantoco), Perspectivas
sobretodo en las leguminosas de zona tropical. En el curso de esta simbiosis, el programa gentico de la
planta hospedera es considerablemente modificado y Cuadro 12 - Nitrgeno fijado por leguminosas Algunos de las prioridades en la investigacin en el tema
La figura 3 (Dommergues et al., 1999) presenta un es- muchos genes de la planta se expresan en los ndulos. (kg/ha/ao) se pueden resumir:
quema que resume el dilogo molecular entre Sinorhizo-
bium y alfalfa que se traduce en intercambio de seales El cordn de infeccin se produce luego de invaginacin Forrajeras incorporar leguminosas no tradicionales en ensayos
que permiten distinguir tres niveles de especificidad indi- de la pared del pelo y crece a lo largo del mismo. Las Templadas de adaptacin como forrajeras perennes: Desmodium
cadas en el esquema por asteriscos. bacterias diferenciadas en bacteroides se rodean de una Medicago sativa (alfalfa) 177 intortum, Leucaena leucocephala, Lotenis bainesii,
membrana peribacterial que deriva de la membrana de Trifolium platense (trbol rojo) 115 Noenotonia wightii, Macroptilium atropurpureum
El proceso comienza con la exudacin de sustancias in- la clula vegetal. Trifolim repens (trbol blanco) 149
ductores (flavonoides, betanas) por la raz. En su presen- extender las investigaciones sobre la fijacin del N2 en
cia, las protenas reguladoras sintetizadas por los genes En la nodulacin se distinguen varias etapas resumidas legum.consociadas(pradera mixta) 125 leguminosas arbreas, importantes en la fijacin de
nodD de la bacteria son activadas e inducen los genes esen el cuadro 6 (Sprent y Sprent, 1990) y en la figura 4 (a, Melilotus alba (trbol de olor, blanco) 104 suelos arenosos, erosionados, con incremento del ni-
tructurales de la nodulacin. Estos incluyen los genes co- b y c, Wood y Newcomb, 1989; d, Truchet et al., 1989. Medicago polymorpha (trbol carretilla) 63 vel de materia orgnica (Dommergues, 1995, Frioni et
Trifolium subterraneum (trbol subterrneo) 24 al, 1998 a y b)
Alfalfa Lotus corniculatus(cuernecillo) 27
Sinorhizobium mililoti estudiar leguminosas indgenas, bien adaptadas a
Tropicales
Centrosema pubesens(centro) 112 determinadas zonas ecolgicas, pero no explotadas a
Protena NodD nivel agrcola
Stylosanthes guianensis 115
Neonotonia wightii 160-450 evaluar la simbiosis triple: leguminosa-rhizobio-hongo
nodD genes nod estructurales
precursores nod
Leguminosas de grano micorrtico
proteina nod H, acetato, templadas
sulfato, fucosa, Vicia 57-190 mejorar genticamente a los diazotrofos: el aumento
Seales excretadas por la metilfucosa,
Phaseolus vulgaris (poroto) 46 de la efectividad de los sistemas existentes se puede
grupo con: sulfometilfucosa,
planta (flavonoides, betanas) Lupinus sp.. (lupino) 128 alcanzar manipulando los genes nif responsables de la
acetil, acetil-metilfucosa,
carbonil D-arabinosa Tropicales fijacin del N2, construyendo nuevos organismos fijado-
Vigna unguiculata 35 - 77 res por transferencia de los genes
factores nod
H Glycine max (soja) 17-124
Induccin de ndulos radicales seleccionar mutantes de rhizobios que pueden fijar
H glicerol Arachis hipogea (mani) 33-117
carbonil
metil
N 2 en presencia de altos niveles de N combinado y
18C
16C
con una hidrogenasa funcional que le permita reci-
20C El N de las leguminosas puede transferirse a otros culti- clar los ATP, permiten mayores rendimientos en la
Figura 3- Esquema de la colonizacin de una leguminosa por rhizobio vos en mayor o menor grado por las siguientes vas: fijacin
aumentar la eficiencia en la toma de metales como el dos en el trpico, identificados primeramente como del bas perennes o hierbas anuales. Las especies adaptadas a y fijan N2 efectivamente en asociacin con estas cepas.
Mo y el Fe gnero Trema, como T. cannabina, cuyo endofito bacte- zonas templadas estn aclimatadas a desarrollarse en sue- Estas especies son: promiscuas en la nodulacin y
riano logr infectar varias leguminosas. los de alta fertilidad con elevados tenores en calcio y poseen en la efectividad, por ej. Vigna unguiculata, Macropti-
seleccionar genotipos del husped por su mayor acti- baja eficiencia en la extraccin del mismo y probablemente lium atropurpureum (siratro), Acacia crassicarpa (CL), A.
vidad reductora del acetileno en presencia de una mez- Cuadro 13 - Estrategias para optimizar la fijacin de otros nutrientes cuando crecen en suelos de baja fertili- auriculiformis (CL), Albizia lebbek (CL), Paraserianthes
cla comercial de cepas de rhizobio. Explorar especies del N2 dad. Presentan problemas de desarrollo y nodulacin en sue- falcataria (CL).
con ndulos en los tallos los cidos, a diferencia de las especies tropicales que pre-
1. Seleccin de la planta husped sentan alta capacidad de extraccin de nutrientes en suelos El segundo grupo esta formado por especies nodu-
transferir genes nif a mitocondrias o cloroplastos ve- criterios de seleccin cidos, aunque algunas como Desmodium e Indigofera res- ladas por un amplio rango de cepas genticamente
getales es otra de las aspiraciones de los genetistas. alto potencial de fijacin de N en simbiosis
2
ponden positivamente al encalado. diversas pero slo fijan N 2 con un limitado grupo de
Se piensa que los nif penetran en los vegetales fre- crecimiento rpido cepas especficas: promiscuas para la nodulacin
cuentemente por heridas o llevados por parsitos. El races profundas En el pas las leguminosas presentan gran potencial de y especficas para la efectividad, ej. Acacia man-
problema radica en el mantenimiento de estos genes competencia interespecfica reducida uso, como alimento, en especies de grano, forrajeras y gium (CL), Robinia pseudoacacia (CR), Acacia mear-
y su funcionamiento dentro del organismo superior. Se tolerancia limitaciones del ambiente: salinidad, rboles en los montes nativos y en asociaciones silvopas- nsii (CL).
piensa tambin en su introduccin en microorganis- sequedad toriles. Recientemente se han descrito las especies nati-
mos del rumen nodulacin area ( en casos especficos) vas de Uruguay y zonas vecinas (Izaguirre y Beyhaut, El tercer grupo est integrado por especies que son es-
mtodos de seleccin 1998, 2003) (cuadro 5). pecficas en sus requerimientos, por lo que nodulan efecti-
obtener hibridos por fusin somtica: clulas de una manejo para incrementar la FBN vamente con un pequeo rango de cepas: son especfi-
hoja pueden ser inducidas a fusionarse y regenerar ensayos de orgenes o individuos y su propa- cas para la nodulacin y tambin para la efectividad.
plantas completas. Est en la especulacin de muchos gacin vegetativa, Cuadro 5- Leguminosas en Uruguay Ejemplos: Leucaena leucocephala (CR), Gliricidia sepium
cientficos producir un cereal que forme ndulos fija- eleccin de las mejores combinaciones: (CR), Calliandra calothyrsus (CR)
dores de N2. rhizobio-leguminosa, Frankia- no-leguminosa 2.300 spp en la flora total 10% son leguminosas
transferencia de genes Una limitacin de esta clasificacin es que el carcter de
Pero, muy acertadamente, se seala las consecuencias 73 gneros 272 spp promiscuo o especfico depende del rango de cepas tes-
2. Seleccin de cepas compatibles de Rhizobium
de una alteracin tan brusca de los sistemas simbiticos 9 Mimosoideae 48 spp tadas por lo que deben realizarse gran nmero de ensa-
o Frankia
naturales. Los especialistas del ambiente temen que ma- 8 Caesalpiniodeae 23 spp yos de inoculacin.
criterios de seleccin
las hierbas exuberantes, fijadoras del N2, alteren el equi- 56 Papilionoideae 201 spp (130 nativas,
alta efectividad
librio biolgico. Otros elementos, adems, pasaran a ser 71 adventicias y/o cultivadas)
habilidad competitiva
limitantes: P, K, S, e incluso el CO2. Sera tambin peli- Gneros con mayor nmero de especies Nodulacin
tolerancia a limitantes del medio
grosa la propagacin de microorganismos patgenos con Adesmia Vicia Desmodium Lathyrus Galactia
capacidad de afectar la fisiologa de la planta
genes nif. La fijacin biolgica del N2 en los ndulos de leguminosas
mtodos de seleccin
es el resultado de complejas interacciones entre el hus-
estudios en cepas salvajes
Sin embargo, todos estos llamados de atencin no pue- ped y el endofito la instalacin de la simbiosis est contro-
construccin de nuevas cepas
den detener las investigaciones sobre aspectos vincula- Especificidad en la infectividad y en lada por un dialogo molecular entre ambos integrantes
inoculacin
dos a la FBN, ante la necesidad de alimentar a la crecien- la efectividad (Kondorosi, 1991). La eficiencia es mxima en estos sis-
cultivo de rhizobio o frankia
te poblacin mundial. El cuadro 13 seala algunas de los temas ya que existe:
procesamiento de inoculantes
enfoques en la investigacin en este tema. Algunas cepas de Rhizobium o Frankia poseen un amplio
3. Levantamiento de limitantes espectro de huspedes. Otras cepas poseen un pequeo 1. proteccin de variables ambientales y la FBN pue-
sequa espectro y se les dice especficas. Este tema de la espe- de funcionar bajo amplio rango de condiciones. As,
La simbiosis rhizobio-Parasponia irrigacin cificidad debe verse desde el punto de vista del micro y ndulos de soja, son relativamente insensibles a la tem-
deficiencia de nutrientes del macrosimbionte. Basados en sus caractersticas de peratura sobre un rango de 15C, y pueden fijar N2 a
Hasta no hace mucho tiempo se pensaba que los rhizo- fertilizacin y micorrizacin especificidad para la nodulacin y la fijacin, se recono- concentraciones externas de O2 entre 0,05 y 0,8 atm,
bios formaban ndulos solamente con leguminosas. En factores biolgicos desfavorables cen tres tipos de leguminosas: mientras que los bacteroides fijan N2 en rango ms
1973 se describi nodulacin en ciertas Ulmaceae, por control qumico ( pesticidas) o control biolgico estrecho (10-6, 10-4 atm). La proteccin frente al O2 es
rhizobios. Son rboles muy altos, ampliamente distribui- esterilizacin ( solarizacin) El primer grupo est integrado por especies nodula- una de las principales ventajas de los sistemas sim-
das por amplio rango de cepas genticamente diversas biticos
El endofito dos de races micorrizadas no ofrece las mismas garan- Estudios posteriores mostraron que estos especmenes bargo, muchas de ellas establecen asociaciones simbiti-
tas. La inoculacin con esporas desinfectadas mostr estaban incorrectamente identificados y que pertenecen en cas variadas, con hongos, en los lquenes, con hepticas,
Los hongos son no-tabicados, se los ubica entre los que el rango de hospedantes para la mayora de los ais- realidad al gnero Parasponia, sobre todo P. rugosa. Pa- musgos, con el helecho acutico Azolla y una angiosper-
Zygomycotina, del orden Glomales (familias Glomaceae, lamientos estudiados es amplio, hecho que contradice rasponia es nativa del sudeste asitico, son rboles de ma, Gunnera.
Acaulosporaceae y Gigasporaceae) y Endogonales (fa- la incapacidad del hongo para desarrollarse fuera del hasta unos 15 m, pioneros en suelos de montaa de Mala-
milias Gigasporaceae y Endogonaceae) (cuadro 4). No hospedante. sia, Indonesia y Nueva Guinea. Tres especies presentan Cycas
se les conoce estado sexual (Honrubia et al., 1994). ndulos: P. rugosa, P. parviflora y P. andersonii, empleadas Las Cycadales son consideradas gimnospermas primiti-
Ciclo de vida de un hongo que forma micorrizas desde muy antiguo como abono verde en Java. El endo- vas, reliquias de una flora tropical muy antigua: su origen
Como estos hongos no han logrado crecer en medios de arbusculares simbionte se identific como Bradyrhizobium spp de creci- se ubica en los perodos Trisico, Jursico y Cretceo. Se
cultivo la taxonoma se basa en caractersticas de las es- Es necesario efectuar observaciones al microscopio de miento lento, el ms promiscuo y tal vez el ms antiguo de piensa que jugaron importante rol en el ciclo del nitrgeno
poras (figura 8), que se colectan de suelo rizosfrico por cortes coloreados de races colonizadas, previamente tra- los rhizobios, que inocula cruzado con Vigna unguiculata. de esas pocas. De las 90 especies actuales (9 gneros),
tcnicas de tamizado hmedo y decantacin. El em- tados con KOH a los efectos de clarificar las clulas, eli- Los ndulos de Parasponia fijan nitrgeno en rangos com- slo algunas, como Macrozamia, se desarrollan en Aus-
pleo de gradientes de sacarosa ayuda a separar las es- minando polmeros de la pared ya que las races no per- parables a los ndulos perennes de otras no leguminosas. tralia a un nivel suficiente como para intervenir activamente
poras de partculas inertes, huevos de insectos, etc. Se miten visualizar estructuras internas. Las hifas del hongo en el ciclo del nitrgeno. No han sido muy estudiadas y
emplean combinaciones de tcnicas (Anexo prctico). El penetran desde el suelo y se presentan tanto inter como Diferencias con ndulos de las leguminosas: muchos aspectos relativos al proceso de infeccin y a la
empleo de sondas moleculares ha permitido la identifica- intracelularmente, en la corteza. La endodermis, meriste- el rhizobio se encuentra preferencialmente dentro de un naturaleza de la especificidad hospedante-endofito, no han
cin del microsimbionte y ha contribuido mucho en los ma y vasos no son colonizados. Se coloniza la zona api- cordn de infeccin altamente ramificado y pocas bac- sido aclarados.
estudios de inoculacin. cal de races jvenes. terias se liberan de l y se diferencian en bacteroi-
des. En las leguminosas, la mayora de los rhizobios se Desarrollo y estructura de los ndulos: se parecen
Se distinguen varias fases (figura 9, Duhoux y Nicole, transforman en bacteroides superficialmente a los de no-leguminosas angiospermas,
2004) pero su formacin y estructura varan. Se originan a par-
los ndulos de Parasponia no poseen leghemoglobi- tir de races especializadas, llamadas coraloides, que
Raz Suelo na, lo que muestra claramente que tanto la formacin presentan estructuras del tipo nodular an antes de ser
de bacteroides como la sntesis de leghemoglobina, es- colonizadas por la cianobacteria, inducidas posiblemen-
1 tn determinados por el hospedante. La masa coraloi- te por bacterias. Los ndulos se inician en la raz em-
de puede alcanzar tamaos de hasta 6 cm de dimetro brional y el hipoctilo y recin luego de su emergencia
2 y se parecen ms a los ndulos actinorrticos de Coria- son infectados por cianobacterias heterocsticas de los
ria o Datisca que a los de las leguminosas gneros Nostoc y Anabaena, por rupturas de los estra-
tos superficiales.
la zona infectada suele presentar forma de herradura,
donde coexisten clulas hipertrofiadas, con la bacteria Las races coraloides se desarrollan en forma de grandes
Figura 8- Espora del hongo Gigaspora y clulas menores, libres de endofito. Pueden presen- racimos y pierden su caracterstico geotropismo negati-
tarse capas con clulas oscuras, posiblemente con com- vo. Las races no infectadas permanecen pequeas y
puestos polifenoles y taninos mueren en el correr del ao. Todos los aislamientos mos-
Glomus puede presentar esporocarpos o no con clami- traron capacidad para fijar N2.
dosporas generalmente terminales en una hifa indiferen- Parasponia, como Casuarina y rboles leguminosos cre-
ciada, las de Sclerocystis se ubican dentro de esporocar- cen rpidamente en suelos vrgenes del sudeste de Asia y En Argentina se describi nodulacin en ejemplares de
pos, en capa simple. Gigaspora posee azigosporas en juegan importante papel en la reforestacin de suelos ero- Cyca revoluta cultivada en parques y jardines. La fijacin
extremo de clula alargada en una hifa que se proyecta sionados, donde son empleados desde muy antiguamente. en cultivos de Cycas spp. y Macrozamia spp se realiza
hacia la espora y Acaulospora no forma esporocarpo y las tanto en aerobiosis como en anaerobiosis. Los productos
esporas estn ubicadas en hifas prximas a una vescula de la fijacin son transportados al hospedante y se piensa
de gran tamao. Simbiosis con ndulos con Nostoc y Anabae- que gran parte es exudado por el endosimbionte, a dife-
3 4 na (cianobacterias) rencia de lo que ocurre con la cinobacterias en vida libre.
Con estas esporas es posible realizar ensayos de snte- Las causas de mayor exudacin podran deberse a:
sis de endomicorrizas y probar la eficiencia de distintas Las cianobacterias por su doble aptitud de fotosintetizar y
combinaciones planta-endofito. El empleo de macera- Figura 9- Ciclo de un hongo endomicorrcico de fijar N2, son especies tpicamente pioneras. Sin em- mayor actividad nitrogensica del endosimbionte
tas de muy variada taxonoma y se conocieron como Han sido descriptas en cultivos muy variados, como maz,
a b c micorrizas vesculo-arbusculares (V-A), hoy mejor man, trigo, citrus, manzanos, papas, porotos, soja, caf,
definidas como arbusculares (A), ya que las vesculas caa de azcar, hasta plantas silvestres, rboles como
pueden o no estar presentes y son las que han recibido roble, fresno y plantas herbceas, en variadas zonas eco-
mayor atencin en los ltimos tiempos. lgicas. Generalmente slo estn ausentes en suelos muy
hmedos, en plantas sumergidas. Son ms abundantes
Es realmente importante el volumen de publicaciones so- en suelos de baja fertilidad, como todos los tipos de mico-
bre este tema desde la dcada del 70 y distintas ramas rrizas, y algunas prcticas agrcolas, como la fertilizacin,
del conocimiento se sienten atrados por estas asociacio- pueden disminuir su incidencia.
nes en las cuales el hongo y la planta obtienen mutuos
beneficios. Como la morfologa de las races cambia muy poco, pa-
saron mucho tiempo inadvertidas y adems la dificultad
Micorrizas arbusculares (MA) del endofito para desarrollarse en medio de cultivo,
Estas asociaciones son las ms numerosas, las presen- limit los estudios.
tan la mayora de las fanergamas, de lo que se deduce
el enorme potencial econmico que puede derivarse de Vasos del floema Vasos del xilema
un correcto manejo de ellas en suelos de baja fertilidad. Hifas externas
d e
Los estudios se han incrementado mucho en los ltimos
aos y se trata de seleccionar las mejores combinacio- Vesculas Clamidospora
nes planta-hongo con el objeto de inocular cultivos de Hifas internas
Pelo radical
inters. En las leguminosas se tienden a usar inoculan-
tes dobles, con rhizobio y esporas del hongo endomico-
rrcico. Arbsculo
Los hospedantes se encuentran distribuidos en las princi- Esporocarpo

pales familias cultivadas, las gramneas y leguminosas.
Muy pocas de las familias examinadas carecen de endo- Clula epidrmica
Clula cortical
micorrizas MA. Se piensa que Ericaceae, Orquidaceae y
ciertas familias tpicamente ectomicorrcicas como Pina-
Figura 10- La simbiosis Azolla-Anabaena. a) Morfologa de hojas de Azolla, b) Racimo de hojas de Azolla, c) Poros con Anabaena ceae y Betulaceae, carecen de micorrizas arbusculares. Figura 7- Esquema de una micorriza arbuscular (MA)
luego de accin de pectinasas, d) Anabaena: h= heterocisto, c= clula vegetativa, e) heterocisto de Nostoc con gruesa pared de
varias capas (flecha) y la pared externa muscilaginosa, menos densa (*).
Cuadro 4 - Sistemtica de Zygomycotina micorrcicos y tipo de micorrizas formadas
una capacidad limitada para almacenar nitrgeno como el 20 y 30% de clulas de la cianobacteria y estn rodea-
ficocianina dos de gruesas paredes (figura 10: a, b, c y d Franche et Orden Suborden Familia Gnero Micorriza
al., 1998; e, Selosse, 1996). En el filamento ocurre foto-
Glomales Glominae Glomaceae Glomus A
Azolla sntesis y en los heterocistos, que carecen de fotosistema
II, se expresa la nitrogenasa. Sclerocystis A
La simbiosis Azolla-Anabaena es ecolgicamente la ms
importante, muy abundante en aguas calmas templadas Acaulosporaceae Acaulospora A
y tropicales. La cianobacteria se encuentra en poros ubi- Azolla se usa como biofertilizante en vastas regiones de Entrophospora A
cados en cara ventral de las hojas, que se cierran en ho- Asia, Africa, como abono verde. Se cultiva en estanques
jas maduras. Se han contado hasta 2.000 a 5.000 clulas y luego se libera con el agua que inunda el arroz. La ino- Gigasporinae Gigasporaceae Gigaspora A
de Anabaena azollae en una sola cavidad. La fijacin del culacin puede aumentar los rendimientos entre un 30 y Scutellospora A
N2 tiene lugar en los heterocistos que representan entre 50%. La agricultura cada vez ms intensiva y la fertiliza-
Endogonales Endogonaceae Endogone A, EC
Nodulacin La figura 12 muestra ndulos jvenes de Casuarina y Allo- El reconocimiento del hongo y el hospedante apropia- en la inoculacin de plntulas. Las esporas son fci-
casuarina y ndulos de varios aos donde se aprecia la do es seguido por la colonizacin y la formacin del les de coleccionar a partir de esporocarpos maduros
El ndulo es un rgano compuesto de unidades ele- suberizacin (Duhoux y Nicole, 2004). manto fngico. El desarrollo del hongo en la rizosfera de muchos Gasteromycetes que se colectan en el
mentales llamadas lbulos nodulares, cada uno origi- del hospedante es estimulado por los exudados radi- terreno en la vecindad de rboles bien micorrizados
nado por invasin de frankia en races adventicias. En Formacin de los ndulos: el proceso ha sido ms cales. y se agregan a las macetas regando con un licuado
funcin de variaciones del ambiente, se van formando estudiado con Alnus glutinosa y pueden distinguirse 4 en agua
nuevos lbulos, lo que origina un ndulo muy grande, fases: La fertilidad del suelo y la actividad fotosinttica del
de aspecto coraloide, que se va lignificando. Un ndulo vegetal afectan marcadamente a la micorrizacin. con cultivos puros, desde la dcada del 50 se comen-
a. desarrollo del endofito en la rizosfera
puede persistir durante 5 a 10 aos, en ese caso slo z con xito a inocular con cultivos puros. Los suelos o
los lbulos perifricos son activos b. invasin de pelos capilares Favorecen el proceso: alta actividad fotosinttica y baja los soportes de plntulas se fumigan frecuentemente
o moderada fertilidad para eliminar patgenos y la poblacin nativa, que pue-
Cada lbulo es una raz modificada: su vascularizacin c. formacin de ndulos primarios
de competir con el inculo
es central y como las races adventicias o laterales, se d. formacin de ndulos verdaderos, por ramificaciones Reducen el proceso: bajas intensidades luminosas o
origina en el periciclo (figura 11) (Dommergues et al., dicotmicas de meristemas apicales, dando el aspecto deficiente fotosntesis que afectan el nivel de azcares Las esporas asexuadas desarrolladas en medios de culti-
1999) racimoso caracterstico de estos ndulos y la formacin de nuevas races, altos niveles de N y P vo son tambin un buen inculo, pero los cultivos con mi-
Los lbulos son invadidos, en su corteza, por el micro- en el suelo provocaron disminuciones en el contenido celio se emplean mucho ltimamente ya que ofrecen ma-
simbionte Frankia, que penetra las clulas vegetales y de sacarosa en raicillas de pino y en la susceptibilidad yores garantas.
asegura la fijacin de N2
a b a la infeccin por el hongo ectomicorrtico Pisolithus tinc-
torius. Programas de inoculacin: comienzan con la seleccin
del hongo ectomicorrcico, la que puede realizarse simul-
end 1 Otros factores que inciden en la micorrizacin incluyen la tneamente con un diazotrofo, en leguminosa o en no-
per pe pe temperatura, aireacin, humedad, el nivel de otros nutrien- leguminosa fijadora de N2. Los ensayos para evaluar la
NR tes, que afectan el desarrollo de las races y la propaga- especificidad y eficiencia de la simbiosis se realizan en
4 3 2 4 3 2
cin del hongo, la microflora rizosfrica (sinergismos y plntulas creciendo en tubos con vermiculita/turba, are-
4 3 2 4 3 2 antagonismos). na, con solucin nutritiva. La inoculacin se puede reali-
zar a partir de discos de agar con micelio activo. Los en-
sayos sontinan en invernculo, incluyendo suelo, nive-
a b Prcticas de inoculacin les de fertilizacin, tipos de inculos, etc.
Figura 11- Estructura de ndulos actinorrticos: a) lbulo tipo

c En general, los hongos micorrcicos se incorporan a los La introduccin de especies de Pisolithus en viveros ha
Alnus, b) tipo Myrica y Casuarina, con raz nodular. En ambos cultivos de rboles, en particular de pinos, abetos y otras incrementado significativamente la calidad de plntulas
tipos los vasos son centrales, con endodermis (end), periciclo conferas, as como a plantas ornamentales, cuando s- de pino. El cuadro 2 muestra un ejemplo de inoculacin
(per) y periderma (pe). El parnquima cortical colonizado tas se desarrollan en medios artificiales como vermiculita, en suelos muy erosionados, cerca de minas de cobre, en
presenta 4 zonas:meristemtica (1), de infeccin (2), de arena, etc. en el vivero (Le Tacon, 1997; Marx et al, 1991). el sur de Estados Unidos, pobres en materia orgnica y
fijacin (3) y de senescencia (4). La falta de micorrizacin puede acarrear problemas en el nutrientes minerales. Como se observa se presentan mar-
transplante de estos cultivos, salvo que el suelo contenga cadas diferencias entre los hongos. Las ectomicorrizas
especies ectomicorrcicas. con Pisolithus incrementaron el crecimiento cerca del
Se distinguen dos tipos de ndulos: los de tipo coraloi- 100%, en ambas especies, en relacin a las formadas
de, como los de Alnus donde el meristema nodular cesa Tcnicas de inoculacin (Anexo prctico) por Thelephora, menos adaptado a las condiciones ad-
su actividad una vez que el lbulo se form y los de con suelo o mantillo o trozos de races colonizadas versas del suelo.
tipo Casuarina, Eleagnus, Myrica , en los cuales el me- que se trasladan desde la zona de origen del cultivo, a
ristema del lbulo contina con un desarrollo modifica- los viveros. Esta tcnica es poco especfica y se corre En otras partes del mundo Pisolithus tinctorius responde
do que conduce a la formacin de una raz nodular con Figura 12- Ndulos actinorrticos: a) ndulos jvenes de el riesgo de llevar tambin microorganismos patgenos muy bien en la simbiosis, persiste en el suelo a pesar de la
geotropismo negativo, la cual puede a su vez ser colo- Casuarina glauca, b) ndulo jven de Allocasuarina competencia de los hongos ectomicorrcicos nativos. Nte-
nizada. verticillata, c) ndulo viejo de Casuarina. con esporocarpos, esporas, esclerocios, frescos se que no aparecen los testigos sin inocular ni fertilizar, ya
o secos que se emplean desde hace muchos aos que los pinos son muy dependientes de los hongos y no se
desarrollan en suelos pobres. Considerando la enorme ex- c. reas despobladas o desprovistas del hospedero cin han sustituido esta prctica, llamada tambin azolli- Se piensa que la nodulacin puede ocurrir en gneros
tensin sembrada con especies forestales, se comprende d. suelos y sustratos inertes desinfectados zacin. an no estudiados. Un ejemplo de esto es el descubri-
la importancia de lograr incrementar los rendimientos me- e. en reas donde ocurren los hongos pero se pretende miento de actinorrizas en Trevoa, miembro de Colletieae
diante una correcta seleccin de estos hongos. aumentar la densidad de inculo o introducir organis- y en Datisca glomerata, relacionada a D. cannabina,
mos ms efectivos que los nativos Asociaciones con Frankia spp aunque de distribucin geogrfica muy diferente.
Cuadro 2- Sobrevivencia y desarrollo de
plntulas de pino luego de dos aos Despus de las leguminosas, las plantas actinorrticas
Cuadro 3 - Peso seco y contenido de lignina en constituyen el segundo grupos importante (260 a 280 es- Cuadro 14 Principales especies actinorrticas
Tratamiento altura dimetro vol.plntula Pinus sylvestris micorrizado y no micorrizado pecies) de plantas fijadoras de nitrgeno. Pertenecen a
(cm) tallo (cm) (cm3) unas 10 familias de las Espermatfitas con unos 24 gne- Familia Gneros
pino Virginia con peso seco lignina ros que contribuyen a la economa de este elemento en Betulaceae Alnus (aliso)
Pisolithus 52.3* 1.46* 111.5* (mg) (% de peso seco) zonas erosionales, en suelos pobres, en donde se desa-
inoculado no inoculado no rrollan como vegetacin pionera. Todos los gneros de Casuarinaceae Allocasurina, Casuriana, Gymnostoma,
Thelephora 44.8 1.15 59.3
inoculado inoculado una misma familia no son necesariamente nodulados y Ceuthostoma
pino lobulado con peso seco total 770 354 - -
Pisolithus 48.7* 1.29* 81.0* se encuentran igualmente especies no noduladas en el Coriaceae Coriaria
raz 265 125 30 28 interior de un mismo gnero.
Thelephora 41.3 1.01 42.1 tallos viejos 91 56 35 30
Datiscaceae Datisca
tallos nuevos 108 44 29,5 24,5 Todas las actinorrizas albergan bacterias pertenecien-
* = Diferencia significativa al 5%. Volumen plntula = (di- acculas 305 282 - -
2
metro tallo) x altura. tes a un mismo gnero, un actinomicete simbitico del Eleagnaceae Eleagnus, Hippophae, Shepherdia
gnero Frankia, fijador de N2 que fue confundido prime-
ramente con un hongo, por su carcter filamentoso. Quiz Myricaceae Comptonia, Myrica
Efectos de la inoculacin: incrementos en tamao (altu- Endomicorrizas la primera descripcin de ndulos radicales en estas plan-
Rhamnaceae Ceanothus, Colletia, Discaria,
ra, peso seco de las plantas), diferencias en la anatoma y tas se remonta a 1895 en Alnus glutinosa, cuyo desarro- Kentrothamnus, Retanilla, Trevoa
morfologa de los cultivos, han sido atribuidas a esta sim- Se piensa, dada la abundancia de estas asociaciones, que llo y N en el follaje se correlacionaron con el nmero de
biosis, cambios en la relacin raz/parte area, estructura la presencia de hongos endomicorrcicos en races en con- ndulos. Rosaceae Cercocarpus, Chamaebatia, Cowania, Dryas,
Purshia
de tejidos radicales, longitud de acculas, longevidad de diciones naturales, es una constante, ms que una ex-
races cortas, incremento en el nmero de cloroplastos. cepcin, Han sido reconocidas desde hace ms de 100 Estas asociaciones recibieron diferentes nombres: sim-
Algunas de estas variaciones se atribuyen al incremento aos y se destaca su presencia en fsiles de ms de 300 biosis tipo Alnus, simbiosis con actinomicetes y ms re-
cientemente actinorrizas, por analoga con las micorri- Una minuciosa descripcin sobre el origen en el tiempo
del aporte de nutrientes, pero otras son consecuencia de la millones de aos.
zas (simbiosis con hongos). geolgico de estos vegetales nodulados los ubica en el
actividad del hongo o de fitohormonas que libera.
La mayora de las endomicorrizas poseen caractersticas perodo cuaternario. Actualmente ocurren en reas templa-
comunes: el hongo invade las races desde el suelo, lo que El cuadro 14 presenta las principales especies descrip- das y algunas en la zona circumpolar. Las que se encuen-
El cuadro 3 muestra ligeros aumentos en la lignificacin
implica que debe poseer mecanismos para sobrevivir en l tas. Son frecuentemente especies leosas presentes tran en zonas tropicales, lo hacen slo a altas latitudes, como
de plantas de pino inoculadas (en experimentos con CO214)
o poseer una existencia saproftica (figura 7). Dentro de la al estado espontneo en todos los continentes y cli- Coriaria, en N. Guinea y Per, Cercocarpus, en Mjico y
y del tamao y peso del orden del 44%.
raz, el hongo coloniza las clulas de la corteza, pero no las mas, desde el rtico al subtropical. Son, sin embargo Alnus, en Per. La excepcin la constituye Casuarina, que
de la endodermis y los vasos, los que no presentan cam- ms frecuentes como rboles o arbustos que juegan se extiende en zonas costeras tropicales del Ocano Pac-
Resumiendo: se reconoce la importancia de estas aso-
bios morfolgicos (Barea et al., 1991). importante rol en la economa del nitrgeno en bos- fico y del Indico. Esta distribucin contrasta con la de las
ciaciones en el desarrollo de especies arbreas, sobre
ques de zona templada fra. Su distribucin es menor leguminosas (tropical y templada clida).
todo en suelos de baja fertilidad. El endosimbionte movili-
za nutrientes desde el suelo hacia el hospedante. La ino- Se distinguen dos tipos de endomicorrizas: en la regin tropical. Estas plantas son escasamente
mencionadas en los textos bsicos de biologa o eco- El conocimiento de especies actinorrticas se incremen-
culacin con especies fngicas correctamente seleccio-
aquellas con hongos tabicados pueden subdividirse loga, a pesar de que son importantes componentes tar seguramente en los prximos aos, con la contri-
nadas ofrece una interesante perspectiva en el manejo
en las de las Ericaceae y familias relacionadas y las de ecosistemas de vastas regiones y muchas de ellas bucin de botnicos, fisilogos vegetales, ingenieros
de cultivos forestales en:
presentes en las Orchidaceae muy empleadas en forestacin. Esta vegetacin es to- forestales. Se observa un rpido desarrollo de los es-
lerante a suelos de baja fertilidad, como dunas areno- tudios sobre estas asociaciones dado su contribucin
a. cultivos exticos
las que albergan hongos no tabicados: Zygomycoti- sas, zonas quemadas, suelos erosionados y muchas a la economa del nitrgeno en dunas y suelos muy
b. suelos degradados por la erosin, mineralizacin o por
na. Constituyen un grupo heterogneo, incluyen plan- resisten la salinidad. pobres.
construcciones civiles
patgenos, a toxinas, pH, temperatura y humedades ad- tro fenil fosfato, -glicerol fosfato, por actividad de fos- El proceso es muy parecido al que ocurre en legumino- La existencia de poblaciones extranodulares del endofito
versas. La suberizacin de las races est limitada y se fatasas. sas: los pelos radicales en contacto con el endofito se es esencial para lograr colonizar plntulas y la disemina-
alarga su vida til encurvan y las hifas penetran avanzando hacia clulas cin en el campo. La presencia de cepas de Frankia en el
Es evidente que esta asociacin permite explorar el suelo corticales que son estimuladas a dividirse (figura 13). suelo est asegurada, como en el caso de las legumino-
El hongo, por su parte, obtiene los nutrientes carbona- ms eficientemente en hbitats en donde ninguno de los Las hifas penetran en las clulas en divisin, se ramifi- sas, por el decaimiento y desintegracin de los ndulos al
dos simples que requiere en las etapas iniciales y un integrantes de la pareja podra desarrollarse satisfacto- can y forman las clsicas vesculas en la periferia de finalizar la actividad simbitica.
ambiente que lo protege de la intensa competencia mi- riamente. La asociacin debe mantenerse por un prolon- estos conglomerados. La infeccin progresa y se forma
crobiana gado espacio de tiempo, para obtener beneficios sustan- el llamado ndulo primario, que se reconoce como una La regin apical (2-3 mm) de los lbulos del ndulo pare-
ciales. deformacin de una raz lateral cuyo crecimiento se de- cen constituir las partes ms activas en la fijacin del ni-
Fisiolgicamente, las asociaciones micorrcicas consti- tiene. El ndulo verdadero se completa por surgimiento trgeno. All precisamente, los racimos de vesculas pre-
tuyen uno de los mejores ejemplos de parasitismo contro- de races laterales inducidas cerca de los ndulos pri- sentan la mayor actividad y reducen activamente las sa-
lado. Los intercambios entre ambos componentes de esta Proteccin contra fitopatgenos marios, que se transforman en lbulos nodulares por les de tetrazolium. El aislamiento de las vesculas y la in-
asociacin se estudian con elementos marcados: infeccin persistente de su regin cortical. En los ndu- corporacin de ATP y ditionito permiti comprobar que son
Se ha puesto en evidencia que las races ectomicorriza- los verdaderos, la penetracin de las clulas jvenes el sitio de la fijacin. Incluso los resultados de fijacin se
14
CO2 en las plantas para seguir los compuestos orgni- das son ms resistentes a la invasin por microorganis- de la corteza y la diferenciacin del endofito es esen- expresan por nmero de vesculas.
cos radioactivos en el manto fngico y en las hifas mos fitopatgenos, en relacin a las plantas no infecta- cialmente la misma que en los ndulos primarios.
das. Varias hiptesis tienden a explicar estos hechos: Usos: el empleo que se les da a estas plantas es va-
32
P en compuestos orgnicos o minerales insolubles en En Casuarina y Myrica, el pice de cada lbulo nodular riable:
el suelo, que es transferido hacia la planta, por las hifas el patgeno contara con menor disponibilidad de da lugar a una raz pero con geotropismo negativo (figu-
del hongo. Las plantas micorrizadas se desarrollan mejor materiales carbonados en la zona de la raz, como ras 11 y 12), debido a bajos niveles de cido indolactico, muchas especies de Alnus pueden alcanzar 30-35 m en
en suelos deficientes en nutrientes como N, P, K. consecuencia de la absorcin de los mismos por el hon- lo que le da a los ndulos una apariencia muy particular. 50 aos con dimetros de 0,6 m y se emplean en mue-
go micorrcico En el campo, los ndulos pueden alcanzar dimetros de bles, postes, enchapados, y en la preparacin de pul-
Las races micorrizadas carecen de pelos capilares, la ms de 8 cm y muchas veces resulta difcil obtenerlos, pas para la elaboracin de tejidos
mayora de los nutrientes deben ser absorbidos por el manto fngico ejercera una eficiente barrera fsica a pues se distribuyen a lo largo de un sistema radical muy
las capas externas de la vaina fngica y son trasladados la penetracin por el patgeno: en cortes de races mi- extenso, que en suelos pedregosos y compactados pue- Casuarina se emplea tambin para postes y es rica en
a la corteza radical, por las hifas. La gran superficie de corrizadas y controles inoculadas por esporas de hon- de llegar a varios metros. energa y se usa como lea. Pueden alcanzar 4 a 5 m
contacto entre el hongo y la planta permite un rpido in- go patgeno, se aprecia la invasin slo en el caso de en 2 aos
tercambio de nutrientes. races no micorrizadas
clulas de la corteza polisacridos como alimento se usan poco: Hippophae da frutas ri-
colonizadas pelo
La absorcin de fosfatos es entre 2 y 5 veces superior la secrecin de antibiticos frente a los patgenos, el capilar cas en vitamina C y en aceite y suele complementar la
en races micorrizadas, en relacin a controles no infec- desarrollo de una microflora rizosfrica antagnica clula basal de dieta humana
pelo capilar
tados. Los sitios ms activos de absorcin corresponde-
ran a lugares de emergencia de races cortas e infecta- la exudacin de otros metabolitos que inhiben a los hifa Ceanothus y Purshia, como forraje en la alimentacin
infectiva
das. Los fosfatos se desplazaran por los espacios entre patgenos, como terpenos, en concentraciones muy su- hifa de ciervos
endoftica
las hifas del manto fngico, o internamente, por meca- periores a las producidas en races no micorrizadas, se
nismos de difusin. Es probable que todo el fsforo se ha postulado tambin como causa de este fenmeno otras especies poseen uso medicinal, como astringentes,
desplace a expensas del metabolismo fngico, en con- febrfugos, estimulantes o hipnticos: Myrica, Colletia
diciones de baja disponibilidad de fosfatos alrededor de incremento de antagonistas del patgeno entre la
las races. poblacin rizosfrica de la planta micorrizada pero el empleo ms promisorio es sin duda el de la re-
vesculas cuperacin de suelos erosionados, la fijacin de du-
Se han detectado reservas de P, como grnulos de nas y su inclusin en sistemas silvopastoriles ya
polifosfato en vaina e hifas de micorrizas de Pinus. Colonizacin y factores que afectan el desa- que brindan abrigo y sombra a los animales, adems
1a 1b
Algunos hongos ectomicorrcicos son capaces de em- rrollo de ectomicorrizas de brindar N fijado a la pastura asociada
plear fitato (hexafosfato de inositol), que constituye im-
portante fuente de fsforo insoluble en suelos foresta- Se produce a partir de alguna estructura del hongo: Figura 13- Nodulacin en actinorrizas. 1a) clulas de la El empleo del N15 demostr la importancia ecolgica de
corteza radical, 1b) clulas con Frankia estas asociaciones, acelerando sucesiones vegetales en
les. Otras fuentes de P orgnico empleados son: p-ni- micelio, hifas, rizomorfos, esporas, a partir del suelo.
suelos pobres. Estos rboles son empleados en silvicul- Numerosos estudios se han realizado a los efectos de lo- pre que se agregue algo de glucosa (induccin enzim-
tura, en planes de forestacin, en sistemas agroforesta- grar buena sobrevivencia de este organismo en inoculan- tica). Se han detectado actividades de celulasas, hemi-
les, contribuyendo a incrementar el nivel de nitrgeno de tes comerciales a emplear en los viveros. Los ensayos celulasas y amilasas pero, como grupo, estos hongos
los mismos. incluyen soportes inertes como la vermiculita. Frankia re- son en general incapaces de descomponer mantillos u
sult muy resistente al ser atrapada en bolitas de algina- otras formas de materia orgnica del suelo, y dependen
El cuadro 15 muestra el contenido de nitrgeno en hojas to, las que desecadas se conservan por largos perodos del hospedante para la provisin de compuestos carbo-
de algunas de estas plantas. Los datos de N en los rastro- de tiempo (Frioni et al., 1994)(Anexo prctico). nados simples.
jos no deben tomarse como todo el nitrgeno fijado, ya
que, dependiendo del nivel de N del suelo, una parte es Muchas experiencias se realizaron para determinar la dis- Fuentes de nitrgeno: son variadas, en general sales de
reciclada a partir del mismo. tribucin de los endofitos y de sus respectivas plantas amonio, aminocidos y otras formas de N-orgnico son
hospedantes. Se encontraron: rpidamente utilizadas (experiencias con N15), los nitratos
son menos empleados. Altos niveles de N en el suelo in-
Cuadro 15 - N% en hojas y en mantillo de plantas poblaciones locales de Frankia en ambientes sin los hiben la sntesis de ectomicorrizas: una C/N alta parece
actinorrtcas noduladas hospedantes, que pueden haber migrado por agua, ser prerrequisito para su formacin.
viento, lluvia
Especies N% en Mantillo N% Edad N total Factores de crecimiento: muchos de estos hongos re-
hojas ton/ha/ao aos kgN/ha/ao las poblaciones del endofito siguen, en general, a las quieren ciertas vitaminas del complejo B, como tiamina y
Alnus incana 2,82 - - - - poblaciones de la planta hospedante. En Alnus, cuya biotina; otras especies prefieren inositol, cido nicotnico
A. crispa 1,5 3,0 5 157 nodulacin es muy extendida, el endofito se encuen- y cido pantotnico.
A. rubra 1,3 2,0 0-40 30 tra en un 100% de las zonas de distribucin de la
2,17 9,3 1,82 12 169 planta. Los hongos ectomicorrcicos producen auxinas, gi-
A. glutinosa 2,57 - - - - berelinas, citoquininas y una variedad de vitaminas,
Casuarina littoralis 2,9 1,0 - 290 Los ndulos de estas plantas fijan nitrgeno, como lo ha- antibiticos, cidos grasos. Las sustancias de natu-
C. equisetifolia 1,30 - - - - cen otros sistemas fijadores, dependiendo su actividad de raleza auxnica reproducen caracteres de la micorri-
Ceanothus velutinus 6,2 1,46 9 91 la biomasa del tejido nodular, de la actividad de la nitroge- zacin al incorporarlas a races creciendo asptica-
Eleagnus orientalis 13,5 1,35 - 183 nasa y del perodo en que permanecen activos. La respi- mente: se forman races cortas y gruesas con ausen-
racin y la actividad nitrogenasa de los ndulos declina cia de pelos y elongacin radial de clulas con corti-
con los incrementos de la edad de los ndulos, como ocu- cales. La microflora rizosfrica puede brindar el trip-
Numerosos son los trabajos realizados en los ltimos aos rre en general en ndulos perennes. De modo que, en tofano para la sntesis del AIA (cido indol actico),
sobre esta simbiosis que permiten ampliar la capacidad promedio, estos ndulos fijan menos que ndulos jve- que induce estos cambios.
de incorporacin de N en arbustos y rboles de importan- nes de leguminosas anuales.
cia silvopastoril. Si las races micorrizadas pierden al hongo asociado, las
El cuadro 16 (Gauthier et al., 1984) muestra la actividad caractersticas estructurales desaparecen y se transfor-
El actinomicete se propaga en el suelo. La sobrevivencia nitrogenasa de Colletia spinosissima, su contenido de N%, man en races normales. El exceso de nitrgeno afecta a
e infectividad ha sido demostrada cuando se emplean el N total por planta y su peso seco en ensayo control e la micorrizacin: puede provocar que las auxinas se con- Figura 6- Fructificaciones de hongos ectomicorrcicos:
homogeneizados nodulares como material infectivo. La inoculado en cultivo hidropnico. viertan en compuestos relacionados, pero sin actividad Laccaria, Pisolithus y Scleroderma
infectividad, que disminuye con la dilucin, puede mante- promotora del crecimiento, e incluso inhibir su sntesis por
nerse a bajas temperaturas -en heladera- por varios me- el hongo.
ses. Se pueden conservar ndulos secos al aire sobre Cuadro 16 - Efecto de la inoculacin con Frankia Interacciones entre el hongo y el hospedante
slico-gel a 6C. El congelamiento permite tambin man- en Colletia spinosissima Los factores fsicos tambin afectan el desarrollo de
tener los inculos viables. Se observ que la presencia estos hongos. El ptimo del crecimiento se sita entre 18 Si bien el desarrollo de plntulas de rboles no depende
de ndulos con esporas permite mayor sobrevivencia, sien- Tratamiento Peso seco ARA mMC2H4/ y 27C, para muchos cesa sobre 35C y debajo de 5C. siempre de la simbiosis, tanto el crecimiento como el nivel
do las esporas ms resistentes a condiciones adversas mg/planta N% N total h/planta Se consideran acidfilos, con pH ptimo entre 4 y 6, algu- de minerales son incrementados.
del suelo. Las partculas del endofito responsables de la Control 56 0,8 0,45 0 nos crecen bien a pH 3,0. Son aerobios, por esto los cul-
propagacin y de la colonizacin posterior parecen ser Inoculado 113 1,5 1,69 0,68 tivos para preparar inoculantes se agitan, y sensibles a la La planta logra mayor absorcin de nutrientes al au-
hifas finas, ms que las esporas. falta de agua. mentar la superficie radical, incrementan la resistencia a
La identificacin de los hongos se realiza a partir de sus Se han sealado valores de fijacin de 200-250 kgN/ha/ nosas. Alnus glutinosa y Myrica gale se mostraron muy
fructificaciones y de observaciones citolgicas de hifas ao en Alnus, entre 60 y 230 en Casuarina, 20-180 en resistentes a las bajas concentraciones de iones hi-
(doliporos en Basidiomycotina y cuerpos de Woronin en Hippophe, de 150 en Coriaria. En general, en la mayor drgeno
Ascomycotina) ayudado con marcadores moleculares (se- parte de los ecosistemas con especies leosas fijadoras
cuencias del ARN ribosomal). de N2, se sealan ganancias de N a nivel del suelo igua- La humedad, muchas especies actinorrticas que cre-
les o superiores a 100 kgN/ha/ao, del mismo orden de cen en reas secas son afectadas por una sequa tran-
Por otra parte, estos hongos son fciles de aislar y de magnitud que las aportadas como fertilizantes en confe- sitoria y la actividad nitrogenasa cesa en plantas some-
cultivar al estado puro (Honrubia et al., 1994, Malvarez et ras (Subba-Rao y Rodrguez-Barrueco, 1992). La selec- tidas a una succin de -25 barias en el xilema. En gene-
al., 1997; Anexo prctico). cin de especies eficientes es una alternativa a la fertili- ral ocurre un decaimiento masivo de ndulos en el ve-
zacin, logrando ganancias sensibles de la productividad, rano. La inundacin, al limitar la difusin de los gases,
La mayora son: Basidiomycetes: Hymenomycetes, como sin aumento de los costos. limita la actividad de los ndulos. Algunas especies
Boletus, Cortinarius, Suillus, Amanita, Thricholoma, Lac- poseen estructuras en las extremidades de los ndulos
caria y entre los Gasteromycetes se encuentran espe- llamadas lenticelas, que facilitan la difusin del O2 a
Figura 4- Carpforos de hongos ectomicorrcicos (A, B, C), cies de Rhizopogon, Pisolithus y Scleorderma. Algunos Factores que afectan a la fijacin del travs del tejido nodular
races micorrizadas (D, E) y cortes de races microrrizadas de estos gneros poseen especies saprofitas o parsi- nitrgeno
(F,G) se aprecia el manto fngico (s) y la red de Hartig (Hn) tas que no forman simbiosis con races y es posible que Los cambios diurnos y estacionales: en rboles
en las primeras filas de clulas corticales Tanto la nodulacin como la fijacin del nitrgeno estn
los ectomicorrcicos hayan evolucionado a partir de s- perennes, la actividad nitrogenasa se induce tempra-
afectadas por los mismos factores que en otras simbiosis
tos (figura 6). no en la primavera, cuando comienza la emergencia
fijadoras de N2: fotosntesis, factores ambientales, como
de las hojas. Luego se incrementa a medida que lo
la temperatura, el aporte de nutrientes, incluido el nitrge-
De acuerdo a su capacidad para vivir libremente y su gra- hace la temperatura. Las determinaciones de la fija-
no combinado, la aireacin. La cantidad fijada vara mu-
do de especificidad con el hospedante, los hongos ecto- cin del N2 se han realizado sobre todo a nivel de
cho entre especies e incluso por la posicin de los ndu-
micorrcicos se dividen en: laboratorio, con ndulos aislados y son pocos los
los en la raz.
datos de campo que permiten conocer el aporte de
saprofitas, que pueden formar micorrizas con hospe- El nmero de partculas infectivas en la rizosfera afec-
nitrgeno al suelo
dantes adecuados ta directamente a la nodulacin y por lo tanto a la fija-
cin del N2. La inoculacin tendr efectos positivos cuan-
normalmente micorrcicos, con amplio rango de hos- do ese nmero es bajo
Transporte de los productos de la fijacin
pedantes, y con capacidad saproftica. La mayora de hacia la planta
los hongos que forman EM poseen escasa o nula habi- El nitrgeno combinado afecta negativamente a la fi-
lidad para vivir libremente, pero poseen amplio rango jacin por estos organismos, al igual que el proceso en Como en otras simbiosis, un 90-95% de los compuestos
de hospedantes. leguminosas. Se observaron, sin embargo, diferencias nitrogenados de la fijacin son transferidos al hospedan-
entre la sensibilidad de especies vegetales frente al ni- te. Luego de unos minutos de exposicin a una mezcla de
con escasa capacidad saprofita, con estrecho rango trgeno combinado; Alnus es bastante insensible y se gases con N15, un 25% del nitrgeno fijado se detecta en
de hospedantes: Suillus plorans o Boletinus asiaticus, los puede encontrar nodulados en suelos relativamente las partes basales de los ndulos de Alnus, el resto se
que pueden encontrarse en una sola o dos especies. ricos en nitrgeno encuentra en las partes superiores de los lbulos nodula-
La mayora de los conocimientos sobre la fisiologa de las res y luego de una hora de inoculacin, en las races veci-
ectomicorrizas se obtuvo con los dos ltimos grupos. Las La temperatura del suelo: afecta marcadamente a la nas al ndulo.
diferencias en los grados de colonizacin dependen, en- fijacin, aunque la tolerancia a temperaturas extremas
vara con las especies. El ptimo para muchas plan- Los compuestos transferidos son sobre todo aminoci-
tre otras causas, de la actividad de enzimas como celula-
tas se ubica entre 20-25 C, sin embargo especies de dos: arginina, glutamina; la citrulina es ms comn en
sa y polifenol oxidasa.
Casuarina y H. rhamnoides toleran altas temperatu- ndulos de Alnus glutinosa. No se sabe si su sntesis es
ras, lo que les brinda gran ventaja ecolgica. Las ba- realizada por la planta, el endofito o por ambos. Entre las
Fuentes de carbono: muchas especies ectomicorrci-
jas temperaturas afectan tambin negativamente al enzimas para la asimilacin del amonio, se encontr la
cas obligadas han podido desarrollarse en cultivo puro,
proceso glutamato deshidrogenasa (GDH) y la glutamino sinteta-
con nutrientes relativamente simples, como glucosa y
Figura 5- Tipos morfolgicos de ectomicorrizas sa (GS), presentes en ndulos de A. glutinosa, sobre todo
otros azcares. Muchas no pueden emplear disacridos
Observese estructura dicotmica, hifas a partir del manto La acidez: se piensa en general que las no-legumino- en el citoplasma del hospedante y no tanto en los resi-
fngico y las formas coraloides. y otras especies pueden degradar polisacridos siem-
sas son ms tolerantes a los bajos pH que las legumi- duos de 20 micras con vesculas. Se postula que la asimi-
lacin la efecta el hospedante, mientras que el endofito reas muy erosionadas, suelos muy pobres en todas las un conjunto de filamentos miceliares que exploran el sue- El hongo se mantiene en la corteza pudiendo llegar a la
excretara el amonio producido en la reduccin del N2, al regiones climticas. lo para asegurar la nutricin mineral de la asociacin, re- endodermis, va lmina media, por accin de enzimas
igual que en las otras simbiosis fijadoras de nitrgeno. lacionados a las fructificaciones fngicas o carpforos. pectinolticas, dependiendo de la agresividad del hongo y
la respuesta del hospedante
El H2 es liberado escasamente por la presencia de una Resumen Tejido vascular
hidrogenasa muy eficiente contenida en las vesculas que Endodermis Las plantas hospederas
asegura el reciclamiento de los electrones hacia la nitro- El cuadro 17 compara las simbiosis por rhizobio y por Fran- Clulas corticales De gran distribucin en las Gymnospermas: Pinaceae (pi-
genasa. kia y la figura 14 esquematiza ambos tipos de ndulos. nos, abetos, epigeas) y las Angiospermas, sobre todo dico-
Se aprecia la colonizacin central en las leguminosas y tiledneas como Fagaceae (hayas, robles, castaos), Myr-
Como se observa, los sistemas simbiticos fijadores de perifrica en no-leguminosas. taceae (eucalipto) y familias de plantas tropicales (Caesal-
N2 presentan gran similitud en cuanto a los sistemas enzi- pinoideae). Es de hacer notar que una misma especie pue-
mticos: nitrogenasa e hidrogenasa, en las enzimas para de presentar simbiosis ecto y endomicorrtica, como es el
la asimilacin del amonio y en los efectos del medio sobre caso de los lamos, eucaliptos, casuarinas y leguminosas
la magnitud del proceso. arbreas, que pueden presentar tres tipos de simbiosis a lo
largo de su ciclo de vida: ndulos con rhizobio, ecto y endo-
Red de Hartig Manto formado por micorrizas (se habla de simbiosis triple).
(hifas intercelulares) hifas del hongo
Perspectivas
Los hongos
El empleo de las plantas actinorrticas como pioneras en Figura 2- Esquema de una raz ectomicorrizada Contrariamente a lo observado con los hongos que for-
suelos pobres o degradados es ya prctica comn en man endomicorrizas, son numerosos las especies ecto-
muchos pases. Algunas especies se pastorean, como micorrticas, con ms de 5.000 especies. Pertenecen a
jvenes ejemplares de Alnus spp. Representan una bue- El manto fngico puede representar en 40% del peso to- las subdivisiones Ascomycotina y Basidiomycotina, cuyos
na alternativa frente a las leguminosas en ciertas zonas. tal del rgano (figura 3). Las hifas se pueden extender al ciclos sexuados son bien conocidos. Muchos presentan
Progresan los estudios sobre las relaciones de especifici- suelo vecino y tambin penetrar espacios intercelulares rganos de reproduccin sexual o carpforos comestibles
dad endofito-hospedante, los mecanismos de reconoci- de la corteza. Las clulas corticales se alargan transver- (boletos, agaricales, trufas), mientras que otros son txi-
miento y los procesos de colonizacin. Constituye un rea salmente y los pelos capilares estn ausentes. Los teji- cos (Amanita phallodes). Algunos hongos presentan un
cuyos estudios se incrementan rpidamente por la impor- dos meristemticos y los del pice estn reducidos en re- espectro de especificidad estrecho, como Boletus betuli-
tancia del nitrgeno como elemento limitante del desarro- Figura 14- Esquema de ndulos en: a) actinorrizas lacin a races no micorrizadas. Las races colonizadas cola, y otros como Pisolithus tinctorius, coloniza ms de
llo vegetal y la capacidad de estas plantas de colonizar b) leguminosas son por lo general laterales, al emerger de la corteza de una decena de especies vegetales.
races micorrizadas. Estas races son de corta longitud,
muy ramificadas y son reemplazadas peridicamente.
Cuadro 17- Comparacin de las simbiosis en leguminosas y en plantas actinorrizas Raz no micorrizada Raz micorrizada
La morfologa y anatoma de las ectomicorrizas son varia-
Leguminosas Actinorrizas das segn el estado de desarrollo, el hongo asociado y la
Morfologa ndulo Simple Complejo presencia de ms de una especie fngica (figuras 4 y 5).
Velocidad de crecimiento de la bacteria Lentas: ms 6h(tg) Ms 15 horas (tg) Caracteres anatmicos, fisiolgicos, ecolgicos y taxon-
Rpidas: menos 6h micos se tienen en cuenta en la descripcin de las ecto-
Sistema vascular en ndulos Perifrico Central micorrizas, como la morfologa de las hifas, estructura y
Hidrogenasa (Hup+) No general General aspecto del manto fngico, presencia de rizomorfos, co-
Fijacin de N2 in vitro Excepcional General lor, flourescencia, olor, hbitat (Alvarez, 1991). Lmite de la zona
Proteccin O2: hemoglobina Siempre presente Variable, algunas excepciones de absorcin de P
Las ectomicorrizas de rboles forestales pueden ser par-
Nodulacin area Varias especies Excepcional das, negras, rojas, amarillas, blancas. Muchos hongos
Transporte N fijado como uredos Puede emplearse en No lo forman inducen ramificaciones dicotmicas en las races, las que
plantas (tropicales) le dan forma coraloide caracterstica; otras pueden tener Figura 3- Zonas de absorcin de nutrientes en raz no
Nodulacin perenne Excepcional Es la regla formas ramificadas, pinadas, globulosas, etc. (figura 4). micorrizada (izquierda) y micorrizada (derecha)
fas se expanden entre las clulas corticales de la raz (red los dos grupos precedentes y que se aprecian frecuente- Bibliografa Central Argentina, 1994, Soil Biol. Biochem 26(7):
de Hartig). Son comunes entre Gimnospermas (especialmente en los viveros forestales. 921-923
mente Pinaceas) y Angiospermas (especialmente Salica- Barea, J. M., Cuantificacin de la fijacin biolgica de N Gauthier, D.; Frioni, L.; Diem, H. G. y Y. Dommergues,
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guminoseae, Myrtaceae, Tiliaceae, Ericaceae). La mayo- yas hifas en forma de pelotones intracelulares estn muy Biolgica de Nutrientes, vol II, 1991, Olivares, J. y J. Oecol. Plantarum, 5 (19); N 3: 231-239
ra son rboles. desarrolladas. Otros tipos han sido descriptos (endomico- M. Barea (coord), Consejo Superior de Investigacio- Gonzalez-Lopez, J. Microorganismos diazotrofos asocia-
rrizas con pelotones) en las Orchidaceae, las Monotropeae nes Cientficas, Coleccin Nuevas tendencias, Madrid: dos a races de plantas no-leguminosas. En : Inte-
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vescula esporocarpo hongo soil nitrogen economy. 1995, Fertilizer Research 42: Kondorosi, A. Overview on genetic of nodule induction:
pelotn
hifas septadas - + 215-230 Factors controlling nodule induction by Rhizobium
hifas no septadas + - Dommergues, Y., Duhoux, E. y Diem, H. G. Les arbres meliloti. En: Advances in molecular genetics of
pared del hongo
intracelulares + -
pared de la clula vegetal interfase
manto fngico - +
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membrana perifngica
red de Hartig - + Espaces 34, Pars D.P.S. Verma (eds), Kluver Academic Publishers, Dor-
vacuola vesculas +o- - Duhoux, E. y Nicole, M. Biologie Vgtale: Associatio- dcrecht, Holanda: 111-118
arbsculos + - ns et interactions chez les plantes. 2004, Dunod, Martinez, E., D. Romero y J. Caballero-Mellado, Rhizo-
ncleo taxonoma Zygomycetes= Basidiomycetes,
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Glomeromycetes Ascomycetes
membrana plasmtica de la Zygomycetes Franche, C., Laplaze, L., Duhoux, E., Bogusz, D. Actinor- Crit. Rev. Plant Sci. 15(2):113-140
ectomicorriza
clula vegetal, endomicorriza A hizal symbioses: recent advances inplant molecular and Okon, Y (ed) Azospirillum-Plant Associations. 1994,
planta Bryophytas, Pteridophytas Pocas Pteridophytas
taxonoma Gymnospermas Gimnospermas genetic transformation studies, 1998. Critic Rev. Plant CRC Press, Boca Raton, Fl
Figura 1- Esquema de raz: normal, con pelos capilares, Angiospermas Angiospermas Sci, 17:1-28 Okon, Y. y C.A. Labandera-Gonzalez, Agronomic applica-
micorrizada por ecto, endo y ectendomicorrizas Frioni, L., Le Roux, C., Dommergues, Y. y Diem, H. G. tions of Azospirillum of 20 years worldwide field inocula-
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Algunas especies hospedantes pueden formar tambin J. Microbiol. & Biotech 10: 118-121 caryotes autotrophes. 1996. Biologie - Gologie 3:
los otros dos tipos de micorrizas: ectendomicorrizas y La simbiosis ectomicorrtica (figura 2)(Dommergues, Man- Frioni, L., R. Dodera, D. Malates e I. Irigoyen An asses- 481-529.
endomicorrizas, en donde la caracterstica es la pene- genot, 1970) ocurre sobretodo en plantas leosas, rbo- sment of nitrogen fixation capability of leguminous Sprent, J.I. y P. Sprent. Nitrogen Fixing Organisms-Pure
tracin de las clulas de la raz. les o arbustos y solamente en un 3%-5% del total de trees in Uruguay. 1998, Applied Soil Ecology 7: 271- and Applied Aspects, 1990. Chapman y Hall, Lon-
especies vegetales, pero la gran distribucin geogrfica y 279 don 256 pp
En las endomicorrizas se encuentran hifas intercelulares la importancia econmica de esas especies contribuy al Frioni, L., D. Malates, I. Irigoyen y R. Dodera Promiscuity Subba Rao, N. S. y C. Rodriguez-Barrueco Symbiosis in
e hifas que penetran en las clulas del hospedero y se apre- desarrollo de los estudios en esta asociacin. for nodulation and effectivity in the N2-fixing legume Nitrogen-Fixing Trees, 1993, Subba Rao y R.Barrueco
cian: hifas, vesculas, arbsculos o haustorios y espo- tree Acacia caven in Uruguay, 1998, Applied Soil (eds) Oxford & IBH Publishing Co. New Delhi
ras. Muchas veces no se aprecian modificaciones externas Caractersticas: se aprecia un manto fngico alrededor Ecology 7: 239-244 Truchet, G., Camut, S., de Billy, F., Odorico, R.,Vasse, J.
que evidencien la colonizacin. Se describen tambin las de las races (figura 2), hifas intercelulares, formando la Fulchieri, M. y L. Frioni, Azospirillum inoculation on mai- The rhizobium - legume symbiosis 1989. Protoplas-
ectendomicorrizas, que son formas intermediarias entre tpica red de Hartig entre las primeras clulas corticales y ze (Zea mays). Effect on yield in a field experiment in ma, 149: 82-88.
Urquiaga, S. y J. Dbereiner Fijacin biolgica de nitrge- 6) Explique una asociacin de una cianobacteria fijado-
no asociada con gramneas forrajeras, cereales y caa ra de N2 con vegetales y su aplicacin agronmica
de azcar. En : Fijacin y Movilizacin de Nutrien- 7) A qu se llama azollizacin?
tes, vol II, 1991, Olivares, J. y J. M. Barea (coord),
8) Qu importancia prctica pueden tener las bacte-
Consejo Superior de Investigaciones Cientficas, co-
rias fotosintticas anaerobias? Y que rol cumplieron
leccin Nuevas Tendencias, vol 18, Madrid: 71-89
Vincent, J. M. Nitrogen Fixation in Legumes, 1982, Aca-
demic Press, Londres
Wood, S. M., Newcomb, W., Nodule morphogenesis: the
en estudios bioqumicos y metablicos?
9) Seale 3 asociaciones simbiticas fijadoras de N2:
10) Caractersticas de rhizobio:
16 Las micorrizas
early infection of alfalfa (Medicago sativa) root hairs 11) Aislamiento a partir de suelo sin cultivo de legumi-
by Rhizobium meliloti. 1989. Can. J. Bot., 67: 3108- nosas
3122. 12) Seales moleculares en la iniciacin de la nodulacin:
Existen numerosas relaciones mutualsticas entre hongos El cuadro 1 muestra los beneficios que se reconocen en
13) Diferencias entre ndulos de rhizobio y de frankia y races de plantas vasculares y no vasculares. Una de la nutricin vegetal por la micorrizacin. La importancia
Preguntas de repaso 14) Por qu Frankia puede fijar al aire? las ms extendidas la constituyen las asociaciones mico- de estas asociaciones se demostr por los fracasos en
15) Qu se entiende por inoculacin? rrcicas, que involucran varios tipos de hongos del suelo y la implantacin de especies exticas, al cambiarlos de
1) Explique por qu la fijacin biolgica de N2 es ms 16) En qu situaciones aconsejara inocular una legu- races. hbitat o por la dificultad en la forestacin de zonas ero-
eficiente en asociaciones simbiticas nodulares. minosa? sionadas.
2) Cmo demostrara la respuesta anterior? El trmino micorriza (muks=hongo, rhiza=raz) fue pro-
17) Cmo evaluara el efecto de un inoculante?
puesto por Frank, en 1885 para describir estos rganos Cuando se agregan cultivos adecuados de hongos mico-
3) Seale relaciones de diazotrofos hetertrofos con el 18) Principales cultivos inoculados con diazotrofos que mixtos formados por races y hongos del suelo, que no rrcicos, o mantillo de la zona de origen, la sobrevivencia
O2 y explique en qu condiciones fijan N2. conozca provocan sntomas de enfermedad y se las considera como y desarrollo de especies forestales aumentan en forma
4) Qu mecanismos de proteccin de la N2asa puede 19) Si debe inocular y no dispone de cepas eficientes, verdaderas simbiosis. en contraste con la infeccin de sorprendente. En base a los caracteres morfolgicos se
sealar? qu procedimiento seguira? races con hongos patgenos. Los hongos colonizan el reconocen varios tipos de micorrizas.
5) Cul o cuales de ellos presenta: Azotobacter, Azos- 20) Qu ensayos efectuara en la evaluacin de un ino- tejido cortical de las races durante el perodo de activo
pirillum, Clostridium, Klebsiella, Bacillus? culante comercial? crecimiento vegetal.
Cuadro 1- Beneficios de la micorrizacin en
La asociacin est caracterizada por: vegetales
el movimiento de productos carbonados de la planta al
mejoramiento en la absorcin de nutrientes
hongo
incremento en la tolerancia a:
mayor absorcin de agua y nutrientes por parte del hon- sequa
go que favorece a la planta sales
metales pesados
Estn muy distribuidas en el reino vegetal y slo algunas patgenos
especies acuticas, las crucferas y otras pocas especies, estabilizacin del suelo
no forman normalmente micorrizas. Se reconocen en los
fsiles vegetales ms antiguos y se postula que la evolu-
cin de plantas terrestres desde hbitats semi acuticos Las caractersticas de los dos tipos ms importantes: en-
fue posible gracias a relaciones mutualsticas con algas y domicorrizas arbusculares (MA), llamadas tambin ve-
hongos. Aproximadamente el 95% de las especies de plan- sculo-arbusculares, V-A y las ectomicorrizas (EM) se
tas vasculares pertenecen a familias caractersticamente sealan en el cuadro 2 y en la figura 1 (Duhoux y Nicole,
micorrizadas, as como numerosas Briofitas y Pteridofitas. 2004).
La micorrizacin ha evolucionado como la norma en la En las ectomicorrizas, la raz est completamente ro-
nutricin terrestre y no como la excepcin. deada por un manto fngico, bien desarrollado, cuyas hi-
Urquiaga, S. y J. Dbereiner Fijacin biolgica de nitrge- 6) Explique una asociacin de una cianobacteria fijado-
no asociada con gramneas forrajeras, cereales y caa ra de N2 con vegetales y su aplicacin agronmica
de azcar. En : Fijacin y Movilizacin de Nutrien- 7) A qu se llama azollizacin?
tes, vol II, 1991, Olivares, J. y J. M. Barea (coord),
8) Qu importancia prctica pueden tener las bacte-
Consejo Superior de Investigaciones Cientficas, co-
rias fotosintticas anaerobias? Y que rol cumplieron
leccin Nuevas Tendencias, vol 18, Madrid: 71-89
Vincent, J. M. Nitrogen Fixation in Legumes, 1982, Aca-
demic Press, Londres
Wood, S. M., Newcomb, W., Nodule morphogenesis: the
en estudios bioqumicos y metablicos?
9) Seale 3 asociaciones simbiticas fijadoras de N2:
10) Caractersticas de rhizobio:
16 Las micorrizas
early infection of alfalfa (Medicago sativa) root hairs 11) Aislamiento a partir de suelo sin cultivo de legumi-
by Rhizobium meliloti. 1989. Can. J. Bot., 67: 3108- nosas
3122. 12) Seales moleculares en la iniciacin de la nodulacin:
Existen numerosas relaciones mutualsticas entre hongos El cuadro 1 muestra los beneficios que se reconocen en
13) Diferencias entre ndulos de rhizobio y de frankia y races de plantas vasculares y no vasculares. Una de la nutricin vegetal por la micorrizacin. La importancia
Preguntas de repaso 14) Por qu Frankia puede fijar al aire? las ms extendidas la constituyen las asociaciones mico- de estas asociaciones se demostr por los fracasos en
15) Qu se entiende por inoculacin? rrcicas, que involucran varios tipos de hongos del suelo y la implantacin de especies exticas, al cambiarlos de
1) Explique por qu la fijacin biolgica de N2 es ms 16) En qu situaciones aconsejara inocular una legu- races. hbitat o por la dificultad en la forestacin de zonas ero-
eficiente en asociaciones simbiticas nodulares. minosa? sionadas.
2) Cmo demostrara la respuesta anterior? El trmino micorriza (muks=hongo, rhiza=raz) fue pro-
17) Cmo evaluara el efecto de un inoculante?
puesto por Frank, en 1885 para describir estos rganos Cuando se agregan cultivos adecuados de hongos mico-
3) Seale relaciones de diazotrofos hetertrofos con el 18) Principales cultivos inoculados con diazotrofos que mixtos formados por races y hongos del suelo, que no rrcicos, o mantillo de la zona de origen, la sobrevivencia
O2 y explique en qu condiciones fijan N2. conozca provocan sntomas de enfermedad y se las considera como y desarrollo de especies forestales aumentan en forma
4) Qu mecanismos de proteccin de la N2asa puede 19) Si debe inocular y no dispone de cepas eficientes, verdaderas simbiosis. en contraste con la infeccin de sorprendente. En base a los caracteres morfolgicos se
sealar? qu procedimiento seguira? races con hongos patgenos. Los hongos colonizan el reconocen varios tipos de micorrizas.
5) Cul o cuales de ellos presenta: Azotobacter, Azos- 20) Qu ensayos efectuara en la evaluacin de un ino- tejido cortical de las races durante el perodo de activo
pirillum, Clostridium, Klebsiella, Bacillus? culante comercial? crecimiento vegetal.
Cuadro 1- Beneficios de la micorrizacin en
La asociacin est caracterizada por: vegetales
el movimiento de productos carbonados de la planta al
mejoramiento en la absorcin de nutrientes
hongo
incremento en la tolerancia a:
mayor absorcin de agua y nutrientes por parte del hon- sequa
go que favorece a la planta sales
metales pesados
Estn muy distribuidas en el reino vegetal y slo algunas patgenos
especies acuticas, las crucferas y otras pocas especies, estabilizacin del suelo
no forman normalmente micorrizas. Se reconocen en los
fsiles vegetales ms antiguos y se postula que la evolu-
cin de plantas terrestres desde hbitats semi acuticos Las caractersticas de los dos tipos ms importantes: en-
fue posible gracias a relaciones mutualsticas con algas y domicorrizas arbusculares (MA), llamadas tambin ve-
hongos. Aproximadamente el 95% de las especies de plan- sculo-arbusculares, V-A y las ectomicorrizas (EM) se
tas vasculares pertenecen a familias caractersticamente sealan en el cuadro 2 y en la figura 1 (Duhoux y Nicole,
micorrizadas, as como numerosas Briofitas y Pteridofitas. 2004).
La micorrizacin ha evolucionado como la norma en la En las ectomicorrizas, la raz est completamente ro-
nutricin terrestre y no como la excepcin. deada por un manto fngico, bien desarrollado, cuyas hi-
fas se expanden entre las clulas corticales de la raz (red los dos grupos precedentes y que se aprecian frecuente- Bibliografa Central Argentina, 1994, Soil Biol. Biochem 26(7):
de Hartig). Son comunes entre Gimnospermas (especialmente en los viveros forestales. 921-923
mente Pinaceas) y Angiospermas (especialmente Salica- Barea, J. M., Cuantificacin de la fijacin biolgica de N Gauthier, D.; Frioni, L.; Diem, H. G. y Y. Dommergues,
ceae, Betulacceae, Fagaceae, Ulmaceae, Rosaceae, Le- Las micorrizas tipo arbutoide, son ectendomicorrizas cu- mediante el uso de N15. En: Fijacin y Movilizacin The Colletia spinosissima-Frankia Symbiosis, 1984,
guminoseae, Myrtaceae, Tiliaceae, Ericaceae). La mayo- yas hifas en forma de pelotones intracelulares estn muy Biolgica de Nutrientes, vol II, 1991, Olivares, J. y J. Oecol. Plantarum, 5 (19); N 3: 231-239
ra son rboles. desarrolladas. Otros tipos han sido descriptos (endomico- M. Barea (coord), Consejo Superior de Investigacio- Gonzalez-Lopez, J. Microorganismos diazotrofos asocia-
rrizas con pelotones) en las Orchidaceae, las Monotropeae nes Cientficas, Coleccin Nuevas tendencias, Madrid: dos a races de plantas no-leguminosas. En : Inte-
hifas extremas
y en las Erycaceae. 105-127 raccin Planta-Microorganismo, Biologia del ni-
Bottini, R., Fulchieri, M. Pearce, D. y Pharis, R. P. Identifi- trgeno, 1992, Gonzlez Lpez, J. y Lluch Pl, C.
rizoderma Los estudios relacionados con la naturaleza del hongo, la cation of giberelins A1, A3 and iso-A3 in cultures de (coord),. Editorial Rueda, Madrid: 71-96
red Hartig fisiologa de la micorriza, el aislamiento y propagacin del Azospirillum lipoferum. 1989, Plant Physiol. 90:45-47 Izaguirre, P. y R. Beyhaut. Las leguminosas en Uruguay
pelo absorbente endosimbionte y las prcticas de inoculacin, se han in- Dbereiner, J., y F.P. Pedrosa; Nitrogen-fixing Bacteria y regiones vecinas. 1998. Parte 1: Papilionoideae:
crementado en los ltimos aos (Agerer, 1994, Allen, 1991, in Non-Legumineus Crop Plants. 1987, Springer-Ver- Ed. Hemisferio Sur. Montevideo, 549 pp.
manto
Norris et al, 1994, Siquiera et al, 1994). lag, Berln Izaguirre, P. y R. Beyhaut. Las leguminosas en Uruguay y
parenquima cilindro parenquima arbsculo Dbereiner, J., V.M. Reis, M. A. Paula y F. Olivares, En- regiones vecinas. 2003. Parte 2: Caesalpinioideae. Parte
cortical central cortical
pelotn dophytic diazotrophs in sugar cane, cereals and tuber 3: Mimosoideae: Ed. Hemisferio Sur. Montevideo, 302 pp.
Cuadro 2 - Caractersticas de los tipos ms plants. En: New Horizons in Nitrogen Fixation, 1992 Graham, P. H. Biological Dinitrogen Fixation:Symbiotic. En:
importantes de micorrizas R. Palacios, J. Mora y W. E. Newton, (eds) Kluver Aca- Principles and Applications of Soil Microbiology.
demic Publishers, Dordrecht: 671-676 1998, Sylvia, Fuhrmann, Hartel y Zuberer (eds), Pren-
hifas externas Caractersticas Arbusculares Ectomicorrizas Dommergues, Y. Nitrogen fixation by trees in relation to tice Hall, New York
esporas
vescula esporocarpo hongo soil nitrogen economy. 1995, Fertilizer Research 42: Kondorosi, A. Overview on genetic of nodule induction:
pelotn
hifas septadas - + 215-230 Factors controlling nodule induction by Rhizobium
hifas no septadas + - Dommergues, Y., Duhoux, E. y Diem, H. G. Les arbres meliloti. En: Advances in molecular genetics of
pared del hongo
intracelulares + -
pared de la clula vegetal interfase
manto fngico - +
fixateurs dazote. 1999, Co-edicin CIRAD/FAO/IRD plant-microbe interactions. 1991, H.Nennecke y
membrana perifngica
red de Hartig - + Espaces 34, Pars D.P.S. Verma (eds), Kluver Academic Publishers, Dor-
vacuola vesculas +o- - Duhoux, E. y Nicole, M. Biologie Vgtale: Associatio- dcrecht, Holanda: 111-118
arbsculos + - ns et interactions chez les plantes. 2004, Dunod, Martinez, E., D. Romero y J. Caballero-Mellado, Rhizo-
ncleo taxonoma Zygomycetes= Basidiomycetes,
Pars bium phylogenies and bacterial genetic diversity. 1996,
Glomeromycetes Ascomycetes
membrana plasmtica de la Zygomycetes Franche, C., Laplaze, L., Duhoux, E., Bogusz, D. Actinor- Crit. Rev. Plant Sci. 15(2):113-140
ectomicorriza
clula vegetal, endomicorriza A hizal symbioses: recent advances inplant molecular and Okon, Y (ed) Azospirillum-Plant Associations. 1994,
planta Bryophytas, Pteridophytas Pocas Pteridophytas
taxonoma Gymnospermas Gimnospermas genetic transformation studies, 1998. Critic Rev. Plant CRC Press, Boca Raton, Fl
Figura 1- Esquema de raz: normal, con pelos capilares, Angiospermas Angiospermas Sci, 17:1-28 Okon, Y. y C.A. Labandera-Gonzalez, Agronomic applica-
micorrizada por ecto, endo y ectendomicorrizas Frioni, L., Le Roux, C., Dommergues, Y. y Diem, H. G. tions of Azospirillum of 20 years worldwide field inocula-
Inoculant made of encapsulated Frankia: assessment tion, 1994, Soil Biol. Biochem.26(12): 1591-1601
Ectomicorrizas of Frankia growth within alginate beads. 1994 World Selosse, M. A., Les cyanobactries, dtonnants pro-
Algunas especies hospedantes pueden formar tambin J. Microbiol. & Biotech 10: 118-121 caryotes autotrophes. 1996. Biologie - Gologie 3:
los otros dos tipos de micorrizas: ectendomicorrizas y La simbiosis ectomicorrtica (figura 2)(Dommergues, Man- Frioni, L., R. Dodera, D. Malates e I. Irigoyen An asses- 481-529.
endomicorrizas, en donde la caracterstica es la pene- genot, 1970) ocurre sobretodo en plantas leosas, rbo- sment of nitrogen fixation capability of leguminous Sprent, J.I. y P. Sprent. Nitrogen Fixing Organisms-Pure
tracin de las clulas de la raz. les o arbustos y solamente en un 3%-5% del total de trees in Uruguay. 1998, Applied Soil Ecology 7: 271- and Applied Aspects, 1990. Chapman y Hall, Lon-
especies vegetales, pero la gran distribucin geogrfica y 279 don 256 pp
En las endomicorrizas se encuentran hifas intercelulares la importancia econmica de esas especies contribuy al Frioni, L., D. Malates, I. Irigoyen y R. Dodera Promiscuity Subba Rao, N. S. y C. Rodriguez-Barrueco Symbiosis in
e hifas que penetran en las clulas del hospedero y se apre- desarrollo de los estudios en esta asociacin. for nodulation and effectivity in the N2-fixing legume Nitrogen-Fixing Trees, 1993, Subba Rao y R.Barrueco
cian: hifas, vesculas, arbsculos o haustorios y espo- tree Acacia caven in Uruguay, 1998, Applied Soil (eds) Oxford & IBH Publishing Co. New Delhi
ras. Muchas veces no se aprecian modificaciones externas Caractersticas: se aprecia un manto fngico alrededor Ecology 7: 239-244 Truchet, G., Camut, S., de Billy, F., Odorico, R.,Vasse, J.
que evidencien la colonizacin. Se describen tambin las de las races (figura 2), hifas intercelulares, formando la Fulchieri, M. y L. Frioni, Azospirillum inoculation on mai- The rhizobium - legume symbiosis 1989. Protoplas-
ectendomicorrizas, que son formas intermediarias entre tpica red de Hartig entre las primeras clulas corticales y ze (Zea mays). Effect on yield in a field experiment in ma, 149: 82-88.
lacin la efecta el hospedante, mientras que el endofito reas muy erosionadas, suelos muy pobres en todas las un conjunto de filamentos miceliares que exploran el sue- El hongo se mantiene en la corteza pudiendo llegar a la
excretara el amonio producido en la reduccin del N2, al regiones climticas. lo para asegurar la nutricin mineral de la asociacin, re- endodermis, va lmina media, por accin de enzimas
igual que en las otras simbiosis fijadoras de nitrgeno. lacionados a las fructificaciones fngicas o carpforos. pectinolticas, dependiendo de la agresividad del hongo y
la respuesta del hospedante
El H2 es liberado escasamente por la presencia de una Resumen Tejido vascular
hidrogenasa muy eficiente contenida en las vesculas que Endodermis Las plantas hospederas
asegura el reciclamiento de los electrones hacia la nitro- El cuadro 17 compara las simbiosis por rhizobio y por Fran- Clulas corticales De gran distribucin en las Gymnospermas: Pinaceae (pi-
genasa. kia y la figura 14 esquematiza ambos tipos de ndulos. nos, abetos, epigeas) y las Angiospermas, sobre todo dico-
Se aprecia la colonizacin central en las leguminosas y tiledneas como Fagaceae (hayas, robles, castaos), Myr-
Como se observa, los sistemas simbiticos fijadores de perifrica en no-leguminosas. taceae (eucalipto) y familias de plantas tropicales (Caesal-
N2 presentan gran similitud en cuanto a los sistemas enzi- pinoideae). Es de hacer notar que una misma especie pue-
mticos: nitrogenasa e hidrogenasa, en las enzimas para de presentar simbiosis ecto y endomicorrtica, como es el
la asimilacin del amonio y en los efectos del medio sobre caso de los lamos, eucaliptos, casuarinas y leguminosas
la magnitud del proceso. arbreas, que pueden presentar tres tipos de simbiosis a lo
largo de su ciclo de vida: ndulos con rhizobio, ecto y endo-
Red de Hartig Manto formado por micorrizas (se habla de simbiosis triple).
(hifas intercelulares) hifas del hongo
Perspectivas
Los hongos
El empleo de las plantas actinorrticas como pioneras en Figura 2- Esquema de una raz ectomicorrizada Contrariamente a lo observado con los hongos que for-
suelos pobres o degradados es ya prctica comn en man endomicorrizas, son numerosos las especies ecto-
muchos pases. Algunas especies se pastorean, como micorrticas, con ms de 5.000 especies. Pertenecen a
jvenes ejemplares de Alnus spp. Representan una bue- El manto fngico puede representar en 40% del peso to- las subdivisiones Ascomycotina y Basidiomycotina, cuyos
na alternativa frente a las leguminosas en ciertas zonas. tal del rgano (figura 3). Las hifas se pueden extender al ciclos sexuados son bien conocidos. Muchos presentan
Progresan los estudios sobre las relaciones de especifici- suelo vecino y tambin penetrar espacios intercelulares rganos de reproduccin sexual o carpforos comestibles
dad endofito-hospedante, los mecanismos de reconoci- de la corteza. Las clulas corticales se alargan transver- (boletos, agaricales, trufas), mientras que otros son txi-
miento y los procesos de colonizacin. Constituye un rea salmente y los pelos capilares estn ausentes. Los teji- cos (Amanita phallodes). Algunos hongos presentan un
cuyos estudios se incrementan rpidamente por la impor- dos meristemticos y los del pice estn reducidos en re- espectro de especificidad estrecho, como Boletus betuli-
tancia del nitrgeno como elemento limitante del desarro- Figura 14- Esquema de ndulos en: a) actinorrizas lacin a races no micorrizadas. Las races colonizadas cola, y otros como Pisolithus tinctorius, coloniza ms de
llo vegetal y la capacidad de estas plantas de colonizar b) leguminosas son por lo general laterales, al emerger de la corteza de una decena de especies vegetales.
races micorrizadas. Estas races son de corta longitud,
muy ramificadas y son reemplazadas peridicamente.
Cuadro 17- Comparacin de las simbiosis en leguminosas y en plantas actinorrizas Raz no micorrizada Raz micorrizada
La morfologa y anatoma de las ectomicorrizas son varia-
Leguminosas Actinorrizas das segn el estado de desarrollo, el hongo asociado y la
Morfologa ndulo Simple Complejo presencia de ms de una especie fngica (figuras 4 y 5).
Velocidad de crecimiento de la bacteria Lentas: ms 6h(tg) Ms 15 horas (tg) Caracteres anatmicos, fisiolgicos, ecolgicos y taxon-
Rpidas: menos 6h micos se tienen en cuenta en la descripcin de las ecto-
Sistema vascular en ndulos Perifrico Central micorrizas, como la morfologa de las hifas, estructura y
Hidrogenasa (Hup+) No general General aspecto del manto fngico, presencia de rizomorfos, co-
Fijacin de N2 in vitro Excepcional General lor, flourescencia, olor, hbitat (Alvarez, 1991). Lmite de la zona
Proteccin O2: hemoglobina Siempre presente Variable, algunas excepciones de absorcin de P
Las ectomicorrizas de rboles forestales pueden ser par-
Nodulacin area Varias especies Excepcional das, negras, rojas, amarillas, blancas. Muchos hongos
Transporte N fijado como uredos Puede emplearse en No lo forman inducen ramificaciones dicotmicas en las races, las que
plantas (tropicales) le dan forma coraloide caracterstica; otras pueden tener Figura 3- Zonas de absorcin de nutrientes en raz no
Nodulacin perenne Excepcional Es la regla formas ramificadas, pinadas, globulosas, etc. (figura 4). micorrizada (izquierda) y micorrizada (derecha)
La identificacin de los hongos se realiza a partir de sus Se han sealado valores de fijacin de 200-250 kgN/ha/ nosas. Alnus glutinosa y Myrica gale se mostraron muy
fructificaciones y de observaciones citolgicas de hifas ao en Alnus, entre 60 y 230 en Casuarina, 20-180 en resistentes a las bajas concentraciones de iones hi-
(doliporos en Basidiomycotina y cuerpos de Woronin en Hippophe, de 150 en Coriaria. En general, en la mayor drgeno
Ascomycotina) ayudado con marcadores moleculares (se- parte de los ecosistemas con especies leosas fijadoras
cuencias del ARN ribosomal). de N2, se sealan ganancias de N a nivel del suelo igua- La humedad, muchas especies actinorrticas que cre-
les o superiores a 100 kgN/ha/ao, del mismo orden de cen en reas secas son afectadas por una sequa tran-
Por otra parte, estos hongos son fciles de aislar y de magnitud que las aportadas como fertilizantes en confe- sitoria y la actividad nitrogenasa cesa en plantas some-
cultivar al estado puro (Honrubia et al., 1994, Malvarez et ras (Subba-Rao y Rodrguez-Barrueco, 1992). La selec- tidas a una succin de -25 barias en el xilema. En gene-
al., 1997; Anexo prctico). cin de especies eficientes es una alternativa a la fertili- ral ocurre un decaimiento masivo de ndulos en el ve-
zacin, logrando ganancias sensibles de la productividad, rano. La inundacin, al limitar la difusin de los gases,
La mayora son: Basidiomycetes: Hymenomycetes, como sin aumento de los costos. limita la actividad de los ndulos. Algunas especies
Boletus, Cortinarius, Suillus, Amanita, Thricholoma, Lac- poseen estructuras en las extremidades de los ndulos
caria y entre los Gasteromycetes se encuentran espe- llamadas lenticelas, que facilitan la difusin del O2 a
Figura 4- Carpforos de hongos ectomicorrcicos (A, B, C), cies de Rhizopogon, Pisolithus y Scleorderma. Algunos Factores que afectan a la fijacin del travs del tejido nodular
races micorrizadas (D, E) y cortes de races microrrizadas de estos gneros poseen especies saprofitas o parsi- nitrgeno
(F,G) se aprecia el manto fngico (s) y la red de Hartig (Hn) tas que no forman simbiosis con races y es posible que Los cambios diurnos y estacionales: en rboles
en las primeras filas de clulas corticales Tanto la nodulacin como la fijacin del nitrgeno estn
los ectomicorrcicos hayan evolucionado a partir de s- perennes, la actividad nitrogenasa se induce tempra-
afectadas por los mismos factores que en otras simbiosis
tos (figura 6). no en la primavera, cuando comienza la emergencia
fijadoras de N2: fotosntesis, factores ambientales, como
de las hojas. Luego se incrementa a medida que lo
la temperatura, el aporte de nutrientes, incluido el nitrge-
De acuerdo a su capacidad para vivir libremente y su gra- hace la temperatura. Las determinaciones de la fija-
no combinado, la aireacin. La cantidad fijada vara mu-
do de especificidad con el hospedante, los hongos ecto- cin del N2 se han realizado sobre todo a nivel de
cho entre especies e incluso por la posicin de los ndu-
micorrcicos se dividen en: laboratorio, con ndulos aislados y son pocos los
los en la raz.
datos de campo que permiten conocer el aporte de
saprofitas, que pueden formar micorrizas con hospe- El nmero de partculas infectivas en la rizosfera afec-
nitrgeno al suelo
dantes adecuados ta directamente a la nodulacin y por lo tanto a la fija-
cin del N2. La inoculacin tendr efectos positivos cuan-
normalmente micorrcicos, con amplio rango de hos- do ese nmero es bajo
Transporte de los productos de la fijacin
pedantes, y con capacidad saproftica. La mayora de hacia la planta
los hongos que forman EM poseen escasa o nula habi- El nitrgeno combinado afecta negativamente a la fi-
lidad para vivir libremente, pero poseen amplio rango jacin por estos organismos, al igual que el proceso en Como en otras simbiosis, un 90-95% de los compuestos
de hospedantes. leguminosas. Se observaron, sin embargo, diferencias nitrogenados de la fijacin son transferidos al hospedan-
entre la sensibilidad de especies vegetales frente al ni- te. Luego de unos minutos de exposicin a una mezcla de
con escasa capacidad saprofita, con estrecho rango trgeno combinado; Alnus es bastante insensible y se gases con N15, un 25% del nitrgeno fijado se detecta en
de hospedantes: Suillus plorans o Boletinus asiaticus, los puede encontrar nodulados en suelos relativamente las partes basales de los ndulos de Alnus, el resto se
que pueden encontrarse en una sola o dos especies. ricos en nitrgeno encuentra en las partes superiores de los lbulos nodula-
La mayora de los conocimientos sobre la fisiologa de las res y luego de una hora de inoculacin, en las races veci-
ectomicorrizas se obtuvo con los dos ltimos grupos. Las La temperatura del suelo: afecta marcadamente a la nas al ndulo.
diferencias en los grados de colonizacin dependen, en- fijacin, aunque la tolerancia a temperaturas extremas
vara con las especies. El ptimo para muchas plan- Los compuestos transferidos son sobre todo aminoci-
tre otras causas, de la actividad de enzimas como celula-
tas se ubica entre 20-25 C, sin embargo especies de dos: arginina, glutamina; la citrulina es ms comn en
sa y polifenol oxidasa.
Casuarina y H. rhamnoides toleran altas temperatu- ndulos de Alnus glutinosa. No se sabe si su sntesis es
ras, lo que les brinda gran ventaja ecolgica. Las ba- realizada por la planta, el endofito o por ambos. Entre las
Fuentes de carbono: muchas especies ectomicorrci-
jas temperaturas afectan tambin negativamente al enzimas para la asimilacin del amonio, se encontr la
cas obligadas han podido desarrollarse en cultivo puro,
proceso glutamato deshidrogenasa (GDH) y la glutamino sinteta-
con nutrientes relativamente simples, como glucosa y
Figura 5- Tipos morfolgicos de ectomicorrizas sa (GS), presentes en ndulos de A. glutinosa, sobre todo
otros azcares. Muchas no pueden emplear disacridos
Observese estructura dicotmica, hifas a partir del manto La acidez: se piensa en general que las no-legumino- en el citoplasma del hospedante y no tanto en los resi-
fngico y las formas coraloides. y otras especies pueden degradar polisacridos siem-
sas son ms tolerantes a los bajos pH que las legumi- duos de 20 micras con vesculas. Se postula que la asimi-
suelos pobres. Estos rboles son empleados en silvicul- Numerosos estudios se han realizado a los efectos de lo- pre que se agregue algo de glucosa (induccin enzim-
tura, en planes de forestacin, en sistemas agroforesta- grar buena sobrevivencia de este organismo en inoculan- tica). Se han detectado actividades de celulasas, hemi-
les, contribuyendo a incrementar el nivel de nitrgeno de tes comerciales a emplear en los viveros. Los ensayos celulasas y amilasas pero, como grupo, estos hongos
los mismos. incluyen soportes inertes como la vermiculita. Frankia re- son en general incapaces de descomponer mantillos u
sult muy resistente al ser atrapada en bolitas de algina- otras formas de materia orgnica del suelo, y dependen
El cuadro 15 muestra el contenido de nitrgeno en hojas to, las que desecadas se conservan por largos perodos del hospedante para la provisin de compuestos carbo-
de algunas de estas plantas. Los datos de N en los rastro- de tiempo (Frioni et al., 1994)(Anexo prctico). nados simples.
jos no deben tomarse como todo el nitrgeno fijado, ya
que, dependiendo del nivel de N del suelo, una parte es Muchas experiencias se realizaron para determinar la dis- Fuentes de nitrgeno: son variadas, en general sales de
reciclada a partir del mismo. tribucin de los endofitos y de sus respectivas plantas amonio, aminocidos y otras formas de N-orgnico son
hospedantes. Se encontraron: rpidamente utilizadas (experiencias con N15), los nitratos
son menos empleados. Altos niveles de N en el suelo in-
Cuadro 15 - N% en hojas y en mantillo de plantas poblaciones locales de Frankia en ambientes sin los hiben la sntesis de ectomicorrizas: una C/N alta parece
actinorrtcas noduladas hospedantes, que pueden haber migrado por agua, ser prerrequisito para su formacin.
viento, lluvia
Especies N% en Mantillo N% Edad N total Factores de crecimiento: muchos de estos hongos re-
hojas ton/ha/ao aos kgN/ha/ao las poblaciones del endofito siguen, en general, a las quieren ciertas vitaminas del complejo B, como tiamina y
Alnus incana 2,82 - - - - poblaciones de la planta hospedante. En Alnus, cuya biotina; otras especies prefieren inositol, cido nicotnico
A. crispa 1,5 3,0 5 157 nodulacin es muy extendida, el endofito se encuen- y cido pantotnico.
A. rubra 1,3 2,0 0-40 30 tra en un 100% de las zonas de distribucin de la
2,17 9,3 1,82 12 169 planta. Los hongos ectomicorrcicos producen auxinas, gi-
A. glutinosa 2,57 - - - - berelinas, citoquininas y una variedad de vitaminas,
Casuarina littoralis 2,9 1,0 - 290 Los ndulos de estas plantas fijan nitrgeno, como lo ha- antibiticos, cidos grasos. Las sustancias de natu-
C. equisetifolia 1,30 - - - - cen otros sistemas fijadores, dependiendo su actividad de raleza auxnica reproducen caracteres de la micorri-
Ceanothus velutinus 6,2 1,46 9 91 la biomasa del tejido nodular, de la actividad de la nitroge- zacin al incorporarlas a races creciendo asptica-
Eleagnus orientalis 13,5 1,35 - 183 nasa y del perodo en que permanecen activos. La respi- mente: se forman races cortas y gruesas con ausen-
racin y la actividad nitrogenasa de los ndulos declina cia de pelos y elongacin radial de clulas con corti-
con los incrementos de la edad de los ndulos, como ocu- cales. La microflora rizosfrica puede brindar el trip-
Numerosos son los trabajos realizados en los ltimos aos rre en general en ndulos perennes. De modo que, en tofano para la sntesis del AIA (cido indol actico),
sobre esta simbiosis que permiten ampliar la capacidad promedio, estos ndulos fijan menos que ndulos jve- que induce estos cambios.
de incorporacin de N en arbustos y rboles de importan- nes de leguminosas anuales.
cia silvopastoril. Si las races micorrizadas pierden al hongo asociado, las
El cuadro 16 (Gauthier et al., 1984) muestra la actividad caractersticas estructurales desaparecen y se transfor-
El actinomicete se propaga en el suelo. La sobrevivencia nitrogenasa de Colletia spinosissima, su contenido de N%, man en races normales. El exceso de nitrgeno afecta a
e infectividad ha sido demostrada cuando se emplean el N total por planta y su peso seco en ensayo control e la micorrizacin: puede provocar que las auxinas se con- Figura 6- Fructificaciones de hongos ectomicorrcicos:
homogeneizados nodulares como material infectivo. La inoculado en cultivo hidropnico. viertan en compuestos relacionados, pero sin actividad Laccaria, Pisolithus y Scleroderma
infectividad, que disminuye con la dilucin, puede mante- promotora del crecimiento, e incluso inhibir su sntesis por
nerse a bajas temperaturas -en heladera- por varios me- el hongo.
ses. Se pueden conservar ndulos secos al aire sobre Cuadro 16 - Efecto de la inoculacin con Frankia Interacciones entre el hongo y el hospedante
slico-gel a 6C. El congelamiento permite tambin man- en Colletia spinosissima Los factores fsicos tambin afectan el desarrollo de
tener los inculos viables. Se observ que la presencia estos hongos. El ptimo del crecimiento se sita entre 18 Si bien el desarrollo de plntulas de rboles no depende
de ndulos con esporas permite mayor sobrevivencia, sien- Tratamiento Peso seco ARA mMC2H4/ y 27C, para muchos cesa sobre 35C y debajo de 5C. siempre de la simbiosis, tanto el crecimiento como el nivel
do las esporas ms resistentes a condiciones adversas mg/planta N% N total h/planta Se consideran acidfilos, con pH ptimo entre 4 y 6, algu- de minerales son incrementados.
del suelo. Las partculas del endofito responsables de la Control 56 0,8 0,45 0 nos crecen bien a pH 3,0. Son aerobios, por esto los cul-
propagacin y de la colonizacin posterior parecen ser Inoculado 113 1,5 1,69 0,68 tivos para preparar inoculantes se agitan, y sensibles a la La planta logra mayor absorcin de nutrientes al au-
hifas finas, ms que las esporas. falta de agua. mentar la superficie radical, incrementan la resistencia a
patgenos, a toxinas, pH, temperatura y humedades ad- tro fenil fosfato, -glicerol fosfato, por actividad de fos- El proceso es muy parecido al que ocurre en legumino- La existencia de poblaciones extranodulares del endofito
versas. La suberizacin de las races est limitada y se fatasas. sas: los pelos radicales en contacto con el endofito se es esencial para lograr colonizar plntulas y la disemina-
alarga su vida til encurvan y las hifas penetran avanzando hacia clulas cin en el campo. La presencia de cepas de Frankia en el
Es evidente que esta asociacin permite explorar el suelo corticales que son estimuladas a dividirse (figura 13). suelo est asegurada, como en el caso de las legumino-
El hongo, por su parte, obtiene los nutrientes carbona- ms eficientemente en hbitats en donde ninguno de los Las hifas penetran en las clulas en divisin, se ramifi- sas, por el decaimiento y desintegracin de los ndulos al
dos simples que requiere en las etapas iniciales y un integrantes de la pareja podra desarrollarse satisfacto- can y forman las clsicas vesculas en la periferia de finalizar la actividad simbitica.
ambiente que lo protege de la intensa competencia mi- riamente. La asociacin debe mantenerse por un prolon- estos conglomerados. La infeccin progresa y se forma
crobiana gado espacio de tiempo, para obtener beneficios sustan- el llamado ndulo primario, que se reconoce como una La regin apical (2-3 mm) de los lbulos del ndulo pare-
ciales. deformacin de una raz lateral cuyo crecimiento se de- cen constituir las partes ms activas en la fijacin del ni-
Fisiolgicamente, las asociaciones micorrcicas consti- tiene. El ndulo verdadero se completa por surgimiento trgeno. All precisamente, los racimos de vesculas pre-
tuyen uno de los mejores ejemplos de parasitismo contro- de races laterales inducidas cerca de los ndulos pri- sentan la mayor actividad y reducen activamente las sa-
lado. Los intercambios entre ambos componentes de esta Proteccin contra fitopatgenos marios, que se transforman en lbulos nodulares por les de tetrazolium. El aislamiento de las vesculas y la in-
asociacin se estudian con elementos marcados: infeccin persistente de su regin cortical. En los ndu- corporacin de ATP y ditionito permiti comprobar que son
Se ha puesto en evidencia que las races ectomicorriza- los verdaderos, la penetracin de las clulas jvenes el sitio de la fijacin. Incluso los resultados de fijacin se
14
CO2 en las plantas para seguir los compuestos orgni- das son ms resistentes a la invasin por microorganis- de la corteza y la diferenciacin del endofito es esen- expresan por nmero de vesculas.
cos radioactivos en el manto fngico y en las hifas mos fitopatgenos, en relacin a las plantas no infecta- cialmente la misma que en los ndulos primarios.
das. Varias hiptesis tienden a explicar estos hechos: Usos: el empleo que se les da a estas plantas es va-
32
P en compuestos orgnicos o minerales insolubles en En Casuarina y Myrica, el pice de cada lbulo nodular riable:
el suelo, que es transferido hacia la planta, por las hifas el patgeno contara con menor disponibilidad de da lugar a una raz pero con geotropismo negativo (figu-
del hongo. Las plantas micorrizadas se desarrollan mejor materiales carbonados en la zona de la raz, como ras 11 y 12), debido a bajos niveles de cido indolactico, muchas especies de Alnus pueden alcanzar 30-35 m en
en suelos deficientes en nutrientes como N, P, K. consecuencia de la absorcin de los mismos por el hon- lo que le da a los ndulos una apariencia muy particular. 50 aos con dimetros de 0,6 m y se emplean en mue-
go micorrcico En el campo, los ndulos pueden alcanzar dimetros de bles, postes, enchapados, y en la preparacin de pul-
Las races micorrizadas carecen de pelos capilares, la ms de 8 cm y muchas veces resulta difcil obtenerlos, pas para la elaboracin de tejidos
mayora de los nutrientes deben ser absorbidos por el manto fngico ejercera una eficiente barrera fsica a pues se distribuyen a lo largo de un sistema radical muy
las capas externas de la vaina fngica y son trasladados la penetracin por el patgeno: en cortes de races mi- extenso, que en suelos pedregosos y compactados pue- Casuarina se emplea tambin para postes y es rica en
a la corteza radical, por las hifas. La gran superficie de corrizadas y controles inoculadas por esporas de hon- de llegar a varios metros. energa y se usa como lea. Pueden alcanzar 4 a 5 m
contacto entre el hongo y la planta permite un rpido in- go patgeno, se aprecia la invasin slo en el caso de en 2 aos
tercambio de nutrientes. races no micorrizadas
clulas de la corteza polisacridos como alimento se usan poco: Hippophae da frutas ri-
colonizadas pelo
La absorcin de fosfatos es entre 2 y 5 veces superior la secrecin de antibiticos frente a los patgenos, el capilar cas en vitamina C y en aceite y suele complementar la
en races micorrizadas, en relacin a controles no infec- desarrollo de una microflora rizosfrica antagnica clula basal de dieta humana
pelo capilar
tados. Los sitios ms activos de absorcin corresponde-
ran a lugares de emergencia de races cortas e infecta- la exudacin de otros metabolitos que inhiben a los hifa Ceanothus y Purshia, como forraje en la alimentacin
infectiva
das. Los fosfatos se desplazaran por los espacios entre patgenos, como terpenos, en concentraciones muy su- hifa de ciervos
endoftica
las hifas del manto fngico, o internamente, por meca- periores a las producidas en races no micorrizadas, se
nismos de difusin. Es probable que todo el fsforo se ha postulado tambin como causa de este fenmeno otras especies poseen uso medicinal, como astringentes,
desplace a expensas del metabolismo fngico, en con- febrfugos, estimulantes o hipnticos: Myrica, Colletia
diciones de baja disponibilidad de fosfatos alrededor de incremento de antagonistas del patgeno entre la
las races. poblacin rizosfrica de la planta micorrizada pero el empleo ms promisorio es sin duda el de la re-
vesculas cuperacin de suelos erosionados, la fijacin de du-
Se han detectado reservas de P, como grnulos de nas y su inclusin en sistemas silvopastoriles ya
polifosfato en vaina e hifas de micorrizas de Pinus. Colonizacin y factores que afectan el desa- que brindan abrigo y sombra a los animales, adems
1a 1b
Algunos hongos ectomicorrcicos son capaces de em- rrollo de ectomicorrizas de brindar N fijado a la pastura asociada
plear fitato (hexafosfato de inositol), que constituye im-
portante fuente de fsforo insoluble en suelos foresta- Se produce a partir de alguna estructura del hongo: Figura 13- Nodulacin en actinorrizas. 1a) clulas de la El empleo del N15 demostr la importancia ecolgica de
corteza radical, 1b) clulas con Frankia estas asociaciones, acelerando sucesiones vegetales en
les. Otras fuentes de P orgnico empleados son: p-ni- micelio, hifas, rizomorfos, esporas, a partir del suelo.
Nodulacin La figura 12 muestra ndulos jvenes de Casuarina y Allo- El reconocimiento del hongo y el hospedante apropia- en la inoculacin de plntulas. Las esporas son fci-
casuarina y ndulos de varios aos donde se aprecia la do es seguido por la colonizacin y la formacin del les de coleccionar a partir de esporocarpos maduros
El ndulo es un rgano compuesto de unidades ele- suberizacin (Duhoux y Nicole, 2004). manto fngico. El desarrollo del hongo en la rizosfera de muchos Gasteromycetes que se colectan en el
mentales llamadas lbulos nodulares, cada uno origi- del hospedante es estimulado por los exudados radi- terreno en la vecindad de rboles bien micorrizados
nado por invasin de frankia en races adventicias. En Formacin de los ndulos: el proceso ha sido ms cales. y se agregan a las macetas regando con un licuado
funcin de variaciones del ambiente, se van formando estudiado con Alnus glutinosa y pueden distinguirse 4 en agua
nuevos lbulos, lo que origina un ndulo muy grande, fases: La fertilidad del suelo y la actividad fotosinttica del
de aspecto coraloide, que se va lignificando. Un ndulo vegetal afectan marcadamente a la micorrizacin. con cultivos puros, desde la dcada del 50 se comen-
a. desarrollo del endofito en la rizosfera
puede persistir durante 5 a 10 aos, en ese caso slo z con xito a inocular con cultivos puros. Los suelos o
los lbulos perifricos son activos b. invasin de pelos capilares Favorecen el proceso: alta actividad fotosinttica y baja los soportes de plntulas se fumigan frecuentemente
o moderada fertilidad para eliminar patgenos y la poblacin nativa, que pue-
Cada lbulo es una raz modificada: su vascularizacin c. formacin de ndulos primarios
de competir con el inculo
es central y como las races adventicias o laterales, se d. formacin de ndulos verdaderos, por ramificaciones Reducen el proceso: bajas intensidades luminosas o
origina en el periciclo (figura 11) (Dommergues et al., dicotmicas de meristemas apicales, dando el aspecto deficiente fotosntesis que afectan el nivel de azcares Las esporas asexuadas desarrolladas en medios de culti-
1999) racimoso caracterstico de estos ndulos y la formacin de nuevas races, altos niveles de N y P vo son tambin un buen inculo, pero los cultivos con mi-
Los lbulos son invadidos, en su corteza, por el micro- en el suelo provocaron disminuciones en el contenido celio se emplean mucho ltimamente ya que ofrecen ma-
simbionte Frankia, que penetra las clulas vegetales y de sacarosa en raicillas de pino y en la susceptibilidad yores garantas.
asegura la fijacin de N2
a b a la infeccin por el hongo ectomicorrtico Pisolithus tinc-
torius. Programas de inoculacin: comienzan con la seleccin
del hongo ectomicorrcico, la que puede realizarse simul-
end 1 Otros factores que inciden en la micorrizacin incluyen la tneamente con un diazotrofo, en leguminosa o en no-
per pe pe temperatura, aireacin, humedad, el nivel de otros nutrien- leguminosa fijadora de N2. Los ensayos para evaluar la
NR tes, que afectan el desarrollo de las races y la propaga- especificidad y eficiencia de la simbiosis se realizan en
4 3 2 4 3 2
cin del hongo, la microflora rizosfrica (sinergismos y plntulas creciendo en tubos con vermiculita/turba, are-
4 3 2 4 3 2 antagonismos). na, con solucin nutritiva. La inoculacin se puede reali-
zar a partir de discos de agar con micelio activo. Los en-
sayos sontinan en invernculo, incluyendo suelo, nive-
a b Prcticas de inoculacin les de fertilizacin, tipos de inculos, etc.
Figura 11- Estructura de ndulos actinorrticos: a) lbulo tipo

c En general, los hongos micorrcicos se incorporan a los La introduccin de especies de Pisolithus en viveros ha
Alnus, b) tipo Myrica y Casuarina, con raz nodular. En ambos cultivos de rboles, en particular de pinos, abetos y otras incrementado significativamente la calidad de plntulas
tipos los vasos son centrales, con endodermis (end), periciclo conferas, as como a plantas ornamentales, cuando s- de pino. El cuadro 2 muestra un ejemplo de inoculacin
(per) y periderma (pe). El parnquima cortical colonizado tas se desarrollan en medios artificiales como vermiculita, en suelos muy erosionados, cerca de minas de cobre, en
presenta 4 zonas:meristemtica (1), de infeccin (2), de arena, etc. en el vivero (Le Tacon, 1997; Marx et al, 1991). el sur de Estados Unidos, pobres en materia orgnica y
fijacin (3) y de senescencia (4). La falta de micorrizacin puede acarrear problemas en el nutrientes minerales. Como se observa se presentan mar-
transplante de estos cultivos, salvo que el suelo contenga cadas diferencias entre los hongos. Las ectomicorrizas
especies ectomicorrcicas. con Pisolithus incrementaron el crecimiento cerca del
Se distinguen dos tipos de ndulos: los de tipo coraloi- 100%, en ambas especies, en relacin a las formadas
de, como los de Alnus donde el meristema nodular cesa Tcnicas de inoculacin (Anexo prctico) por Thelephora, menos adaptado a las condiciones ad-
su actividad una vez que el lbulo se form y los de con suelo o mantillo o trozos de races colonizadas versas del suelo.
tipo Casuarina, Eleagnus, Myrica , en los cuales el me- que se trasladan desde la zona de origen del cultivo, a
ristema del lbulo contina con un desarrollo modifica- los viveros. Esta tcnica es poco especfica y se corre En otras partes del mundo Pisolithus tinctorius responde
do que conduce a la formacin de una raz nodular con Figura 12- Ndulos actinorrticos: a) ndulos jvenes de el riesgo de llevar tambin microorganismos patgenos muy bien en la simbiosis, persiste en el suelo a pesar de la
geotropismo negativo, la cual puede a su vez ser colo- Casuarina glauca, b) ndulo jven de Allocasuarina competencia de los hongos ectomicorrcicos nativos. Nte-
nizada. verticillata, c) ndulo viejo de Casuarina. con esporocarpos, esporas, esclerocios, frescos se que no aparecen los testigos sin inocular ni fertilizar, ya
o secos que se emplean desde hace muchos aos que los pinos son muy dependientes de los hongos y no se
desarrollan en suelos pobres. Considerando la enorme ex- c. reas despobladas o desprovistas del hospedero cin han sustituido esta prctica, llamada tambin azolli- Se piensa que la nodulacin puede ocurrir en gneros
tensin sembrada con especies forestales, se comprende d. suelos y sustratos inertes desinfectados zacin. an no estudiados. Un ejemplo de esto es el descubri-
la importancia de lograr incrementar los rendimientos me- e. en reas donde ocurren los hongos pero se pretende miento de actinorrizas en Trevoa, miembro de Colletieae
diante una correcta seleccin de estos hongos. aumentar la densidad de inculo o introducir organis- y en Datisca glomerata, relacionada a D. cannabina,
mos ms efectivos que los nativos Asociaciones con Frankia spp aunque de distribucin geogrfica muy diferente.
Cuadro 2- Sobrevivencia y desarrollo de
plntulas de pino luego de dos aos Despus de las leguminosas, las plantas actinorrticas
Cuadro 3 - Peso seco y contenido de lignina en constituyen el segundo grupos importante (260 a 280 es- Cuadro 14 Principales especies actinorrticas
Tratamiento altura dimetro vol.plntula Pinus sylvestris micorrizado y no micorrizado pecies) de plantas fijadoras de nitrgeno. Pertenecen a
(cm) tallo (cm) (cm3) unas 10 familias de las Espermatfitas con unos 24 gne- Familia Gneros
pino Virginia con peso seco lignina ros que contribuyen a la economa de este elemento en Betulaceae Alnus (aliso)
Pisolithus 52.3* 1.46* 111.5* (mg) (% de peso seco) zonas erosionales, en suelos pobres, en donde se desa-
inoculado no inoculado no rrollan como vegetacin pionera. Todos los gneros de Casuarinaceae Allocasurina, Casuriana, Gymnostoma,
Thelephora 44.8 1.15 59.3
inoculado inoculado una misma familia no son necesariamente nodulados y Ceuthostoma
pino lobulado con peso seco total 770 354 - -
Pisolithus 48.7* 1.29* 81.0* se encuentran igualmente especies no noduladas en el Coriaceae Coriaria
raz 265 125 30 28 interior de un mismo gnero.
Thelephora 41.3 1.01 42.1 tallos viejos 91 56 35 30
Datiscaceae Datisca
tallos nuevos 108 44 29,5 24,5 Todas las actinorrizas albergan bacterias pertenecien-
* = Diferencia significativa al 5%. Volumen plntula = (di- acculas 305 282 - -
2
metro tallo) x altura. tes a un mismo gnero, un actinomicete simbitico del Eleagnaceae Eleagnus, Hippophae, Shepherdia
gnero Frankia, fijador de N2 que fue confundido prime-
ramente con un hongo, por su carcter filamentoso. Quiz Myricaceae Comptonia, Myrica
Efectos de la inoculacin: incrementos en tamao (altu- Endomicorrizas la primera descripcin de ndulos radicales en estas plan-
Rhamnaceae Ceanothus, Colletia, Discaria,
ra, peso seco de las plantas), diferencias en la anatoma y tas se remonta a 1895 en Alnus glutinosa, cuyo desarro- Kentrothamnus, Retanilla, Trevoa
morfologa de los cultivos, han sido atribuidas a esta sim- Se piensa, dada la abundancia de estas asociaciones, que llo y N en el follaje se correlacionaron con el nmero de
biosis, cambios en la relacin raz/parte area, estructura la presencia de hongos endomicorrcicos en races en con- ndulos. Rosaceae Cercocarpus, Chamaebatia, Cowania, Dryas,
Purshia
de tejidos radicales, longitud de acculas, longevidad de diciones naturales, es una constante, ms que una ex-
races cortas, incremento en el nmero de cloroplastos. cepcin, Han sido reconocidas desde hace ms de 100 Estas asociaciones recibieron diferentes nombres: sim-
Algunas de estas variaciones se atribuyen al incremento aos y se destaca su presencia en fsiles de ms de 300 biosis tipo Alnus, simbiosis con actinomicetes y ms re-
cientemente actinorrizas, por analoga con las micorri- Una minuciosa descripcin sobre el origen en el tiempo
del aporte de nutrientes, pero otras son consecuencia de la millones de aos.
zas (simbiosis con hongos). geolgico de estos vegetales nodulados los ubica en el
actividad del hongo o de fitohormonas que libera.
La mayora de las endomicorrizas poseen caractersticas perodo cuaternario. Actualmente ocurren en reas templa-
comunes: el hongo invade las races desde el suelo, lo que El cuadro 14 presenta las principales especies descrip- das y algunas en la zona circumpolar. Las que se encuen-
El cuadro 3 muestra ligeros aumentos en la lignificacin
implica que debe poseer mecanismos para sobrevivir en l tas. Son frecuentemente especies leosas presentes tran en zonas tropicales, lo hacen slo a altas latitudes, como
de plantas de pino inoculadas (en experimentos con CO214)
o poseer una existencia saproftica (figura 7). Dentro de la al estado espontneo en todos los continentes y cli- Coriaria, en N. Guinea y Per, Cercocarpus, en Mjico y
y del tamao y peso del orden del 44%.
raz, el hongo coloniza las clulas de la corteza, pero no las mas, desde el rtico al subtropical. Son, sin embargo Alnus, en Per. La excepcin la constituye Casuarina, que
de la endodermis y los vasos, los que no presentan cam- ms frecuentes como rboles o arbustos que juegan se extiende en zonas costeras tropicales del Ocano Pac-
Resumiendo: se reconoce la importancia de estas aso-
bios morfolgicos (Barea et al., 1991). importante rol en la economa del nitrgeno en bos- fico y del Indico. Esta distribucin contrasta con la de las
ciaciones en el desarrollo de especies arbreas, sobre
ques de zona templada fra. Su distribucin es menor leguminosas (tropical y templada clida).
todo en suelos de baja fertilidad. El endosimbionte movili-
za nutrientes desde el suelo hacia el hospedante. La ino- Se distinguen dos tipos de endomicorrizas: en la regin tropical. Estas plantas son escasamente
mencionadas en los textos bsicos de biologa o eco- El conocimiento de especies actinorrticas se incremen-
culacin con especies fngicas correctamente seleccio-
aquellas con hongos tabicados pueden subdividirse loga, a pesar de que son importantes componentes tar seguramente en los prximos aos, con la contri-
nadas ofrece una interesante perspectiva en el manejo
en las de las Ericaceae y familias relacionadas y las de ecosistemas de vastas regiones y muchas de ellas bucin de botnicos, fisilogos vegetales, ingenieros
de cultivos forestales en:
presentes en las Orchidaceae muy empleadas en forestacin. Esta vegetacin es to- forestales. Se observa un rpido desarrollo de los es-
lerante a suelos de baja fertilidad, como dunas areno- tudios sobre estas asociaciones dado su contribucin
a. cultivos exticos
las que albergan hongos no tabicados: Zygomycoti- sas, zonas quemadas, suelos erosionados y muchas a la economa del nitrgeno en dunas y suelos muy
b. suelos degradados por la erosin, mineralizacin o por
na. Constituyen un grupo heterogneo, incluyen plan- resisten la salinidad. pobres.
construcciones civiles
tas de muy variada taxonoma y se conocieron como Han sido descriptas en cultivos muy variados, como maz,
a b c micorrizas vesculo-arbusculares (V-A), hoy mejor man, trigo, citrus, manzanos, papas, porotos, soja, caf,
definidas como arbusculares (A), ya que las vesculas caa de azcar, hasta plantas silvestres, rboles como
pueden o no estar presentes y son las que han recibido roble, fresno y plantas herbceas, en variadas zonas eco-
mayor atencin en los ltimos tiempos. lgicas. Generalmente slo estn ausentes en suelos muy
hmedos, en plantas sumergidas. Son ms abundantes
Es realmente importante el volumen de publicaciones so- en suelos de baja fertilidad, como todos los tipos de mico-
bre este tema desde la dcada del 70 y distintas ramas rrizas, y algunas prcticas agrcolas, como la fertilizacin,
del conocimiento se sienten atrados por estas asociacio- pueden disminuir su incidencia.
nes en las cuales el hongo y la planta obtienen mutuos
beneficios. Como la morfologa de las races cambia muy poco, pa-
saron mucho tiempo inadvertidas y adems la dificultad
Micorrizas arbusculares (MA) del endofito para desarrollarse en medio de cultivo,
Estas asociaciones son las ms numerosas, las presen- limit los estudios.
tan la mayora de las fanergamas, de lo que se deduce
el enorme potencial econmico que puede derivarse de Vasos del floema Vasos del xilema
un correcto manejo de ellas en suelos de baja fertilidad. Hifas externas
d e
Los estudios se han incrementado mucho en los ltimos
aos y se trata de seleccionar las mejores combinacio- Vesculas Clamidospora
nes planta-hongo con el objeto de inocular cultivos de Hifas internas
Pelo radical
inters. En las leguminosas se tienden a usar inoculan-
tes dobles, con rhizobio y esporas del hongo endomico-
rrcico. Arbsculo
Los hospedantes se encuentran distribuidos en las princi- Esporocarpo

pales familias cultivadas, las gramneas y leguminosas.
Muy pocas de las familias examinadas carecen de endo- Clula epidrmica
Clula cortical
micorrizas MA. Se piensa que Ericaceae, Orquidaceae y
ciertas familias tpicamente ectomicorrcicas como Pina-
Figura 10- La simbiosis Azolla-Anabaena. a) Morfologa de hojas de Azolla, b) Racimo de hojas de Azolla, c) Poros con Anabaena ceae y Betulaceae, carecen de micorrizas arbusculares. Figura 7- Esquema de una micorriza arbuscular (MA)
luego de accin de pectinasas, d) Anabaena: h= heterocisto, c= clula vegetativa, e) heterocisto de Nostoc con gruesa pared de
varias capas (flecha) y la pared externa muscilaginosa, menos densa (*).
Cuadro 4 - Sistemtica de Zygomycotina micorrcicos y tipo de micorrizas formadas
una capacidad limitada para almacenar nitrgeno como el 20 y 30% de clulas de la cianobacteria y estn rodea-
ficocianina dos de gruesas paredes (figura 10: a, b, c y d Franche et Orden Suborden Familia Gnero Micorriza
al., 1998; e, Selosse, 1996). En el filamento ocurre foto-
Glomales Glominae Glomaceae Glomus A
Azolla sntesis y en los heterocistos, que carecen de fotosistema
II, se expresa la nitrogenasa. Sclerocystis A
La simbiosis Azolla-Anabaena es ecolgicamente la ms
importante, muy abundante en aguas calmas templadas Acaulosporaceae Acaulospora A
y tropicales. La cianobacteria se encuentra en poros ubi- Azolla se usa como biofertilizante en vastas regiones de Entrophospora A
cados en cara ventral de las hojas, que se cierran en ho- Asia, Africa, como abono verde. Se cultiva en estanques
jas maduras. Se han contado hasta 2.000 a 5.000 clulas y luego se libera con el agua que inunda el arroz. La ino- Gigasporinae Gigasporaceae Gigaspora A
de Anabaena azollae en una sola cavidad. La fijacin del culacin puede aumentar los rendimientos entre un 30 y Scutellospora A
N2 tiene lugar en los heterocistos que representan entre 50%. La agricultura cada vez ms intensiva y la fertiliza-
Endogonales Endogonaceae Endogone A, EC
El endofito dos de races micorrizadas no ofrece las mismas garan- Estudios posteriores mostraron que estos especmenes bargo, muchas de ellas establecen asociaciones simbiti-
tas. La inoculacin con esporas desinfectadas mostr estaban incorrectamente identificados y que pertenecen en cas variadas, con hongos, en los lquenes, con hepticas,
Los hongos son no-tabicados, se los ubica entre los que el rango de hospedantes para la mayora de los ais- realidad al gnero Parasponia, sobre todo P. rugosa. Pa- musgos, con el helecho acutico Azolla y una angiosper-
Zygomycotina, del orden Glomales (familias Glomaceae, lamientos estudiados es amplio, hecho que contradice rasponia es nativa del sudeste asitico, son rboles de ma, Gunnera.
Acaulosporaceae y Gigasporaceae) y Endogonales (fa- la incapacidad del hongo para desarrollarse fuera del hasta unos 15 m, pioneros en suelos de montaa de Mala-
milias Gigasporaceae y Endogonaceae) (cuadro 4). No hospedante. sia, Indonesia y Nueva Guinea. Tres especies presentan Cycas
se les conoce estado sexual (Honrubia et al., 1994). ndulos: P. rugosa, P. parviflora y P. andersonii, empleadas Las Cycadales son consideradas gimnospermas primiti-
Ciclo de vida de un hongo que forma micorrizas desde muy antiguo como abono verde en Java. El endo- vas, reliquias de una flora tropical muy antigua: su origen
Como estos hongos no han logrado crecer en medios de arbusculares simbionte se identific como Bradyrhizobium spp de creci- se ubica en los perodos Trisico, Jursico y Cretceo. Se
cultivo la taxonoma se basa en caractersticas de las es- Es necesario efectuar observaciones al microscopio de miento lento, el ms promiscuo y tal vez el ms antiguo de piensa que jugaron importante rol en el ciclo del nitrgeno
poras (figura 8), que se colectan de suelo rizosfrico por cortes coloreados de races colonizadas, previamente tra- los rhizobios, que inocula cruzado con Vigna unguiculata. de esas pocas. De las 90 especies actuales (9 gneros),
tcnicas de tamizado hmedo y decantacin. El em- tados con KOH a los efectos de clarificar las clulas, eli- Los ndulos de Parasponia fijan nitrgeno en rangos com- slo algunas, como Macrozamia, se desarrollan en Aus-
pleo de gradientes de sacarosa ayuda a separar las es- minando polmeros de la pared ya que las races no per- parables a los ndulos perennes de otras no leguminosas. tralia a un nivel suficiente como para intervenir activamente
poras de partculas inertes, huevos de insectos, etc. Se miten visualizar estructuras internas. Las hifas del hongo en el ciclo del nitrgeno. No han sido muy estudiadas y
emplean combinaciones de tcnicas (Anexo prctico). El penetran desde el suelo y se presentan tanto inter como Diferencias con ndulos de las leguminosas: muchos aspectos relativos al proceso de infeccin y a la
empleo de sondas moleculares ha permitido la identifica- intracelularmente, en la corteza. La endodermis, meriste- el rhizobio se encuentra preferencialmente dentro de un naturaleza de la especificidad hospedante-endofito, no han
cin del microsimbionte y ha contribuido mucho en los ma y vasos no son colonizados. Se coloniza la zona api- cordn de infeccin altamente ramificado y pocas bac- sido aclarados.
estudios de inoculacin. cal de races jvenes. terias se liberan de l y se diferencian en bacteroi-
des. En las leguminosas, la mayora de los rhizobios se Desarrollo y estructura de los ndulos: se parecen
Se distinguen varias fases (figura 9, Duhoux y Nicole, transforman en bacteroides superficialmente a los de no-leguminosas angiospermas,
2004) pero su formacin y estructura varan. Se originan a par-
los ndulos de Parasponia no poseen leghemoglobi- tir de races especializadas, llamadas coraloides, que
Raz Suelo na, lo que muestra claramente que tanto la formacin presentan estructuras del tipo nodular an antes de ser
de bacteroides como la sntesis de leghemoglobina, es- colonizadas por la cianobacteria, inducidas posiblemen-
1 tn determinados por el hospedante. La masa coraloi- te por bacterias. Los ndulos se inician en la raz em-
de puede alcanzar tamaos de hasta 6 cm de dimetro brional y el hipoctilo y recin luego de su emergencia
2 y se parecen ms a los ndulos actinorrticos de Coria- son infectados por cianobacterias heterocsticas de los
ria o Datisca que a los de las leguminosas gneros Nostoc y Anabaena, por rupturas de los estra-
tos superficiales.
la zona infectada suele presentar forma de herradura,
donde coexisten clulas hipertrofiadas, con la bacteria Las races coraloides se desarrollan en forma de grandes
Figura 8- Espora del hongo Gigaspora y clulas menores, libres de endofito. Pueden presen- racimos y pierden su caracterstico geotropismo negati-
tarse capas con clulas oscuras, posiblemente con com- vo. Las races no infectadas permanecen pequeas y
puestos polifenoles y taninos mueren en el correr del ao. Todos los aislamientos mos-
Glomus puede presentar esporocarpos o no con clami- traron capacidad para fijar N2.
dosporas generalmente terminales en una hifa indiferen- Parasponia, como Casuarina y rboles leguminosos cre-
ciada, las de Sclerocystis se ubican dentro de esporocar- cen rpidamente en suelos vrgenes del sudeste de Asia y En Argentina se describi nodulacin en ejemplares de
pos, en capa simple. Gigaspora posee azigosporas en juegan importante papel en la reforestacin de suelos ero- Cyca revoluta cultivada en parques y jardines. La fijacin
extremo de clula alargada en una hifa que se proyecta sionados, donde son empleados desde muy antiguamente. en cultivos de Cycas spp. y Macrozamia spp se realiza
hacia la espora y Acaulospora no forma esporocarpo y las tanto en aerobiosis como en anaerobiosis. Los productos
esporas estn ubicadas en hifas prximas a una vescula de la fijacin son transportados al hospedante y se piensa
de gran tamao. Simbiosis con ndulos con Nostoc y Anabae- que gran parte es exudado por el endosimbionte, a dife-
3 4 na (cianobacterias) rencia de lo que ocurre con la cinobacterias en vida libre.
Con estas esporas es posible realizar ensayos de snte- Las causas de mayor exudacin podran deberse a:
sis de endomicorrizas y probar la eficiencia de distintas Las cianobacterias por su doble aptitud de fotosintetizar y
combinaciones planta-endofito. El empleo de macera- Figura 9- Ciclo de un hongo endomicorrcico de fijar N2, son especies tpicamente pioneras. Sin em- mayor actividad nitrogensica del endosimbionte
biocontrol o sus genes, que puedan mantenerse luego El cuadro 14 resume algunos datos histricos en el uso Germinacin de las esporas y crecimiento de las hi- una latencia inicial atribuida al desarrollo de las pln-
de la aplicacin al suelo. Se pueden construir microor- de los microorganismos como agentes promotores del fas: las esporas plurinucleadas germinan en el suelo o tulas y germinacin de esporas, el crecimiento del tubo
ganismos rizosfricos competentes mediante ingeniera crecimiento vegetal. in-vitro, se forma un tubo germinativo cenoctico. El hon- de germinacin y la colonizacin (20-25 das)
gentica, desarrollados a gran escala y que pueden ser go responde a exudados radicales aumentando signifi-
aplicados a partes vegetales subterrneas en ambien- cativamente el crecimiento de los filamentos y las rami- intenso desarrollo de la micorriza, de unos 30 das,
tes conductivos para su establecimiento, crecimiento y Cuadro 14- Breve historia del uso de ficaciones. Se ste no se encuentra con una raz com- coincide con crecimiento de la parte area y del micelio
dispersin. microorganismos como promotores del patible, el crecimiento se detiene. externo, facilitando las colonizaciones
crecimiento vegetal
Si los procedimientos anteriores no son eficientes, se pro- Entrada a la raz: en la proximidad de una raz compa- fase de equilibrio, donde la proporcin de races mico-
cede a la inoculacin de semillas repetidamente con cada * 1958 ex URSS inoculacin de 10 7 ha con A. chroococcum tible, el crecimiento del tubo germinativo es estimulado rrizadas y no micorrizadas permanece constante, coin-
cultivo. y B. megaterium var. phosphaticum (bajos incrementos) por variados factores, como CO2, exudados, etc. y las cide con la etapa de fructificacin del hospedante y con-
* 1974 se preparan y comercializan inoculantes en pequea ramificaciones sucesivas penetran en la raz. Se ob- tina hasta la senectud.
Si bien la tendencia es la seleccin, produccin y patenta- escala en varios pases servan estructuras especializadas llamadas apresorios,
miento de un solo microorganismo por producto comer- englobamientos redondeados de hifas, cuya pared im- Las endomicorrizas colaboran con la nutricin del vegetal
* 1978 resultados favorables con Pseudomonas (se mantie-
cial, la mezcla de microorganismos puede resultar ms pregnada de melanina se espesa y asegura una pre- durante el perodo de mximo desarrollo.
nen y desarrollan en la rizosfera) Kloeper y Schroth: uso
eficaz, ya que simulan la microflora natural que acta en de la sigla PGPR
sin osmtica elevada. Los apresorios se forman por
la supresin de una enfermedad. Se usan inoculantes con _
molculas liberadas por el hospedero. Los filamentos Las estructuras fngicas caractersticas son (figura 10)
rhizobio y/o hongos micorrcicos que estn acompaados * 1986 Schipers obtiene mutante sid (Tn5) de P. fluores- se propagan en la exodermis y el parnquima cortical,
de algn microorganismo de biocontrol, como Pseudomo- cens WCS 358 que no promueve crecimiento de papas sin llegar nunca a la endodermis. Hidrolasas degradan Los arbsculos que se forman por repetidas divisiones
en campo, si lo hace su recombinante sid+ dicotmicas de una hifa, presentan el aspecto arbores-
nas, Bacillus, etc. la pared de la planta provocando la progresin del fila-
* Se incrementan los trabajos en bacterias: P. fluorescens, mento fngico, bajo el efecto de una presin hidrostti- cente caracterstico, llamados tambin haustorios o apre-
El uso masivo de estos productos depende de los cos- P. putida. Bacillus, Azospirillum, hongos: Thrichoderma, ca elevada. sorios, con gran superficie de intercambio con el hospe-
tos de produccin, de la estabilidad gentica de los Penicillum, Cladosporium, Gliocladium dante y es a este nivel que se realizan la transferencia de
agentes empleados, de su eficacia en varios ecosiste- Colonizacin radical: en el desarrollo del hongo sim- nutrientes (C, P, etc.). Presentan viabilidad slo por algu-
* 1993 mercado agroqumicos en el mundo U$S 12.106,
mas. agentes biolgicos 1% (120 millones de dlares), 92% bitico, aparecen las estructuras tpicas de estas aso- nos das, son digeridos por la planta y su formacin reco-
corresponde a Bt (Bacillus thuringensis). ciaciones, los arbsculos y las vesculas. mienza.
El cuadro 13 presenta resultados de aplicacin de tcni-
cas de control integrado en el caso de podredumbre blan- Desarrollo de hifas externas: la colonizacin se Las ramificaciones de los arbsculos estn limitados por
ca causada por Sclerotium cepivorum, con un fungicida completa por activo desarrollo de hifas extraradica- una membrana periarbuscular de origen vegetal que ro-
(Iprodione) y un antagonista Trichoderma harzianum. Se Bibliografa les, muy ramificadas y finas que estn involucradas dea la pared fngica muy fina y acompaa a la hifa. Esta
aprecia el efecto benfico de ambas cepas de pseudomo- en la nutricin mineral del hongo. Constituyen una membrana presenta modificaciones funcionales importan-
nas y la ventaja de aplicar control integrado. Sin embar- Campbell, R. Biological Control of Soil-Borne Diseases. nueva estructura funcional en la nutricin mineral de tes: se ha detectado actividad ATPasa muy activa, ausen-
go, frente a los desafos de mantener el ambiente libre de En: Brighton Crop Protection Conference- Pests la planta (N, P). te en races no micorrizadas,que podra estar implicada
biocidas, la eleccin parece inclinarse por el uso de los and Diseases, 1990, Brighton, Section 7A-2 en el transporte a travs de la membrana en esta simbio-
agentes biolgicos. Fulchieri, M. Produccin de giberelinas por Azospirillum Resumiendo: el hongo endomicorrcico presenta dos tisis (fosfatos hacia la planta).
spp. y efecto de la inoculacin sobre el contenido de pos de hifas: las de infeccin con crecimiento centrpeto
Cuadro 13- Control integrado giberelinas en la raz y la promocin del crecimiento en relacin a la raz y las hifas extraradicales, de creci- Las vesculas son estructuras de gruesas paredes, que
en maz (Zea mays, L). 1992, Tesis Doctor en Cien- miento centrfugo. El aporte de esqueletos carbonados por se desarrollan en extremos de hifas inter o intracelular-
Tratamiento % de infeccin cias Biolgicas de la Universidad Nacional de Ro Cuar- parte de la planta asegura el equilibrio de esta simbiosis. mente, a medida que la infeccin progresa, aunque se
to, 170 pp las ha descripto en etapas tempranas de la colonizacin.
Ninguno 74 La ltima etapa se caracteriza por la degradacin de Se encuentran en general en las capas superficiales de
Graham, J.H. Y Mitchell, D. J. Biological Control of Soil-
Iprodine 51 los arbsculos, la clula colonizada retoma la estruc- la raz y funcionan como rganos de almacenamiento
borne Plant Pathogens and Nematodes. En: Princi-
T. harzianum cepa T 18 tura habitual. de grasas, aceite y colaboran en la propagacin del en-
ples and Applications of Soil Microbiology, 1998,
T. harzianum ipro 25M 13 dofito. El hongo determina su formacin y morfologa.
(eds) Sylvia, Fuhrmann, Hartel y Zuberer, Prentice Hall,
Iprodione + T.h cepa ipro 25M 6 Se reconocen tres fases en el desarrollo de las endomi- Algunos hongos como Gigaspora y Scutellospora no las
Ney Jersey: 427-446
corrizas forman.
MA, observando segmentos de 1 cm a intervalos regula- tivo de hongos con fines de aplicacin masivas, pero no plagas. Goult (1990) y Campbell (1990) sealan algu-
res. Esta longitud puede llegar a un tercio del total en mu- se adaptan bien a las fermentaciones usuales en medio nas de las lneas futuras de investigacin en el tema (cua-
chas plantas cultivadas y superar 70-80% (Honrubia et lquido. Tambin se estn aplicando soportes orgnicos dro 12).
al., 1994; Sieverding y Barea, 1991), en plantas inocula- del tipo alginato de sodio, que encapsulan propgalos de
das, en vivero. hongos y de Frankia, as como bacterias (rhizobios, pseu-
domonas) en soluciones acuosas de compuestos que for- Cuadro 12- Investigaciones necesarias en el tema
man geles (mezclas de alginato de sodio y cloruro de cal- de control biolgico
Ecologa cio), ofrecen la facilidad de mantener viables a los incu-
los y de ocupar pequeos volmenes al secarse. En el * Dilucidacin de los mecanismos involucrados en diferen-
Muchos son los factores que afectan la formacin y desa- momento de uso, estos cristales de alginato de calcio, se tes tipos de suelos
rrollo de las micorrizas MA. La fotosntesis es uno de los disuelven con un buffer adecuado que se usa como ino- * Identificacin de parmetros ambientales que afectan la
ms importantes, pero el manejo de los cultivos (fertiliza- culante (Anexo prctico). colonizacin radical
cin, biocidas, rotaciones), la abundancia de inculo en
* Desarrollo de procedimientos ms eficientes de seleccin
los suelos, la susceptibilidad de la planta, las condiciones Cuadro 11- Consideraciones en el empleo de de cepas y de formulacin de productos comerciales
de temperatura, humedad, pH, estacin del ao, afecta- tcnicas de control biolgico
rn el grado y la eficiencia de la asociacin. * Identificacin de los genes que codifican produccin de
* Los agentes de control biolgico presentan un espectro siderforos, de antibiticos y los que permiten la coloniza-
estrecho, no slo en trminos de hospedante, sino del cin de las races
Fotosntesis: con CO2 marcado se demostr la transfe-
rencia de compuestos carbonados hacia el hongo. Som- ambiente, incluido el pH, tipo de suelo, humedad, tempe- * Lograr avances en la modificacin gentica de cepas para
breado o corte de la parte area afectan la micorrizacin. ratura. producir agentes superiores de biocontrol, con mayor ran-
El efecto estacional incide en la colonizacin, sta aumenta * Considerar los costos de seleccin, produccin y formula- go de hospedantes y suelos a ser aplicados
en la estacin de activo crecimiento vegetal. cin de los inoculantes
* Considerar que efectos de laboratorio muchas veces no se
La incidencia de la micorrizacin es mayor cuando la acti- reproducen en el campo y se necesitan numerosas expe-
Alternativas a la inoculacin
vidad biolgica del cultivo es ms intensa, con preponde- riencias antes de poder recomendar un agente biolgico Muchas prcticas de manejo conducen al control de mi-
rancia de arbsculos, responsables de los intercambios croorganismos fitopatgenos por estimulacin de la mi-
* Emplear el producto en el sitio de accin (semilla, suelo) croflora antagonista naturalmente presente, a veces en
nutritivos con el hospedante. Las hifas y esporas contri- resulta crtico, sobretodo en ausencia de movimientos de
buyen a la propagacin del endofito y las vesculas alma- bajo nivel, en los suelos. Algunos ejemplos de estas prc-
agua
cenan nutrientes que el hongo moviliza en condiciones ticas incluyen:
adversas. * Los ms efectivos agentes de control biolgico son aque-
llos que poseen un nicho que pueden colonizar rpida- rotaciones de cultivos: el patgeno al no encontrar la
Figura 10- Estructuras de hongos endomicorrcicos: esporas, mente y sin competencia de la poblacin indgena rizosfera de la planta sensible (determinada por la natura-
Otros factores del ambiente, como la luz y la temperatu-
vesculas y arbsculos.
ra, afectan el desarrollo del hospedante y por ende la dis- * Lograr buen desarrollo en medios simples de laboratorio, leza de exudados) germina y muere al no poder competir
ponibilidad de nutrientes para el hongo. Existe correla- de bajo costo, asi como formulaciones sencillas que ase- con la poblacin nativa por los nutrientes, espacio, etc.
Las hifas que se desarrollan dentro de la raz estn co- cin entre grado de colonizacin y nivel de hidratos de guren viabilidad por perodos de tiempo que permitan su
nectadas a un fino micelio que se extiende en el suelo carbono en jvenes plntulas. distribucin. incorporacin de enmiendas orgnicas, como pajas,
vecino. Los pices radicales no se presentan frecuente- abonos verdes, que provocan una eclosin microbiana
mente colonizados, como tampoco las races gruesas La temperatura del suelo parece afectar ms la actividad en respuesta a los nutrientes aportados por el residuo
fisiolgica de la micorriza que su desarrollo La produccin de inculos en fermentadores y su adicin orgnico. En esta poblacin estimulada se encuentran
Las esporas presentes en las clulas colonizadas y en el a turba (como en el caso de rhizobios) parece ser otra antagonistas que por los mecanismos sealados en
suelo vecino. Su morfologa permite la caracterizacin de alternativa para estos inoculantes.
La aireacin: la escasa colonizacin en suelos inunda- este captulo (antibiosis, competencia, predacin, para-
especies (Schenck y Prez, 1988) luego de trabajoso pro-
dos est relacionada a la falta de oxgeno sitismo), logran disminuir o eliminar a la poblacin dele-
cedimiento de aislamiento a partir se suelo rizosfrico por Finalmente: se piensa que a pesar del trabajo de selec- trea o patgena.
tamizado hmedo (Anexo prctico). cin, propagacin y evaluacin de efectos de los inocu-
La fertilizacin afecta el establecimiento del hongo. La
Se suele determinar la longitud de la raz con alguna de inhibicin por fosfatos solubles ha sido bien documenta- lantes biolgicos, su menor impacto en el ambiente los Cuando los antagonistas nativos son escasos o inade-
las estructuras de los hongos que forman micorrizas tipo da: cuando la concentracin de P en los tejidos vegeta- convierte en alternativas promisorias en la lucha contra cuados, se pueden introducir agentes seleccionados de
ser degradadas tanto por aislamientos de Serratia mar- los cuales los agentes de control biolgico representan les se vuelve muy alta, la morfologa del hongo cambia la respuesta a la micorrizacin est inversamente correla-
cescens como por extractos acelulares de la misma cepa slo un 1% (120 millones). Pero de stos, un 92% corres- drsticamente y eventualmente muere. Los fertilizantes cionada con el contenido de P lbil del suelo.
con actividad quitinoltica. La adicin de quitina al suelo ponde a preparaciones secas de Bacillus thuringensis (Bt) nitrogenados tambin afectan a esa simbiosis, pero no
incrementa el nmero de bacterias y actinomicetes, mu- que sintetizan cristales de protenas txicas en cultivos existe acuerdo sobre los mecanismos involucrados. Se Absorcin de P por las hifas El P32 se acumula en
chos de ellos inducen quitinasa afectando a la poblacin esporulados y son empleados como poderosos insecti- especula sobre la teora de los hidratos te carbono de estructuras fngicas, a partir de la fraccin soluble, en
fngica. cidas (figura 5). Bjrkman: el nitrgeno, al incrementar la sntesis de pro- ensayos de corta duracin. La fraccin asimilable o
tenas, disminuira el aporte de azcares que estimulan intercambiable de fosfato representa slo entre el 1 y
* eliminacin de microorganismos deletreos de la ri- El resto est integrado por una mezcla de productos la colonizacin endomicorrcica. En condiciones natura- el 5% del contenido total de P en los suelos. Los hon-
zosfera: estos organismos inhiben el crecimiento vegetal menores. les, se observa variacin en la sensibilidad de los distin- gos MA, al mismo tiempo que incrementan la capaci-
por produccin de metabolitos txicos, pero sin llegar a tos endofitos frente al nitrgeno. dad de absorcin de fosfato asimilable, pueden tam-
parasitar. Shippers et al, 1987) sugieren que uno de los bin solubilizar fuentes no disponibles o escasamente
principales grupos de bacterias deletreas son las pseu- Los pesticidas tambin afectan al proceso: muchos fun- disponibles. Las plantas micorrizadas responden al
domonas productoras de HCN. Como el hierro es nece- gicidas e insecticidas han sido referidos como inhibido- agregado de fuentes insolubles de P como fosfato de
sario para la produccin de HCN por estos microorganis- res. Es necesario tener en cuenta estos efectos en las roca, hidroxiapatita.
mos, tambin sugieren que los microorganismos del in- prcticas de inoculacin.
culo ejercen su efecto benfico compitiendo con ellos por Translocacin de P a lo largo de las hifas. Las hifas
el hierro. Las interacciones con otros microorganismos del suelo acumulan grandes cantidades de P que podra interfe-
afectan la germinacin y crecimiento de esporas de hon- rir en el metabolismo celular, lo que se evita por su
* generar resistencia inducida en plantas sensibles: gos que forman micorrizas MA: rpida conversin en polifosfato, osmticamente in-
se ha observado que cepas no patognicas de un hongo activo. Los grnulos, contenidos en vacuolas que pue-
patgeno prevn la infeccin por la cepa patgena. Se La inoculacin con esporas de hongos endomicorrcicos den representar entre un 16 y 40% del total de P en
explica este fenmeno por competencia entre ambas ce- y rhizobios ha tenido xito en la implantacin y rendimien- estos hongos, se evidencian en el microscopio electr-
pas por nichos ecolgicos similares en el suelo. tos de leguminosas: los rhizobios favoreceran la micorri- nico. La translocacin tiene lugar por corrientes cito-
zacin por la produccin de polisacridos y de poligalac- plasmticas rpidas. Los hongos poseen las enzimas
* inhibicin de la germinacin y crecimiento de hongos touronasa en el sitio de infeccin. Otras enzimas, como necesarias para la sntesis y degradacin de los poli-
por compuestos voltiles de la atmsfera del suelo, como Figura 5- Bacillus thuringensis, bioinsecticida (Bt). Ntese el las pectinolticas, producidas por bacterias del suelo, fa- fosfatos, asi como fosfatasas, cuyo nivel disminuye con
el etileno, amonio, ha sido ocasionalmente observado. cristal proteico oscuro vecino a la espora vorecen tambin la micorrizacin (proceso relacionado en la fertilizacin fosfatada.
gran parte a la produccin de enzimas, ya que los hongos
* aumento de la disponibilidad de nutrientes y pro- no parecen entrar por heridas). Transferencia de P a la planta. La interfase entre ambos
duccin de sustancias del tipo de las fitohormonas, Para este autor es necesario tener en cuenta una serie de facilita los intercambios, se ha referido un incremento en
como el AIA, giberelinas, citoquininas, que ha sido verifi- consideraciones para lograr competir con los agentes qu- Se apreci que el cultivo respondi positivamente a la la permeabilidad de la membrana de la hifa inducida por
cada en cultivos microbianos, se postula como causa de micos de control (cuadro 11). accin conjunta de rhizobio y endomicorriza MA, en pre- el hospedero, la transferencia de fosfatos estara acopla-
control de enfermedades. El cultivo se desarrolla ms tem- sencia de fosfato de roca, incrementando su peso seco da de alguna manera a la transferencia de carbohidratos
pranamente y su poblacin rizosfrica puede competir con y nodulacin. La inoculacin conjunta permiti un apro- desde el mismo.
el patgeno. Limitaciones para la comercializacin de ino- vechamiento ms eficiente y rpido del fertilizante fosfa-
culantes para biocontrol tado. Otros beneficios:
* numerosos minerales son absorbidos en mayor grado
Desarrollo de agentes para el control Los obstculos principales en el biocontrol por adicin al por plantas micorrizadas con hongos tipo MA, pero no
biolgico suelo o a las semillas de antagonistas de plagas lo cons- Beneficios mutuos existen referencias sobre absorcin incrementada de
tituye el escaso desarrollo de tcnicas de cultivo de gran iones mviles en el suelo, como los nitratos. La toma de
A pesar de los mltiples ejemplos publicados en los lti- volumen de biomasa microbiana y la introduccin de mi- Beneficios para la planta agua parecera estar incrementada y la resistencia a
mos aos sobre el xito en la aplicacin de organismos croorganismos en sistemas de produccin en forma se- En general cultivos creciendo en suelos deficientes en P condiciones de sequedad se atribuye a la capacidad de
para el control biolgico de enfermedades de races, ha gura y de bajo costo. responden rpidamente a la inoculacin y en las primeras la planta micorrizada para mantener un adecuado nivel
habido escaso desarrollo de formulaciones comerciales. semanas ya se aprecian diferencias en el desarrollo de de fsforo ya que la baja humedad disminuye la movili-
Powell (1993) seala que el mercado de agroqumicos en Se han empleado medios slidos como arcillas expandi- plntulas inoculadas y a los pocos das se visualizan los dad de los iones fosfato, ms que a un efecto directo
el mundo es de cerca de 12 mil millones de dlares, de das, residuos de cereales, granos de cebada, para el cul- arbsculos intracelulares. En general, se encuentra que sobre la absorcin del agua.
* detoxificacin del medio: remocin de inhibidores, pre- ta. Los arbsculos son el sitio de intercambio carbonado Micoparasitismo te, aunque las tcnicas de manipulacin gentica en hon-
sentes en el suelo o producidos por los mtodos de es- entre ambos simbiontes, donde se regula la hidrlisis de la gos han prosperado menos que en bacterias. La mutag-
terilizacin, ejemplo, metales pesados sacarosa de la fotosntesis, por estimulacin de la inverta- El empleo de hongos como agentes de biocontrol se ha nesis en hongos es un proceso bastante inespecfico y se
sa de la planta como consecuencia de la acidificacin de la extendido mucho en los ltimos aos y la literatura es muy han realizado avances con la fusin de protoplastos a los
* produccin de sustancias biticas, solubles en agua interfase del arbsculo. amplia sobre resultados de antagonismo de patgenos, efectos de lograr la transferencia de caracteres de inters
o voltiles, como aminocidos, vitaminas, fitohormonas sobretodo de otros hongos (Howell, 1990). El grupo de asociados al biocontrol de una cepa de hongo a otra.
Hyphomycetes ms empleado en el control biolgico lo
* cambios en el pH, como en el caso de los solubilizado- Inoculacin integran los gneros: Verticillium, Trichoderma y Gliocla-
res de fosfatos (captulo 12) dium, los 3 son micoparsitos necrotrficos (matan inme-
La principal limitante en la inoculacin de plantines con diatamente del contacto con el hospedante) y buenos
* produccin de fitohormonas, como lo hacen bacterias hongos endomicorrcicos es la incapacidad de desarro- saprofitas que crecen en medios corrientes de laborato-
y otros organismos del suelo. Su balance resulta de fun- llarse en cultivo puro en medios de laboratorio, por lo rio. V. biguttatum se encuentra en asociacin con esclero-
damental importancia en la regulacin del crecimiento que no se cuenta al presente con inoculante a base de cios de Rhizoctonia solani y se usa en el tratamiento de
vegetal micelio. semillas de papa, donde reduce significativamente el n-
mero de esclerocios patgenos en los nuevos tubrculos.
Las clulas de la corteza colonizadas con hongos que for- Existen, sin embargo, numerosas publicaciones sobre
man MA incrementan las mitocondrias, retculo endoplas- efectos en los rendimientos de varios cultivos luego de El gnero Trichoderma contiene numerosas especies
mtico, clorofila, respiracin, tamao del ncleo y dismi- la inoculacin con Endogonaceae, sobre todo a nivel ex- usadas en el control biolgico seleccionadas por su capa-
nuyen su contenido en almidn y la invasin por hongos perimental. La inoculacin es promisoria en el caso de cidad de micoparasitar a otros hongos. T. harzianum es la
patgenos. plantas de valor econmico: ornamentales y micropro- especie ms empleada y el rango de especies sensibles
pagadas (citrus, caf, etc.). No se puede pensar por el incluye: Sclerotium rolfsii, Rhizoctonia solani, Phytium
Los hongos micorrcicos tanto ecto como endomicorrci- momento su uso en cultivos extensivos. Para que la aphanidermatum, Alternaria raphani, Fusarium roseum,
cos, pueden contribuir entonces a: inoculacin sea exitosa se deben reunir una serie de con- patgenos de muchos cultivos, como trigo, algodn. El
diciones: ataque se realiza envolviendo y penetrando a las hifas y
la mineralizacin de P orgnico por actividad de fos- estructuras de resistencia (figura 4)(Graham y Mitchell,
fatasas localizadas en arbsculos maduros e hifas inter- ausencia o bajo potencial de inculo de hongos en- 1998). La entrada se logra por orificios en la pared me-
celulares y domicorrcicos nativos diante la produccin de enzimas como 1-3 glucanasa y
quitinasa. El reconocimiento de las hifas est mediado
la solubilizacin de P insoluble (fosfato triclcico, hi- alta competencia del inculo en caso de que la pobla- por lectinas.
droxiapatita, polvo de roca) mediante la produccin de cin nativa sea alta y gran capacidad para estimular la
cidos. La seleccin de inoculantes se realiza incluyendo toma de nutrientes y el crecimiento vegetal. Especies de Trichoderma producen adems antibiticos
y fitoxinas, por lo que es son considerados importantes Figura 4- Colonizacin de Phytophtora cinnamomi. a) hifa
estas propiedades.
colonizada por un antagonista, Trichoderma sp. (T), b)
Las caractersticas requeridas para emplear un hongo que agentes de biocontrol. Se han sealado estimulaciones
hifas lisadas con bacteria (B) colonizando la superficie de
Beneficios para el hongo forma MA como inoculante son similares a las exigidas a del crecimiento en cultivos inoculados en suelos estriles, la hifa
Ya sealados en el caso de los hongos ectomicorrcicos: cepas de rhizobios: infectividad, efectividad, coloniza- lo que evidencia la produccin de sustancias del tipo de
reciben de la planta nutrientes, sobre todo hidratos de cin y sobrevivencia en la rizosfera y en el suelo. las fitohormonas. Otras especies incluyen T. hamatum, T.
carbono en las primeras etapas de la colonizacin. La koningii y T. viridi, que producen las tpicas esporas ver- Otros mecanismos
estimulacin en la produccin de clorofila y una alteracin Existe poca especificidad entre las asociaciones arbus- des en medios de cultivo.
en la permeabilidad de las membranas evitan prdidas de culares y las plantas. En cultivos anuales, la sobreviven- Se han propuesto otras explicaciones de los incremen-
energa en la fotofosforilacin y explican el hecho de que cia debe ser considerada para eliminar los costos de rei- Un representante del gnero Penicillum, P. vermiculatum tos en el crecimiento vegetal y la resistencia a enferme-
una incrementada actividad fotosinttica compensa el flu- noculacin. se emplea en biocontrol por combinacin de micoparasi- dades en plantas inoculadas con microorganismos de
jo de carbono hacia el hongo, evitando disminuir la mate- tismo y produccin de antibiticos. P. frequentans parasi- biocontrol:
ria seca de la planta. La seleccin inicial debe incluir hongos que produz- ta esclerocios de numerosos hongos.
can esporas que germinen rpidamente, hifas que crez- * enzimas lticas extracelulares que destruyen la inte-
Se ha demostrado con CO2 marcado que el hongo emplea can bien en el suelo y que colonicen extensivamente al Las investigaciones sobre las posibilidades de emplear gridad de las paredes de hongos, como quitinasas. Se
entre un 4 y un 20% de las hexosas producidas por la plan- sistema radical. Las condiciones experimentales para hongos como agentes de biocontrol avanzan rpidamen- ha demostrado que las hifas de Sclerotium rolfsii pueden
R. solani. Esta bacteria inoculada en semillas de algodn lo Cuadro 9- Efecto del Fe en el antagonismo que la seleccin de cepas son las mismas que para rhizo- tratado con bromuro de metilo a los efectos de matar a
protegi de la enfermedad conocida como damping-off pro- afecta la germinacin de clamidosporas de bios. la poblacin nativa.
ducida por ambos hongos. La aplicacin de los antibiticos Fusarium oxysporum
a las semillas protegi a la planta de esta enfermedad. El nivel de fsforo de los suelos empleados debe ser Cuadro 5 - Efecto la inoculacin con rhizobio y
Antagonista % germinacin similar al de los suelos que van a ser inoculados. Gene- hongos endomicorrcicos en plantas de soja (media
Pero la confirmacin de este rol se realiza con el empleo -Fe +Fe ralmente se esterilizan los suelos en los ensayos mace- de 5 repeticiones), nivel de fosfato de roca 0,12%
de mutantes antibitico negativas, que no protegen a la Control 83 94 teros, pero se aconseja incluir un control no esterilizado
planta, mientras que la cepa parenteral si la protege asi para comparar el comportamiento del inculo con la po- Tratamiento Peso seco Peso seco N ndulos %
Pseudomonas 346 10 46 parte area raz (mg) por planta colonizacin
como la mutante complementada con el ADN responsa- blacin nativa de hongos arbusculares (Sieverding,
Pseudomonas NIR 15 50 (mg) micorrcica
ble de la sntesis del antibitico. 1991).
Enterobacter 12 40
Testigo 155 60 0 0
Otra clase de sustancias antimicrobianas producidas por El inculo: rhizobio (Rh) 161 64 6 0
bacterias son las bacteriocinas, efectivas contra micro- esporas colectadas mediante tcnicas trabajosas de ME3 162 63 0 62
organismos estrechamente relacionados (muchas veces El cuadro 10 presenta los resultados de un ensayo so- tamizado a partir de suelo rizosfrico MYV 161 68 0 67
de la misma especie). Uno de las primeras aplicaciones bre actividad antagonista ltica y de antibiosis contra Rhi- ME3 + Rh 320 117 16 88
comerciales para el control biolgico de enfermedades de zoctonia solani en suelos supresivos y conductivos para races colonizadas picadas MYV + Rh 357 136 16 90
races ha sido el uso de Agrobacterium radiobacter K84 este patgeno. Se aprecia que el efecto parece deberse
para el control de Agrobacterium tumefaciens causante al incremento en hongos totales y entre ellos a un anta- mezcla de suelo con races de plantas trampa (sor-
de la enfermedad conocida como agallas de corona, gonista natural productor de antibiticos. go, cebolla, etc.) inoculadas con esporas, crecidas y lue-
mediante la produccin de Agrocina 84, codificada por go sometidas a estrs (sequedad) a los efectos de que
un plsmido, cuya transferencia a cepas de A. tumefa- el hongo esporule (Anexo prctico).
ciens las convierte en resistentes. Cuadro 10- Anlisis del efecto antagnico de
bacterias y hongos sobre Rhizoctonia solani en El cuadro 5 publicado por Frioni, (1990), muestra los re-
El cuadro 8 muestra los resultados de un experimento de suelos supresivos y conductivos para el patgeno sultados de inoculacin de plntulas de soja con R. japo-
evaluacin del efecto de cepas de pseudomonas sobre nicum y una mezcla de esporas, hifas, micelio de hongos
hongos fitopatgenos in-vitro. Se aprecia que la cepa 374 Tratamiento %colonias %colonias bacterias hongos Trichoderma endomicorrcicos Glomus fasciculatus (E3) y Glomus mos-
con lticas totales totales spp
produce inhibicin por varios mecanismos simultneos inhibicin seae (YV) y de trozos de races colonizadas, con distintas
adems de por siderforos, mientras que la 429 lo hace dosis de fosfato de roca y el cuadro 6 informa los resulta-
Control 15 56 9,0 x 106 1,8 x 104 1,5 x 104
por competencia por el hierro, evidenciado por el levanta- dos de inoculacin de Pinus strobus con hongos ectomi-
miento de la inhibicin por el agregado del mismo. El cua- No supresivo 6 57 2,4 x 106 5,3 x 106 2,0 x 102 corrcicos (Smith y Read, 1997).
dro 9 muestra el efecto del Fe en el antagonismo entre Supresivo 17 63 2,7 x 106 1,2 x 108 4,0 x 104
Figura 11- Inoculacin de Acacia tortillis en suelo pobre en P
bacterias y un hongo. Se vuelve a apreciar la confluencia La figura 11 (Dommergues et al., 1999) presenta los y en N. 1R= inoculadas con rhizobio especfico: 1RM=inculo
de ms de un mecanismo de antagonismo. resultados de inoculacin de una especie de Acacia con doble, con rhizobio y el hongo endomicorrcico, 1RP= plantas
-1
Resumen: sobre el control biolgico mediado por side- Rhizobium y Glomus mosseae en suelo pobre en P y N con rhizobio y KH2PO4 (10mg P.kg suelo )
rforos
Cuadro 8- Efecto de Pseudomonas florescens en
el crecimiento de hongos. Inhibicin (mm) control in vitro a bajas concentraciones de Fe+3 y no en Cuadro 6- Crecimiento de plntulas de Pinus strobus ectomicorrizado y minerales absorbidos
altas
cepa 429 cepa 374
mayor rendimiento de cultivos en suelos privados de
-Fe +Fe -Fe +Fe Plntulas Peso seco Peso seco N (mg/planta) Fosfato Potasio
Fe+3
Botrytis cinerea 2,7 0 15,0 4,0 planta (mg) races (mg) (mg/planta) (mg/planta)
Cochliobolus sativus 3,8 0 9,5 4,2 agregado de pseudobactina al suelo: supresin enfer-
C. victoria 6,0 0 4,3 1,0
medades por Phytium y Gaeumanomyces ectomicorrizadas 404 175 5,00 0,789 2,97
Fusarium solani 0 0 0 0
Trichoderma hamatum 6,3 0 4,8 3,0 mutantes no productoras (sid-) pierden capacidad de
T. harzianum 6,5 0 4,6 1,3 no micorrizadas 331 166 2,45 0,239 1,55
supresin de patgenos en la rizosfera
Resumen: perspectivas y aplicaciones de los distintos ti- 6) Micorrizas y plantas micropropagadas: muchas es- Numerosas bacterias y hongos producen siderforos, a b CI
N OH NO2
pos de micorrizas pecies hortcolas y forestales son micropropagadas in- como Azospirilluam, Rhizobium, etc. y en la seleccin de N
H
C
CI
N CI CI
N
H
vitro, en medio con agar y azcares y luego transplan- cepas para la preparacin de inoculantes se incluye la OH O N
1 2 1 2 N
1) Aumento del rea de exploracin del suelo: por los tadas a sustrato adecuado. Esta etapa constituye una produccin de siderforos para favorecer su supremaca OH OH
R1
filamentos vegetativos extra radicales, cerca de 1.000m fase de aclimatacin y con el fin de evitar estrs hdrico en ambientes con hierro no disponible. Muchos pigmen- N
H
+
N R2 H O
de micelio/m de raz. Es la principal funcin de las mi- y nutricional, se las inocula con hongos endomicorrci- tos fluorescentes aislados de Pseudomonas poseen la OH
N
CH3
corrizas, que de esta manera aumentan la nutricin micos (esporas, plantas trampa micorrizadas y picadas) propiedad de complejar el hierro e inhibir a hongos fitopa- 3 OH 4 3 4
N
neral de los vegetales. tgenos. La inhibicin es revertida por el agregado de hie- N R N O O
N N HC=C-C=C - CH=C=CH
7) Produccin de hongos comestibles: muchos hon- rro. La inoculacin de estas bacterias y su siderforo, H 2N O OH
2) Nutricin nitrogenada y fosfatada: el hongo asimila gos ectomicorrcicos son tambin comestibles, de modo pseudobactina, a suelos conductivos los convierten en 5 5
formas de N que la planta usa mal y pone a disposicin que las fructificaciones de ellos en bosques con espe- supresivos. Figura 3- Metabolitos secundarios producidos por
de las mismas aminocidos, pptidos y protenas, au- cies inoculadas son cosechadas y aportan otra fuente pseudomonas fluorescentes
menta adems, el nivel de nitrgeno mineral absorbi- de ingreso al productor forestal (Lactarius deliciosus, Este suelo revierte a su estado original conductivo por:
do. La planta absorbe ms fosfatos gracias a la capaci- trufas, como Suillus luteus, Cantharellus cibarius). Otros a) 1- fenacinas, 2- indoles, 3- pio compuestos 4-fenilpirroles
dad de los hongos de usar formas orgnicas y minera- hongos comestibles son saprofitas y algunos hasta pa- la adicin de hierro 5-pterinas b) Antibiticos representativos producidos por
les del P del suelo (ortofosfato) no asimilables por los tgenos: Agaricus, Amanita, Tricholome, por lo que no pseudomona: 1-pioleuterina, 2-pirrolnitrina, 3-tropolone, 4-
al bajar el pH, debido probablemente a una incrementa-
vegetales, acumulan P mvil (polifosfatos) y lo transfie- ofrecen esta dualidad de empleo: micorrizacin y co- piocianina, 5- cepacina A
da disponibilidad del hierro a bajos pH
ren enseguida a la planta (figura 12). Presentan fosfa- mercializacin.
tasas. Pseudomonas putida WCS358, seleccionada para papa
A modo de repaso el cuadro 6 compara caractersticas Amensalismo que increment rendimientos en 13% en el campo. Su
3) Otros beneficios: produccin de fitohormonas (auxi- de las ectomicorrizas y las endo del tipo arbuscular (A) y efecto es mayor en rotaciones cortas (unos 3 aos). Su
nas), aumento de resistencia a estrs hdrico, a toxici- en el figura 12 (Duhoux y Nicole, 2004) se compara el Uno de los principales mecanismos de control biolgico efecto es la produccin de siderforos limitando el hierro
dad a minerales como aluminio, manganeso, a la aci- funcionamiento de ambos tipos de micorrizas. Las ecto- es la produccin de metabolitos secundarios txicos, a la microflora deletrea que produce HCN.
dez, salinidad, proteccin frente a fitopatgenos. micorrizas excretan enzimas hidrolticas que le permiten como los antibiticos, o toxinas especficas como las
absorber formas orgnicas del N y P. La absorcin de bacteriocinas que actan sobre hongos patgenos in- Pseudomonas fluorescens 2-79, efectiva en maz con
4) Costo para la planta: estudios con CO2 marcado con formas solubles puede realizarse tambin a partir de que- duciendo fungiostasis, inhibiendo la germinacin, lisan- enfermedades producidas por Gaeumannomyces grami-
C14 demostraron que entre un 20 y 40% de los azcares latos (complejos organo minerales). Las hifas de los hondo el micelio o ejerciendo efectos fungicidas. Son mol- nis var tritici, por siderforos y antibiticos.
fotoasimilados son usados por el hongo. En las endo- gos endomicorrcicos de tipo arbuscular secretan fosfata- culas orgnicas liberadas por los microorganismos al
micorrizas arbusculares, son los arbsculos los lugar sas. Tambin se mejora la asimilacin de ciertos oligoele- ambiente donde pueden perder efectividad a distancia Pseudomonas fluorescens CHAO que produce el side-
es de intercambio carbonado entre ambos integrantes. mentos como Cu, Zn. de las clulas productoras porque son adsorbidas a los rforo pioverdina, cido saliclico y tres antibiticos, en-
coloides orgnicos o minerales o son degradadas qu- tre ellos pioluteorina
5) Inoculacin: la misma se efecta en plntulas en vive- Ectomicorrizas Endomicorrizas A mica o biolgicamente. La aparicin de resistencias en
ro. La mayor aplicacin se da actualmente en la pro- los patgenos, codificada en general en plsmidos, li- Las condiciones qumicas y nutricionales del suelo afec-
duccin forestal, inoculando los plantines con: suelo y mita muchas veces su efectividad. tan la produccin de los antibiticos: el pH, nutrientes in-
mantillo de bosques establecidos, carpforos picados, orgnicos, edad del cultivo. En medios de cultivo se ob-
o inoculantes a base de micelio puro de hongos .ecto- Las pseudomonas fluorescentes han sido consideradas para serv que estas sustancias se producen en la segunda
micorrcicos seleccionados. El efecto de las endomico- Aminocidos el control biolgico ya que producen gran nmero de meta- mitad de la fase estacionaria, cuando las fuentes minera-
rrizas arbusculares no ha sido an establecido en la agri- bolitos secundarios, (figura 3, a y b), muchos con accin les se agotan.
cultura a gran escala, pero se estima, que su introduc- Pelo antimicrobiana (1 a 5 figura 3a). Otras pseudomonas pro-
cin puede disminuir los niveles de fertilizantes requeri- absorbente
ducen potentes antibiticos (1 a 5, fig 3b) como tropolone, La evidencia del rol de estas sustancias en el control biol-
dos sobre todo en la fase de establecimiento de los cul- Fosfatasas bacteriosttico y bactericida de amplio rango de bacterias y gico se obtuvo a partir de los trabajos de Howell y Stipano-
tivos. La incapacidad de los hongos que forman mico- tambin fungicida. Producen tambin HCN. vic (1980) quienes aislaron de rizosfera de algodn una cepa
Fosfatasas
rrizas del tipo A de desarrollarse en cultivo puro consti- de P. fluorescens antagonista de de Rhizoctonia solani y
tuye la principal limitacin en estudios fisiolgicos, ge- P-orgnico Algunas pseudomonas han sido patentadas y se emplean Phythium ultimun, que produce dos antibiticos: pioleuto-
nticos, taxonmicos y por supuesto en la preparacin en inoculantes comerciales: rina, activa contra P. ultimum y pirrolnitrina, activa contra
de inoculantes. Figura 12 - Funcionamiento de ecto y endomicorrizas
Mecanismos en el control biolgico Los pigmentos fluorescentes que permiten identificar a Cuadro 6 - Caractersticas de ecto y Allen, M.F. (ed) Mycorrhizal Functioning, An integrati-
estas pseudomonas constituyen muchas veces sider- endomicorrizas ve Plant-Fungal Process, 1991, Chapman & Hall,
Los antagonismos biolgicos se dan por: competencia, foros, como la pioverdina, seudobactina. Una prote- New York, 534 pp.
amensalismo, predacin, parasitismo (Kapulnik, 1991) na de membrana especfica (permeasa) transporta el Endomicorrizas Ectomicorrizas Alvarez, I. F. Ecologa, fisiologa e implicancias prcticas
(captulo 14). compelejo organo-metlico al citoplasma, donde siste- Presentes en un 97% Presentes en aprox.3% de fane- de las ectomicorrizas. En: Fijacin y Movilizacin de
mas ferrisiderforo-reductasa reducen el hierro y el re- fanergamas y algunos rgamas, sobretodo forestales Nutrientes, vol II, 1991, Coleccin Nuevas tendencias,
Competencia sultante hierro ferroso es liberado y asimilado por la rboles Consejo Superior de Investigaciones Cientficas, Ma-
Se da por nutrientes (C, N, S, P, Fe, micronutrientes, etc.), planta. El siderforo queda disponible para reiniciar el No visibles a simple vista Visibles macroscpicamente drid: 247-259
espacio, agua, O2, CO2, luz, etc. Una colonizacin agresi- ciclo. Bago, B.; Pfeffer, P. E.; Shachar-Hill. Y. Carbon metabo-
Estructuras dentro clulas Manto fngico, a veces colorea- lism and transport in arbuscular mycorrhizas. 2000,
va por estos antagonistas desplaza especies rizosfricas
Raz corticales de la raz: do, red de Hartig; hifas intercelu-
deletreas disminuyendo el riesgo de reduccin del creci- Clula A Plant Physiology 124: 949-957
SID
arbsculos, vesculas, lares, rara vez penetran en las
miento vegetal. Se reduce tambin el inculo de patge- y esporas clulas Barea, J. M., C. Azcon-Aguilar, J. A. Ocampo y R. Azcon
nos del suelo. Morfologa, anatoma y citologa de las micorrizas ve-
Fe+++ + SID Fe+++ + SID Forman carpforos, espo- En general forman carpforos sculo-arbusculares. En: Fijacin y Movilizacin Bio-
Metabolismo
ras y/o elementos de visibles (areos o hipogeos)
Competencia mediada por siderforos energtico a lgica de Nutrientes, Vol II, 199, Coleccin Nuevas
nivel celular rersistencia en el suelo,
A pesar de que el hierro es abundante en los suelos, CN- Asimilacin no visibles Tendencias, vol 18, Consejo Superior de Investigacio-
Clula B
est muchas veces no disponible para plantas y micro- reducida nes Cientficas, Madrid: 149-173
CN - Hongos no tabicados Basidiomycotina, Ascomycotina
organismos ya que su solubilidad es muy baja a pH neu- Dommergues, Y. y Mangenot, F. Ecologie microbienne
Zygomycotina micelio tabicado
tro y alcalino. Muchos microorganismos, sobre todo es- du sol. 1970, Masson, Pars
(Endogonales)
pecies de Pseudomonas producen sustancias orgnicas Dommergues, Y. Duhoux, E. Y Diem, H. G. Les arbres
quelantes, de bajo PM (figura 1), con elevada afinidad Figura 2- Mecanismo de accin de siderforos. A-clula Aislados de suelo y raz no Idem, cultivados en medios de fixateurs dazote. 1999 Co-edicin CIRAD/FAO/IRD/
por el ion frrico, denominados siderforos, que son productora de siderforos, B- clula de microorganismo crecen en medios usuales laboratorio a partir de esporas o Espaces 34, Pars
deletreo productor de cianuro. SID- siderforo de cultivo hifas
inducidos por bajas concentraciones de hierro y reprimi- Duhoux, E. y Nicole, M. Biologie Vgtal: Associations
dos por altas. Fructifican en presencia del No fructifican en medios de et Interactions chez les Plantes. 2004, Dunod, Pa-
hospedante laboratorio, salvo excepciones rs: 54-93
Muchos microorganismos deletreos producen HCN Frioni, L. Ecologa microbiana del suelo, 1990 Ed. Uni-
Inoculacin en pequea y Inoculacin con mantillo, esporas
(cido cianhdrico) que inhibe el metabolismo ener- mediana escala con esporas o cultivos de micelio y/o esporas. versidad de la Repblica, Montevideo
gtico a nivel de la CTE (figura 2). Los microorganis- o suelo y races de plantas Inoculantes comerciales Honrubia, M., P. Torres, G. Diaz y A: Morte, Biotecnolo-
mos productores de siderforos compiten con estos trampa ga Forestal: Tcnicas de Micorrizacin y Micro-
organismos por el hierro, inhibiendo el efecto delet- propagacin de Plantas, 1994, Universidad de Mur-
Pueden conservarse a baja Pueden conservarse mucho tiem-
reo en el cultivo. A pH inferiores a 6,0 el hierro dispo- temperatura por 1-2 aos po en medios artificiales cia, 167 pp.
nible (ferroso) aumenta y los siderforos son menos Le Tacon, E. (editor) Champignons et mycorrhizes en
efectivos. No se conocen especies Algunas especies comestibles y
venenosas ni comestibles otras altamente venenosas fret. 1997 Revue Forestire Franaise, N especial.
Ed. Ecole Nacional du Gnie Rural, des eaux et forts.
Para determinar si la produccin de estas sustancias es Requieren al hospedante No lo requieren
Nancy
la causa de la supresin de una enfermedad, se agrega para crecer
Malvrez, G., Major, G., Curbelo, V. y Frioni, L. Hon-
Fe soluble al sistema suelo-planta: si reaparece la enfer- gos ectomicorrticos en Eucalyptus grandis. 1997,
medad la competencia por el hierro puede haber sido la Agrociencia 1:38-43, Facultad de Agronoma, Mon-
causa de la supresin. tevideo
Figura 1- Esquema del siderforo seudobactina Bibliografa Marx, D. H., J. L. Ruehle y C. E. Cordell, Methods for stu-
Otra forma de demostrar esto es mediante el empleo dying nursery and field response of trees to specific
de mutantes siderforo negativas (sid-) obtenidas con Agerer, R. Characterization of Ectomycorhiza. En: Tech- ectomycorrhyza. En: Methods in Microbiology, vol
Estas sustancias favorecen las posibilidades de asimila- ayuda de transposonos (Tn5), su inoculacin no limita niques for Mycorrhizal Research, 1994, J. R. No- 23, Techniques for the Study of Mycorrhyza, 1991,
cin de este in por la bacteria productora en ambientes la enfermedad, pero si lo hace la recombinante con el rris, D. Read y A. K. Varma (eds), Academic Press: J. R. Norris,D. J. Read y A. K. Varma (eds), Academic
de baja disponibilidad, compitiendo con el microorganis- segmento de ADN productor del siderforo aislado de 25-73, London Press, London: 383-412.
mo deletreo o patgeno (figura 2). la cepa salvaje.
Norris, J.R., D. Read y A.K. Varma (eds) Techniques for 2) Por qu a las micorrizas se les cataloga tambin como La evidencia de control biolgico se obtuvo en la dca- Un microorganismo efectivo en el control biolgico deber
Mycorrhizal Research, 1994, Academic Press, Lon- parasitismo controlado? da del 80 cuando monocultivos de trigo o cebada infec- realizar alguna de funciones presentadas en el cuadro 7.
don, New York 3) Describa en pocas palabras los tipos ms frecuentes tados con un hongo Gaeumannomyces graminis se tra-
Schenck, N.C. y Y. Perez Manual for the Identification de micorrizas taron con un suelo supresivo para la enfermedad (take-
of VA Mycorrhizal Fungi, 1988 Univ.Florida, Ganes- 4) Diferencias entre los endosimbiontes fngicos en las all), es decir un suelo que no permite el desarrollo de Cuadro 7- Propiedades de un microorganismo
ville, 241 pp ecto y endomicorrizas arbusculares este patgeno. antagonista
Sieverding, E. Vesicular-arbuscular mycorrhizal mana- 5) Posiblidades de aislamiento y propagacin de ellos a
gement in tropical agrosystems. 1991 GTZ Gmbh, Los suelos conductivos (que manifiestan la enfermedad) * Colonizar rpidamente la zona radical
los efectos de obtener inoculantes a base de micelio
Eschborn, 371 pp. se convirtieron en supresivos, sugiriendo la participacin
puro y seleccionado * Producir antibiticos que antagonicen a los microorganis-
Siqueira, J. O., F. M. de S. Moreira, B. M. Grisi, M. Hun- de un factor biolgico. En efecto, se encontr mayor n-
6) Por qu los plantines (pino, eucalipto, robles) en los mos patgenos
gria y R. S. Araujo Micorrizas. En: Microorganismos mero de pseudomonas fluorescentes antagonistas del
viveros ms tecnificados presentan bajo porcentaje de hongo en la rizosfera de trigo en relacin al resto del sue- * Producir compuestos que quelatan al hierro, como los lla-
e Processos Biolgicos do Solo: Pespectiva Am-
micorrizacin? lo. Actualmente, numerosas pseudomonas se reconocen mados siderforos, que hacen menos disponible este
biental, 1994 EMBRAPA-SPI, Brasilia, DF: 95-117
7) Formas de incrementar este ndice efectivas en el control de esta enfermedad. elemento para los patgenos
Smith, S.E. Y Read, D. J. Mycorrhizal symbiosis. 1997,
Academic Press 8) Cmo establecera si los carpforos dominantes en
* Competir por sustratos esenciales para el patgeno
bosques establecidos son micorrcicos? El control biolgico de enfermedades de races se puede
9) Si pudiera escoger hongos ectomicorrcicos entre hon- lograr de varias maneras (cuadro 5). * Competir con el patgeno por los sitios de infeccin
Preguntas de repaso gos saprofitas y otros comestibles, cual escogera
* Liberar nutrientes asimilables por las plantas (N, P, etc.) y
como inoculante y por qu? producir compuestos promotores del crecimiento de las
Cuadro 5- Prcticas de control biolgico
1) En qu momento de la evolucin las plantas necesita- 10)Perspectivas y futuros desafos en los estudios con plantas, como AIA, giberelinas, etc., que favorecen el de-
ron de hongos asociados? Qu ventajas adquirieron? hongos endomicorrcicos arbusculares. * Inoculacin directa de las bacterias u hongos selecciona- sarrollo de las plantas
dos en semillas o trozos de tallos (propagacin vegetativa)
* Moverse hacia zonas adecuadas de la raz y adherirse a
* Incorporacin en el suelo del vivero ella
* Control indirecto por cambios culturales que estimulan a * Emplear los sustratos disponibles
la microflora antagonista nativa
* Control integrado, como inoculacin de semillas con el * Competir con la microflora autctona
agente de control biolgico y dosis menores del agente * Multiplicarse sobre la raz
qumico
El cuadro 6 presenta algunas de las caractersticas que La habilidad de un organismo para colonizar la rizosfera
debe presentar un microorganismo para actuar como un del hospedante es uno de los principales requerimien-
antagonista ideal de un microorganismo fitopatgeno. tos para el xito del control biolgico de enfermedades
de raz.
Cuadro 6- Cualidades de un antagonista ideal
Si se inoculan las semillas, el microorganismo debe
* Genticamente estable multiplicarse en la espermatsfera antes de estable-
* Efectivo a bajas concentraciones cerse en la radcula emergente. La quimiostasis ayu-
* Poco exigente en requerimientos nutritivos da a desplazarse hacia exudados. La adhesin a la
* Capaz de sobrevivir en condiciones ambientales adversas raz mediante unin a glicoportenas, como las lecti-
* Eficaz contra amplio rango de patgenos nas, ha sido reconocida como un paso crtico en la
* Posible de cultivo en medios corrientes colonizacin. Los exudados radicales seleccionan
* Mantener el efecto en el tiempo
poblaciones rizosfricas y varan con el ambiente, la
* Que no produzca efectos secundarios
* Resistente a pesticidas
gentica y estado de desarrollo de la planta y afectan
* No ser patgeno para el hospedero la susceptibilidad de los cultivos frente a enfermeda-
des (captulo 13).
Los tratamientos empleados en el control de estas plagas Cuadro 3- Mecanismos de control biolgico de
incluyen: enfermedades vegetales
Control qumico: innumerables sustancias de gran toxi- * rotacin de cultivos con plantas no susceptibles al pat-
cidad se emplean en el tratamiento de enfermedades ve- geno o mantener barbechos (sin cultivos)
Microorganismos promotores del

17
getales. Se calculan 500.000 toneladas de agrotxicos * aradas, que aceleran el desplazamiento de algunos pat-
usadas en el mundo al ao, lo que ha despertado gran genos en los residuos
inquietud por los efectos laterales contra los animales y
el hombre, la lenta biodegradacin de muchos y su acu-
* empleo de variedades resistentes
* tratamiento del suelo (vapor de agua, solarizacin, bioci-
crecimiento vegetal
mulacin en aguas y suelos.
das) que cambian la microflora del suelo
Control biolgico: se aprovechan efectos antagonistas * incorporacin de compost y otros materiales orgnicos
de un microorganismo sobre otro para disminuir o elimi- que estimulan la actividad de antagonistas naturales o En este captulo analizaremos el manejo de las interac- Cuadro 1 - Efecto de los microorganismos sobre
nar enfermedades, sobretodo a nivel de races, y la ino- suprimen la actividad del patgeno ciones benficas entre los microorganismos y los vegeta- las plantas
culacin de organismos seleccionados resulta una prcti- * inoculacin con microorganismos antagonistas les a los efectos de disminuir enfermedades en los mis-
ca cada vez ms extendida a nivel de vivero. Resulta ms mos causadas por microorganismos del suelo. Los mis- Benficos FBN, antibiosis, sustancias promoto-
difcil el tratamiento biolgico a nivel de hojas, tallos, etc. mos criterios se emplean para control de enfermedades ras, biocontrol, estabilizacin del suelo,
provocadas por integrantes de la fauna (nemtodos, co- liberacin de nutrientes (mineralizacin,
Cada da se incrementan las investigaciones en este as- Cuadro 4- Ventajas y desventajas del control
lmbolos), insectos, etc., que escapan a esta revisin. solubilizacin),degradacin de fitotxicos
pecto, ya que los microorganismos no presentan, en ge- biolgico de fitopatgenos
neral, el riesgo de toxicidad de los agroqumicos y los cos- Neutros o adhesin, liberacin de enzimas, compe-
Los microorganismos del suelo estn relacionados con variables tencia, alelopatas, flujo de nutrientes
tos de aplicacin son bajos. Ventajas
* Los microorganismos ofrecen mayor seguridad en el uso las plantas y sus interacciones, como vimos (captulo 13)
Perjudiciales fitotoxicidad, infeccin
en relacin a muchos agentes qumicos pueden ser benficas, neutras o perjudiciales.
Son muy empleados hongos y bacterias contra insectos
plaga de vegetales. * No se acumulan en las cadenas alimenticias Los efectos de los microorganismos rizosfricos sobre a
* Su persistencia y multiplicacin evita repetidas aplica- las plantas pueden resumirse en: Se sabe que la enfermedad est relacionada a complejas
Control integrado: prctica que resulta de la interacciones interacciones de tres componentes (tringulo de enfermedad):
cin de los anteriores, con el empleo de bajas dosis de Neutros: no afectan el crecimiento
* Raramente desarrollan resistencias como ocurre con
sustancias qumicas combinado con inoculantes biol-
agentes qumicos Benficos: existe creciente evidencia de que la microflo- Patgeno
gicos.
* Cuando se muestran menos efectivos que una sustan- ra saprofita de la rizosfera incluye componentes benfi-
Conceptos: existen muchas definiciones del control cia qumica, ambos se pueden combinar en las aplica- cos que pueden incrementar el crecimiento vegetal y los
ciones Ambiente y
biolgico, pero en sentido amplio se considera la re- rendimientos significativamente
Hospedero antagnistas
duccin de la cantidad de un patgeno o de la activi- * Los agentes biolgicos correctamente preparados y
dad que produce enfermedad en un vegetal, mediante aplicados no son considerados peligrosos para la eco- Deletreos: que pueden afectar negativamente el cre-
el uso de microorganismos, sus enzimas o sus genes. loga cimiento vegetal, sin necesariamente parasitar al teji-
Como el suelo cambia menos rpidamente que la atms-
En sentido ms acotado: se refiere a la introduccin do (alteraciones en el aporte de agua, iones y sustan-
fera sobre l, los microorganismos estn adaptados a este
artificial de microorganismos antagonistas o sus pro-
Desventajas cias promotoras del crecimiento vegetal, cambiando las
* La variabilidad gentica de muchos microorganismos selec- habitat relativamente estable. Las poblaciones de anta-
ductos o genes en el ambiente para controlar al pat- funciones y/o limitando el crecimiento de races)
cionados, obligara a una seleccin continua gonistas, patgenos y plantas fluctan dentro de ciertos
geno. Patgenos: disminuyen el rendimiento por produccin de lmites en respuesta a las interacciones biticas y abiti-
* La experimentacin requerida, que incluye ensayos de
enfermedades: numerosas bacterias, actinomicetes, hon- cas. Ligeros cambios en las condiciones del ambiente
laboratorio, invernculo y campo
Los procedimientos aplicados pueden variar (cuadro 3). gos producen enfermedades que provocan importantes pueden ejercer profundos efectos en poblaciones de pa-
* Las variaciones en los resultados de aplicaciones de cam- tgenos o antagonistas aislados. Los cambios produci-
po (efecto de suelos, clima, etc.)
prdidas en los cultivos
Las ventajas y desventajas del control biolgico de enfer- dos por la agricultura son en general rpidos, variados y
medades en vegetales han sido resumidas por Gould * La necesidad de asegurar su sobrevivencia en los sopor- En el cuadro 1 se ejemplifican algunos de estos efectos y permiten en poco tiempo recuperar el equilibrio biolgico.
(1990) y se presentan en el cuadro 4. tes ms empleados en los inoculantes comerciales en el cuadro 2 se sealan algunos de los microorganis- Pero el uso intensivo de fertilizantes, pesticidas, irrigacin,
mos con distintos efectos sobre los vegetales . labranzas y otras prcticas que tienden a incrementar los
rendimientos han resultado en incrementos en la severi- La ocurrencia de una enfermedad en vegetales indica que Los microorganismos benficos afectan el desarrollo Mecanismos de accin
dad o incidencia de enfermedades vegetales. Los mono- alguno de las siguientes condiciones coexisten (Graham vegetal por: 1. Produccin de sustancias estimulantes del creci-
cultivos estimulan ciertas enfermedades que ocurriran y Mitchell, 1998): miento vegetal. En medios de cultivo se ha verificado
raramente en ecosistemas no perturbados. aumento de la disponibilidad y toma de nutrientes la produccin de sustancias del tipo de las fitohormo-
El patgeno es altamente virulento o est presente en minerales nas; auxinas, giberelinas, citoquininas. El cido indol
alta densidad actico (AIA) a bajas concentraciones promueve la elon-
Cuadro 2- Microorganismos con efectos provisin de sustancias promotoras del crecimiento gacin radical e incrementa las ramificaciones laterales
benficos, deletreos y patgenos sobre plantas Las condiciones abiticas del ambiente son ms favo- (aumenta el rea radical), mientras que mayores con-
rables para el patgeno que para el hospedante o el supresin de microorganismos deletreos o patgenos centraciones pueden resultar inhibitorias. Algunos au-
Benficos antagonista en la rizosfera tores relacionan la produccin de AIA con aumentos en
Bacterias fijadoras de N2: la permeabilidad celular con consiguiente incremento
no simbiticos: Azospirillum, Azotobacter, Clostridium, El hospedante vegetal es genticamente homogneo, Las caractersticas de un microorganismo promotor en la exudacin radical. Se han logrado los mismos efec-
Acetobacter altamente susceptible y extensivamente sembrado del crecimiento vegetal (MPCV) se resumen en el cua- tos con la adicin de giberelinas o AIA que con la inocu-
simbiticos: Rhizobium, Bradyrhizobium, Frankia, Azor-
dro 3. lacin con diazotrofos, como por ejemplo, Azospirillum,
hizobium El antagonista est ausente o lo est en bajo nmero evidenciando que el efecto en los incrementos de los
Rizobacterias estimulantes del crecimiento vegetal por falta de condiciones favorables o por inhibicin por
(PGPR en ingls)
rendimientos se deben principalmente a estas sustan-
otros microorganismos Cuadro 3- Cualidades de microorganismos cias (Fulchieri, 1992).
solubilizacin de Pi
liberacin sustancias estimulantes crecimiento promotores del crecimiento vegetal
El equilibrio biolgico en situaciones de enfermedades 2. Incrementos en la capacidad de absorcin de agua
mayor absorcin de agua y de nutrientes
antagonistas de patgenos
vegetales puede manipularse a travs del uso integrado * Desarrollo en la rizosfera, deben tener la capacidad y minerales. Los MPCV aumentan la disponibilidad de
degradacin de sustancias fitotxicas
de controladores qumicos, como los fungicidas, bacteri- de colonizar activamente la rizsfera y el rizoplano nutrientes poco mviles (fosfatos) y su absorcin por la
Hongos micorrticos cidas, nematomicidas, controles culturales, como las ro- planta. Los microorganismos solublizadores de fsforo
ectomicorrticos: Pisolithus, Suillus, Laccaria taciones de cultivos, enmiendas orgnicas y mediante * Sobrevivir a la inoculacin sobre las semillas, en el como Bacillus megaterium, B. fluorescens son capaces
endomicorrticos: Glomus, Acaulospora mtodos de control biolgico, como los que incrementan suelo, en la espermatsfera en respuesta a exuda- de mineralizar P orgnico (fosfatasas) o solubilizar el P
Microorganismos empleados en control biolgico la resistencia natural de los cultivos o mediante la intro- dos radicales inorgnico por produccin de cidos (captulos 12 y 16).
antagonistas de bacterias (Agrobacterium tumefaciens) duccin por inoculacin de microorganismos antagonis-
antagonistas de hongos (bacterias, otros hongos)
Los procesos de oxido-reduccin ponen a disposicin
tas de los patgenos. * Activos competidores, para persistir deben encon- de los vegetales nutrientes solubles asimilables (nitra-
Microorganismos en la rehabilitacin de suelos
revegetacin trarse en valores altos (103-106 ufc/g raz fresca). Son tos, sulfatos, sales ferrosas, etc.) (captulos 10 y 12).
El control biolgico es de ms reciente adopcin y slo sobretodo bacterias y hongos
manejo de residuos txicos
representa una fraccin muy baja (2-10%) del control La inoculacin con diazotrofos como Azospirillum y la sim-
solubilizacin de fosfatos
Tcnicas de estimulacin de estos microorganismos qumico, opera ms lentamente, pero es ms seguro, * Gram negativos, como Pseudomonas flouorecens, biosis con hongos ecto y endomicorrticos producen es-
manejo de residuos (abonos, pajas) no contaminante y de larga duracin en relacin a los Pseudomonas no fluorescentes, Azospirillum, tos efectos.
inoculacin anteriores. miembros de las Enterobacteriaceae: Enterobac-
ter agglomerans, E. cloacae, Erwinia herbicola, 3. Estimulacin de la germinacin y emergencia
Deletreos Se verific la produccin de sustancias de tipo fenoles
Asociados al mantillo Serratia marcens
inmovilizantes del N
Promocin directa del crecimiento vegetal como las quinonas por Pseudomonas estimulan la ger-
sntesis de sustancias txicas (cidos orgnicos, * Gram positivos, como Arthrobacter y Bacillus: B. minacin de semillas y la emergencia de plntulas.
toxinas) Las rizobacterias benficas que promueven el desa- cereus,B. subtilis, etc. Otros microorganismos:
Rizobacterias rrollo vegetal se designaron como rizobacterias pro- Streptomyces, hongos: Alternaria,, Trichoderma,
reductoras de S, Fe, Mn motoras del crecimiento vegetal (PGPR, plant Aspergillus, Fusarium, Cladosporium, etc. Mecanismos de accin indirecta
antagonistas de microorganismos promotores growing promoting rhizobacteria) y son extensamente
estudiadas por sus efectos benficos en rendimientos * Rpida colonizacin por: alta velocidad de creci- Control biolgico
Patgenos de importantes cultivos (Schippers et al., 1987). Ha- miento, movilidad que le permita acceder a nutrien- Los microorganismos deletreos y fitopatgenos causan
bacterias blaremos de microorganismos promotores del cre- tes, quimiostasis (desplazamiento hacia exudados serios deterioros en frutas, hortalizas, plantas ornamen-
hongos cimiento vegetal (MPCV), para incluir a otros grupos, tales y prdidas econmicas. Ocurren severas enferme-
radicales)
los virus (entidades biolgicas) como los hongos. dades a nivel de hojas, frutos, tallos, races.
rendimientos han resultado en incrementos en la severi- La ocurrencia de una enfermedad en vegetales indica que Los microorganismos benficos afectan el desarrollo Mecanismos de accin
dad o incidencia de enfermedades vegetales. Los mono- alguno de las siguientes condiciones coexisten (Graham vegetal por: 1. Produccin de sustancias estimulantes del creci-
cultivos estimulan ciertas enfermedades que ocurriran y Mitchell, 1998): miento vegetal. En medios de cultivo se ha verificado
raramente en ecosistemas no perturbados. aumento de la disponibilidad y toma de nutrientes la produccin de sustancias del tipo de las fitohormo-
El patgeno es altamente virulento o est presente en minerales nas; auxinas, giberelinas, citoquininas. El cido indol
alta densidad actico (AIA) a bajas concentraciones promueve la elon-
Cuadro 2- Microorganismos con efectos provisin de sustancias promotoras del crecimiento gacin radical e incrementa las ramificaciones laterales
benficos, deletreos y patgenos sobre plantas Las condiciones abiticas del ambiente son ms favo- (aumenta el rea radical), mientras que mayores con-
rables para el patgeno que para el hospedante o el supresin de microorganismos deletreos o patgenos centraciones pueden resultar inhibitorias. Algunos au-
Benficos antagonista en la rizosfera tores relacionan la produccin de AIA con aumentos en
Bacterias fijadoras de N2: la permeabilidad celular con consiguiente incremento
no simbiticos: Azospirillum, Azotobacter, Clostridium, El hospedante vegetal es genticamente homogneo, Las caractersticas de un microorganismo promotor en la exudacin radical. Se han logrado los mismos efec-
Acetobacter altamente susceptible y extensivamente sembrado del crecimiento vegetal (MPCV) se resumen en el cua- tos con la adicin de giberelinas o AIA que con la inocu-
simbiticos: Rhizobium, Bradyrhizobium, Frankia, Azor-
dro 3. lacin con diazotrofos, como por ejemplo, Azospirillum,
hizobium El antagonista est ausente o lo est en bajo nmero evidenciando que el efecto en los incrementos de los
Rizobacterias estimulantes del crecimiento vegetal por falta de condiciones favorables o por inhibicin por
(PGPR en ingls)
rendimientos se deben principalmente a estas sustan-
otros microorganismos Cuadro 3- Cualidades de microorganismos cias (Fulchieri, 1992).
solubilizacin de Pi
liberacin sustancias estimulantes crecimiento promotores del crecimiento vegetal
El equilibrio biolgico en situaciones de enfermedades 2. Incrementos en la capacidad de absorcin de agua
mayor absorcin de agua y de nutrientes
antagonistas de patgenos
vegetales puede manipularse a travs del uso integrado * Desarrollo en la rizosfera, deben tener la capacidad y minerales. Los MPCV aumentan la disponibilidad de
degradacin de sustancias fitotxicas
de controladores qumicos, como los fungicidas, bacteri- de colonizar activamente la rizsfera y el rizoplano nutrientes poco mviles (fosfatos) y su absorcin por la
Hongos micorrticos cidas, nematomicidas, controles culturales, como las ro- planta. Los microorganismos solublizadores de fsforo
ectomicorrticos: Pisolithus, Suillus, Laccaria taciones de cultivos, enmiendas orgnicas y mediante * Sobrevivir a la inoculacin sobre las semillas, en el como Bacillus megaterium, B. fluorescens son capaces
endomicorrticos: Glomus, Acaulospora mtodos de control biolgico, como los que incrementan suelo, en la espermatsfera en respuesta a exuda- de mineralizar P orgnico (fosfatasas) o solubilizar el P
Microorganismos empleados en control biolgico la resistencia natural de los cultivos o mediante la intro- dos radicales inorgnico por produccin de cidos (captulos 12 y 16).
antagonistas de bacterias (Agrobacterium tumefaciens) duccin por inoculacin de microorganismos antagonis-
antagonistas de hongos (bacterias, otros hongos)
Los procesos de oxido-reduccin ponen a disposicin
tas de los patgenos. * Activos competidores, para persistir deben encon- de los vegetales nutrientes solubles asimilables (nitra-
Microorganismos en la rehabilitacin de suelos
revegetacin trarse en valores altos (103-106 ufc/g raz fresca). Son tos, sulfatos, sales ferrosas, etc.) (captulos 10 y 12).
El control biolgico es de ms reciente adopcin y slo sobretodo bacterias y hongos
manejo de residuos txicos
representa una fraccin muy baja (2-10%) del control La inoculacin con diazotrofos como Azospirillum y la sim-
solubilizacin de fosfatos
Tcnicas de estimulacin de estos microorganismos qumico, opera ms lentamente, pero es ms seguro, * Gram negativos, como Pseudomonas flouorecens, biosis con hongos ecto y endomicorrticos producen es-
manejo de residuos (abonos, pajas) no contaminante y de larga duracin en relacin a los Pseudomonas no fluorescentes, Azospirillum, tos efectos.
inoculacin anteriores. miembros de las Enterobacteriaceae: Enterobac-
ter agglomerans, E. cloacae, Erwinia herbicola, 3. Estimulacin de la germinacin y emergencia
Deletreos Se verific la produccin de sustancias de tipo fenoles
Asociados al mantillo Serratia marcens
inmovilizantes del N
Promocin directa del crecimiento vegetal como las quinonas por Pseudomonas estimulan la ger-
sntesis de sustancias txicas (cidos orgnicos, * Gram positivos, como Arthrobacter y Bacillus: B. minacin de semillas y la emergencia de plntulas.
toxinas) Las rizobacterias benficas que promueven el desa- cereus,B. subtilis, etc. Otros microorganismos:
Rizobacterias rrollo vegetal se designaron como rizobacterias pro- Streptomyces, hongos: Alternaria,, Trichoderma,
reductoras de S, Fe, Mn motoras del crecimiento vegetal (PGPR, plant Aspergillus, Fusarium, Cladosporium, etc. Mecanismos de accin indirecta
antagonistas de microorganismos promotores growing promoting rhizobacteria) y son extensamente
estudiadas por sus efectos benficos en rendimientos * Rpida colonizacin por: alta velocidad de creci- Control biolgico
Patgenos de importantes cultivos (Schippers et al., 1987). Ha- miento, movilidad que le permita acceder a nutrien- Los microorganismos deletreos y fitopatgenos causan
bacterias blaremos de microorganismos promotores del cre- tes, quimiostasis (desplazamiento hacia exudados serios deterioros en frutas, hortalizas, plantas ornamen-
hongos cimiento vegetal (MPCV), para incluir a otros grupos, tales y prdidas econmicas. Ocurren severas enferme-
radicales)
los virus (entidades biolgicas) como los hongos. dades a nivel de hojas, frutos, tallos, races.
Los tratamientos empleados en el control de estas plagas Cuadro 3- Mecanismos de control biolgico de
incluyen: enfermedades vegetales
Control qumico: innumerables sustancias de gran toxi- * rotacin de cultivos con plantas no susceptibles al pat-
cidad se emplean en el tratamiento de enfermedades ve- geno o mantener barbechos (sin cultivos)
Microorganismos promotores del

17
getales. Se calculan 500.000 toneladas de agrotxicos * aradas, que aceleran el desplazamiento de algunos pat-
usadas en el mundo al ao, lo que ha despertado gran genos en los residuos
inquietud por los efectos laterales contra los animales y
el hombre, la lenta biodegradacin de muchos y su acu-
* empleo de variedades resistentes
* tratamiento del suelo (vapor de agua, solarizacin, bioci-
crecimiento vegetal
mulacin en aguas y suelos.
das) que cambian la microflora del suelo
Control biolgico: se aprovechan efectos antagonistas * incorporacin de compost y otros materiales orgnicos
de un microorganismo sobre otro para disminuir o elimi- que estimulan la actividad de antagonistas naturales o En este captulo analizaremos el manejo de las interac- Cuadro 1 - Efecto de los microorganismos sobre
nar enfermedades, sobretodo a nivel de races, y la ino- suprimen la actividad del patgeno ciones benficas entre los microorganismos y los vegeta- las plantas
culacin de organismos seleccionados resulta una prcti- * inoculacin con microorganismos antagonistas les a los efectos de disminuir enfermedades en los mis-
ca cada vez ms extendida a nivel de vivero. Resulta ms mos causadas por microorganismos del suelo. Los mis- Benficos FBN, antibiosis, sustancias promoto-
difcil el tratamiento biolgico a nivel de hojas, tallos, etc. mos criterios se emplean para control de enfermedades ras, biocontrol, estabilizacin del suelo,
provocadas por integrantes de la fauna (nemtodos, co- liberacin de nutrientes (mineralizacin,
Cada da se incrementan las investigaciones en este as- Cuadro 4- Ventajas y desventajas del control
lmbolos), insectos, etc., que escapan a esta revisin. solubilizacin),degradacin de fitotxicos
pecto, ya que los microorganismos no presentan, en ge- biolgico de fitopatgenos
neral, el riesgo de toxicidad de los agroqumicos y los cos- Neutros o adhesin, liberacin de enzimas, compe-
Los microorganismos del suelo estn relacionados con variables tencia, alelopatas, flujo de nutrientes
tos de aplicacin son bajos. Ventajas
* Los microorganismos ofrecen mayor seguridad en el uso las plantas y sus interacciones, como vimos (captulo 13)
Perjudiciales fitotoxicidad, infeccin
en relacin a muchos agentes qumicos pueden ser benficas, neutras o perjudiciales.
Son muy empleados hongos y bacterias contra insectos
plaga de vegetales. * No se acumulan en las cadenas alimenticias Los efectos de los microorganismos rizosfricos sobre a
* Su persistencia y multiplicacin evita repetidas aplica- las plantas pueden resumirse en: Se sabe que la enfermedad est relacionada a complejas
Control integrado: prctica que resulta de la interacciones interacciones de tres componentes (tringulo de enfermedad):
cin de los anteriores, con el empleo de bajas dosis de Neutros: no afectan el crecimiento
* Raramente desarrollan resistencias como ocurre con
sustancias qumicas combinado con inoculantes biol-
agentes qumicos Benficos: existe creciente evidencia de que la microflo- Patgeno
gicos.
* Cuando se muestran menos efectivos que una sustan- ra saprofita de la rizosfera incluye componentes benfi-
Conceptos: existen muchas definiciones del control cia qumica, ambos se pueden combinar en las aplica- cos que pueden incrementar el crecimiento vegetal y los
ciones Ambiente y
biolgico, pero en sentido amplio se considera la re- rendimientos significativamente
Hospedero antagnistas
duccin de la cantidad de un patgeno o de la activi- * Los agentes biolgicos correctamente preparados y
dad que produce enfermedad en un vegetal, mediante aplicados no son considerados peligrosos para la eco- Deletreos: que pueden afectar negativamente el cre-
el uso de microorganismos, sus enzimas o sus genes. loga cimiento vegetal, sin necesariamente parasitar al teji-
Como el suelo cambia menos rpidamente que la atms-
En sentido ms acotado: se refiere a la introduccin do (alteraciones en el aporte de agua, iones y sustan-
fera sobre l, los microorganismos estn adaptados a este
artificial de microorganismos antagonistas o sus pro-
Desventajas cias promotoras del crecimiento vegetal, cambiando las
* La variabilidad gentica de muchos microorganismos selec- habitat relativamente estable. Las poblaciones de anta-
ductos o genes en el ambiente para controlar al pat- funciones y/o limitando el crecimiento de races)
cionados, obligara a una seleccin continua gonistas, patgenos y plantas fluctan dentro de ciertos
geno. Patgenos: disminuyen el rendimiento por produccin de lmites en respuesta a las interacciones biticas y abiti-
* La experimentacin requerida, que incluye ensayos de
enfermedades: numerosas bacterias, actinomicetes, hon- cas. Ligeros cambios en las condiciones del ambiente
laboratorio, invernculo y campo
Los procedimientos aplicados pueden variar (cuadro 3). gos producen enfermedades que provocan importantes pueden ejercer profundos efectos en poblaciones de pa-
* Las variaciones en los resultados de aplicaciones de cam- tgenos o antagonistas aislados. Los cambios produci-
po (efecto de suelos, clima, etc.)
prdidas en los cultivos
Las ventajas y desventajas del control biolgico de enfer- dos por la agricultura son en general rpidos, variados y
medades en vegetales han sido resumidas por Gould * La necesidad de asegurar su sobrevivencia en los sopor- En el cuadro 1 se ejemplifican algunos de estos efectos y permiten en poco tiempo recuperar el equilibrio biolgico.
(1990) y se presentan en el cuadro 4. tes ms empleados en los inoculantes comerciales en el cuadro 2 se sealan algunos de los microorganis- Pero el uso intensivo de fertilizantes, pesticidas, irrigacin,
mos con distintos efectos sobre los vegetales . labranzas y otras prcticas que tienden a incrementar los
Norris, J.R., D. Read y A.K. Varma (eds) Techniques for 2) Por qu a las micorrizas se les cataloga tambin como La evidencia de control biolgico se obtuvo en la dca- Un microorganismo efectivo en el control biolgico deber
Mycorrhizal Research, 1994, Academic Press, Lon- parasitismo controlado? da del 80 cuando monocultivos de trigo o cebada infec- realizar alguna de funciones presentadas en el cuadro 7.
don, New York 3) Describa en pocas palabras los tipos ms frecuentes tados con un hongo Gaeumannomyces graminis se tra-
Schenck, N.C. y Y. Perez Manual for the Identification de micorrizas taron con un suelo supresivo para la enfermedad (take-
of VA Mycorrhizal Fungi, 1988 Univ.Florida, Ganes- 4) Diferencias entre los endosimbiontes fngicos en las all), es decir un suelo que no permite el desarrollo de Cuadro 7- Propiedades de un microorganismo
ville, 241 pp ecto y endomicorrizas arbusculares este patgeno. antagonista
Sieverding, E. Vesicular-arbuscular mycorrhizal mana- 5) Posiblidades de aislamiento y propagacin de ellos a
gement in tropical agrosystems. 1991 GTZ Gmbh, Los suelos conductivos (que manifiestan la enfermedad) * Colonizar rpidamente la zona radical
los efectos de obtener inoculantes a base de micelio
Eschborn, 371 pp. se convirtieron en supresivos, sugiriendo la participacin
puro y seleccionado * Producir antibiticos que antagonicen a los microorganis-
Siqueira, J. O., F. M. de S. Moreira, B. M. Grisi, M. Hun- de un factor biolgico. En efecto, se encontr mayor n-
6) Por qu los plantines (pino, eucalipto, robles) en los mos patgenos
gria y R. S. Araujo Micorrizas. En: Microorganismos mero de pseudomonas fluorescentes antagonistas del
viveros ms tecnificados presentan bajo porcentaje de hongo en la rizosfera de trigo en relacin al resto del sue- * Producir compuestos que quelatan al hierro, como los lla-
e Processos Biolgicos do Solo: Pespectiva Am-
micorrizacin? lo. Actualmente, numerosas pseudomonas se reconocen mados siderforos, que hacen menos disponible este
biental, 1994 EMBRAPA-SPI, Brasilia, DF: 95-117
7) Formas de incrementar este ndice efectivas en el control de esta enfermedad. elemento para los patgenos
Smith, S.E. Y Read, D. J. Mycorrhizal symbiosis. 1997,
Academic Press 8) Cmo establecera si los carpforos dominantes en
* Competir por sustratos esenciales para el patgeno
bosques establecidos son micorrcicos? El control biolgico de enfermedades de races se puede
9) Si pudiera escoger hongos ectomicorrcicos entre hon- lograr de varias maneras (cuadro 5). * Competir con el patgeno por los sitios de infeccin
Preguntas de repaso gos saprofitas y otros comestibles, cual escogera
* Liberar nutrientes asimilables por las plantas (N, P, etc.) y
como inoculante y por qu? producir compuestos promotores del crecimiento de las
Cuadro 5- Prcticas de control biolgico
1) En qu momento de la evolucin las plantas necesita- 10)Perspectivas y futuros desafos en los estudios con plantas, como AIA, giberelinas, etc., que favorecen el de-
ron de hongos asociados? Qu ventajas adquirieron? hongos endomicorrcicos arbusculares. * Inoculacin directa de las bacterias u hongos selecciona- sarrollo de las plantas
dos en semillas o trozos de tallos (propagacin vegetativa)
* Moverse hacia zonas adecuadas de la raz y adherirse a
* Incorporacin en el suelo del vivero ella
* Control indirecto por cambios culturales que estimulan a * Emplear los sustratos disponibles
la microflora antagonista nativa
* Control integrado, como inoculacin de semillas con el * Competir con la microflora autctona
agente de control biolgico y dosis menores del agente * Multiplicarse sobre la raz
qumico
El cuadro 6 presenta algunas de las caractersticas que La habilidad de un organismo para colonizar la rizosfera
debe presentar un microorganismo para actuar como un del hospedante es uno de los principales requerimien-
antagonista ideal de un microorganismo fitopatgeno. tos para el xito del control biolgico de enfermedades
de raz.
Cuadro 6- Cualidades de un antagonista ideal
Si se inoculan las semillas, el microorganismo debe
* Genticamente estable multiplicarse en la espermatsfera antes de estable-
* Efectivo a bajas concentraciones cerse en la radcula emergente. La quimiostasis ayu-
* Poco exigente en requerimientos nutritivos da a desplazarse hacia exudados. La adhesin a la
* Capaz de sobrevivir en condiciones ambientales adversas raz mediante unin a glicoportenas, como las lecti-
* Eficaz contra amplio rango de patgenos nas, ha sido reconocida como un paso crtico en la
* Posible de cultivo en medios corrientes colonizacin. Los exudados radicales seleccionan
* Mantener el efecto en el tiempo
poblaciones rizosfricas y varan con el ambiente, la
* Que no produzca efectos secundarios
* Resistente a pesticidas
gentica y estado de desarrollo de la planta y afectan
* No ser patgeno para el hospedero la susceptibilidad de los cultivos frente a enfermeda-
des (captulo 13).
Mecanismos en el control biolgico Los pigmentos fluorescentes que permiten identificar a Cuadro 6 - Caractersticas de ecto y Allen, M.F. (ed) Mycorrhizal Functioning, An integrati-
estas pseudomonas constituyen muchas veces sider- endomicorrizas ve Plant-Fungal Process, 1991, Chapman & Hall,
Los antagonismos biolgicos se dan por: competencia, foros, como la pioverdina, seudobactina. Una prote- New York, 534 pp.
amensalismo, predacin, parasitismo (Kapulnik, 1991) na de membrana especfica (permeasa) transporta el Endomicorrizas Ectomicorrizas Alvarez, I. F. Ecologa, fisiologa e implicancias prcticas
(captulo 14). compelejo organo-metlico al citoplasma, donde siste- Presentes en un 97% Presentes en aprox.3% de fane- de las ectomicorrizas. En: Fijacin y Movilizacin de
mas ferrisiderforo-reductasa reducen el hierro y el re- fanergamas y algunos rgamas, sobretodo forestales Nutrientes, vol II, 1991, Coleccin Nuevas tendencias,
Competencia sultante hierro ferroso es liberado y asimilado por la rboles Consejo Superior de Investigaciones Cientficas, Ma-
Se da por nutrientes (C, N, S, P, Fe, micronutrientes, etc.), planta. El siderforo queda disponible para reiniciar el No visibles a simple vista Visibles macroscpicamente drid: 247-259
espacio, agua, O2, CO2, luz, etc. Una colonizacin agresi- ciclo. Bago, B.; Pfeffer, P. E.; Shachar-Hill. Y. Carbon metabo-
Estructuras dentro clulas Manto fngico, a veces colorea- lism and transport in arbuscular mycorrhizas. 2000,
va por estos antagonistas desplaza especies rizosfricas
Raz corticales de la raz: do, red de Hartig; hifas intercelu-
deletreas disminuyendo el riesgo de reduccin del creci- Clula A Plant Physiology 124: 949-957
SID
arbsculos, vesculas, lares, rara vez penetran en las
miento vegetal. Se reduce tambin el inculo de patge- y esporas clulas Barea, J. M., C. Azcon-Aguilar, J. A. Ocampo y R. Azcon
nos del suelo. Morfologa, anatoma y citologa de las micorrizas ve-
Fe+++ + SID Fe+++ + SID Forman carpforos, espo- En general forman carpforos sculo-arbusculares. En: Fijacin y Movilizacin Bio-
Metabolismo
ras y/o elementos de visibles (areos o hipogeos)
Competencia mediada por siderforos energtico a lgica de Nutrientes, Vol II, 199, Coleccin Nuevas
nivel celular rersistencia en el suelo,
A pesar de que el hierro es abundante en los suelos, CN- Asimilacin no visibles Tendencias, vol 18, Consejo Superior de Investigacio-
Clula B
est muchas veces no disponible para plantas y micro- reducida nes Cientficas, Madrid: 149-173
CN - Hongos no tabicados Basidiomycotina, Ascomycotina
organismos ya que su solubilidad es muy baja a pH neu- Dommergues, Y. y Mangenot, F. Ecologie microbienne
Zygomycotina micelio tabicado
tro y alcalino. Muchos microorganismos, sobre todo es- du sol. 1970, Masson, Pars
(Endogonales)
pecies de Pseudomonas producen sustancias orgnicas Dommergues, Y. Duhoux, E. Y Diem, H. G. Les arbres
quelantes, de bajo PM (figura 1), con elevada afinidad Figura 2- Mecanismo de accin de siderforos. A-clula Aislados de suelo y raz no Idem, cultivados en medios de fixateurs dazote. 1999 Co-edicin CIRAD/FAO/IRD/
por el ion frrico, denominados siderforos, que son productora de siderforos, B- clula de microorganismo crecen en medios usuales laboratorio a partir de esporas o Espaces 34, Pars
deletreo productor de cianuro. SID- siderforo de cultivo hifas
inducidos por bajas concentraciones de hierro y reprimi- Duhoux, E. y Nicole, M. Biologie Vgtal: Associations
dos por altas. Fructifican en presencia del No fructifican en medios de et Interactions chez les Plantes. 2004, Dunod, Pa-
hospedante laboratorio, salvo excepciones rs: 54-93
Muchos microorganismos deletreos producen HCN Frioni, L. Ecologa microbiana del suelo, 1990 Ed. Uni-
Inoculacin en pequea y Inoculacin con mantillo, esporas
(cido cianhdrico) que inhibe el metabolismo ener- mediana escala con esporas o cultivos de micelio y/o esporas. versidad de la Repblica, Montevideo
gtico a nivel de la CTE (figura 2). Los microorganis- o suelo y races de plantas Inoculantes comerciales Honrubia, M., P. Torres, G. Diaz y A: Morte, Biotecnolo-
mos productores de siderforos compiten con estos trampa ga Forestal: Tcnicas de Micorrizacin y Micro-
organismos por el hierro, inhibiendo el efecto delet- propagacin de Plantas, 1994, Universidad de Mur-
Pueden conservarse a baja Pueden conservarse mucho tiem-
reo en el cultivo. A pH inferiores a 6,0 el hierro dispo- temperatura por 1-2 aos po en medios artificiales cia, 167 pp.
nible (ferroso) aumenta y los siderforos son menos Le Tacon, E. (editor) Champignons et mycorrhizes en
efectivos. No se conocen especies Algunas especies comestibles y
venenosas ni comestibles otras altamente venenosas fret. 1997 Revue Forestire Franaise, N especial.
Ed. Ecole Nacional du Gnie Rural, des eaux et forts.
Para determinar si la produccin de estas sustancias es Requieren al hospedante No lo requieren
Nancy
la causa de la supresin de una enfermedad, se agrega para crecer
Malvrez, G., Major, G., Curbelo, V. y Frioni, L. Hon-
Fe soluble al sistema suelo-planta: si reaparece la enfer- gos ectomicorrticos en Eucalyptus grandis. 1997,
medad la competencia por el hierro puede haber sido la Agrociencia 1:38-43, Facultad de Agronoma, Mon-
causa de la supresin. tevideo
Figura 1- Esquema del siderforo seudobactina Bibliografa Marx, D. H., J. L. Ruehle y C. E. Cordell, Methods for stu-
Otra forma de demostrar esto es mediante el empleo dying nursery and field response of trees to specific
de mutantes siderforo negativas (sid-) obtenidas con Agerer, R. Characterization of Ectomycorhiza. En: Tech- ectomycorrhyza. En: Methods in Microbiology, vol
Estas sustancias favorecen las posibilidades de asimila- ayuda de transposonos (Tn5), su inoculacin no limita niques for Mycorrhizal Research, 1994, J. R. No- 23, Techniques for the Study of Mycorrhyza, 1991,
cin de este in por la bacteria productora en ambientes la enfermedad, pero si lo hace la recombinante con el rris, D. Read y A. K. Varma (eds), Academic Press: J. R. Norris,D. J. Read y A. K. Varma (eds), Academic
de baja disponibilidad, compitiendo con el microorganis- segmento de ADN productor del siderforo aislado de 25-73, London Press, London: 383-412.
mo deletreo o patgeno (figura 2). la cepa salvaje.
Resumen: perspectivas y aplicaciones de los distintos ti- 6) Micorrizas y plantas micropropagadas: muchas es- Numerosas bacterias y hongos producen siderforos, a b CI
N OH NO2
pos de micorrizas pecies hortcolas y forestales son micropropagadas in- como Azospirilluam, Rhizobium, etc. y en la seleccin de N
H
C
CI
N CI CI
N
H
vitro, en medio con agar y azcares y luego transplan- cepas para la preparacin de inoculantes se incluye la OH O N
1 2 1 2 N
1) Aumento del rea de exploracin del suelo: por los tadas a sustrato adecuado. Esta etapa constituye una produccin de siderforos para favorecer su supremaca OH OH
R1
filamentos vegetativos extra radicales, cerca de 1.000m fase de aclimatacin y con el fin de evitar estrs hdrico en ambientes con hierro no disponible. Muchos pigmen- N
H
+
N R2 H O
de micelio/m de raz. Es la principal funcin de las mi- y nutricional, se las inocula con hongos endomicorrci- tos fluorescentes aislados de Pseudomonas poseen la OH
N
CH3
corrizas, que de esta manera aumentan la nutricin micos (esporas, plantas trampa micorrizadas y picadas) propiedad de complejar el hierro e inhibir a hongos fitopa- 3 OH 4 3 4
N
neral de los vegetales. tgenos. La inhibicin es revertida por el agregado de hie- N R N O O
N N HC=C-C=C - CH=C=CH
7) Produccin de hongos comestibles: muchos hon- rro. La inoculacin de estas bacterias y su siderforo, H 2N O OH
2) Nutricin nitrogenada y fosfatada: el hongo asimila gos ectomicorrcicos son tambin comestibles, de modo pseudobactina, a suelos conductivos los convierten en 5 5
formas de N que la planta usa mal y pone a disposicin que las fructificaciones de ellos en bosques con espe- supresivos. Figura 3- Metabolitos secundarios producidos por
de las mismas aminocidos, pptidos y protenas, au- cies inoculadas son cosechadas y aportan otra fuente pseudomonas fluorescentes
menta adems, el nivel de nitrgeno mineral absorbi- de ingreso al productor forestal (Lactarius deliciosus, Este suelo revierte a su estado original conductivo por:
do. La planta absorbe ms fosfatos gracias a la capaci- trufas, como Suillus luteus, Cantharellus cibarius). Otros a) 1- fenacinas, 2- indoles, 3- pio compuestos 4-fenilpirroles
dad de los hongos de usar formas orgnicas y minera- hongos comestibles son saprofitas y algunos hasta pa- la adicin de hierro 5-pterinas b) Antibiticos representativos producidos por
les del P del suelo (ortofosfato) no asimilables por los tgenos: Agaricus, Amanita, Tricholome, por lo que no pseudomona: 1-pioleuterina, 2-pirrolnitrina, 3-tropolone, 4-
al bajar el pH, debido probablemente a una incrementa-
vegetales, acumulan P mvil (polifosfatos) y lo transfie- ofrecen esta dualidad de empleo: micorrizacin y co- piocianina, 5- cepacina A
da disponibilidad del hierro a bajos pH
ren enseguida a la planta (figura 12). Presentan fosfa- mercializacin.
tasas. Pseudomonas putida WCS358, seleccionada para papa
A modo de repaso el cuadro 6 compara caractersticas Amensalismo que increment rendimientos en 13% en el campo. Su
3) Otros beneficios: produccin de fitohormonas (auxi- de las ectomicorrizas y las endo del tipo arbuscular (A) y efecto es mayor en rotaciones cortas (unos 3 aos). Su
nas), aumento de resistencia a estrs hdrico, a toxici- en el figura 12 (Duhoux y Nicole, 2004) se compara el Uno de los principales mecanismos de control biolgico efecto es la produccin de siderforos limitando el hierro
dad a minerales como aluminio, manganeso, a la aci- funcionamiento de ambos tipos de micorrizas. Las ecto- es la produccin de metabolitos secundarios txicos, a la microflora deletrea que produce HCN.
dez, salinidad, proteccin frente a fitopatgenos. micorrizas excretan enzimas hidrolticas que le permiten como los antibiticos, o toxinas especficas como las
absorber formas orgnicas del N y P. La absorcin de bacteriocinas que actan sobre hongos patgenos in- Pseudomonas fluorescens 2-79, efectiva en maz con
4) Costo para la planta: estudios con CO2 marcado con formas solubles puede realizarse tambin a partir de que- duciendo fungiostasis, inhibiendo la germinacin, lisan- enfermedades producidas por Gaeumannomyces grami-
C14 demostraron que entre un 20 y 40% de los azcares latos (complejos organo minerales). Las hifas de los hondo el micelio o ejerciendo efectos fungicidas. Son mol- nis var tritici, por siderforos y antibiticos.
fotoasimilados son usados por el hongo. En las endo- gos endomicorrcicos de tipo arbuscular secretan fosfata- culas orgnicas liberadas por los microorganismos al
micorrizas arbusculares, son los arbsculos los lugar sas. Tambin se mejora la asimilacin de ciertos oligoele- ambiente donde pueden perder efectividad a distancia Pseudomonas fluorescens CHAO que produce el side-
es de intercambio carbonado entre ambos integrantes. mentos como Cu, Zn. de las clulas productoras porque son adsorbidas a los rforo pioverdina, cido saliclico y tres antibiticos, en-
coloides orgnicos o minerales o son degradadas qu- tre ellos pioluteorina
5) Inoculacin: la misma se efecta en plntulas en vive- Ectomicorrizas Endomicorrizas A mica o biolgicamente. La aparicin de resistencias en
ro. La mayor aplicacin se da actualmente en la pro- los patgenos, codificada en general en plsmidos, li- Las condiciones qumicas y nutricionales del suelo afec-
duccin forestal, inoculando los plantines con: suelo y mita muchas veces su efectividad. tan la produccin de los antibiticos: el pH, nutrientes in-
mantillo de bosques establecidos, carpforos picados, orgnicos, edad del cultivo. En medios de cultivo se ob-
o inoculantes a base de micelio puro de hongos .ecto- Las pseudomonas fluorescentes han sido consideradas para serv que estas sustancias se producen en la segunda
micorrcicos seleccionados. El efecto de las endomico- Aminocidos el control biolgico ya que producen gran nmero de meta- mitad de la fase estacionaria, cuando las fuentes minera-
rrizas arbusculares no ha sido an establecido en la agri- bolitos secundarios, (figura 3, a y b), muchos con accin les se agotan.
cultura a gran escala, pero se estima, que su introduc- Pelo antimicrobiana (1 a 5 figura 3a). Otras pseudomonas pro-
cin puede disminuir los niveles de fertilizantes requeri- absorbente
ducen potentes antibiticos (1 a 5, fig 3b) como tropolone, La evidencia del rol de estas sustancias en el control biol-
dos sobre todo en la fase de establecimiento de los cul- Fosfatasas bacteriosttico y bactericida de amplio rango de bacterias y gico se obtuvo a partir de los trabajos de Howell y Stipano-
tivos. La incapacidad de los hongos que forman mico- tambin fungicida. Producen tambin HCN. vic (1980) quienes aislaron de rizosfera de algodn una cepa
Fosfatasas
rrizas del tipo A de desarrollarse en cultivo puro consti- de P. fluorescens antagonista de de Rhizoctonia solani y
tuye la principal limitacin en estudios fisiolgicos, ge- P-orgnico Algunas pseudomonas han sido patentadas y se emplean Phythium ultimun, que produce dos antibiticos: pioleuto-
nticos, taxonmicos y por supuesto en la preparacin en inoculantes comerciales: rina, activa contra P. ultimum y pirrolnitrina, activa contra
de inoculantes. Figura 12 - Funcionamiento de ecto y endomicorrizas
R. solani. Esta bacteria inoculada en semillas de algodn lo Cuadro 9- Efecto del Fe en el antagonismo que la seleccin de cepas son las mismas que para rhizo- tratado con bromuro de metilo a los efectos de matar a
protegi de la enfermedad conocida como damping-off pro- afecta la germinacin de clamidosporas de bios. la poblacin nativa.
ducida por ambos hongos. La aplicacin de los antibiticos Fusarium oxysporum
a las semillas protegi a la planta de esta enfermedad. El nivel de fsforo de los suelos empleados debe ser Cuadro 5 - Efecto la inoculacin con rhizobio y
Antagonista % germinacin similar al de los suelos que van a ser inoculados. Gene- hongos endomicorrcicos en plantas de soja (media
Pero la confirmacin de este rol se realiza con el empleo -Fe +Fe ralmente se esterilizan los suelos en los ensayos mace- de 5 repeticiones), nivel de fosfato de roca 0,12%
de mutantes antibitico negativas, que no protegen a la Control 83 94 teros, pero se aconseja incluir un control no esterilizado
planta, mientras que la cepa parenteral si la protege asi para comparar el comportamiento del inculo con la po- Tratamiento Peso seco Peso seco N ndulos %
Pseudomonas 346 10 46 parte area raz (mg) por planta colonizacin
como la mutante complementada con el ADN responsa- blacin nativa de hongos arbusculares (Sieverding,
Pseudomonas NIR 15 50 (mg) micorrcica
ble de la sntesis del antibitico. 1991).
Enterobacter 12 40
Testigo 155 60 0 0
Otra clase de sustancias antimicrobianas producidas por El inculo: rhizobio (Rh) 161 64 6 0
bacterias son las bacteriocinas, efectivas contra micro- esporas colectadas mediante tcnicas trabajosas de ME3 162 63 0 62
organismos estrechamente relacionados (muchas veces El cuadro 10 presenta los resultados de un ensayo so- tamizado a partir de suelo rizosfrico MYV 161 68 0 67
de la misma especie). Uno de las primeras aplicaciones bre actividad antagonista ltica y de antibiosis contra Rhi- ME3 + Rh 320 117 16 88
comerciales para el control biolgico de enfermedades de zoctonia solani en suelos supresivos y conductivos para races colonizadas picadas MYV + Rh 357 136 16 90
races ha sido el uso de Agrobacterium radiobacter K84 este patgeno. Se aprecia que el efecto parece deberse
para el control de Agrobacterium tumefaciens causante al incremento en hongos totales y entre ellos a un anta- mezcla de suelo con races de plantas trampa (sor-
de la enfermedad conocida como agallas de corona, gonista natural productor de antibiticos. go, cebolla, etc.) inoculadas con esporas, crecidas y lue-
mediante la produccin de Agrocina 84, codificada por go sometidas a estrs (sequedad) a los efectos de que
un plsmido, cuya transferencia a cepas de A. tumefa- el hongo esporule (Anexo prctico).
ciens las convierte en resistentes. Cuadro 10- Anlisis del efecto antagnico de
bacterias y hongos sobre Rhizoctonia solani en El cuadro 5 publicado por Frioni, (1990), muestra los re-
El cuadro 8 muestra los resultados de un experimento de suelos supresivos y conductivos para el patgeno sultados de inoculacin de plntulas de soja con R. japo-
evaluacin del efecto de cepas de pseudomonas sobre nicum y una mezcla de esporas, hifas, micelio de hongos
hongos fitopatgenos in-vitro. Se aprecia que la cepa 374 Tratamiento %colonias %colonias bacterias hongos Trichoderma endomicorrcicos Glomus fasciculatus (E3) y Glomus mos-
con lticas totales totales spp
produce inhibicin por varios mecanismos simultneos inhibicin seae (YV) y de trozos de races colonizadas, con distintas
adems de por siderforos, mientras que la 429 lo hace dosis de fosfato de roca y el cuadro 6 informa los resulta-
Control 15 56 9,0 x 106 1,8 x 104 1,5 x 104
por competencia por el hierro, evidenciado por el levanta- dos de inoculacin de Pinus strobus con hongos ectomi-
miento de la inhibicin por el agregado del mismo. El cua- No supresivo 6 57 2,4 x 106 5,3 x 106 2,0 x 102 corrcicos (Smith y Read, 1997).
dro 9 muestra el efecto del Fe en el antagonismo entre Supresivo 17 63 2,7 x 106 1,2 x 108 4,0 x 104
Figura 11- Inoculacin de Acacia tortillis en suelo pobre en P
bacterias y un hongo. Se vuelve a apreciar la confluencia La figura 11 (Dommergues et al., 1999) presenta los y en N. 1R= inoculadas con rhizobio especfico: 1RM=inculo
de ms de un mecanismo de antagonismo. resultados de inoculacin de una especie de Acacia con doble, con rhizobio y el hongo endomicorrcico, 1RP= plantas
-1
Resumen: sobre el control biolgico mediado por side- Rhizobium y Glomus mosseae en suelo pobre en P y N con rhizobio y KH2PO4 (10mg P.kg suelo )
rforos
Cuadro 8- Efecto de Pseudomonas florescens en
el crecimiento de hongos. Inhibicin (mm) control in vitro a bajas concentraciones de Fe+3 y no en Cuadro 6- Crecimiento de plntulas de Pinus strobus ectomicorrizado y minerales absorbidos
altas
cepa 429 cepa 374
mayor rendimiento de cultivos en suelos privados de
-Fe +Fe -Fe +Fe Plntulas Peso seco Peso seco N (mg/planta) Fosfato Potasio
Fe+3
Botrytis cinerea 2,7 0 15,0 4,0 planta (mg) races (mg) (mg/planta) (mg/planta)
Cochliobolus sativus 3,8 0 9,5 4,2 agregado de pseudobactina al suelo: supresin enfer-
C. victoria 6,0 0 4,3 1,0
medades por Phytium y Gaeumanomyces ectomicorrizadas 404 175 5,00 0,789 2,97
Fusarium solani 0 0 0 0
Trichoderma hamatum 6,3 0 4,8 3,0 mutantes no productoras (sid-) pierden capacidad de
T. harzianum 6,5 0 4,6 1,3 no micorrizadas 331 166 2,45 0,239 1,55
supresin de patgenos en la rizosfera
* detoxificacin del medio: remocin de inhibidores, pre- ta. Los arbsculos son el sitio de intercambio carbonado Micoparasitismo te, aunque las tcnicas de manipulacin gentica en hon-
sentes en el suelo o producidos por los mtodos de es- entre ambos simbiontes, donde se regula la hidrlisis de la gos han prosperado menos que en bacterias. La mutag-
terilizacin, ejemplo, metales pesados sacarosa de la fotosntesis, por estimulacin de la inverta- El empleo de hongos como agentes de biocontrol se ha nesis en hongos es un proceso bastante inespecfico y se
sa de la planta como consecuencia de la acidificacin de la extendido mucho en los ltimos aos y la literatura es muy han realizado avances con la fusin de protoplastos a los
* produccin de sustancias biticas, solubles en agua interfase del arbsculo. amplia sobre resultados de antagonismo de patgenos, efectos de lograr la transferencia de caracteres de inters
o voltiles, como aminocidos, vitaminas, fitohormonas sobretodo de otros hongos (Howell, 1990). El grupo de asociados al biocontrol de una cepa de hongo a otra.
Hyphomycetes ms empleado en el control biolgico lo
* cambios en el pH, como en el caso de los solubilizado- Inoculacin integran los gneros: Verticillium, Trichoderma y Gliocla-
res de fosfatos (captulo 12) dium, los 3 son micoparsitos necrotrficos (matan inme-
La principal limitante en la inoculacin de plantines con diatamente del contacto con el hospedante) y buenos
* produccin de fitohormonas, como lo hacen bacterias hongos endomicorrcicos es la incapacidad de desarro- saprofitas que crecen en medios corrientes de laborato-
y otros organismos del suelo. Su balance resulta de fun- llarse en cultivo puro en medios de laboratorio, por lo rio. V. biguttatum se encuentra en asociacin con esclero-
damental importancia en la regulacin del crecimiento que no se cuenta al presente con inoculante a base de cios de Rhizoctonia solani y se usa en el tratamiento de
vegetal micelio. semillas de papa, donde reduce significativamente el n-
mero de esclerocios patgenos en los nuevos tubrculos.
Las clulas de la corteza colonizadas con hongos que for- Existen, sin embargo, numerosas publicaciones sobre
man MA incrementan las mitocondrias, retculo endoplas- efectos en los rendimientos de varios cultivos luego de El gnero Trichoderma contiene numerosas especies
mtico, clorofila, respiracin, tamao del ncleo y dismi- la inoculacin con Endogonaceae, sobre todo a nivel ex- usadas en el control biolgico seleccionadas por su capa-
nuyen su contenido en almidn y la invasin por hongos perimental. La inoculacin es promisoria en el caso de cidad de micoparasitar a otros hongos. T. harzianum es la
patgenos. plantas de valor econmico: ornamentales y micropro- especie ms empleada y el rango de especies sensibles
pagadas (citrus, caf, etc.). No se puede pensar por el incluye: Sclerotium rolfsii, Rhizoctonia solani, Phytium
Los hongos micorrcicos tanto ecto como endomicorrci- momento su uso en cultivos extensivos. Para que la aphanidermatum, Alternaria raphani, Fusarium roseum,
cos, pueden contribuir entonces a: inoculacin sea exitosa se deben reunir una serie de con- patgenos de muchos cultivos, como trigo, algodn. El
diciones: ataque se realiza envolviendo y penetrando a las hifas y
la mineralizacin de P orgnico por actividad de fos- estructuras de resistencia (figura 4)(Graham y Mitchell,
fatasas localizadas en arbsculos maduros e hifas inter- ausencia o bajo potencial de inculo de hongos en- 1998). La entrada se logra por orificios en la pared me-
celulares y domicorrcicos nativos diante la produccin de enzimas como 1-3 glucanasa y
quitinasa. El reconocimiento de las hifas est mediado
la solubilizacin de P insoluble (fosfato triclcico, hi- alta competencia del inculo en caso de que la pobla- por lectinas.
droxiapatita, polvo de roca) mediante la produccin de cin nativa sea alta y gran capacidad para estimular la
cidos. La seleccin de inoculantes se realiza incluyendo toma de nutrientes y el crecimiento vegetal. Especies de Trichoderma producen adems antibiticos
y fitoxinas, por lo que es son considerados importantes Figura 4- Colonizacin de Phytophtora cinnamomi. a) hifa
estas propiedades.
colonizada por un antagonista, Trichoderma sp. (T), b)
Las caractersticas requeridas para emplear un hongo que agentes de biocontrol. Se han sealado estimulaciones
hifas lisadas con bacteria (B) colonizando la superficie de
Beneficios para el hongo forma MA como inoculante son similares a las exigidas a del crecimiento en cultivos inoculados en suelos estriles, la hifa
Ya sealados en el caso de los hongos ectomicorrcicos: cepas de rhizobios: infectividad, efectividad, coloniza- lo que evidencia la produccin de sustancias del tipo de
reciben de la planta nutrientes, sobre todo hidratos de cin y sobrevivencia en la rizosfera y en el suelo. las fitohormonas. Otras especies incluyen T. hamatum, T.
carbono en las primeras etapas de la colonizacin. La koningii y T. viridi, que producen las tpicas esporas ver- Otros mecanismos
estimulacin en la produccin de clorofila y una alteracin Existe poca especificidad entre las asociaciones arbus- des en medios de cultivo.
en la permeabilidad de las membranas evitan prdidas de culares y las plantas. En cultivos anuales, la sobreviven- Se han propuesto otras explicaciones de los incremen-
energa en la fotofosforilacin y explican el hecho de que cia debe ser considerada para eliminar los costos de rei- Un representante del gnero Penicillum, P. vermiculatum tos en el crecimiento vegetal y la resistencia a enferme-
una incrementada actividad fotosinttica compensa el flu- noculacin. se emplea en biocontrol por combinacin de micoparasi- dades en plantas inoculadas con microorganismos de
jo de carbono hacia el hongo, evitando disminuir la mate- tismo y produccin de antibiticos. P. frequentans parasi- biocontrol:
ria seca de la planta. La seleccin inicial debe incluir hongos que produz- ta esclerocios de numerosos hongos.
can esporas que germinen rpidamente, hifas que crez- * enzimas lticas extracelulares que destruyen la inte-
Se ha demostrado con CO2 marcado que el hongo emplea can bien en el suelo y que colonicen extensivamente al Las investigaciones sobre las posibilidades de emplear gridad de las paredes de hongos, como quitinasas. Se
entre un 4 y un 20% de las hexosas producidas por la plan- sistema radical. Las condiciones experimentales para hongos como agentes de biocontrol avanzan rpidamen- ha demostrado que las hifas de Sclerotium rolfsii pueden
ser degradadas tanto por aislamientos de Serratia mar- los cuales los agentes de control biolgico representan les se vuelve muy alta, la morfologa del hongo cambia la respuesta a la micorrizacin est inversamente correla-
cescens como por extractos acelulares de la misma cepa slo un 1% (120 millones). Pero de stos, un 92% corres- drsticamente y eventualmente muere. Los fertilizantes cionada con el contenido de P lbil del suelo.
con actividad quitinoltica. La adicin de quitina al suelo ponde a preparaciones secas de Bacillus thuringensis (Bt) nitrogenados tambin afectan a esa simbiosis, pero no
incrementa el nmero de bacterias y actinomicetes, mu- que sintetizan cristales de protenas txicas en cultivos existe acuerdo sobre los mecanismos involucrados. Se Absorcin de P por las hifas El P32 se acumula en
chos de ellos inducen quitinasa afectando a la poblacin esporulados y son empleados como poderosos insecti- especula sobre la teora de los hidratos te carbono de estructuras fngicas, a partir de la fraccin soluble, en
fngica. cidas (figura 5). Bjrkman: el nitrgeno, al incrementar la sntesis de pro- ensayos de corta duracin. La fraccin asimilable o
tenas, disminuira el aporte de azcares que estimulan intercambiable de fosfato representa slo entre el 1 y
* eliminacin de microorganismos deletreos de la ri- El resto est integrado por una mezcla de productos la colonizacin endomicorrcica. En condiciones natura- el 5% del contenido total de P en los suelos. Los hon-
zosfera: estos organismos inhiben el crecimiento vegetal menores. les, se observa variacin en la sensibilidad de los distin- gos MA, al mismo tiempo que incrementan la capaci-
por produccin de metabolitos txicos, pero sin llegar a tos endofitos frente al nitrgeno. dad de absorcin de fosfato asimilable, pueden tam-
parasitar. Shippers et al, 1987) sugieren que uno de los bin solubilizar fuentes no disponibles o escasamente
principales grupos de bacterias deletreas son las pseu- Los pesticidas tambin afectan al proceso: muchos fun- disponibles. Las plantas micorrizadas responden al
domonas productoras de HCN. Como el hierro es nece- gicidas e insecticidas han sido referidos como inhibido- agregado de fuentes insolubles de P como fosfato de
sario para la produccin de HCN por estos microorganis- res. Es necesario tener en cuenta estos efectos en las roca, hidroxiapatita.
mos, tambin sugieren que los microorganismos del in- prcticas de inoculacin.
culo ejercen su efecto benfico compitiendo con ellos por Translocacin de P a lo largo de las hifas. Las hifas
el hierro. Las interacciones con otros microorganismos del suelo acumulan grandes cantidades de P que podra interfe-
afectan la germinacin y crecimiento de esporas de hon- rir en el metabolismo celular, lo que se evita por su
* generar resistencia inducida en plantas sensibles: gos que forman micorrizas MA: rpida conversin en polifosfato, osmticamente in-
se ha observado que cepas no patognicas de un hongo activo. Los grnulos, contenidos en vacuolas que pue-
patgeno prevn la infeccin por la cepa patgena. Se La inoculacin con esporas de hongos endomicorrcicos den representar entre un 16 y 40% del total de P en
explica este fenmeno por competencia entre ambas ce- y rhizobios ha tenido xito en la implantacin y rendimien- estos hongos, se evidencian en el microscopio electr-
pas por nichos ecolgicos similares en el suelo. tos de leguminosas: los rhizobios favoreceran la micorri- nico. La translocacin tiene lugar por corrientes cito-
zacin por la produccin de polisacridos y de poligalac- plasmticas rpidas. Los hongos poseen las enzimas
* inhibicin de la germinacin y crecimiento de hongos touronasa en el sitio de infeccin. Otras enzimas, como necesarias para la sntesis y degradacin de los poli-
por compuestos voltiles de la atmsfera del suelo, como Figura 5- Bacillus thuringensis, bioinsecticida (Bt). Ntese el las pectinolticas, producidas por bacterias del suelo, fa- fosfatos, asi como fosfatasas, cuyo nivel disminuye con
el etileno, amonio, ha sido ocasionalmente observado. cristal proteico oscuro vecino a la espora vorecen tambin la micorrizacin (proceso relacionado en la fertilizacin fosfatada.
gran parte a la produccin de enzimas, ya que los hongos
* aumento de la disponibilidad de nutrientes y pro- no parecen entrar por heridas). Transferencia de P a la planta. La interfase entre ambos
duccin de sustancias del tipo de las fitohormonas, Para este autor es necesario tener en cuenta una serie de facilita los intercambios, se ha referido un incremento en
como el AIA, giberelinas, citoquininas, que ha sido verifi- consideraciones para lograr competir con los agentes qu- Se apreci que el cultivo respondi positivamente a la la permeabilidad de la membrana de la hifa inducida por
cada en cultivos microbianos, se postula como causa de micos de control (cuadro 11). accin conjunta de rhizobio y endomicorriza MA, en pre- el hospedero, la transferencia de fosfatos estara acopla-
control de enfermedades. El cultivo se desarrolla ms tem- sencia de fosfato de roca, incrementando su peso seco da de alguna manera a la transferencia de carbohidratos
pranamente y su poblacin rizosfrica puede competir con y nodulacin. La inoculacin conjunta permiti un apro- desde el mismo.
el patgeno. Limitaciones para la comercializacin de ino- vechamiento ms eficiente y rpido del fertilizante fosfa-
culantes para biocontrol tado. Otros beneficios:
* numerosos minerales son absorbidos en mayor grado
Desarrollo de agentes para el control Los obstculos principales en el biocontrol por adicin al por plantas micorrizadas con hongos tipo MA, pero no
biolgico suelo o a las semillas de antagonistas de plagas lo cons- Beneficios mutuos existen referencias sobre absorcin incrementada de
tituye el escaso desarrollo de tcnicas de cultivo de gran iones mviles en el suelo, como los nitratos. La toma de
A pesar de los mltiples ejemplos publicados en los lti- volumen de biomasa microbiana y la introduccin de mi- Beneficios para la planta agua parecera estar incrementada y la resistencia a
mos aos sobre el xito en la aplicacin de organismos croorganismos en sistemas de produccin en forma se- En general cultivos creciendo en suelos deficientes en P condiciones de sequedad se atribuye a la capacidad de
para el control biolgico de enfermedades de races, ha gura y de bajo costo. responden rpidamente a la inoculacin y en las primeras la planta micorrizada para mantener un adecuado nivel
habido escaso desarrollo de formulaciones comerciales. semanas ya se aprecian diferencias en el desarrollo de de fsforo ya que la baja humedad disminuye la movili-
Powell (1993) seala que el mercado de agroqumicos en Se han empleado medios slidos como arcillas expandi- plntulas inoculadas y a los pocos das se visualizan los dad de los iones fosfato, ms que a un efecto directo
el mundo es de cerca de 12 mil millones de dlares, de das, residuos de cereales, granos de cebada, para el cul- arbsculos intracelulares. En general, se encuentra que sobre la absorcin del agua.
MA, observando segmentos de 1 cm a intervalos regula- tivo de hongos con fines de aplicacin masivas, pero no plagas. Goult (1990) y Campbell (1990) sealan algu-
res. Esta longitud puede llegar a un tercio del total en mu- se adaptan bien a las fermentaciones usuales en medio nas de las lneas futuras de investigacin en el tema (cua-
chas plantas cultivadas y superar 70-80% (Honrubia et lquido. Tambin se estn aplicando soportes orgnicos dro 12).
al., 1994; Sieverding y Barea, 1991), en plantas inocula- del tipo alginato de sodio, que encapsulan propgalos de
das, en vivero. hongos y de Frankia, as como bacterias (rhizobios, pseu-
domonas) en soluciones acuosas de compuestos que for- Cuadro 12- Investigaciones necesarias en el tema
man geles (mezclas de alginato de sodio y cloruro de cal- de control biolgico
Ecologa cio), ofrecen la facilidad de mantener viables a los incu-
los y de ocupar pequeos volmenes al secarse. En el * Dilucidacin de los mecanismos involucrados en diferen-
Muchos son los factores que afectan la formacin y desa- momento de uso, estos cristales de alginato de calcio, se tes tipos de suelos
rrollo de las micorrizas MA. La fotosntesis es uno de los disuelven con un buffer adecuado que se usa como ino- * Identificacin de parmetros ambientales que afectan la
ms importantes, pero el manejo de los cultivos (fertiliza- culante (Anexo prctico). colonizacin radical
cin, biocidas, rotaciones), la abundancia de inculo en
* Desarrollo de procedimientos ms eficientes de seleccin
los suelos, la susceptibilidad de la planta, las condiciones Cuadro 11- Consideraciones en el empleo de de cepas y de formulacin de productos comerciales
de temperatura, humedad, pH, estacin del ao, afecta- tcnicas de control biolgico
rn el grado y la eficiencia de la asociacin. * Identificacin de los genes que codifican produccin de
* Los agentes de control biolgico presentan un espectro siderforos, de antibiticos y los que permiten la coloniza-
estrecho, no slo en trminos de hospedante, sino del cin de las races
Fotosntesis: con CO2 marcado se demostr la transfe-
rencia de compuestos carbonados hacia el hongo. Som- ambiente, incluido el pH, tipo de suelo, humedad, tempe- * Lograr avances en la modificacin gentica de cepas para
breado o corte de la parte area afectan la micorrizacin. ratura. producir agentes superiores de biocontrol, con mayor ran-
El efecto estacional incide en la colonizacin, sta aumenta * Considerar los costos de seleccin, produccin y formula- go de hospedantes y suelos a ser aplicados
en la estacin de activo crecimiento vegetal. cin de los inoculantes
* Considerar que efectos de laboratorio muchas veces no se
La incidencia de la micorrizacin es mayor cuando la acti- reproducen en el campo y se necesitan numerosas expe-
Alternativas a la inoculacin
vidad biolgica del cultivo es ms intensa, con preponde- riencias antes de poder recomendar un agente biolgico Muchas prcticas de manejo conducen al control de mi-
rancia de arbsculos, responsables de los intercambios croorganismos fitopatgenos por estimulacin de la mi-
* Emplear el producto en el sitio de accin (semilla, suelo) croflora antagonista naturalmente presente, a veces en
nutritivos con el hospedante. Las hifas y esporas contri- resulta crtico, sobretodo en ausencia de movimientos de
buyen a la propagacin del endofito y las vesculas alma- bajo nivel, en los suelos. Algunos ejemplos de estas prc-
agua
cenan nutrientes que el hongo moviliza en condiciones ticas incluyen:
adversas. * Los ms efectivos agentes de control biolgico son aque-
llos que poseen un nicho que pueden colonizar rpida- rotaciones de cultivos: el patgeno al no encontrar la
Figura 10- Estructuras de hongos endomicorrcicos: esporas, mente y sin competencia de la poblacin indgena rizosfera de la planta sensible (determinada por la natura-
Otros factores del ambiente, como la luz y la temperatu-
vesculas y arbsculos.
ra, afectan el desarrollo del hospedante y por ende la dis- * Lograr buen desarrollo en medios simples de laboratorio, leza de exudados) germina y muere al no poder competir
ponibilidad de nutrientes para el hongo. Existe correla- de bajo costo, asi como formulaciones sencillas que ase- con la poblacin nativa por los nutrientes, espacio, etc.
Las hifas que se desarrollan dentro de la raz estn co- cin entre grado de colonizacin y nivel de hidratos de guren viabilidad por perodos de tiempo que permitan su
nectadas a un fino micelio que se extiende en el suelo carbono en jvenes plntulas. distribucin. incorporacin de enmiendas orgnicas, como pajas,
vecino. Los pices radicales no se presentan frecuente- abonos verdes, que provocan una eclosin microbiana
mente colonizados, como tampoco las races gruesas La temperatura del suelo parece afectar ms la actividad en respuesta a los nutrientes aportados por el residuo
fisiolgica de la micorriza que su desarrollo La produccin de inculos en fermentadores y su adicin orgnico. En esta poblacin estimulada se encuentran
Las esporas presentes en las clulas colonizadas y en el a turba (como en el caso de rhizobios) parece ser otra antagonistas que por los mecanismos sealados en
suelo vecino. Su morfologa permite la caracterizacin de alternativa para estos inoculantes.
La aireacin: la escasa colonizacin en suelos inunda- este captulo (antibiosis, competencia, predacin, para-
especies (Schenck y Prez, 1988) luego de trabajoso pro-
dos est relacionada a la falta de oxgeno sitismo), logran disminuir o eliminar a la poblacin dele-
cedimiento de aislamiento a partir se suelo rizosfrico por Finalmente: se piensa que a pesar del trabajo de selec- trea o patgena.
tamizado hmedo (Anexo prctico). cin, propagacin y evaluacin de efectos de los inocu-
La fertilizacin afecta el establecimiento del hongo. La
Se suele determinar la longitud de la raz con alguna de inhibicin por fosfatos solubles ha sido bien documenta- lantes biolgicos, su menor impacto en el ambiente los Cuando los antagonistas nativos son escasos o inade-
las estructuras de los hongos que forman micorrizas tipo da: cuando la concentracin de P en los tejidos vegeta- convierte en alternativas promisorias en la lucha contra cuados, se pueden introducir agentes seleccionados de
biocontrol o sus genes, que puedan mantenerse luego El cuadro 14 resume algunos datos histricos en el uso Germinacin de las esporas y crecimiento de las hi- una latencia inicial atribuida al desarrollo de las pln-
de la aplicacin al suelo. Se pueden construir microor- de los microorganismos como agentes promotores del fas: las esporas plurinucleadas germinan en el suelo o tulas y germinacin de esporas, el crecimiento del tubo
ganismos rizosfricos competentes mediante ingeniera crecimiento vegetal. in-vitro, se forma un tubo germinativo cenoctico. El hon- de germinacin y la colonizacin (20-25 das)
gentica, desarrollados a gran escala y que pueden ser go responde a exudados radicales aumentando signifi-
aplicados a partes vegetales subterrneas en ambien- cativamente el crecimiento de los filamentos y las rami- intenso desarrollo de la micorriza, de unos 30 das,
tes conductivos para su establecimiento, crecimiento y Cuadro 14- Breve historia del uso de ficaciones. Se ste no se encuentra con una raz com- coincide con crecimiento de la parte area y del micelio
dispersin. microorganismos como promotores del patible, el crecimiento se detiene. externo, facilitando las colonizaciones
crecimiento vegetal
Si los procedimientos anteriores no son eficientes, se pro- Entrada a la raz: en la proximidad de una raz compa- fase de equilibrio, donde la proporcin de races mico-
cede a la inoculacin de semillas repetidamente con cada * 1958 ex URSS inoculacin de 10 7 ha con A. chroococcum tible, el crecimiento del tubo germinativo es estimulado rrizadas y no micorrizadas permanece constante, coin-
cultivo. y B. megaterium var. phosphaticum (bajos incrementos) por variados factores, como CO2, exudados, etc. y las cide con la etapa de fructificacin del hospedante y con-
* 1974 se preparan y comercializan inoculantes en pequea ramificaciones sucesivas penetran en la raz. Se ob- tina hasta la senectud.
Si bien la tendencia es la seleccin, produccin y patenta- escala en varios pases servan estructuras especializadas llamadas apresorios,
miento de un solo microorganismo por producto comer- englobamientos redondeados de hifas, cuya pared im- Las endomicorrizas colaboran con la nutricin del vegetal
* 1978 resultados favorables con Pseudomonas (se mantie-
cial, la mezcla de microorganismos puede resultar ms pregnada de melanina se espesa y asegura una pre- durante el perodo de mximo desarrollo.
nen y desarrollan en la rizosfera) Kloeper y Schroth: uso
eficaz, ya que simulan la microflora natural que acta en de la sigla PGPR
sin osmtica elevada. Los apresorios se forman por
la supresin de una enfermedad. Se usan inoculantes con _
molculas liberadas por el hospedero. Los filamentos Las estructuras fngicas caractersticas son (figura 10)
rhizobio y/o hongos micorrcicos que estn acompaados * 1986 Schipers obtiene mutante sid (Tn5) de P. fluores- se propagan en la exodermis y el parnquima cortical,
de algn microorganismo de biocontrol, como Pseudomo- cens WCS 358 que no promueve crecimiento de papas sin llegar nunca a la endodermis. Hidrolasas degradan Los arbsculos que se forman por repetidas divisiones
en campo, si lo hace su recombinante sid+ dicotmicas de una hifa, presentan el aspecto arbores-
nas, Bacillus, etc. la pared de la planta provocando la progresin del fila-
* Se incrementan los trabajos en bacterias: P. fluorescens, mento fngico, bajo el efecto de una presin hidrostti- cente caracterstico, llamados tambin haustorios o apre-
El uso masivo de estos productos depende de los cos- P. putida. Bacillus, Azospirillum, hongos: Thrichoderma, ca elevada. sorios, con gran superficie de intercambio con el hospe-
tos de produccin, de la estabilidad gentica de los Penicillum, Cladosporium, Gliocladium dante y es a este nivel que se realizan la transferencia de
agentes empleados, de su eficacia en varios ecosiste- Colonizacin radical: en el desarrollo del hongo sim- nutrientes (C, P, etc.). Presentan viabilidad slo por algu-
* 1993 mercado agroqumicos en el mundo U$S 12.106,
mas. agentes biolgicos 1% (120 millones de dlares), 92% bitico, aparecen las estructuras tpicas de estas aso- nos das, son digeridos por la planta y su formacin reco-
corresponde a Bt (Bacillus thuringensis). ciaciones, los arbsculos y las vesculas. mienza.
El cuadro 13 presenta resultados de aplicacin de tcni-
cas de control integrado en el caso de podredumbre blan- Desarrollo de hifas externas: la colonizacin se Las ramificaciones de los arbsculos estn limitados por
ca causada por Sclerotium cepivorum, con un fungicida completa por activo desarrollo de hifas extraradica- una membrana periarbuscular de origen vegetal que ro-
(Iprodione) y un antagonista Trichoderma harzianum. Se Bibliografa les, muy ramificadas y finas que estn involucradas dea la pared fngica muy fina y acompaa a la hifa. Esta
aprecia el efecto benfico de ambas cepas de pseudomo- en la nutricin mineral del hongo. Constituyen una membrana presenta modificaciones funcionales importan-
nas y la ventaja de aplicar control integrado. Sin embar- Campbell, R. Biological Control of Soil-Borne Diseases. nueva estructura funcional en la nutricin mineral de tes: se ha detectado actividad ATPasa muy activa, ausen-
go, frente a los desafos de mantener el ambiente libre de En: Brighton Crop Protection Conference- Pests la planta (N, P). te en races no micorrizadas,que podra estar implicada
biocidas, la eleccin parece inclinarse por el uso de los and Diseases, 1990, Brighton, Section 7A-2 en el transporte a travs de la membrana en esta simbio-
agentes biolgicos. Fulchieri, M. Produccin de giberelinas por Azospirillum Resumiendo: el hongo endomicorrcico presenta dos tisis (fosfatos hacia la planta).
spp. y efecto de la inoculacin sobre el contenido de pos de hifas: las de infeccin con crecimiento centrpeto
Cuadro 13- Control integrado giberelinas en la raz y la promocin del crecimiento en relacin a la raz y las hifas extraradicales, de creci- Las vesculas son estructuras de gruesas paredes, que
en maz (Zea mays, L). 1992, Tesis Doctor en Cien- miento centrfugo. El aporte de esqueletos carbonados por se desarrollan en extremos de hifas inter o intracelular-
Tratamiento % de infeccin cias Biolgicas de la Universidad Nacional de Ro Cuar- parte de la planta asegura el equilibrio de esta simbiosis. mente, a medida que la infeccin progresa, aunque se
to, 170 pp las ha descripto en etapas tempranas de la colonizacin.
Ninguno 74 La ltima etapa se caracteriza por la degradacin de Se encuentran en general en las capas superficiales de
Graham, J.H. Y Mitchell, D. J. Biological Control of Soil-
Iprodine 51 los arbsculos, la clula colonizada retoma la estruc- la raz y funcionan como rganos de almacenamiento
borne Plant Pathogens and Nematodes. En: Princi-
T. harzianum cepa T 18 tura habitual. de grasas, aceite y colaboran en la propagacin del en-
ples and Applications of Soil Microbiology, 1998,
T. harzianum ipro 25M 13 dofito. El hongo determina su formacin y morfologa.
(eds) Sylvia, Fuhrmann, Hartel y Zuberer, Prentice Hall,
Iprodione + T.h cepa ipro 25M 6 Se reconocen tres fases en el desarrollo de las endomi- Algunos hongos como Gigaspora y Scutellospora no las
Ney Jersey: 427-446
corrizas forman.
Gould, W.D. Biological Control of Plant Root Diseases by Preguntas de repaso

Bacteria. En: Biotecnology of Plant-Microbe Interac-
tions, 1990, J.P. Naskas y Ch. Hagedorn (eds) Mac 1) Cmo afectan las plantas la dinmica del equilibrio
Graw-Hill, New York: 287-317 entre los microorganismos en el suelo?
Howell, Ch.R. Fungi as Biological Biocontrol Agents, en 2) Qu acciones de los microorganismos pueden afec-
Biotechnology of Plant-Microbe Interactions, 1990, tar negativamente a las plantas? Seale algn ejem-
J.P. Naskas y Ch. Hagedorn (eds) Mac Graw-Hill, New plo
York: 257-286 3) Qu mecanismos utilizan los microorganismos para
Howell, C.R. y R. D. Stipanovic, Suppresion of Pythium limitar poblaciones de patgenos vegetales?
ultimum induced damping-off of cotton seedlings by 4) Seale procedimientos que le permitan demostrar al-
Pseudomonas fluorescens and its antibiotic pyoleuto- guno de esos mecanismos como involucrados en el
rin, 1980, Phytopalogy 70: 712-715 control biolgico de microorganismos fitopatgenos.
Kapulnik, Y. Plant-Growth-Promoting Rhizobacteria. En: Plant 5) Caractersticas importantes en la competencia rizosf-
Roots, the Hidden Half, 1991, Waisel, Y., A. Eshel y V. rica de microorganismos del suelo?
Kafkafi (eds), Marcel Dekker, New York: 717-729 6) Por qu muchas veces una mezcla de agentes de
Shippers, B., Bakker, A.W. y P.A.H.M. Bakker Interactio- control puede resultar ms efectivo que el uso de un
ns of deleteterious and beneficial rhizosphere micro- solo microorganismo?
organisms and the effect of cropping practices. 1987 7) Pasos a seguir en la elaboracin de un producto biol-
Ann. Rev. Phytopatology 25: 339-358 gico a usar para control de una fusariosis en raz de
Powell, K.A. The commercial exploitation of microorganisms trigo.
in agriculture. En: Exploitation of Microorganisms, 1993, 8) Discuta los trminos: control qumico, control integra-
D.G. Jones(ed), Chapman & Hall, London: 441-459 do, control biolgico
Los microorganismos en
los alimentos y la industria
19 Fermentacin lctica y alcohlica.

Aplicaciones biotecnolgicas ....................................................... 341
20 Aplicaciones industriales de los

microorganismos ........................................................................... 357
metanognicas, son los ms antiguos en la escala biol- Bibliografa

gica (ms de 3.000 millones de aos), deben haber teni-
do suficientes oportunidades para evolucionar y cambiar Dehority, B. A. Rumen Microbiology, 2003, Nottingham
hacia mayor eficiencia. University Press, Londres, 372pp
Hobson, P. N., Stewart, C.S. Rumen Microbial Ecosys-
18
Parecera ms oportuno, para este autor modificar los tem, 1997, Kluver Academic Publishing, London
materiales vegetales, hacindolos ms degradables por
la microflora. Cita, sin embargo, casos de xitos en la ino-
Hungate, R.E. The Rumen and Its Microbes, 1966 ,Aca-
demic Press, N.Y., London Procesos microbianos en el rumen
culacin de microorganismos que degradan mimosina, Orskov, E.R. y M. Ryle Energy Nutrition in Ruminants,
aminocido txico contenido en Leucaena, ausentes en 1990 Elsevier Applied Science, London, N.Y.
la mayora de los rumiantes. Prescott, Harley y Klein. Microbiologa. 1999 McGraw-
Hll.Interamericana
Stewart, C.S. y M.P. Bryant, The Rumen Bacteria. En: The Los rumiantes constituyen un grupo de animales herbvo- Alimento inicial
Conclusiones Rumen Microbial Ecosystem, 1988 Hobson, P.N. ros con un estmago dividido en cuatro compartimentos y Bolo alimenticio
(ed), Elsevier Applied Science, London, N.Y. rumian un bolo alimenticio parcialmente digerido. Ejem-
plos: el ganado vacuno, ovino y caprino, alces, camellos, Esfago
Esta breve descripcin del ecosistema del rumen trat de Stewart, C.S. The Rumen bacteria. En: Rumen Mi-
evidenciar su complejidad y dinamismo. Las interaccio- crobial Metabolism and Rumiant Digestion, 1991, ciervos, jirafas y bfalos.
Omaso Rumen
nes microbianas son all numerosas y es precisamente la Jouany, J.P. (Ed), INRA Editions, Pars. Intestino
flexibilidad de este complejo sistema que hace posible la Theodorou, M.K.; S.E. Lowe y A.P.J. Trinci Anaerobic fungi Todos estos animales poseen una porcin dilatada en delgado
conversin de un amplio espectro de sustratos en cidos and the rumen ecosystem. 1992 Micology Series, vol su tubo digestivo donde los alimentos fibrosos volumi-
grasos voltiles de los cuales depende el rumiante para 9, Marcel Dekker, N.Y.:43-72 nosos, que forman gran proporcin de su dieta, pueden
obtener energa. Van Soest, P.J. Nutritional Ecology of the Ruminant, ser detenidos y sufrir una serie de fermentaciones, que
1994, Cornell University Press, Ithaca, London los hacen disponibles para su asimilacin (figura 1)(Pres-
Las predicciones sobre la marcha de las fermentacio- Wolin, M.J. The rumen fermentation: a model for mi- cott et al, 1999). Abomaso
nes resulta difcil dada la suma de factores que inci- crobial interaction in anaerobic systems. 1979, Adv. (estmago verdadero) Retculo
den: ambiente, especie animal, dieta. En general, la Microb. Ecol. 3: 49-77 La parte superior del estmago se expande para formar
activa fermentacin de sustratos celulsicos resulta en una gran bolsa, denominada rumen, y un pequeo retculo
mayores proporciones de cido actico. La fermenta- o redecilla. La parte inferior del estmago est constituida Figura 1- Estmago de un rumiante. Las flechas sealan la
cin de almidn resulta en mayor proporcin de cido Preguntas de repaso por una antecmara, el omaso, detrs de la cual se sita el direccin del alimento
propinico. verdadero estmago (abomaso). Los polisacridos insolu-
1) Por qu el ambiente del rumen es muy particular? bles y la celulosa se mezclan con la saliva y pasan al ru-
Los tipos de fermentacin con dietas ricas en azca- 2) Cmo funcionan los microorganismos en este ambiente? men, donde sufren movimiento de rotacin constante y for- Estos animales aprovechan la accin de los microor-
res, incluyendo melazas, es difcil de predecir. Efec- 3) Explique brevemente las transformaciones de la celu- man una masa pulposa que es atacada por una activa po- ganismos que habitan su tracto gastrointestinal y que
tos asociativos positivos o negativos pueden resultar losa hasta los compuestos que son absorbidos por el blacin microbiana (1012 bacterias/mL). Luego el alimento son los principales agentes de la degradacin de las
cuando se combinan alimentos. Muchos de los lti- animal pasa al retculo y de all es regurgitado en forma de bolo paredes gruesas de los vegetales y permiten la asimi-
mos efectos pueden minimizarse regulando el rgi- 4) La metodologa de estudio resulta sencilla? Por qu? alimenticio que el animal rumia. El alimento se mezcla con lacin de hidratos de carbono complejos ingeridos por
men alimenticio, el grado de procesamiento de los 5) Se puede alterar la microbiologa del rumen? saliva, se traga de nuevo y vuelve al rumen al tiempo que el animal.
granos y el tipo de concentrado adecuado a cada com- 6) De donde se origina el metano eliminado por el ganado? llega otro bolo a la boca. En estas etapas el material va
binacin nutritiva. 7) Cmo se puede regular el funcionamiento del ru- siendo digerido y se hace ms lquido. Como los rumiantes no pueden sintetizar celulasas, apro-
men? vechan las relaciones simbiticas con microorganismos
Numerosos intentos de mejoramiento de la actividad de 8) Qu sucede con la lignina de las ingestas? Este material pasa entonces al retculo y de all a la par- anaerobios que las poseen.
los microorganismos del rumen se llevan adelante e in- 9) Seale algunos ejemplos de sinergismo entre microor- te inferior del estmago: al omaso y luego al abomaso
cluyen manejo de la dieta, de aditivos (antibiticos, sus- ganismos del rumen (estmago verdadero) donde el alimento es atacado por El rumen es un ecosistema microbiano complejo, donde
tancias tampones, antiprotozoarias), que tienden a incre- 10) Analice los gases que se liberan en los rumiantes y su las enzimas digestivas normales del animal y el proceso coexisten relaciones simbiticas entre el animal y las po-
mentan el nivel nutritivo del animal. relacin con el efecto invernadero de digestin contina en forma similar al resto de los blaciones microbianas. Los alimentos ingeridos son fer-
mamferos. mentados y los productos finales son cidos grasos vol-
tiles (AGV) y fuentes de energa para el animal (figura Se produce biomasa microbiana rica en protenas, hidra- Interacciones entre bacterias y protozoos conversin de propionato, butirato y otros AGV), no
2)(Prescott et al., 1999). tos de carbono y lpidos que son usados por el animal. El ocurre en el rumen y la produccin a partir de AGV es
sistema presenta un rango de potencial de oxido-reduc- La interaccin ms sorprendente es la dependencia entre un proceso muy lento. Methanobacterium ruminantium
a) cin entre250 a 450 mV. Los rangos de temperatura los ciliados y las bacterias por los aminocidos. La elimi- se encuentra presente en alta concentracin en el ru-
Boca Rumen Flujo sangineo varan entre 38 y 42 C nacin de los ciliados incrementa hasta 3 veces el nme- men. Methanosarcina barkeri ha sido aislada de rumen
hacia las clulas
Material Celulosa y otros hidratos ro de bacterias. Las bacterias emplean tanto las prote- de vacas y ovejas, crece lentamente con H 2 y CO2, for-
vegetal de carbono complejos
Los microorga-
El balance de microorganismos en el rumen es regulado nas como la amilopectina de los ciliados lisados. ma CH4 a partir de grupos metilos (metanol y metilami-
+
nismos hidrolizan
el enlace (1 4)
por las condiciones del ambiente en el mismo (incluyendo nas) y no compite por el H2 con otros metanognicos.
Rumia
+
el sustrato) y se considera un sistema continuo. Algunas bacterias pueden funcionar simbiticamente, den- Methanobrevibacter spp. es probablemente el meta-
Regurgitacin
Saliva
D-glucosa + celobiosa tro de protozoos, otras permanecen independientes o pue- nognico ms significativo en el rumen bovino, pero se
Fermentacin El rumen ha sido comparado a un fermentador: su tempe- den interactuar con los ciliados, por ejemplo las bacterias requieren mayores estudios para caracterizar a las es-
microbiana
ratura y estado anaerobio son estables, las fluctuaciones metanognicas se adhieren a varios Entodiniomorphes pecies actuantes.
Acidos actico, pro-
de pH son limitados. Pero se diferencia de un dispositivo cuando el H2 es limitante. El H2 generado por los ciliados
Principal fuente
CH4+CO2+H2 Eructacin pinico,butrico, de energa industrial en que la composicin qumica y la estructura de puede ser la principal fuente de metano en el rumen. Mu- Casi todo el H2 producido es empleado por las bacterias
valrico, frmico
los sustratos ingeridos, varan amplia y rpidamente. chos ciliados absorben trazas de O2 del lquido ruminal, metanognicas (transferencia de H2 interespecie). Aproxi-
Pectina Hemicelulosa Celulosa Almidn
manteniendo el ambiente anaerobio. madamente 800 litros de H2 se producen y se usan dia-
b) El rumen, es en esencia, un sistema anaerobio muy reduc- riamente para formar 200 litros de CH4 en una vaca de
Acido galacturnico Xilobiosa Celobiosa tor, un medio ligeramente cido, de pH fijo, isotrmico, con La celulolisis se ve incrementada cuando se asocian 500 kg y slo trazas de H2 se acumulan en la fase gaseo-
Xilosa Glucosa Maltosa
una temperatura de unos 39oC y con una fase gaseosa bacterias y ciliados; este sinergismo fue verificado in- sa del rumen (Hungate, 1966).
compuesta principalmente de CO2, metano y nitrgeno. El vitro. Otro de los roles importantes de los protozoos es
Xilosa Va de las Glucosa-6-P Glucosa-6-P
pentosas pH se mantiene relativamente constante (6-7) por la absor- estabilizar el ambiente: secuestran rpidamente al al- Interacciones y proporciones de AGV
fosfato
cin de de los cidos grasos por la pared del rumen o por midn y azcares solubles, restringen la formacin de Existe considerable inters en alterar las fermentaciones
Fructosa-6-P neutralizacin por sistemas tampones de la saliva. cido lctico y limitan las fluctuaciones del pH. La libe- en el rumen para incrementar la eficiencia de productos
(Va de Embden-Meyerhof)
racin de AGV a partir de las reservas de amilopectina ruminales. Los aditivos alimenticios, como los ionforos
El objetivo de una dieta diaria balanceada para el ganado de los ciliados, contribuye a la nutricin del husped Monensina o Rumensina y Lasolacida, inhiben a los pro-
Piruvato
CO2 + H2 + CO2 + H2 +
-P CO2 NADH es proveer un ambiente en el rumen que maximice la pro- entre ingestas. ductores de H2, favorecen la produccin de propionato y
Oxaloacetato Lactato Formato
2 Acetil-CoA Acetil-CoA
NADH
duccin microbiana y el crecimiento. Cuando se disean reducen la produccin de metano, aumentando por lo tan-
Pi
Acetoacetil-CoA Acetil-P Fumarato Acrilil-CoA raciones para rumiantes es necesario tener en cuenta a los Otro mecanismo que facilita la sobrevivencia de especies to, la eficiencia de conversin de los sustratos en alimen-
H2
-P
microorganismos tanto del animal como los del rumen. no-hidrolticas en este ecosistema son las interacciones to para el ganado. Estas sustancias actan como quelan-
CO2 H2
-OH butiril-CoA Succinato Propionil-CoA entre presa y predator: una poblacin, como los protozo- tes del sodio, potasio y otros cationes, alterando el trans-
-P Los microorganismos que colonizan a los jvenes anima- os obtiene energa y/o carbono a partir de su presa (las porte a travs de la membrana.
Crotonil-CoA Metilmalonil-CoA
les por la ingesta, saliva, aire, heces son estrictamente bacterias). Los protozoos pueden obtener estos requeri-
Propionil-CoA anaerobios, aunque algo de O2 es tolerado y si la fermen- mientos para su desarrollo por fermentacin de sustra- Ingeniera gentica de microorganismos
tacin es activa el Eh se mantiene en lmites normales tos; las bacterias parecen ser ms bien precursores para del rumen
Butirato Acetato Propionato Metano (CH4) (-250 a -450mV). la sntesis de protenas y cidos nucleicos y como fuente La manipulacin gentica de organismos del rumen para
de lpidos. La fermentacin de las reservas carbonadas producir especies ms eficientes en la digestin de los
Figura 2- Bioqumica del rumen Las enzimas para la fermentacin son provistas por un de las bacterias puede contribuir tambin al metabolismo alimentos est siendo practicada. Como los microorga-
significativo nmero de especies de bacterias, hongos y del protozoo. nismos del rumen operan como un consorcio, es decir un
a) Procesos bioqumicos y fisiolgicos en el aparato digestivo protozoos y el nmero relativo de las distintas especies
de un rumiante sistema mixto y su ecologa es opuesta a la de un cultivo
vara con la composicin y estructura del alimento. Por Produccin de CH4 puro a partir de una sola clula, la competancia y el sintro-
b) Fermentaciones ruminales de los principales polisacridos
ingeridos y sus productos finales
otra parte, las interacciones biolgicas que se dan entre Ninguna de las bacterias o protozoos fermentadores fismo deben ser considerados en los intentos de manipu-
ellas son altamente complejas. producen metano, pero algunas producen formiato, H2 lacin gentica.
y CO 2. Las bacterias metanognicas pueden luego
El pH se mantiene en estado de equilibrio por tampones La proliferacin continua de los microorganismos est transformar el H2 y el CO2 en CH4. En el rumen la prin- La transferencia gentica natural en este ambiente debe
de la saliva y por la absorcin de los AGV. asegurada por la ingestin peridica de los alimentos y el cipal va de formacin de metano es a partir de H2 y ocurrir y van Soest (1994) seala que considerando que
CO2. Su formacin a partir de acetato (formado por los microorganismos del rumen, incluidos las bacterias
Interacciones entre compuestos nitrogenados Estas asociaciones nutricionales han sido verificadas en flujo continuo de saliva, el paso del contenido a lo largo Metodologa de estudio
Las protenas de la dieta se convierten en protenas mico-cultivos in-vitro. El xito en la competencia por los del tracto digestivo y por la absorcin de los productos
crobianas. Numerosas especies presentan actividad pro- productos solubles obtenidos de la hidrlisis de polme- finales del metabolismo a travs de la pared del rumen. Se han empleado numerosas tcnicas para estos estu-
teoltica, liberando pptidos, aminocidos y amonio. La ros por especies no-hidrolticas, depende de las veloci- La muerte y autolisis de microorganismos asegura el de- dios.
principal fuente de N para la mayora de las especies, es dades de transporte en las clulas y de su metabolismo sarrollo de otros microorganismos que se nutren de los
el amonio, aunque algunas especies no proteolticas em- posterior. productos liberados (canibalismo). Suspensiones lavadas: un gran volumen de contenido
plean aminocidos. ruminal se filtra por tela y luego se centrifuga primero len-
Los productos de bajo peso molecular de la hidrlisis de En general, los organismos sobreviven en este ecosis- tamente para eliminar los protozoos grandes y luego a
La figura 3 (Wolin, 1979) resume el metabolismo de las polisacridos son fermentados a acetato, butirato, H2 y tema si su tiempo de generacin es menor que el tiempo mayor velocidad por 30 y se incuba con solucin de fos-
protenas en el rumen. Las protenas de la dieta se con- CO2 por especies individuales de bacterias y protozoos. de retencin en este rgano. Muchos microorganismos fatos para regular el pH, en anaerobiosis con el sustrato a
vierten principalmente en nitrgeno microbiano. Algunas La produccin de propionato y CH4 requiere de la interac- pueden sobrevivir en situaciones de rpido trnsito por analizar. Se siguen procesos como la decarboxilacin del
bacterias, como Bacteroides ruminicola pueden degradar cin de especies: las que producen succinato con otras adhesin a las paredes o a partculas grandes de ali- cido succnico y la reduccin de los nitratos. Se aprecia
aminocidos de cadena ramificada en los respectivos ci- que lo decarboxilan a propionato y CO2. Esta interaccin mentos. generalmente correlacin con los resultados obtenidos in-
dos grasos, con un carbono menos. es muy importante en el rumen, ya que el propionato es el vivo. Esta tcnica constituye un medio til para estudiar
principal sustrato gluconeognico para los rumiantes. La Generalmente, las especies dominantes en el rumen con- con detalle las propiedades de la flora mixta del rumen
Interacciones microbianas estn involucradas tambin en figura 4 muestra la interaccin entre Fibrobacter succino- vierten la energa del sustrato en biomasa, resultando luego de la eliminacin de complicaciones como la absor-
la degradacin de protenas de la dieta, como por ejem- genes y Selenomonas ruminantium. El organismo celulo- en menor formacin de cidos por unidad de sustrato. cin a partculas y la presencia de varios sustratos.
plo entre Ruminococcus albus y B. ruminicola en co-culti- ltico produce succinato, acetato y formiato. Cuando am- La seleccin natural tambin favorece el mximo traba-
vo en medio con celulosa y casena, como nicas fuentes bas especies crecen juntas, sin embargo, los productos jo bioqumico, en general en relacin inversa al tamao Rumen artificial: existen numerosos dispositivos para rea-
de energa y N, respectivamente. El celuloltico R. albus finales incluyen propionato y CO2: el succionato es intercelular. lizar los estudios in-vitro que tienden a similar las condi-
provee a la pareja con productos de la hidrlisis del poli- medio en la formacin de propionato y S. ruminantium ciones fsico-qumicas y ambientales del rumen natural.
sacrido. B. ruminicola degrada la casena y libera amo- aporta el CO2 requerido por Fibrobacter. Si bien la proporcin de los productos finales vara, ellos Estos se perfeccionan de modo de analizar efectos de
nio e isobutirato requerido por el primero. consisten principalmente en: CO2, CH4 y tres cidos gra- poblaciones microbianas, condiciones vinculadas a la nu-
celulosa + CO2 sos voltiles (AGV): actico, propinico y buttrico, junto a tricin y factores ambientales. Constituyen verdaderos
Fermentacin de hidratos de carbono amonio, trazas de otros cidos grasos y algunas veces, reactores con controles de entrada y salida de metaboli-
Los polisacridos de la dieta son la fuente principal de C y Fibrobacter succinogenes cido lctico. tos, regulacin de condiciones de incubacin, como tem-
energa para los microorganismos del rumen. las interac- peratura, pH, presin osmtica, etc. y permiten estudiar la
ciones son numerosas y los productos de hidrlisis son fragmentos de celulosa Microorganismos anaerobios con adaptaciones ecolgi- degradacin de diferentes sustancias por poblaciones
asimilados por la poblacin asociada. A pesar de que la cas y requerimientos nutritivos similares existen en los si- microbianas solas o asociadas.
celulasa est presente en pocas especies de bacterias, succinato Selenomonas ruminantium los, aguas servidas, en la biodegradacin anaerobia de
protozoos y ficomicetos anaerobios, los productos de la restos orgnicos. La diferencia ms marcada es que en Aislamiento y cultivo de microorganismos del rumen
+
hidrlisis son sustrato para organismos no celulticos. la biodegradacin anaerobia en silos o aguas el tiempo La mayor dificultad en estos estudios radica en el mante-
acetato propionato
de retencin es mayor, con ms eficiencia en la extrac- nimiento de las condiciones de anaerobiosis durante el
+ cin de la energa del sustrato y proliferacin de bacterias muestreo, siembra y cultivo de los microorganismos, mu-
Protenas en Protozoos
formiato acetato metanognicas que poseen un tiempo de generacin chos de los cuales viven asociados entre si, lo que dificul-
Protenas en la dieta Protenas bacterianas mayor (4 das) que el tiempo de retencin de los sustra- ta su aislamiento.
CO2
AGV Cadena
Otras tos. El resultado es que en estos ambientes no se acumu-
lineal ramificada fuentes lan cidos grasos y los productos se degradan a CH4 y
de C Figura 4- Interaccin metablica entre dos bacterias del
c. grasos aromticos rumen CO2 (captulo 21). Muestro y cultivo
CO2
Pptidos El contenido ruminal se obtiene por succin luego de efec-
Urea La biologa y ecologa de esta poblacin microbiana es
Aminocidos NH3 Otro ejemplo de estas cadenas alimenticias se da con las muy similar en la mayora de las especies animales. La tuar una homogeneizacin manual y despus de una agi-
bacterias metanognicas, que emplean CO2 e H2, para seleccin de especies y la adaptacin de las poblaciones tacin suave bajo CO2 , se filtra por gasa y se liberan
Mayor importancia obtener energa, con acetato o CO2 como fuentes de C, microbianas estn determinadas ms por la dieta y el las clulas adheridas a las partculas (0,1% de Tween 80,
Importancia menor
Importancia media que son liberados por microorganismos que hidrolizan y tiempo de retencin que por el husped, sea ste rumian- con 6-8 horas a 0, o 0,1% de metilcelulosa). Se efectan
Figura 3- Metabolismo de protenas en el rumen fermentan los sustratos. te o no-rumiante. suspensiones-diluciones decimales en diluyente en anae-
robiosis las que se inoculan e incuban en los medios es- cies bacterianas del rumen pueden fermentar ms de de la dieta, usan las de las bacterias fagocitadas. El animal obtiene ms energa cuando se produce cido
cogidos para efectuar el recuento de bacterias, mante- un sustrato. propinico en relacin al cido actico. La liberacin de
niendo siempre la anaerobiosis. El nivel proteico del rumen se incrementa cuando se eli- H2 y CH4 (producto de desecho) es mayor cuando se for-
Las bacterias productoras de metano constituyen un gru- minan los protozoos. ma cido actico.
Se usan diferentes cmaras de incubacin con atmsfe- po muy particular responsables de regular todos los pro-
ra controlada, en general con suficiente CO2, que man- cesos de fermentacin en el rumen. Remueven el gas H2 Eliminacin de los protozoos: se logra por varios pro- La principal prdida de energa se da por la liberacin de
tiene el pH a niveles adecuados y es empleado por nu- al reducir el CO2 con el H2 para dar metano. La produc- cedimientos: cambios en la dieta, agregando varios agen- H2 y CH4. Vemos que la produccin de 2 moles de cido
merosas bacterias. Se usa tambin una mezcla con cin de metano mantiene la concentracin de H2 baja, lo tes qumicos o aislando jvenes animales. No se afecta propinico a partir de un mol de hexosa, requiere H2 adi-
95% de CO2 y 5% de H2. que permite a las bacterias metanognicas promover el mucho el metabolismo del rumen, pero puede alterar el cional. El cido propinico acta como ligando del H2 y
crecimiento de otras especies bacterianas y una ms efi- balance de los productos: una dieta de granos con proto- reduce la prdida de energa por formacin de metano.
Se emplean medios no selectivos para recuento, aisla- ciente fermentacin. Tambin la remocin de H2 favorece zoos presentes produce alto nivel de butirato, mientras
miento y mantenimiento de bacterias del rumen. Los re- a especies productoras de H2 aumentando los rendimien- que sin ellos, domina el propionato. Se aprecia la complejidad de este sistema biolgico, mu-
cuentos se hacen en tubos con medio slido, previamen- tos en biomasa con el resultado de mayor sntesis de c- chos de cuyos aspectos han sido estudiados extensiva-
te fundido a 45C antes de inocular, girado sobre las pare- lulas microbianas, e incremento de protenas disponibles Las funciones de los protozoos en el rumen son comple- mente, otros restan por investigarse.
des hasta que el agar solidifica (roll-tubes). Las colonias para el rumiante. jas. Su eliminacin parece aumentar el rendimiento mi-
quedan incluidas en el agar, a lo largo del tubo. crobiano y la absorcin de aminocidos por el animal, que
Los protozoos en el rumen oscilan entre 105 a 106 / en dietas con pajas pobres, resultara benfico. Mientras Interacciones microbianas en el rumen
Adems de los medios no selectivos, se emplean gran gramo de rumen y son afectados por la alimentacin. que en dietas ricas en almidn, los protozoos tendran otro
nmero de medios selectivos, que permiten evaluar gru- Altos nmeros de protozoos son generalmente encon- rol benfico controlando la acidosis: al englobar partcu- Las interacciones entre los numerosos microorganis-
pos particulares, como amilolticos, pectinolticos, lipolti- trados en el rumen con dietas de alta digestibilidad. las indiscriminadamente, inducen una latencia en la fer- mos se comprenden mejor al comparar al rumen con
cos, metanognicos. Diferencias en la composicin de la dieta estimulan a mentacin del almidn, limitando la acidificacin. un sistema dinmico y cambiante. Es precisamente
distintos gneros de protozoos. Algunas gneros incre- la flexibilidad de este complejo sistema que hace po-
mentan con dietas con grandes cantidades de azca- sible la conversin de un amplio rango de sustratos
Poblacin microbiana del rumen res solubles y otros gneros predominan con dietas de Obtencin de energa por microorganismos en AGV de los cuales depende el rumiante para obte-
alto nivel de almidn. del rumen ner energa.
La poblacin microbiana del rumen consiste en bacterias,
protozoos y hongos. La mayora de la poblacin microbia- Los protozoos ingieren bacterias como fuente de prote- El rumen es un ambiente estrictamente anaerobio, los AGV Las interacciones metablicas entre las distintas pobla-
na son bacterias cuyo nmero alcanza 1010 a 1011 bacte- nas. Ellos tambin aparecen como estabilizadores de pro- son sus productos de excrecin y son absorbidos directa- ciones del rumen resultan esenciales para sostener a la
rias/g de contenido ruminal. El balance entre los tres ductos finales de la fermentacin. Los protozoos, como mente desde el rumen hacia el husped constituyendo la comunidad microbiana y sus actividades. Productos del
tipos principales de microorganismos y el equilibrio de las bacterias y los hongos contribuyen a la digestin de principal fuente de energa. La fermentacin de hidratos metabolismo de algunos microorganismos son fuente de
especies en cada grupo est tambin regulada por las las fibras. Mientras que los protozoos son parte integral de carbono es la principal fuente de energa para los mi- energa para otros. La liberacin de vitaminas y produc-
condiciones ambientales en el rumen, incluyendo los sus- de la poblacin microbiana del rumen y ejercen marcado croorganismos anaerobios del rumen. Las protenas con- tos del metabolismo del nitrgeno constituyen fuentes
tratos aportados por la dieta. efecto en la fermentacin, su beneficio al rumiante es aun tribuyen con menos del 1% del total de energa y el aporte para otros microorganismos. El tipo y grado de estas in-
controvertido. por el glicerol es menor. teracciones regulan las concentraciones y actividades
Las bacterias pueden agruparse de acuerdo a sus formas de especies individuales y la naturaleza cuali y cuanti-
tpicas (cocos, bacilos, espirilos), por su tamao (general- Los hongos anaerobios constituyen el grupo ms recien- La fermentacin de glucosa en los 3 principales AGV con- tativa de los productos de la fermentacin de los sustra-
mente desde 0,3 a 50micras) y por sus estructuras. Tam- temente reconocido de microorganismos del rumen. Cuan- duce a: tos ingeridos.
bin pueden agruparse segn el tipo de sustrato que fer- do los animales se nutren con dieta rica en forrajes, los
mentan. hongos del rumen pueden contribuir con ms del 8% de cido actico: C6H12O6 2CH3COOH+ CO2+ H2 Interacciones nutritivas
la biomasa microbiana. Aunque no est claro si estos hon- Los rumiantes no requieren vitaminas del complejo B en
cido propinico: C6H12O6 2CH3-CH2-COOH + 2H2O
Las especies presentes en el rumen degradan o utili- gos son funcionalmente significativos, se ha mostrado que su dieta. Sus requerimientos son satisfechos por la micro-

zan productos tales como celulosa, hemicelulosas, al- pueden degradar celulosa y xilanos, indicando rol en la cido butrico: C6H12O6 CH3CH2CH2COOH + 2CO2 + H2 flora del rumen. Es alto el nmero de especies que re-
midn, azcares, protenas, cidos orgnicos interme- digestin de fibras. quieren biotina y cido para-amino benzico (PABA) o bio-
diarios, lpidos y producen metano. Una clasificacin Etapa final: metano (respiracin anaerobia): tina y cido flico. La biotina se requiere para la decar-
ms extendida puede incluir degradadores de la pecti- Existen tres ambientes interconectados en el rumen don- 4H2 +CO2 CH4 + 2H20 boxilacin del succinato a propionato, principal reaccin
na y productoras de amonio. La mayora de las espe- de se localizan los microorganismos. La primera es la fase en la fermentacin del rumen.
y una gran proporcin (ms de 2/3) pueden ser lisados en b) son capaces de almacenar hidratos de carbono adi- lquida, el fluido ruminal, donde grupos de microorganis- des cantidades de hidratos de carbono fcilmente fer-
el rumen. cionales en forma de un polmero insoluble, la amilo- mos se encuentran libres, se nutren de protenas y carbo- mentables, ocurren varios cambios en la poblacin mi-
pectina hidratos solubles. Esta porcin constituye un 25% de la crobiana, con predominio de aquellos que producen y
Los ciliados constituyen la poblacin mayor en rumiantes biomasa microbiana. utilizan lactato.
adultos y las clases principales de ciliados son los holotri- c) los Holotriches son ms fcilmente destruidos por la
cos y los entodiniomorfos acidez y los Entodiniomorphes son menos sensibles. Luego se encuentra la fase slida, donde los grupos mi- Los microorganismos productores de lactato, sensibles a
crobianos asociados o adheridos a partculas alimenticias la acidez, son remplazadas por consumidores de lactato,
* Holotricos: presentan cilias en toda la superficie celular d) no pueden sintetizar aminocidos a partir de compues- digieren polisacridos insolubles, como almidn o fibras, cido tolerantes. Se puede producir una acidosis lctica
tos simples de nitrgeno y dependen de las bacterias, as como a las protenas menos solubles. Constituyen por este cambio brusco a una dieta rica en concentrados.
* Entodiniomorfos: la mayora de la superficie no presenta cuyos aminocidos emplean luego de fagocitarlas (1% ms del 70% de la biomasa microbiana. Se mantiene entonces alta la poblacin que usa lactato para
cilias, stas estn restringidas a un solo grupo alrede- de las bacterias del rumen pueden ser fagocitadas por evitar su excesiva acumulacin, lo que provoca descenso
dor de la citofaringe (cavidad de entrada de nutrientes). cilados en cada minuto). Son responsables de la pro- En la ltima fase, un 5% de los microorganismos estn del pH del rumen a niveles muy cidos, menores de 5,5.
Los principales holotricos son Isotricha y Dasytricha duccin de gran parte del amonio en el rumen adheridos al epitelio del rumen o a los protozoos.
El pH del rumen es uno de los factores que afectan las
* Isotricha fermenta almidn, sacarosa, glucosa, pectina e) a diferencia de las bacterias, los ciliados del rumen no La adhesin de la microflora al rumen tiene importancia poblaciones microbianas y los niveles de cidos grasos
son esenciales para los procesos de fermentacin, pero para el rumiante. Para que las bacterias mantengan su voltiles. El pH del rumen en el cual ciertas funciones son
* Isotricha intestinalis e Isotricha prostoma son dos espe- contribuyen a su eficiencia. nmero en el rumen, es necesario que su tiempo de ge- optimizadas, puede variar. Los microorganismos que de-
cies encontradas en el rumen, su gran tamao hace de neracin sea menor que el tiempo de reciclado de la in- gradan fibras son ms activos a pH 6.2 a 6.8. Las bacte-
ellas las especies ms conspicuas cuando el fludo es Ciliados celulolticos gesta del rumen. Como la velocidad de pasaje de los rias celulolticas y metanognicas pueden reducirse cuan-
analizado al microscopio Pocos gneros de Epidinium estn involucrados en la frag- nutrientes por la fase particulada es mucho ms lenta do el pH baja debajo de 6,0. Los degradadores del almi-
mentacin de los restos vegetales. Secretan enzimas que que la de la fase lquida, las especies que se adhieren a dn prefieren un pH ms cido de 5.2 a 6.0. Ciertos pro-
* Dasytricha fermenta almidn, maltosa, celobiosa, promueven la separacin de las clulas y la fragmenta- los materiales slidos, son especies de crecimiento len- tozoos pueden deprimirse con pH debajo de 5.5. Para
glucosa Dasytricha ruminantium es la nica espe- cin del material. to, y as, se evita su lavado fuera del rumen. satisfacer estas demandas, las dietas normales deben
cie encontrada en el rumen. Los holotricos pueden mantener rangos de pH entre 5.8 a 6.4.
almacenar amilopectina (reservas carbonadas del En condiciones adecuadas ms de la mitad de la activi- La composicin de la dieta afecta el nmero y las pro-
protozoo). dad celuloltica del rumen se asocia con los ciliados. La porciones relativas de las diferentes especies micro- El cuadro 1 (van Soest, 1994) presenta los organismos
mayor actividad se da cuando la enzima es liberada luego bianas en el rumen. La mayora de los cambios en la descriptos en el rumen. Las bacterias pequeas cons-
* Entodinia y Diplodinia son los principales gneros ento- de la lisis celular que ocurre por exposicin al O2 en la dieta requieren un perodo de transicin para permitir tituyen la mitad de la biomasa en rumen normal, pero
diniomorfos ruminacin o por hipotona causada luego de la ingestin incrementar diferentes especies microbianas, periodo son responsables de la mayor actividad metablica (ge-
de agua. que puede durar varios das. Cuando se incluyen gran- neralmente en relacin inversa al tamao celular).
Entodinium bursa y Entodinium caudatum son especies
comunes, pero se han descripto otras especies. Fermen- Ciliados amilolticos
Cuadro 1. Nmero y volumen relativo de microorganismos en el rumen
tan almidn, hemicelulosa, celobiosa. glucosa, maltosa y Todos los Entodiniomorphes emplean almidn, cuyo ex-
sacarosa ceso almacenan como amilopectina. Sin embargo, uno
Grupo N/mL Vol celular Biomasa tg % de la
de los dos gneros de Holotriches no puede usar almi-
(3 ) (mg/100mL) biomasa total
Diplodinia spp. varias especies han sido aisladas e iden- dn. La mayora prefiere azcares solubles y se mueven
tificadas (ejemplo: Diplodinium polyplastron y Diplodinium rpidamente hacia ellos. Se estima que ms de 1/3 de los
Bacterias pequeas 1x1010 1 1.600 20min 60-90
eudiplodinium). La mayora fermenta celulosa, hemicelu- azcares ingeridos por el animal puede convertirse en
Selenomonas 1x108 30 300
losa, glucosa y almidn amilopectina.
Oscillospira flagellates 1x106 250 25
Los ciliados difieren de las bacterias en varios aspec- Otras fuentes de energa: Los ciliados son responsables
Protozoos,ciliados 10-40
tos: de del 30-40% de la lipolisis. Incrementan el contenido de 5 4
Entodinia 3x10 1x10 300 8h
cidos grasos saturados. Un 75% de los lpidos microbia-
Dashytricha + Diplodinia 3x104 1x105 300
a) son muy mviles e invaden a los alimentos recin inge- nos estn normalmente asociados con los ciliados, por lo
Isotricha + Epidinia 1x104 1x106 1100 36h
ridos tan rpidamente como las bacterias, a pesar de que su contribucin al husped puede ser significativa.
Isotricha + Epidinia 1x104 1x105 24h 5-10
su menor nmero. No son muy importantes en la degradacin de protenas
Bacterias en el rumen Las actividades bioqumicas de las bacterias del rumen Los hongos producen AGV, gases y trazas de etanol y La concentracin tpica en el rumen vara entre 104 a 106
han sido estudiadas con cierto detalle. Los estudios in- lactato. protozoos por mL. Los valores pueden bajar a102 a 103 /
Las bacterias del rumen son integrantes de un consorcio vivo brindan informacin sobre el tipo de fermentacin mL con dietas altamente concentradas. Todos los proto-
que realiza varias funciones vitales para el desarrollo del dominante, pero no sobre las actividades de cada espe- Su contribucin a la biomasa microbiana puede ser zoos del rumen son estrictamente anaerobios. Disminu-
husped: cie. El examen microscpico directo del contenido rumi- baja, como la de los protozoos, ya que se ubican en la yen en nmero desde el nacimiento a la madurez del ani-
nal proporciona considerable informacin, pero poca so- ingesta de lento movimiento, evitando su rpido lava- mal. La menor concentracin se encuentra en rumiantes
1) Las fibras y otros restos de polmeros vegetales no bre las actividades de los microorganismos. do. No son esenciales para la sobrevivencia de los ru- adultos. La acidez disminuye el nmero de protozoos, pero
degradados por enzimas del animal, son fermentados a miantes, estn presentes en bajo nmero o an au- no los elimina totalmente
cidos grasos voltiles, CO2 y CH4. Los AGV pasan las Microorganismos que emplean productos liberados por sentes en animales con dieta baja en fibras, pero se
paredes del rumen hacia el sistema circulatorio y son otros pueden representar ms del 60% del nmero de piensa que contribuyen a la digestin de forrajes de Variedad de especies se encuentran sobre el forraje y en
oxidados en el hgado, constituyendo la mayor parte de especies y constituyen un importante grupo funcional. Pro- baja calidad. las dietas mezclas (forrajes/concentrados).
la energa requerida por el husped (figura 1). Tambin ductos liberados en cultivo puro no han sido detectados
se usan en la sntesis de materiales celulares. en el rumen: como etanol, succinato y formiato, debido al Se necesitan mayores estudios para evaluar las funcio- Rol de los protozoos: regulan la relacin protozoo/ bac-
metabolismo compartido, relaciones sintrficas. nes de los hongos en el rumen, sus interacciones con los teria, parecen actuar como predatores no selectivos.
2) La fermentacin est acoplada al crecimiento micro-
protozoos, bacterias celulolticos, metanognicas y otras
biano y las protenas de la biomasa constituyen la prin-
El concepto de sintrofia difiere del de simbiosis, en que especies que emplean H2. La degradacin de las protenas microbianas por los pro-
cipal fuente de nitrgeno para el animal.
ms de 2 especies estn involucradas y el beneficio mu- tozoos contribuye a aumentar el amonio del rumen, pue-
3) Los microorganismos del rumen sintetizan vitaminas, tuo se relaciona a las fuentes nutritivas de energa. Los den contener 10 a 40% del N total del rumen. Sin em-
sobretodo del complejo B, empleadas por el husped. grupos sintrficos relacionados a la degradacin de fibras, Protozoos del rumen bargo, el flujo de protenas de los protozoos hacia el duo-
incluye, por ejemplo, a los celulolticos, hemicelulolticos deno es menor que lo esperado desde la masa ruminal,
4) Algunas bacterias degradan componentes txicos de
y microorganismos que los suceden, como las bacterias Constituyen los organismos ms conspicuos en el ru- indicando probablemente un reciclamiento de las pro-
la dieta. Ejemplo son los aminocidos mimosina y sus
metanognicas. Las ms competitivas presentan adhe- men y en el tracto digestivo de algunos monogstri- tenas de los protozoos en el rumen. Absorben almidn
derivados, componentes del forraje de Leucaena, feno-
sin al sustrato y almacenamiento efectivo de la energa cos hervboros y su rol ha sido debatido por dcadas. y pueden almacenar glicgeno. Pueden ser benficos
les vegetales, como la cumarina (1,2 benzopirona), la
dentro de la clula. Forman gran proporcin de la biomasa (20-40% del N estimulando la fermentacin ruminal. Liberan productos
canavanina, anloga de la arginina, componente de la
microbiano), pero su contribucin es menor por la finales de la fermentacin, sobretodo acetato, butirato,
leguminosa Canavalia ensiformis, que inhibe a algunas
Las bacterias ruminales son muchas veces clasificadas gran retencin y su menor actividad metablica. Su butirato e H2.
bacterias del rumen, pero es hidrolizada por otras.
por el empleo de distintos sustratos y por los productos tiempo de generacin es grande y la sobrevivencia
finales de su metabolismo. en el rumen depende de las estrategias que reducen La eliminacin de los protozoos incrementa la proporcin
Representan la clase predominante de microorganismos:
el lavado. de propionato en el fludo ruminal
1.1010 a 1011 /g de contenido ruminal.
Las Eubacterias del rumen se caracterizan en base a:
morfologa y Gram, productos de la fermentacin, rango Pueden representar una biomasa igual o mayor que la de La mayora de los componentes son Ciliata, los organis-
Probablemente acten ms de 200 especies, pero slo
de sustratos usados, relacin molar (G+C)% de su ADN y las bacterias. mos unicelulares ms complejos. Su biomasa es en ge-
unas pocas parecen tener significado cuantitativo. Las
en menor grado por la composicin de cidos grasos en neral similar a la de las bacterias, pero pueden sobre-
nuevas tcnicas de biologa molecular que emplean son-
los fosfolpidos. Su contribucin a la fermentacin en el rumen no est pasarla ms de 3 veces segn la dieta, o incluso des-
das gnicas han hecho cambiar rpidamente la identifica-
muy clara, en parte por la dificultad de cultivo libre de bac- aparecer. Su densidad es del orden de 105-106/mL. Las
cin de las bacterias ruminales Se han informado de 22 El cuadro 2 presenta las caractersticas de bacterias Gram terias, a las que predan. Esta constituye su principal fun- distintas especies varan en tamao entre 25 a 250
gneros y 63 especies. negativas y Gram positivas del rumen (Stewart, 1991). cin: ingieren partculas del tamao de las bacterias, as micras, agrupados en 17 gneros de la sub-clase Ento-
como almidn, fibras, cloroplastos. La mayora de las tc- diniomorphes y 2 gneros de la sub-clase Holotriches,
La mayora son anaerobios obligados, pero coexisten las Las bacterias pequeas constituyen ms de la mitad de la nicas de estudio involucran eliminacin de las bacterias: que difieren en su morfologa y metabolismo. Las espe-
anaerobias facultativas que pueden representar un 107 to biomasa y son muy activas: digieren hidratos de carbono: qumicamente (agentes activos de superficie), por conge- cies presentes varan con la especie animal, la locali-
108 por gramo de contenido ruminal, adheridas a las pa- celulosa, hemicelulosa, pectina, almidn y azcares. Otras lamiento del lquido ruminal. dad, la dieta.
redes del rumen y usan el O2 que difunde del torrente emplean celulodextrinas, pentosas, glucosa, lactato, suc-
circulatorio. Son ms fciles de aislar, aunque no son im- cinato, formiato, H2, como fuentes de energa. Se piensa que la actividad celuloltica se realice por la Los tiempos de generacin varan entre 0,5 a 2 das. Los
portantes en las funciones del rumen, pero se hacen do-
flora bacteriana asociada. Algunos autores los conside- ms lentos pueden desaparecer con los fludos del ru-
minantes en disfunciones de este sistema. Las ms im- Veillonela parvula, por ejemplo, crece principalmente en ran minirumiantes que albergan bacterias celulolticas y men, pero varios permanecen adheridos a fragmentos de
portantes son las que fermentan la celulosa. lactato y Anaerovibrio en glicerol (liberado de los lpidos por otras que metabolizan lo que ellos ingieren. alimento, por lo que son ms retenidos que las bacterias
Bacterias hidrolticas den constituir hasta el 8% de la biomasa intra-ruminal. lipasas) y fructosa. Las celulolticas, como Ruminococcus y Bacterias verstiles incluyen Butyrivibrio, algunas de cu-
Los flagelados, con sus zoosporas mviles, se confundie- Fibrobacter crecen sobretodo en celulosa, aunque muchas yas especies son celulolticas, Bacteroides ruminicola y
Oligosacridos y azcares solubles, productos finales de la ron mucho tiempo con protozoos y colonizan regiones especies hidrolizan hemicelulosas, pero en general no em- Selenomonas. Clostridium polysaccharolyticum es uno de
degradacin de la celulosa, son empleados por numerosos daadas de los tejidos vegetales en las 2 horas de la plean los productos de la hidrlisis. Bacteroidamylophilus las pocas bacterias del rumen capaces de emplear celu-
microorganismos que los degradan obteniendo energa, ingestin en respuesta a materiales solubles. En las 22 degrada almidn y azcares derivados del almidn. losa y almidn como sustratos.
de modo que la biomasa crece rpidamente. Se forma ATP, horas ms del 30% de las partculas mayores se aprecian
poder reductor (NADH) y ferredoxina reducida, que se reci- invadidas por rizoides. + -
clan por oxidacin con liberacin de H2, que puede inhibir a Cuadro 2 Algunas bacterias G y G del rumen
las enzimas responsables. Otros mecanismos biosintticos En cultivo puro algunos de estos hongos fermentan celu-
ocurren, con produccin de propionato y butirato, pero esta losa, liberando acetato, lactato, CO2 e H2. La celulasa li-
diversificacin puede limitarse en el rumen por las bacte- berada al medio incrementa la degradacin. Hemicelulo- Gram positivas
rias metanognicas (CO2 + H2= CH4). sas, xilanos, almidn y azcares son tambin fermenta- Especie Morfologa (G+C)% Productos Sustratos
dos. La lignina no parece ser degradada por los hongos
anaerobios del rumen. Bacteroides ruminicola bacilo 49-50 AS amplio: hidrol.proteinas
Otras fuentes de energa
Su principal rol parece relacionado a facilitar la des- Ruminobacte amylophilus 40.42 FAS almidn
Lpidos aparicin de la pared celular. Fibrobacter succinogenes 47-49 AS celulosa
Slo bajos niveles de lpidos (7%) son adecuados en la
Selenomonas ruminantium variada 54 LPA amplio
dieta del rumiante. A niveles ms altos, la liberacin de Las principales especies descriptas son:
cidos grasos por su hidrlisis inhibe la digestin de las Neocallimastix frontalis, Sphaeromonas communis, y Pyro- Butyrivibrio fibrisolvens bacilo curvo 36-41 FBA FBA
fibras, posiblemente por recubrimiento superficial de las monas communis. Anaerovibrio lipolytica bacilo ND PSA lipoltico
partculas que limita la adhesin bacteriana. Algunas bac-
terias convierten el glicerol liberado en AGV, otras hidro- Parecen importantes en dietas con alto contenido de fo- Veillonella parvula Cocos 38-41 AP H2 lactato
genan cidos no saturados convirtindolos en saturados rrajes, pero en general su contribucin a la digestin no Succinimonas amylolytica cocos ND S Almidn
est an bien definida. Atacan residuos vegetales y pue-
Acidos grasos voltiles den degradar celulosa y xilanos. Su rol en la digestin de
En el rumen existen bacterias que usan AGV, pero como fibras parece ser relativamente menor que la de las bac- Gram negativas
ellos son rpidamente asimilados por el animal, su nme- terias
ro permanece bajo. Entonces, de los productos finales de Ruminococcus albus cocos 42-46 A H2 CO2 celulosa
la fermentacin del rumen: Han sido identificadas especies de 4 gneros: Neocalli- R. flavefaciens cocos 39-44 AS H2 celulosa
mastix, Caecomyces (formalmente Sphaeromona),
Streptococcus bovis cocos 37-39 L CO2 almidn
a) los AGV son metabolizados slo por microorganismos Pyromyces (formalmente Phyromonas) y Orpinomyces
que no prosperan en el ambiente del rumen, (Theodorou et al., 1992). Resultan ms fciles de cultivar Lachnospira multiparus bacilos ND FAL H2 CO2 pectina
que los protozoos y su ciclo de vida involucra un cuerpo Eubacterium riminantium bacilos ND FBL CO2 xilano
b) el CO2 se produce ms rpido que lo que se usa y cons- de fructificacin (esporangio), originado a partir de una
tituye (dependiendo del tipo de fermentacin) cerca de zoospora mvil que se adhiere a las fibras y desarrolla E. oxidoreducens bacilos 36 L H2 aromticos ?
65% de los gases expelidos por el animal y esporangios y filamentos rizoidales, que penetran la ma- Lactobacillus ruminis bacilos 44-47 L azcares
triz lignocelulsica, donde actan las enzimas.
c) el metano, que constituye el resto del 35%, no puede L. vitulinus bacilos 34-37 L azcares
aportar energa a los microorganismos en las condicio- Los hongos liberan un complejo celulsico ms soluble Clostridium polysaccharolyticum bacilos ND FBA H2 celulosa/almidn
nes anaerobias del rumen. que el de las bacterias y atacan partculas rugosas a las
(esporas)
que fermentan ms rpidamente que las bacterias. Ali-
Hongos del rumen mentos finamente molidos o altamente concentrados pre-
sentan menos hongos. Existe evidencia de que su inocu-
F=formiato; A=acetato; P=propionato; B=butirato; V=valerato;
El aporte de hongos Phycomycetes en las fermentacio- lacin puede incrementar la digestin de las fibras asi
S= succinato; L= lactosa; ND= no determinado
nes del rumen ha sido reconocido recientemente y pue- como el desarrollo de jvenes rumiantes.
Bacterias celulolticas Las bacterias celulolticas colonizan la superficie de res- plica ms lentamente que el S. bovis y es inhibida cuan- Especies recientemente identificadas:
tos vegetales en los 5 minutos de su entrada al rumen. do el pH cae. (a) Peptostreptococcus anaerobius, Clostridium sticklan-
La degradacin de la celulosa es definida usualmente Como existe amonio, ellas se multiplican rpidamente. El dii, y Clostridium aminophilum
como la principal funcin del rumen. Las enzimas respon- agregado de urea al alimento, favorece esta multiplica- Las enzimas para la degradacin del almidn estn am-
sables de la degradacin de la celulosa la presentan prin- cin. Sin embargo, si el pH del rumen cae debajo de 6,0, pliamente distribuidas entre bacterias, protozoos y hon- Son fermentadoras rpidos de aminocidos a amonio. La
cipalmente en bacterias. Los vertebrados carecen de es- el crecimiento de las bacterias y la celulolisis se hacen gos. Principales especies: proteolisis y la fermentacin de aminocidos son impor-
tas enzimas. Principales especies: ms lentas. Debajo de 5,6 su desarrollo cesa, de modo tantes fuentes de AGV de cadena ramificada para espe-
que la presencia en la dieta de productos que favorecen a) Bacteroides amylophilus - bacilos y formas cocoides, cies celulolticas y proveen de amonio para especies que
a) Fibrobacter succinogenes - bacilos o cocos Gram- la acidez, inhiben la digestin de materiales fibrosos. Dis- Gram- lo prefieren como fuente de N.
minuyen tambin en presencia de sustratos competitivos,
b) Ruminococcus albus - cocos Gram+ como el almidn. b) Streptococcus bovis - cocos Gram+ Las bacterias se adhieren a la pared del rumen y pueden
jugar rol en la hidrlisis de la urea.
c) Ruminococcus flavefaciens cocos Gram+
c) Selenomonas ruminantium bacilos Gram negativos
Principales bacterias xilanolticas Pueden representar entre el 22 al 51% del total de los Muchas de esas especies son anaerobias facultativas.
Las tres especies degradan celulosa a velocidad cons-
recuentos de viables. El principal sustrato es el almi-
tante sobre la superficie de las fibras, decrecen por
a) Butyrivibrio fibrisolvens bacilos curvos Gram positi- dn pero pueden usar lactato. La actividad -amilasa Organismos Gram negativos del fluido ruminal pueden
la predacin por los protozoos, presentan especifici-
vos. Los cidos butrico, frmico, actico y lctico son est presente en algunas especies (ej. B. bovis), pero colonizar la pared del rumen. Las colonias de la pared
dad de sustratos, usan celulosa o sus productos de
los principales productos finales de la fermentacin no parecen atacar directamente al almidn. Algunas ruminal invaden reas daadas, accediendo a la vena
hidrlisis.
especies (ej. B. amylophilus) atacan grnulos de almi- porta, con formacin de abcesos en el hgado.
b) Prevotella ruminicola (formalmente Bacteroides rumi- dn y parecen tener una -amilasa intracelular.
Forman una cubierta extracelular que les permite adhe- nicola) bacilos Gram negativos. Los cidos succnico,
sin a la celulosa. Las enzimas se localizan cerca o en la actico y frmico son los principales productos finales Bacterias metanognicas
superficie del organismo, lo que probablemente disminu-
Principales bacterias proteolticas
ye la prdida de celulasas por proteolisis. Como resulta- Se conoce menos sobre la biodegradacin de los xilanos El mecanismo primario de produccin de metano en el
do, la actividad celuloltica del fluido ruminal es mnima. en relacin con la celulosa. El catabolismo de protenas y aminocidos que libera rumen es la reduccin del CO2.
Su desarrollo sigue una cintica de primer orden, depen-
amonio en el rumen es de gran inters en la nutricin del
diendo de la disponibilidad de sustrato, ms probablemente
animal, aunque su exceso puede ocasionar problemas. Se funcin es mantener baja la concentracin de hidr-
de la disponibilidad de la celulosa. Producen primaria- Bacterias amilolticas El amonio es tambin requerido por microorganismos fer- geno en el rumen, lo que facilita un crecimiento ms efi-
mente succinato y acetato como productos finales de la
mentadores, algunos de los cuales pueden tambin usar ciente de otras bacterias del rumen. Los organismos me-
fermentacin La mayora de las bacterias amilolticas son incapaces de aminocidos o pptidos. tanognicos predominantes son generalmente bacilos
usar celulosa. Las enzimas amilolticas estn muy distri- Gram positivos.
Las tres especies son anaerobias estrictas y presentan buidas entre las bacterias y son ellas la que aseguran la Las proteinas de la microflora constituyen la fuen-
un estrecho rango de pH para su crecimiento -pH 6 a 7-. conversin de materiales amilceos, como granos de ce- te primaria de N para el animal. Methanobrevibacter ruminantium, Methanobacterium for-
Requieren ciertos AGV de cadena ramificada para su cre- reales, en cidos grasos voltiles. La mayora de las protenas contenidas en la dieta son micicum y Methanomicrobium mobile.
cimiento. En cultivos mixtos, estos son aportados por bac-
rpidamente hidrolizadas en el rumen. Parte de los ami-
terias que fermentan aminocidos Con amonio, el proceso es ms eficiente. Asi, Streptococ-
nocidos son inmovilizados por bacterias y protozoos, los Este grupo puede producir ms de 200 litros de CH4 por
cus bovis produce acetato y etanol cuando se multiplica
restantes son fuente de energa y son degradadas a AGV da en una vaca de 500 kg. Este gas es expelido, en parte
Muchas de las especies celulolticas pueden tambin de- lentamente, pero forma lactato si crece rpidamente. Esta
y amonio. El exceso de amonio es absorbido por el ani- con el CO2 por el animal. Condiciones que restringen la
gradar la fraccin mal llamada hemicelulosa. especie es ms tolerante a la acidez que la mayora de
mal y convertido en urea en el hgado. metanognesis favorecen la produccin de propionato e
las bacterias del rumen. No son muy abundantes, pero
incrementan la relacin propionato/acetato en los produc-
En medios de cultivo, las bacterias producen metabolitos se hacen dominantes si la acumulacin de cido lctico
La actividad proteoltica est ampliamente distribuida en- tos finales de la fermentacin.
diferentes que en el rumen, ya que all las bacterias estn sobrepasa la capacidad tampn del rumen. Severa acido-
tre los microorganismos del rumen, se ha detectado en
asociadas y los productos finales de una son empleados sis (pH 5,0) puede ocurrir cuando la dieta se cambia abrup-
ms del 38% de los aislamientos a partir de rumen de La metanognesis promueve la sntesis de ATP, el creci-
por otras. As, B. succinogenes libera succinato a partir tamente de celulosa a almidn o sacarosa.
ganado vacuno. La degradacin de aminocidos parece miento microbiano y la produccin de acetato, con la pr-
de celulosa, pero in vivo, ste es convertido por otras es-
ser ms especializada. dida de ms de 15% de la energa del alimento, como
pecies en propionato, uno de los principales productos de La microflora que convierte lactato en acetato y propio-
metano.
la fermentacin. nato no est presente en nmero suficiente o se multi-
Bacterias celulolticas Las bacterias celulolticas colonizan la superficie de res- plica ms lentamente que el S. bovis y es inhibida cuan- Especies recientemente identificadas:
tos vegetales en los 5 minutos de su entrada al rumen. do el pH cae. (a) Peptostreptococcus anaerobius, Clostridium sticklan-
La degradacin de la celulosa es definida usualmente Como existe amonio, ellas se multiplican rpidamente. El dii, y Clostridium aminophilum
como la principal funcin del rumen. Las enzimas respon- agregado de urea al alimento, favorece esta multiplica- Las enzimas para la degradacin del almidn estn am-
sables de la degradacin de la celulosa la presentan prin- cin. Sin embargo, si el pH del rumen cae debajo de 6,0, pliamente distribuidas entre bacterias, protozoos y hon- Son fermentadoras rpidos de aminocidos a amonio. La
cipalmente en bacterias. Los vertebrados carecen de es- el crecimiento de las bacterias y la celulolisis se hacen gos. Principales especies: proteolisis y la fermentacin de aminocidos son impor-
tas enzimas. Principales especies: ms lentas. Debajo de 5,6 su desarrollo cesa, de modo tantes fuentes de AGV de cadena ramificada para espe-
que la presencia en la dieta de productos que favorecen a) Bacteroides amylophilus - bacilos y formas cocoides, cies celulolticas y proveen de amonio para especies que
a) Fibrobacter succinogenes - bacilos o cocos Gram- la acidez, inhiben la digestin de materiales fibrosos. Dis- Gram- lo prefieren como fuente de N.
minuyen tambin en presencia de sustratos competitivos,
b) Ruminococcus albus - cocos Gram+ como el almidn. b) Streptococcus bovis - cocos Gram+ Las bacterias se adhieren a la pared del rumen y pueden
jugar rol en la hidrlisis de la urea.
c) Ruminococcus flavefaciens cocos Gram+
c) Selenomonas ruminantium bacilos Gram negativos
Principales bacterias xilanolticas Pueden representar entre el 22 al 51% del total de los Muchas de esas especies son anaerobias facultativas.
Las tres especies degradan celulosa a velocidad cons-
recuentos de viables. El principal sustrato es el almi-
tante sobre la superficie de las fibras, decrecen por
a) Butyrivibrio fibrisolvens bacilos curvos Gram positi- dn pero pueden usar lactato. La actividad -amilasa Organismos Gram negativos del fluido ruminal pueden
la predacin por los protozoos, presentan especifici-
vos. Los cidos butrico, frmico, actico y lctico son est presente en algunas especies (ej. B. bovis), pero colonizar la pared del rumen. Las colonias de la pared
dad de sustratos, usan celulosa o sus productos de
los principales productos finales de la fermentacin no parecen atacar directamente al almidn. Algunas ruminal invaden reas daadas, accediendo a la vena
hidrlisis.
especies (ej. B. amylophilus) atacan grnulos de almi- porta, con formacin de abcesos en el hgado.
b) Prevotella ruminicola (formalmente Bacteroides rumi- dn y parecen tener una -amilasa intracelular.
Forman una cubierta extracelular que les permite adhe- nicola) bacilos Gram negativos. Los cidos succnico,
sin a la celulosa. Las enzimas se localizan cerca o en la actico y frmico son los principales productos finales Bacterias metanognicas
superficie del organismo, lo que probablemente disminu-
Principales bacterias proteolticas
ye la prdida de celulasas por proteolisis. Como resulta- Se conoce menos sobre la biodegradacin de los xilanos El mecanismo primario de produccin de metano en el
do, la actividad celuloltica del fluido ruminal es mnima. en relacin con la celulosa. El catabolismo de protenas y aminocidos que libera rumen es la reduccin del CO2.
Su desarrollo sigue una cintica de primer orden, depen-
amonio en el rumen es de gran inters en la nutricin del
diendo de la disponibilidad de sustrato, ms probablemente
animal, aunque su exceso puede ocasionar problemas. Se funcin es mantener baja la concentracin de hidr-
de la disponibilidad de la celulosa. Producen primaria- Bacterias amilolticas El amonio es tambin requerido por microorganismos fer- geno en el rumen, lo que facilita un crecimiento ms efi-
mente succinato y acetato como productos finales de la
mentadores, algunos de los cuales pueden tambin usar ciente de otras bacterias del rumen. Los organismos me-
fermentacin La mayora de las bacterias amilolticas son incapaces de aminocidos o pptidos. tanognicos predominantes son generalmente bacilos
usar celulosa. Las enzimas amilolticas estn muy distri- Gram positivos.
Las tres especies son anaerobias estrictas y presentan buidas entre las bacterias y son ellas la que aseguran la Las proteinas de la microflora constituyen la fuen-
un estrecho rango de pH para su crecimiento -pH 6 a 7-. conversin de materiales amilceos, como granos de ce- te primaria de N para el animal. Methanobrevibacter ruminantium, Methanobacterium for-
Requieren ciertos AGV de cadena ramificada para su cre- reales, en cidos grasos voltiles. La mayora de las protenas contenidas en la dieta son micicum y Methanomicrobium mobile.
cimiento. En cultivos mixtos, estos son aportados por bac-
rpidamente hidrolizadas en el rumen. Parte de los ami-
terias que fermentan aminocidos Con amonio, el proceso es ms eficiente. Asi, Streptococ-
nocidos son inmovilizados por bacterias y protozoos, los Este grupo puede producir ms de 200 litros de CH4 por
cus bovis produce acetato y etanol cuando se multiplica
restantes son fuente de energa y son degradadas a AGV da en una vaca de 500 kg. Este gas es expelido, en parte
Muchas de las especies celulolticas pueden tambin de- lentamente, pero forma lactato si crece rpidamente. Esta
y amonio. El exceso de amonio es absorbido por el ani- con el CO2 por el animal. Condiciones que restringen la
gradar la fraccin mal llamada hemicelulosa. especie es ms tolerante a la acidez que la mayora de
mal y convertido en urea en el hgado. metanognesis favorecen la produccin de propionato e
las bacterias del rumen. No son muy abundantes, pero
incrementan la relacin propionato/acetato en los produc-
En medios de cultivo, las bacterias producen metabolitos se hacen dominantes si la acumulacin de cido lctico
La actividad proteoltica est ampliamente distribuida en- tos finales de la fermentacin.
diferentes que en el rumen, ya que all las bacterias estn sobrepasa la capacidad tampn del rumen. Severa acido-
tre los microorganismos del rumen, se ha detectado en
asociadas y los productos finales de una son empleados sis (pH 5,0) puede ocurrir cuando la dieta se cambia abrup-
ms del 38% de los aislamientos a partir de rumen de La metanognesis promueve la sntesis de ATP, el creci-
por otras. As, B. succinogenes libera succinato a partir tamente de celulosa a almidn o sacarosa.
ganado vacuno. La degradacin de aminocidos parece miento microbiano y la produccin de acetato, con la pr-
de celulosa, pero in vivo, ste es convertido por otras es-
ser ms especializada. dida de ms de 15% de la energa del alimento, como
pecies en propionato, uno de los principales productos de La microflora que convierte lactato en acetato y propio-
metano.
la fermentacin. nato no est presente en nmero suficiente o se multi-
Bacterias hidrolticas den constituir hasta el 8% de la biomasa intra-ruminal. lipasas) y fructosa. Las celulolticas, como Ruminococcus y Bacterias verstiles incluyen Butyrivibrio, algunas de cu-
Los flagelados, con sus zoosporas mviles, se confundie- Fibrobacter crecen sobretodo en celulosa, aunque muchas yas especies son celulolticas, Bacteroides ruminicola y
Oligosacridos y azcares solubles, productos finales de la ron mucho tiempo con protozoos y colonizan regiones especies hidrolizan hemicelulosas, pero en general no em- Selenomonas. Clostridium polysaccharolyticum es uno de
degradacin de la celulosa, son empleados por numerosos daadas de los tejidos vegetales en las 2 horas de la plean los productos de la hidrlisis. Bacteroidamylophilus las pocas bacterias del rumen capaces de emplear celu-
microorganismos que los degradan obteniendo energa, ingestin en respuesta a materiales solubles. En las 22 degrada almidn y azcares derivados del almidn. losa y almidn como sustratos.
de modo que la biomasa crece rpidamente. Se forma ATP, horas ms del 30% de las partculas mayores se aprecian
poder reductor (NADH) y ferredoxina reducida, que se reci- invadidas por rizoides. + -
clan por oxidacin con liberacin de H2, que puede inhibir a Cuadro 2 Algunas bacterias G y G del rumen
las enzimas responsables. Otros mecanismos biosintticos En cultivo puro algunos de estos hongos fermentan celu-
ocurren, con produccin de propionato y butirato, pero esta losa, liberando acetato, lactato, CO2 e H2. La celulasa li-
diversificacin puede limitarse en el rumen por las bacte- berada al medio incrementa la degradacin. Hemicelulo- Gram positivas
rias metanognicas (CO2 + H2= CH4). sas, xilanos, almidn y azcares son tambin fermenta- Especie Morfologa (G+C)% Productos Sustratos
dos. La lignina no parece ser degradada por los hongos
anaerobios del rumen. Bacteroides ruminicola bacilo 49-50 AS amplio: hidrol.proteinas
Otras fuentes de energa
Su principal rol parece relacionado a facilitar la des- Ruminobacte amylophilus 40.42 FAS almidn
Lpidos aparicin de la pared celular. Fibrobacter succinogenes 47-49 AS celulosa
Slo bajos niveles de lpidos (7%) son adecuados en la
Selenomonas ruminantium variada 54 LPA amplio
dieta del rumiante. A niveles ms altos, la liberacin de Las principales especies descriptas son:
cidos grasos por su hidrlisis inhibe la digestin de las Neocallimastix frontalis, Sphaeromonas communis, y Pyro- Butyrivibrio fibrisolvens bacilo curvo 36-41 FBA FBA
fibras, posiblemente por recubrimiento superficial de las monas communis. Anaerovibrio lipolytica bacilo ND PSA lipoltico
partculas que limita la adhesin bacteriana. Algunas bac-
terias convierten el glicerol liberado en AGV, otras hidro- Parecen importantes en dietas con alto contenido de fo- Veillonella parvula Cocos 38-41 AP H2 lactato
genan cidos no saturados convirtindolos en saturados rrajes, pero en general su contribucin a la digestin no Succinimonas amylolytica cocos ND S Almidn
est an bien definida. Atacan residuos vegetales y pue-
Acidos grasos voltiles den degradar celulosa y xilanos. Su rol en la digestin de
En el rumen existen bacterias que usan AGV, pero como fibras parece ser relativamente menor que la de las bac- Gram negativas
ellos son rpidamente asimilados por el animal, su nme- terias
ro permanece bajo. Entonces, de los productos finales de Ruminococcus albus cocos 42-46 A H2 CO2 celulosa
la fermentacin del rumen: Han sido identificadas especies de 4 gneros: Neocalli- R. flavefaciens cocos 39-44 AS H2 celulosa
mastix, Caecomyces (formalmente Sphaeromona),
Streptococcus bovis cocos 37-39 L CO2 almidn
a) los AGV son metabolizados slo por microorganismos Pyromyces (formalmente Phyromonas) y Orpinomyces
que no prosperan en el ambiente del rumen, (Theodorou et al., 1992). Resultan ms fciles de cultivar Lachnospira multiparus bacilos ND FAL H2 CO2 pectina
que los protozoos y su ciclo de vida involucra un cuerpo Eubacterium riminantium bacilos ND FBL CO2 xilano
b) el CO2 se produce ms rpido que lo que se usa y cons- de fructificacin (esporangio), originado a partir de una
tituye (dependiendo del tipo de fermentacin) cerca de zoospora mvil que se adhiere a las fibras y desarrolla E. oxidoreducens bacilos 36 L H2 aromticos ?
65% de los gases expelidos por el animal y esporangios y filamentos rizoidales, que penetran la ma- Lactobacillus ruminis bacilos 44-47 L azcares
triz lignocelulsica, donde actan las enzimas.
c) el metano, que constituye el resto del 35%, no puede L. vitulinus bacilos 34-37 L azcares
aportar energa a los microorganismos en las condicio- Los hongos liberan un complejo celulsico ms soluble Clostridium polysaccharolyticum bacilos ND FBA H2 celulosa/almidn
nes anaerobias del rumen. que el de las bacterias y atacan partculas rugosas a las
(esporas)
que fermentan ms rpidamente que las bacterias. Ali-
Hongos del rumen mentos finamente molidos o altamente concentrados pre-
sentan menos hongos. Existe evidencia de que su inocu-
F=formiato; A=acetato; P=propionato; B=butirato; V=valerato;
El aporte de hongos Phycomycetes en las fermentacio- lacin puede incrementar la digestin de las fibras asi
S= succinato; L= lactosa; ND= no determinado
nes del rumen ha sido reconocido recientemente y pue- como el desarrollo de jvenes rumiantes.
Bacterias en el rumen Las actividades bioqumicas de las bacterias del rumen Los hongos producen AGV, gases y trazas de etanol y La concentracin tpica en el rumen vara entre 104 a 106
han sido estudiadas con cierto detalle. Los estudios in- lactato. protozoos por mL. Los valores pueden bajar a102 a 103 /
Las bacterias del rumen son integrantes de un consorcio vivo brindan informacin sobre el tipo de fermentacin mL con dietas altamente concentradas. Todos los proto-
que realiza varias funciones vitales para el desarrollo del dominante, pero no sobre las actividades de cada espe- Su contribucin a la biomasa microbiana puede ser zoos del rumen son estrictamente anaerobios. Disminu-
husped: cie. El examen microscpico directo del contenido rumi- baja, como la de los protozoos, ya que se ubican en la yen en nmero desde el nacimiento a la madurez del ani-
nal proporciona considerable informacin, pero poca so- ingesta de lento movimiento, evitando su rpido lava- mal. La menor concentracin se encuentra en rumiantes
1) Las fibras y otros restos de polmeros vegetales no bre las actividades de los microorganismos. do. No son esenciales para la sobrevivencia de los ru- adultos. La acidez disminuye el nmero de protozoos, pero
degradados por enzimas del animal, son fermentados a miantes, estn presentes en bajo nmero o an au- no los elimina totalmente
cidos grasos voltiles, CO2 y CH4. Los AGV pasan las Microorganismos que emplean productos liberados por sentes en animales con dieta baja en fibras, pero se
paredes del rumen hacia el sistema circulatorio y son otros pueden representar ms del 60% del nmero de piensa que contribuyen a la digestin de forrajes de Variedad de especies se encuentran sobre el forraje y en
oxidados en el hgado, constituyendo la mayor parte de especies y constituyen un importante grupo funcional. Pro- baja calidad. las dietas mezclas (forrajes/concentrados).
la energa requerida por el husped (figura 1). Tambin ductos liberados en cultivo puro no han sido detectados
se usan en la sntesis de materiales celulares. en el rumen: como etanol, succinato y formiato, debido al Se necesitan mayores estudios para evaluar las funcio- Rol de los protozoos: regulan la relacin protozoo/ bac-
metabolismo compartido, relaciones sintrficas. nes de los hongos en el rumen, sus interacciones con los teria, parecen actuar como predatores no selectivos.
2) La fermentacin est acoplada al crecimiento micro-
protozoos, bacterias celulolticos, metanognicas y otras
biano y las protenas de la biomasa constituyen la prin-
El concepto de sintrofia difiere del de simbiosis, en que especies que emplean H2. La degradacin de las protenas microbianas por los pro-
cipal fuente de nitrgeno para el animal.
ms de 2 especies estn involucradas y el beneficio mu- tozoos contribuye a aumentar el amonio del rumen, pue-
3) Los microorganismos del rumen sintetizan vitaminas, tuo se relaciona a las fuentes nutritivas de energa. Los den contener 10 a 40% del N total del rumen. Sin em-
sobretodo del complejo B, empleadas por el husped. grupos sintrficos relacionados a la degradacin de fibras, Protozoos del rumen bargo, el flujo de protenas de los protozoos hacia el duo-
incluye, por ejemplo, a los celulolticos, hemicelulolticos deno es menor que lo esperado desde la masa ruminal,
4) Algunas bacterias degradan componentes txicos de
y microorganismos que los suceden, como las bacterias Constituyen los organismos ms conspicuos en el ru- indicando probablemente un reciclamiento de las pro-
la dieta. Ejemplo son los aminocidos mimosina y sus
metanognicas. Las ms competitivas presentan adhe- men y en el tracto digestivo de algunos monogstri- tenas de los protozoos en el rumen. Absorben almidn
derivados, componentes del forraje de Leucaena, feno-
sin al sustrato y almacenamiento efectivo de la energa cos hervboros y su rol ha sido debatido por dcadas. y pueden almacenar glicgeno. Pueden ser benficos
les vegetales, como la cumarina (1,2 benzopirona), la
dentro de la clula. Forman gran proporcin de la biomasa (20-40% del N estimulando la fermentacin ruminal. Liberan productos
canavanina, anloga de la arginina, componente de la
microbiano), pero su contribucin es menor por la finales de la fermentacin, sobretodo acetato, butirato,
leguminosa Canavalia ensiformis, que inhibe a algunas
Las bacterias ruminales son muchas veces clasificadas gran retencin y su menor actividad metablica. Su butirato e H2.
bacterias del rumen, pero es hidrolizada por otras.
por el empleo de distintos sustratos y por los productos tiempo de generacin es grande y la sobrevivencia
finales de su metabolismo. en el rumen depende de las estrategias que reducen La eliminacin de los protozoos incrementa la proporcin
Representan la clase predominante de microorganismos:
el lavado. de propionato en el fludo ruminal
1.1010 a 1011 /g de contenido ruminal.
Las Eubacterias del rumen se caracterizan en base a:
morfologa y Gram, productos de la fermentacin, rango Pueden representar una biomasa igual o mayor que la de La mayora de los componentes son Ciliata, los organis-
Probablemente acten ms de 200 especies, pero slo
de sustratos usados, relacin molar (G+C)% de su ADN y las bacterias. mos unicelulares ms complejos. Su biomasa es en ge-
unas pocas parecen tener significado cuantitativo. Las
en menor grado por la composicin de cidos grasos en neral similar a la de las bacterias, pero pueden sobre-
nuevas tcnicas de biologa molecular que emplean son-
los fosfolpidos. Su contribucin a la fermentacin en el rumen no est pasarla ms de 3 veces segn la dieta, o incluso des-
das gnicas han hecho cambiar rpidamente la identifica-
muy clara, en parte por la dificultad de cultivo libre de bac- aparecer. Su densidad es del orden de 105-106/mL. Las
cin de las bacterias ruminales Se han informado de 22 El cuadro 2 presenta las caractersticas de bacterias Gram terias, a las que predan. Esta constituye su principal fun- distintas especies varan en tamao entre 25 a 250
gneros y 63 especies. negativas y Gram positivas del rumen (Stewart, 1991). cin: ingieren partculas del tamao de las bacterias, as micras, agrupados en 17 gneros de la sub-clase Ento-
como almidn, fibras, cloroplastos. La mayora de las tc- diniomorphes y 2 gneros de la sub-clase Holotriches,
La mayora son anaerobios obligados, pero coexisten las Las bacterias pequeas constituyen ms de la mitad de la nicas de estudio involucran eliminacin de las bacterias: que difieren en su morfologa y metabolismo. Las espe-
anaerobias facultativas que pueden representar un 107 to biomasa y son muy activas: digieren hidratos de carbono: qumicamente (agentes activos de superficie), por conge- cies presentes varan con la especie animal, la locali-
108 por gramo de contenido ruminal, adheridas a las pa- celulosa, hemicelulosa, pectina, almidn y azcares. Otras lamiento del lquido ruminal. dad, la dieta.
redes del rumen y usan el O2 que difunde del torrente emplean celulodextrinas, pentosas, glucosa, lactato, suc-
circulatorio. Son ms fciles de aislar, aunque no son im- cinato, formiato, H2, como fuentes de energa. Se piensa que la actividad celuloltica se realice por la Los tiempos de generacin varan entre 0,5 a 2 das. Los
portantes en las funciones del rumen, pero se hacen do-
flora bacteriana asociada. Algunos autores los conside- ms lentos pueden desaparecer con los fludos del ru-
minantes en disfunciones de este sistema. Las ms im- Veillonela parvula, por ejemplo, crece principalmente en ran minirumiantes que albergan bacterias celulolticas y men, pero varios permanecen adheridos a fragmentos de
portantes son las que fermentan la celulosa. lactato y Anaerovibrio en glicerol (liberado de los lpidos por otras que metabolizan lo que ellos ingieren. alimento, por lo que son ms retenidos que las bacterias
y una gran proporcin (ms de 2/3) pueden ser lisados en b) son capaces de almacenar hidratos de carbono adi- lquida, el fluido ruminal, donde grupos de microorganis- des cantidades de hidratos de carbono fcilmente fer-
el rumen. cionales en forma de un polmero insoluble, la amilo- mos se encuentran libres, se nutren de protenas y carbo- mentables, ocurren varios cambios en la poblacin mi-
pectina hidratos solubles. Esta porcin constituye un 25% de la crobiana, con predominio de aquellos que producen y
Los ciliados constituyen la poblacin mayor en rumiantes biomasa microbiana. utilizan lactato.
adultos y las clases principales de ciliados son los holotri- c) los Holotriches son ms fcilmente destruidos por la
cos y los entodiniomorfos acidez y los Entodiniomorphes son menos sensibles. Luego se encuentra la fase slida, donde los grupos mi- Los microorganismos productores de lactato, sensibles a
crobianos asociados o adheridos a partculas alimenticias la acidez, son remplazadas por consumidores de lactato,
* Holotricos: presentan cilias en toda la superficie celular d) no pueden sintetizar aminocidos a partir de compues- digieren polisacridos insolubles, como almidn o fibras, cido tolerantes. Se puede producir una acidosis lctica
tos simples de nitrgeno y dependen de las bacterias, as como a las protenas menos solubles. Constituyen por este cambio brusco a una dieta rica en concentrados.
* Entodiniomorfos: la mayora de la superficie no presenta cuyos aminocidos emplean luego de fagocitarlas (1% ms del 70% de la biomasa microbiana. Se mantiene entonces alta la poblacin que usa lactato para
cilias, stas estn restringidas a un solo grupo alrede- de las bacterias del rumen pueden ser fagocitadas por evitar su excesiva acumulacin, lo que provoca descenso
dor de la citofaringe (cavidad de entrada de nutrientes). cilados en cada minuto). Son responsables de la pro- En la ltima fase, un 5% de los microorganismos estn del pH del rumen a niveles muy cidos, menores de 5,5.
Los principales holotricos son Isotricha y Dasytricha duccin de gran parte del amonio en el rumen adheridos al epitelio del rumen o a los protozoos.
El pH del rumen es uno de los factores que afectan las
* Isotricha fermenta almidn, sacarosa, glucosa, pectina e) a diferencia de las bacterias, los ciliados del rumen no La adhesin de la microflora al rumen tiene importancia poblaciones microbianas y los niveles de cidos grasos
son esenciales para los procesos de fermentacin, pero para el rumiante. Para que las bacterias mantengan su voltiles. El pH del rumen en el cual ciertas funciones son
* Isotricha intestinalis e Isotricha prostoma son dos espe- contribuyen a su eficiencia. nmero en el rumen, es necesario que su tiempo de ge- optimizadas, puede variar. Los microorganismos que de-
cies encontradas en el rumen, su gran tamao hace de neracin sea menor que el tiempo de reciclado de la in- gradan fibras son ms activos a pH 6.2 a 6.8. Las bacte-
ellas las especies ms conspicuas cuando el fludo es Ciliados celulolticos gesta del rumen. Como la velocidad de pasaje de los rias celulolticas y metanognicas pueden reducirse cuan-
analizado al microscopio Pocos gneros de Epidinium estn involucrados en la frag- nutrientes por la fase particulada es mucho ms lenta do el pH baja debajo de 6,0. Los degradadores del almi-
mentacin de los restos vegetales. Secretan enzimas que que la de la fase lquida, las especies que se adhieren a dn prefieren un pH ms cido de 5.2 a 6.0. Ciertos pro-
* Dasytricha fermenta almidn, maltosa, celobiosa, promueven la separacin de las clulas y la fragmenta- los materiales slidos, son especies de crecimiento len- tozoos pueden deprimirse con pH debajo de 5.5. Para
glucosa Dasytricha ruminantium es la nica espe- cin del material. to, y as, se evita su lavado fuera del rumen. satisfacer estas demandas, las dietas normales deben
cie encontrada en el rumen. Los holotricos pueden mantener rangos de pH entre 5.8 a 6.4.
almacenar amilopectina (reservas carbonadas del En condiciones adecuadas ms de la mitad de la activi- La composicin de la dieta afecta el nmero y las pro-
protozoo). dad celuloltica del rumen se asocia con los ciliados. La porciones relativas de las diferentes especies micro- El cuadro 1 (van Soest, 1994) presenta los organismos
mayor actividad se da cuando la enzima es liberada luego bianas en el rumen. La mayora de los cambios en la descriptos en el rumen. Las bacterias pequeas cons-
* Entodinia y Diplodinia son los principales gneros ento- de la lisis celular que ocurre por exposicin al O2 en la dieta requieren un perodo de transicin para permitir tituyen la mitad de la biomasa en rumen normal, pero
diniomorfos ruminacin o por hipotona causada luego de la ingestin incrementar diferentes especies microbianas, periodo son responsables de la mayor actividad metablica (ge-
de agua. que puede durar varios das. Cuando se incluyen gran- neralmente en relacin inversa al tamao celular).
Entodinium bursa y Entodinium caudatum son especies
comunes, pero se han descripto otras especies. Fermen- Ciliados amilolticos
Cuadro 1. Nmero y volumen relativo de microorganismos en el rumen
tan almidn, hemicelulosa, celobiosa. glucosa, maltosa y Todos los Entodiniomorphes emplean almidn, cuyo ex-
sacarosa ceso almacenan como amilopectina. Sin embargo, uno
Grupo N/mL Vol celular Biomasa tg % de la
de los dos gneros de Holotriches no puede usar almi-
(3 ) (mg/100mL) biomasa total
Diplodinia spp. varias especies han sido aisladas e iden- dn. La mayora prefiere azcares solubles y se mueven
tificadas (ejemplo: Diplodinium polyplastron y Diplodinium rpidamente hacia ellos. Se estima que ms de 1/3 de los
Bacterias pequeas 1x1010 1 1.600 20min 60-90
eudiplodinium). La mayora fermenta celulosa, hemicelu- azcares ingeridos por el animal puede convertirse en
Selenomonas 1x108 30 300
losa, glucosa y almidn amilopectina.
Oscillospira flagellates 1x106 250 25
Los ciliados difieren de las bacterias en varios aspec- Otras fuentes de energa: Los ciliados son responsables
Protozoos,ciliados 10-40
tos: de del 30-40% de la lipolisis. Incrementan el contenido de 5 4
Entodinia 3x10 1x10 300 8h
cidos grasos saturados. Un 75% de los lpidos microbia-
Dashytricha + Diplodinia 3x104 1x105 300
a) son muy mviles e invaden a los alimentos recin inge- nos estn normalmente asociados con los ciliados, por lo
Isotricha + Epidinia 1x104 1x106 1100 36h
ridos tan rpidamente como las bacterias, a pesar de que su contribucin al husped puede ser significativa.
Isotricha + Epidinia 1x104 1x105 24h 5-10
su menor nmero. No son muy importantes en la degradacin de protenas
robiosis las que se inoculan e incuban en los medios es- cies bacterianas del rumen pueden fermentar ms de de la dieta, usan las de las bacterias fagocitadas. El animal obtiene ms energa cuando se produce cido
cogidos para efectuar el recuento de bacterias, mante- un sustrato. propinico en relacin al cido actico. La liberacin de
niendo siempre la anaerobiosis. El nivel proteico del rumen se incrementa cuando se eli- H2 y CH4 (producto de desecho) es mayor cuando se for-
Las bacterias productoras de metano constituyen un gru- minan los protozoos. ma cido actico.
Se usan diferentes cmaras de incubacin con atmsfe- po muy particular responsables de regular todos los pro-
ra controlada, en general con suficiente CO2, que man- cesos de fermentacin en el rumen. Remueven el gas H2 Eliminacin de los protozoos: se logra por varios pro- La principal prdida de energa se da por la liberacin de
tiene el pH a niveles adecuados y es empleado por nu- al reducir el CO2 con el H2 para dar metano. La produc- cedimientos: cambios en la dieta, agregando varios agen- H2 y CH4. Vemos que la produccin de 2 moles de cido
merosas bacterias. Se usa tambin una mezcla con cin de metano mantiene la concentracin de H2 baja, lo tes qumicos o aislando jvenes animales. No se afecta propinico a partir de un mol de hexosa, requiere H2 adi-
95% de CO2 y 5% de H2. que permite a las bacterias metanognicas promover el mucho el metabolismo del rumen, pero puede alterar el cional. El cido propinico acta como ligando del H2 y
crecimiento de otras especies bacterianas y una ms efi- balance de los productos: una dieta de granos con proto- reduce la prdida de energa por formacin de metano.
Se emplean medios no selectivos para recuento, aisla- ciente fermentacin. Tambin la remocin de H2 favorece zoos presentes produce alto nivel de butirato, mientras
miento y mantenimiento de bacterias del rumen. Los re- a especies productoras de H2 aumentando los rendimien- que sin ellos, domina el propionato. Se aprecia la complejidad de este sistema biolgico, mu-
cuentos se hacen en tubos con medio slido, previamen- tos en biomasa con el resultado de mayor sntesis de c- chos de cuyos aspectos han sido estudiados extensiva-
te fundido a 45C antes de inocular, girado sobre las pare- lulas microbianas, e incremento de protenas disponibles Las funciones de los protozoos en el rumen son comple- mente, otros restan por investigarse.
des hasta que el agar solidifica (roll-tubes). Las colonias para el rumiante. jas. Su eliminacin parece aumentar el rendimiento mi-
quedan incluidas en el agar, a lo largo del tubo. crobiano y la absorcin de aminocidos por el animal, que
Los protozoos en el rumen oscilan entre 105 a 106 / en dietas con pajas pobres, resultara benfico. Mientras Interacciones microbianas en el rumen
Adems de los medios no selectivos, se emplean gran gramo de rumen y son afectados por la alimentacin. que en dietas ricas en almidn, los protozoos tendran otro
nmero de medios selectivos, que permiten evaluar gru- Altos nmeros de protozoos son generalmente encon- rol benfico controlando la acidosis: al englobar partcu- Las interacciones entre los numerosos microorganis-
pos particulares, como amilolticos, pectinolticos, lipolti- trados en el rumen con dietas de alta digestibilidad. las indiscriminadamente, inducen una latencia en la fer- mos se comprenden mejor al comparar al rumen con
cos, metanognicos. Diferencias en la composicin de la dieta estimulan a mentacin del almidn, limitando la acidificacin. un sistema dinmico y cambiante. Es precisamente
distintos gneros de protozoos. Algunas gneros incre- la flexibilidad de este complejo sistema que hace po-
mentan con dietas con grandes cantidades de azca- sible la conversin de un amplio rango de sustratos
Poblacin microbiana del rumen res solubles y otros gneros predominan con dietas de Obtencin de energa por microorganismos en AGV de los cuales depende el rumiante para obte-
alto nivel de almidn. del rumen ner energa.
La poblacin microbiana del rumen consiste en bacterias,
protozoos y hongos. La mayora de la poblacin microbia- Los protozoos ingieren bacterias como fuente de prote- El rumen es un ambiente estrictamente anaerobio, los AGV Las interacciones metablicas entre las distintas pobla-
na son bacterias cuyo nmero alcanza 1010 a 1011 bacte- nas. Ellos tambin aparecen como estabilizadores de pro- son sus productos de excrecin y son absorbidos directa- ciones del rumen resultan esenciales para sostener a la
rias/g de contenido ruminal. El balance entre los tres ductos finales de la fermentacin. Los protozoos, como mente desde el rumen hacia el husped constituyendo la comunidad microbiana y sus actividades. Productos del
tipos principales de microorganismos y el equilibrio de las bacterias y los hongos contribuyen a la digestin de principal fuente de energa. La fermentacin de hidratos metabolismo de algunos microorganismos son fuente de
especies en cada grupo est tambin regulada por las las fibras. Mientras que los protozoos son parte integral de carbono es la principal fuente de energa para los mi- energa para otros. La liberacin de vitaminas y produc-
condiciones ambientales en el rumen, incluyendo los sus- de la poblacin microbiana del rumen y ejercen marcado croorganismos anaerobios del rumen. Las protenas con- tos del metabolismo del nitrgeno constituyen fuentes
tratos aportados por la dieta. efecto en la fermentacin, su beneficio al rumiante es aun tribuyen con menos del 1% del total de energa y el aporte para otros microorganismos. El tipo y grado de estas in-
controvertido. por el glicerol es menor. teracciones regulan las concentraciones y actividades
Las bacterias pueden agruparse de acuerdo a sus formas de especies individuales y la naturaleza cuali y cuanti-
tpicas (cocos, bacilos, espirilos), por su tamao (general- Los hongos anaerobios constituyen el grupo ms recien- La fermentacin de glucosa en los 3 principales AGV con- tativa de los productos de la fermentacin de los sustra-
mente desde 0,3 a 50micras) y por sus estructuras. Tam- temente reconocido de microorganismos del rumen. Cuan- duce a: tos ingeridos.
bin pueden agruparse segn el tipo de sustrato que fer- do los animales se nutren con dieta rica en forrajes, los
mentan. hongos del rumen pueden contribuir con ms del 8% de cido actico: C6H12O6 2CH3COOH+ CO2+ H2 Interacciones nutritivas
la biomasa microbiana. Aunque no est claro si estos hon- Los rumiantes no requieren vitaminas del complejo B en
cido propinico: C6H12O6 2CH3-CH2-COOH + 2H2O
Las especies presentes en el rumen degradan o utili- gos son funcionalmente significativos, se ha mostrado que su dieta. Sus requerimientos son satisfechos por la micro-

zan productos tales como celulosa, hemicelulosas, al- pueden degradar celulosa y xilanos, indicando rol en la cido butrico: C6H12O6 CH3CH2CH2COOH + 2CO2 + H2 flora del rumen. Es alto el nmero de especies que re-
midn, azcares, protenas, cidos orgnicos interme- digestin de fibras. quieren biotina y cido para-amino benzico (PABA) o bio-
diarios, lpidos y producen metano. Una clasificacin Etapa final: metano (respiracin anaerobia): tina y cido flico. La biotina se requiere para la decar-
ms extendida puede incluir degradadores de la pecti- Existen tres ambientes interconectados en el rumen don- 4H2 +CO2 CH4 + 2H20 boxilacin del succinato a propionato, principal reaccin
na y productoras de amonio. La mayora de las espe- de se localizan los microorganismos. La primera es la fase en la fermentacin del rumen.
Interacciones entre compuestos nitrogenados Estas asociaciones nutricionales han sido verificadas en flujo continuo de saliva, el paso del contenido a lo largo Metodologa de estudio
Las protenas de la dieta se convierten en protenas mico-cultivos in-vitro. El xito en la competencia por los del tracto digestivo y por la absorcin de los productos
crobianas. Numerosas especies presentan actividad pro- productos solubles obtenidos de la hidrlisis de polme- finales del metabolismo a travs de la pared del rumen. Se han empleado numerosas tcnicas para estos estu-
teoltica, liberando pptidos, aminocidos y amonio. La ros por especies no-hidrolticas, depende de las veloci- La muerte y autolisis de microorganismos asegura el de- dios.
principal fuente de N para la mayora de las especies, es dades de transporte en las clulas y de su metabolismo sarrollo de otros microorganismos que se nutren de los
el amonio, aunque algunas especies no proteolticas em- posterior. productos liberados (canibalismo). Suspensiones lavadas: un gran volumen de contenido
plean aminocidos. ruminal se filtra por tela y luego se centrifuga primero len-
Los productos de bajo peso molecular de la hidrlisis de En general, los organismos sobreviven en este ecosis- tamente para eliminar los protozoos grandes y luego a
La figura 3 (Wolin, 1979) resume el metabolismo de las polisacridos son fermentados a acetato, butirato, H2 y tema si su tiempo de generacin es menor que el tiempo mayor velocidad por 30 y se incuba con solucin de fos-
protenas en el rumen. Las protenas de la dieta se con- CO2 por especies individuales de bacterias y protozoos. de retencin en este rgano. Muchos microorganismos fatos para regular el pH, en anaerobiosis con el sustrato a
vierten principalmente en nitrgeno microbiano. Algunas La produccin de propionato y CH4 requiere de la interac- pueden sobrevivir en situaciones de rpido trnsito por analizar. Se siguen procesos como la decarboxilacin del
bacterias, como Bacteroides ruminicola pueden degradar cin de especies: las que producen succinato con otras adhesin a las paredes o a partculas grandes de ali- cido succnico y la reduccin de los nitratos. Se aprecia
aminocidos de cadena ramificada en los respectivos ci- que lo decarboxilan a propionato y CO2. Esta interaccin mentos. generalmente correlacin con los resultados obtenidos in-
dos grasos, con un carbono menos. es muy importante en el rumen, ya que el propionato es el vivo. Esta tcnica constituye un medio til para estudiar
principal sustrato gluconeognico para los rumiantes. La Generalmente, las especies dominantes en el rumen con- con detalle las propiedades de la flora mixta del rumen
Interacciones microbianas estn involucradas tambin en figura 4 muestra la interaccin entre Fibrobacter succino- vierten la energa del sustrato en biomasa, resultando luego de la eliminacin de complicaciones como la absor-
la degradacin de protenas de la dieta, como por ejem- genes y Selenomonas ruminantium. El organismo celulo- en menor formacin de cidos por unidad de sustrato. cin a partculas y la presencia de varios sustratos.
plo entre Ruminococcus albus y B. ruminicola en co-culti- ltico produce succinato, acetato y formiato. Cuando am- La seleccin natural tambin favorece el mximo traba-
vo en medio con celulosa y casena, como nicas fuentes bas especies crecen juntas, sin embargo, los productos jo bioqumico, en general en relacin inversa al tamao Rumen artificial: existen numerosos dispositivos para rea-
de energa y N, respectivamente. El celuloltico R. albus finales incluyen propionato y CO2: el succionato es intercelular. lizar los estudios in-vitro que tienden a similar las condi-
provee a la pareja con productos de la hidrlisis del poli- medio en la formacin de propionato y S. ruminantium ciones fsico-qumicas y ambientales del rumen natural.
sacrido. B. ruminicola degrada la casena y libera amo- aporta el CO2 requerido por Fibrobacter. Si bien la proporcin de los productos finales vara, ellos Estos se perfeccionan de modo de analizar efectos de
nio e isobutirato requerido por el primero. consisten principalmente en: CO2, CH4 y tres cidos gra- poblaciones microbianas, condiciones vinculadas a la nu-
celulosa + CO2 sos voltiles (AGV): actico, propinico y buttrico, junto a tricin y factores ambientales. Constituyen verdaderos
Fermentacin de hidratos de carbono amonio, trazas de otros cidos grasos y algunas veces, reactores con controles de entrada y salida de metaboli-
Los polisacridos de la dieta son la fuente principal de C y Fibrobacter succinogenes cido lctico. tos, regulacin de condiciones de incubacin, como tem-
energa para los microorganismos del rumen. las interac- peratura, pH, presin osmtica, etc. y permiten estudiar la
ciones son numerosas y los productos de hidrlisis son fragmentos de celulosa Microorganismos anaerobios con adaptaciones ecolgi- degradacin de diferentes sustancias por poblaciones
asimilados por la poblacin asociada. A pesar de que la cas y requerimientos nutritivos similares existen en los si- microbianas solas o asociadas.
celulasa est presente en pocas especies de bacterias, succinato Selenomonas ruminantium los, aguas servidas, en la biodegradacin anaerobia de
protozoos y ficomicetos anaerobios, los productos de la restos orgnicos. La diferencia ms marcada es que en Aislamiento y cultivo de microorganismos del rumen
+
hidrlisis son sustrato para organismos no celulticos. la biodegradacin anaerobia en silos o aguas el tiempo La mayor dificultad en estos estudios radica en el mante-
acetato propionato
de retencin es mayor, con ms eficiencia en la extrac- nimiento de las condiciones de anaerobiosis durante el
+ cin de la energa del sustrato y proliferacin de bacterias muestreo, siembra y cultivo de los microorganismos, mu-
Protenas en Protozoos
formiato acetato metanognicas que poseen un tiempo de generacin chos de los cuales viven asociados entre si, lo que dificul-
Protenas en la dieta Protenas bacterianas mayor (4 das) que el tiempo de retencin de los sustra- ta su aislamiento.
CO2
AGV Cadena
Otras tos. El resultado es que en estos ambientes no se acumu-
lineal ramificada fuentes lan cidos grasos y los productos se degradan a CH4 y
de C Figura 4- Interaccin metablica entre dos bacterias del
c. grasos aromticos rumen CO2 (captulo 21). Muestro y cultivo
CO2
Pptidos El contenido ruminal se obtiene por succin luego de efec-
Urea La biologa y ecologa de esta poblacin microbiana es
Aminocidos NH3 Otro ejemplo de estas cadenas alimenticias se da con las muy similar en la mayora de las especies animales. La tuar una homogeneizacin manual y despus de una agi-
bacterias metanognicas, que emplean CO2 e H2, para seleccin de especies y la adaptacin de las poblaciones tacin suave bajo CO2 , se filtra por gasa y se liberan
Mayor importancia obtener energa, con acetato o CO2 como fuentes de C, microbianas estn determinadas ms por la dieta y el las clulas adheridas a las partculas (0,1% de Tween 80,
Importancia menor
Importancia media que son liberados por microorganismos que hidrolizan y tiempo de retencin que por el husped, sea ste rumian- con 6-8 horas a 0, o 0,1% de metilcelulosa). Se efectan
Figura 3- Metabolismo de protenas en el rumen fermentan los sustratos. te o no-rumiante. suspensiones-diluciones decimales en diluyente en anae-
tiles (AGV) y fuentes de energa para el animal (figura Se produce biomasa microbiana rica en protenas, hidra- Interacciones entre bacterias y protozoos conversin de propionato, butirato y otros AGV), no
2)(Prescott et al., 1999). tos de carbono y lpidos que son usados por el animal. El ocurre en el rumen y la produccin a partir de AGV es
sistema presenta un rango de potencial de oxido-reduc- La interaccin ms sorprendente es la dependencia entre un proceso muy lento. Methanobacterium ruminantium
a) cin entre250 a 450 mV. Los rangos de temperatura los ciliados y las bacterias por los aminocidos. La elimi- se encuentra presente en alta concentracin en el ru-
Boca Rumen Flujo sangineo varan entre 38 y 42 C nacin de los ciliados incrementa hasta 3 veces el nme- men. Methanosarcina barkeri ha sido aislada de rumen
hacia las clulas
Material Celulosa y otros hidratos ro de bacterias. Las bacterias emplean tanto las prote- de vacas y ovejas, crece lentamente con H 2 y CO2, for-
vegetal de carbono complejos
Los microorga-
El balance de microorganismos en el rumen es regulado nas como la amilopectina de los ciliados lisados. ma CH4 a partir de grupos metilos (metanol y metilami-
+
nismos hidrolizan
el enlace (1 4)
por las condiciones del ambiente en el mismo (incluyendo nas) y no compite por el H2 con otros metanognicos.
Rumia
+
el sustrato) y se considera un sistema continuo. Algunas bacterias pueden funcionar simbiticamente, den- Methanobrevibacter spp. es probablemente el meta-
Regurgitacin
Saliva
D-glucosa + celobiosa tro de protozoos, otras permanecen independientes o pue- nognico ms significativo en el rumen bovino, pero se
Fermentacin El rumen ha sido comparado a un fermentador: su tempe- den interactuar con los ciliados, por ejemplo las bacterias requieren mayores estudios para caracterizar a las es-
microbiana
ratura y estado anaerobio son estables, las fluctuaciones metanognicas se adhieren a varios Entodiniomorphes pecies actuantes.
Acidos actico, pro-
de pH son limitados. Pero se diferencia de un dispositivo cuando el H2 es limitante. El H2 generado por los ciliados
Principal fuente
CH4+CO2+H2 Eructacin pinico,butrico, de energa industrial en que la composicin qumica y la estructura de puede ser la principal fuente de metano en el rumen. Mu- Casi todo el H2 producido es empleado por las bacterias
valrico, frmico
los sustratos ingeridos, varan amplia y rpidamente. chos ciliados absorben trazas de O2 del lquido ruminal, metanognicas (transferencia de H2 interespecie). Aproxi-
Pectina Hemicelulosa Celulosa Almidn
manteniendo el ambiente anaerobio. madamente 800 litros de H2 se producen y se usan dia-
b) El rumen, es en esencia, un sistema anaerobio muy reduc- riamente para formar 200 litros de CH4 en una vaca de
Acido galacturnico Xilobiosa Celobiosa tor, un medio ligeramente cido, de pH fijo, isotrmico, con La celulolisis se ve incrementada cuando se asocian 500 kg y slo trazas de H2 se acumulan en la fase gaseo-
Xilosa Glucosa Maltosa
una temperatura de unos 39oC y con una fase gaseosa bacterias y ciliados; este sinergismo fue verificado in- sa del rumen (Hungate, 1966).
compuesta principalmente de CO2, metano y nitrgeno. El vitro. Otro de los roles importantes de los protozoos es
Xilosa Va de las Glucosa-6-P Glucosa-6-P
pentosas pH se mantiene relativamente constante (6-7) por la absor- estabilizar el ambiente: secuestran rpidamente al al- Interacciones y proporciones de AGV
fosfato
cin de de los cidos grasos por la pared del rumen o por midn y azcares solubles, restringen la formacin de Existe considerable inters en alterar las fermentaciones
Fructosa-6-P neutralizacin por sistemas tampones de la saliva. cido lctico y limitan las fluctuaciones del pH. La libe- en el rumen para incrementar la eficiencia de productos
(Va de Embden-Meyerhof)
racin de AGV a partir de las reservas de amilopectina ruminales. Los aditivos alimenticios, como los ionforos
El objetivo de una dieta diaria balanceada para el ganado de los ciliados, contribuye a la nutricin del husped Monensina o Rumensina y Lasolacida, inhiben a los pro-
Piruvato
CO2 + H2 + CO2 + H2 +
-P CO2 NADH es proveer un ambiente en el rumen que maximice la pro- entre ingestas. ductores de H2, favorecen la produccin de propionato y
Oxaloacetato Lactato Formato
2 Acetil-CoA Acetil-CoA
NADH
duccin microbiana y el crecimiento. Cuando se disean reducen la produccin de metano, aumentando por lo tan-
Pi
Acetoacetil-CoA Acetil-P Fumarato Acrilil-CoA raciones para rumiantes es necesario tener en cuenta a los Otro mecanismo que facilita la sobrevivencia de especies to, la eficiencia de conversin de los sustratos en alimen-
H2
-P
microorganismos tanto del animal como los del rumen. no-hidrolticas en este ecosistema son las interacciones to para el ganado. Estas sustancias actan como quelan-
CO2 H2
-OH butiril-CoA Succinato Propionil-CoA entre presa y predator: una poblacin, como los protozo- tes del sodio, potasio y otros cationes, alterando el trans-
-P Los microorganismos que colonizan a los jvenes anima- os obtiene energa y/o carbono a partir de su presa (las porte a travs de la membrana.
Crotonil-CoA Metilmalonil-CoA
les por la ingesta, saliva, aire, heces son estrictamente bacterias). Los protozoos pueden obtener estos requeri-
Propionil-CoA anaerobios, aunque algo de O2 es tolerado y si la fermen- mientos para su desarrollo por fermentacin de sustra- Ingeniera gentica de microorganismos
tacin es activa el Eh se mantiene en lmites normales tos; las bacterias parecen ser ms bien precursores para del rumen
Butirato Acetato Propionato Metano (CH4) (-250 a -450mV). la sntesis de protenas y cidos nucleicos y como fuente La manipulacin gentica de organismos del rumen para
de lpidos. La fermentacin de las reservas carbonadas producir especies ms eficientes en la digestin de los
Figura 2- Bioqumica del rumen Las enzimas para la fermentacin son provistas por un de las bacterias puede contribuir tambin al metabolismo alimentos est siendo practicada. Como los microorga-
significativo nmero de especies de bacterias, hongos y del protozoo. nismos del rumen operan como un consorcio, es decir un
a) Procesos bioqumicos y fisiolgicos en el aparato digestivo protozoos y el nmero relativo de las distintas especies
de un rumiante sistema mixto y su ecologa es opuesta a la de un cultivo
vara con la composicin y estructura del alimento. Por Produccin de CH4 puro a partir de una sola clula, la competancia y el sintro-
b) Fermentaciones ruminales de los principales polisacridos
ingeridos y sus productos finales
otra parte, las interacciones biolgicas que se dan entre Ninguna de las bacterias o protozoos fermentadores fismo deben ser considerados en los intentos de manipu-
ellas son altamente complejas. producen metano, pero algunas producen formiato, H2 lacin gentica.
y CO 2. Las bacterias metanognicas pueden luego
El pH se mantiene en estado de equilibrio por tampones La proliferacin continua de los microorganismos est transformar el H2 y el CO2 en CH4. En el rumen la prin- La transferencia gentica natural en este ambiente debe
de la saliva y por la absorcin de los AGV. asegurada por la ingestin peridica de los alimentos y el cipal va de formacin de metano es a partir de H2 y ocurrir y van Soest (1994) seala que considerando que
CO2. Su formacin a partir de acetato (formado por los microorganismos del rumen, incluidos las bacterias
metanognicas, son los ms antiguos en la escala biol- Bibliografa

gica (ms de 3.000 millones de aos), deben haber teni-
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Hobson, P. N., Stewart, C.S. Rumen Microbial Ecosys-
18
Parecera ms oportuno, para este autor modificar los tem, 1997, Kluver Academic Publishing, London
materiales vegetales, hacindolos ms degradables por
la microflora. Cita, sin embargo, casos de xitos en la ino-
Hungate, R.E. The Rumen and Its Microbes, 1966 ,Aca-
demic Press, N.Y., London Procesos microbianos en el rumen
culacin de microorganismos que degradan mimosina, Orskov, E.R. y M. Ryle Energy Nutrition in Ruminants,
aminocido txico contenido en Leucaena, ausentes en 1990 Elsevier Applied Science, London, N.Y.
la mayora de los rumiantes. Prescott, Harley y Klein. Microbiologa. 1999 McGraw-
Hll.Interamericana
Stewart, C.S. y M.P. Bryant, The Rumen Bacteria. En: The Los rumiantes constituyen un grupo de animales herbvo- Alimento inicial
Conclusiones Rumen Microbial Ecosystem, 1988 Hobson, P.N. ros con un estmago dividido en cuatro compartimentos y Bolo alimenticio
(ed), Elsevier Applied Science, London, N.Y. rumian un bolo alimenticio parcialmente digerido. Ejem-
plos: el ganado vacuno, ovino y caprino, alces, camellos, Esfago
Esta breve descripcin del ecosistema del rumen trat de Stewart, C.S. The Rumen bacteria. En: Rumen Mi-
evidenciar su complejidad y dinamismo. Las interaccio- crobial Metabolism and Rumiant Digestion, 1991, ciervos, jirafas y bfalos.
Omaso Rumen
nes microbianas son all numerosas y es precisamente la Jouany, J.P. (Ed), INRA Editions, Pars. Intestino
flexibilidad de este complejo sistema que hace posible la Theodorou, M.K.; S.E. Lowe y A.P.J. Trinci Anaerobic fungi Todos estos animales poseen una porcin dilatada en delgado
conversin de un amplio espectro de sustratos en cidos and the rumen ecosystem. 1992 Micology Series, vol su tubo digestivo donde los alimentos fibrosos volumi-
grasos voltiles de los cuales depende el rumiante para 9, Marcel Dekker, N.Y.:43-72 nosos, que forman gran proporcin de su dieta, pueden
obtener energa. Van Soest, P.J. Nutritional Ecology of the Ruminant, ser detenidos y sufrir una serie de fermentaciones, que
1994, Cornell University Press, Ithaca, London los hacen disponibles para su asimilacin (figura 1)(Pres-
Las predicciones sobre la marcha de las fermentacio- Wolin, M.J. The rumen fermentation: a model for mi- cott et al, 1999). Abomaso
nes resulta difcil dada la suma de factores que inci- crobial interaction in anaerobic systems. 1979, Adv. (estmago verdadero) Retculo
den: ambiente, especie animal, dieta. En general, la Microb. Ecol. 3: 49-77 La parte superior del estmago se expande para formar
activa fermentacin de sustratos celulsicos resulta en una gran bolsa, denominada rumen, y un pequeo retculo
mayores proporciones de cido actico. La fermenta- o redecilla. La parte inferior del estmago est constituida Figura 1- Estmago de un rumiante. Las flechas sealan la
cin de almidn resulta en mayor proporcin de cido Preguntas de repaso por una antecmara, el omaso, detrs de la cual se sita el direccin del alimento
propinico. verdadero estmago (abomaso). Los polisacridos insolu-
1) Por qu el ambiente del rumen es muy particular? bles y la celulosa se mezclan con la saliva y pasan al ru-
Los tipos de fermentacin con dietas ricas en azca- 2) Cmo funcionan los microorganismos en este ambiente? men, donde sufren movimiento de rotacin constante y for- Estos animales aprovechan la accin de los microor-
res, incluyendo melazas, es difcil de predecir. Efec- 3) Explique brevemente las transformaciones de la celu- man una masa pulposa que es atacada por una activa po- ganismos que habitan su tracto gastrointestinal y que
tos asociativos positivos o negativos pueden resultar losa hasta los compuestos que son absorbidos por el blacin microbiana (1012 bacterias/mL). Luego el alimento son los principales agentes de la degradacin de las
cuando se combinan alimentos. Muchos de los lti- animal pasa al retculo y de all es regurgitado en forma de bolo paredes gruesas de los vegetales y permiten la asimi-
mos efectos pueden minimizarse regulando el rgi- 4) La metodologa de estudio resulta sencilla? Por qu? alimenticio que el animal rumia. El alimento se mezcla con lacin de hidratos de carbono complejos ingeridos por
men alimenticio, el grado de procesamiento de los 5) Se puede alterar la microbiologa del rumen? saliva, se traga de nuevo y vuelve al rumen al tiempo que el animal.
granos y el tipo de concentrado adecuado a cada com- 6) De donde se origina el metano eliminado por el ganado? llega otro bolo a la boca. En estas etapas el material va
binacin nutritiva. 7) Cmo se puede regular el funcionamiento del ru- siendo digerido y se hace ms lquido. Como los rumiantes no pueden sintetizar celulasas, apro-
men? vechan las relaciones simbiticas con microorganismos
Numerosos intentos de mejoramiento de la actividad de 8) Qu sucede con la lignina de las ingestas? Este material pasa entonces al retculo y de all a la par- anaerobios que las poseen.
los microorganismos del rumen se llevan adelante e in- 9) Seale algunos ejemplos de sinergismo entre microor- te inferior del estmago: al omaso y luego al abomaso
cluyen manejo de la dieta, de aditivos (antibiticos, sus- ganismos del rumen (estmago verdadero) donde el alimento es atacado por El rumen es un ecosistema microbiano complejo, donde
tancias tampones, antiprotozoarias), que tienden a incre- 10) Analice los gases que se liberan en los rumiantes y su las enzimas digestivas normales del animal y el proceso coexisten relaciones simbiticas entre el animal y las po-
mentan el nivel nutritivo del animal. relacin con el efecto invernadero de digestin contina en forma similar al resto de los blaciones microbianas. Los alimentos ingeridos son fer-
mamferos. mentados y los productos finales son cidos grasos vol-
Los microorganismos en
los alimentos y la industria
19 Fermentacin lctica y alcohlica.

Aplicaciones biotecnolgicas ....................................................... 341
20 Aplicaciones industriales de los

microorganismos ........................................................................... 357
Gould, W.D. Biological Control of Plant Root Diseases by Preguntas de repaso

Bacteria. En: Biotecnology of Plant-Microbe Interac-
tions, 1990, J.P. Naskas y Ch. Hagedorn (eds) Mac 1) Cmo afectan las plantas la dinmica del equilibrio
Graw-Hill, New York: 287-317 entre los microorganismos en el suelo?
Howell, Ch.R. Fungi as Biological Biocontrol Agents, en 2) Qu acciones de los microorganismos pueden afec-
Biotechnology of Plant-Microbe Interactions, 1990, tar negativamente a las plantas? Seale algn ejem-
J.P. Naskas y Ch. Hagedorn (eds) Mac Graw-Hill, New plo
York: 257-286 3) Qu mecanismos utilizan los microorganismos para
Howell, C.R. y R. D. Stipanovic, Suppresion of Pythium limitar poblaciones de patgenos vegetales?
ultimum induced damping-off of cotton seedlings by 4) Seale procedimientos que le permitan demostrar al-
Pseudomonas fluorescens and its antibiotic pyoleuto- guno de esos mecanismos como involucrados en el
rin, 1980, Phytopalogy 70: 712-715 control biolgico de microorganismos fitopatgenos.
Kapulnik, Y. Plant-Growth-Promoting Rhizobacteria. En: Plant 5) Caractersticas importantes en la competencia rizosf-
Roots, the Hidden Half, 1991, Waisel, Y., A. Eshel y V. rica de microorganismos del suelo?
Kafkafi (eds), Marcel Dekker, New York: 717-729 6) Por qu muchas veces una mezcla de agentes de
Shippers, B., Bakker, A.W. y P.A.H.M. Bakker Interactio- control puede resultar ms efectivo que el uso de un
ns of deleteterious and beneficial rhizosphere micro- solo microorganismo?
organisms and the effect of cropping practices. 1987 7) Pasos a seguir en la elaboracin de un producto biol-
Ann. Rev. Phytopatology 25: 339-358 gico a usar para control de una fusariosis en raz de
Powell, K.A. The commercial exploitation of microorganisms trigo.
in agriculture. En: Exploitation of Microorganisms, 1993, 8) Discuta los trminos: control qumico, control integra-
D.G. Jones(ed), Chapman & Hall, London: 441-459 do, control biolgico
Metabolitos primarios y secundarios de los mi- Las tcnicas de cultivo continuo (captulo 4), mejoran la
croorganismos produccin de clulas y la velocidad de empleo del sus-
Metabolitos primarios: se producen durante la fase lo- trato, ya que los microorganismos se mantienen en fase
gartmica de crecimiento como producto del metabolismo, logartimica continua.
y son esenciales para la funcin del microorganismo (ami-
Fermentaciones lctica y alcohlica
19
Fermentador de
nocidos, cido pirvico, etanol, cido lctico). Su pro- produccin
duccin neta se relaciona con el crecimiento y la cantidad Cultivo de Cultivo en Fermentador
reserva matrz inoculante
de sustrato. Esta etapa se denomina trofofase Biomasa
Aplicaciones biotecnolgicas
Metabolitos secundarios: se producen en la fase tem-
prana estacionaria de crecimiento y son productos finales
de vas metablicas complejas. No son crticos para la Sobrenadante
funcin de los microorganismos, como por ejemplo los Desde muy antiguo el hombre emple a los microorganis- culares. Las bacterias carecen de enzimas de la va gli-
Medio
antibiticos, pigmentos, hormonas, vitaminas, etc. esterilizado mos en la produccin y conservacin de alimentos, aun coltica (aldolasa y triosafosfato isomerasa) y la degrada-
sin conocerlos. Los mtodos empleados antes de la intro- cin de la glucosa se realiza por la va de las pentosas. El
Extraccin
Esta etapa es conocida como idiofase (figura 2). Preparacin del del producto
duccin de la refrigeracin, radiaciones, aditivos, etc., para rendimiento energtico es menor: 1 solo mol de ATP, en
medio la conservacin de hortalizas, pasturas, granos, leche, lugar de 2 como en los homofermentadores que produ-
Metabolismo 1ario. Metabolismo 2ario. Purificacin etc. eran cen el doble de biomasa por mol de azcar fermentado.
Envasado del producto Tratamiento
de efluentes * salado No se acumula poder reductor y la produccin de CO2 es
Figura 3- Proceso industrial de produccin de un metabolito una forma sencilla de distinguir un grupo del otro.
* secado al aire o ahumado
microbiano
Clulas EtOH
* fermentaciones cidas Las bacterias del cido lctico
Pertenecen a la familia Lactobacteriaceae: Gram positi-
El cuadro 5 resumen los pasos a seguir en la obtencin El empleo de otra fermentacin, la alcohlica, permiti la vas, comunmente no mviles, no esporuladas que produ-
de metabolitos microbianos por procesos aerobios o conversin de frutas en productos estables y deriv en cen cido lctico como producto final y nico del matabo-
Azcar Penicilina
anaerobios. aplicaciones biotecnolgicas muy importantes del punto lismo fermentativo. Los integrantes de este grupo care-
Figura 2- Cintica de la produccin de metabolitos de vista econmico. cen de porfirinas y citocromos, no realizan fosforilacin
Cuadro 5- Etapas en la obtencin de metabolitos por transporte de electrones y obtienen energa solamen-
de inters en procesos aerobios o anaerobios te por fosforilacin a nivel del sustrato. Todas las bacte-
Fermentacin lctica rias del grupo crecen en anaerobiosis, pero la mayor parte
La figura 3 esquematiza el proceso industrial de produc- * preparacin de medios de cultivo con sustratos accesibles de ellas no son sensibles al O2 y pueden crecer con o sin
cin de un metabolito, partiendo de un cultivo microbiano y de bajo costo Es uno de los procesos microbianos ms empleados a O2, por lo que son anaerobios aerotolerantes.
debidamente seleccionado, el que se propaga por sucesi- nivel mundial ya que involucra a la leche y sus derivados:
vos cultivos, incrementando el tamao del inculo a intro- * esterilizacin del equipo con el medio de cultivo manteca, yogur, leches cidas, quesos, produccin de Algunas cepas pueden tomar O2 por el sistema de flavo-
ducir en el fermentador. casena, otros subproductos, en los ensilados (forrajes, protena oxidasa, dando H2O2, pero la mayora carecen
* preparacin del inculo y su propagacin en el laboratorio granos, pescado, etc.), en la conservacin de frutas y hor- de catalasa y deben eliminar el agua oxigenada por otras
(1/10 del volumen del reactor) talizas. La fermentacin lctica puede ser como vimos en enzimas, como las peroxidasas.
Los medios de cultivo empleados en la industria incluyen
materias primas de bajo costo: melazas, sueros de le- el captulo 3, homo o heterofermentativa.
* inoculacin y desarrollo controlado del microorganismos
che, desechos agrcolas, glicerol, como fuentes de carbo- en el reactor
La mayora de las bacterias acidolcticas obtienen ener-
no y energa, harina de soja, amonaco y sales de amonio o fermentacin homolctica, las bacterias degradan la ga slo del metabolismo de los carbohidratos y su distri-
nitratos, como fuentes de nitrgeno, extractos de levadura * extraccin y purificacin del producto: enzima, protena, glucosa por la va glicoltica y el producto final es en un bucin est restringida a ambientes con azcares. Exigen
o preparaciones sin refinar de vegetales como fuente de solvente, etc. 90% cido lctico adems aminocidos, vitaminas, purinas y pirimidinas.
vitaminas, yeso o carbonatos o fosfatos usados como ferti-
lizantes, como amortiguadores de pH, aceites vegetales o * tratamiento de los efluentes fermentacin heterolctica los productos finales son Los gneros han sido definidos en base a la morfologa y
alcocholes de alta graduacin como antiespumantes. cido lctico, etanol y CO2, en cantidades equimole- al tipo de metabolismo fermentativo (cuadro 1).
Cuadro 1 - Principales gneros de bacterias lcticas Cuadro 4- Propiedades de microorganismos de ultracongelacin (en nitrgeno lquido) a -196C.
uso industrial Se informa de cultivos viables por estas ltimas tcnicas
gnero forma y agrupaciones fermentacin ADN por ms de 15 aos.
(mol GC%) Disponible en cultivo puro
Una vez seleccionado el microorganismo, ste debe ser
Streptococcus cocos en cadena homofermentativo 34-46 Genticamente estable cultivado de modo de obtener los productos deseados.
Leuconostoc cocos en cadena heterofermentativo 38-41 Los microorganismos deben, en general, cultivarse en for-
No patgeno y libre de toxinas
Pediococcus cocos en ttrada homofermentativo 34-42 ma masiva, a los efectos de obtener gran cantidad de bio-
Crecimiento rpido en cultivo en gran escala con alto ren- masa. Hay que destacar que el trmino fermentacin, es
Lactobacillus bacilos en cadena homofermentativo 32-53 dimiento del producto deseado empleado en forma ms general en microbiologa indus-
bacilos en cadena heterofermentativo 34-53 trial y biotecnologa. En efecto, se refiere con este trmi-
Debe poder protegerse de la contaminacin no tambin a cualquier proceso aerobio o anaerobio que
Enterococcus cocos en cadena homofermentativo 38-40 conduzca al cultivo masivo de microorganismos, a la des-
Crecer en medio de cultivo lquido y con sustratos de bajo
Lactococcus cocos en cadena homofermentativo 38-41 costo composicin de alimentos, a la produccin de bebidas al-
cohlicas. Los reactores industriales y los equipos a es-
Fcil recuperacin del producto del medio de cultivo cala de laboratorio con control de entrada y salida de nu-
Como se aprecia los gneros Streptococcus, Leuconos- natural lo constituyen los vegetales y tambin se encuen- trientes, de pH, aireacin, etc. se denominan
toc y Pediococcus presentan relaciones de bases en su tran en la leche. Se emplean mucho como cultivos inicia- Susceptible a la manipulacin gentica
fermentadores(figura 1) (Prescott et al., 1999), donde to-
ADN bastante similares y existe pequea variacin entre les en la industria lctica por sus propiedades aromati- dos los procesos se realizan en condiciones de asepsia.
cepas. El gnero Lactobacillus, por el contrario posee zantes (diacetilo y acetona al descomponer el citrato),
miembros con diversa composicin del ADN y no consti- aunque han sido desplazados por el S. diacetilactis. Algu- Los microorganismos seleccionados deben conservarse
tuye un grupo homogneo. nas cepas producen grandes cantidades del polisacrido con el mantenimiento de las caractersticas deseadas (es-
Motor
dextrano ( 1,6-glucano), de uso mdico. tabilidad). Las tcnicas incluyen:
Streptococcus: se presentan en cadenas de cocos, son
* transferencias o repiques peridicos (puede aumentar Adicin de cultivo o
mesfilos (ptimo entre 20 y 30C), por lo que el calenta- Lactobacillus: son bastones que varan de largos y del- nutriente
Sonda de pH
miento los destruye con facilidad, son homofermentativos gados a cortos y curvos. La mayora son homofermentati- la tasa de mutaciones y la variacin) Sonda de oxgeno
disuelto
y presentan una amplia variedad de especies con habi- vos, pero algunas especies son heterofermentativas. El Toma de Salida del agua
tats muy diversos, algunos son patgenos. Constituyen la gnero se ha dividido en tres subgrupos principales (cua- * cultivos en agar inclinado cubierto de aceite mineral, que muestras de refrigeracin
flora normal de la leche (figura 1) (Prescott et al., 1999). dro 2). Se los encuentra en la leche, ensilados, frutas y evita desecacin Vlvula
hortalizas conservadas, en la saliva, en el intestino huma- Propulsores
Leuconostoc: son diplococos o en cadenas, heterofer- no y de animales. Producen grandes cantidades de cido * muchos microorganismos se pueden conservar en agar-
mentativos, por lo que son poco acidificantes. Su habitat lctico, resisten altas temperaturas, son termodricos. L. agua o aun en medio de cultivo mnimo (los cultivos lava- Sensor de Revestimiento
dos pueden conservarse varios meses en heladera) temperatura y de refrigeracin
unidad de control
Unidad del
* congelacin a -20 o -70C en medios con glicerol (50%) biosensor
Entrada del
que evita daos en la clula agua de
refrigeracin
* deshidratacin (los cultivos se secan en suelo estril o Vlvula
en discos de papel de filtro y se pueden almacenar en
Entrada de aire
desecador o congelarse).
Vlvula
Finalmente, los mtodos ms seguros incluyen : Salida de Filtro del aire

captacin
liofilizacin (se elimina el agua por ciclos de vaco y

Figura 1- Estreptococos. a) Streptococcus pyogenes (x900), b) micrografa electrnica de barrido de Streptococcus (x33.000), c) congelamiento en aparatos especiales), las clulas se- Figura 1- Fermentador para cultivos de microorganismos
S. pneumoniae (x900) cas se conservan en ampollas cerradas aerobios o anaerobios a gran escala
Methylophilus methylotrophus, productor de metano a tecnologa del ADN recombinante. Se puede, as, aadir delbrueckii se emplea en la produccin de yogur, L. aci- Leche y derivados
partir de gas natural o metanol nueva informacin gentica a las clulas que se desee dophilus en la de leche cida y otras especies participan La leche se define como el producto ntegro de ordee
(vegetal, animal, microbiana) (cuadro 3). en la produccin de repollo fermentado, ensilaje y pickles. total e ininterrumpido de una hembra lechera sana, des-
Fusarium graminarum, biomasa que se vende comercial- cansada y bien alimentada, recogida higinicamente y sin
mente Resisten los pH bajos por lo que continan creciendo calostro. Su composicin (g/L) indica que es un muy buen
Cuadro 2- Aplicaciones de los microorganismos cuando el pH descendi e inhibi a otras bacterias lcti- sustrato para la microflora:
Fermentaciones cas. Son, por lo tanto responsables de las etapas finales
aminocidos, cidos ctrico, acetona, enzimas, vita- Enzimas: amilasas, glucosa isomerasa, proteasas de las fermentaciones acidolcticas. Raramente son agua 873 sales 9
minas Aditivos para alimentos: aa (fenilalanina, lisina, glutamato patgenos. glcidos:lactosa 49 del cido ctrico 2
monosdico), vitaminas (B12, riboflavina), cidos orgnios lpidos 35 del c. fosfrico 2,6
alimentos: levaduras, polisacridos, derivados de la (c. ctrico), nucletidos, polisacridos Se los encuentra en la superficie de las plantas, en pro- materia grasa 34 otras 4,4
leche Productos qumicos comunes: citrato, cido actico, eta- ductos lcteos, carne, cerveza, frutas y muchos otros lecitina 0,5 compuestos diversos
Metabolitos secundarios nol, solventes industriales, alcoholes y acetona, produci- materiales. fraccin insaponificable 0,5 extracto seco total 127
dos por fermentacin protenas 34 extracto seco desgrasado 93
antibiticos: Penicillum notatum (penicilina), Streptomy-
ces sp (estreptomicina), hongos (micotoxinas) Farmaceticos: antibiticos (penicilina, estreptomicina), bio- Aplicaciones de la fermentacin lctica casena 27
polmeros (fenoxialcanos), hormonas (por ingeniera ge- La fermentacin lctica acidifica el medio a valores de pH protena soluble 5,5
Ingeniera gentica ntica las bacterias pueden producir insulina de uso hu- menores de 5,0, eliminando la posibilidad de crecimiento N no proteco 1,5
mano), alcaloides de microorganismos que alteran los alimentos. Esta prc-
vacunas
Productos agrcolas: utilizacin de inoculantes para: legu- tica se emplea en la conservacin de alimentos para el Se deben incluir carotenoides, vitaminas, enzimas, este-
algunas hormonas (la insulina, se produce a partir de
E. minosas, silos, viveros forestales, otros (control biolgico hombre, como los derivados de la leche y en la conserva- roles, que se encuentran en pequeas cantidades pero
coli recombinante hiperacumuladora; hormona del cre- de microorganismos fitopatgenos e insectos plaga, ej: cin de frutas y hortalizas, en los pickles y en alimentos ejercen un efecto relevante. El pH neutro es adecuado
cimiento humano, interferones) Bacillus thuringensis) para animales, como los ensilados. para la mayora de los microorganismos, por lo que este
Proteccin del ambiente: microorganismos naturales o mo- alimento es atacado por una micropoblacin variada. La
agentes para el control de insectos: la protena txi- dificados genticamente en la biodegradacin de polme- temperatura regular la composicin y velocidad de creci-
ca del Bacillus thuringensis (Bt) es introducida a ve- ros, recuperacin de metales (biorremediacin) Cuadro 2 - Caractersticas de los subgrupos en el miento de la misma.
getales gnero Lactobacillus
Biocombustibles: metano, etanol, H2, biodiesel
A medida que aumenta la temperatura de conserva-
Microbiologa industrial Caractersticas Especies ADN cin de la leche hasta 35-40C se evidencia mayor de-
Esta rama de la microbiologa tiene por objeto la produc- (mol%GC) sarrollo microbiano. Por encima de 40C se desarro-
Cuadro 3- Cepas microbianas empleadas para
cin a gran escala de microorganismos de inters (bio- llan especies termfilas como Bacillus, Clostridium y
procesos industriales
masa microbiana), que sern empleados como inoculan- Homofermentativos Steptococcus. Entre 20 y 40C prodominan mesfilos
tes en la produccin de vinos, cervezas, pan, derivados Ac.lct. principal producto
cepas nativas seleccionadas en la naturaleza como Streptococcus. A bajas temperaturas predominan
lcteos, etc., para la obtencin de enzimas de inters, (ms 85% de la glucosa, no dan
gas,aldolasa)
sicrfilos como Pseudomonas, Alcaligenes y Achromo-
como celulasa, lipasas, Taq-polimerasa, enzima termol- cepas de coleccin que se adquieren en estado liofilizado bacter.
1) crecen a 45C pero no a 15C L.delbrueckii 50
bil, empleada en la reaccin en cadena de la polimerasa
seleccin de mutantes espontneas (resistentes a fagos, bacilos cortos L. acidophilus 32-37
(PCR), de metabolitos de inters: aminocidos, hormo- Alteracin natural
nas, vitaminas, antibiticos, etc. Los microorganismos se con propiedades aromticas, etc.)
2) crecen a 15C, variable a L. casei Por tratarse de un producto muy rico en nutrientes y po-
emplean tambin en el control de insectos y otras plagas, organismos genticamente modificadas (OGM) a los cua- 45C, bacilos cortos y coreniformes L. plantarum 45-46 seer un azcar fcilmente degradable, la leche es muy
en la recuperacin de metales y en el cuidado del am- les se les integraron genes de inters en plsmidos, me- L. curvatus 42-44 alterable. Se evidencian 4 etapas:
biente (cuadro 2). diante tcnicas de ingeniera gentica
Heterofermentativos * Perodo germicida: luego de ordeada no se detecta
En sus comienzos la biotecnologa, aplic los mtodos de producen cerca del 50% de c. L. fermentum 53
crecimiento microbiano por la presencia de sustancias
seleccin, mutacin e intercambio gentico. Si bien este El cuadro 4 resume algunas de las propiedades que se lctico, CO2 y etanol, sin L. brevis, 45
aldolasa, fosfocetolasa presente, L.buchneri 45
inhibidoras como lactoperoxidasa y aglutininas. Este
mtodo se sigue empleando, en la biotecnologa moder- les exige a un microorganismo que va a ser empleado en perodo vara de pocos minutos a 2 horas dependiendo
la industria. bacilos largos y cortos L. kefir 41
na estas tcnicas se complementan con el empleo de la de condiciones de temperatura.
* Perodo de acidificacin, en el que se desarrollan acti- Fermentaciones especficas de la leche

vamente los microorganismos productores de cido lc- 1. Fermentacin lctica, que como vimos es producida
tico a partir de lactosa hasta que su concentracin llega por enzimas microbianas que liberan cido lctico de
a un 1%. La figura 2a muestra la variacin de pH del la lactosa. Las bacterias ms importantes son Strep-
sustrato a medida que la fermentacin progresa. A pH tococcus lactis y S. cremoris, mesfilos y presentes
Aplicaciones industriales de los
20
cercanos a 4,0 la acidificacin se detiene por autoinhi- en la leche. Se produce la precipitacin de la casena
bicin de la flora lctica. En la figura 2b se aprecian las (cuajada). Leuconostoc citrovorum tambin produce
variaciones de la lactosa, azcar de la leche, y el cido
lctico, en el tiempo.
cido lctico, L. dextranicum produce cido actico,
etanol y CO2. Lactobacillus casei es usado en la pre-
microorganismos
paracin de quesos, L. acidofillus. L. bulgaricus y L.
* Fase de neutralizacin: el cido estabiliza al producto plantarum son importantes en la elaboracin de leches
pero pueden prosperar hongos y levaduras si la tempe- cidas.
ratura es adecuada, que consumen el cido lctico. En Los microorganismos son muy empleados en proce- Cuadro 1- Cronologa del desarrollo de la
la superficie se aprecia densa capa de hongos. El pro- 2. Fermentacin gaseosa: otros microorganismos no sos vinculados a las industrias alimenticia, qumica, far- Biotecnologa
ducto se desestabiliza y el resto de las fracciones org- deseables producen cidos y gases: micrococus, coli- macutica, en la elaboracin de inoculantes para la agri-
nicas son degradadas. formes. Escherichia coli y Aerobacter aerogenes libe- cultura y la proteccin del ambiente. El hombre, desde Etapa pre-Pasteur (anterior a 1865)
ran CO2 e H2 a partir de lactosa. Otros microorganismos muy antiguo, an sin reconocer la accin de los micro- Bebidas alcohlicas (cervezas, vinos)
* Fase de putrefaccin llevada a cabo por bacterias y pueden ser Clostridium butyricum y levaduras como organismos se vali de ellos para conservar alimen- Productos lcteos (quesos, yogur)
hongos que permanecieron al estado latente a pH bajo Candida y Torulopsis. tos, como por ejemplo, mediante el empleo de las fer- Vinagre
y ahora atacan la casena (proteolisis) y luego los lpi- mentaciones, especialmente la alcohlica, ya referidas Etapa Pasteur (1865-1940)
dos (lipolisis), descomponen totalmente la leche de- 3. Produccin de aromas y sabores agradables: Strep- en Egipto, 6.000 aos AC. Pero cuando se emplean Fermentaciones Industriales (etanol, butanol, ace-
jando un lquido claro, que puede poseer sustancias tococcus citrovorus, S. paracitrovorus que dan produc- los microorganismos en microbiologa industrial o bio- tona, glicerol)
txicas. tos voltiles como el cido actico o el diacetilo a partir tecnologa, se trabaja con el organismo o la comuni- Produccin de cidos orgnicos (actico, ctrico,
de cido ctrico. dad seleccionada el que se propaga en un ambiente lctico)
pH controlado. Etapa Antibiticos (1940-1960)
9
8 4. Fermentacin proteoltica: producida por microorga- Produccin a gran escala de antibiticos
7 nismos que desdoblan protenas dando olores y sabo- El cuadro 1 resume la evolucin de la aplicacin de los Transformaciones de esteroles (cortisona, estrge-
6 microorganismos en Biotecnologa: manipulacin cient- nos)
res desagradables. Los organismos son Streptococcus
5
liquefaciens, Clostridium butyricum, Bacillus subtilis, Se- fica de procesos realizados por microorganismos y sus Etapa post-antibiticos (1960-1975)
4
3 rratia marcens, Pseudomonas putrefaciens. enzimas y en sentido ms estricto, modernamente se de- Produccin de: aminocidos, enzimas industriales
2 signan con el mismo trmino a los procesos que involu- Enzimas inmovilizadas
1 5. Fermentacin lipoltica: causada por microorganis- cran al ADN recombinante. Protena unicelular, polisacridos
a mos que desdoblan las grasas en glicerol y cidos gra- Etapa Biotecnologa Molecular (1975-presente)
tiempo Se reconocen reas en la Biotecnologa: Tecnologa del ADN recombinante
sos y en consecuencia se produce rancidez: Pseudo-
concentracin
monas fluorescens, Achromobactyer lipoliticum, levadu- Primeros productos aparecen en el mercado en
ras (Candida lipolitica), hongos (Penicullum spp., Geo- i) produccin de biomasa 1982 (vacunas, insulina humana)
cido lctico
trochum candidum).
ii) fermentaciones (procesos biolgicos que ocurren en la
oscuridad y no involucran cadenas respiratorias con O2 Produccin de biomasa
Derivados de la leche o NO3 como aceptares de electrones) fuente de energa renovable. Ej. Gasohol en Brasil
lactosa Los productos fermentados son consecuencia de la ac-
iii) obtencin de metabolitos secundarios de los microor- produccin de protenas microbianas (SCP=single cell
tividad controlada de un conjunto de microorganismos.
ganismos protein)
b Con la pasteurizacin de la leche fue necesario susti-
tiempo
tuir la microflora natural por cepas seleccionadas y con- Ejemplos: Candida lipolytica, levadura que crece en hi-
Figura 2 - a) Evolucin del pH del sustrato en el tiempo, b) troladas que aseguren la estandarizacin de los pro- iv) empleo de microorganismos genticamente modifica- drocarburos derivados del petrleo crudo y en hidrocar-
Variacin en la concentracin del cido lctico y lactosa ductos. dos (MGM) buros alifticos de cadenas largas (C12-C18)
La pasteurizacin elimina a la mayora de los microorga- La ampolla que los contiene se llena con leche estril
nismos que alteran el producto, pero no esteriliza. descremada, se agita enrgicamente para suspender
el cultivo y se incuba a 23-24C por 16-18 horas
Tipos: baja 62C durante 30
alta 72C durante 15 Estos cultivos se repican en leche descremada (1 litro)
ultrapasteurizacin 140C durante 1 en condiciones aspticas y se incuban 12 horas a 23-
25C (primer subcultivo), luego se logran otros subculti-
Esterilizacin : se incrementa la distribucin de leches vos a razn del 2% de inculo y 18 horas de incuba-
esterilizadas (larga vida), las que son sometidas a 143C cin. Uno de ellos se usa para mantener la cepa en el
durante 3 segundos, en tubos concntricos y enfriada r- refrigerador.
pidamente.
Un cultivo puro no se puede repicar indefinidamente sin
En la ltima parte del siglo 19 se aislaron por primera vez que se alteren sus caractersticas. Debe procurarse nue-
los microorganismos responsables de la fermentacin lc- vamente un cultivo puro. El cuadro 3 resume algunos de
tica. En la actualidad se emplean grandes volmenes de los productos obtenidos por fermentaciones a partir de
inoculantes adecuadamente seleccionados por criterios: la leche.
* temperatura de crecimiento y actividad

* acidificacin : nivel de cido lctico y velocidad de for- Leches cidas
macin
Yogur
* actividad proteoltica, importante en la preparacin de Se prepara a partir de leche con poca grasa inoculada
quesos con cultivo mixto de:
* estabilidad gentica de las cepas
Streptococcus thermophillus, para la produccin de cido
* resistencia a bacterifagos
lctico y Lactobacillus bulgaricus, que contribuye al sa-
bor y aroma.
Muchos de estos microorganismos empleados como ini-
ciadores (starter) contienen numerosos plsmidos de
La fermentacin se realiza a 45C durante varias horas,
particular importancia porque codifican propiedades esen-
(figura 3) la acidez coagula la leche produciendo tambin
ciales como: fermentacin de la lactosa, actividad protei-
la digestin parcial de la casena que facilita su asimila-
nasa, metabolismo del citrato, propiedades antagonistas,
cin. El yogur recin preparado contiene 109 bacterias por
resistencia a bacterofagos. Algunas especies poseen
gramo. Las formas slidas se preparan con leche con-
estos genes en el cromosoma. La prdida de estos pls-
centrada y se fermentan durante 2-3 horas en los enva-
midos explica la inestabilidad de algunas de estas propie-
ses de venta. El yogur lquido se incuba a una temperatu-
dades esenciales (Varnam, 1993). El anlisis molecular
ra ms baja y por un tiempo mayor, luego se mezcla y se
de los plsmidos que albergan los genes que codifican
enfra antes del envasado.
estas propiedades hace posible aplicar los conocimientos
de la gentica de las bacterias lcticas para mejorar ce-
Leche cida
pas existentes o producir nuevas. La inclusin de estos
Es otro tipo de leche fermentada preparada con cultivos
genes en el cromosoma es otra de las orientaciones para
de Lactobacillus acidophillus a la que se le atribuye ma-
incrementar la estabilidad de los cultivos.
yor efecto diettico debido a que la bacteria sobrevive en
el estmago y produce cido lctico en el intestino lo que
Los inculos se producen en la actualidad en general en
inhibe el desarrollo de microorganismos de la putrefac-
laboratorios especializados y se comercializan como cul-
cin. Crece ms lentamente y coagula la leche dentro de
tivos liofilizados:
las 4 a 8 horas.
Cuadro 3 - Alimentos obtenidos por fermentacin porulados con forma de bacilo y tambin bifurcados en Preguntas de repaso mentacin lctica
lctica los extremos (figura 4) (Prescott et al., 1999), son inm- 4) Dnde puede obtener inculos de bacterias lcticas?
viles, anaerobias y fermentan lactosa y otros azcares 1) Concepto general del proceso de fermentacin, rendi- Y cmo se usan los comerciales?
Producto Materia prima Microorganismo dando cidos actico y lctico. Son habitantes tpicos mientos energticos y en poder reductor de las princi- 5) Caractersticas de un buen ensilado.
del tracto intestinal humano y se les atribuyen muchas pales fermentaciones. 6) Por qu los medios de cultivo con extracto de levadu-
queso cuajo de leche Streptococcus spp.
Leuconostoc spp. propiedades beneficiosas, mejoran la tolerancia a la lac- 2) Compare la fermentacin homo y la heterolctica ra se denominan complejos?
tosa, previenen diarreas en nios y son actualmente in- 3) Ejemplos de aplicaciones biotecnolgicas de la fer- 7) Factores que hacen del vino un producto estable.
Kefir leche Streptococcus spp. corporados en numerosos productos fermentados.
Saccharomyces kefir
yogur leche desnatada y Streptomyces thermophillus
leche en polvo Lactobacillus bulgaricus
leche cida leche Lactobacillus acidophillus
manteca crema de leche Lactobacillus bulgaricus
Leche tipificada Leche desnatada
seleccin de la leche
homogeneizacin
pasteurizacin

leche en polvo concentracin leche concentrada
siembra cultivo 2-5%

S. tehemophillus

45C 2-5 horas incubacin L. bulgaricus (aroma)

pH 4,6 refrigeracin

conservacin (aprox. 1 semana a 7C)
Figura 3- Esquema en la preparacin de yogur
Kefir Figura 4- Bifidobacterias

Esta leche cida se consume mucho en Europa Oriental.
Las bacterias lcticas se suplementan con una levadura
fermentadora de la glucosa que le proporciona a esta be- Manteca
bida contenido alcohlico de 1-2%. La levadura es Sac- Su preparacin es en parte microbiolgica ya que el
charomyces kefir y las bacterias Lactobacillus caucasicus agriado inicial de la leche por Streptococcus es necesa-
y Streptococcus spp. El alimento se prepara agregando a rio para la separacin de la grasa. Estos organismos
la leche grnulos de kefir de una fermentacin anterior. producen pequeas cantidades de acetona que es oxi-
dada a diacetilo (CH3-CO-CO-CH3), compuesto respon-
Otras bacterias de inters son las bifidobacterias (per- sable del sabor. Es comn inocular crema pasteurizada
tenecientes a los actinomicetes). El gnero Bifidobacte- con cultivos puros de S. lactis, S. cremoris, L. citrovo-
rium contiene bacilos Gram positivos irregulares, no es- rum y L. diacetylactis.
Elaboracin de cerveza co y enturbiamiento. Las enfermedades pueden evitarse Esquema Los semiblandos como Limburger maduran por bacte-
por pasteurizacin o esterilizacin por filtracin antes del rias y otros contaminantes de su superficie. El Roque-
Esta bebida se produce por fermentacin de granos sin embotellado. NATA Pasteurizacin Refrigeracin Maduracin fort lo hace por accin de mohos del gnero Penicillum
azcares fermentables. El almidn debe ser hidrolizado a (inculo) cuyas esporas se inoculan en la suferficie, luego se apre-
azcares (maltosa y glucosa) antes de usarse como sus- Panificacin Suero cia el color de las hifas (verde, azul, blanco) penetrando
trato por las levaduras para su fermentacin. Este proceso En la elaboracin de pan se usan levaduras para leudar Batido en la pasta. El Camambert madura en pequeos enva-
Grnulos Lavado, salado,
se llama sacarificacin. Los granos usados pueden ser de la masa. La levadura usada es Saccharomyces cerevi- ses para que las enzimas del Penicillum que ha crecido
armado envasado
cebada, arroz o maz. Granos de arroz se usan en Asia, siae que por fermentacin alcohlica de los azcares pro- aerbicamente en la superficie, difundan a interior para
mientras que el maz es utilizado en algunas regiones de duce etanol y dixido de carbono. En el caso del pan lo realizar la maduracin. Propionibacterium produce en el
Quesos
Amrica. Los granos ms empleados son los de cebada. que interesa es la produccin de dixido de carbono que queso tipo suizo los tpicos ojos producidos por la libe-
Es el producto resultante de la concentracin de la mate-
hace que aumente el volumen de la masa, el alcohol se racin de gases.
ria seca de la leche por coagulacin a travs de la accin
La conversin de los granos de cebada en malta se deno- evapora en el horno.
de microorganismos lcticos. La leche posee microorga-
mina malteado: los granos se dejan germinar, luego son En los quesos de pasta dura, como Cheddar o Suizo, las
nismos propios y provenientes del ambiente. Algunos son
secados y molidos. La malta contiene amilasas que son Inculos: se usan inculos comerciales, levaduras pro- bacterias lcticas crecen anaerbicamente en su interior,
perjudiciales y otros se usan para elaborar quesos en for-
las enzimas necesarias para degradar el almidn en az- ducidas en gran escala, en sistemas aireados, donde el mueren y se autolizan.
ma artesanal. La leche pasteurizada asegura la estan-
cares fcilmente fermentables. Posteriormente se muele rendimiento energtico es ms alto que en la fermenta-
darizacin de la produccin al destruir microorganismos
la malta y se deja hidrolizar su suspensin en agua. Algu- cin. Mediante centrifugado se elimina el lquido y se ob- El cuadro 4 muestra caractersticas de procesos mi-
patgenos y saprofitas, colibacterias, levaduras y enzimas
nos productos incluyen la hidrlisis de protenas, enton- tienen los pellets celulares a los que se les agrega aceites crobiolgicos y bioqumicos y los microorganismos res-
de la leche.
ces esta mezcla se somete a altas temperaturas para de- vegetales y se forman los panes de levadura. La levadura ponsables de la produccin de distintos tipos de que-
tener estos cambios enzimticos y se filtra. tambin se vende seca, en polvo. sos.
Etapas
* Fermentacin, con o sin inoculacin con S. lactis, S. cre-
Agregado de lpulo (inflorescencia del vegetal Humulus
moris, S. casei, Lactobacillus spp. Cuadro 4 - Microbiologa de distintos tipos de queso
lupus), a la malta para impartirle el caracterstico sabor Bibliografa
amargo de la cerveza por la presencia de una resina solu-
Aunque hay innumerables tipos de quesos todos requie- Tipos Proceso Microorganismo
ble que adems acta previniendo el desarrollo de micro- Frazier, W. C., D. C. Westhoff Microbiologa de los Ali-
ren la formacin de la cuajada, que se separa de de la quesos temperatura de
organismos no deseados. mentos, 1985, Ed. Acribia, Barcelona
fraccin lquida o suero. La casena sufre cambios fsico- (en general) fermentacin: 35C S. lactis o cremoris
Frioni, L. Procesos microbianos. 1999 Fundacin de la
qumicos y precipita como paracaseinato de calcio. Como 42C Lactobacillus (termfilo)
Fermentacin Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina
coagulante se puede usar cuajo o cido.
La maltosa y la glucosa son fermentados por cepas se- Jonsson, A. The role of yeasts and clostridia in silage de- quesos duros proteolisis, lipolisis bacterias lcticas
leccionadas de Saccharomyces cerevisiae conocidas terioration, 1989, Sveriges lantbruksuniversitet, Inst. fr (Chedar, suizo) dentro del queso
El primero es ms usado y se obtiene del estmago de
como levaduras cerveceras. Este proceso se realiza a baja Mikrobiologi, Rapport 42, Uppsala: 1-51
terneros lactantes y su principio activo es una protena, la quesos blandos
temperatura por espacio de 5 a 10 das producindose Madigan, Martinko, Parker Brock, Biologa de los mino madurados: Lactococcus lactis
renina, activa a pH cidos (pH 3,8) que se logra por el
etanol y CO2. croorganismos, 2000. Prentice Hall International Requesn S. thermophilus,
cido lctico de las lactobacterias al fermentar la lactosa.
National Academy of Sciences, Microbial processes: Mozzarella L. bulgaricus
El cido lctico produce adems sabores caractersticos
Maduracin Promisiong Technologies for Developing Coun-
de estos productos. madurados proteolisis, lipolisis crecimiento superficial
Luego de la fermentacin la cerveza se almacena a 0C y tries, 1979, Washington DC
precipitan las protenas, resinas y el lquido se aclara. Peagaricano, J. A. , W. Arias y N. J. Llaneza Ensila- (Camambert) de hongos: Penicillum spp.
* La cuajada pasa por un proceso de maduracin, excep- Seguidos de bacterias
je,1988, Ed. Hemisferio Sur
to en algunos quesos frescos o ricota. La dureza del Bacterium
Enfermedades Prescott, Harley y Klein Microbiologa, 1999, McGraw-
queso se obtiene en esta etapa: cuanto ms agua pier-
Se pueden producir durante el proceso de fermentacin, Hill.Interamericana queso suizo ferm. propinica, Propionibacterium spp.
da la cuajada y ms se comprima, ms duro ser el lipolisis y produccin Penicillum roqueforti
en la maduracin y en el embotellamiento. Un agente Salminen, S. y A. von Wright, Lactic Acid bacteria, 1993,
producto. Tambin ocurre hidrlisis de de grasas por pigmento azul
nocivo muy comn lo constituye la levadura salvaje Sac- Marcel Dekker, New York
enzimas microbianas y la renina.
charomyces pasteurianus que provoca un sabor amargo Varnam, A. H. The exploitation of microorganisms in the quesos muy 12-16 meses de Lactobacillus lactis,
y desagradable. Si la temperatura se hace demasiado processing of dairy products. En : Exploitation of Mi- duros maduracin L. cremoris,
Los quesos livianos maduran por enzimas de bacterias,
alta durante el proceso de maduracin y almacenamiento croorganisms, 1993 D. Gareth Jones (ed), Chapman madurados (Parmesano) S. thermophilus
levaduras y hongos que crecen en su superficie.
se desarrollan bacterias lcticas produciendo cido lcti- & Hall, London: 273-296
Esquema general: Se estimula as la accin de las bacterias lcticas com- Cuadro 10 - Uso de las levaduras Luego se debe obtener la anaerobiosis dejando en repo-

pletndose la secuencia. Pediococcus cereviseae fermen- so el contenido de la cuba, para que se produzca la fer-
Leche Fermentacin Coagulacin Corte y
seleccionada con o sin (con cuajo) desuerado ta manitol y dextranos producido por Leuconostoc mesen- Produccin de clulas de levaduras: levadura del pan mentacin. Se debe tener en cuenta el pH, temperatura y
inoculacin trabajo mecnico teroides. Lactobacillus plantarum es el principal productor levadura seca como alimento y suplemento proteico concentracin de azcar del medio, para posibilitar el buen
y cocido de cido lctico de esta secuencia microbiana. trabajo de las levaduras. El alto contenido de alcohol y
Productos de las levaduras: extracto de levadura usado en me- bajo pH, hacen al vino un medio inapropiado para el cre-

empaque maduracin salado moldeado dios de cultivo
Chucrut cimiento de la mayora de los microorganismos pero a
vitaminas A y D, enzimas para la industria alimenticia (invertasa,
Para finalizar, los subproductos lcteos se pueden agru- Es otra tcnica de conservacin de vegetales por acidifi- galactosidasa)
veces se puede alterar (cuadro 12). Pasteur fue el prime-
par segn su contenido de agua: cacin. En este caso el vegetal usado es el repollo que se ro que describi estas alteraciones:
corta en tiras, se sala en seco y se deja fermentar en reci- Productos obtenidos por fermentacin: etanol, glicerol 1. si el vino queda expuesto al aire pueden actuar levadu-
con alto porcentaje de agua: la leche pientes adecuados. El iniciador del proceso fermentativo
ras no deseadas y bacterias que producen cido acti-
con alto contenido de gasa: la manteca y crema de leche es Leuconostoc mesenteroides que produce las condicio- Bebidas alcohlicas: vino, cerveza
co transformando al vino en vinagre
nes necesarias para la actuacin de las restantes bacte-
con alto porcentaje de protenas: el queso rias lcticas. Bebidas destiladas: whisky, brandy, vodka, ron 2. si el vino se mantiene en condiciones de anaerobiosis
pueden actuar bacterias lcticas que fermentan azca-
res residuales produciendo mal gusto. Hay levaduras que
Conservacin de frutas y hortalizas por Cuadro 5- Alimentos vegetales conservados por pueden crecer en vinos dulces que no alteran el sabor
fermentacin lctica fermentacin lctica Vinificacin pero enturbian el producto. Para prevenir las alteracio-
nes se puede pasteurizar, pero este proceso disminuye
Por fermentacin cida se conservan hortalizas de hoja, Alimento Materia prima Microorganismo El vino se produce por la fermentacin alcohlica del mosto la calidad, pues se alteran los azcares y disminuye el
hortalizas subterrneas y frutas, las ms usadas son: pe- de uva y el microorganismo responsable es la levadura contenido alcohlico. Tambin se puede esterilizar el pro-
pinos, repollos, cebollas, tomates verdes. El producto re- Pickle Ciertas Leuconostoc Saccharomyces cerevisiae (cuadro 11). La uva colectada ducto por filtracin o agregando aditivos qumicos (SO2).
sultante se denomina pickle o encurtido. hortalizas y mesenteroides debe tener un contenido adecuado de azcar (160 a 180 g/
frutas Pediococcus cereviseae L) para posibilitar un buen sustrato para la fermentacin.
Lactobacillus plantarum En la superficie de las uvas existen levaduras salvajes que Cuadro 11- Caractersticas del mosto y del vino
Pickle Lactobacillus brevis estn naturalmente presentes, pero que no hay que dejar
Chucrut Repollo Leuconostoc Mosto Vino
Producto acidificado resultante de la fermentacin lcti- prosperar porque no producen buenas fermentaciones. Para glucosa etanol (11%)
mesenteroides
ca de ciertos vegetales. Salchichas Carnes y Lactobacillus plantarum
eliminarlas se trata la superficie vegetal con sustancias como fructosa (200g/L) levaduras y azcares < 2g/L
dixido de azufre o metabisulfito de potasio. Luego de for- pH = 3.0-3.8 pH 3,0-3,8
ahumadas pescado
La fermentacin lctica la realizan las bacterias que se mado el mosto se le agrega el cultivo de Saccharomyces cidos tartrico y mlico cidos, idem
Salame Pediococcus cerevisiae aa, NH4+, vitaminas aminocidos, amonio, vitaminas
encuentran en la superficie de los vegetales. En el proce- Lactobacillus plantarum cerevisiae aireando el contenido de la cuba para que la le-
anaerobiosis aromas, en mayor proporcin
so de conservacin se procura favorecer el desarrollo de Salsas de Lactobacuillus spp vadura se reproduzca rpidamente por respiracin.
las bacterias lcticas e impedir el desarrollo de otros mi- pescado Aspergillus glaucus (Japon)
croorganismos que pueden alterar la calidad del alimen- Cuadro 12 - Lista parcial de microorganismos involucrados en la produccin y alteracin de vino
to. Las condiciones que favorecen el desarrollo de la flora
lctica son: anaerobiosis y concentracin de sal a 5%. Ensilados Organismo Rol en produccin y/o alteracin Cambios
Se produce la siguiente secuencia de microorganismos: Saccharomyces cerevisiae var ellipsoideus 1. ferm.lica primaria glucosa y/o fructosa
La conservacin de forrajes o alimentos, granos, tubr- 2. carbonatacin de vinos espu- etanol y CO2
Leuconostoc mesenteroides, Pediococcus cereviseae, mantes en fermentacin secundaria
culos, pescado, etc. en ausencia del aire, ha sido em- 3. enturbiamiento en vinos dulces
Lactobacillus plantarum, Lactobacillus brevis
pleada por el hombre desde hace miles de aos. En el Pediococcus, Leuconostoc y Lactobacillus fermentacin malolctica I. c.mlico c. lctico y CO2
Leuconostoc mesenteroides realiza fermentacin hetero- caso de alimentos para el ganado, la finalidad del proce- II. mejor sabor
lctica y los productos finales son cido lctico, cido ac- so es conservar los forrajes con la mayor calidad posi- Levaduras superficiales pesado crecimiento superficial I. etanol,acetaldehido
tico, alcohol y CO2. El CO2 desaloja el O2 del medio y ase- ble, por un lapso ms o menos prolongado, de forma de Saccharomyces beticus y produccin de sabor a Jerez II. sabores
gura la anaerobiosis. El cido lctico baja el pH del me- Botrytris cineres crecen en ciertas regiones, en I. deseca la uva
emplearlos en el momento en que se los necesite. Con- superficie de uvas que dan vinos dulces II. oxida mlico a CO2 y H2O
dio, lo que inhibe la actividad de la restante microflora pre- serva el valor nutritivo del forraje a diferencia del proce- III. agrega color y sabor
sente en los vegetales. so de secado al aire (heno). Bacterias del cido actico y levaduras superficiales alteran vinos expuestos al aire oxidan etanol a c. actico
Bacterias lcticas Lactobacillus trichodes alteran el vino anaerbicamente mal gusto
Inhibidores: se agregan para evitar el desarrollo de or- * cosechar en el momento oportuno rios factores; estado de madurez, contenido de hu-
ganismos indeseables, como el SO2 que es gas, metabi- medad, sistema de cosecha del forraje, mtodo em-
sulfito de sodio, CO2 al 1%. * no ensilar forrajes mojados por la lluvia pleado. Cuando el silo est bien construido, sin po-
sibilidad de entrada de aire, esta etapa es breve, se
Complementos: la sal comn ha sido empleada como * picar o macerar el cultivo anula la actividad de microorganismos aerobios, se
conservadora. Urea, sales orgnicas, etc. liberan los jugos celulares y la temperatura comien-
* extraer el aire za a disminuir.
Cultivos bacterianos en algunos pases se inoculan
los silos con productos comerciales con bacterias lcti- * agregar melazas en el ensilado de leguminosas Segunda fase, fermentacin, en ausencia de aire: si el
cas seleccionadas por su rpida produccin de cido. Si forraje est bien compactado en los silos se elimina r-
bien la microflora activa est presente en los vegetales, * marchitar los forrajes con alto contenido de humedad pidamente el exceso de aire y comienza el proceso de
puede encontrarse en bajo nmero o las condiciones ensilaje. En esta etapa se desarrollan microorganismos
pueden no ser las ptimas. La inoculacin puede acele- * utilizar sales inorgnicas, inoculantes, otros aditivos, pre- fermentadores, favorecidos por la baja disponibilidad de
rar el proceso. viamente evaluados. O2 y la difusin del contenido celular con azcares fer-
Figura 5- Silo sobre el terreno. El forraje picado es mentescibles. Los principales productos son cidos lc-
La figura 7 esquematiza procesos tanto en la forma- apisonado para eliminar el aire tico, actico, butrico, que acidifican el medio.
cin como en el deterioro de los silos. Al entrar aire se Fermentacin alcohlica
desarrollan microorganismos, sobretodo levaduras y El forraje verde que se desea conservar por va hmeda Un buen ensilado se caracteriza por poseer:
hongos, que consumen el cido lctico. El silo pierde Glucosa (gliclisis) pirvico acetaldehdo etanol es cosechado por una mquina especial, que lo corta y
la sustancia que lo estabiliza, el pH asciende y se con-
pica en trozos pequeos que se transportan y acumulan * alta proporcin de cido lctico
sumen las otras sustancias nutritivas, protenas, lpi- CO2 sobre el terreno o se coloca en construcciones especia-
dos. Es importante evitar esto deterioros, mantenien- les, llamados silos (figura 5). * niveles variables, pero bajas de cido actico
do cubierto el forraje. Los productos finales de la fermentaci6n alcohlica son
etanol y CO2 y es realizada por levaduras entre ellas Primera fase: respiracin aerobia, los carbohidratos * muy bajo o nula cantidad de cido butrico
la ms conocida es Saccharomyces cerevisiae. Estas presentes en el forraje cortado son respirados en presen-
levaduras tienen ms de un tipo metablico, son aero- cia de aire; la fotosntesis contina mientras las plantas * nfima proporcin de amonio, lo que significa que las
pH
6.0 pH
bias y respiran en presencia de O2, pero en condicio- estn expuestas al sol. protenas han sido degradadas con disminucin del
ac. lac.
5.5 nes anaerobias fermentan. Este tipo de levaduras so- valor nutritivo del silo
5.0 2.0 portan mayores concentraciones de alcohol que otros azcares + O2 CO2 + H2O + calor
4.5 microorganismos. Por esto, la fermentacin alcohlica
4.0 1.5
Los microorganismos fermentadores se encuentran en la
O2 se emplea en la conservacin o produccin de alimen- Efectos: disminucin de carbohidratos superficie de los vegetales, en el suelo y se desarrollan
20 O2 1.0 tos. El mecanismo de conservacin se basa en la pro- produccin de CO2 y H2O una vez que las condiciones les son favorables. Cada gru-
15 duccin de alta concentracin de alcohol no tolerado aumento de la temperatura po posee condiciones ptimas de temperatura, humedad
10 ac. lac. 0.5 por la mayora de los microorganismos, en especial los disminucin del O2 en la masa y presencia y/o ausencia de aire para su mejor desarrollo
5
0 degradadores de la materia orgnica que deterioran el (cuadro 6).
0 1 hora 1 da 10 das 100 das tiempo producto. El cuadro 10 muestra diferentes usos de es- Si esta etapa se prolonga el forraje ser degradado por
Etapa de campo Fermentacin Almacenamiento Apertura tos microorganismos. una variedad de microorganismos. La intensidad de la La fermentacin lctica homo y heterofermentativa es
misma se puede evaluar por el calor liberado. La deten- realizada por la microflora presente en forraje, granos,
Figura 7- Principales cambios en el ensilaje y fases crticas El proceso de fermentacin alcohlica es empleado en: cin de la respiracin y la muerte rpida de las clulas se etc.
en el deterioro aerobio y anaerobio segn el pH, nivel de O2 y puede lograr por distintas vas:
concentracin de cido lctico * la elaboracin de bebidas alcohlicas La figura 6 esquematiza las fases del proceso en forra-
* artificialmente, por el agregado de cidos (actico, etc.) jes: una fase aerbica en el campo, una fase de fermen-
* la produccin de pan tacin inicialmente aerobia, una de almacenamiento y
En resumen * naturalmente, permitiendo la evolucin de los proce- descarga que resulta en estabilizacin o deterioro, de-
La obtencin de buenos ensilados puede lograrse si se * etanol: solvente, desinfectante y que se usa en muchos sos naturales, como es la fermentacin. La rapidez pendiendo del nivel de pH obtenido y el grado de entra-
toman en cuenta ciertas condiciones: pases como combustible y eficacia de la eliminacin del aire depende de va- da del aire.
Exclusin del aire mizan las prdidas por respiracin. Los microorganis- * Impedir la entrada de aire al silo una vez terminado el En el corte, maz y sorgo presentan entre 30 y 40% de

Bacterias butricas mos responsables se encuentran normalmente en n- proceso, pues se creara un ambiente favorable para el materia seca, que coincide con el estado fenolgico de
y acticas Bacterias lcticas mero suficiente en el exterior de forrajes y su sabor y desarrollo de organismos butricos. grano lechoso a grano pastoso y la produccin de carbo-
Forraje picado y compactado

olor son apetecidos por el ganado hidratos es elevada asegurando el desarrollo de microor-
Humedad, jugos Hidratos de C ganismos fermentadores.
vegetales * no causa efectos secundarios o perjudiciales en la salud Cultivos a ensilar

Ausencia de O2 del ganado, ni altera sabor o apariencia de derivados

Desarrollo de bacterias lcticas de la leche, como manteca, queso. Dentro de la gran variedad de plantas aptas para ensilar, Aditivos
Rico en azcares Pobre en azcares debemos sealar sus diferencias en cuanto a su disponi-

Aditivos
Condiciones para un rpido ensilaje bilidad en azcares (cuadro 8): Se recomienda el uso de estas sustancias cuando la es-
Fermentacin * Medio anaerobio: se debe excluir rpidamente el aire casez o el exceso de algn elemento en la planta hace

Buen ensilado Mal ensilado atrapado en la masa Cuadro 8- Tenor en azcares y protenas en insegura la conservacin del silo, o cuando se desea me-
forrajes jorar el valor nutritivo, la apeticibilidad, o ambos. La co-
Figura 6- Etapas en el ensilaje de un forraje verde
* Temperatura entre 5 y 60C; entre 5 y 20C las nicas rrecta distribucin de estas sustancias en toda la masa
bacterias que pueden desarrollarse son las lcticas, im- Forraje Carbohidratos Protenas del silo asegura su eficacia.
pidiendo la fermentacin butrica. El cuadro 7 muestra maz o sorgo elevado muy bajo
Cuadro 6 - Procesos microbianos en el silo. las proporciones relativas de ambos cidos. gramneas (pasturas) alto regular Productos ricos en carbohidratos: se agregan a mate-
gramneas + leguminosas mediano mediano riales pobres en ellos, como las leguminosas:
Fermentacin Temperatura pH Organismo leguminosas muy bajo elevado
Cuadro 7 - Ensilados a distintas temperaturas * melaza, subproducto de la refinera de la caa de az-
lctica 5 a 60C L. plantarum car, se presenta como un lquido oscuro, espeso, con
ptimo 35C 3y4 L. brevis Temperatura C % c. lctico % c. butrico Valores vlidos cuando los cultivos se cosechan en el olor caracterstico que es muy empleada por su bajo
L. casei momento aconsejado para ensilar. El forraje a ensilar costo. Se mezcla en partes iguales con agua y puede
S. lactis 45 0,4 3,7 deber contener elevado contenido de glcidos y bajo de agregarse a la cosechadora que va regando el forraje
actica 18-25C grupo coliforme 30 1,9 0,1 protenas, ya que stas al ser degradadas producen amo- (3-5% en peso), con este aditivo.
22 1,2 0,1 nio que neutraliza al cido lctico, restndole calidad al
butrica 20-40C 4y5 Clostridium
producto. El cuadro 9 muestra caractersticas de silos a * granos: poseen almidn, poco empleado por la flora lc-
partir de diferentes plantas. tica hasta desdoblamiento enzimtico en azcares. Se
* Facilitar rpido contacto entre las bacterias y los carbo- aconseja ms la harina de granos (70 a 100 kg/ton fo-
La produccin de cido actico, causada por microorga-
hidratos; el picado o triturado de los forrajes permite la rraje).
nismos del grupo coliforme es de escaso significado en
exclusin del aire y el contacto con las bacterias. El pro- Cuadro 9 - Caractersticas de los materiales
los silos. La fermentacin butrica no es deseada, pues
ceso se acelera. iniciales y de los tres silos obtenidos * suero de leche: posee entre 4 y 5% de lactosa, pero los
causa sabores desagradables, sobre todo para el hom-
volmenes a manejar son grandes (250 L/ton forraje).
bre. Los animales pueden tolerarlo. Se puede producir
* Contenido de humedad de los forrajes entre 60 y 75% Forraje Materia Protena Azcares Azcares/ Se usan ms sueros desecados (20-30 kg/ton)
tambin mezcla de cido actico, etanol e H2. La tempe-
seca % bruta % solubles % protenas
ratura ms favorable para especies de Clostridium es en- asegura una alta concentracin de azcares fermen-
tescibles, como por ejemplo 60% en sorgo, 70% en alfalfa 24,4 25,2 3,9 0,15
* papas, remolacha azucarera, desechos de frutas, etc.
tre 20 y 40C y no soportan pH inferiores a 4,0.
maz y 75% en pasturas. Debajo de estos niveles se sorgo 35,2 9,4 10,4 1,10 son tambin empleados.
Ventajas de la fermentacin lctica: corre el riesgo de alcanzar altas temperaturas por mala maz 24,1 8,6 15,9 1,80
compactacin y expulsin del aire con la consiguiente Conservadores: agregado de cidos directamente al fo-
* asegura alta concentracin de cido lctico, elemen-
prdida de carbohidratos y digestibilidad de protenas. % % cidos % rraje hasta bajar su pH a menos de 4,0. Mtodo AIV: se
to nutritivo y conservador, sin la formacin de productos Silo %M.S. Prot Azcares pH L A P B emplean 4 partes de cido sulfrico y 6 de cido clorhdri-
secundarios no palatables o innecesarios
* Mantener en la masa un pH de 3 a 4, que asegura la sorgo 34,7 8,5 2,8 4,2 1,8 0,6 0,0 0,0 co, que se mezcla en el momento de ensilar diluyendo en
permanencia del cido lctico e impide la proliferacin maz 22,4 10,2 3,8 3,9 1,7 0,6 0,0 0,0 5-6 veces su peso en agua. Se detiene la actividad de las
* conservacin de un mayor porcentaje de elementos nu-
de otros organismos.
alfalfa 21,2 16,7 1,3 5,7 0,0 1,1 0,5 1,9 clulas, que se marchitan y el desarrollo de microorganis-
tritivos, al desarrollarse a bajas temperaturas se mini-
mos indeseables. Se usa en pases nrdicos, muy fros,
cidos: L=lctico, A=actico, P=propinico, B=butrico donde cuesta establecer la fermentacin.
Exclusin del aire mizan las prdidas por respiracin. Los microorganis- * Impedir la entrada de aire al silo una vez terminado el En el corte, maz y sorgo presentan entre 30 y 40% de

Bacterias butricas mos responsables se encuentran normalmente en n- proceso, pues se creara un ambiente favorable para el materia seca, que coincide con el estado fenolgico de
y acticas Bacterias lcticas mero suficiente en el exterior de forrajes y su sabor y desarrollo de organismos butricos. grano lechoso a grano pastoso y la produccin de carbo-
Forraje picado y compactado

olor son apetecidos por el ganado hidratos es elevada asegurando el desarrollo de microor-
Humedad, jugos Hidratos de C ganismos fermentadores.
vegetales * no causa efectos secundarios o perjudiciales en la salud Cultivos a ensilar

Ausencia de O2 del ganado, ni altera sabor o apariencia de derivados

Desarrollo de bacterias lcticas de la leche, como manteca, queso. Dentro de la gran variedad de plantas aptas para ensilar, Aditivos
Rico en azcares Pobre en azcares debemos sealar sus diferencias en cuanto a su disponi-

Aditivos
Condiciones para un rpido ensilaje bilidad en azcares (cuadro 8): Se recomienda el uso de estas sustancias cuando la es-
Fermentacin * Medio anaerobio: se debe excluir rpidamente el aire casez o el exceso de algn elemento en la planta hace

Buen ensilado Mal ensilado atrapado en la masa Cuadro 8- Tenor en azcares y protenas en insegura la conservacin del silo, o cuando se desea me-
forrajes jorar el valor nutritivo, la apeticibilidad, o ambos. La co-
Figura 6- Etapas en el ensilaje de un forraje verde
* Temperatura entre 5 y 60C; entre 5 y 20C las nicas rrecta distribucin de estas sustancias en toda la masa
bacterias que pueden desarrollarse son las lcticas, im- Forraje Carbohidratos Protenas del silo asegura su eficacia.
pidiendo la fermentacin butrica. El cuadro 7 muestra maz o sorgo elevado muy bajo
Cuadro 6 - Procesos microbianos en el silo. las proporciones relativas de ambos cidos. gramneas (pasturas) alto regular Productos ricos en carbohidratos: se agregan a mate-
gramneas + leguminosas mediano mediano riales pobres en ellos, como las leguminosas:
Fermentacin Temperatura pH Organismo leguminosas muy bajo elevado
Cuadro 7 - Ensilados a distintas temperaturas * melaza, subproducto de la refinera de la caa de az-
lctica 5 a 60C L. plantarum car, se presenta como un lquido oscuro, espeso, con
ptimo 35C 3y4 L. brevis Temperatura C % c. lctico % c. butrico Valores vlidos cuando los cultivos se cosechan en el olor caracterstico que es muy empleada por su bajo
L. casei momento aconsejado para ensilar. El forraje a ensilar costo. Se mezcla en partes iguales con agua y puede
S. lactis 45 0,4 3,7 deber contener elevado contenido de glcidos y bajo de agregarse a la cosechadora que va regando el forraje
actica 18-25C grupo coliforme 30 1,9 0,1 protenas, ya que stas al ser degradadas producen amo- (3-5% en peso), con este aditivo.
22 1,2 0,1 nio que neutraliza al cido lctico, restndole calidad al
butrica 20-40C 4y5 Clostridium
producto. El cuadro 9 muestra caractersticas de silos a * granos: poseen almidn, poco empleado por la flora lc-
partir de diferentes plantas. tica hasta desdoblamiento enzimtico en azcares. Se
* Facilitar rpido contacto entre las bacterias y los carbo- aconseja ms la harina de granos (70 a 100 kg/ton fo-
La produccin de cido actico, causada por microorga-
hidratos; el picado o triturado de los forrajes permite la rraje).
nismos del grupo coliforme es de escaso significado en
exclusin del aire y el contacto con las bacterias. El pro- Cuadro 9 - Caractersticas de los materiales
los silos. La fermentacin butrica no es deseada, pues
ceso se acelera. iniciales y de los tres silos obtenidos * suero de leche: posee entre 4 y 5% de lactosa, pero los
causa sabores desagradables, sobre todo para el hom-
volmenes a manejar son grandes (250 L/ton forraje).
bre. Los animales pueden tolerarlo. Se puede producir
* Contenido de humedad de los forrajes entre 60 y 75% Forraje Materia Protena Azcares Azcares/ Se usan ms sueros desecados (20-30 kg/ton)
tambin mezcla de cido actico, etanol e H2. La tempe-
seca % bruta % solubles % protenas
ratura ms favorable para especies de Clostridium es en- asegura una alta concentracin de azcares fermen-
tescibles, como por ejemplo 60% en sorgo, 70% en alfalfa 24,4 25,2 3,9 0,15
* papas, remolacha azucarera, desechos de frutas, etc.
tre 20 y 40C y no soportan pH inferiores a 4,0.
maz y 75% en pasturas. Debajo de estos niveles se sorgo 35,2 9,4 10,4 1,10 son tambin empleados.
Ventajas de la fermentacin lctica: corre el riesgo de alcanzar altas temperaturas por mala maz 24,1 8,6 15,9 1,80
compactacin y expulsin del aire con la consiguiente Conservadores: agregado de cidos directamente al fo-
* asegura alta concentracin de cido lctico, elemen-
prdida de carbohidratos y digestibilidad de protenas. % % cidos % rraje hasta bajar su pH a menos de 4,0. Mtodo AIV: se
to nutritivo y conservador, sin la formacin de productos Silo %M.S. Prot Azcares pH L A P B emplean 4 partes de cido sulfrico y 6 de cido clorhdri-
secundarios no palatables o innecesarios
* Mantener en la masa un pH de 3 a 4, que asegura la sorgo 34,7 8,5 2,8 4,2 1,8 0,6 0,0 0,0 co, que se mezcla en el momento de ensilar diluyendo en
permanencia del cido lctico e impide la proliferacin maz 22,4 10,2 3,8 3,9 1,7 0,6 0,0 0,0 5-6 veces su peso en agua. Se detiene la actividad de las
* conservacin de un mayor porcentaje de elementos nu-
de otros organismos.
alfalfa 21,2 16,7 1,3 5,7 0,0 1,1 0,5 1,9 clulas, que se marchitan y el desarrollo de microorganis-
tritivos, al desarrollarse a bajas temperaturas se mini-
mos indeseables. Se usa en pases nrdicos, muy fros,
cidos: L=lctico, A=actico, P=propinico, B=butrico donde cuesta establecer la fermentacin.
Inhibidores: se agregan para evitar el desarrollo de or- * cosechar en el momento oportuno rios factores; estado de madurez, contenido de hu-
ganismos indeseables, como el SO2 que es gas, metabi- medad, sistema de cosecha del forraje, mtodo em-
sulfito de sodio, CO2 al 1%. * no ensilar forrajes mojados por la lluvia pleado. Cuando el silo est bien construido, sin po-
sibilidad de entrada de aire, esta etapa es breve, se
Complementos: la sal comn ha sido empleada como * picar o macerar el cultivo anula la actividad de microorganismos aerobios, se
conservadora. Urea, sales orgnicas, etc. liberan los jugos celulares y la temperatura comien-
* extraer el aire za a disminuir.
Cultivos bacterianos en algunos pases se inoculan
los silos con productos comerciales con bacterias lcti- * agregar melazas en el ensilado de leguminosas Segunda fase, fermentacin, en ausencia de aire: si el
cas seleccionadas por su rpida produccin de cido. Si forraje est bien compactado en los silos se elimina r-
bien la microflora activa est presente en los vegetales, * marchitar los forrajes con alto contenido de humedad pidamente el exceso de aire y comienza el proceso de
puede encontrarse en bajo nmero o las condiciones ensilaje. En esta etapa se desarrollan microorganismos
pueden no ser las ptimas. La inoculacin puede acele- * utilizar sales inorgnicas, inoculantes, otros aditivos, pre- fermentadores, favorecidos por la baja disponibilidad de
rar el proceso. viamente evaluados. O2 y la difusin del contenido celular con azcares fer-
Figura 5- Silo sobre el terreno. El forraje picado es mentescibles. Los principales productos son cidos lc-
La figura 7 esquematiza procesos tanto en la forma- apisonado para eliminar el aire tico, actico, butrico, que acidifican el medio.
cin como en el deterioro de los silos. Al entrar aire se Fermentacin alcohlica
desarrollan microorganismos, sobretodo levaduras y El forraje verde que se desea conservar por va hmeda Un buen ensilado se caracteriza por poseer:
hongos, que consumen el cido lctico. El silo pierde Glucosa (gliclisis) pirvico acetaldehdo etanol es cosechado por una mquina especial, que lo corta y
la sustancia que lo estabiliza, el pH asciende y se con-
pica en trozos pequeos que se transportan y acumulan * alta proporcin de cido lctico
sumen las otras sustancias nutritivas, protenas, lpi- CO2 sobre el terreno o se coloca en construcciones especia-
dos. Es importante evitar esto deterioros, mantenien- les, llamados silos (figura 5). * niveles variables, pero bajas de cido actico
do cubierto el forraje. Los productos finales de la fermentaci6n alcohlica son
etanol y CO2 y es realizada por levaduras entre ellas Primera fase: respiracin aerobia, los carbohidratos * muy bajo o nula cantidad de cido butrico
la ms conocida es Saccharomyces cerevisiae. Estas presentes en el forraje cortado son respirados en presen-
levaduras tienen ms de un tipo metablico, son aero- cia de aire; la fotosntesis contina mientras las plantas * nfima proporcin de amonio, lo que significa que las
pH
6.0 pH
bias y respiran en presencia de O2, pero en condicio- estn expuestas al sol. protenas han sido degradadas con disminucin del
ac. lac.
5.5 nes anaerobias fermentan. Este tipo de levaduras so- valor nutritivo del silo
5.0 2.0 portan mayores concentraciones de alcohol que otros azcares + O2 CO2 + H2O + calor
4.5 microorganismos. Por esto, la fermentacin alcohlica
4.0 1.5
Los microorganismos fermentadores se encuentran en la
O2 se emplea en la conservacin o produccin de alimen- Efectos: disminucin de carbohidratos superficie de los vegetales, en el suelo y se desarrollan
20 O2 1.0 tos. El mecanismo de conservacin se basa en la pro- produccin de CO2 y H2O una vez que las condiciones les son favorables. Cada gru-
15 duccin de alta concentracin de alcohol no tolerado aumento de la temperatura po posee condiciones ptimas de temperatura, humedad
10 ac. lac. 0.5 por la mayora de los microorganismos, en especial los disminucin del O2 en la masa y presencia y/o ausencia de aire para su mejor desarrollo
5
0 degradadores de la materia orgnica que deterioran el (cuadro 6).
0 1 hora 1 da 10 das 100 das tiempo producto. El cuadro 10 muestra diferentes usos de es- Si esta etapa se prolonga el forraje ser degradado por
Etapa de campo Fermentacin Almacenamiento Apertura tos microorganismos. una variedad de microorganismos. La intensidad de la La fermentacin lctica homo y heterofermentativa es
misma se puede evaluar por el calor liberado. La deten- realizada por la microflora presente en forraje, granos,
Figura 7- Principales cambios en el ensilaje y fases crticas El proceso de fermentacin alcohlica es empleado en: cin de la respiracin y la muerte rpida de las clulas se etc.
en el deterioro aerobio y anaerobio segn el pH, nivel de O2 y puede lograr por distintas vas:
concentracin de cido lctico * la elaboracin de bebidas alcohlicas La figura 6 esquematiza las fases del proceso en forra-
* artificialmente, por el agregado de cidos (actico, etc.) jes: una fase aerbica en el campo, una fase de fermen-
* la produccin de pan tacin inicialmente aerobia, una de almacenamiento y
En resumen * naturalmente, permitiendo la evolucin de los proce- descarga que resulta en estabilizacin o deterioro, de-
La obtencin de buenos ensilados puede lograrse si se * etanol: solvente, desinfectante y que se usa en muchos sos naturales, como es la fermentacin. La rapidez pendiendo del nivel de pH obtenido y el grado de entra-
toman en cuenta ciertas condiciones: pases como combustible y eficacia de la eliminacin del aire depende de va- da del aire.
Esquema general: Se estimula as la accin de las bacterias lcticas com- Cuadro 10 - Uso de las levaduras Luego se debe obtener la anaerobiosis dejando en repo-

pletndose la secuencia. Pediococcus cereviseae fermen- so el contenido de la cuba, para que se produzca la fer-
Leche Fermentacin Coagulacin Corte y
seleccionada con o sin (con cuajo) desuerado ta manitol y dextranos producido por Leuconostoc mesen- Produccin de clulas de levaduras: levadura del pan mentacin. Se debe tener en cuenta el pH, temperatura y
inoculacin trabajo mecnico teroides. Lactobacillus plantarum es el principal productor levadura seca como alimento y suplemento proteico concentracin de azcar del medio, para posibilitar el buen
y cocido de cido lctico de esta secuencia microbiana. trabajo de las levaduras. El alto contenido de alcohol y
Productos de las levaduras: extracto de levadura usado en me- bajo pH, hacen al vino un medio inapropiado para el cre-

empaque maduracin salado moldeado dios de cultivo
Chucrut cimiento de la mayora de los microorganismos pero a
vitaminas A y D, enzimas para la industria alimenticia (invertasa,
Para finalizar, los subproductos lcteos se pueden agru- Es otra tcnica de conservacin de vegetales por acidifi- galactosidasa)
veces se puede alterar (cuadro 12). Pasteur fue el prime-
par segn su contenido de agua: cacin. En este caso el vegetal usado es el repollo que se ro que describi estas alteraciones:
corta en tiras, se sala en seco y se deja fermentar en reci- Productos obtenidos por fermentacin: etanol, glicerol 1. si el vino queda expuesto al aire pueden actuar levadu-
con alto porcentaje de agua: la leche pientes adecuados. El iniciador del proceso fermentativo
ras no deseadas y bacterias que producen cido acti-
con alto contenido de gasa: la manteca y crema de leche es Leuconostoc mesenteroides que produce las condicio- Bebidas alcohlicas: vino, cerveza
co transformando al vino en vinagre
nes necesarias para la actuacin de las restantes bacte-
con alto porcentaje de protenas: el queso rias lcticas. Bebidas destiladas: whisky, brandy, vodka, ron 2. si el vino se mantiene en condiciones de anaerobiosis
pueden actuar bacterias lcticas que fermentan azca-
res residuales produciendo mal gusto. Hay levaduras que
Conservacin de frutas y hortalizas por Cuadro 5- Alimentos vegetales conservados por pueden crecer en vinos dulces que no alteran el sabor
fermentacin lctica fermentacin lctica Vinificacin pero enturbian el producto. Para prevenir las alteracio-
nes se puede pasteurizar, pero este proceso disminuye
Por fermentacin cida se conservan hortalizas de hoja, Alimento Materia prima Microorganismo El vino se produce por la fermentacin alcohlica del mosto la calidad, pues se alteran los azcares y disminuye el
hortalizas subterrneas y frutas, las ms usadas son: pe- de uva y el microorganismo responsable es la levadura contenido alcohlico. Tambin se puede esterilizar el pro-
pinos, repollos, cebollas, tomates verdes. El producto re- Pickle Ciertas Leuconostoc Saccharomyces cerevisiae (cuadro 11). La uva colectada ducto por filtracin o agregando aditivos qumicos (SO2).
sultante se denomina pickle o encurtido. hortalizas y mesenteroides debe tener un contenido adecuado de azcar (160 a 180 g/
frutas Pediococcus cereviseae L) para posibilitar un buen sustrato para la fermentacin.
Lactobacillus plantarum En la superficie de las uvas existen levaduras salvajes que Cuadro 11- Caractersticas del mosto y del vino
Pickle Lactobacillus brevis estn naturalmente presentes, pero que no hay que dejar
Chucrut Repollo Leuconostoc Mosto Vino
Producto acidificado resultante de la fermentacin lcti- prosperar porque no producen buenas fermentaciones. Para glucosa etanol (11%)
mesenteroides
ca de ciertos vegetales. Salchichas Carnes y Lactobacillus plantarum
eliminarlas se trata la superficie vegetal con sustancias como fructosa (200g/L) levaduras y azcares < 2g/L
dixido de azufre o metabisulfito de potasio. Luego de for- pH = 3.0-3.8 pH 3,0-3,8
ahumadas pescado
La fermentacin lctica la realizan las bacterias que se mado el mosto se le agrega el cultivo de Saccharomyces cidos tartrico y mlico cidos, idem
Salame Pediococcus cerevisiae aa, NH4+, vitaminas aminocidos, amonio, vitaminas
encuentran en la superficie de los vegetales. En el proce- Lactobacillus plantarum cerevisiae aireando el contenido de la cuba para que la le-
anaerobiosis aromas, en mayor proporcin
so de conservacin se procura favorecer el desarrollo de Salsas de Lactobacuillus spp vadura se reproduzca rpidamente por respiracin.
las bacterias lcticas e impedir el desarrollo de otros mi- pescado Aspergillus glaucus (Japon)
croorganismos que pueden alterar la calidad del alimen- Cuadro 12 - Lista parcial de microorganismos involucrados en la produccin y alteracin de vino
to. Las condiciones que favorecen el desarrollo de la flora
lctica son: anaerobiosis y concentracin de sal a 5%. Ensilados Organismo Rol en produccin y/o alteracin Cambios
Se produce la siguiente secuencia de microorganismos: Saccharomyces cerevisiae var ellipsoideus 1. ferm.lica primaria glucosa y/o fructosa
La conservacin de forrajes o alimentos, granos, tubr- 2. carbonatacin de vinos espu- etanol y CO2
Leuconostoc mesenteroides, Pediococcus cereviseae, mantes en fermentacin secundaria
culos, pescado, etc. en ausencia del aire, ha sido em- 3. enturbiamiento en vinos dulces
Lactobacillus plantarum, Lactobacillus brevis
pleada por el hombre desde hace miles de aos. En el Pediococcus, Leuconostoc y Lactobacillus fermentacin malolctica I. c.mlico c. lctico y CO2
Leuconostoc mesenteroides realiza fermentacin hetero- caso de alimentos para el ganado, la finalidad del proce- II. mejor sabor
lctica y los productos finales son cido lctico, cido ac- so es conservar los forrajes con la mayor calidad posi- Levaduras superficiales pesado crecimiento superficial I. etanol,acetaldehido
tico, alcohol y CO2. El CO2 desaloja el O2 del medio y ase- ble, por un lapso ms o menos prolongado, de forma de Saccharomyces beticus y produccin de sabor a Jerez II. sabores
gura la anaerobiosis. El cido lctico baja el pH del me- Botrytris cineres crecen en ciertas regiones, en I. deseca la uva
emplearlos en el momento en que se los necesite. Con- superficie de uvas que dan vinos dulces II. oxida mlico a CO2 y H2O
dio, lo que inhibe la actividad de la restante microflora pre- serva el valor nutritivo del forraje a diferencia del proce- III. agrega color y sabor
sente en los vegetales. so de secado al aire (heno). Bacterias del cido actico y levaduras superficiales alteran vinos expuestos al aire oxidan etanol a c. actico
Bacterias lcticas Lactobacillus trichodes alteran el vino anaerbicamente mal gusto
Elaboracin de cerveza co y enturbiamiento. Las enfermedades pueden evitarse Esquema Los semiblandos como Limburger maduran por bacte-
por pasteurizacin o esterilizacin por filtracin antes del rias y otros contaminantes de su superficie. El Roque-
Esta bebida se produce por fermentacin de granos sin embotellado. NATA Pasteurizacin Refrigeracin Maduracin fort lo hace por accin de mohos del gnero Penicillum
azcares fermentables. El almidn debe ser hidrolizado a (inculo) cuyas esporas se inoculan en la suferficie, luego se apre-
azcares (maltosa y glucosa) antes de usarse como sus- Panificacin Suero cia el color de las hifas (verde, azul, blanco) penetrando
trato por las levaduras para su fermentacin. Este proceso En la elaboracin de pan se usan levaduras para leudar Batido en la pasta. El Camambert madura en pequeos enva-
Grnulos Lavado, salado,
se llama sacarificacin. Los granos usados pueden ser de la masa. La levadura usada es Saccharomyces cerevi- ses para que las enzimas del Penicillum que ha crecido
armado envasado
cebada, arroz o maz. Granos de arroz se usan en Asia, siae que por fermentacin alcohlica de los azcares pro- aerbicamente en la superficie, difundan a interior para
mientras que el maz es utilizado en algunas regiones de duce etanol y dixido de carbono. En el caso del pan lo realizar la maduracin. Propionibacterium produce en el
Quesos
Amrica. Los granos ms empleados son los de cebada. que interesa es la produccin de dixido de carbono que queso tipo suizo los tpicos ojos producidos por la libe-
Es el producto resultante de la concentracin de la mate-
hace que aumente el volumen de la masa, el alcohol se racin de gases.
ria seca de la leche por coagulacin a travs de la accin
La conversin de los granos de cebada en malta se deno- evapora en el horno.
de microorganismos lcticos. La leche posee microorga-
mina malteado: los granos se dejan germinar, luego son En los quesos de pasta dura, como Cheddar o Suizo, las
nismos propios y provenientes del ambiente. Algunos son
secados y molidos. La malta contiene amilasas que son Inculos: se usan inculos comerciales, levaduras pro- bacterias lcticas crecen anaerbicamente en su interior,
perjudiciales y otros se usan para elaborar quesos en for-
las enzimas necesarias para degradar el almidn en az- ducidas en gran escala, en sistemas aireados, donde el mueren y se autolizan.
ma artesanal. La leche pasteurizada asegura la estan-
cares fcilmente fermentables. Posteriormente se muele rendimiento energtico es ms alto que en la fermenta-
darizacin de la produccin al destruir microorganismos
la malta y se deja hidrolizar su suspensin en agua. Algu- cin. Mediante centrifugado se elimina el lquido y se ob- El cuadro 4 muestra caractersticas de procesos mi-
patgenos y saprofitas, colibacterias, levaduras y enzimas
nos productos incluyen la hidrlisis de protenas, enton- tienen los pellets celulares a los que se les agrega aceites crobiolgicos y bioqumicos y los microorganismos res-
de la leche.
ces esta mezcla se somete a altas temperaturas para de- vegetales y se forman los panes de levadura. La levadura ponsables de la produccin de distintos tipos de que-
tener estos cambios enzimticos y se filtra. tambin se vende seca, en polvo. sos.
Etapas
* Fermentacin, con o sin inoculacin con S. lactis, S. cre-
Agregado de lpulo (inflorescencia del vegetal Humulus
moris, S. casei, Lactobacillus spp. Cuadro 4 - Microbiologa de distintos tipos de queso
lupus), a la malta para impartirle el caracterstico sabor Bibliografa
amargo de la cerveza por la presencia de una resina solu-
Aunque hay innumerables tipos de quesos todos requie- Tipos Proceso Microorganismo
ble que adems acta previniendo el desarrollo de micro- Frazier, W. C., D. C. Westhoff Microbiologa de los Ali-
ren la formacin de la cuajada, que se separa de de la quesos temperatura de
organismos no deseados. mentos, 1985, Ed. Acribia, Barcelona
fraccin lquida o suero. La casena sufre cambios fsico- (en general) fermentacin: 35C S. lactis o cremoris
Frioni, L. Procesos microbianos. 1999 Fundacin de la
qumicos y precipita como paracaseinato de calcio. Como 42C Lactobacillus (termfilo)
Fermentacin Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina
coagulante se puede usar cuajo o cido.
La maltosa y la glucosa son fermentados por cepas se- Jonsson, A. The role of yeasts and clostridia in silage de- quesos duros proteolisis, lipolisis bacterias lcticas
leccionadas de Saccharomyces cerevisiae conocidas terioration, 1989, Sveriges lantbruksuniversitet, Inst. fr (Chedar, suizo) dentro del queso
El primero es ms usado y se obtiene del estmago de
como levaduras cerveceras. Este proceso se realiza a baja Mikrobiologi, Rapport 42, Uppsala: 1-51
terneros lactantes y su principio activo es una protena, la quesos blandos
temperatura por espacio de 5 a 10 das producindose Madigan, Martinko, Parker Brock, Biologa de los mino madurados: Lactococcus lactis
renina, activa a pH cidos (pH 3,8) que se logra por el
etanol y CO2. croorganismos, 2000. Prentice Hall International Requesn S. thermophilus,
cido lctico de las lactobacterias al fermentar la lactosa.
National Academy of Sciences, Microbial processes: Mozzarella L. bulgaricus
El cido lctico produce adems sabores caractersticos
Maduracin Promisiong Technologies for Developing Coun-
de estos productos. madurados proteolisis, lipolisis crecimiento superficial
Luego de la fermentacin la cerveza se almacena a 0C y tries, 1979, Washington DC
precipitan las protenas, resinas y el lquido se aclara. Peagaricano, J. A. , W. Arias y N. J. Llaneza Ensila- (Camambert) de hongos: Penicillum spp.
* La cuajada pasa por un proceso de maduracin, excep- Seguidos de bacterias
je,1988, Ed. Hemisferio Sur
to en algunos quesos frescos o ricota. La dureza del Bacterium
Enfermedades Prescott, Harley y Klein Microbiologa, 1999, McGraw-
queso se obtiene en esta etapa: cuanto ms agua pier-
Se pueden producir durante el proceso de fermentacin, Hill.Interamericana queso suizo ferm. propinica, Propionibacterium spp.
da la cuajada y ms se comprima, ms duro ser el lipolisis y produccin Penicillum roqueforti
en la maduracin y en el embotellamiento. Un agente Salminen, S. y A. von Wright, Lactic Acid bacteria, 1993,
producto. Tambin ocurre hidrlisis de de grasas por pigmento azul
nocivo muy comn lo constituye la levadura salvaje Sac- Marcel Dekker, New York
enzimas microbianas y la renina.
charomyces pasteurianus que provoca un sabor amargo Varnam, A. H. The exploitation of microorganisms in the quesos muy 12-16 meses de Lactobacillus lactis,
y desagradable. Si la temperatura se hace demasiado processing of dairy products. En : Exploitation of Mi- duros maduracin L. cremoris,
Los quesos livianos maduran por enzimas de bacterias,
alta durante el proceso de maduracin y almacenamiento croorganisms, 1993 D. Gareth Jones (ed), Chapman madurados (Parmesano) S. thermophilus
levaduras y hongos que crecen en su superficie.
se desarrollan bacterias lcticas produciendo cido lcti- & Hall, London: 273-296
Cuadro 3 - Alimentos obtenidos por fermentacin porulados con forma de bacilo y tambin bifurcados en Preguntas de repaso mentacin lctica
lctica los extremos (figura 4) (Prescott et al., 1999), son inm- 4) Dnde puede obtener inculos de bacterias lcticas?
viles, anaerobias y fermentan lactosa y otros azcares 1) Concepto general del proceso de fermentacin, rendi- Y cmo se usan los comerciales?
Producto Materia prima Microorganismo dando cidos actico y lctico. Son habitantes tpicos mientos energticos y en poder reductor de las princi- 5) Caractersticas de un buen ensilado.
del tracto intestinal humano y se les atribuyen muchas pales fermentaciones. 6) Por qu los medios de cultivo con extracto de levadu-
queso cuajo de leche Streptococcus spp.
Leuconostoc spp. propiedades beneficiosas, mejoran la tolerancia a la lac- 2) Compare la fermentacin homo y la heterolctica ra se denominan complejos?
tosa, previenen diarreas en nios y son actualmente in- 3) Ejemplos de aplicaciones biotecnolgicas de la fer- 7) Factores que hacen del vino un producto estable.
Kefir leche Streptococcus spp. corporados en numerosos productos fermentados.
Saccharomyces kefir
yogur leche desnatada y Streptomyces thermophillus
leche en polvo Lactobacillus bulgaricus
leche cida leche Lactobacillus acidophillus
manteca crema de leche Lactobacillus bulgaricus
Leche tipificada Leche desnatada
seleccin de la leche
homogeneizacin
pasteurizacin

leche en polvo concentracin leche concentrada
siembra cultivo 2-5%

S. tehemophillus

45C 2-5 horas incubacin L. bulgaricus (aroma)

pH 4,6 refrigeracin

conservacin (aprox. 1 semana a 7C)
Figura 3- Esquema en la preparacin de yogur
Kefir Figura 4- Bifidobacterias

Esta leche cida se consume mucho en Europa Oriental.
Las bacterias lcticas se suplementan con una levadura
fermentadora de la glucosa que le proporciona a esta be- Manteca
bida contenido alcohlico de 1-2%. La levadura es Sac- Su preparacin es en parte microbiolgica ya que el
charomyces kefir y las bacterias Lactobacillus caucasicus agriado inicial de la leche por Streptococcus es necesa-
y Streptococcus spp. El alimento se prepara agregando a rio para la separacin de la grasa. Estos organismos
la leche grnulos de kefir de una fermentacin anterior. producen pequeas cantidades de acetona que es oxi-
dada a diacetilo (CH3-CO-CO-CH3), compuesto respon-
Otras bacterias de inters son las bifidobacterias (per- sable del sabor. Es comn inocular crema pasteurizada
tenecientes a los actinomicetes). El gnero Bifidobacte- con cultivos puros de S. lactis, S. cremoris, L. citrovo-
rium contiene bacilos Gram positivos irregulares, no es- rum y L. diacetylactis.
La pasteurizacin elimina a la mayora de los microorga- La ampolla que los contiene se llena con leche estril
nismos que alteran el producto, pero no esteriliza. descremada, se agita enrgicamente para suspender
el cultivo y se incuba a 23-24C por 16-18 horas
Tipos: baja 62C durante 30
alta 72C durante 15 Estos cultivos se repican en leche descremada (1 litro)
ultrapasteurizacin 140C durante 1 en condiciones aspticas y se incuban 12 horas a 23-
25C (primer subcultivo), luego se logran otros subculti-
Esterilizacin : se incrementa la distribucin de leches vos a razn del 2% de inculo y 18 horas de incuba-
esterilizadas (larga vida), las que son sometidas a 143C cin. Uno de ellos se usa para mantener la cepa en el
durante 3 segundos, en tubos concntricos y enfriada r- refrigerador.
pidamente.
Un cultivo puro no se puede repicar indefinidamente sin
En la ltima parte del siglo 19 se aislaron por primera vez que se alteren sus caractersticas. Debe procurarse nue-
los microorganismos responsables de la fermentacin lc- vamente un cultivo puro. El cuadro 3 resume algunos de
tica. En la actualidad se emplean grandes volmenes de los productos obtenidos por fermentaciones a partir de
inoculantes adecuadamente seleccionados por criterios: la leche.
* temperatura de crecimiento y actividad

* acidificacin : nivel de cido lctico y velocidad de for- Leches cidas
macin
Yogur
* actividad proteoltica, importante en la preparacin de Se prepara a partir de leche con poca grasa inoculada
quesos con cultivo mixto de:
* estabilidad gentica de las cepas
Streptococcus thermophillus, para la produccin de cido
* resistencia a bacterifagos
lctico y Lactobacillus bulgaricus, que contribuye al sa-
bor y aroma.
Muchos de estos microorganismos empleados como ini-
ciadores (starter) contienen numerosos plsmidos de
La fermentacin se realiza a 45C durante varias horas,
particular importancia porque codifican propiedades esen-
(figura 3) la acidez coagula la leche produciendo tambin
ciales como: fermentacin de la lactosa, actividad protei-
la digestin parcial de la casena que facilita su asimila-
nasa, metabolismo del citrato, propiedades antagonistas,
cin. El yogur recin preparado contiene 109 bacterias por
resistencia a bacterofagos. Algunas especies poseen
gramo. Las formas slidas se preparan con leche con-
estos genes en el cromosoma. La prdida de estos pls-
centrada y se fermentan durante 2-3 horas en los enva-
midos explica la inestabilidad de algunas de estas propie-
ses de venta. El yogur lquido se incuba a una temperatu-
dades esenciales (Varnam, 1993). El anlisis molecular
ra ms baja y por un tiempo mayor, luego se mezcla y se
de los plsmidos que albergan los genes que codifican
enfra antes del envasado.
estas propiedades hace posible aplicar los conocimientos
de la gentica de las bacterias lcticas para mejorar ce-
Leche cida
pas existentes o producir nuevas. La inclusin de estos
Es otro tipo de leche fermentada preparada con cultivos
genes en el cromosoma es otra de las orientaciones para
de Lactobacillus acidophillus a la que se le atribuye ma-
incrementar la estabilidad de los cultivos.
yor efecto diettico debido a que la bacteria sobrevive en
el estmago y produce cido lctico en el intestino lo que
Los inculos se producen en la actualidad en general en
inhibe el desarrollo de microorganismos de la putrefac-
laboratorios especializados y se comercializan como cul-
cin. Crece ms lentamente y coagula la leche dentro de
tivos liofilizados:
las 4 a 8 horas.
* Perodo de acidificacin, en el que se desarrollan acti- Fermentaciones especficas de la leche

vamente los microorganismos productores de cido lc- 1. Fermentacin lctica, que como vimos es producida
tico a partir de lactosa hasta que su concentracin llega por enzimas microbianas que liberan cido lctico de
a un 1%. La figura 2a muestra la variacin de pH del la lactosa. Las bacterias ms importantes son Strep-
sustrato a medida que la fermentacin progresa. A pH tococcus lactis y S. cremoris, mesfilos y presentes
Aplicaciones industriales de los
20
cercanos a 4,0 la acidificacin se detiene por autoinhi- en la leche. Se produce la precipitacin de la casena
bicin de la flora lctica. En la figura 2b se aprecian las (cuajada). Leuconostoc citrovorum tambin produce
variaciones de la lactosa, azcar de la leche, y el cido
lctico, en el tiempo.
cido lctico, L. dextranicum produce cido actico,
etanol y CO2. Lactobacillus casei es usado en la pre-
microorganismos
paracin de quesos, L. acidofillus. L. bulgaricus y L.
* Fase de neutralizacin: el cido estabiliza al producto plantarum son importantes en la elaboracin de leches
pero pueden prosperar hongos y levaduras si la tempe- cidas.
ratura es adecuada, que consumen el cido lctico. En Los microorganismos son muy empleados en proce- Cuadro 1- Cronologa del desarrollo de la
la superficie se aprecia densa capa de hongos. El pro- 2. Fermentacin gaseosa: otros microorganismos no sos vinculados a las industrias alimenticia, qumica, far- Biotecnologa
ducto se desestabiliza y el resto de las fracciones org- deseables producen cidos y gases: micrococus, coli- macutica, en la elaboracin de inoculantes para la agri-
nicas son degradadas. formes. Escherichia coli y Aerobacter aerogenes libe- cultura y la proteccin del ambiente. El hombre, desde Etapa pre-Pasteur (anterior a 1865)
ran CO2 e H2 a partir de lactosa. Otros microorganismos muy antiguo, an sin reconocer la accin de los micro- Bebidas alcohlicas (cervezas, vinos)
* Fase de putrefaccin llevada a cabo por bacterias y pueden ser Clostridium butyricum y levaduras como organismos se vali de ellos para conservar alimen- Productos lcteos (quesos, yogur)
hongos que permanecieron al estado latente a pH bajo Candida y Torulopsis. tos, como por ejemplo, mediante el empleo de las fer- Vinagre
y ahora atacan la casena (proteolisis) y luego los lpi- mentaciones, especialmente la alcohlica, ya referidas Etapa Pasteur (1865-1940)
dos (lipolisis), descomponen totalmente la leche de- 3. Produccin de aromas y sabores agradables: Strep- en Egipto, 6.000 aos AC. Pero cuando se emplean Fermentaciones Industriales (etanol, butanol, ace-
jando un lquido claro, que puede poseer sustancias tococcus citrovorus, S. paracitrovorus que dan produc- los microorganismos en microbiologa industrial o bio- tona, glicerol)
txicas. tos voltiles como el cido actico o el diacetilo a partir tecnologa, se trabaja con el organismo o la comuni- Produccin de cidos orgnicos (actico, ctrico,
de cido ctrico. dad seleccionada el que se propaga en un ambiente lctico)
pH controlado. Etapa Antibiticos (1940-1960)
9
8 4. Fermentacin proteoltica: producida por microorga- Produccin a gran escala de antibiticos
7 nismos que desdoblan protenas dando olores y sabo- El cuadro 1 resume la evolucin de la aplicacin de los Transformaciones de esteroles (cortisona, estrge-
6 microorganismos en Biotecnologa: manipulacin cient- nos)
res desagradables. Los organismos son Streptococcus
5
liquefaciens, Clostridium butyricum, Bacillus subtilis, Se- fica de procesos realizados por microorganismos y sus Etapa post-antibiticos (1960-1975)
4
3 rratia marcens, Pseudomonas putrefaciens. enzimas y en sentido ms estricto, modernamente se de- Produccin de: aminocidos, enzimas industriales
2 signan con el mismo trmino a los procesos que involu- Enzimas inmovilizadas
1 5. Fermentacin lipoltica: causada por microorganis- cran al ADN recombinante. Protena unicelular, polisacridos
a mos que desdoblan las grasas en glicerol y cidos gra- Etapa Biotecnologa Molecular (1975-presente)
tiempo Se reconocen reas en la Biotecnologa: Tecnologa del ADN recombinante
sos y en consecuencia se produce rancidez: Pseudo-
concentracin
monas fluorescens, Achromobactyer lipoliticum, levadu- Primeros productos aparecen en el mercado en
ras (Candida lipolitica), hongos (Penicullum spp., Geo- i) produccin de biomasa 1982 (vacunas, insulina humana)
cido lctico
trochum candidum).
ii) fermentaciones (procesos biolgicos que ocurren en la
oscuridad y no involucran cadenas respiratorias con O2 Produccin de biomasa
Derivados de la leche o NO3 como aceptares de electrones) fuente de energa renovable. Ej. Gasohol en Brasil
lactosa Los productos fermentados son consecuencia de la ac-
iii) obtencin de metabolitos secundarios de los microor- produccin de protenas microbianas (SCP=single cell
tividad controlada de un conjunto de microorganismos.
ganismos protein)
b Con la pasteurizacin de la leche fue necesario susti-
tiempo
tuir la microflora natural por cepas seleccionadas y con- Ejemplos: Candida lipolytica, levadura que crece en hi-
Figura 2 - a) Evolucin del pH del sustrato en el tiempo, b) troladas que aseguren la estandarizacin de los pro- iv) empleo de microorganismos genticamente modifica- drocarburos derivados del petrleo crudo y en hidrocar-
Variacin en la concentracin del cido lctico y lactosa ductos. dos (MGM) buros alifticos de cadenas largas (C12-C18)
Methylophilus methylotrophus, productor de metano a tecnologa del ADN recombinante. Se puede, as, aadir delbrueckii se emplea en la produccin de yogur, L. aci- Leche y derivados
partir de gas natural o metanol nueva informacin gentica a las clulas que se desee dophilus en la de leche cida y otras especies participan La leche se define como el producto ntegro de ordee
(vegetal, animal, microbiana) (cuadro 3). en la produccin de repollo fermentado, ensilaje y pickles. total e ininterrumpido de una hembra lechera sana, des-
Fusarium graminarum, biomasa que se vende comercial- cansada y bien alimentada, recogida higinicamente y sin
mente Resisten los pH bajos por lo que continan creciendo calostro. Su composicin (g/L) indica que es un muy buen
Cuadro 2- Aplicaciones de los microorganismos cuando el pH descendi e inhibi a otras bacterias lcti- sustrato para la microflora:
Fermentaciones cas. Son, por lo tanto responsables de las etapas finales
aminocidos, cidos ctrico, acetona, enzimas, vita- Enzimas: amilasas, glucosa isomerasa, proteasas de las fermentaciones acidolcticas. Raramente son agua 873 sales 9
minas Aditivos para alimentos: aa (fenilalanina, lisina, glutamato patgenos. glcidos:lactosa 49 del cido ctrico 2
monosdico), vitaminas (B12, riboflavina), cidos orgnios lpidos 35 del c. fosfrico 2,6
alimentos: levaduras, polisacridos, derivados de la (c. ctrico), nucletidos, polisacridos Se los encuentra en la superficie de las plantas, en pro- materia grasa 34 otras 4,4
leche Productos qumicos comunes: citrato, cido actico, eta- ductos lcteos, carne, cerveza, frutas y muchos otros lecitina 0,5 compuestos diversos
Metabolitos secundarios nol, solventes industriales, alcoholes y acetona, produci- materiales. fraccin insaponificable 0,5 extracto seco total 127
dos por fermentacin protenas 34 extracto seco desgrasado 93
antibiticos: Penicillum notatum (penicilina), Streptomy-
ces sp (estreptomicina), hongos (micotoxinas) Farmaceticos: antibiticos (penicilina, estreptomicina), bio- Aplicaciones de la fermentacin lctica casena 27
polmeros (fenoxialcanos), hormonas (por ingeniera ge- La fermentacin lctica acidifica el medio a valores de pH protena soluble 5,5
Ingeniera gentica ntica las bacterias pueden producir insulina de uso hu- menores de 5,0, eliminando la posibilidad de crecimiento N no proteco 1,5
mano), alcaloides de microorganismos que alteran los alimentos. Esta prc-
vacunas
Productos agrcolas: utilizacin de inoculantes para: legu- tica se emplea en la conservacin de alimentos para el Se deben incluir carotenoides, vitaminas, enzimas, este-
algunas hormonas (la insulina, se produce a partir de
E. minosas, silos, viveros forestales, otros (control biolgico hombre, como los derivados de la leche y en la conserva- roles, que se encuentran en pequeas cantidades pero
coli recombinante hiperacumuladora; hormona del cre- de microorganismos fitopatgenos e insectos plaga, ej: cin de frutas y hortalizas, en los pickles y en alimentos ejercen un efecto relevante. El pH neutro es adecuado
cimiento humano, interferones) Bacillus thuringensis) para animales, como los ensilados. para la mayora de los microorganismos, por lo que este
Proteccin del ambiente: microorganismos naturales o mo- alimento es atacado por una micropoblacin variada. La
agentes para el control de insectos: la protena txi- dificados genticamente en la biodegradacin de polme- temperatura regular la composicin y velocidad de creci-
ca del Bacillus thuringensis (Bt) es introducida a ve- ros, recuperacin de metales (biorremediacin) Cuadro 2 - Caractersticas de los subgrupos en el miento de la misma.
getales gnero Lactobacillus
Biocombustibles: metano, etanol, H2, biodiesel
A medida que aumenta la temperatura de conserva-
Microbiologa industrial Caractersticas Especies ADN cin de la leche hasta 35-40C se evidencia mayor de-
Esta rama de la microbiologa tiene por objeto la produc- (mol%GC) sarrollo microbiano. Por encima de 40C se desarro-
Cuadro 3- Cepas microbianas empleadas para
cin a gran escala de microorganismos de inters (bio- llan especies termfilas como Bacillus, Clostridium y
procesos industriales
masa microbiana), que sern empleados como inoculan- Homofermentativos Steptococcus. Entre 20 y 40C prodominan mesfilos
tes en la produccin de vinos, cervezas, pan, derivados Ac.lct. principal producto
cepas nativas seleccionadas en la naturaleza como Streptococcus. A bajas temperaturas predominan
lcteos, etc., para la obtencin de enzimas de inters, (ms 85% de la glucosa, no dan
gas,aldolasa)
sicrfilos como Pseudomonas, Alcaligenes y Achromo-
como celulasa, lipasas, Taq-polimerasa, enzima termol- cepas de coleccin que se adquieren en estado liofilizado bacter.
1) crecen a 45C pero no a 15C L.delbrueckii 50
bil, empleada en la reaccin en cadena de la polimerasa
seleccin de mutantes espontneas (resistentes a fagos, bacilos cortos L. acidophilus 32-37
(PCR), de metabolitos de inters: aminocidos, hormo- Alteracin natural
nas, vitaminas, antibiticos, etc. Los microorganismos se con propiedades aromticas, etc.)
2) crecen a 15C, variable a L. casei Por tratarse de un producto muy rico en nutrientes y po-
emplean tambin en el control de insectos y otras plagas, organismos genticamente modificadas (OGM) a los cua- 45C, bacilos cortos y coreniformes L. plantarum 45-46 seer un azcar fcilmente degradable, la leche es muy
en la recuperacin de metales y en el cuidado del am- les se les integraron genes de inters en plsmidos, me- L. curvatus 42-44 alterable. Se evidencian 4 etapas:
biente (cuadro 2). diante tcnicas de ingeniera gentica
Heterofermentativos * Perodo germicida: luego de ordeada no se detecta
En sus comienzos la biotecnologa, aplic los mtodos de producen cerca del 50% de c. L. fermentum 53
crecimiento microbiano por la presencia de sustancias
seleccin, mutacin e intercambio gentico. Si bien este El cuadro 4 resume algunas de las propiedades que se lctico, CO2 y etanol, sin L. brevis, 45
aldolasa, fosfocetolasa presente, L.buchneri 45
inhibidoras como lactoperoxidasa y aglutininas. Este
mtodo se sigue empleando, en la biotecnologa moder- les exige a un microorganismo que va a ser empleado en perodo vara de pocos minutos a 2 horas dependiendo
la industria. bacilos largos y cortos L. kefir 41
na estas tcnicas se complementan con el empleo de la de condiciones de temperatura.
Cuadro 1 - Principales gneros de bacterias lcticas Cuadro 4- Propiedades de microorganismos de ultracongelacin (en nitrgeno lquido) a -196C.
uso industrial Se informa de cultivos viables por estas ltimas tcnicas
gnero forma y agrupaciones fermentacin ADN por ms de 15 aos.
(mol GC%) Disponible en cultivo puro
Una vez seleccionado el microorganismo, ste debe ser
Streptococcus cocos en cadena homofermentativo 34-46 Genticamente estable cultivado de modo de obtener los productos deseados.
Leuconostoc cocos en cadena heterofermentativo 38-41 Los microorganismos deben, en general, cultivarse en for-
No patgeno y libre de toxinas
Pediococcus cocos en ttrada homofermentativo 34-42 ma masiva, a los efectos de obtener gran cantidad de bio-
Crecimiento rpido en cultivo en gran escala con alto ren- masa. Hay que destacar que el trmino fermentacin, es
Lactobacillus bacilos en cadena homofermentativo 32-53 dimiento del producto deseado empleado en forma ms general en microbiologa indus-
bacilos en cadena heterofermentativo 34-53 trial y biotecnologa. En efecto, se refiere con este trmi-
Debe poder protegerse de la contaminacin no tambin a cualquier proceso aerobio o anaerobio que
Enterococcus cocos en cadena homofermentativo 38-40 conduzca al cultivo masivo de microorganismos, a la des-
Crecer en medio de cultivo lquido y con sustratos de bajo
Lactococcus cocos en cadena homofermentativo 38-41 costo composicin de alimentos, a la produccin de bebidas al-
cohlicas. Los reactores industriales y los equipos a es-
Fcil recuperacin del producto del medio de cultivo cala de laboratorio con control de entrada y salida de nu-
Como se aprecia los gneros Streptococcus, Leuconos- natural lo constituyen los vegetales y tambin se encuen- trientes, de pH, aireacin, etc. se denominan
toc y Pediococcus presentan relaciones de bases en su tran en la leche. Se emplean mucho como cultivos inicia- Susceptible a la manipulacin gentica
fermentadores(figura 1) (Prescott et al., 1999), donde to-
ADN bastante similares y existe pequea variacin entre les en la industria lctica por sus propiedades aromati- dos los procesos se realizan en condiciones de asepsia.
cepas. El gnero Lactobacillus, por el contrario posee zantes (diacetilo y acetona al descomponer el citrato),
miembros con diversa composicin del ADN y no consti- aunque han sido desplazados por el S. diacetilactis. Algu- Los microorganismos seleccionados deben conservarse
tuye un grupo homogneo. nas cepas producen grandes cantidades del polisacrido con el mantenimiento de las caractersticas deseadas (es-
Motor
dextrano ( 1,6-glucano), de uso mdico. tabilidad). Las tcnicas incluyen:
Streptococcus: se presentan en cadenas de cocos, son
* transferencias o repiques peridicos (puede aumentar Adicin de cultivo o
mesfilos (ptimo entre 20 y 30C), por lo que el calenta- Lactobacillus: son bastones que varan de largos y del- nutriente
Sonda de pH
miento los destruye con facilidad, son homofermentativos gados a cortos y curvos. La mayora son homofermentati- la tasa de mutaciones y la variacin) Sonda de oxgeno
disuelto
y presentan una amplia variedad de especies con habi- vos, pero algunas especies son heterofermentativas. El Toma de Salida del agua
tats muy diversos, algunos son patgenos. Constituyen la gnero se ha dividido en tres subgrupos principales (cua- * cultivos en agar inclinado cubierto de aceite mineral, que muestras de refrigeracin
flora normal de la leche (figura 1) (Prescott et al., 1999). dro 2). Se los encuentra en la leche, ensilados, frutas y evita desecacin Vlvula
hortalizas conservadas, en la saliva, en el intestino huma- Propulsores
Leuconostoc: son diplococos o en cadenas, heterofer- no y de animales. Producen grandes cantidades de cido * muchos microorganismos se pueden conservar en agar-
mentativos, por lo que son poco acidificantes. Su habitat lctico, resisten altas temperaturas, son termodricos. L. agua o aun en medio de cultivo mnimo (los cultivos lava- Sensor de Revestimiento
dos pueden conservarse varios meses en heladera) temperatura y de refrigeracin
unidad de control
Unidad del
* congelacin a -20 o -70C en medios con glicerol (50%) biosensor
Entrada del
que evita daos en la clula agua de
refrigeracin
* deshidratacin (los cultivos se secan en suelo estril o Vlvula
en discos de papel de filtro y se pueden almacenar en
Entrada de aire
desecador o congelarse).
Vlvula
Finalmente, los mtodos ms seguros incluyen : Salida de Filtro del aire

captacin
liofilizacin (se elimina el agua por ciclos de vaco y

Figura 1- Estreptococos. a) Streptococcus pyogenes (x900), b) micrografa electrnica de barrido de Streptococcus (x33.000), c) congelamiento en aparatos especiales), las clulas se- Figura 1- Fermentador para cultivos de microorganismos
S. pneumoniae (x900) cas se conservan en ampollas cerradas aerobios o anaerobios a gran escala
Metabolitos primarios y secundarios de los mi- Las tcnicas de cultivo continuo (captulo 4), mejoran la
croorganismos produccin de clulas y la velocidad de empleo del sus-
Metabolitos primarios: se producen durante la fase lo- trato, ya que los microorganismos se mantienen en fase
gartmica de crecimiento como producto del metabolismo, logartimica continua.
y son esenciales para la funcin del microorganismo (ami-
Fermentaciones lctica y alcohlica
19
Fermentador de
nocidos, cido pirvico, etanol, cido lctico). Su pro- produccin
duccin neta se relaciona con el crecimiento y la cantidad Cultivo de Cultivo en Fermentador
reserva matrz inoculante
de sustrato. Esta etapa se denomina trofofase Biomasa
Aplicaciones biotecnolgicas
Metabolitos secundarios: se producen en la fase tem-
prana estacionaria de crecimiento y son productos finales
de vas metablicas complejas. No son crticos para la Sobrenadante
funcin de los microorganismos, como por ejemplo los Desde muy antiguo el hombre emple a los microorganis- culares. Las bacterias carecen de enzimas de la va gli-
Medio
antibiticos, pigmentos, hormonas, vitaminas, etc. esterilizado mos en la produccin y conservacin de alimentos, aun coltica (aldolasa y triosafosfato isomerasa) y la degrada-
sin conocerlos. Los mtodos empleados antes de la intro- cin de la glucosa se realiza por la va de las pentosas. El
Extraccin
Esta etapa es conocida como idiofase (figura 2). Preparacin del del producto
duccin de la refrigeracin, radiaciones, aditivos, etc., para rendimiento energtico es menor: 1 solo mol de ATP, en
medio la conservacin de hortalizas, pasturas, granos, leche, lugar de 2 como en los homofermentadores que produ-
Metabolismo 1ario. Metabolismo 2ario. Purificacin etc. eran cen el doble de biomasa por mol de azcar fermentado.
Envasado del producto Tratamiento
de efluentes * salado No se acumula poder reductor y la produccin de CO2 es
Figura 3- Proceso industrial de produccin de un metabolito una forma sencilla de distinguir un grupo del otro.
* secado al aire o ahumado
microbiano
Clulas EtOH
* fermentaciones cidas Las bacterias del cido lctico
Pertenecen a la familia Lactobacteriaceae: Gram positi-
El cuadro 5 resumen los pasos a seguir en la obtencin El empleo de otra fermentacin, la alcohlica, permiti la vas, comunmente no mviles, no esporuladas que produ-
de metabolitos microbianos por procesos aerobios o conversin de frutas en productos estables y deriv en cen cido lctico como producto final y nico del matabo-
Azcar Penicilina
anaerobios. aplicaciones biotecnolgicas muy importantes del punto lismo fermentativo. Los integrantes de este grupo care-
Figura 2- Cintica de la produccin de metabolitos de vista econmico. cen de porfirinas y citocromos, no realizan fosforilacin
Cuadro 5- Etapas en la obtencin de metabolitos por transporte de electrones y obtienen energa solamen-
de inters en procesos aerobios o anaerobios te por fosforilacin a nivel del sustrato. Todas las bacte-
Fermentacin lctica rias del grupo crecen en anaerobiosis, pero la mayor parte
La figura 3 esquematiza el proceso industrial de produc- * preparacin de medios de cultivo con sustratos accesibles de ellas no son sensibles al O2 y pueden crecer con o sin
cin de un metabolito, partiendo de un cultivo microbiano y de bajo costo Es uno de los procesos microbianos ms empleados a O2, por lo que son anaerobios aerotolerantes.
debidamente seleccionado, el que se propaga por sucesi- nivel mundial ya que involucra a la leche y sus derivados:
vos cultivos, incrementando el tamao del inculo a intro- * esterilizacin del equipo con el medio de cultivo manteca, yogur, leches cidas, quesos, produccin de Algunas cepas pueden tomar O2 por el sistema de flavo-
ducir en el fermentador. casena, otros subproductos, en los ensilados (forrajes, protena oxidasa, dando H2O2, pero la mayora carecen
* preparacin del inculo y su propagacin en el laboratorio granos, pescado, etc.), en la conservacin de frutas y hor- de catalasa y deben eliminar el agua oxigenada por otras
(1/10 del volumen del reactor) talizas. La fermentacin lctica puede ser como vimos en enzimas, como las peroxidasas.
Los medios de cultivo empleados en la industria incluyen
materias primas de bajo costo: melazas, sueros de le- el captulo 3, homo o heterofermentativa.
* inoculacin y desarrollo controlado del microorganismos
che, desechos agrcolas, glicerol, como fuentes de carbo- en el reactor
La mayora de las bacterias acidolcticas obtienen ener-
no y energa, harina de soja, amonaco y sales de amonio o fermentacin homolctica, las bacterias degradan la ga slo del metabolismo de los carbohidratos y su distri-
nitratos, como fuentes de nitrgeno, extractos de levadura * extraccin y purificacin del producto: enzima, protena, glucosa por la va glicoltica y el producto final es en un bucin est restringida a ambientes con azcares. Exigen
o preparaciones sin refinar de vegetales como fuente de solvente, etc. 90% cido lctico adems aminocidos, vitaminas, purinas y pirimidinas.
vitaminas, yeso o carbonatos o fosfatos usados como ferti-
lizantes, como amortiguadores de pH, aceites vegetales o * tratamiento de los efluentes fermentacin heterolctica los productos finales son Los gneros han sido definidos en base a la morfologa y
alcocholes de alta graduacin como antiespumantes. cido lctico, etanol y CO2, en cantidades equimole- al tipo de metabolismo fermentativo (cuadro 1).
una buena actividad de estos organismos, es necesario Inoculacin A continuacin analizaremos algunos de los grupos mi- rtrofos (captulo 3) y que conducen a la acumulacin de
mezclar los materiales en forma frecuente. crobianos de inters para el hombre que tienen desarrollo productos que han sido histricamente importantes para
Se ha intentado seleccionar microorganismos para usarlos industrial (cuadro 6). El tema Antibiticos es tratado en el hombre:
como inoculante en cultivos puros o mezclas. Existen a nilos captulos 4, 14 y 17.
Cuadro 4 - Principales microorganismos aislados vel comercial productos recomendados para la inoculacin * etanol, acetona, H2, cido lctico, ctrico, propinico,
de un compost de diferentes tipos de residuos. Sin embargo, los datos en- butanodiol, cidos orgnicos, etc.
contrados en la bibliografa sealan escasas diferencias en Cuadro 6- Procesos microbianos de inters
Bacterias Actinomicetes el producto final entre restos inoculados y sin inocular. 1 CO2
2
Lactato NADH NADH Etanol
levaduras: panificacin, bebidas alcohlicas, etanol, vi- Piruvato Acetaldehdo
Mesfilas Termotolerantes
Cellulomonas folia Micromonospora vulgaris Los microorganismos autctonos, existentes en esos taminas CO2 Piruvato
CO2
Chondrococcus exigus Nocardia brasiliensis materiales se encuentran en general en cantidad y cali- CoASH
dad suficiente para producir la descomposicin. La airea- bacterias lcticas: inoculantes para alimentos, leche y de- 3 4
Myxococcus fulvus Streptomyces rectus
cin de las pilas asegura la multiplicacin de los microor- rivados (yogur, queso, pickles) Oxaloacetato acetolactato
Thiobacillus thiooxidans S. thermofuscus
Acetil -CoA Formato CO2
Thiobacillus denitrificans S. thermophillus ganismos en toda la masa. microorganismos como agentes probiticos: bacterias lc- NADH Pi 5
Aerobacter sp. S. thermoviolaceus CoA H2 CO2
ticas Acetil P Acetaldehdo Acetona
Proteus sp. Thermonospora fusca Para que los sustratos puedan ser inoculados con xito, Malato
ADP NADH
Pseudomonas sp. T. glaucus sera necesario en primer lugar esterilizarlos o pasteuri- bacterias productoras de cidos actico (vinagre), Aceto- H2O ATP
NAHD
Thermoactinomyces sp. bacter, Gluconobacter Acetato Etanol
zarlos para luego inocularlos. La cantidad de inculo pue-
Thermopolyspora sp. Fumarato 6
Termfilas
de representar una limitante, teniendo en cuenta los gran-
bacterias productoras de solventes: acetona, etanol, Clos- Acetoacetil-CoA
Bacillus stearotermophilis des volmenes que normalmente se procesan. NADH
tridium acetobutilicum, Propionibacterium CO2
Hongos Residuos vegetales secos, como los restos de cosechas Succinato Acetona Butiril -CoA
Pi
inoculantes para la agricultura: bacterias fijadoras de N2
CO2 NADH CoA Coa
Mesfilos Termfilos (pajas de alta relacin C/N) pobres en microorganismos (Rhizobium, Bradyrhizobium, cianobacterias, Frankia), NADH
Butiraldehdo Butiril P
Fusarium culmorum Aspergillus fumigatus pueden ser compostados mezclndolos con estircol de microorganismos para control biolgico (Pseudomonas, ADP
F. roseum Humicola insolens animales, lodos o cualquier material que posea alta carga Thrichoderma) ATP
Stysanus stemonitis Mucor pusillus microbiana.
Coprinus cinereus Dactylomyces crustaceous microorganismos para producir protenas unicelulares
Figura 4- Diversidad de fermentaciones
Aspergillus niger Torula thermophila como alimento: levaduras, bacterias, algas
Geothricum candidum (Candida, Spirulina)
Mucor jansseni
Tecnologa
bioinsecticidas: Bacillus thuringensis Muchos de estos productos se continan produciendo
El compostaje puede realizarse en: hoy da por va fermentativa, a pesar de que su sntesis
microorganismos como fuente de aminocidos, de vitami- qumica permite su obtencin en la industria, ya que el
Son enzimas hidrolticas extracelulares las que actan en
en el campo, en pilas, al aire libre, sobre piso de tierra nas: vit B12, riboflavina fcil aislamiento de los microorganismos responsables
la primera etapa, liberando molculas menores, solubles
en agua. La actividad de varias enzimas ha sido monito- o pavimentado, con o sin aireacin forzada produccin biolgica de polisacridos: dextranos (Leuco-
y el bajo costo de los sustratos y de la tecnologa reque-
reada en el proceso. La actividad celulasa desminuye la nostoc), xantanos (Xanthomonas) rida hace que los procesos biolgicos sean competitivos
cantidad de celulosa en un 25% en unas tres semanas. en silos, en digestores o usinas altamente tecnifica- desde el punto de vista econmico.
Las actividades de lipasas, proteasas y amilasas crecen y das, para el tratamiento de grandes volmenes de sli- virus y bacterias para preparacin de vacunas
luego descienden en las sucesivas etapas del compostados, como por ejemplo los residuos domiciliarios. Se Las fermentaciones lctica y alcohlica son tratadas en el
je (decrecen marcadamente en la fase termfila). La des- usan reactores cerrados con control de aireacin, hu- captulo 19.
naturalizacin de enzimas se correlaciona con la muerte medad, temperatura y tiempo de retencin. En estos
del microorganismo por el calor. La recuperacin del n- ltimos, el proceso puede completarse entre 5-7 das, Productos de las fermentaciones Se sealan a continuacin algunos de los objetivos en la
mero de microorganismos y la actividad enzimtica en el mientras que en las pilas, puede llevar 3 a 8 semanas, produccin de bacterias lcticas y de las levaduras (cua-
o ms para lograr un compost adecuado La figura 4 muestra distintas vas metablicas que a partir dros 7 y 8), dos de los grupos microbianos con mayor
interior de la pila luego de la fase termfila se atribuyen a
del piruvato realizan numerosos microorganismos hete- incidencia en la alimentacin humana.
la reintroducin de organismos que sobrevivieron en las
zonas externas, ms fras de la pila o a partir de contami- La experiencia ha demostrado que las dimensiones idea-
nacin por el aire. les para las pilas de desechos son las siguientes:
Cuadro 7- Metabolitos producidos por las yora de los probiticos son bacterias, aunque algunas La materia orgnica se descompone ms eficiente y com- Esta etapa culmina al agotarse los nutrientes fcilmente
bacterias lcticas levaduras, como Saccharomyces boulardii ha sido eva- pletamente en condiciones de oxgeno disponible y a tem- empleados por los microorganismos, y el compost va per-
luada como probitica. peraturas elevadas. Las protenas liberan amonaco y diendo calor. La materia orgnica se ha estabilizado, acu-
Productos principales: cido lctico, CO2, etanol, sustan- nitratos, mientras que las grasas y carbohidratos forman mulndose aquella de lenta degradacin (fraccin ligno-
cias aromticas Un producto de estas caractersticas debe ser ante todo dixido de carbono y agua, va cidos orgnicos. Se su- celulsica).
Compuestos antimicrobianos: cidos orgnicos, etanol, dia-
seguro, efectivo y debe mantener su efectividad y poten- ceden fases:
cetilos, H2O2 cialidad hasta su consumo (cuadro 9). Etapa de maduracin: ocurre una lenta degradacin de
Bacteriocinas: pptidos que inhiben cepas muy relaciona-
fase mesfila, en la que predominan bacterias y hon- la materia orgnica hasta que el volumen se reduce aproxi-
das. Contra patgenos como Bacillus, Clostridium, Sta-
gos productores de cidos que atacan a la materia or- madamente 50%.
phylococcus. Ej: la Nisina producida por Lactococcus, Aci- Cuadro 9- Criterios para seleccin de probiticos
dofilina por L. acidophilus activa contra E. coli, Salmonella
gnica fcilmente degradable, generando calor que fa-
panama vorece el desarrollo de organismos termfilos El material va retornando a una nueva fase mesfila, pero
* por su habilidad de sobrevivir en el tracto gastrointestinal ahora con otra composicin qumica, puesto que los nu-
Texturizantes (exopolisacridos): importantes evitando la
separacin del agua (yogur). S. thermophilus productora * por la produccin de sustancias antimicrobianas fase termfila: a partir del 10o da, con la elevacin de trientes fcilmente atacables ya han sido consumidos por
de 2 heteropolisacridos con glucosa y galactosa * rpido crecimiento: bajo tempo de generacin (tg) o alta la temperatura, comienza esta etapa y la poblacin domi- los microorganismos. Reaparecen, hongos y bacterias
Quimosina: esta importante enzima usada para la coagu- velocidad de crecimiento (vc) nante se compone de actinomicetes, bacterias y hon- mesfilas provenientes del medio. A medida que el com-
lacin de la leche en la preparacin de quesos se obtiene gos termfilos o termotolerantes. post va tomando la temperatura ambiente pueden ser
* sin efecto patgeno y con habilidad para estabilizar la mi- encontrados protozoarios, nemtodos, hormigas, miri-
del estmago de terneros, pero en la actualidad se sinteti-
croflora nativa
za a partir de numerosos microorganismos. Preparacio- Los microorganismos que crecen a temperaturas medias podos, lombrices e insectos diversos.
nes comerciales a partir de Lactococcus lactis, Saccha- * habilidad de sobrevivir a bajo pH y en la presencia de bilis (microorganismos mesfilos) son inhibidos con el aumen-
romyces cereviseae , Bacillus, Aspergillus niger, se en- to de la temperatura, mientras que predominan los micro- La maduracin involucra mayor biodegradacin de com-
cuentran en desarrollo. organismos termfilos. Esta fase de alta temperatura es puestos y toma varias semanas. En esta etapa se forman
La mayora de los productos contienen bacterias de los importante porque destruye semillas de malezas y pat- nitratos y las fitotoxinas son degradadas. Esta es una
gneros Lactobacillus y Bifidobacterium, a pesar de que genos de animales y plantas y acelera las reacciones de fase importante en el proceso y el compost inmaduro pue-
Cuadro 8- Importancia industrial de las levaduras otros gneros como Escherichia coli, Enterococcus, Baci- biodegradacin. de provocar serios daos a los vegetales.
llus y Saccharomyces (levadura) han sido comercializa-
* Son los microorganismos ms ampliamente utilizados en dos como probiticas. Esta elevacin de la temperatura y la consecuente altera- La mayora de los compost son vendidos como mejorado-
la industria cin de la flora microbiana son influenciadas, en gran res de suelo. Pueden ser mezclados con otros materiales
* Importancia econmica:
Existe controversia sobre si las bacterias usadas como parte, por la disponibilidad de oxgeno. para rellenar macetas en viveros, usarse en coberturas
a) biomasa celular (para pan, cerveza, vino) iniciadoras en la preparacin de yogur deben considerar- en superficies deportivas y como coberturas de suelo para
b) componentes celulares (vitaminas, aminocidos) se probiticas. Lactobacillus bulgaricus and Streptotoc- Se produce adems, la inactivacin de microorganismos sitios remediados. Tambin pueden ser usados para re-
c) productos finales de la fermentacin (etanol, CO2) cus thermophilus se usan para fermentar la leche y pre- patgenos como coliformes, Salmonella, Streptococcus, mediar tierras contaminadas, ayudar a prevenir la erosin
parar el yogur (captulo 19). Pero estos cultivos no son Aspergillus. Las pilas de compost ms intensamente re- del suelo y como cobertura diaria en los sitios de disposi-
* El proceso de produccin de material celular es aerbico muy resistentes a las condiciones del estmago e intesti- movidas al comienzo alcanzan temperaturas ms elevacin final de residuos. La biomasa microbiana puede
no delgado y generalmente no alcanzan en alto nmero das, hasta 75C, mientras que las menos aireadas slo representar hasta el 25% del peso total del compost.
* El proceso de fermentacin alcohlica es anaerbico
el tracto gastrointestinal, por lo que no pueden ejercer efec- llegan hasta los 60C. Las bacterias formadoras de espo-
to probitico. Sin embargo, estas bacterias, han incremen- ras sobrevivirn a estas temperaturas.
Probiticos
tado la digestin de la lactosa en individuos carentes de Microorganismos presentes
lactasa y la respuesta inmune. La pila se da vuelta o se airea forzadamente, para permi-
tir bajar la temperatura y adems reinocular el material El cuadro 4 presenta algunas de las especies identifi-
Se definen como: alimentos suplementados con micro- Rol de los probiticos en la salud con microorganismos desde la atmsfera ya que la alta cadas.
organismos viables que benefician al consumidor por Por muchos aos se aseguraba que los productos lc- temperatura produjo disminucin de microorganismos
mejoramiento del balance microbiano. La FAO los de- teos con cultivos vivos y activos, eran muy saludables. La mesfilos, por pasteurizacin del sustrato. La temperatu- Los hongos y actinomicetes son activos degradadores de
fine como organismos vivos administrados en cantida- investigacin ha confirmado algunas de estas asevera- ra vuelve a ascender, reinicindose el ciclo. Las pilas se la celulosa y otros materiales ms resistentes. Muchas
des adecuadas que ejercen efectos benficos en la salud ciones. Por ejemplo, la capacidad de algunas bacterias dejan de remover y/o airear cuando la temperatura no se bacterias atacan la celulosa, pero hacia el final del
del hospedante. Se consideran hospedantes a los ani- usadas en la dieta pueden mejorar la salud, como poten- eleva ms, lo que indica que los sustratos fcilmente de- compostaje, cuando la temperatura disminuye, son hon-
males (ganado vacuno, ovino, etc.) y el hombre. La ma- ciar el sistema inmunitario. Algunas infecciones resisten- gradables han sido mineralizados. gos y actinomicetes los que predominan. Para asegurar
rio potencial de carbono. Su aplicacin al suelo puede * Contaminantes orgnicos persistentes (COP) se encuen- tes a antibiticos, se convierten en serios problemas. La te de alimento. Existe una industria basada en el cultivo
economizar la aplicacin de nutrientes, va los fertilizan- tran en menor concentracin en el compost de bioresi- prevencin de esas afecciones antes de que ocurran es de levaduras para uso como suplemento en alimento
tes sintticos. duos y de residuos de poda en relacin a los que se la mejor alternativa y los probiticos constituyen una aproxi- animal. Se usan levaduras estrictamente aerobias, como
acumulan a partir de residuos slidos urbanos (RSU) macin natural como barreras frente a las infecciones mi- las del gnero Candida en lugar de las fermentativas,
* El compost puede reemplazar a la turba como medio de crobianas. Tambin contribuyen a reducir el riesgo de cier- para lograr maximizar el crecimiento en condiciones de
crecimiento para plantines en viveros forestales y hort- * La presencia de plsticos en los residuos est desafian- tas enfermedades ocasionadas por diarreas y alergias en aireacin forzada.
colas. do los sistemas industriales del bioproceso ya que las nios.
partculas pequeas pueden permanecer en el compost En general se buscan los sustratos ms econmicos, pri-
* Tambin puede reducir la necesidad de encalado al ejer- an despus de repetidos tamizados Cmo funcionan los probiticos meramente se emplearon melazas (sub producto de la
cer efecto tampn contra las cadas del pH. Los humanos, como todos los animales contienen mu- refinacin del azcar) y residuos de cosechas. Actual-
chos tipos y altos nmeros de microorganismos en la piel, mente se emplean derivados del petrleo, parafinas y
* Esta tecnologa presenta costos competitivos con otras Proceso de compostaje boca, tractos gastrointestinal y vaginal, En efecto, se ha molculas de varios carbonos, adicionados de sales inor-
tecnologas de manejo de residuos (fsicos, qumicos). considerado que existen ms microorganismos asociados gnicas. Esta lnea de elaboracin de protenas microbia-
Es un proceso microbiolgico realizado en la naturaleza al cuerpo humano, del orden de 1014, que de clulas pro- nas se denomina PP (produccin de protenas) y las plan-
* Se reduce la cantidad de restos producidos por la socie- por organismos nativos: bacterias, hongos y actinomice- pias (del orden de 1013). Adems del gran nmero de tas se instalan en las industrias petroleras, que abaste-
dad y satisface la necesidad de obtener rellenos para el tes, principalmente, actuando en sucesin de predominan- bacterias es necesario tener en cuenta su gran diversi- cen con las fuentes de carbono.
suelo y macetas (viveros). cia, segn la influencia de factores, como la composicin dad. Se estim que ms de 400 especies diferentes se
qumica del material original, su relacin C/N, humedad, encuentran en nuestro cuerpo. Existen unidades industriales en pases petroleros para el
* Constituye una tcnica para obtener la estabilizacin de aireacin, temperatura, pH. cultivo de Candida lipolytica en emulsin acuosa de pe-
la materia orgnica en forma rpida y en condiciones Teniendo este hecho en consideracin, no es sorpren- trleo crudo (la levadura puede oxidar hidrocarburos ali-
que no provocan inmovilizacin del nitrgeno en el sue- Los primeros sustratos atacados son hidratos de carbono dente que los microorganismos hayan ejercido un im- fticos de cadena larga, de C12 a C18). El petrleo que
lo al ser aplicado. Al mineralizarse provee en forma len- simples, protenas, compuestos solubles en alcohol y otros portante rol en la salud humana. La mayora de ellos no queda es ms fcilmente refinado.
ta, los nutrientes que las plantas necesitan. solventes orgnicos (ceras, grasas, cutinas). son patgenas y de hecho contribuyen positivamente al
normal desarrollo. Pero algunas de estas bacterias pue- Otro sustrato potencial es el gas metano, derivado de la
En la naturaleza esta estabilizacin se da en tiempo inde- La fraccin ligno-celulsica no es degradada en su totali- den tener efectos negativos, por lo que resulta impor- industria petroqumica. Las velocidades de crecimiento
terminado, de acuerdo a las condiciones que encuentra el dad y se mezcla con la biomasa microbiana en el produc- tante que el balance microbiano se mantenga a favor de son relativamente lentas en las bacterias oxidantes del
sustrato. to final. las benficas. metano y tienen tendencia a acumular muclagos extra-
celulares.
Otras ventajas son: Involucra 3 etapas: Se ha reconocido que individuos con una amplia flora in-
reduccin de costos en la remocin de nitratos del agua pre-proceso testinal de bacterias benficas estn en mejores condi- Otro microorganismos muy empleado como suplemento
ciones para limitar el desarrollo de bacterias patgenas. proteico es la cianobacteria Spirulina, que es empleada
reduccin de la susceptibilidad a la erosin del suelo biodegradacin
Lactobacilos y bifidobacterias mantienen un balance sa- como alimento en Africa y se vende en polvo o en forma
reduccin de los requerimientos de riego maduracin ludable de la flora intestinal por la produccin de com- de pastel seco en comercios de alimentos de Estados
puestos orgnicos, como el cido lctico, perxido de hi- Unidos de Amrica.
Pre-proceso puede incluir solamente la molienda y pul- drgeno y cido actico, que incrementan la acidez del
Inconvenientes del compostaje verizacin (residuos de parques y jardines) o puede re- intestino e inhiben la reproduccin de muchas bacterias
* En el compostaje ocurren emisiones (lixiviado, olores, querir tratamientos ms complejos para remover conta- perjudiciales. Estas bacterias probiticas tambin produ- Produccin de aminocidos especficos
aerosoles con microorganismos y polvo) y cuando se minantes. El tamizado separa partculas segn su tama- cen bacteriocinas, con efecto antibitico.
realiza en instalaciones centralizadas de gran escala, o. Las mquinas separan papel, plsticos y otros consti- Las protenas sintetizadas por los microorganismos son
el proceso consume energa tuyentes no deseados de la materia orgnica. deficientes en ciertos aminocidos requeridos por |os
Produccin de levaduras a partir de deriva- mamferos. Las protenas vegetales carecen tambin de
* Algunos herbicidas, no son destruidos por el compostaje Biodegradacin requiere aireacin en pilas o en disposi- dos del petrleo estas sustancias: la de trigo es baja en lisina, la de arroz,
y pueden daar los cultivos. Estos herbicidas son usa- tivos adecuados con aireacin forzada. Durante las pri- en lisina y treonina. La suplementacin con estos ami-
dos sobre malezas y pueden pasar a travs del tracto meras semanas, la temperatura de la pila aumenta drsti- Por su rpido crecimiento, alto contenido proteico y ca- nocidos es prctica corriente y la produccin microbiana
digestivo de los animales, depositndose en las camas camente debido a la energa generada por los microorga- pacidad para emplear sustratos carbonados de bajo cos- de aminocidos especficos ha sido muy estudiada. Mu-
de paja y estircol, que pueden ser luego compostados nismos. to, los microorganismos constituyen una importante fuen- chas cepas microbianas o sus mutantes son defectivas
en los mecanismos de regulacin de los metabolismos ple vista si son externos (hongos de sombrero) o subte- compuestos con fsforo tratamiento anaerobio donde ocurren respiraciones anae-
especficos de biosntesis y por lo tanto, excretan gran- rrneos, como los hipogeos, globulosos, como las trufas. -3 -3 robias que aseguran la prdida de estos elementos a la
en aerobiosis Pi + poli-PO 4 poli-PO4 (n+1)
des cantidades de algunos aminocidos al medio. Este Estos hongos son cosechados, producindose sucesivos atmsfera.
ejemplo constituye una importante aplicacin de un pro- ciclos sobre sustratos lignocelulsicos (rastrojos, made- en anaerobiosis poli-PO4-3 (n+1) poli-PO4-3 + Pi
ceso microbiano. ras) complementados con nutrientes. No se emplean me-
dios ricos para evitar el desarrollo de hongos contaminan- metales pesados Restos slidos
tes saprofitas.
Uso de bacterias del cido actico en anaerobiosis SO4= + 8H+ S
=
+ Me++ SMe que precipita Compostaje
Hongos hipgeos globulosos como las trufas, son muy Compostaje es el trmino que se usa para designar la
Es conocida la acidificacin que sufren bebidas alcohli- codiciadas por su sabor y aroma particular, pero su culti- degradacin aerbica y termfila de materiales orgni-
cas expuestas al aire. Se oxida el etanol a cido actico, vo requiere suelos alcalinos y estn muy asociados a las Biodegradacin aerobia de residuos cos de diferente origen, en estado slido, realizado por
por bacterias estrictamente aerobias. De aqu deriva la encinas, en Espaa. orgnicos comunidades microbianas quimioheterotrficas existentes
industria del vinagre, que permanece bastante emprica, en los propios residuos, bajo condiciones controladas del
la conversin lleva varias semanas y la limitante del pro- Muchos de estos hongos son adems ectomicorrcicos, Restos con alto contenido de agua que se obtiene un producto estable, el compost, que pue-
ceso es la lenta difusin del aire en el lquido (gruesa pe- de modo que el productor forestal los recoge en la vecin- Los residuos pueden contener alto nivel de agua, como de ser utilizado como fertilizante. Debera traducirse el
lcula superficial de bacterias), se airea y regula la tempe- dad de los rboles, como pino, eucalipto, roble. por ejemplo los efluentes de la industria lctea, aguas trmino compost por compuesto, pero lamentablemente
ratura pero no es microbiolgicamente controlado. Actual- servidas, etc. Su tratamiento se realiza en forma conti- se contina con la denominacin inglesa la que es usada
mente se produce vinagre en grandes fermentadores con El cuadro 10 resume la composicin qumica de dos hon- nua, en dispositivos tipo piletas, que dependen de la tambin en otros idiomas.
circulacin de lquido y aireacin. gos comestibles. Se aprecia que no son ricos en prote- difusin natural del aire que se mezcla con las aguas a
nas, pero por su buen sabor, minerales, bajo tenor graso, tratar por corrientes trmicas o producidas por el vien- Ventajas del compostaje
Esta oxidacin es un ejemplo de respiracin aerobia in- han sido incorporados al rgimen alimenticio en los lti- to. En algunos casos se utilizan aireadores mecni- Si los residuos orgnicos son enterrados pueden impac-
completa, realizada por representantes de los gneros mos tiempos. cos, que incrementan la difusin del aire atmosfrico tar al ambiente. El agua que percola a travs del residuo
Acetobacter y Gluconobacter, que no presentan las enzi- en el agua y aseguran vigoroso crecimiento de las bac- puede lixiviar sustancias hacia las aguas subterrneas.
mas del ciclo de los cidos tricarboxlicos funcionales, de terias aerobias. Se produce metano como consecuencia de la degrada-
modo que se acumula acetil-coA y cido actico. Cuadro 10- Componentes nutricionales en cin de la materia orgnica en ausencia de aire, gas con
algunos hongos importante efecto invernadero, 30 veces ms perjudicial
CH4 N2
Otras bacterias con defectos enzimticos que no les per- que el dixido de carbono.
miten completar las fermentaciones o respiraciones, son Agaricus sp Pleurotus sp
Biodiscos aireados
muy usadas en industria, en efecto, el cido glucurnico mg (%) mg (%) * El compostaje remueve una gran parte de los sustratos
(uso farmacutico) se produce por oxidacin de la gluco- orgnicos biodegradables de los residuos y reduce el
caloras 24 27
sa por bacterias acticas. Muchos azcares alcoholes son tiempo de biodegradacin en relacin a los procesos
convertidos en los azcares por estas bacterias (sorbosa grasa 0 0 Efluentes en Efluentes en
anaerobiosis anaerobiosis anaerobios, con liberacin de menor cantidad de gases
del sorbitol). sodio 0 0 y menos prdidas por lixiviado.
hidratos de carbono 15,5% 3,2%
fibra 0mg 0mg Reactor Reactor Reactor
metanognico desnitrificante nitrificante * Se disminuye el volumen, peso o tenor de humedad, en
Los hongos comestibles proteinas 2,4% 3,2% relacin al material original, lo que facilita el
vitA 0% menos 2% Figura 1- Esquema de usina de tratamiento de aguas almacenamiento, transporte y empleo del residuo
Varias clases de hongos se emplean como fuentes de ali- vitC 2,4% 2% residuales
mento humano, de los cuales los ms importantes son las Ca 0% menos 2% * El compost puede colaborar con el control de enferme-
setas, grandes cuerpos de fructificacin de hongos fila- Fe 2,4% menos 2% dades de las plantas y reducir las prdidas en las cose-
mentosos. Durante la mayor parte de su ciclo de vida, las Las aguas vertidas por industrias, establecimientos agro- chas en agricultura y horticultura.
setas o championes como se les denomina a los hon- pecuarios se tratan ms aceleradamente en reactores.
gos comestibles crecen en forma de micelio en suelo, Aislamiento, propagacin de hongos comestibles En la figura 1 se esquematiza un modelo donde primero * El agregado de compost a los suelos evita la disminu-
mantillos, vegetales en descomposicin, pero cuando las El aislamiento puede ser: el proceso es anaerobio, se pierde metano y N2. Luego cin de la materia orgnica, contribuyendo a la fijacin
condiciones son favorables, por la humedad, temperatu- directo (esporas, micelio, carpforos el proceso es aerobio y los compuestos reducidos de N del carbono en los mismos. La produccin de compost
ra, desarrollan los cuerpos de fructificacin, visibles a sim- indirecto (empleo de cmaras hmedas y S se transforman en nitratos y sulfatos, que vuelven al y su incorporacin al suelo superficial crea un reservo-
producir alimentos (cultivo de hongos, protenas mi- En aerobiosis ocurren procesos de respiracin: Los medios de cultivo empleados son:
crobianas, lombrices) (lquidos y slidos
C6H12O6 6CO2 + 6 H2O + biomasa microbiana G= -2828 Kj/ mol/glucosa (sintticos, semisintticos, naturales
Cuadro 3- Procesos empleados en la 100% 60% 40%
biodegradacin de residuos El hongo ms cultivado es sin duda el Agaricus bisporus,
Como se aprecia, la alta eficiencia en la asimilacin del C cuyo inculo se propaga en botellas con medio rico en
Biolgicos No biolgicos conduce a la produccin de gran volumen de biomasa sustancias orgnicas, en general con semillas que facili-
Orgnicos Orgnicos microbiana. Los residuos son removidos, pero el trata- tan la adhesin del micelio a superficies y liberan ade- Figura 5- Hongos comestibles: Lentinus edulus, shiitaki
biogs, protenas unice- incineracin, fabricacin miento de efluentes contaminados con materia orgnica ms sustratos orgnicos. (izquierda) y Agaricus bisporus (derecha)
lulares, etanol de ladrillos requiere grandes superficies (lagunas) y queda un gran
Inorgnicos Inorgnicos volumen de barros (biomasa microbiana, residuos lig- La propagacin se realiza en lugares apropiados, tipo s-
Medio estril
lixiviacin bacteriana, nitrifi- reciclaje de minerales nocelulsicos slidos), que requieren nuevos tratamien- tanos o galpones oscuros y con control de humedad y
cacin-desnitrificacin tos, en general, uno anaerobio. temperatura. La cama de siembra consiste, en general, Aislamiento
en materiales como pajas, con suelo, estircol. Pueden
En anaerobiosis ocurren fermentaciones y respiraciones usarse grandes bolsas de plstico, colgadas en forma
El tratamiento de un residuo puede conducir a ms de un anaerobias: vertical. Luego de varias semanas comienzan a verse los
cuerpos fructferos, que se colectan y conservan frescos Esterilizacin
objetivo, por ejemplo, el compostaje de restos del tambo dismi-
nuye la carga contaminante y se logra un slido estabilizado C6H12O6 3 CH4 + 3CO2 + biomasa microbiana hasta su envo al mercado.
Inoculacin medio
empleado como fertilizante. La biodegradacin anaerobia l00% 45% 45% 10% G= -394 Kj/mol glucosa de granos
adems de disminuir la contaminacin ambiental, produce Otro hongo muy empleado es el Lentinus edulus, conoci-
energa (CH4) y un residuo empleado como fertilizante. Los residuos son removidos en forma incompleta, queda do como shiitake (figura 5). Es un hongo degradador de Inoculacin del soporte En
amonio, SH2, cidos grasos, que hacen necesario un tra- celulosa que se cultiva en troncos humedecidos o sobre madera
tamiento aerobio posterior. Son, por el contrario, proce- aserrn. El inculo se deposita en pequeos orificios de la
Procesos biolgicos sos de bajo costo que emplean pequeos reactores y ori- madera y aproximadamente luego de un ao, produce las
ginan pocos barros (residuos de biomasa y materiales lig- fructificaciones, ms sabrosas que las de Agaricus y de
En los residuos orgnicos derivados de vegetales, el com- nocelulsicos no atacados). mayor precio.
plejo lignocelulsico es el ms lentamente degradable en
B. Residuos inorgnicos En bandejas
procesos aerobios o anaerobios. Otro hongo de fcil propagacin son las numerosas va-
compuestos nitrogenados riantes de Pleurotus, tpico hongo de sombrero de color
+ _ _ pardo, gris, amarillo y rosado.
en aerobiosis NH4 + O2 NO2 NO3
Fermentaciones CO2, cidos,
alcoholes, H , H O La figura 6 esquematiza el cultivo de hongos comestibles. En el suelo
2 2 _ _
biomasa microbiana en anaerobiosis NO3 + e + H+ N2+ N2O Los cultivos se adquieren en forma de micelio, el que se Cultivos en bolsas
Complejo lignocelulsico energa conserva en frascos con granos y medio de cultivo. El
El ciclo de nitrificacin y desnitrificacin asegura la elimina- micelio se propaga intensamente alrededor de los granos Figura 6- Esquema en la produccin de hongos comestibles
cin del N de los ecosistemas hacia la atmsfera, en for- aprovechando liberacin de sustancias orgnicas.
Respiraciones CO2, H2O, CH4, biomasa,
ma de gases.
microbiana, material
bioestabilizado, energa El cultivo puede realizarse en distintos dispositivos, como
compuestos con azufre estanteras con cama de materiales ligno-celulsicos (pa- Otros microorganismos con inters industrial
jas, aserrn, madera), o en bolsas de plstico colgadas a
en aerobiosis S, S= SO4= la sombra, a las cuales se les efectan orificios a los efec- Bacilos Gram positivos
Comparacin de procesos de biodegradacin ae- Numerosas especies de bacilos Gram positivos son em-
robia y anaerobia de residuos _ + tos de que salgan al exterior los carpforos y se puedan
en anaerobiosis SO4= + e + H H2S pleados por el hombre. Los aerobios o anaerobios facul-
cosechar.
tativos del gnero Bacillus son importantes productores
A. Residuos orgnicos + Me SMe
de enzimas (hidrolasas, lipasas) muy empleadas en la in-
residuos de cosechas, como cscara y pajas de cerea- (metales) El ambiente se mantiene a una humedad adecuada, sin
(SO4= reduccin) (precipitado, por ejemplo como S Fe, negro) luz directa. dustria en productos para quitar manchas en la ropa, para
les, aserrn, de alto contenido en lignocelulosa
destapar caeras, etc. Otros producen antibiticos y al- El cuadro 11 esquematiza otra importante funcin de es- Los tratamientos previos a que somete estos productos 1/3 de la cantidad aplicada), el resto del N aportado por el
gunos son reconocidos en el control biolgico de enfer- pecies de Bacillus, que es la lucha biolgica, en este (compostaje, biodegradacin anaerobia, etc.) bajan con- abono puede ser lavado y ocasionar contaminaciones. Si
medades vegetales y como bioinsecticidas. caso contra larvas de insectos, sensibles a una podero- siderablemente estos valores ya que la degradacin de la se procediera racionalmente se necesitara un rea de suelo
sa toxina que se sintetiza junto a la espora bacteriana. fraccin ms fcilmente atacada estabiliza a estos resi- tres veces superior para dispersar este abono.
Clostridium, con numerosos representantes anaerobios Se ha logrado clonar este pptido y se ha incluido en duos.
que incluyen especies benficas, fijadoras de N2, por ejem- vegetales, que se convierten en resistentes a insectos Este es un ejemplo de las discordias entre la proteccin
plo y otros patgenos como C. tetanii, C. botulinicum, etc. (arroz, maz, etc. Bt, que presenta incluido genes con Sin embargo, a pesar de estas consideraciones, en mu- del ambiente y la prctica de disponer de suelos para las
(cuadro 10 y figura 7) efecto insecticida). chos establecimientos rurales se aplican los abonos or- grandes cantidades de residuos generados por la activi-
gnicos y residuos de agroindustrias directamente en el dad del hombre.
suelo. Se recomienda tener en cuenta:
Cuadro 10- Caractersticas de los gneros Cuadro11- Insecticidas microbianos Tratamiento de los residuos
Bacillus y Clostridium incrementar de la calidad de los abonos orgnicos para Complejos sistemas microbiolgicos que transforman es-
Bacillus popillae y Bacillus thuringiensis hacerlos ms competitivos en relacin a los fertilizantes tos residuos resultantes de la actividad humana y que pue-
Aerobios o facultativos Anaerobios qumicos, por un adecuado control de calidad, disminu- den llegar a provocar graves problemas de contamina-
Ej. Bacillus Ej. Clostridium Esporulados, flagelos pertricos cin en la concentracin de sales y elementos traza en cin, se desarrollaron a lo largo de miles de aos, sobre-
Endosporas resistentes Endosporas, resistentes a tempe- las raciones, mejorar la presentacin fsica de los mis- todo en el suelo. Como en general, la tasa de degrada-
Producen toxinas y un cuerpo paraesporal: protena txica
ratura, desecacin, radiaciones mos. cin de residuos orgnicos es extremadamente inferior a
que en el intestino de los insectos produce parlisis de
Son anaerobios facultativos Comn en suelos las larvas
su tasa de generacin, y adems, muchos de los resi-
B. anthracis patgeno a humanos Producen poderosas toxinas efectuar recomendaciones adecuadas a los producto- duos no son productos naturales, el hombre se ve obliga-
y animales Se utilizan como esporas muertas por calor en cultivos ve- res para su aplicacin correcta do a su tratamiento en el campo, donde se producen, o en
B. subtilis y B. polymyxa productores Causantes de ttanos, botulismo, getales plantas con reactores, especialmente diseados.
de antibiticos gangrena gaseosa El cuadro 2 (publicado por Stevenson y Cole, 1999) mues-
B. thuringiensis control biolgico Se usan para producir butanol por
tra el contenido promedio de nutrientes en estircol de 23 Los tratamientos a que son sometidos los residuos se
de insectos fermentacin establecimientos de cra de ganado (la humedad vari pueden agrupar en:
Biodegradadores, produccin Algunos fijan N2 Actinomicetes entre 21 y 54%).
de enzimas Las bacterias verdaderas se diferencian marcadamente fsicos: transformaciones termoqumicas, pirlisis (al-
Muchas especies son productoras de los hongos filamentosos. Los actinomicetes se encuen- tas temperaturas)
de enzimas de inters: tran entre ambos grupos, aunque pertenecen formalmen- Cuadro 2- Nutrientes en estircol de ganado
hidrolasas, lipasas te a las bacterias, al orden Actinomycetales y son orga- vacuno qumicos: hidrlisis cida o alcalina
nismos Gram positivos, de estructura vegetativa de tipo
miceliar desarrollo confinado slo a bacterias Gram posi- Nutriente Rango % kg/ton biolgicos y enzimticos: fermentaciones, enriqueci-
p tivas. Algunos de estos organismos, los Euactinomice- miento proteco para forrajes, hidrlisis enzimtica
N 1,16-1,96 1,34 13,4
tes, se desarrollan slo en estado miceliar, reproducin- P 0,32-0,85 0,53 5,3
dose por formacin de esporas unicelulares diferencia- El cuadro 3 resume estos procesos.
K 0,75-2,35 1,50 15
das en el extremo de la hifa.
Na 0,29-1,43 0,74 7,4 Los objetivos en el tratamiento de los residuos son varios:
En un segundo grupo, el de los Proactinomicetes, el Ca 0,81-1,75 1,30 13
e
desarrollo miceliar es transitorio, no se producen esporas Mg 0,32-0,66 0,50 5,0 disminuir la carga contaminante (ejemplo: tratamien-
y la reproduccin ocurre primariamente por fragmentacim Fe 0,09-0,55 0,21 2,1 tos de grandes volmenes de estircol en la industria le-
miceliar en clulas cortas de tipo bacilar. Zn 0,005-0,012 0,009 0,09 chera)
Figura 7- Izquierda: Clostridium spp. Ntese dos
mecanismos de resistencia: endosporas terminales y cpsula.
Los euactinomicetes: los ambientes naturales contie- aprovechar los restos como fuente de energa (pro-
Coloracin negativa, cultivo lquido en gota de tinta china. De estos datos se puede calcular que la aplicacin anual
Derecha: Bacillus thuringensis con espora (e) y vecina a nen una gran poblacin, que se agrupan en pocas fami- duccin de etanol, H2, metano)
de 40 toneladas de abono por hectrea agrega 540kgN/ha
ella, la protena txica (p). lias (figura 8).
y considerando que un cultivo de maz con rendimiento de obtener molculas de inters (produccin de prote-
4.600kg/ha remover unos 180kgN/ha (aproximadamente nas celulares)
Muchos residuos orgnicos (estircol, residuos de coen residuos pretratados. Su poblacin en aguas trata- Termoactinomyces Micropolyspora les que producen. Este grupo ha adquirido importancia eco-
sechas, abonos animales, aguas servidas), se emplean das, en compostajes, debe ser menor a 1000 organis- nmica, por el gran nmero de antibiticos formados como
Dactylosporangium
directamente como abonos en el suelo, pero se sea- mos/g o por mL para que el material se considere apto metabolitos secundarios. Las esporas tienen rol reproducti-
lan numerosas limitaciones a esta prctica que se re- para su aplicacin. vo y son diseminadas por el aire o el agua. Thermoacti-
sumen: Streptosporangium nomyces produce esporas extremadamente resistentes al
* Los olores y otros inconvenientes crean conflictos entre calor, similares a las endosporas de las bacterias tpicas y
* Son en general fertilizantes de baja concentracin en N, los productores y la poblacin que se resiste muchas Microeliobosporia Nocardia la temperatura mxima de crecimiento es de 65-68C. Son
P, K, etc. , de composicin variable, con alto contenido veces a reconocer que los riesgos pueden minimizarse activos en compostajes (captulo 21), o abonos.
de agua. Los gastos de transporte son en general, su- en sistemas de manejo apropiados.
periores a su valor como fertilizante. La aplicacin debe Los representantes del gnero Frankia se asocian simbiti-
separase de la siembra a los efectos de permitir la eli- * Finalmente, debe requerirse un monitoreo de la calidad camente a especies de no-leguminosas (captulos 11 y 15).
minacin del exceso de agua del abono. de los cultivos y del agua por parte de agencias de Figura 8 - Principales grupos de actinomicetes
proteccin ambiental. Este requerimiento agrega un Actividades y ecologa
* La concentracin de nutrientes, sales solubles, micronu- costo adicional a la produccin y no est disponible en la densidad de este grupo en el suelo es por lo general
trientes y agua vara mucho de un lugar a otro y rara- muchos pases. La polucin potencial de un resto org- 1. Streptomycetaceae: las hifas usualmente fragmentan, de 3 a 15 veces menor que la de las bacterias, domi-
mente son analizados antes de su empleo. Resulta dif- nico en los causes de agua se expresa usualmente en micelio areo extensivo y cadenas de esporas con 5-50 nando sobre todo los gneros Streptomyces y Nocardia
cil recomendar una dosis correcta. trminos de: o ms conidios por cadena. Gneros tpicos: Streptomy- (Dommergues, Mangenot, 1970)
ces, Microellobosporia, Sporichthya.
la mayora de las especies son mesfilas (ptimo 25-
* Las sales solubles pueden causar problemas de lavado DBO= demanda biolgica de oxgeno, la cantidad de O2 2. Nocardiaceae: hifas tpicamente fragmentadas para 30C, aunque hay especies termfilas
de nitratos hacia aguas subsuperficiales, sobretodo en consumido por oxidacin microbiana en 5 das de incuba- dar pequeas esporas.
cultivos irrigados, cin. Esta medida informa sobre la concentracin de com- abundan en suelos de pH 6,8-8,0 y slo excepcional-
puestos orgnicos rpidamente degradables y formas mente en suelos de pH inferior a 5,0. Esta sensibilidad
_ 3. Micromonosporaceae: hifas que no se fragmentan,
* Muchos residuos pueden contener metales pesados reducidas de N y S (NH3 y HS ) a pH cidos es empleada en el control de organismos
los conidios se presentan solos, en pares, o en cortas
y/o compuestos orgnicos sintticos que pueden acu- fitopatgenos
cadenas. Gneros: Micromonospora, Microbispora, Mi-
mularse en los suelos a niveles txicos para los ve- DQO= demanda qumica de oxgeno, es una medida de cropolyspora, Thermomonospora, Thermoactinomyces, si la humedad es abundante y la temperatura no muy
getales. Muchos vegetales no sufren daos visibles las sustancias orgnicas e inorgnicas oxidables totales Actinobifida. elevada, se los encuentra en forma vegetativa
pero acumulan estas sustancias txicas en sus teji- que se estima por oxidacin qumica con solucin de di-
dos y se convierten en peligro para el consumo hu- cromato de potasio y cido sulfrico. Es menos empleada 4. Actinoplanaceae: esporas en esporangios, dimetro en condiciones extremas de desecacin y/o altas tem-
mano. Las aplicaciones repetidas de abonos orgni- que la DBO. de la hifa 0,2- 2 mu. Gneros: Streptosporangium, Acti- peraturas, dominan en forma de conidios
cos y aguas servidas al suelo pueden incrementar noplanes, Planibispora, Dactylosporangium.
los niveles de As, Cd, Cr, Hg, Mo, Pb, Ni, Se y Zn. Si un residuo orgnico con alta DBO se introduce en el dominan en suelos alcalinos
Muchos estn ligados a la materia orgnica y son agua en gran cantidad, el contenido de O2 de la misma se 5. Dermatophilaceae: los fragmentos de hifas se dividen
para dar gran nmero de estructuras redondas, mvi- disminuyen con la profundidad, aunque el porcentaje
liberados a formas asimilables a medida que el res- reducir a niveles que impedirn la vida de los peces (re-
les. Gnero: Geodermatophilus. de actinomicetes en relacin a la microflora total au-
tos es degradado en perodos de varios aos. Exis- quieren unos 5mg/L de O2 disuelto para sobrevivir) y otros
menta con la profundidad y constituyen gran proporcin
ten diferencias entre pases sobre los niveles acep- organismos acuticos. 6. Frankiaceae: habitan ndulos radicales en ciertas no- de la poblacin en horizontes inferiores
tables de metales txicos en los productos aplicados leguminosas. Se han logrado reproducir fuera del hus-
al suelo. Aguas con valores de DBO de 1mg/L (1mg/L de O2 se ped. Gnero: Frankia disminuyen con la inundacin (la mayora son aerobios)
consumen en 5 das de incubacin) se consideran de
* Residuos de la produccin avcola y animales no rumian- alta calidad, valores de DBO de 5 indican pureza dudo- 7. Actinomycetaceae: no forman verdadero micelio, co- por su capacidad para sobrevivir en condiciones desfa-
tes contienen bacterias, virus y otros patgenos peli- sa. Se considera inadecuada la entrada de corrientes mnmente anaerobias facultativas. Gnero: Actinomyces. vorables, constituyen uno de los grupos ms distribui-
grosos para la salud humana cuando entran en la cade- de agua a arroyos o ros con una DBO de ms de 20mg/ dos en los suelos
De los numerosos gneros de euactinomicetes, el ms am-
na alimenticia. La mayora de ellos muere cuando los L. La DBO de los residuos animales y la de los efluentes
plio es Streptomyces, que pueden representar ms del 70- Funciones
restos o aguas son pretratadas en lagunas u oxidadas de la industria de procesamiento de alimentos es muy
90% de las colonias desarrolladas en medio slido. Son Degradacin de compuestos resistentes: responden al
biolgicamente. E. coli, habitante normal del intestino alta (ms de 10.000 en tambos) y ejercen efectos muy
muy abundantes en el suelo, al cual le confieren el olor ca- agregado de materiales carbonados varias semanas ms
humano es una bacteria indicadora de la calidad de los perjudiciales en la comunidad acutica y en la calidad
racterstico a tierra hmeda, atribuible a sustancias volti- tarde, pues son dbiles competidores frente a bacterias y
residuos y aguas, ya que no se encuentra en general del agua.
hongos, cuando abundan los compuestos simples. Su par- Bacilos Gram negativos
ticipacin aumenta cuando quedan materiales resistentes Numerosos representantes de estos organismos son be-
nficos para el hombre. Otras, como integrantes de la flo-
Formacin de humus: muchas especies producen en ra intestinal (enterobacterias), pueden, en ciertas condi-
medio de cultivo molculas complejas, a las que se pre- ciones transformarse en patgenas.
sume muy importantes en la humificacin
Biotransformacin de residuos
Transformaciones a altas temperaturas: sobre todo
en la podredumbre y calentamiento de abonos verdes,
heno, compost, abonos animales. Los termfilos son el
Agrobacterium
El gnero comprende organismos que producen tumores
en vegetales. A. tumefaciens posee un plsmido Ti res-
21 orgnicos
grupo dominante y las superficies de los compost to- ponsable de la virulencia. Se han construido vectores de
man color blanco o gris tpico de este grupo transferencia generalizado para plantas (figura 10) (Pres-
cott et al., 1999). A. rhizogenes ha sido reclasificada ac-
Enfermedades en vegetales: como la podredumbre tualmente con los rhizobios, por la similitud gentica ob- La lenta descomposicin de materiales biolgicos tiene Stevenson y Cole (1999) sealan que en los estados Uni-
negra de la papa y la viruela de la batata, por Strep- servada en los anlisis de fragmentos de ARN y ADN. lugar en la naturaleza desde los comienzos de la vida. Sin dos, los animales de granja acumulan 10 veces ms resi-
tomyces scabies y Streptomyces ipomoeae, respecti- la presencia de estos procesos microbiolgicos naturales duos orgnicos que los habitantes y que una vaca o 7
vamente (figura 9) T-ADN se hubiera hecho imposible la continuacin de la misma, aves generan 16 veces ms residuos en relacin a los de
dada la creciente acumulacin de materiales con carcter un hombre.
Infecciones en el hombre y animales: por ejemplo, txico y contaminante.
por Nocardia asteroides y Nocardia otitidis-caviarum Secuencia del
Vector de
plsmido Ti
clonacin Actualmente la crisis en la disponibilidad de alimentos, la Cuadro 1- Constituyentes de los residuos
Antagonismos microbianos: sntesis de antibiticos,
enzimas lticas (quitinasas, celulasas, hidrolasas) escasez de combustibles y la agudizacin de la polucin
ambiental han conducido a que numerosos residuos de la Grasas, aceites, resinas, terpenos
Produccin de sustancias probiticas, como vitami- agricultura, agroindustrias (lecheras, queseras), activi- Carbohidratos: azcares, almidn, hemicelulosa, celulo-
nas (B1, B2, B6, B12, biotina, cido flico) Insercin del gen en la dad forestal, industrias, animales o el hombre, deban ser sa, poliurnidos
regin T-ADN tratados para reciclarlos y obtener alimentos, forraje, ener- cidos orgnicos
Fijacin biolgica de N : el gnero Frankia es emplea-
2 Gen que codifica ga, fertilizantes, sustancias qumicas. Aldehdos, cetonas, alcoholes
do en algunos pases como inoculante de plntulas ac- la luciferasa y
Lignina
tinorrcicas en viveros (captulo 15 y Anexo prctico). promotor de la
Estos aspectos ambientales del ciclo terrestre del carbo-
lucirnaga Compuestos cclicos: fenoles, quinonas, taninos
Estas bacterias, tienen importantes aplicaciones biotecnol- no han preocupado mucho a gobiernos e investigadores
Alcaloides y bases orgnicas
gicas, ya que son grandes productores de sustancias biti- desde la dcada del 60 por la necesidad de resolver pro-
Plsmido Protenas, aminocidos, aminas, otros compuestos nitro-
cas (vitaminas) y antibiticas. La figura 9 muestra las espo- blemas creados por actividades incorrectas en el pasado.
recombinante Los estudios se han enfocado sobretodo en los proble- genados
ras y los filamentos de especies del gnero Streptomyces:
mas derivados de la acumulacin de desechos orgnicos Enzimas, hormonas, vitaminas, pigmentos, sustancias
e inorgnicos en los suelos y causes de agua, la acumu- antibiticas

lacin de productos qumicos sintticos, la acumulacin Constituyentes minerales: fosfatos, sulfatos, carbonatos,
de materia orgnica y su contribucin al CO2 atmosfrico clorados, nitratos, sales de K, Na, Ca, Mg y microelemen-
Transformacin de y la produccin de sustancias txicas para el hombre. tos
Agrobacterium e
infeccin de la planta Muchos residuos orgnicos constituyen fuentes potencia-
del tabaco
El cuadro 1 muestra la composicin de los residuos org-
nicos ms comunes producidos cada ao a partir de acti- les de nutrientes para los vegetales (N, P, K), pueden con-
vidades domsticas, residuos urbanos slidos y lquidos, tribuir positivamente a la calidad de los suelos, mejorar su
produccin animal, industrias de alimentos, aserraderos estructura, de modo que su empleo como abonos orgni-
Genoma de T-ADN y gen de la Genoma de la y gran variedad de industrias orgnicas. Estos desechos cos resulta una prctica til para la sociedad por su bajo
la planta luciferasa planta no constituyen un problema ambiental solamente en las costo, estimulacin de la fertilidad y produccin agrcola y
Figura 9- Streptomyces, ntese el micelio fragmentado en ciudades, en efecto, la agricultura intensiva es fuente im- mejora de la calidad de las aguas, evitando su vertido en
esporas (izquierda) y tubrculo de papa infectado (derecha) Figura 10- Transferencia de genes empleando Agrobacterium portante de desechos orgnicos. las mismas.
Rhizobios nas. La biolixiviacin es realizada por poblaciones nativas

Esta bacteria, responsable de la introduccin de nitr- de Thiobacillus thiooxidans que pueden recuperar hasta
geno a ecosistemas agrcolas y acuticos, es analizada un 70% del cobre de minerales con bajo nivel en el metal.
en los captulos 11 y 15. En biotecnologa son emplea- Se produce la oxidacin biolgica del cobre para producir
dos por la gran produccin de exopolisacridos (EPS) y sulfato de cobre soluble, que puede recuperarse al reac-
de fenoxialcanos (cido poli OH butrico) empleados cionar esta solucin de lixiviacin, con hasta 3,0g/L de
como plsticos biodegradables (figura 11). Son bacilos cobre soluble, con hierro. Se forma sulfato de hierro y el
mviles, no forman esporas y fijan N2 en simbiosis con cobre se reduce a la forma elemental, que precipita y se
vegetales. Una de las principales industrias vinculadas recoge:
con la agronoma es la de los inoculantes para legumi-
nosas que incluyen cultivos seleccionados de rhizobio CuSO4 + Feo Cu
o
+ SO4Fe
(Anexo prctico).
Puede haber necesidad de agregar otros nutrientes como
P, N, micronutrientes para complementar la nutricin mi-
crobiana.
En la misma forma se recupera el mercurio.
Otra de las formas de recuperar minerales consiste en

emplear clulas microbianas cultivadas previamente,
como es e caso de ciertas algas, para concentrar meta-
les preciosos, como la plata o el oro, presentes en baja
concentracin en minerales o contenidos en el agua. La
Figura 11- Clula de rhizobio mostrando los grnulos de figura 12 (Prescott et al., 1999) es una microfotografa
cido poli OH butrico (claros a los electrones) electrnica de la recuperacin de oro a partir de un cho-
rro de lavado por clulas de Chlorella vulgaris. Los de-
psitos de oro (manchas negras) estn asociados a las
Pseudomonas clulas del alga.
Gnero de bacilos Gram negativos con numerosas espe-
cies, muchas de ellas con importante aplicacin biotecno-
lgica. Inoculantes de cepas seleccionadas son introduci-
das al suelo como inoculantes de semillas ya que actan
como agentes de biocontrol (producen antibiticos, side-
rforos, compiten por nutrientes) contra otras bacterias y
hongos y en prcticas de bioremediacin, por su capaci-
dad biodegradante. Otras producen desnitrificacin (P. fluo-
rescens, P. aeruginosa), enfermedades en plantas (P.
syringae) y en animales.
Uso de microorganismos para remocin de

metales pesados de ecosistemas
Otra aplicacin de los microorganismos es la recupera- Figura 12- Recuperacin de metales (oro) por
cin de metales a partir de minerales y desechos de mi- clulas de un alga
Estos microorganismos promueven la bioprecipitacin Madigan, Martinko, Parker, Brock, Biologa de los mi-
ej: biomineralizacin y/o cristalizacin por precipitacin croorganismos, 2000. Prentice Hall International
de metales en la superficie celular. Este fenmeno se Prescott, Harley y Klein, Microbiologa, 1999, McGraw-
puede deber a la sntesis y secrecin de exopolmeros Hill.Interamericana
(EPS, protenas). Contienen plsmidos de resistencia Hongos comestibles: www.attra.ncat.org/attra-pub.PDF/
a Cd, Co, Cr, Cu, Pb, Hg, Ni y Zn. Bacterias como Rals- mushroom.pdf. 24pag.
tonia eutropha y P. mendocina, son resistentes a los
metales pesados por la presencia de un sistema de
eflujo eficiente. Preguntas de repaso
1) Seale las condiciones ms econmicas para pro-

Uso de los microorganismos y sus produc- ducir protenas de origen microbiano
tos en bioensayos
dosificaciones(antibiticos, vitaminas, aminocidos)
2) Cual sera el uso a darle a estos productos?
3) Seale dos productos importantes empleados en
Los microorganismos y
biosensores (gases, demanda biolgica de O , vitaminas)
2
la dieta diaria del hombre producidos por va biol-
gica. Compare el proceso con alternativas qumi-
la proteccin ambiental
cas de sntesis
Dosificaciones: cuando las concentraciones de ciertos
productos qumicos como los antibiticos son muy bajas 4) Cmo procedera a la bsqueda de nuevos antibi-
como para detectarlos por mtodos qumicos se emplean ticos?
21 Biotransformacin de residuos orgnicos ..................................... 373
los microorganismos. Por ejemplo se determina la dosis 5) Por qu estas sustancias van perdiendo eficiencia?
letal mnima de un antimicrobiano, como un antibitico, 6) Indique dos microorganismos de importante uso en
capaz de inhibir el desarrollo de un microorganismo elegi- 22 Degradacin de xenobiticos ....................................................... 393
la agricultura
do como test, como el Staphylococcus aureus, en ensa-
7) Por qu Agrobacterium es un gnero con muchas
yos en medio lquido. La sustancia qumica se diluye se- 23 Biorremediacin ............................................................................ 407
riadamente y a cada dilucin se le agrega el mismo incu- especies de inters en ingeniera gentica?
lo de la bacteria de referencia. Se considera dosis letal 8) Cmo propagara a gran escala hongos para ser
mnima (DLM) a la mayor dilucin que provoca muerte del empleados como: i) comestibles y ii) micorrcicos.
microorganismo (captulo 4). Puede alguna especie coincidir en ambas funciones?
Seale algunas
Biosensores, en este nuevo campo de la bioelectrnica, 9) Qu condiciones son necesarias para la produccin
los microorganismos vivos o sus enzimas se unen con ms eficiente de hongos comestibles?
electrodos y la accin de estos biosensores convierte las
reacciones biolgicas en corrientes elctricas. Se emplean 10) Por qu los microorganismos son muy usados en
mucho en medicina, en anlisis en la agricultura, en la la dosificacin de sustancias presentes en la natura-
deteccin de contaminacin en aguas, en el control de leza, en el torrente sanguneo o en soluciones? Cual
gases y lquidos industriales, en la medida de gases txi- es el fundamento del mtodo?
cos en las minas. Con su desarrollo se alcanzar a detec- 11) Ejemplos de especies de Clostridium muy patge-
tar patgenos, toxinas, protenas y ADN. nos.
12) Resuma algunas de las funciones por las cua-
les los microorganismos son empleados a nivel
Bibliografa industrial
Dommergues, Y., Mangenot, F. Ecologie microbienne du 13) Seale algunos de los alimentos producidos por fer-
sol. 1970, Masson & Cie., Pars mentaciones y los sustratos originales.
Estos microorganismos promueven la bioprecipitacin Madigan, Martinko, Parker, Brock, Biologa de los mi-
ej: biomineralizacin y/o cristalizacin por precipitacin croorganismos, 2000. Prentice Hall International
de metales en la superficie celular. Este fenmeno se Prescott, Harley y Klein, Microbiologa, 1999, McGraw-
puede deber a la sntesis y secrecin de exopolmeros Hill.Interamericana
(EPS, protenas). Contienen plsmidos de resistencia Hongos comestibles: www.attra.ncat.org/attra-pub.PDF/
a Cd, Co, Cr, Cu, Pb, Hg, Ni y Zn. Bacterias como Rals- mushroom.pdf. 24pag.
tonia eutropha y P. mendocina, son resistentes a los
metales pesados por la presencia de un sistema de
eflujo eficiente. Preguntas de repaso
1) Seale las condiciones ms econmicas para pro-

Uso de los microorganismos y sus produc- ducir protenas de origen microbiano
tos en bioensayos
dosificaciones(antibiticos, vitaminas, aminocidos)
2) Cual sera el uso a darle a estos productos?
3) Seale dos productos importantes empleados en
Los microorganismos y
biosensores (gases, demanda biolgica de O , vitaminas)
2
la dieta diaria del hombre producidos por va biol-
gica. Compare el proceso con alternativas qumi-
la proteccin ambiental
cas de sntesis
Dosificaciones: cuando las concentraciones de ciertos
productos qumicos como los antibiticos son muy bajas 4) Cmo procedera a la bsqueda de nuevos antibi-
como para detectarlos por mtodos qumicos se emplean ticos?
21 Biotransformacin de residuos orgnicos ..................................... 373
los microorganismos. Por ejemplo se determina la dosis 5) Por qu estas sustancias van perdiendo eficiencia?
letal mnima de un antimicrobiano, como un antibitico, 6) Indique dos microorganismos de importante uso en
capaz de inhibir el desarrollo de un microorganismo elegi- 22 Degradacin de xenobiticos ....................................................... 393
la agricultura
do como test, como el Staphylococcus aureus, en ensa-
7) Por qu Agrobacterium es un gnero con muchas
yos en medio lquido. La sustancia qumica se diluye se- 23 Biorremediacin ............................................................................ 407
riadamente y a cada dilucin se le agrega el mismo incu- especies de inters en ingeniera gentica?
lo de la bacteria de referencia. Se considera dosis letal 8) Cmo propagara a gran escala hongos para ser
mnima (DLM) a la mayor dilucin que provoca muerte del empleados como: i) comestibles y ii) micorrcicos.
microorganismo (captulo 4). Puede alguna especie coincidir en ambas funciones?
Seale algunas
Biosensores, en este nuevo campo de la bioelectrnica, 9) Qu condiciones son necesarias para la produccin
los microorganismos vivos o sus enzimas se unen con ms eficiente de hongos comestibles?
electrodos y la accin de estos biosensores convierte las
reacciones biolgicas en corrientes elctricas. Se emplean 10) Por qu los microorganismos son muy usados en
mucho en medicina, en anlisis en la agricultura, en la la dosificacin de sustancias presentes en la natura-
deteccin de contaminacin en aguas, en el control de leza, en el torrente sanguneo o en soluciones? Cual
gases y lquidos industriales, en la medida de gases txi- es el fundamento del mtodo?
cos en las minas. Con su desarrollo se alcanzar a detec- 11) Ejemplos de especies de Clostridium muy patge-
tar patgenos, toxinas, protenas y ADN. nos.
12) Resuma algunas de las funciones por las cua-
les los microorganismos son empleados a nivel
Bibliografa industrial
Dommergues, Y., Mangenot, F. Ecologie microbienne du 13) Seale algunos de los alimentos producidos por fer-
sol. 1970, Masson & Cie., Pars mentaciones y los sustratos originales.
Rhizobios nas. La biolixiviacin es realizada por poblaciones nativas

Esta bacteria, responsable de la introduccin de nitr- de Thiobacillus thiooxidans que pueden recuperar hasta
geno a ecosistemas agrcolas y acuticos, es analizada un 70% del cobre de minerales con bajo nivel en el metal.
en los captulos 11 y 15. En biotecnologa son emplea- Se produce la oxidacin biolgica del cobre para producir
dos por la gran produccin de exopolisacridos (EPS) y sulfato de cobre soluble, que puede recuperarse al reac-
de fenoxialcanos (cido poli OH butrico) empleados cionar esta solucin de lixiviacin, con hasta 3,0g/L de
como plsticos biodegradables (figura 11). Son bacilos cobre soluble, con hierro. Se forma sulfato de hierro y el
mviles, no forman esporas y fijan N2 en simbiosis con cobre se reduce a la forma elemental, que precipita y se
vegetales. Una de las principales industrias vinculadas recoge:
con la agronoma es la de los inoculantes para legumi-
nosas que incluyen cultivos seleccionados de rhizobio CuSO4 + Feo Cu
o
+ SO4Fe
(Anexo prctico).
Puede haber necesidad de agregar otros nutrientes como
P, N, micronutrientes para complementar la nutricin mi-
crobiana.
En la misma forma se recupera el mercurio.
Otra de las formas de recuperar minerales consiste en

emplear clulas microbianas cultivadas previamente,
como es e caso de ciertas algas, para concentrar meta-
les preciosos, como la plata o el oro, presentes en baja
concentracin en minerales o contenidos en el agua. La
Figura 11- Clula de rhizobio mostrando los grnulos de figura 12 (Prescott et al., 1999) es una microfotografa
cido poli OH butrico (claros a los electrones) electrnica de la recuperacin de oro a partir de un cho-
rro de lavado por clulas de Chlorella vulgaris. Los de-
psitos de oro (manchas negras) estn asociados a las
Pseudomonas clulas del alga.
Gnero de bacilos Gram negativos con numerosas espe-
cies, muchas de ellas con importante aplicacin biotecno-
lgica. Inoculantes de cepas seleccionadas son introduci-
das al suelo como inoculantes de semillas ya que actan
como agentes de biocontrol (producen antibiticos, side-
rforos, compiten por nutrientes) contra otras bacterias y
hongos y en prcticas de bioremediacin, por su capaci-
dad biodegradante. Otras producen desnitrificacin (P. fluo-
rescens, P. aeruginosa), enfermedades en plantas (P.
syringae) y en animales.
Uso de microorganismos para remocin de

metales pesados de ecosistemas
Otra aplicacin de los microorganismos es la recupera- Figura 12- Recuperacin de metales (oro) por
cin de metales a partir de minerales y desechos de mi- clulas de un alga
hongos, cuando abundan los compuestos simples. Su par- Bacilos Gram negativos
ticipacin aumenta cuando quedan materiales resistentes Numerosos representantes de estos organismos son be-
nficos para el hombre. Otras, como integrantes de la flo-
Formacin de humus: muchas especies producen en ra intestinal (enterobacterias), pueden, en ciertas condi-
medio de cultivo molculas complejas, a las que se pre- ciones transformarse en patgenas.
sume muy importantes en la humificacin
Biotransformacin de residuos
Transformaciones a altas temperaturas: sobre todo
en la podredumbre y calentamiento de abonos verdes,
heno, compost, abonos animales. Los termfilos son el
Agrobacterium
El gnero comprende organismos que producen tumores
en vegetales. A. tumefaciens posee un plsmido Ti res-
21 orgnicos
grupo dominante y las superficies de los compost to- ponsable de la virulencia. Se han construido vectores de
man color blanco o gris tpico de este grupo transferencia generalizado para plantas (figura 10) (Pres-
cott et al., 1999). A. rhizogenes ha sido reclasificada ac-
Enfermedades en vegetales: como la podredumbre tualmente con los rhizobios, por la similitud gentica ob- La lenta descomposicin de materiales biolgicos tiene Stevenson y Cole (1999) sealan que en los estados Uni-
negra de la papa y la viruela de la batata, por Strep- servada en los anlisis de fragmentos de ARN y ADN. lugar en la naturaleza desde los comienzos de la vida. Sin dos, los animales de granja acumulan 10 veces ms resi-
tomyces scabies y Streptomyces ipomoeae, respecti- la presencia de estos procesos microbiolgicos naturales duos orgnicos que los habitantes y que una vaca o 7
vamente (figura 9) T-ADN se hubiera hecho imposible la continuacin de la misma, aves generan 16 veces ms residuos en relacin a los de
dada la creciente acumulacin de materiales con carcter un hombre.
Infecciones en el hombre y animales: por ejemplo, txico y contaminante.
por Nocardia asteroides y Nocardia otitidis-caviarum Secuencia del
Vector de
plsmido Ti
clonacin Actualmente la crisis en la disponibilidad de alimentos, la Cuadro 1- Constituyentes de los residuos
Antagonismos microbianos: sntesis de antibiticos,
enzimas lticas (quitinasas, celulasas, hidrolasas) escasez de combustibles y la agudizacin de la polucin
ambiental han conducido a que numerosos residuos de la Grasas, aceites, resinas, terpenos
Produccin de sustancias probiticas, como vitami- agricultura, agroindustrias (lecheras, queseras), activi- Carbohidratos: azcares, almidn, hemicelulosa, celulo-
nas (B1, B2, B6, B12, biotina, cido flico) Insercin del gen en la dad forestal, industrias, animales o el hombre, deban ser sa, poliurnidos
regin T-ADN tratados para reciclarlos y obtener alimentos, forraje, ener- cidos orgnicos
Fijacin biolgica de N : el gnero Frankia es emplea-
2 Gen que codifica ga, fertilizantes, sustancias qumicas. Aldehdos, cetonas, alcoholes
do en algunos pases como inoculante de plntulas ac- la luciferasa y
Lignina
tinorrcicas en viveros (captulo 15 y Anexo prctico). promotor de la
Estos aspectos ambientales del ciclo terrestre del carbo-
lucirnaga Compuestos cclicos: fenoles, quinonas, taninos
Estas bacterias, tienen importantes aplicaciones biotecnol- no han preocupado mucho a gobiernos e investigadores
Alcaloides y bases orgnicas
gicas, ya que son grandes productores de sustancias biti- desde la dcada del 60 por la necesidad de resolver pro-
Plsmido Protenas, aminocidos, aminas, otros compuestos nitro-
cas (vitaminas) y antibiticas. La figura 9 muestra las espo- blemas creados por actividades incorrectas en el pasado.
recombinante Los estudios se han enfocado sobretodo en los proble- genados
ras y los filamentos de especies del gnero Streptomyces:
mas derivados de la acumulacin de desechos orgnicos Enzimas, hormonas, vitaminas, pigmentos, sustancias
e inorgnicos en los suelos y causes de agua, la acumu- antibiticas

lacin de productos qumicos sintticos, la acumulacin Constituyentes minerales: fosfatos, sulfatos, carbonatos,
de materia orgnica y su contribucin al CO2 atmosfrico clorados, nitratos, sales de K, Na, Ca, Mg y microelemen-
Transformacin de y la produccin de sustancias txicas para el hombre. tos
Agrobacterium e
infeccin de la planta Muchos residuos orgnicos constituyen fuentes potencia-
del tabaco
El cuadro 1 muestra la composicin de los residuos org-
nicos ms comunes producidos cada ao a partir de acti- les de nutrientes para los vegetales (N, P, K), pueden con-
vidades domsticas, residuos urbanos slidos y lquidos, tribuir positivamente a la calidad de los suelos, mejorar su
produccin animal, industrias de alimentos, aserraderos estructura, de modo que su empleo como abonos orgni-
Genoma de T-ADN y gen de la Genoma de la y gran variedad de industrias orgnicas. Estos desechos cos resulta una prctica til para la sociedad por su bajo
la planta luciferasa planta no constituyen un problema ambiental solamente en las costo, estimulacin de la fertilidad y produccin agrcola y
Figura 9- Streptomyces, ntese el micelio fragmentado en ciudades, en efecto, la agricultura intensiva es fuente im- mejora de la calidad de las aguas, evitando su vertido en
esporas (izquierda) y tubrculo de papa infectado (derecha) Figura 10- Transferencia de genes empleando Agrobacterium portante de desechos orgnicos. las mismas.
Muchos residuos orgnicos (estircol, residuos de coen residuos pretratados. Su poblacin en aguas trata- Termoactinomyces Micropolyspora les que producen. Este grupo ha adquirido importancia eco-
sechas, abonos animales, aguas servidas), se emplean das, en compostajes, debe ser menor a 1000 organis- nmica, por el gran nmero de antibiticos formados como
Dactylosporangium
directamente como abonos en el suelo, pero se sea- mos/g o por mL para que el material se considere apto metabolitos secundarios. Las esporas tienen rol reproducti-
lan numerosas limitaciones a esta prctica que se re- para su aplicacin. vo y son diseminadas por el aire o el agua. Thermoacti-
sumen: Streptosporangium nomyces produce esporas extremadamente resistentes al
* Los olores y otros inconvenientes crean conflictos entre calor, similares a las endosporas de las bacterias tpicas y
* Son en general fertilizantes de baja concentracin en N, los productores y la poblacin que se resiste muchas Microeliobosporia Nocardia la temperatura mxima de crecimiento es de 65-68C. Son
P, K, etc. , de composicin variable, con alto contenido veces a reconocer que los riesgos pueden minimizarse activos en compostajes (captulo 21), o abonos.
de agua. Los gastos de transporte son en general, su- en sistemas de manejo apropiados.
periores a su valor como fertilizante. La aplicacin debe Los representantes del gnero Frankia se asocian simbiti-
separase de la siembra a los efectos de permitir la eli- * Finalmente, debe requerirse un monitoreo de la calidad camente a especies de no-leguminosas (captulos 11 y 15).
minacin del exceso de agua del abono. de los cultivos y del agua por parte de agencias de Figura 8 - Principales grupos de actinomicetes
proteccin ambiental. Este requerimiento agrega un Actividades y ecologa
* La concentracin de nutrientes, sales solubles, micronu- costo adicional a la produccin y no est disponible en la densidad de este grupo en el suelo es por lo general
trientes y agua vara mucho de un lugar a otro y rara- muchos pases. La polucin potencial de un resto org- 1. Streptomycetaceae: las hifas usualmente fragmentan, de 3 a 15 veces menor que la de las bacterias, domi-
mente son analizados antes de su empleo. Resulta dif- nico en los causes de agua se expresa usualmente en micelio areo extensivo y cadenas de esporas con 5-50 nando sobre todo los gneros Streptomyces y Nocardia
cil recomendar una dosis correcta. trminos de: o ms conidios por cadena. Gneros tpicos: Streptomy- (Dommergues, Mangenot, 1970)
ces, Microellobosporia, Sporichthya.
la mayora de las especies son mesfilas (ptimo 25-
* Las sales solubles pueden causar problemas de lavado DBO= demanda biolgica de oxgeno, la cantidad de O2 2. Nocardiaceae: hifas tpicamente fragmentadas para 30C, aunque hay especies termfilas
de nitratos hacia aguas subsuperficiales, sobretodo en consumido por oxidacin microbiana en 5 das de incuba- dar pequeas esporas.
cultivos irrigados, cin. Esta medida informa sobre la concentracin de com- abundan en suelos de pH 6,8-8,0 y slo excepcional-
puestos orgnicos rpidamente degradables y formas mente en suelos de pH inferior a 5,0. Esta sensibilidad
_ 3. Micromonosporaceae: hifas que no se fragmentan,
* Muchos residuos pueden contener metales pesados reducidas de N y S (NH3 y HS ) a pH cidos es empleada en el control de organismos
los conidios se presentan solos, en pares, o en cortas
y/o compuestos orgnicos sintticos que pueden acu- fitopatgenos
cadenas. Gneros: Micromonospora, Microbispora, Mi-
mularse en los suelos a niveles txicos para los ve- DQO= demanda qumica de oxgeno, es una medida de cropolyspora, Thermomonospora, Thermoactinomyces, si la humedad es abundante y la temperatura no muy
getales. Muchos vegetales no sufren daos visibles las sustancias orgnicas e inorgnicas oxidables totales Actinobifida. elevada, se los encuentra en forma vegetativa
pero acumulan estas sustancias txicas en sus teji- que se estima por oxidacin qumica con solucin de di-
dos y se convierten en peligro para el consumo hu- cromato de potasio y cido sulfrico. Es menos empleada 4. Actinoplanaceae: esporas en esporangios, dimetro en condiciones extremas de desecacin y/o altas tem-
mano. Las aplicaciones repetidas de abonos orgni- que la DBO. de la hifa 0,2- 2 mu. Gneros: Streptosporangium, Acti- peraturas, dominan en forma de conidios
cos y aguas servidas al suelo pueden incrementar noplanes, Planibispora, Dactylosporangium.
los niveles de As, Cd, Cr, Hg, Mo, Pb, Ni, Se y Zn. Si un residuo orgnico con alta DBO se introduce en el dominan en suelos alcalinos
Muchos estn ligados a la materia orgnica y son agua en gran cantidad, el contenido de O2 de la misma se 5. Dermatophilaceae: los fragmentos de hifas se dividen
para dar gran nmero de estructuras redondas, mvi- disminuyen con la profundidad, aunque el porcentaje
liberados a formas asimilables a medida que el res- reducir a niveles que impedirn la vida de los peces (re-
les. Gnero: Geodermatophilus. de actinomicetes en relacin a la microflora total au-
tos es degradado en perodos de varios aos. Exis- quieren unos 5mg/L de O2 disuelto para sobrevivir) y otros
menta con la profundidad y constituyen gran proporcin
ten diferencias entre pases sobre los niveles acep- organismos acuticos. 6. Frankiaceae: habitan ndulos radicales en ciertas no- de la poblacin en horizontes inferiores
tables de metales txicos en los productos aplicados leguminosas. Se han logrado reproducir fuera del hus-
al suelo. Aguas con valores de DBO de 1mg/L (1mg/L de O2 se ped. Gnero: Frankia disminuyen con la inundacin (la mayora son aerobios)
consumen en 5 das de incubacin) se consideran de
* Residuos de la produccin avcola y animales no rumian- alta calidad, valores de DBO de 5 indican pureza dudo- 7. Actinomycetaceae: no forman verdadero micelio, co- por su capacidad para sobrevivir en condiciones desfa-
tes contienen bacterias, virus y otros patgenos peli- sa. Se considera inadecuada la entrada de corrientes mnmente anaerobias facultativas. Gnero: Actinomyces. vorables, constituyen uno de los grupos ms distribui-
grosos para la salud humana cuando entran en la cade- de agua a arroyos o ros con una DBO de ms de 20mg/ dos en los suelos
De los numerosos gneros de euactinomicetes, el ms am-
na alimenticia. La mayora de ellos muere cuando los L. La DBO de los residuos animales y la de los efluentes
plio es Streptomyces, que pueden representar ms del 70- Funciones
restos o aguas son pretratadas en lagunas u oxidadas de la industria de procesamiento de alimentos es muy
90% de las colonias desarrolladas en medio slido. Son Degradacin de compuestos resistentes: responden al
biolgicamente. E. coli, habitante normal del intestino alta (ms de 10.000 en tambos) y ejercen efectos muy
muy abundantes en el suelo, al cual le confieren el olor ca- agregado de materiales carbonados varias semanas ms
humano es una bacteria indicadora de la calidad de los perjudiciales en la comunidad acutica y en la calidad
racterstico a tierra hmeda, atribuible a sustancias volti- tarde, pues son dbiles competidores frente a bacterias y
residuos y aguas, ya que no se encuentra en general del agua.
destapar caeras, etc. Otros producen antibiticos y al- El cuadro 11 esquematiza otra importante funcin de es- Los tratamientos previos a que somete estos productos 1/3 de la cantidad aplicada), el resto del N aportado por el
gunos son reconocidos en el control biolgico de enfer- pecies de Bacillus, que es la lucha biolgica, en este (compostaje, biodegradacin anaerobia, etc.) bajan con- abono puede ser lavado y ocasionar contaminaciones. Si
medades vegetales y como bioinsecticidas. caso contra larvas de insectos, sensibles a una podero- siderablemente estos valores ya que la degradacin de la se procediera racionalmente se necesitara un rea de suelo
sa toxina que se sintetiza junto a la espora bacteriana. fraccin ms fcilmente atacada estabiliza a estos resi- tres veces superior para dispersar este abono.
Clostridium, con numerosos representantes anaerobios Se ha logrado clonar este pptido y se ha incluido en duos.
que incluyen especies benficas, fijadoras de N2, por ejem- vegetales, que se convierten en resistentes a insectos Este es un ejemplo de las discordias entre la proteccin
plo y otros patgenos como C. tetanii, C. botulinicum, etc. (arroz, maz, etc. Bt, que presenta incluido genes con Sin embargo, a pesar de estas consideraciones, en mu- del ambiente y la prctica de disponer de suelos para las
(cuadro 10 y figura 7) efecto insecticida). chos establecimientos rurales se aplican los abonos or- grandes cantidades de residuos generados por la activi-
gnicos y residuos de agroindustrias directamente en el dad del hombre.
suelo. Se recomienda tener en cuenta:
Cuadro 10- Caractersticas de los gneros Cuadro11- Insecticidas microbianos Tratamiento de los residuos
Bacillus y Clostridium incrementar de la calidad de los abonos orgnicos para Complejos sistemas microbiolgicos que transforman es-
Bacillus popillae y Bacillus thuringiensis hacerlos ms competitivos en relacin a los fertilizantes tos residuos resultantes de la actividad humana y que pue-
Aerobios o facultativos Anaerobios qumicos, por un adecuado control de calidad, disminu- den llegar a provocar graves problemas de contamina-
Ej. Bacillus Ej. Clostridium Esporulados, flagelos pertricos cin en la concentracin de sales y elementos traza en cin, se desarrollaron a lo largo de miles de aos, sobre-
Endosporas resistentes Endosporas, resistentes a tempe- las raciones, mejorar la presentacin fsica de los mis- todo en el suelo. Como en general, la tasa de degrada-
Producen toxinas y un cuerpo paraesporal: protena txica
ratura, desecacin, radiaciones mos. cin de residuos orgnicos es extremadamente inferior a
que en el intestino de los insectos produce parlisis de
Son anaerobios facultativos Comn en suelos las larvas
su tasa de generacin, y adems, muchos de los resi-
B. anthracis patgeno a humanos Producen poderosas toxinas efectuar recomendaciones adecuadas a los producto- duos no son productos naturales, el hombre se ve obliga-
y animales Se utilizan como esporas muertas por calor en cultivos ve- res para su aplicacin correcta do a su tratamiento en el campo, donde se producen, o en
B. subtilis y B. polymyxa productores Causantes de ttanos, botulismo, getales plantas con reactores, especialmente diseados.
de antibiticos gangrena gaseosa El cuadro 2 (publicado por Stevenson y Cole, 1999) mues-
B. thuringiensis control biolgico Se usan para producir butanol por
tra el contenido promedio de nutrientes en estircol de 23 Los tratamientos a que son sometidos los residuos se
de insectos fermentacin establecimientos de cra de ganado (la humedad vari pueden agrupar en:
Biodegradadores, produccin Algunos fijan N2 Actinomicetes entre 21 y 54%).
de enzimas Las bacterias verdaderas se diferencian marcadamente fsicos: transformaciones termoqumicas, pirlisis (al-
Muchas especies son productoras de los hongos filamentosos. Los actinomicetes se encuen- tas temperaturas)
de enzimas de inters: tran entre ambos grupos, aunque pertenecen formalmen- Cuadro 2- Nutrientes en estircol de ganado
hidrolasas, lipasas te a las bacterias, al orden Actinomycetales y son orga- vacuno qumicos: hidrlisis cida o alcalina
nismos Gram positivos, de estructura vegetativa de tipo
miceliar desarrollo confinado slo a bacterias Gram posi- Nutriente Rango % kg/ton biolgicos y enzimticos: fermentaciones, enriqueci-
p tivas. Algunos de estos organismos, los Euactinomice- miento proteco para forrajes, hidrlisis enzimtica
N 1,16-1,96 1,34 13,4
tes, se desarrollan slo en estado miceliar, reproducin- P 0,32-0,85 0,53 5,3
dose por formacin de esporas unicelulares diferencia- El cuadro 3 resume estos procesos.
K 0,75-2,35 1,50 15
das en el extremo de la hifa.
Na 0,29-1,43 0,74 7,4 Los objetivos en el tratamiento de los residuos son varios:
En un segundo grupo, el de los Proactinomicetes, el Ca 0,81-1,75 1,30 13
e
desarrollo miceliar es transitorio, no se producen esporas Mg 0,32-0,66 0,50 5,0 disminuir la carga contaminante (ejemplo: tratamien-
y la reproduccin ocurre primariamente por fragmentacim Fe 0,09-0,55 0,21 2,1 tos de grandes volmenes de estircol en la industria le-
miceliar en clulas cortas de tipo bacilar. Zn 0,005-0,012 0,009 0,09 chera)
Figura 7- Izquierda: Clostridium spp. Ntese dos
mecanismos de resistencia: endosporas terminales y cpsula.
Los euactinomicetes: los ambientes naturales contie- aprovechar los restos como fuente de energa (pro-
Coloracin negativa, cultivo lquido en gota de tinta china. De estos datos se puede calcular que la aplicacin anual
Derecha: Bacillus thuringensis con espora (e) y vecina a nen una gran poblacin, que se agrupan en pocas fami- duccin de etanol, H2, metano)
de 40 toneladas de abono por hectrea agrega 540kgN/ha
ella, la protena txica (p). lias (figura 8).
y considerando que un cultivo de maz con rendimiento de obtener molculas de inters (produccin de prote-
4.600kg/ha remover unos 180kgN/ha (aproximadamente nas celulares)
producir alimentos (cultivo de hongos, protenas mi- En aerobiosis ocurren procesos de respiracin: Los medios de cultivo empleados son:
crobianas, lombrices) (lquidos y slidos
C6H12O6 6CO2 + 6 H2O + biomasa microbiana G= -2828 Kj/ mol/glucosa (sintticos, semisintticos, naturales
Cuadro 3- Procesos empleados en la 100% 60% 40%
biodegradacin de residuos El hongo ms cultivado es sin duda el Agaricus bisporus,
Como se aprecia, la alta eficiencia en la asimilacin del C cuyo inculo se propaga en botellas con medio rico en
Biolgicos No biolgicos conduce a la produccin de gran volumen de biomasa sustancias orgnicas, en general con semillas que facili-
Orgnicos Orgnicos microbiana. Los residuos son removidos, pero el trata- tan la adhesin del micelio a superficies y liberan ade- Figura 5- Hongos comestibles: Lentinus edulus, shiitaki
biogs, protenas unice- incineracin, fabricacin miento de efluentes contaminados con materia orgnica ms sustratos orgnicos. (izquierda) y Agaricus bisporus (derecha)
lulares, etanol de ladrillos requiere grandes superficies (lagunas) y queda un gran
Inorgnicos Inorgnicos volumen de barros (biomasa microbiana, residuos lig- La propagacin se realiza en lugares apropiados, tipo s-
Medio estril
lixiviacin bacteriana, nitrifi- reciclaje de minerales nocelulsicos slidos), que requieren nuevos tratamien- tanos o galpones oscuros y con control de humedad y
cacin-desnitrificacin tos, en general, uno anaerobio. temperatura. La cama de siembra consiste, en general, Aislamiento
en materiales como pajas, con suelo, estircol. Pueden
En anaerobiosis ocurren fermentaciones y respiraciones usarse grandes bolsas de plstico, colgadas en forma
El tratamiento de un residuo puede conducir a ms de un anaerobias: vertical. Luego de varias semanas comienzan a verse los
cuerpos fructferos, que se colectan y conservan frescos Esterilizacin
objetivo, por ejemplo, el compostaje de restos del tambo dismi-
nuye la carga contaminante y se logra un slido estabilizado C6H12O6 3 CH4 + 3CO2 + biomasa microbiana hasta su envo al mercado.
Inoculacin medio
empleado como fertilizante. La biodegradacin anaerobia l00% 45% 45% 10% G= -394 Kj/mol glucosa de granos
adems de disminuir la contaminacin ambiental, produce Otro hongo muy empleado es el Lentinus edulus, conoci-
energa (CH4) y un residuo empleado como fertilizante. Los residuos son removidos en forma incompleta, queda do como shiitake (figura 5). Es un hongo degradador de Inoculacin del soporte En
amonio, SH2, cidos grasos, que hacen necesario un tra- celulosa que se cultiva en troncos humedecidos o sobre madera
tamiento aerobio posterior. Son, por el contrario, proce- aserrn. El inculo se deposita en pequeos orificios de la
Procesos biolgicos sos de bajo costo que emplean pequeos reactores y ori- madera y aproximadamente luego de un ao, produce las
ginan pocos barros (residuos de biomasa y materiales lig- fructificaciones, ms sabrosas que las de Agaricus y de
En los residuos orgnicos derivados de vegetales, el com- nocelulsicos no atacados). mayor precio.
plejo lignocelulsico es el ms lentamente degradable en
B. Residuos inorgnicos En bandejas
procesos aerobios o anaerobios. Otro hongo de fcil propagacin son las numerosas va-
compuestos nitrogenados riantes de Pleurotus, tpico hongo de sombrero de color
+ _ _ pardo, gris, amarillo y rosado.
en aerobiosis NH4 + O2 NO2 NO3
Fermentaciones CO2, cidos,
alcoholes, H , H O La figura 6 esquematiza el cultivo de hongos comestibles. En el suelo
2 2 _ _
biomasa microbiana en anaerobiosis NO3 + e + H+ N2+ N2O Los cultivos se adquieren en forma de micelio, el que se Cultivos en bolsas
Complejo lignocelulsico energa conserva en frascos con granos y medio de cultivo. El
El ciclo de nitrificacin y desnitrificacin asegura la elimina- micelio se propaga intensamente alrededor de los granos Figura 6- Esquema en la produccin de hongos comestibles
cin del N de los ecosistemas hacia la atmsfera, en for- aprovechando liberacin de sustancias orgnicas.
Respiraciones CO2, H2O, CH4, biomasa,
ma de gases.
microbiana, material
bioestabilizado, energa El cultivo puede realizarse en distintos dispositivos, como
compuestos con azufre estanteras con cama de materiales ligno-celulsicos (pa- Otros microorganismos con inters industrial
jas, aserrn, madera), o en bolsas de plstico colgadas a
en aerobiosis S, S= SO4= la sombra, a las cuales se les efectan orificios a los efec- Bacilos Gram positivos
Comparacin de procesos de biodegradacin ae- Numerosas especies de bacilos Gram positivos son em-
robia y anaerobia de residuos _ + tos de que salgan al exterior los carpforos y se puedan
en anaerobiosis SO4= + e + H H2S pleados por el hombre. Los aerobios o anaerobios facul-
cosechar.
tativos del gnero Bacillus son importantes productores
A. Residuos orgnicos + Me SMe
de enzimas (hidrolasas, lipasas) muy empleadas en la in-
residuos de cosechas, como cscara y pajas de cerea- (metales) El ambiente se mantiene a una humedad adecuada, sin
(SO4= reduccin) (precipitado, por ejemplo como S Fe, negro) luz directa. dustria en productos para quitar manchas en la ropa, para
les, aserrn, de alto contenido en lignocelulosa
en los mecanismos de regulacin de los metabolismos ple vista si son externos (hongos de sombrero) o subte- compuestos con fsforo tratamiento anaerobio donde ocurren respiraciones anae-
especficos de biosntesis y por lo tanto, excretan gran- rrneos, como los hipogeos, globulosos, como las trufas. -3 -3 robias que aseguran la prdida de estos elementos a la
en aerobiosis Pi + poli-PO 4 poli-PO4 (n+1)
des cantidades de algunos aminocidos al medio. Este Estos hongos son cosechados, producindose sucesivos atmsfera.
ejemplo constituye una importante aplicacin de un pro- ciclos sobre sustratos lignocelulsicos (rastrojos, made- en anaerobiosis poli-PO4-3 (n+1) poli-PO4-3 + Pi
ceso microbiano. ras) complementados con nutrientes. No se emplean me-
dios ricos para evitar el desarrollo de hongos contaminan- metales pesados Restos slidos
tes saprofitas.
Uso de bacterias del cido actico en anaerobiosis SO4= + 8H+ S
=
+ Me++ SMe que precipita Compostaje
Hongos hipgeos globulosos como las trufas, son muy Compostaje es el trmino que se usa para designar la
Es conocida la acidificacin que sufren bebidas alcohli- codiciadas por su sabor y aroma particular, pero su culti- degradacin aerbica y termfila de materiales orgni-
cas expuestas al aire. Se oxida el etanol a cido actico, vo requiere suelos alcalinos y estn muy asociados a las Biodegradacin aerobia de residuos cos de diferente origen, en estado slido, realizado por
por bacterias estrictamente aerobias. De aqu deriva la encinas, en Espaa. orgnicos comunidades microbianas quimioheterotrficas existentes
industria del vinagre, que permanece bastante emprica, en los propios residuos, bajo condiciones controladas del
la conversin lleva varias semanas y la limitante del pro- Muchos de estos hongos son adems ectomicorrcicos, Restos con alto contenido de agua que se obtiene un producto estable, el compost, que pue-
ceso es la lenta difusin del aire en el lquido (gruesa pe- de modo que el productor forestal los recoge en la vecin- Los residuos pueden contener alto nivel de agua, como de ser utilizado como fertilizante. Debera traducirse el
lcula superficial de bacterias), se airea y regula la tempe- dad de los rboles, como pino, eucalipto, roble. por ejemplo los efluentes de la industria lctea, aguas trmino compost por compuesto, pero lamentablemente
ratura pero no es microbiolgicamente controlado. Actual- servidas, etc. Su tratamiento se realiza en forma conti- se contina con la denominacin inglesa la que es usada
mente se produce vinagre en grandes fermentadores con El cuadro 10 resume la composicin qumica de dos hon- nua, en dispositivos tipo piletas, que dependen de la tambin en otros idiomas.
circulacin de lquido y aireacin. gos comestibles. Se aprecia que no son ricos en prote- difusin natural del aire que se mezcla con las aguas a
nas, pero por su buen sabor, minerales, bajo tenor graso, tratar por corrientes trmicas o producidas por el vien- Ventajas del compostaje
Esta oxidacin es un ejemplo de respiracin aerobia in- han sido incorporados al rgimen alimenticio en los lti- to. En algunos casos se utilizan aireadores mecni- Si los residuos orgnicos son enterrados pueden impac-
completa, realizada por representantes de los gneros mos tiempos. cos, que incrementan la difusin del aire atmosfrico tar al ambiente. El agua que percola a travs del residuo
Acetobacter y Gluconobacter, que no presentan las enzi- en el agua y aseguran vigoroso crecimiento de las bac- puede lixiviar sustancias hacia las aguas subterrneas.
mas del ciclo de los cidos tricarboxlicos funcionales, de terias aerobias. Se produce metano como consecuencia de la degrada-
modo que se acumula acetil-coA y cido actico. Cuadro 10- Componentes nutricionales en cin de la materia orgnica en ausencia de aire, gas con
algunos hongos importante efecto invernadero, 30 veces ms perjudicial
CH4 N2
Otras bacterias con defectos enzimticos que no les per- que el dixido de carbono.
miten completar las fermentaciones o respiraciones, son Agaricus sp Pleurotus sp
Biodiscos aireados
muy usadas en industria, en efecto, el cido glucurnico mg (%) mg (%) * El compostaje remueve una gran parte de los sustratos
(uso farmacutico) se produce por oxidacin de la gluco- orgnicos biodegradables de los residuos y reduce el
caloras 24 27
sa por bacterias acticas. Muchos azcares alcoholes son tiempo de biodegradacin en relacin a los procesos
convertidos en los azcares por estas bacterias (sorbosa grasa 0 0 Efluentes en Efluentes en
anaerobiosis anaerobiosis anaerobios, con liberacin de menor cantidad de gases
del sorbitol). sodio 0 0 y menos prdidas por lixiviado.
hidratos de carbono 15,5% 3,2%
fibra 0mg 0mg Reactor Reactor Reactor
metanognico desnitrificante nitrificante * Se disminuye el volumen, peso o tenor de humedad, en
Los hongos comestibles proteinas 2,4% 3,2% relacin al material original, lo que facilita el
vitA 0% menos 2% Figura 1- Esquema de usina de tratamiento de aguas almacenamiento, transporte y empleo del residuo
Varias clases de hongos se emplean como fuentes de ali- vitC 2,4% 2% residuales
mento humano, de los cuales los ms importantes son las Ca 0% menos 2% * El compost puede colaborar con el control de enferme-
setas, grandes cuerpos de fructificacin de hongos fila- Fe 2,4% menos 2% dades de las plantas y reducir las prdidas en las cose-
mentosos. Durante la mayor parte de su ciclo de vida, las Las aguas vertidas por industrias, establecimientos agro- chas en agricultura y horticultura.
setas o championes como se les denomina a los hon- pecuarios se tratan ms aceleradamente en reactores.
gos comestibles crecen en forma de micelio en suelo, Aislamiento, propagacin de hongos comestibles En la figura 1 se esquematiza un modelo donde primero * El agregado de compost a los suelos evita la disminu-
mantillos, vegetales en descomposicin, pero cuando las El aislamiento puede ser: el proceso es anaerobio, se pierde metano y N2. Luego cin de la materia orgnica, contribuyendo a la fijacin
condiciones son favorables, por la humedad, temperatu- directo (esporas, micelio, carpforos el proceso es aerobio y los compuestos reducidos de N del carbono en los mismos. La produccin de compost
ra, desarrollan los cuerpos de fructificacin, visibles a sim- indirecto (empleo de cmaras hmedas y S se transforman en nitratos y sulfatos, que vuelven al y su incorporacin al suelo superficial crea un reservo-
rio potencial de carbono. Su aplicacin al suelo puede * Contaminantes orgnicos persistentes (COP) se encuen- tes a antibiticos, se convierten en serios problemas. La te de alimento. Existe una industria basada en el cultivo
economizar la aplicacin de nutrientes, va los fertilizan- tran en menor concentracin en el compost de bioresi- prevencin de esas afecciones antes de que ocurran es de levaduras para uso como suplemento en alimento
tes sintticos. duos y de residuos de poda en relacin a los que se la mejor alternativa y los probiticos constituyen una aproxi- animal. Se usan levaduras estrictamente aerobias, como
acumulan a partir de residuos slidos urbanos (RSU) macin natural como barreras frente a las infecciones mi- las del gnero Candida en lugar de las fermentativas,
* El compost puede reemplazar a la turba como medio de crobianas. Tambin contribuyen a reducir el riesgo de cier- para lograr maximizar el crecimiento en condiciones de
crecimiento para plantines en viveros forestales y hort- * La presencia de plsticos en los residuos est desafian- tas enfermedades ocasionadas por diarreas y alergias en aireacin forzada.
colas. do los sistemas industriales del bioproceso ya que las nios.
partculas pequeas pueden permanecer en el compost En general se buscan los sustratos ms econmicos, pri-
* Tambin puede reducir la necesidad de encalado al ejer- an despus de repetidos tamizados Cmo funcionan los probiticos meramente se emplearon melazas (sub producto de la
cer efecto tampn contra las cadas del pH. Los humanos, como todos los animales contienen mu- refinacin del azcar) y residuos de cosechas. Actual-
chos tipos y altos nmeros de microorganismos en la piel, mente se emplean derivados del petrleo, parafinas y
* Esta tecnologa presenta costos competitivos con otras Proceso de compostaje boca, tractos gastrointestinal y vaginal, En efecto, se ha molculas de varios carbonos, adicionados de sales inor-
tecnologas de manejo de residuos (fsicos, qumicos). considerado que existen ms microorganismos asociados gnicas. Esta lnea de elaboracin de protenas microbia-
Es un proceso microbiolgico realizado en la naturaleza al cuerpo humano, del orden de 1014, que de clulas pro- nas se denomina PP (produccin de protenas) y las plan-
* Se reduce la cantidad de restos producidos por la socie- por organismos nativos: bacterias, hongos y actinomice- pias (del orden de 1013). Adems del gran nmero de tas se instalan en las industrias petroleras, que abaste-
dad y satisface la necesidad de obtener rellenos para el tes, principalmente, actuando en sucesin de predominan- bacterias es necesario tener en cuenta su gran diversi- cen con las fuentes de carbono.
suelo y macetas (viveros). cia, segn la influencia de factores, como la composicin dad. Se estim que ms de 400 especies diferentes se
qumica del material original, su relacin C/N, humedad, encuentran en nuestro cuerpo. Existen unidades industriales en pases petroleros para el
* Constituye una tcnica para obtener la estabilizacin de aireacin, temperatura, pH. cultivo de Candida lipolytica en emulsin acuosa de pe-
la materia orgnica en forma rpida y en condiciones Teniendo este hecho en consideracin, no es sorpren- trleo crudo (la levadura puede oxidar hidrocarburos ali-
que no provocan inmovilizacin del nitrgeno en el sue- Los primeros sustratos atacados son hidratos de carbono dente que los microorganismos hayan ejercido un im- fticos de cadena larga, de C12 a C18). El petrleo que
lo al ser aplicado. Al mineralizarse provee en forma len- simples, protenas, compuestos solubles en alcohol y otros portante rol en la salud humana. La mayora de ellos no queda es ms fcilmente refinado.
ta, los nutrientes que las plantas necesitan. solventes orgnicos (ceras, grasas, cutinas). son patgenas y de hecho contribuyen positivamente al
normal desarrollo. Pero algunas de estas bacterias pue- Otro sustrato potencial es el gas metano, derivado de la
En la naturaleza esta estabilizacin se da en tiempo inde- La fraccin ligno-celulsica no es degradada en su totali- den tener efectos negativos, por lo que resulta impor- industria petroqumica. Las velocidades de crecimiento
terminado, de acuerdo a las condiciones que encuentra el dad y se mezcla con la biomasa microbiana en el produc- tante que el balance microbiano se mantenga a favor de son relativamente lentas en las bacterias oxidantes del
sustrato. to final. las benficas. metano y tienen tendencia a acumular muclagos extra-
celulares.
Otras ventajas son: Involucra 3 etapas: Se ha reconocido que individuos con una amplia flora in-
reduccin de costos en la remocin de nitratos del agua pre-proceso testinal de bacterias benficas estn en mejores condi- Otro microorganismos muy empleado como suplemento
ciones para limitar el desarrollo de bacterias patgenas. proteico es la cianobacteria Spirulina, que es empleada
reduccin de la susceptibilidad a la erosin del suelo biodegradacin
Lactobacilos y bifidobacterias mantienen un balance sa- como alimento en Africa y se vende en polvo o en forma
reduccin de los requerimientos de riego maduracin ludable de la flora intestinal por la produccin de com- de pastel seco en comercios de alimentos de Estados
puestos orgnicos, como el cido lctico, perxido de hi- Unidos de Amrica.
Pre-proceso puede incluir solamente la molienda y pul- drgeno y cido actico, que incrementan la acidez del
Inconvenientes del compostaje verizacin (residuos de parques y jardines) o puede re- intestino e inhiben la reproduccin de muchas bacterias
* En el compostaje ocurren emisiones (lixiviado, olores, querir tratamientos ms complejos para remover conta- perjudiciales. Estas bacterias probiticas tambin produ- Produccin de aminocidos especficos
aerosoles con microorganismos y polvo) y cuando se minantes. El tamizado separa partculas segn su tama- cen bacteriocinas, con efecto antibitico.
realiza en instalaciones centralizadas de gran escala, o. Las mquinas separan papel, plsticos y otros consti- Las protenas sintetizadas por los microorganismos son
el proceso consume energa tuyentes no deseados de la materia orgnica. deficientes en ciertos aminocidos requeridos por |os
Produccin de levaduras a partir de deriva- mamferos. Las protenas vegetales carecen tambin de
* Algunos herbicidas, no son destruidos por el compostaje Biodegradacin requiere aireacin en pilas o en disposi- dos del petrleo estas sustancias: la de trigo es baja en lisina, la de arroz,
y pueden daar los cultivos. Estos herbicidas son usa- tivos adecuados con aireacin forzada. Durante las pri- en lisina y treonina. La suplementacin con estos ami-
dos sobre malezas y pueden pasar a travs del tracto meras semanas, la temperatura de la pila aumenta drsti- Por su rpido crecimiento, alto contenido proteico y ca- nocidos es prctica corriente y la produccin microbiana
digestivo de los animales, depositndose en las camas camente debido a la energa generada por los microorga- pacidad para emplear sustratos carbonados de bajo cos- de aminocidos especficos ha sido muy estudiada. Mu-
de paja y estircol, que pueden ser luego compostados nismos. to, los microorganismos constituyen una importante fuen- chas cepas microbianas o sus mutantes son defectivas
Cuadro 7- Metabolitos producidos por las yora de los probiticos son bacterias, aunque algunas La materia orgnica se descompone ms eficiente y com- Esta etapa culmina al agotarse los nutrientes fcilmente
bacterias lcticas levaduras, como Saccharomyces boulardii ha sido eva- pletamente en condiciones de oxgeno disponible y a tem- empleados por los microorganismos, y el compost va per-
luada como probitica. peraturas elevadas. Las protenas liberan amonaco y diendo calor. La materia orgnica se ha estabilizado, acu-
Productos principales: cido lctico, CO2, etanol, sustan- nitratos, mientras que las grasas y carbohidratos forman mulndose aquella de lenta degradacin (fraccin ligno-
cias aromticas Un producto de estas caractersticas debe ser ante todo dixido de carbono y agua, va cidos orgnicos. Se su- celulsica).
Compuestos antimicrobianos: cidos orgnicos, etanol, dia-
seguro, efectivo y debe mantener su efectividad y poten- ceden fases:
cetilos, H2O2 cialidad hasta su consumo (cuadro 9). Etapa de maduracin: ocurre una lenta degradacin de
Bacteriocinas: pptidos que inhiben cepas muy relaciona-
fase mesfila, en la que predominan bacterias y hon- la materia orgnica hasta que el volumen se reduce aproxi-
das. Contra patgenos como Bacillus, Clostridium, Sta-
gos productores de cidos que atacan a la materia or- madamente 50%.
phylococcus. Ej: la Nisina producida por Lactococcus, Aci- Cuadro 9- Criterios para seleccin de probiticos
dofilina por L. acidophilus activa contra E. coli, Salmonella
gnica fcilmente degradable, generando calor que fa-
panama vorece el desarrollo de organismos termfilos El material va retornando a una nueva fase mesfila, pero
* por su habilidad de sobrevivir en el tracto gastrointestinal ahora con otra composicin qumica, puesto que los nu-
Texturizantes (exopolisacridos): importantes evitando la
separacin del agua (yogur). S. thermophilus productora * por la produccin de sustancias antimicrobianas fase termfila: a partir del 10o da, con la elevacin de trientes fcilmente atacables ya han sido consumidos por
de 2 heteropolisacridos con glucosa y galactosa * rpido crecimiento: bajo tempo de generacin (tg) o alta la temperatura, comienza esta etapa y la poblacin domi- los microorganismos. Reaparecen, hongos y bacterias
Quimosina: esta importante enzima usada para la coagu- velocidad de crecimiento (vc) nante se compone de actinomicetes, bacterias y hon- mesfilas provenientes del medio. A medida que el com-
lacin de la leche en la preparacin de quesos se obtiene gos termfilos o termotolerantes. post va tomando la temperatura ambiente pueden ser
* sin efecto patgeno y con habilidad para estabilizar la mi- encontrados protozoarios, nemtodos, hormigas, miri-
del estmago de terneros, pero en la actualidad se sinteti-
croflora nativa
za a partir de numerosos microorganismos. Preparacio- Los microorganismos que crecen a temperaturas medias podos, lombrices e insectos diversos.
nes comerciales a partir de Lactococcus lactis, Saccha- * habilidad de sobrevivir a bajo pH y en la presencia de bilis (microorganismos mesfilos) son inhibidos con el aumen-
romyces cereviseae , Bacillus, Aspergillus niger, se en- to de la temperatura, mientras que predominan los micro- La maduracin involucra mayor biodegradacin de com-
cuentran en desarrollo. organismos termfilos. Esta fase de alta temperatura es puestos y toma varias semanas. En esta etapa se forman
La mayora de los productos contienen bacterias de los importante porque destruye semillas de malezas y pat- nitratos y las fitotoxinas son degradadas. Esta es una
gneros Lactobacillus y Bifidobacterium, a pesar de que genos de animales y plantas y acelera las reacciones de fase importante en el proceso y el compost inmaduro pue-
Cuadro 8- Importancia industrial de las levaduras otros gneros como Escherichia coli, Enterococcus, Baci- biodegradacin. de provocar serios daos a los vegetales.
llus y Saccharomyces (levadura) han sido comercializa-
* Son los microorganismos ms ampliamente utilizados en dos como probiticas. Esta elevacin de la temperatura y la consecuente altera- La mayora de los compost son vendidos como mejorado-
la industria cin de la flora microbiana son influenciadas, en gran res de suelo. Pueden ser mezclados con otros materiales
* Importancia econmica:
Existe controversia sobre si las bacterias usadas como parte, por la disponibilidad de oxgeno. para rellenar macetas en viveros, usarse en coberturas
a) biomasa celular (para pan, cerveza, vino) iniciadoras en la preparacin de yogur deben considerar- en superficies deportivas y como coberturas de suelo para
b) componentes celulares (vitaminas, aminocidos) se probiticas. Lactobacillus bulgaricus and Streptotoc- Se produce adems, la inactivacin de microorganismos sitios remediados. Tambin pueden ser usados para re-
c) productos finales de la fermentacin (etanol, CO2) cus thermophilus se usan para fermentar la leche y pre- patgenos como coliformes, Salmonella, Streptococcus, mediar tierras contaminadas, ayudar a prevenir la erosin
parar el yogur (captulo 19). Pero estos cultivos no son Aspergillus. Las pilas de compost ms intensamente re- del suelo y como cobertura diaria en los sitios de disposi-
* El proceso de produccin de material celular es aerbico muy resistentes a las condiciones del estmago e intesti- movidas al comienzo alcanzan temperaturas ms elevacin final de residuos. La biomasa microbiana puede
no delgado y generalmente no alcanzan en alto nmero das, hasta 75C, mientras que las menos aireadas slo representar hasta el 25% del peso total del compost.
* El proceso de fermentacin alcohlica es anaerbico
el tracto gastrointestinal, por lo que no pueden ejercer efec- llegan hasta los 60C. Las bacterias formadoras de espo-
to probitico. Sin embargo, estas bacterias, han incremen- ras sobrevivirn a estas temperaturas.
Probiticos
tado la digestin de la lactosa en individuos carentes de Microorganismos presentes
lactasa y la respuesta inmune. La pila se da vuelta o se airea forzadamente, para permi-
tir bajar la temperatura y adems reinocular el material El cuadro 4 presenta algunas de las especies identifi-
Se definen como: alimentos suplementados con micro- Rol de los probiticos en la salud con microorganismos desde la atmsfera ya que la alta cadas.
organismos viables que benefician al consumidor por Por muchos aos se aseguraba que los productos lc- temperatura produjo disminucin de microorganismos
mejoramiento del balance microbiano. La FAO los de- teos con cultivos vivos y activos, eran muy saludables. La mesfilos, por pasteurizacin del sustrato. La temperatu- Los hongos y actinomicetes son activos degradadores de
fine como organismos vivos administrados en cantida- investigacin ha confirmado algunas de estas asevera- ra vuelve a ascender, reinicindose el ciclo. Las pilas se la celulosa y otros materiales ms resistentes. Muchas
des adecuadas que ejercen efectos benficos en la salud ciones. Por ejemplo, la capacidad de algunas bacterias dejan de remover y/o airear cuando la temperatura no se bacterias atacan la celulosa, pero hacia el final del
del hospedante. Se consideran hospedantes a los ani- usadas en la dieta pueden mejorar la salud, como poten- eleva ms, lo que indica que los sustratos fcilmente de- compostaje, cuando la temperatura disminuye, son hon-
males (ganado vacuno, ovino, etc.) y el hombre. La ma- ciar el sistema inmunitario. Algunas infecciones resisten- gradables han sido mineralizados. gos y actinomicetes los que predominan. Para asegurar
una buena actividad de estos organismos, es necesario Inoculacin A continuacin analizaremos algunos de los grupos mi- rtrofos (captulo 3) y que conducen a la acumulacin de
mezclar los materiales en forma frecuente. crobianos de inters para el hombre que tienen desarrollo productos que han sido histricamente importantes para
Se ha intentado seleccionar microorganismos para usarlos industrial (cuadro 6). El tema Antibiticos es tratado en el hombre:
como inoculante en cultivos puros o mezclas. Existen a nilos captulos 4, 14 y 17.
Cuadro 4 - Principales microorganismos aislados vel comercial productos recomendados para la inoculacin * etanol, acetona, H2, cido lctico, ctrico, propinico,
de un compost de diferentes tipos de residuos. Sin embargo, los datos en- butanodiol, cidos orgnicos, etc.
contrados en la bibliografa sealan escasas diferencias en Cuadro 6- Procesos microbianos de inters
Bacterias Actinomicetes el producto final entre restos inoculados y sin inocular. 1 CO2
2
Lactato NADH NADH Etanol
levaduras: panificacin, bebidas alcohlicas, etanol, vi- Piruvato Acetaldehdo
Mesfilas Termotolerantes
Cellulomonas folia Micromonospora vulgaris Los microorganismos autctonos, existentes en esos taminas CO2 Piruvato
CO2
Chondrococcus exigus Nocardia brasiliensis materiales se encuentran en general en cantidad y cali- CoASH
dad suficiente para producir la descomposicin. La airea- bacterias lcticas: inoculantes para alimentos, leche y de- 3 4
Myxococcus fulvus Streptomyces rectus
cin de las pilas asegura la multiplicacin de los microor- rivados (yogur, queso, pickles) Oxaloacetato acetolactato
Thiobacillus thiooxidans S. thermofuscus
Acetil -CoA Formato CO2
Thiobacillus denitrificans S. thermophillus ganismos en toda la masa. microorganismos como agentes probiticos: bacterias lc- NADH Pi 5
Aerobacter sp. S. thermoviolaceus CoA H2 CO2
ticas Acetil P Acetaldehdo Acetona
Proteus sp. Thermonospora fusca Para que los sustratos puedan ser inoculados con xito, Malato
ADP NADH
Pseudomonas sp. T. glaucus sera necesario en primer lugar esterilizarlos o pasteuri- bacterias productoras de cidos actico (vinagre), Aceto- H2O ATP
NAHD
Thermoactinomyces sp. bacter, Gluconobacter Acetato Etanol
zarlos para luego inocularlos. La cantidad de inculo pue-
Thermopolyspora sp. Fumarato 6
Termfilas
de representar una limitante, teniendo en cuenta los gran-
bacterias productoras de solventes: acetona, etanol, Clos- Acetoacetil-CoA
Bacillus stearotermophilis des volmenes que normalmente se procesan. NADH
tridium acetobutilicum, Propionibacterium CO2
Hongos Residuos vegetales secos, como los restos de cosechas Succinato Acetona Butiril -CoA
Pi
inoculantes para la agricultura: bacterias fijadoras de N2
CO2 NADH CoA Coa
Mesfilos Termfilos (pajas de alta relacin C/N) pobres en microorganismos (Rhizobium, Bradyrhizobium, cianobacterias, Frankia), NADH
Butiraldehdo Butiril P
Fusarium culmorum Aspergillus fumigatus pueden ser compostados mezclndolos con estircol de microorganismos para control biolgico (Pseudomonas, ADP
F. roseum Humicola insolens animales, lodos o cualquier material que posea alta carga Thrichoderma) ATP
Stysanus stemonitis Mucor pusillus microbiana.
Coprinus cinereus Dactylomyces crustaceous microorganismos para producir protenas unicelulares
Figura 4- Diversidad de fermentaciones
Aspergillus niger Torula thermophila como alimento: levaduras, bacterias, algas
Geothricum candidum (Candida, Spirulina)
Mucor jansseni
Tecnologa
bioinsecticidas: Bacillus thuringensis Muchos de estos productos se continan produciendo
El compostaje puede realizarse en: hoy da por va fermentativa, a pesar de que su sntesis
microorganismos como fuente de aminocidos, de vitami- qumica permite su obtencin en la industria, ya que el
Son enzimas hidrolticas extracelulares las que actan en
en el campo, en pilas, al aire libre, sobre piso de tierra nas: vit B12, riboflavina fcil aislamiento de los microorganismos responsables
la primera etapa, liberando molculas menores, solubles
en agua. La actividad de varias enzimas ha sido monito- o pavimentado, con o sin aireacin forzada produccin biolgica de polisacridos: dextranos (Leuco-
y el bajo costo de los sustratos y de la tecnologa reque-
reada en el proceso. La actividad celulasa desminuye la nostoc), xantanos (Xanthomonas) rida hace que los procesos biolgicos sean competitivos
cantidad de celulosa en un 25% en unas tres semanas. en silos, en digestores o usinas altamente tecnifica- desde el punto de vista econmico.
Las actividades de lipasas, proteasas y amilasas crecen y das, para el tratamiento de grandes volmenes de sli- virus y bacterias para preparacin de vacunas
luego descienden en las sucesivas etapas del compostados, como por ejemplo los residuos domiciliarios. Se Las fermentaciones lctica y alcohlica son tratadas en el
je (decrecen marcadamente en la fase termfila). La des- usan reactores cerrados con control de aireacin, hu- captulo 19.
naturalizacin de enzimas se correlaciona con la muerte medad, temperatura y tiempo de retencin. En estos
del microorganismo por el calor. La recuperacin del n- ltimos, el proceso puede completarse entre 5-7 das, Productos de las fermentaciones Se sealan a continuacin algunos de los objetivos en la
mero de microorganismos y la actividad enzimtica en el mientras que en las pilas, puede llevar 3 a 8 semanas, produccin de bacterias lcticas y de las levaduras (cua-
o ms para lograr un compost adecuado La figura 4 muestra distintas vas metablicas que a partir dros 7 y 8), dos de los grupos microbianos con mayor
interior de la pila luego de la fase termfila se atribuyen a
del piruvato realizan numerosos microorganismos hete- incidencia en la alimentacin humana.
la reintroducin de organismos que sobrevivieron en las
zonas externas, ms fras de la pila o a partir de contami- La experiencia ha demostrado que las dimensiones idea-
nacin por el aire. les para las pilas de desechos son las siguientes:
conjugacin o formacin de complejos, por reacciones pueden ser activados. As, el cianato de potasio y el da- largo: 2,5 a 3,5 m Cuadro 6- Factores que afectan el compostaje
de adicin; el microorganismo combina el pesticida con lapn se hidrolizan lentamente en agua, resultando en- altura: 1,5 a 1,8 m, que baja al final de 1/3 a 1/6
metabolitos celulares (adicin de aminocido, cidos or- tonces inefectivos como herbicidas. En suelos en am- ancho: variable, nunca menor de 2 m * Relacin C/N
gnicos, metilos, etc.); pueden conducir a bajar la toxi- biente anaerobio, la degradacin puede ser qumica y >30/1 = proceso lento
cidad microbiolgica. El peso disminuye de 50 a 80%, y el volumen total se 25-35/1 = ptimo
reduce entre un 20 y un 60%. La pila nunca puede ser < 25/1 = prdidas de nitrgeno
activacin: conversin de un producto no txico en muy alta, porque se corre el riesgo de que las capas su-
* Aireacin
molculas txicas: preparaciones comerciales, como el Adsorcin a coloides periores ejerzan presin sobre las inferiores, compactn-
necesaria para la degradacin
herbicida 4 (2,4-DB) que en el suelo se transforma en dolas, provocando anaerobiosis y los consiguientes pro-
metabolito txico para malezas (2,4-D) Son retenidos a la materia orgnica (humus) y a la frac- cesos de fermentacin y putrefaccin. * Humedad
cin arcilla, y los xidos e hidrxidos de hierro y alumi- >60% = ausencia de aire: putrefaccin
cambio en espectro de toxicidad: sustancias espe- nio juegan importante rol en suelos pobres en materia En cuanto a la forma, las pilas pueden tener seccin trian- 40-60% = ptima
cficas para un grupo de organismos, se metabolizan orgnica. En escala descendente de capacidad de ad- gular o trapezoidal: la triangular es recomendada para estacio- < 40% = reduccin de actividad microbiana
y dan productos que inhiben a otros organismos, como sorcin tendramos: humus > montmorillonita > illita > nes lluviosas, pues favorece el escurrimiento del agua, la < 12% = cesa la actividad microbiana
la conversin en el suelo del fungicida pentacloro ben- caolinita, pero intervienen tambin la temperatura, el pH, trapezoidal, por el contrario, facilita la infiltracin del agua.
zol en cido pentacloro benzoico, que acta como her- la capacidad de intercambio catinico. Los enlaces pue- Otros: temperatura, granulometra
bicida den ser de naturaleza fsica (fuerzas de Van der Waals)
o electrostticos, por puentes de hidrgeno, sobre todo Materiales a compostar Principales factores que afectan el compostaje
simplificacin: conversin de molcula no txica, que en molculas con grupos -NH, como los fenilcarbama-
puede convertirse en pesticida cuando es activada en- tos y las ureas sustituidas. Intervienen tambin enlaces En el cuadro 5 se observa la composicin de distintos Relacin C/N: cuando la materia prima presenta alta
zimticamente, en producto no txico, fcilmente de- en complejos con iones metlicos, inactivndose muchas materiales a compostar y su contenido en nitrgeno y el relacin C/N, se corrige agregando materiales ricos en
gradado. molculas fijadas. cuadro 6 resumen los principales factores que afectan al N (estircol, camas de animales, tortas vegetales, resi-
proceso de compostaje. duos de matadero, fertilizantes orgnicos nitrogenados,
La figura 2 reagrupa estos conceptos en el ejemplo del As, suelos con alto nivel de materia orgnica requie- etc.). Una relacin ideal para un compostaje rpido se
metabolismo de herbicidas fenoxialcanos. ren dosis relativamente mayores de la mayora de los sita entre 25 y 35/1.
herbicidas y suelos arcillosos niveles superiores a los Cuadro 5 - Composicin de residuos a compostar
O(CH2)3COOH OCH3
arenosos. Para predecir las dosis de herbicidas que es Un compost con materiales de C/N inferior a 30/1condu-
Cl Cl necesario aplicar en varios tipos de suelos, se han de- Materiales %N sobre peso seco Relacin C/N cen a prdidas de N como amonio, agravadas si el pH
A OH D sarrollado modelos matemticos. El nivel de materia Orina de animales 15-18 0.8 es alcalino. En este caso, se agregan materiales ricos
orgnica es uno de los parmetros del suelo que ofre- Sangre seca 10-14 3 en C, como pajas, para elevar la relacin C/N o tierra,
Cl Cl Cl
4(2,4 DB) ce las mejores correlaciones entre la adsorcin de her- Harina de cuernos 12 ND arcillas o fertilizantes minerales que pueden retener el
C A) Simplificacin (Flavobacterium)
B) Activacin en el suelo bicidas y propiedades edficas. El carbn activado, uno Harina de pescado 4-10 4-5 amonio.
B OCH COOH Torta de oleaginosa 3-9 3-15
2 Cl C) Detoxificacin (suelo, Arthorobacter) de los materiales absorbentes ms potentes, se em-
E) Degradacin (Pseudomonas, suelo)
Cl 2,4 Diclorofenol plea para proteger a las semillas de la accin de los Lodos cloacales 5.5-6.5 6-10 Al final del compostaje la mayor parte del N est en for-
herbicidas. Fangos activados 5-6 6
ma de NO3 en solucin que puede ser removido por el
E Harina de huesos 2-4 8
agua y aprovechado por las plantas. Tambin puede
Cl Cama de aves 4 ND
2,4-D CO2,H2O,Cl- Pasturas jvenes 2-4 12 ocurrir fijacin de N2 atmosfrico por microorganismos
Lavado Desechos de cervecera 3-5 15 especializados, en compost estabilizados, sin presencia
Figura 2- Pasos iniciales en el metabolismo de herbicidas Estircol de cerdo 1.9 ND de N amoniacal.
fenoxialcanos Los herbicidas de pre-emergencia que se aplican gene- Estircol vacuno 1.0-1.8 ND
ralmente en la superficie del suelo pueden ser llevados Paja de trigo 0.6 80 Granulometra: sta se adeca moliendo los materiales
por el agua a capas sub-superficiales donde germinan la Hojas recin cadas 0.4-0.1 40-80 gruesos o agregando restos como pajas en residuos de
Descomposicin qumica mayora de las semillas de malezas, que son as elimina- Restos de remolacha 0.3 150 granulometra fina como los lodos residuales u otros sus-
das por estas sustancias. Las semillas grandes deben Aserrn fresco 0.1 500 tratos con tendencia a compactarse. Tambin se pueden
Mediante reacciones de oxidacin, reduccin o hidrli- sembrarse debajo del rea de alta concentracin del her- Papel 0 infinito agregar materiales no degradables, como esferas poro-
sis se pueden degradar pesticidas, mientras que otros bicida, o bien ser resistentes a ellos. El grado de lixivia- ND: No determinado. sas de arcillas, plstico, goma.
pH : el ptimo se sita entre 6,0 y 7,5, los vegetales pre- a la microflora mesfila, coagulan protenas y provocan tanto son liberadas y los procesos ocurren en rganos como glucosa, por ejemplo, que al disminuir en el me-
sentan en general reaccin cida que se puede corregir prdidas de N como amonio. La figura 2 presenta la varia- especializados, como el hgado dio inducen las enzimas necesarias para la degrada-
agregando cal, ceniza vegetal u otro producto alcalino, cin ms frecuente de temperatura durante las distintas cin del pesticida.
evitando que el pH pase de 8,0. fases del compostaje. en los microorganismos, el objeto principal es la obten-
pH cin de energa y muy pocas molculas (algunos halo- Cuando el nivel de pesticida es bajo en relacin a otras
Humedad: la humedad ptima para mxima eficiencia del 70 8,0 genados aromticos usados como insecticidas) no son fuentes de carbono, el metabolismo incidental, dentro del
proceso est comprendida entre 60 a 65% en peso para atacadas por algn grupo de microorganismo, en el sue- cual se ubica el cometabolismo, es la forma principal de
temperatura C
50 7,0 actividad microbiana.
granulometras groseras (pajas de cereales) y de 55 a 60% lo. Se propuso un esquema general sobre la accin de
para granulometras finas (aserrn, contenido ruminal). La los microorganismos y de procesos abiolgicos, sobre
30 Las reacciones catablicas ocurren sobre todo cuando las
humedad mnima debe ser de 40%; con humedad inferior 6,0 los pesticidas (cuadro 6).
dosis de pesticidas son altas y la estructura qumica per-
al 12% la actividad biolgica cesa y muy altas inducen 10
mite su biodegradacin y su uso como fuente de carbono.
anaerobiosis y prdidas de nutrientes.
A B C D Cuadro 5 - Influencia de la estructura en la
Se controla dentro de los lmites recomendados por: mesfila termfila mesfila estabilizacin biodegradacin de xenobiticos
Cuadro 6 - Metabolismos microbianos sobre
Figura 2- Cambios en la temperatura y el pH durante el pesticidas
irrigacin al montar la pila, si la humedad de los resi- Tipo de compuesto Ms degradable Menos degradable
compostaje o sustituyentes
duos es baja I. Enzimtico
hidrocarburos alcanos superiores alcanos inferiores A. Metabolismo incidental: los pesticidas no se usan directamente
remover la pila para provocar evaporacin si la hume- (12 C) como fuente de energa.
dad es alta Calidad, anlisis, estndares y mercados alcanos alcanos de alto PM 1. metabolismo por enzimas generalmente disponibles
alifticos de alifticos ramificados a. enzimas de amplio espectro (hidrolasas, oxidasas, etc.)
La humedad se debe mantener en el entorno del 50% cadenas lineales aromticos b. enzimas especficas presentes en muchas especies
La aceptacin del producto final en el mercado depende 2. metabolismo inducido por productos anlogos (cometabolismo)
durante la fase inicial y del 30% en la fase final de de varios elementos que incluyen: el precio, la calidad y aromticos mono policclicos
y bi cclicos aromticos c. enzimas que emplean sustratos estructuralmente similares
estabilizacin. consistencia del producto, adems de las garantas de que a los de los pesticidas.
el producto no contiene niveles no aceptables de metales aromticos -OH -F B. Catabolismo: los pesticidas se emplean como fuente de energa
Aireacin: es importante para que la descomposicin sea pesados, vidrio, plantas y patgenos. sustitudos -COOH -Cl d. pesticidas o parte de su molcula son rpidamente usados
aerobia, ms rpida y eficiente que la anaerobia. Su con- -NH2 -Br e. deben inducirse enzimas especficas para su degradacin
trol es una de las tareas ms difciles y costosas. La con- La calidad del compost se refiere a las caractersticas -OCH3 -NO2 C. Detoxificacin.
centracin de O2 no debe ser inferior al 5 y 10% del vol- fsicas, qumicas y biolgicas, las que condicionan el im- f. metabolismo por microorganismos resistentes
alifticos -Cl ms 6 C -Cl menos 6 C
men de los macroporos. pacto del producto sobre el ambiente y es resultante de II. No enzimtico
clorados desde el C terminal
la calidad de los materiales iniciales y de la calidad del A. Participacin en reacciones fotoqumicas
En los digestores cerrados la aireacin se hace mecni- proceso de compostaje. B. Contribucin por cambios de pH
camente. En las pilas se produce en el mezclado o por C. Por la produccin de reactantes orgnicos o inorgnicos
Una microflora especializada es responsable de la degrada- D. Por la produccin de cofactores
sistemas de aireacin forzada.
Los estndares tienen en cuenta contaminantes, como cin de los pesticidas mediante dos mecanismos diferentes:
metales pesados y desde el punto de vista microbiano,
Temperatura: el calor es la primera informacin de que el
la ausencia de microorganismos patgenos. No existen I. la sustancia favorece el crecimiento y es empleada
proceso de descomposicin se inici. La ausencia de ca-
estndares reconocidos mundialmente para productos como fuente de carbono, energa y ocasionalmente de Procesos microbianos sobre pesticidas
lor en los primeros das indica un problema en: baja acti-
derivados de bioresiduos; los estados miembros de la nitrgeno, azufre, etc. El nmero de especies activas
vidad microbiana, falta de O2 por exceso de agua o mate- Mecanismos generales de biodegradacin
Unin Europea y Estados Unidos de Amrica aplican sus aumenta y el aislamiento se puede efectuar en medios
rial de granulometra muy fina. Las altas temperaturas son
propios estndares. El Uruguay, como en muchos pa- de cultivo en donde el pesticida acta como nica fuen-
consideradas deseables por el hecho de destruir semillas detoxificacin, conversin de molculas txicas en no
ses, se encuentra con la necesidad de establecer norte de nutrientes. Una vez que el producto es degrada-
de malezas y organismos patgenos, la mayora sensi- txicas
mas de calidad para estos biofertilizantes producidos en do, la poblacin declina
bles al calor.
el pas o importados. La madurez de los productos se degradacin, o transformacin de sustancias comple-
establece frecuentemente por el consumo de O2 o la li- II. cometabolismo: el compuesto no acta directamente jas en productos simples (puede ser sinnimo de mine-
Se produce una pasteurizacin del material. Las altas
beracin de CO2 durante su incubacin. Cuanto ms como fuente de nutrientes, sino que debe emplear otras, ralizacin, con aparicin de CO2, H2O, NH3, etc.)
temperaturas no deben extenderse mucho porque limitan
masa microbiana, por recuentos o por la tcnica de fu- En el efecto biolgico de un pesticida (B) interviene su maduro est el compost menos O2 es consumido. Otro nativa. Como el humus, los compost aumentan la agrega-
migacin-incubacin, recuentos de grupos microbianos concentracin y la duracin de su accin. test es la liberacin endgena de calor: compost inma- cin del suelo, la aireacin, infiltracin de agua, capaci-
que realizan procesos de inters para el ambiente (FBN, duro calienta a 65-70C en dos o tres das, uno maduro dad de retencin del agua y la capacidad de intercambio
solubilizadores, mineralizantes, etc.), actividad enzim- B = K i cdt no eleva la temperatura a ms de 30C. No debe conte- catinica.
tica: deshidrogenasas, amilasas, fosfatasas, ATPasas, Donde c es la concentracin en un momento dado (dt); K es ner fitotoxinas u otros inhibidores de la germinacin de
etc., procesos microbianos, como la FBN, mineraliza- un factor que depende del suelo (humedad, coloides, etc.). semillas, ni metales pesados. La estabilidad del compost es una caracterstica impor-
cin, oxido-reduccin, son evaluados antes y despus de tante desde el punto de vista del mercado. La descom-
la incorporacin de estas sustancias. La persistencia en ambientes naturales depende de va- Se han descrito varias tcnicas para evaluar la calidad de un posicin activa y continua del compost cuando se agre-
rios factores: la descomposicin qumica y biolgica, la compost: evaluacin de actividades respiratorias y enzimti- ga al suelo puede inhibir el crecimiento de las plantas
adsorcin a coloides, el lavado. la volatilizacin, la foto- cas del suelo con y sin aditivos, su relacin C/N, la presen- por la reduccin del oxgeno y del nitrgeno disponibles
Pesticidas en el suelo descomposicin, la remocin por vegetales que se cose- cia de sustancias fitotxicas, de metales pesados, se anali- en la zona de las races o por la presencia de compues-
chan. El cuadro 4 muestra los procesos que en el suelo zan tambin el nivel de sustancias del tipo humus. (Anexo tos fitotxicos.
La figura 1 presenta un esquema de las posibles vas a se- afectan a sustancias xenobiticas prctico) y el contenido de nutrientes (cuadro 7)(Zibilske,
guir por un pesticida cuando llega al suelo. Pongamos como 1998). Muchos compost son buenas fuentes de nutientes para En resumen: el compostaje de residuos biodegradables
ejemplo el caso de la incorporacin de un herbicida. Este se los cultivos, con cantidades apropiadas de N, P, S, etc. es un excelente camino para reducir la cantidad de resi-
puede perder por lavado, por degradacin en el suelo, o ser Cuadro 4 - Procesos que afectan a xenobiticos duos a ser incinerados o volcados a causes de agua, o
absorbido por los cultivos. El perodo en que un pesticida en el suelo Estos productos difieren de los fertilizantes inorgnicos enterrados y la cantidad de metano liberado a la atmsfe-
persiste en el suelo es de gran importancia prctica, ya que en que los compost requieren degradacin microbiana ra. Es un proceso esencialmente microbiano que puede
refleja el tiempo en que la plaga o peste estar sometida a Proceso Factores que inciden para liberar la mayora de sus nutrientes y ponerlos a ser controlado por los factores que afectan a los microor-
control, afectando tambin la polucin del ambiente: acumu- hidrlisis pH disposicin de los vegetales. En los anlisis de calidad ganismos intervinientes. La falta de sustratos adecuados,
lacin en porciones comestibles de las plantas, en corrientes transformacin microbiana enzimas degradativas, se incluye entonces su facilidad de mineralizacin. Es niveles de humedad o temperatura fuera de los rangos
de agua, transporte a pjaros va lombrices, etctera. condiciones ambientales necesario esta determinacin a los efectos de determi- ptimos y problemas con la difusin del oxgeno al interior
apropiadas nar las dosis a aplicar. Muchas veces estos productos de la pila, son los factores limitantes ms frecuentes en el
volatilizacin presin de vapor
se acompaan con fertilizantes qumicos a los efectos compostaje.
evaporacin aplicacin fotodescomposicin xido-reduccin Eh
lavado solubilidad de brindar nutrientes a los vegetales desde su aplica-
atmsfera vegetales
adsorcin coeficiente de particin pKa, cin. Se necesitan normas claras para dirigir la recoleccin y
poros del suelo el tratamiento de estos residuos, adems de buenos con-
movimiento capilar y
solubilidad, tipos de adsorbentes
gravitacional bioconcentracin coeficiente de particin pKa En promedio, un 10% del compost se mineraliza en el troles de calidad y estndares obligatorios a los efectos
fijacin/adsorcin CIC primer ao de aplicacin, luego esta tasa cae a 1 a 3%, de recomendar productos de buena calidad e inocuos para
difusin fijacin: arcillas difusin
asemejndose a la degradacin de la materia orgnica el hombre y la naturaleza.
materia orgnica
absorcin: formacin de complejos La estructura de la molcula, la posicin y naturaleza de

plantas metabolismo y con minerales
microorganismos degradacin los grupos funcionales afectan tambin la persistencia,
qumica como se aprecia en cuadro 5. Cuadro 7- Propiedades de algunos compost
lixiviacin
Figura 1- Esquema del comportamiento de un pesticida en el Descomposicin microbiana pH humedad% densidad N% P% K%

suelo (kg/m3)
Durante mucho tiempo se pens que los mecanismos de
La persistencia en el suelo, es decir la duracin de la degradacin de los pesticidas por los microorganismos Desechos municipales lquidos 6-6,5 20-35 772 2,21 0,97 0,27
efectividad de un pesticida, depende de eran similares a los de los animales. Pero a medida que
Estircol 5,8-7,2 34-61 304-400 0,7 0-0,03 0,02-0,36
las investigaciones fueron progresando, se apreciaron las
su composicin qumica Residuos alimenticios - 40 352 0,95 0,13-0,46 0,48-0,89
diferencias:
de las condiciones del medio: materia orgnica, arci- en los animales las reacciones conducen sobre todo a Slidos municipales - 45 352-481 - - -
llas, pH, humedad, tipo de suelo, etctera. convertir estas molculas en formas polares y por lo
Vermicompostaje necesita ms mano de obra procesos benficos (degradacin de materia orgnica, ni- resultados obtenidos a nivel de laboratorio a las condi-
trificacin, fijacin del N2, solubilizacin de fosfatos) ciones naturales de campo, resulta muchas veces difcil
Constituye una variacin en la tecnologa del compostaje el material debe estar triturado para una mayor eficien- porque:
en la cual se utilizan lombrices para acelerar la degrada- cia en la degradacin sobre los pesticidas: los microorganismos de estos
cin de la materia orgnica. La lombriz trabaja cavando
2
necesita de una mayor rea: 1000 m para producir 100 ambientes metabolizarn a estas sustancias (la mayo- los estudios fueron realizados bajo condiciones muy di-
galeras en el suelo o en el compost, moliendo y humede- ton de compost por da ra son orgnicas) por distintos mecanismos, los que versas, muchas veces no correctamente explicitadas en
ciendo partculas en el tubo digestivo (accin ms mecni- sumados a las otras causas abiolgicas de alteracin, los trabajos
ca que biolgica). no presenta fase termfila, que matara a la fauna contribuyen a disminuir sus efectos txicos.
en ambientes y tipos de suelos muy diferentes
Sus excrementos estn formados por agregados de tie- La descomposicin de la materia orgnica es realizada Como generalizacin, se piensa que: falta de informacin sobre la formulacin de productos
rra, materia orgnica digerida y secreciones intestinales por los microorganismos del tracto digestivo de las lom- comerciales y sus aditivos, que pueden afectar a la po-
y urinarias, de ms fcil asimilacin por las races que brices. los compuestos de amplio rango, como los fumigan- blacin en mayor grado que el producto mismo.
reciben el nombre de coprolitos. Estos son ms neu- tes, fungicidas, parecen afectar negativamente todos
tros que los suelos, pobres en arcillas y ricos en materia los procesos biolgicos, al menos temporariamente. El efecto de un pesticida sobre la microflora se evala
orgnica, nitratos, P, K, Ca y Mg, presentando alta CIC El mismo efecto se encontr con la mayora de los frecuentemente en el laboratorio, bajo condiciones con-
(capacidad de intercambio catinico), saturacin en ba- metales pesados troladas. En estos casos la determinacin de la dosis que
ses y alto porcentaje de humedad. El cuadro 8 resume acta sobre los organismos resulta difcil de precisar, so-
las caractersticas del proceso y la figura 3 muestra un herbicidas, insecticidas, son menos perjudiciales para bre todo con pesticidas voltiles.
cantero de vermicompostaje. la microflora y en algunos casos, pueden estimularla.
Cuando las sustancias son fuertemente adsorbidas en los
Entre los procesos: la nitrificacin es altamente sensible, coloides del suelo, se pueden acumular altas concentra-
Cuadro 8- Vermicompostaje mientras que la mineralizacin del nitrgeno es bastante ciones en las capas superficiales. La concentracin pue-
resistente. de ser ms alta en la zona de la corona, por movilizacin
el material se dispone en canteros del producto por los tallos. En esa zona la actividad biol-
* ancho: 1-1.20 m La eficacia de un pesticida se determina por la dosis le- gica es grande y actan gran nmero de patgenos.
* altura: 0.30-0.40 m Figura 3- Produccin de vermicompost tal, que asegura la muerte de la poblacin entera y la dosis
* largo: variable letal 50 (DL 50), que elimina al 50% de los componentes Con sustancias muy adsorbidas, se emplean dosis altas
de la poblacin. En respuesta al efecto causado por los en los modelos experimentales, como reflejo de la prcti-
material picado y bien mezclado (puede ser pre- En resumen: el empleo de compost o vermicompost en pesticidas, los microorganismos muestran gran adaptabi- ca de campo.
compostado) la agricultura es muy ventajoso, funcionan como fertili- lidad, evidenciada por el rpido restablecimiento de la
* sustrato recomendado: estircol, restos de caf, zantes nitrogenados de liberacin lenta con accin resi- actividad metablica. El estudio de la biodegradacin de sustancias con ca-
t y yerba dual prolongada, de modo que se incrementa la eficien-
rcter biocida no es sencillo en aguas, suelos, alimentos,
* evitar: ajo, cebolla, residuos ctricos cia de absorcin por las plantas, con mayores produc- Los mecanismos pueden ser: ya que muchas veces las concentraciones son muy ba-
tividades al compararla con el empleo de fertilizantes
reemplazo de especies sensibles por otras tolerantes, jas, del orden de las partes por milln (mg/kg).
humedad: 60-80% nitrogenados solubles. Su aplicacin puede incrementar
la retencin de agua en el suelo. Prcticamente todos muy frecuente en el caso de especies de rhizobios
Mtodos
los restos orgnicos generados y acumulados en esta-
por una rpida recolonizacin del ambiente luego de los Qumicos: se deben emplear tcnicas muy sensibles: cro-
Para la elaboracin del vermicompostaje pueden utili- blecimientos agropecuarios son capaces de estabilizarse
tratamientos biocidas matografa en fase gaseosa o lquida, espectrofotometra
zarse una gran variedad de sustratos, las lombrices pre- mediante este proceso microbiano.
con luz ultravioleta, para detectar trazas de pesticidas o
fieren los estircoles pero atacan cualquier tipo de made sus intermediarios en la degradacin.
teria orgnica, siempre que no sea muy cida o muy olo- El cuadro 9 presenta los resultados del agregado de 20
Evaluacin de efectos inhibidores o txicos
rosa. El vermicompostaje es una tcnica competitiva toneladas de compost por hectrea sobre el rendimiento
Biolgicos: actividad respiratoria, el desprendimiento
frente a compostaje tradicional aunque presenta algu- de maz, en un suelo arcilloso calcreo, con cultivo ante-
Numerosos estudios se han realizado en torno a los efec- de CO2 o el consumo de O2 de muestras de suelo o aguas
nas desventajas: rior de trigo y con riego.
tos laterales de los pesticidas sobre los microorganis- tratadas con el producto en estudio y algn sustrato cuya
mos y sobre sus interacciones. La aplicabilidad de estos transformacin se desea seguir, glucosa, celulosa, bio-
Precisamente, el citado Convenio de Estocolmo apunta y verduras para la exportacin, la lucha contra insectos, Cuadro 9 - Efecto del agregado de compost en Biodegradacin anaerobia
sus esfuerzos en dotar a los pases que lo necesiten de etc. liberan en los ecosistemas naturales grandes canti- cultivo de maz de restos orgnicos
asistencia tanto tcnica como financiera para disminuir en dades de sustancias de lenta biodegradacin.
primera instancia las emisiones nocivas de los COP y se Con compost Sin compost La digestin anaerobia consiste en una serie de procesos
intenta que la Organizacin de las Naciones Unidas (ONU) Las investigaciones sobre el efecto de muchos de estas Rendimiento kg/ha 7.750a 5.850b de degradacin microbiana de la materia orgnica en au-

impulse la eliminacin de al menos estos 12 contaminan- sustancias en las comunidades microbianas naturales y sencia de agentes oxidantes (O2, NO3 , S04=).
tes persistentes, mediante la prohibicin de su produc- sobre los mecanismos de degradacin se han estimulado Interaccin del compost x dosis de N-urea (kg/ha)
cin, exportacin e importacin. por los riesgos reales o potenciales asociados con el em- Como productos finales de esta degradacin se produ-
Dosis de N 0 50 100 150 200
pleo indiscriminado de los xenobiticos. Con compost 7750 9940 10470 10830 10880
ce una mezcla de gases (biogs) con predominio de
Sin compost 5850 8750 9640 10740 10470 metano (CH4) usado como combustible y materia org-
Efecto sobre la microflora del suelo Los pesticidas son sustancias qumicas destinadas al con- nica estabilizada, el biofertilizante, activador de la po-
trol de poblaciones no deseadas (pestes), de muy distin- blacin microbiana y mejorador de las propiedades fsi-
El efecto de estas sustancias en segmentos de la pobla- tos grupos taxonmicos y se caracterizan por los organis- Como se aprecia globalmente sobre todas las parce- cas del suelo.
cin depender de: mos que atacan: insecticidas, nematicidas, herbicidas, las, el efecto de la enmienda fue favorable (a 10% de
fungicidas. Otros, destinados a la supresin de roedores confianza), sobretodo sin fertilizacin o con bajas do- Interviene en este proceso una poblacin microbiana muy
su composicin qumica, dosis, mtodos de aplicacin y moluscos, han recibido menos atencin. heterognea que acta en una cadena alimentaria. Uno
sis de nitrgeno. El agregado de compost economiza
parmetros fsico-qumicos del ambiente, como pH, tem- unos 50kg de N-urea/ha, como surge de los datos del de los grupos terminales de esta cadena son las metano-
peratura, agua En muchos pases no se llevan estadsticas sobre el uso de cuadro 9. bacterias, responsables de la produccin de gas meta-
estas sustancias y debemos remitirnos a las cifras sobre no, usado como combustible. El sustrato que entra a los
No existen muchos datos cuantitativos sobre las transfor- sus importaciones. El empleo masivo de herbicidas selecti- El cuadro 10 compara estos procesos controlados con la biodigestores rurales est compuesto principalmente por
maciones de muchos de estos productos txicos, salvo, vos comenz hacia la mitad de la dcada del 40, luego del degradacin de la materia orgnica realizada en la natu- estircol u otras materias orgnicas diludas: una mezcla
quiz, lo referente a los pesticidas, sobre los cuales las descubrimiento del 2,4-D, pero el control qumico de male- raleza en condiciones naturales. compleja de celulosa, hemicelulosa, lignina, protenas, l-
investigaciones son ms abundantes. Los xenobiticos zas est an poco desarrollado, si se lo compara a los lo- pidos, minerales, etc. Los microorganismos utilizan es-
interfieren con procesos importantes como: gros en el mejoramiento vegetal y con otros aspectos de tos compuestos para obtener energa y como fuente de
las ciencias del suelo. Se pretende lograr que un agente Cuadro 10- Diferencias entre degradacin de carbono, mineralizando cada vez ms los restos orgni-
fotosntesis qumico especfico acte selectivamente sobre una deter- cos hasta alcanzar un equilibrio. En la digestin anaero-
la materia orgnica en el suelo y en el
metabolismos oxidativos minada planta. Los mtodos de control de malezas son compostaje bia se distinguen cuatro etapas (figura 4).
numerosos: fsicos o mecnicos (competencia por el culti-
sntesis celulares vo, rotaciones), biolgicos, qumicos, el fuego, etctera. Hidrlisis de biopolmeros
La concentracin de nutrientes es mayor en el compost
algunos, como los derivados clorados actan sobre la Fermentacin
Muchas de estas sustancias, sobre todo los herbicidas, La estructura del suelo no permite la liberacin brusca de
composicin de la membrana celular, alterando su per-
se aplican directamente en la superficie o llegan a las ca- calor (el mismo se disipa y la temperatura no sube) Acetognesis y deshidrogenacin
meabilidad y la fisiologa celular
pas superficiales del suelo, otros se pulverizan sobre el
follaje, pero se ponen en contacto con los microorganis- Los organismos termfilos no se incrementan en el suelo Metanognesis
Los mtodos empleados para estudiar sus efectos son
mos al caer las hojas o cuando las plantas mueren. Estas como lo hacen en los compost
los clsicos en estudios de ecologa microbiana (captulo
8) y Anexo prctico, pero en las ltimas revisiones sobre aplicaciones pueden alcanzar zonas vecinas cuando las La velocidad de los cambios es muy diferente (45-200 das
Hidrlisis: la primera etapa de la degradacin de la ma-
el tema se destaca la necesidad de estandarizar las tcni- molculas son voltiles. El agua de riego puede contami- en el compost, aos en el suelo) teria orgnica es llevada a cabo por enzimas hidrolticas
cas que reflejan los efectos de estas sustancias sobre gru- narse, constituyendo sta otra va de entrada al suelo. de mltiples microorganismos que utilizan los compues-
pos y procesos microbianos de importancia para la conti- La accin del viento y el mezclado facilita la degradacin tos de la hidrlisis. Posteriormente acta otro grupo que
nuidad de los ciclos de los elementos en la naturaleza. Las interacciones entre los pesticidas y los microorga- en el compost ataca los productos resultantes de la accin del primer
nismos sern analizadas desde dos puntos de vista: grupo y asi sucesivamente conformando una cadena tr-
Mayor diversidad de materiales compostados
fica con una poblacin microbiana en equilibrio.
Pesticidas Baja carga contaminante y remocin de semillas de male-
sobre los microorganismos: estas sustancias pueden zas en el compost La fermentacin es la fuente de energa en las condicio-
afectar habitantes no patgenos de los ecosistemas natu- nes de anaerobiosis y de falta de luz de este sistema. Los
Su empleo se ha incrementado en los ltimos aos y tan-
rales, o sus interacciones con el consiguiente efecto sobre
to la agricultura moderna, como la conservacin de frutas
principales productos finales de la hidrlisis y la fermenta- Cada biodigestor es diferente ya que debido a que las in- Cuadro 2- Propiedades que alteran la los clorados), plsticos y polmeros sintticos relaciona-
cin son CO2, H2, propionato, acetato y butirato. teracciones entre los microorganismos son mltiples y comple- biodegradacin de compuestos orgnicos dos y un conjunto de derivados de la industria.
jas, en cada uno se alcanzarn poblaciones distintas. contaminantes
Existen bacterias que degradan el propionato y el butirato
llevndolo a acetato, H2 y CO2. Estas bacterias actan sinrgi- No se puede hacer consideraciones taxonmicas gene- 1 Carencia de oxgeno en su molcula (hidrocarburos)
Convencin de Estocolmo sobre contaminan-
camente (sintrofia) con otros microorganismos que consu- rales pero es importante conocer los grandes grupos fi-
tes orgnicos persistentes (COP)
2 Enlaces saturados (hidrocarburos alifticos no satura
men el H2 producido y de esta forma permiten que se esta- siolgicos de microorganismos presentes. Los microor- dos y los aromticos tienden a ser ms rpidamente ata- El Convenio de Estocolmo surgi luego de largos aos de
blezca el primer grupo (que es inhibido por el hidrgeno). ganismos se agrupan de acuerdo a las reacciones que cados que los no saturados) negociaciones que permitieron alcanzar un compromiso
emplean en la generacin de energa y se relacionan a su 3 Longitud de la cadena, los hidrocarburos alifticos con de los pases para eliminar a los llamados COP. Comen-
La metanognesis (respiracin anaerobia) es la ltima vez con el consumo y produccin de hidrgeno. cadenas laterales cortas son ms rpidamente degra- z a regir en 2004 y la primera Conferencia de los pases
etapa de la cadena trfica y las bacterias metanognicas dados que los hidrocarburos de ms alto peso molecular miembros, que tuvo lugar en Punta del Este, Uruguay, en
producen CH4 por la siguiente reaccin: La clasificacin se esquematiza en el cuadro 11. 4 La polimerizacin de la molcula limita su biodegrada- mayo de 2005 defini en un principio los 12 los productos
cin considerados sucios (cuadro 3) y sobre los que se pien-
CO2 + 4 H2 CH4 + 2 H2O 5 Su escasa solubilidad en agua (molculas hidrofbicas) sa que deben tomarse medidas urgentes para erradicar-
Cuadro 11 - Microorganismos en biodigestores los del planeta en un plazo que los expertos no pueden
Como se observa consumen hidrgeno, por lo que po- anaerobios 6 La estructura y nmero de anillos aromticos
precisar. La lista de estos productos genera desechos al-
seen un papel regulador en el biodigestor. 7 El incremento de la ramificacin de la molcula disminu-
tamente peligrosos para la salud humana y pueden pro-
Grupo Caractersticas ye la biodegradacin vocar su muerte o generar enfermedades y malformacio-
Tambin se puede producir metano a partir de acetato Productores de hidrgeno 8 El nmero y la posicin de grupos halgenos, nitro,ami- nes tanto en el hombre como en otras especies animales.
(metanognesis acetoclstica). no, sulfonato
hidrlisis de biopolmeros, fermentacin de azucares, aminocidos,
cidos grasos (bacterias, hongos, protozoos) 9 El entrecruzamiento con otras molculas impide llegar a Cuadro 3- Contaminantes orgnicos persistentes
CH3 COOH CH4 + CO2 las enzimas (complejo ligno-celulsico)
(COP)
anaerobias facultativas consumen el O2 presente
Residuos (protenas, 10 Volatilizacin
polisacridos) Aldrin Plaguicida usado en varios cultivos
anaerobias estrictas actan a bajo nivel de O2, 11 Solubilidad en agua
Hidrlisis biopolmeros fermentativos Bifenilos policlorados Compuestos usados como aditivos en

12 Molculas orgnicas unidas a arcilla son ms resisten- productos de la industria grfica, entre
Monmeros (azcares, tes a la degradacin (1g de la arcilla montmorillinolita
aminocidos) aerotolerantes actan en presencia de O2, otras
presenta 600 m2 de rea superficial)
bacterias lcticas Clordano De uso agrcola

13 El complejo arcilla/humus puede inactivar exoenzimas

Fermentacin DDT Uno de los ms conocidos insecticidas,
CO2 + H2 Bacterias sintrficas: acetognesis y deshidrogenacin (celulasa) o adsorber al sustrato
Acetato
Propionato
con numerosas aplicaciones
anaerobias obligadas: requieren siempre de otro microorganis- 14 Ambientes extremos: temperatura, sequedad, pH, altas Dieldrin Insecticida, contra termitas

mo para crecer concentraciones de sal

Acetato Dioxinas Generadas por combustin en la fabri-

Acetato CO2 + H2 15 Restricciones fisiolgicas: carencia de las enzimas re- cacin de plaguicidas, entre otros
anaerobias facultativas: pueden crecer en cultivo puro
Metanognesis queridas. Transporte de la sustancia en el suelo, limita-
Endrin Insecticida empleado en algunos cultivos
cin de nutrientes esenciales (N, S, P. etc.)
y contra roedores

Consumidores de hidrgeno

CH4 Furanos Compuestos producidos por diversas

Bacterias metanognicas, anaerobias estrictas, productoras de
Un concepto muy popular en el pasado, antes de la dca- emisiones como incineradores y auto-
CH4, crecen slo con menos de 5 ppm de O2
da del 60, sostena que esencialmente toda sustancia mviles
Figura 4- Esquema de las etapas de la digestin anaerobia
orgnica introducida en la biosfera debera ser meta- Heptaclorobenceno Insecticida
bolizada por los microorganismos en un perodo de Hexaclorobenceno Herbicida, contra malezas
Bacterias hidrolticas y fermentadoras tiempo razonablemente corto. Este concepto actual- Mirex Insecticida y usado tambin en produc-
Poblacin microbiana
mente no es del todo correcto ya que vimos que hay sus- tos plsticos
Se encuentran bacterias anaerobias facultativas como las tancias sintticas recalcitrantes y que persisten en el sue- Toxafeno Insecticida usado en ciertos cultivos de
Dentro del biodigestor coexisten distintos grupos de microor-
enterobacterias, las aerotolerantes como las del cido lcti- lo en ciertas condiciones por largos perodos, como son cereales y hortalizas
ganismos: bacterias, hongos y protozoarios (Soubes, 1994).
los bifenilos policlorados, ciertos pesticidas (sobretodo
Muchos polmeros sintticos se encontraran en la ca- propiedades quimiodinmicas del producto co y bacterias anaerobias estrictas como Clostridium, Bac- La reduccin del sulfato a sulfuro es ms favorable termo-
tegora 1. teroides, Propionibacterium. Las enterobacterias como E. dinmicamente que la produccin de metano. Si existe alta
propiedades fsico-qumicas del suelo coli poseen la enzima formiato liasa responsable de la disponibilidad de sulfatos proliferarn estas bacterias con
La lignina es un ejemplo de la segunda categora ya que generacin de H2 a partir de formiato, pero tal vez su rol consecuencias negativas: van a emplear el H2 (sustrato de
su transferencia en las interfases suelo-agua y suelo-
es sustrato para algunos hongos aunque no es desasimi- fundamental es la remocin del O2. Las bacterias lcticas las metanognicas) y producen sulfuros, txicos a concen-
aire y a travs de membranas biolgicas
lada rpidamente. Ciertos hidrocarburos clorados con producen cido lctico y a veces etanol y CO2, a partir de traciones elevadas e indeseable en el gas de salida.
carcter insecticida son ejemplos de la tercera categora, En la mayora de los casos las sustancias orgnicas bio- azcares. Propionibacterium fermenta cido lctico con li-
ya que muchos son metabolizados en medios de cultivo, degradables sufren los mismos tipos de reacciones de beracin de H2 y acetato, o acetato y propionato. En virtud del elevado nmero de bacterias sulfatoreductoras
pero su mineralizacin a CO2, H2O y Cl2 no ha sido de- ruptura y simplificacin que las sintticas, a saber: decar- que existen en los reactores anaerobios y en los biodigesto-
mostrado in situ. En la ltima categora se pueden ubicar boxilacin, desaminacin, hidroxilacin, -oxidacin e hi- res rurales, aun en asusencia de sulfato (pueden metabolizar
algunos hidrocarburos derivados del petrleo y cons- drlisis de enlaces ster. Procesos biticos y abiticos Bacterias acetognicas reductoras obligadas lactato dando acetato, CO2 y H2), se postula que ejercen im-
tituyentes vegetales. pueden transformar a los productos alterando su estado de protones portante rol como acetognicas deshidrogenantes.
qumico y consecuentemente su toxicidad y reactividad.
En los ltimos 50 aos, se han producido en la industria Idealmente se espera su conversin a: Son las conocidas bacterias sintrficas obligadas que se ca-
ms de 600.00 toneladas de sustancias orgnicas y se racterizan por su imposibilidad de crecer en cultivo puro. Ne- Bacterias acetognicas
estima que un 15% han entrado al ambiente (Stevenson y CO2, H2O, minerales cesitan asociarse estrechamente a microorganismos consu-
Cole, 1999). midores de H2. En el laboratorio se las mantiene junto a una Son las que crecen a expensas de la reaccin:
sustancias menos txicas bacteria metanognica hidrogenoflica, o a una sulfatoreduc-
En trminos de cantidad, los xenobiticos orgnicos son tora en presencia de sulfato, que en estas condiciones fun- H2 + 2CO2 = acetato + H2O + H+
Pero se pueden formar productos intermediarios que se
los ms numerosos: 114 compuestos han sido designa- ciona como consumidor de H2. Los sustratos naturales que
convierten en polucionantes txicos.
dos por la Agencia de Proteccin Ambiental de los Esta- oxidan son cidos grasos saturados, etanol y benzoato. Al- Pertenecen a gneros diversos como Acetobacterium,
dos Unidos como polucionantes, en 1982. Los ms peli- gunas de las reacciones de las que generan energa: Acetogenium y Clostridium. Tambin pueden realzar otros
Las propiedades fsicas y qumicas de la molcula del
grosos son los halogenados, especialmente los aromti- metabolismos y slo un 10% del carbono en los reactores
polucionante afectan su biodegradacin (cuadro 2). La
cos por sus efectos sobre la biocenosis y su carcter re- etanol + H2O= acetato- + 2H2 + H+ sufrir esta transformacin.
mayora de los compuestos orgnicos poseen grupos hi-
calcitrante en el ambiente. Consecuentemente persisten
droxilos y carboxilos (OH y COOH) que son rpidamente butirato- + 2H2O = 2acetato- + 2H2 + H+
en el suelo porque no son susceptibles de transformacio-
oxidados.
nes biolgicas a rangos normales. Bacterias desnitrificantes
No pueden transferir los equivalentes de reduccin del
El cuadro 1 muestra algunos ejemplos de compuestos NADH a ningn aceptor externo que no sean los proto- Estas bacterias que obtienen energa de la oxidacin de
Cuadro 1 Ejemplo de importantes xenobiticos nes. Algunas especies conocidas: Syntrophobacter woli-
orgnicos detectados en suelos y que representan poten- compuestos orgnicos y compuestos de azufre reducido
orgnicos nii que usa propionato y crece en cocultivo con Desulfovi-
cial peligro para el ecosistema suelo-planta-hombre, mu- e H2, con nitratos como aceptores de electrones, estn
chos se reconocen o sospechan como cancerognicos o brio, Syntrophomonas sapovorans, crece con cidos gra- presentes en los reactores anaerobios y se les atribuye
Tipo Ejemplos sos de C4 a C18 asociada con Methanospirillum.
mutagnicos. Los halogenados aromticos ejercen efec- junto a las Enterobacterias el rol de remocin del oxgeno
tos negativos en la microflora y son reconocidos recalci- Alifticos (halogenados) tricloroetano, tricloro metano, del sistema. Especies del gnero Pseudomonas son las
trantes. Fueron introducidos por el hombre, de modo que cloruro de metilo, tetracloetano ms distribudas en la naturaleza.
se consideran verdaderos xenobiticos. Alifticos(no halogenados) acilonitrilo, tolueno, benceno, Bacterias sulfatoreductoras
nitrobenceno,fenol cresol
Como el suelo es el reservorio ltimo de la mayora de Aromticos (halogenados) pentaclorofenol, clorobenceno Emplean los productos de las fermentaciones como sus- Bacterias metanogenticas
hexaclorofenol, diclorobenceno tratos en la reduccin de sulfatos a sulfuros, de la cual
ellos, sus efectos sobre poblaciones microbianas y la ac-
Policclicos(no halogenados) naftaleno, benzopireno, obtienen energa. Se dividen en dos grupos:
cin de stas sobre estas molculas resulta de gran im- antraceno, bifenil, fenantraceno Estos microorganismos tienen caractersticas especiales:
portancia en la determinacin de sus consecuencias. son Arquebacterias, hoy denominadas archae, orga-
oxidantes completos que liberan CO2, H2O y S=, pue- nismos muy primitivos que se distinguen de las bacte-
Policclicos (halogenados) bifenilos policlorados (PCBs)
Una vez liberadas al ambiente la distribucin de estas den degradar cidos orgnicos de hasta 18 carbonos rias tpicas por poseer un seudopeptidoglicano en su
Pesticidas lindano, toxafeno, DDT, 2,3-D
sustancias depende de: dieldrin, heptaclorobenceno oxidantes incompletos: liberan acetato, CO , S=, algu- pared, algunos gneros poseen recubrimientos exte-
2
nas propionato y butirato, que en general no pueden riores solamente protecos (capa S en Methanococ-
seguir degradando cus), o una capa polisacrida junto a la capa S
(Methanosarcina), una capa S y seudomurena (Me- ter. Muchas de ellas a su vez pueden emplear tambin
thanothermus) y diferente composicin lipdica en la formiato, algunas pocas isopropanol e isobutirato.
membrana lo que las hace muy resistentes a pH ba-
jos, altas temperaturas. cido frmico 0,25 CH4 + 0,75 CO2 + 0,5 H2O
metanol 0,75 CH4 + 0,25 CO2 + 0,5 H2O
22
son anaerobias estrictas y requieren concentraciones
de oxgeno menores de 5 mg/L en el cultivo
El gnero Methanosarcina es el ms verstil entre los
metanognicos, ya que posee especies capaces de em-
Degradacin de xenobiticos
el pH ptimo de la mayora de las cepas aisladas es de 7
plear H2, metilaminas y acetato. Los microorganismos
temperatura: existen cepas mesfilas y termfilas metanognicos son sensibles a sustancias txicas como
sales de metales pesados, detergentes, desinfectantes y
son los nicos microorganismos capaces de gene- antibiticos, por lo que se debe prestar atencin especial impurezas en formulaciones de pesticidas (dioxinas clo-
Un nuevo enfoque del ciclo del carbono en los suelos y
rar metano y poseen enzimas exclusivas como hidro- a este aspecto en el momento de cargar el biodigestor. radas) y solventes halogenados.
aguas ha sido introducido como consecuencia del incre-
genasas con cofactores como el F420 y F 430, que fluore- Asimismo el amonaco y el sulfuro resultan txicos a nive- mento en el uso de sustancias orgnicas sintticas para
ce con luz ultravioleta de 420 nanometros y permite asi les superiores de 100 y 150 mg por litro, respectivamente. Otros xenobiticos provienen de la industria manufactu-
el control de plagas.
visualizar clulas y colonias de estos organismos. Es- rera, efluentes de industrias, aguas residuales, actividad
tas metaloprotenas determinan mecesidades especia- La bioqumica y microbiologa dentro del biodigestor deben Generalmente estas sustancias se denominan xenobi- de minas, de las industrias petrolera, del papel, agrcola.
les de Ni, Fe, Co y Se. No presentan metabolismos alter- ser tenidas en cuenta para el manejo del mismo. Por ejem- Los compuestos orgnicos: sintticos e introducidos con-
ticas (xeno= extrao, bitico= vida).
nativos. plo, si aumenta la concentracin de hidrgeno en el siste- tinuamente o los naturales, formados en la biosfera, se
ma, se detiene el metabolismo de las bacterias producto- Son compuestos orgnicos o minerales sintticos, con pueden dividir en dos categoras segn su persistencia
Por los sustratos que pueden degradar se dividen ras de hidrgeno que tambin metabolizan butirato, propio- en el suelo:
estructura y comportamiento en el ambiente diferentes a
en: nato y cidos grasos de cadena larga. En estas condicio-
las de la mayora de las sustancias orgnicas naturales.
nes el biodigestor se acidifica y disminuye la produccin de Son introducidos en el ambiente por actividades del hom- Los biodegradables y aquellos que son resistentes a la
1. hidrogenotrficas, capaces de producir metano a partir biogs, por lo que se debe interrumpir el ingreso de nuevo biodegradacin y se conocen como recalcitrantes o re-
bre a concentraciones que provocan efectos indeseables.
de H2 y CO2: sustrato orgnico para restablecer el equilibrio original. frctiles que se degradan muy lentamente o no la hacen.
Estos compuestos pueden ser degradados por reaccio-
CO2 + 4H2 CH4 + 2H2O nes abiticas y biticas. Estas ltimas, las microbianas, La separacin entre ambos grupos es muchas veces arbi-
son ms significativas en el ambiente ya que los sistemas traria, ya que ciertas molculas orgnicas pueden ser bio-
2. aceticlsticos, que producen metano y anhdrido car- Biofertilizante enzimticos aceleran el proceso de degradacin y pue- degradables bajo ciertas condiciones del suelo, pero no en
bnico a partir de acetato den conducir a una completa degradacin o mineraliza- otras. Muchos compuestos sintticos derivados de alcanos
cido actico El efluente de la digestin anaerobia en los biodigesto- o simples compuestos aromticos son ms lentamente de-
CH4 + CO2 cin del agente polucionante.
res se denomina biofertilizante. Es un producto muy apto gradados en sedimentos de suelos inundados o bajo con-
3. metiltrofos, que metabolizan compuestos como me- para ser usado como fertilizante orgnico e inclusive Algunos de estos compuestos son liberados al ambiente diciones anaerobias, en relacin a suelos bien aereados, lo
tilaminas y metilsulfuros muchos establecimientos agropecuarios instalan biodi- que se explica por la necesidad del O2 en las reacciones
por el hombre con el objeto de controlar plagas, caso de
gestores con el fin primario de obtener un fertilizante enzimticas responsables de su degradacin.
los pesticidas, o agrotxicos, cuya persistencia y trans-
metilamina 0,5 H2O + 0,75 CH4 + 0,25 CO2 orgnico complejo, cuya composicin variar de acuer- formaciones reflejan su eficacia como producto y su peli-

do al material orgnico. Se reconocen categoras en las sustancias recalcitrantes:
gro potencial para la microflora y la calidad del ambiente.
dimetilamina + H2O 1,5 CH4 + 0,5 CO2 + NH3 En los casos comunes de biodigestores rurales se utiliza Ms de 1.000 de estos compuestos estn registrados, 1- compuestos muy recalcitrantes
estircol diludo, el biofertilizante resultante es una desde molculas simples como el bromuro de metilo 2- los que son slo lentamente biodegradables
trimetilamina + 1,5 H2O 2,25 CH4 + 0,75 CO2 + NH3 suspensin homognea cuyo valor no est dado en la (CH3Br) hasta molculas muy complejas como el aldrn. 3- compuestos que pueden ser utilizados rpidamente por
cantidad de nutrientes qumicos para las plantas (por ejem- Cerca del 97% son herbicidas, insecticidas y fungicidas cultivos microbianos en el laboratorio, pero que no se
El mayor nmero de especies de bacterias metanogni- plo nitrgeno o fsforo), sino como activador de la po- que representan 65, 25 y 7% respectivamente. Los res- sabe si lo pueden hacer en la naturaleza
cas pertenecen al primer grupo, y las ms frecuente son blacin microbiana del suelo con la resultante dinamiza- tantes 3% corresponden nematicidas, acaricidas, etc. 4- compuestos aptos para microorganismos en cultivos
Methanobacterium, Methanospirillum y Methanobrevibac- cin de toda la actividad biolgica. Otros son los aditivos en los plsticos (ftalatos), coloran- axnicos y en uno o ms habitats microbiano, pero que
tes usados en teidos de prendas de vestir y alimentos, son persistentes en ciertas ocasiones.
En el proceso de digestin anaerobia la relacin carbo- caja de carga sale por la caja de descarga y el biodigestor
no/nitrgeno (C/N) baja, sealando una estabilizacin del mantiene siempre el mismo nivel. La presencia de una
producto, que se asemeja al humus, con la fraccin pared divisoria central hace un efecto de reciclaje dentro
lignocelulsica no degradada y abundante biomasa mi- del biodigestor.
crobiana.
El biogs es transportado por caeras hasta el lugar don-
Muchas veces se aprecia un incremento en el porcentaje de se emplea (calefaccin del tambo, luz) e incluso se
de nutrientes presentes en el biofertilizante respecto al envasa en cilindros para usos familiares o como combus-
material original. Sin embargo, el efecto principal sobre tible para vehculos.
los cultivos no es a partir de los nutrientes qumicos sino
al proceso activador sobre la poblacin microbiana del Campana o Salida de biogs
Gasmetro
suelo. Asimismo, se mejoran las propiedades fsicas del
suelo (que son las que regulan la aireacin y la dinmica a)
del agua). Caja de entrada Caja de
salida
La aplicacin de estos biofertilizantes en los primeros cen-
tmetros del suelo puede aportar en promedio:
Pared divisoria
+
N-NH4 252-280kg/ha sujeto a rpida mineralizacin
N-orgnico 336kg/ha liberado lentamente en la

degradacin
b) Modelo hind
P total 200-336kg/ha (80% en la fraccin orgnica)
Puerta
K total 45-90kg/ha Biogs
Los valores varan de acuerdo a la fuente, al tratamiento Caja de entrada biogs biogs
y otros factores, pero se aprecia que la cantidad de nitr- Tubo

Caja de salida
geno aplicada en este ejemplo excede a los requerimien-
tos vegetales, la misma tendencia se aprecia con los mi-
nerales, lo que refuerza la idea de aplicar controles en las
dosis y en el manejo del suelo cuando se aplican estos Modelo chino
biofertilizantes.
Figura 5 - Modelos de biodigestores
a) hind, b) chino
Biodigestores rurales
La figura 5 muestra los dos tipos ms frecuentes de biodi- El modelo chino requiere un diseo ms preciso y posee
gestores empleados en establecimientos agropecuarios, gran resistencia estructural y su vida til puede sobrepa-
el hind y el chino. En el modelo hind, el biogs forma- sar los 20 aos. Consta de caja de carga del material (es-
do se va acumulando bajo la campana que se eleva (flo- tircol y agua), una estructura prIncipal cerrada y una c-
ta) a medida que avanza el proceso. El biodigestor se carga mara compensatoria de presin que es a la vez la caja de
por una caja de entrada y se descarga por una caja de salida del material degradado. El gas se acumula en la
salida. Todo el sistema se maneja con el principio de va- bveda con lo que aumenta la presin interna que hace
sos comunicantes o sea que el volumen que entra por la que el contenido se desplace a la cmara compensatoria
de presin con lo cual sube el nivel de la misma. Al usarse Bibliografa den reunir en una ciudad? Se puede lograr un pro- tamaos pequeos para ser aplicados en la indus-
el biogs la presin de la cmara baja y el lquido entra ducto final de composicin similar? tria. Qu debe contener el llamado reactor? Los
nuevamente al cuerpo principal. Food and Agriculture Organization Recliclaje de Ma- 7) Se puede pasar de la escala de camellones (pilas lar- tiempos en que ocurren las distintas etapas micro-
teria Orgnica y Biogs, FAO, 1986, Santiago de gas y unos 2 m de altura) de residuos a una escala biolgicas pueden descender?
Segn las condiciones climticas se calculan unos 20 das Chile industrial? Qu se requiere de infraestructura? Prin- 10) Cmo evaluara la calidad de un biofertilizante?
para que ocurran las diferentes etapas del proceso Kiehl, E. J. Fertilizantes Orgnicos, 1985 Editora Agro- cipales limitantes. 11) Qu exigencias mnimas se le debe exigir a estos
nmica, Ceres, San Pablo 8) Qu opinin le merece si le ofrecen un biofertili- productos?
En el manejo de grandes volmenes de residuos domi- Lambais; M. R. Poluao Organica e seu Controle. En : zante que presenta: malos olores, pH ligeramente 12) Compare estos procesos de biodegradacin (aero-
ciliarios e industriales se emplean reactores anaerobios Microbiologia do Solo, 1992, Sociedade Brrasileira cido y ms N-amonio en relacin a N-nitrato? bia y anaerobia) con la degradacin natural, en la
de distinto diseo que permiten que las 4 etapas del pro- de Ciencia do Solo, Campinas (SP): 91-104 9) Los biodigestores anaerobios pueden disearse en naturaleza.
ceso se realicen rpidamente durante el flujo de lquido Mustin, M. Le compost: Gestion de la matire organi-
con restos orgnicos (3-5 das). Tambin ocurre el proce- que, 1987, Franois Dubusc (ed), Pars: 954 pp.
so en lagunas donde los efuentes permanecen en pero- Soubes, M. Microbiologa de la digestin anaerobia. En:
dos entre 5 a 30 das. Tratamiento Anaerobio, 1994 III Taller y Seminario
Latinamericano: Tratamiento Anaerobio de Aguas
En resumen: los factores que ms influyen en la eleccin Residuales, Universidad de la Repblica, Montevi-
de un sistema anaerobio son: deo: 15-28
Stevenson, F. J. y Cole, M. A. Cycles of Soils, Carbon,
la baja produccin de lodo biolgico (biomasa) con me-
Nitrogen, Phosphorus, Sulfur, Micronutrients, 1999
nores costos de deposicin Wiley & Sons, New York
altas eficiencias de tratamiento (comparable a otras Zibilske, L. M. Composting of organic wastes. En: Princi-
alternativas) ples and Applications of Soil Microbiology. 1998,
Sylvia, Fuhrmann, Hartel y Zuberer (eds), Prentice Hall,
bajos costos de inversin inicial y menores costos de N. Jersey: 482-497
operacin (no requieren O2)
produccin de metano (uso potencial como combustible)
Preguntas de repaso
bajos requerimientos de nutrientes (menor que en el
sistema aerobio) 1) Analice el concepto de residuo. Y cite ejemplos genera-
dos en establecimientos agropecuarios, en las ciuda-
La figura 6 resume las similitudes y diferencias entre la des y en los domicilios.
degradacin natural, en el suelo mismo de restos orgni- 2) Compare los procesos de biodegradacin aerobia y
cos y la dirigida por el hombre desde muy antiguo, para anaerobia de residuos orgnicos slidos con el ensi-
conducir y acelerar los procesos degradativos. laje de forrajes.
3) Similitudes y diferencias entre los procesos aerobios y
Degradacin de sustratos orgnicos anaerobios
4) En el caso de un tambo, como se puede realizar

la depuracin de los efluentes? Ha visitado algu-
Natural Dirigida na? Cmo determinara que el agua puede ver-
Los procesos de degradacin de Bajo condiciones controladas,
terse finalmente al suelo o a causes de agua (ros,
los residuos orgnicos tienen una se logra acelerar la velocidad de arroyos)?
dinmica continua: se trata de descomposicin de residuos 5) Cmo definira un compost? Y cmo determinara
procesos que no se detienen
Est sujeta a las condiciones
que el mismo est maduro, es decir pronto para su
ambientales empleo en agricultura?
6) Qu limitaciones encuentra en la aplicacin de este
Figura 6- Procesos de biodegradacin natural y dirigidos proceso a mezclas de distintos sustratos que se pue-
de presin con lo cual sube el nivel de la misma. Al usarse Bibliografa den reunir en una ciudad? Se puede lograr un pro- tamaos pequeos para ser aplicados en la indus-
el biogs la presin de la cmara baja y el lquido entra ducto final de composicin similar? tria. Qu debe contener el llamado reactor? Los
nuevamente al cuerpo principal. Food and Agriculture Organization Recliclaje de Ma- 7) Se puede pasar de la escala de camellones (pilas lar- tiempos en que ocurren las distintas etapas micro-
teria Orgnica y Biogs, FAO, 1986, Santiago de gas y unos 2 m de altura) de residuos a una escala biolgicas pueden descender?
Segn las condiciones climticas se calculan unos 20 das Chile industrial? Qu se requiere de infraestructura? Prin- 10) Cmo evaluara la calidad de un biofertilizante?
para que ocurran las diferentes etapas del proceso Kiehl, E. J. Fertilizantes Orgnicos, 1985 Editora Agro- cipales limitantes. 11) Qu exigencias mnimas se le debe exigir a estos
nmica, Ceres, San Pablo 8) Qu opinin le merece si le ofrecen un biofertili- productos?
En el manejo de grandes volmenes de residuos domi- Lambais; M. R. Poluao Organica e seu Controle. En : zante que presenta: malos olores, pH ligeramente 12) Compare estos procesos de biodegradacin (aero-
ciliarios e industriales se emplean reactores anaerobios Microbiologia do Solo, 1992, Sociedade Brrasileira cido y ms N-amonio en relacin a N-nitrato? bia y anaerobia) con la degradacin natural, en la
de distinto diseo que permiten que las 4 etapas del pro- de Ciencia do Solo, Campinas (SP): 91-104 9) Los biodigestores anaerobios pueden disearse en naturaleza.
ceso se realicen rpidamente durante el flujo de lquido Mustin, M. Le compost: Gestion de la matire organi-
con restos orgnicos (3-5 das). Tambin ocurre el proce- que, 1987, Franois Dubusc (ed), Pars: 954 pp.
so en lagunas donde los efuentes permanecen en pero- Soubes, M. Microbiologa de la digestin anaerobia. En:
dos entre 5 a 30 das. Tratamiento Anaerobio, 1994 III Taller y Seminario
Latinamericano: Tratamiento Anaerobio de Aguas
En resumen: los factores que ms influyen en la eleccin Residuales, Universidad de la Repblica, Montevi-
de un sistema anaerobio son: deo: 15-28
Stevenson, F. J. y Cole, M. A. Cycles of Soils, Carbon,
la baja produccin de lodo biolgico (biomasa) con me-
Nitrogen, Phosphorus, Sulfur, Micronutrients, 1999
nores costos de deposicin Wiley & Sons, New York
altas eficiencias de tratamiento (comparable a otras Zibilske, L. M. Composting of organic wastes. En: Princi-
alternativas) ples and Applications of Soil Microbiology. 1998,
Sylvia, Fuhrmann, Hartel y Zuberer (eds), Prentice Hall,
bajos costos de inversin inicial y menores costos de N. Jersey: 482-497
operacin (no requieren O2)
produccin de metano (uso potencial como combustible)
Preguntas de repaso
bajos requerimientos de nutrientes (menor que en el
sistema aerobio) 1) Analice el concepto de residuo. Y cite ejemplos genera-
dos en establecimientos agropecuarios, en las ciuda-
La figura 6 resume las similitudes y diferencias entre la des y en los domicilios.
degradacin natural, en el suelo mismo de restos orgni- 2) Compare los procesos de biodegradacin aerobia y
cos y la dirigida por el hombre desde muy antiguo, para anaerobia de residuos orgnicos slidos con el ensi-
conducir y acelerar los procesos degradativos. laje de forrajes.
3) Similitudes y diferencias entre los procesos aerobios y
Degradacin de sustratos orgnicos anaerobios
4) En el caso de un tambo, como se puede realizar

la depuracin de los efluentes? Ha visitado algu-
Natural Dirigida na? Cmo determinara que el agua puede ver-
Los procesos de degradacin de Bajo condiciones controladas,
terse finalmente al suelo o a causes de agua (ros,
los residuos orgnicos tienen una se logra acelerar la velocidad de arroyos)?
dinmica continua: se trata de descomposicin de residuos 5) Cmo definira un compost? Y cmo determinara
procesos que no se detienen
Est sujeta a las condiciones
que el mismo est maduro, es decir pronto para su
ambientales empleo en agricultura?
6) Qu limitaciones encuentra en la aplicacin de este
Figura 6- Procesos de biodegradacin natural y dirigidos proceso a mezclas de distintos sustratos que se pue-
En el proceso de digestin anaerobia la relacin carbo- caja de carga sale por la caja de descarga y el biodigestor
no/nitrgeno (C/N) baja, sealando una estabilizacin del mantiene siempre el mismo nivel. La presencia de una
producto, que se asemeja al humus, con la fraccin pared divisoria central hace un efecto de reciclaje dentro
lignocelulsica no degradada y abundante biomasa mi- del biodigestor.
crobiana.
El biogs es transportado por caeras hasta el lugar don-
Muchas veces se aprecia un incremento en el porcentaje de se emplea (calefaccin del tambo, luz) e incluso se
de nutrientes presentes en el biofertilizante respecto al envasa en cilindros para usos familiares o como combus-
material original. Sin embargo, el efecto principal sobre tible para vehculos.
los cultivos no es a partir de los nutrientes qumicos sino
al proceso activador sobre la poblacin microbiana del Campana o Salida de biogs
Gasmetro
suelo. Asimismo, se mejoran las propiedades fsicas del
suelo (que son las que regulan la aireacin y la dinmica a)
del agua). Caja de entrada Caja de
salida
La aplicacin de estos biofertilizantes en los primeros cen-
tmetros del suelo puede aportar en promedio:
Pared divisoria
+
N-NH4 252-280kg/ha sujeto a rpida mineralizacin
N-orgnico 336kg/ha liberado lentamente en la

degradacin
b) Modelo hind
P total 200-336kg/ha (80% en la fraccin orgnica)
Puerta
K total 45-90kg/ha Biogs
Los valores varan de acuerdo a la fuente, al tratamiento Caja de entrada biogs biogs
y otros factores, pero se aprecia que la cantidad de nitr- Tubo

Caja de salida
geno aplicada en este ejemplo excede a los requerimien-
tos vegetales, la misma tendencia se aprecia con los mi-
nerales, lo que refuerza la idea de aplicar controles en las
dosis y en el manejo del suelo cuando se aplican estos Modelo chino
biofertilizantes.
Figura 5 - Modelos de biodigestores
a) hind, b) chino
Biodigestores rurales
La figura 5 muestra los dos tipos ms frecuentes de biodi- El modelo chino requiere un diseo ms preciso y posee
gestores empleados en establecimientos agropecuarios, gran resistencia estructural y su vida til puede sobrepa-
el hind y el chino. En el modelo hind, el biogs forma- sar los 20 aos. Consta de caja de carga del material (es-
do se va acumulando bajo la campana que se eleva (flo- tircol y agua), una estructura prIncipal cerrada y una c-
ta) a medida que avanza el proceso. El biodigestor se carga mara compensatoria de presin que es a la vez la caja de
por una caja de entrada y se descarga por una caja de salida del material degradado. El gas se acumula en la
salida. Todo el sistema se maneja con el principio de va- bveda con lo que aumenta la presin interna que hace
sos comunicantes o sea que el volumen que entra por la que el contenido se desplace a la cmara compensatoria
(Methanosarcina), una capa S y seudomurena (Me- ter. Muchas de ellas a su vez pueden emplear tambin
thanothermus) y diferente composicin lipdica en la formiato, algunas pocas isopropanol e isobutirato.
membrana lo que las hace muy resistentes a pH ba-
jos, altas temperaturas. cido frmico 0,25 CH4 + 0,75 CO2 + 0,5 H2O
metanol 0,75 CH4 + 0,25 CO2 + 0,5 H2O
22
son anaerobias estrictas y requieren concentraciones
de oxgeno menores de 5 mg/L en el cultivo
El gnero Methanosarcina es el ms verstil entre los
metanognicos, ya que posee especies capaces de em-
Degradacin de xenobiticos
el pH ptimo de la mayora de las cepas aisladas es de 7
plear H2, metilaminas y acetato. Los microorganismos
temperatura: existen cepas mesfilas y termfilas metanognicos son sensibles a sustancias txicas como
sales de metales pesados, detergentes, desinfectantes y
son los nicos microorganismos capaces de gene- antibiticos, por lo que se debe prestar atencin especial impurezas en formulaciones de pesticidas (dioxinas clo-
Un nuevo enfoque del ciclo del carbono en los suelos y
rar metano y poseen enzimas exclusivas como hidro- a este aspecto en el momento de cargar el biodigestor. radas) y solventes halogenados.
aguas ha sido introducido como consecuencia del incre-
genasas con cofactores como el F420 y F 430, que fluore- Asimismo el amonaco y el sulfuro resultan txicos a nive- mento en el uso de sustancias orgnicas sintticas para
ce con luz ultravioleta de 420 nanometros y permite asi les superiores de 100 y 150 mg por litro, respectivamente. Otros xenobiticos provienen de la industria manufactu-
el control de plagas.
visualizar clulas y colonias de estos organismos. Es- rera, efluentes de industrias, aguas residuales, actividad
tas metaloprotenas determinan mecesidades especia- La bioqumica y microbiologa dentro del biodigestor deben Generalmente estas sustancias se denominan xenobi- de minas, de las industrias petrolera, del papel, agrcola.
les de Ni, Fe, Co y Se. No presentan metabolismos alter- ser tenidas en cuenta para el manejo del mismo. Por ejem- Los compuestos orgnicos: sintticos e introducidos con-
ticas (xeno= extrao, bitico= vida).
nativos. plo, si aumenta la concentracin de hidrgeno en el siste- tinuamente o los naturales, formados en la biosfera, se
ma, se detiene el metabolismo de las bacterias producto- Son compuestos orgnicos o minerales sintticos, con pueden dividir en dos categoras segn su persistencia
Por los sustratos que pueden degradar se dividen ras de hidrgeno que tambin metabolizan butirato, propio- en el suelo:
estructura y comportamiento en el ambiente diferentes a
en: nato y cidos grasos de cadena larga. En estas condicio-
las de la mayora de las sustancias orgnicas naturales.
nes el biodigestor se acidifica y disminuye la produccin de Son introducidos en el ambiente por actividades del hom- Los biodegradables y aquellos que son resistentes a la
1. hidrogenotrficas, capaces de producir metano a partir biogs, por lo que se debe interrumpir el ingreso de nuevo biodegradacin y se conocen como recalcitrantes o re-
bre a concentraciones que provocan efectos indeseables.
de H2 y CO2: sustrato orgnico para restablecer el equilibrio original. frctiles que se degradan muy lentamente o no la hacen.
Estos compuestos pueden ser degradados por reaccio-
CO2 + 4H2 CH4 + 2H2O nes abiticas y biticas. Estas ltimas, las microbianas, La separacin entre ambos grupos es muchas veces arbi-
son ms significativas en el ambiente ya que los sistemas traria, ya que ciertas molculas orgnicas pueden ser bio-
2. aceticlsticos, que producen metano y anhdrido car- Biofertilizante enzimticos aceleran el proceso de degradacin y pue- degradables bajo ciertas condiciones del suelo, pero no en
bnico a partir de acetato den conducir a una completa degradacin o mineraliza- otras. Muchos compuestos sintticos derivados de alcanos
cido actico El efluente de la digestin anaerobia en los biodigesto- o simples compuestos aromticos son ms lentamente de-
CH4 + CO2 cin del agente polucionante.
res se denomina biofertilizante. Es un producto muy apto gradados en sedimentos de suelos inundados o bajo con-
3. metiltrofos, que metabolizan compuestos como me- para ser usado como fertilizante orgnico e inclusive Algunos de estos compuestos son liberados al ambiente diciones anaerobias, en relacin a suelos bien aereados, lo
tilaminas y metilsulfuros muchos establecimientos agropecuarios instalan biodi- que se explica por la necesidad del O2 en las reacciones
por el hombre con el objeto de controlar plagas, caso de
gestores con el fin primario de obtener un fertilizante enzimticas responsables de su degradacin.
los pesticidas, o agrotxicos, cuya persistencia y trans-
metilamina 0,5 H2O + 0,75 CH4 + 0,25 CO2 orgnico complejo, cuya composicin variar de acuer- formaciones reflejan su eficacia como producto y su peli-

do al material orgnico. Se reconocen categoras en las sustancias recalcitrantes:
gro potencial para la microflora y la calidad del ambiente.
dimetilamina + H2O 1,5 CH4 + 0,5 CO2 + NH3 En los casos comunes de biodigestores rurales se utiliza Ms de 1.000 de estos compuestos estn registrados, 1- compuestos muy recalcitrantes
estircol diludo, el biofertilizante resultante es una desde molculas simples como el bromuro de metilo 2- los que son slo lentamente biodegradables
trimetilamina + 1,5 H2O 2,25 CH4 + 0,75 CO2 + NH3 suspensin homognea cuyo valor no est dado en la (CH3Br) hasta molculas muy complejas como el aldrn. 3- compuestos que pueden ser utilizados rpidamente por
cantidad de nutrientes qumicos para las plantas (por ejem- Cerca del 97% son herbicidas, insecticidas y fungicidas cultivos microbianos en el laboratorio, pero que no se
El mayor nmero de especies de bacterias metanogni- plo nitrgeno o fsforo), sino como activador de la po- que representan 65, 25 y 7% respectivamente. Los res- sabe si lo pueden hacer en la naturaleza
cas pertenecen al primer grupo, y las ms frecuente son blacin microbiana del suelo con la resultante dinamiza- tantes 3% corresponden nematicidas, acaricidas, etc. 4- compuestos aptos para microorganismos en cultivos
Methanobacterium, Methanospirillum y Methanobrevibac- cin de toda la actividad biolgica. Otros son los aditivos en los plsticos (ftalatos), coloran- axnicos y en uno o ms habitats microbiano, pero que
tes usados en teidos de prendas de vestir y alimentos, son persistentes en ciertas ocasiones.
Muchos polmeros sintticos se encontraran en la ca- propiedades quimiodinmicas del producto co y bacterias anaerobias estrictas como Clostridium, Bac- La reduccin del sulfato a sulfuro es ms favorable termo-
tegora 1. teroides, Propionibacterium. Las enterobacterias como E. dinmicamente que la produccin de metano. Si existe alta
propiedades fsico-qumicas del suelo coli poseen la enzima formiato liasa responsable de la disponibilidad de sulfatos proliferarn estas bacterias con
La lignina es un ejemplo de la segunda categora ya que generacin de H2 a partir de formiato, pero tal vez su rol consecuencias negativas: van a emplear el H2 (sustrato de
su transferencia en las interfases suelo-agua y suelo-
es sustrato para algunos hongos aunque no es desasimi- fundamental es la remocin del O2. Las bacterias lcticas las metanognicas) y producen sulfuros, txicos a concen-
aire y a travs de membranas biolgicas
lada rpidamente. Ciertos hidrocarburos clorados con producen cido lctico y a veces etanol y CO2, a partir de traciones elevadas e indeseable en el gas de salida.
carcter insecticida son ejemplos de la tercera categora, En la mayora de los casos las sustancias orgnicas bio- azcares. Propionibacterium fermenta cido lctico con li-
ya que muchos son metabolizados en medios de cultivo, degradables sufren los mismos tipos de reacciones de beracin de H2 y acetato, o acetato y propionato. En virtud del elevado nmero de bacterias sulfatoreductoras
pero su mineralizacin a CO2, H2O y Cl2 no ha sido de- ruptura y simplificacin que las sintticas, a saber: decar- que existen en los reactores anaerobios y en los biodigesto-
mostrado in situ. En la ltima categora se pueden ubicar boxilacin, desaminacin, hidroxilacin, -oxidacin e hi- res rurales, aun en asusencia de sulfato (pueden metabolizar
algunos hidrocarburos derivados del petrleo y cons- drlisis de enlaces ster. Procesos biticos y abiticos Bacterias acetognicas reductoras obligadas lactato dando acetato, CO2 y H2), se postula que ejercen im-
tituyentes vegetales. pueden transformar a los productos alterando su estado de protones portante rol como acetognicas deshidrogenantes.
qumico y consecuentemente su toxicidad y reactividad.
En los ltimos 50 aos, se han producido en la industria Idealmente se espera su conversin a: Son las conocidas bacterias sintrficas obligadas que se ca-
ms de 600.00 toneladas de sustancias orgnicas y se racterizan por su imposibilidad de crecer en cultivo puro. Ne- Bacterias acetognicas
estima que un 15% han entrado al ambiente (Stevenson y CO2, H2O, minerales cesitan asociarse estrechamente a microorganismos consu-
Cole, 1999). midores de H2. En el laboratorio se las mantiene junto a una Son las que crecen a expensas de la reaccin:
sustancias menos txicas bacteria metanognica hidrogenoflica, o a una sulfatoreduc-
En trminos de cantidad, los xenobiticos orgnicos son tora en presencia de sulfato, que en estas condiciones fun- H2 + 2CO2 = acetato + H2O + H+
Pero se pueden formar productos intermediarios que se
los ms numerosos: 114 compuestos han sido designa- ciona como consumidor de H2. Los sustratos naturales que
convierten en polucionantes txicos.
dos por la Agencia de Proteccin Ambiental de los Esta- oxidan son cidos grasos saturados, etanol y benzoato. Al- Pertenecen a gneros diversos como Acetobacterium,
dos Unidos como polucionantes, en 1982. Los ms peli- gunas de las reacciones de las que generan energa: Acetogenium y Clostridium. Tambin pueden realzar otros
Las propiedades fsicas y qumicas de la molcula del
grosos son los halogenados, especialmente los aromti- metabolismos y slo un 10% del carbono en los reactores
polucionante afectan su biodegradacin (cuadro 2). La
cos por sus efectos sobre la biocenosis y su carcter re- etanol + H2O= acetato- + 2H2 + H+ sufrir esta transformacin.
mayora de los compuestos orgnicos poseen grupos hi-
calcitrante en el ambiente. Consecuentemente persisten
droxilos y carboxilos (OH y COOH) que son rpidamente butirato- + 2H2O = 2acetato- + 2H2 + H+
en el suelo porque no son susceptibles de transformacio-
oxidados.
nes biolgicas a rangos normales. Bacterias desnitrificantes
No pueden transferir los equivalentes de reduccin del
El cuadro 1 muestra algunos ejemplos de compuestos NADH a ningn aceptor externo que no sean los proto- Estas bacterias que obtienen energa de la oxidacin de
Cuadro 1 Ejemplo de importantes xenobiticos nes. Algunas especies conocidas: Syntrophobacter woli-
orgnicos detectados en suelos y que representan poten- compuestos orgnicos y compuestos de azufre reducido
orgnicos nii que usa propionato y crece en cocultivo con Desulfovi-
cial peligro para el ecosistema suelo-planta-hombre, mu- e H2, con nitratos como aceptores de electrones, estn
chos se reconocen o sospechan como cancerognicos o brio, Syntrophomonas sapovorans, crece con cidos gra- presentes en los reactores anaerobios y se les atribuye
Tipo Ejemplos sos de C4 a C18 asociada con Methanospirillum.
mutagnicos. Los halogenados aromticos ejercen efec- junto a las Enterobacterias el rol de remocin del oxgeno
tos negativos en la microflora y son reconocidos recalci- Alifticos (halogenados) tricloroetano, tricloro metano, del sistema. Especies del gnero Pseudomonas son las
trantes. Fueron introducidos por el hombre, de modo que cloruro de metilo, tetracloetano ms distribudas en la naturaleza.
se consideran verdaderos xenobiticos. Alifticos(no halogenados) acilonitrilo, tolueno, benceno, Bacterias sulfatoreductoras
nitrobenceno,fenol cresol
Como el suelo es el reservorio ltimo de la mayora de Aromticos (halogenados) pentaclorofenol, clorobenceno Emplean los productos de las fermentaciones como sus- Bacterias metanogenticas
hexaclorofenol, diclorobenceno tratos en la reduccin de sulfatos a sulfuros, de la cual
ellos, sus efectos sobre poblaciones microbianas y la ac-
Policclicos(no halogenados) naftaleno, benzopireno, obtienen energa. Se dividen en dos grupos:
cin de stas sobre estas molculas resulta de gran im- antraceno, bifenil, fenantraceno Estos microorganismos tienen caractersticas especiales:
portancia en la determinacin de sus consecuencias. son Arquebacterias, hoy denominadas archae, orga-
oxidantes completos que liberan CO2, H2O y S=, pue- nismos muy primitivos que se distinguen de las bacte-
Policclicos (halogenados) bifenilos policlorados (PCBs)
Una vez liberadas al ambiente la distribucin de estas den degradar cidos orgnicos de hasta 18 carbonos rias tpicas por poseer un seudopeptidoglicano en su
Pesticidas lindano, toxafeno, DDT, 2,3-D
sustancias depende de: dieldrin, heptaclorobenceno oxidantes incompletos: liberan acetato, CO , S=, algu- pared, algunos gneros poseen recubrimientos exte-
2
nas propionato y butirato, que en general no pueden riores solamente protecos (capa S en Methanococ-
seguir degradando cus), o una capa polisacrida junto a la capa S
principales productos finales de la hidrlisis y la fermenta- Cada biodigestor es diferente ya que debido a que las in- Cuadro 2- Propiedades que alteran la los clorados), plsticos y polmeros sintticos relaciona-
cin son CO2, H2, propionato, acetato y butirato. teracciones entre los microorganismos son mltiples y comple- biodegradacin de compuestos orgnicos dos y un conjunto de derivados de la industria.
jas, en cada uno se alcanzarn poblaciones distintas. contaminantes
Existen bacterias que degradan el propionato y el butirato
llevndolo a acetato, H2 y CO2. Estas bacterias actan sinrgi- No se puede hacer consideraciones taxonmicas gene- 1 Carencia de oxgeno en su molcula (hidrocarburos)
Convencin de Estocolmo sobre contaminan-
camente (sintrofia) con otros microorganismos que consu- rales pero es importante conocer los grandes grupos fi-
tes orgnicos persistentes (COP)
2 Enlaces saturados (hidrocarburos alifticos no satura
men el H2 producido y de esta forma permiten que se esta- siolgicos de microorganismos presentes. Los microor- dos y los aromticos tienden a ser ms rpidamente ata- El Convenio de Estocolmo surgi luego de largos aos de
blezca el primer grupo (que es inhibido por el hidrgeno). ganismos se agrupan de acuerdo a las reacciones que cados que los no saturados) negociaciones que permitieron alcanzar un compromiso
emplean en la generacin de energa y se relacionan a su 3 Longitud de la cadena, los hidrocarburos alifticos con de los pases para eliminar a los llamados COP. Comen-
La metanognesis (respiracin anaerobia) es la ltima vez con el consumo y produccin de hidrgeno. cadenas laterales cortas son ms rpidamente degra- z a regir en 2004 y la primera Conferencia de los pases
etapa de la cadena trfica y las bacterias metanognicas dados que los hidrocarburos de ms alto peso molecular miembros, que tuvo lugar en Punta del Este, Uruguay, en
producen CH4 por la siguiente reaccin: La clasificacin se esquematiza en el cuadro 11. 4 La polimerizacin de la molcula limita su biodegrada- mayo de 2005 defini en un principio los 12 los productos
cin considerados sucios (cuadro 3) y sobre los que se pien-
CO2 + 4 H2 CH4 + 2 H2O 5 Su escasa solubilidad en agua (molculas hidrofbicas) sa que deben tomarse medidas urgentes para erradicar-
Cuadro 11 - Microorganismos en biodigestores los del planeta en un plazo que los expertos no pueden
Como se observa consumen hidrgeno, por lo que po- anaerobios 6 La estructura y nmero de anillos aromticos
precisar. La lista de estos productos genera desechos al-
seen un papel regulador en el biodigestor. 7 El incremento de la ramificacin de la molcula disminu-
tamente peligrosos para la salud humana y pueden pro-
Grupo Caractersticas ye la biodegradacin vocar su muerte o generar enfermedades y malformacio-
Tambin se puede producir metano a partir de acetato Productores de hidrgeno 8 El nmero y la posicin de grupos halgenos, nitro,ami- nes tanto en el hombre como en otras especies animales.
(metanognesis acetoclstica). no, sulfonato
hidrlisis de biopolmeros, fermentacin de azucares, aminocidos,
cidos grasos (bacterias, hongos, protozoos) 9 El entrecruzamiento con otras molculas impide llegar a Cuadro 3- Contaminantes orgnicos persistentes
CH3 COOH CH4 + CO2 las enzimas (complejo ligno-celulsico)
(COP)
anaerobias facultativas consumen el O2 presente
Residuos (protenas, 10 Volatilizacin
polisacridos) Aldrin Plaguicida usado en varios cultivos
anaerobias estrictas actan a bajo nivel de O2, 11 Solubilidad en agua
Hidrlisis biopolmeros fermentativos Bifenilos policlorados Compuestos usados como aditivos en

12 Molculas orgnicas unidas a arcilla son ms resisten- productos de la industria grfica, entre
Monmeros (azcares, tes a la degradacin (1g de la arcilla montmorillinolita
aminocidos) aerotolerantes actan en presencia de O2, otras
presenta 600 m2 de rea superficial)
bacterias lcticas Clordano De uso agrcola

13 El complejo arcilla/humus puede inactivar exoenzimas

Fermentacin DDT Uno de los ms conocidos insecticidas,
CO2 + H2 Bacterias sintrficas: acetognesis y deshidrogenacin (celulasa) o adsorber al sustrato
Acetato
Propionato
con numerosas aplicaciones
anaerobias obligadas: requieren siempre de otro microorganis- 14 Ambientes extremos: temperatura, sequedad, pH, altas Dieldrin Insecticida, contra termitas

mo para crecer concentraciones de sal

Acetato Dioxinas Generadas por combustin en la fabri-

Acetato CO2 + H2 15 Restricciones fisiolgicas: carencia de las enzimas re- cacin de plaguicidas, entre otros
anaerobias facultativas: pueden crecer en cultivo puro
Metanognesis queridas. Transporte de la sustancia en el suelo, limita-
Endrin Insecticida empleado en algunos cultivos
cin de nutrientes esenciales (N, S, P. etc.)
y contra roedores

Consumidores de hidrgeno

CH4 Furanos Compuestos producidos por diversas

Bacterias metanognicas, anaerobias estrictas, productoras de
Un concepto muy popular en el pasado, antes de la dca- emisiones como incineradores y auto-
CH4, crecen slo con menos de 5 ppm de O2
da del 60, sostena que esencialmente toda sustancia mviles
Figura 4- Esquema de las etapas de la digestin anaerobia
orgnica introducida en la biosfera debera ser meta- Heptaclorobenceno Insecticida
bolizada por los microorganismos en un perodo de Hexaclorobenceno Herbicida, contra malezas
Bacterias hidrolticas y fermentadoras tiempo razonablemente corto. Este concepto actual- Mirex Insecticida y usado tambin en produc-
Poblacin microbiana
mente no es del todo correcto ya que vimos que hay sus- tos plsticos
Se encuentran bacterias anaerobias facultativas como las tancias sintticas recalcitrantes y que persisten en el sue- Toxafeno Insecticida usado en ciertos cultivos de
Dentro del biodigestor coexisten distintos grupos de microor-
enterobacterias, las aerotolerantes como las del cido lcti- lo en ciertas condiciones por largos perodos, como son cereales y hortalizas
ganismos: bacterias, hongos y protozoarios (Soubes, 1994).
los bifenilos policlorados, ciertos pesticidas (sobretodo
Precisamente, el citado Convenio de Estocolmo apunta y verduras para la exportacin, la lucha contra insectos, Cuadro 9 - Efecto del agregado de compost en Biodegradacin anaerobia
sus esfuerzos en dotar a los pases que lo necesiten de etc. liberan en los ecosistemas naturales grandes canti- cultivo de maz de restos orgnicos
asistencia tanto tcnica como financiera para disminuir en dades de sustancias de lenta biodegradacin.
primera instancia las emisiones nocivas de los COP y se Con compost Sin compost La digestin anaerobia consiste en una serie de procesos
intenta que la Organizacin de las Naciones Unidas (ONU) Las investigaciones sobre el efecto de muchos de estas Rendimiento kg/ha 7.750a 5.850b de degradacin microbiana de la materia orgnica en au-

impulse la eliminacin de al menos estos 12 contaminan- sustancias en las comunidades microbianas naturales y sencia de agentes oxidantes (O2, NO3 , S04=).
tes persistentes, mediante la prohibicin de su produc- sobre los mecanismos de degradacin se han estimulado Interaccin del compost x dosis de N-urea (kg/ha)
cin, exportacin e importacin. por los riesgos reales o potenciales asociados con el em- Como productos finales de esta degradacin se produ-
Dosis de N 0 50 100 150 200
pleo indiscriminado de los xenobiticos. Con compost 7750 9940 10470 10830 10880
ce una mezcla de gases (biogs) con predominio de
Sin compost 5850 8750 9640 10740 10470 metano (CH4) usado como combustible y materia org-
Efecto sobre la microflora del suelo Los pesticidas son sustancias qumicas destinadas al con- nica estabilizada, el biofertilizante, activador de la po-
trol de poblaciones no deseadas (pestes), de muy distin- blacin microbiana y mejorador de las propiedades fsi-
El efecto de estas sustancias en segmentos de la pobla- tos grupos taxonmicos y se caracterizan por los organis- Como se aprecia globalmente sobre todas las parce- cas del suelo.
cin depender de: mos que atacan: insecticidas, nematicidas, herbicidas, las, el efecto de la enmienda fue favorable (a 10% de
fungicidas. Otros, destinados a la supresin de roedores confianza), sobretodo sin fertilizacin o con bajas do- Interviene en este proceso una poblacin microbiana muy
su composicin qumica, dosis, mtodos de aplicacin y moluscos, han recibido menos atencin. heterognea que acta en una cadena alimentaria. Uno
sis de nitrgeno. El agregado de compost economiza
parmetros fsico-qumicos del ambiente, como pH, tem- unos 50kg de N-urea/ha, como surge de los datos del de los grupos terminales de esta cadena son las metano-
peratura, agua En muchos pases no se llevan estadsticas sobre el uso de cuadro 9. bacterias, responsables de la produccin de gas meta-
estas sustancias y debemos remitirnos a las cifras sobre no, usado como combustible. El sustrato que entra a los
No existen muchos datos cuantitativos sobre las transfor- sus importaciones. El empleo masivo de herbicidas selecti- El cuadro 10 compara estos procesos controlados con la biodigestores rurales est compuesto principalmente por
maciones de muchos de estos productos txicos, salvo, vos comenz hacia la mitad de la dcada del 40, luego del degradacin de la materia orgnica realizada en la natu- estircol u otras materias orgnicas diludas: una mezcla
quiz, lo referente a los pesticidas, sobre los cuales las descubrimiento del 2,4-D, pero el control qumico de male- raleza en condiciones naturales. compleja de celulosa, hemicelulosa, lignina, protenas, l-
investigaciones son ms abundantes. Los xenobiticos zas est an poco desarrollado, si se lo compara a los lo- pidos, minerales, etc. Los microorganismos utilizan es-
interfieren con procesos importantes como: gros en el mejoramiento vegetal y con otros aspectos de tos compuestos para obtener energa y como fuente de
las ciencias del suelo. Se pretende lograr que un agente Cuadro 10- Diferencias entre degradacin de carbono, mineralizando cada vez ms los restos orgni-
fotosntesis qumico especfico acte selectivamente sobre una deter- cos hasta alcanzar un equilibrio. En la digestin anaero-
la materia orgnica en el suelo y en el
metabolismos oxidativos minada planta. Los mtodos de control de malezas son compostaje bia se distinguen cuatro etapas (figura 4).
numerosos: fsicos o mecnicos (competencia por el culti-
sntesis celulares vo, rotaciones), biolgicos, qumicos, el fuego, etctera. Hidrlisis de biopolmeros
La concentracin de nutrientes es mayor en el compost
algunos, como los derivados clorados actan sobre la Fermentacin
Muchas de estas sustancias, sobre todo los herbicidas, La estructura del suelo no permite la liberacin brusca de
composicin de la membrana celular, alterando su per-
se aplican directamente en la superficie o llegan a las ca- calor (el mismo se disipa y la temperatura no sube) Acetognesis y deshidrogenacin
meabilidad y la fisiologa celular
pas superficiales del suelo, otros se pulverizan sobre el
follaje, pero se ponen en contacto con los microorganis- Los organismos termfilos no se incrementan en el suelo Metanognesis
Los mtodos empleados para estudiar sus efectos son
mos al caer las hojas o cuando las plantas mueren. Estas como lo hacen en los compost
los clsicos en estudios de ecologa microbiana (captulo
8) y Anexo prctico, pero en las ltimas revisiones sobre aplicaciones pueden alcanzar zonas vecinas cuando las La velocidad de los cambios es muy diferente (45-200 das
Hidrlisis: la primera etapa de la degradacin de la ma-
el tema se destaca la necesidad de estandarizar las tcni- molculas son voltiles. El agua de riego puede contami- en el compost, aos en el suelo) teria orgnica es llevada a cabo por enzimas hidrolticas
cas que reflejan los efectos de estas sustancias sobre gru- narse, constituyendo sta otra va de entrada al suelo. de mltiples microorganismos que utilizan los compues-
pos y procesos microbianos de importancia para la conti- La accin del viento y el mezclado facilita la degradacin tos de la hidrlisis. Posteriormente acta otro grupo que
nuidad de los ciclos de los elementos en la naturaleza. Las interacciones entre los pesticidas y los microorga- en el compost ataca los productos resultantes de la accin del primer
nismos sern analizadas desde dos puntos de vista: grupo y asi sucesivamente conformando una cadena tr-
Mayor diversidad de materiales compostados
fica con una poblacin microbiana en equilibrio.
Pesticidas Baja carga contaminante y remocin de semillas de male-
sobre los microorganismos: estas sustancias pueden zas en el compost La fermentacin es la fuente de energa en las condicio-
afectar habitantes no patgenos de los ecosistemas natu- nes de anaerobiosis y de falta de luz de este sistema. Los
Su empleo se ha incrementado en los ltimos aos y tan-
rales, o sus interacciones con el consiguiente efecto sobre
to la agricultura moderna, como la conservacin de frutas
Vermicompostaje necesita ms mano de obra procesos benficos (degradacin de materia orgnica, ni- resultados obtenidos a nivel de laboratorio a las condi-
trificacin, fijacin del N2, solubilizacin de fosfatos) ciones naturales de campo, resulta muchas veces difcil
Constituye una variacin en la tecnologa del compostaje el material debe estar triturado para una mayor eficien- porque:
en la cual se utilizan lombrices para acelerar la degrada- cia en la degradacin sobre los pesticidas: los microorganismos de estos
cin de la materia orgnica. La lombriz trabaja cavando
2
necesita de una mayor rea: 1000 m para producir 100 ambientes metabolizarn a estas sustancias (la mayo- los estudios fueron realizados bajo condiciones muy di-
galeras en el suelo o en el compost, moliendo y humede- ton de compost por da ra son orgnicas) por distintos mecanismos, los que versas, muchas veces no correctamente explicitadas en
ciendo partculas en el tubo digestivo (accin ms mecni- sumados a las otras causas abiolgicas de alteracin, los trabajos
ca que biolgica). no presenta fase termfila, que matara a la fauna contribuyen a disminuir sus efectos txicos.
en ambientes y tipos de suelos muy diferentes
Sus excrementos estn formados por agregados de tie- La descomposicin de la materia orgnica es realizada Como generalizacin, se piensa que: falta de informacin sobre la formulacin de productos
rra, materia orgnica digerida y secreciones intestinales por los microorganismos del tracto digestivo de las lom- comerciales y sus aditivos, que pueden afectar a la po-
y urinarias, de ms fcil asimilacin por las races que brices. los compuestos de amplio rango, como los fumigan- blacin en mayor grado que el producto mismo.
reciben el nombre de coprolitos. Estos son ms neu- tes, fungicidas, parecen afectar negativamente todos
tros que los suelos, pobres en arcillas y ricos en materia los procesos biolgicos, al menos temporariamente. El efecto de un pesticida sobre la microflora se evala
orgnica, nitratos, P, K, Ca y Mg, presentando alta CIC El mismo efecto se encontr con la mayora de los frecuentemente en el laboratorio, bajo condiciones con-
(capacidad de intercambio catinico), saturacin en ba- metales pesados troladas. En estos casos la determinacin de la dosis que
ses y alto porcentaje de humedad. El cuadro 8 resume acta sobre los organismos resulta difcil de precisar, so-
las caractersticas del proceso y la figura 3 muestra un herbicidas, insecticidas, son menos perjudiciales para bre todo con pesticidas voltiles.
cantero de vermicompostaje. la microflora y en algunos casos, pueden estimularla.
Cuando las sustancias son fuertemente adsorbidas en los
Entre los procesos: la nitrificacin es altamente sensible, coloides del suelo, se pueden acumular altas concentra-
Cuadro 8- Vermicompostaje mientras que la mineralizacin del nitrgeno es bastante ciones en las capas superficiales. La concentracin pue-
resistente. de ser ms alta en la zona de la corona, por movilizacin
el material se dispone en canteros del producto por los tallos. En esa zona la actividad biol-
* ancho: 1-1.20 m La eficacia de un pesticida se determina por la dosis le- gica es grande y actan gran nmero de patgenos.
* altura: 0.30-0.40 m Figura 3- Produccin de vermicompost tal, que asegura la muerte de la poblacin entera y la dosis
* largo: variable letal 50 (DL 50), que elimina al 50% de los componentes Con sustancias muy adsorbidas, se emplean dosis altas
de la poblacin. En respuesta al efecto causado por los en los modelos experimentales, como reflejo de la prcti-
material picado y bien mezclado (puede ser pre- En resumen: el empleo de compost o vermicompost en pesticidas, los microorganismos muestran gran adaptabi- ca de campo.
compostado) la agricultura es muy ventajoso, funcionan como fertili- lidad, evidenciada por el rpido restablecimiento de la
* sustrato recomendado: estircol, restos de caf, zantes nitrogenados de liberacin lenta con accin resi- actividad metablica. El estudio de la biodegradacin de sustancias con ca-
t y yerba dual prolongada, de modo que se incrementa la eficien-
rcter biocida no es sencillo en aguas, suelos, alimentos,
* evitar: ajo, cebolla, residuos ctricos cia de absorcin por las plantas, con mayores produc- Los mecanismos pueden ser: ya que muchas veces las concentraciones son muy ba-
tividades al compararla con el empleo de fertilizantes
reemplazo de especies sensibles por otras tolerantes, jas, del orden de las partes por milln (mg/kg).
humedad: 60-80% nitrogenados solubles. Su aplicacin puede incrementar
la retencin de agua en el suelo. Prcticamente todos muy frecuente en el caso de especies de rhizobios
Mtodos
los restos orgnicos generados y acumulados en esta-
por una rpida recolonizacin del ambiente luego de los Qumicos: se deben emplear tcnicas muy sensibles: cro-
Para la elaboracin del vermicompostaje pueden utili- blecimientos agropecuarios son capaces de estabilizarse
tratamientos biocidas matografa en fase gaseosa o lquida, espectrofotometra
zarse una gran variedad de sustratos, las lombrices pre- mediante este proceso microbiano.
con luz ultravioleta, para detectar trazas de pesticidas o
fieren los estircoles pero atacan cualquier tipo de made sus intermediarios en la degradacin.
teria orgnica, siempre que no sea muy cida o muy olo- El cuadro 9 presenta los resultados del agregado de 20
Evaluacin de efectos inhibidores o txicos
rosa. El vermicompostaje es una tcnica competitiva toneladas de compost por hectrea sobre el rendimiento
Biolgicos: actividad respiratoria, el desprendimiento
frente a compostaje tradicional aunque presenta algu- de maz, en un suelo arcilloso calcreo, con cultivo ante-
Numerosos estudios se han realizado en torno a los efec- de CO2 o el consumo de O2 de muestras de suelo o aguas
nas desventajas: rior de trigo y con riego.
tos laterales de los pesticidas sobre los microorganis- tratadas con el producto en estudio y algn sustrato cuya
mos y sobre sus interacciones. La aplicabilidad de estos transformacin se desea seguir, glucosa, celulosa, bio-
masa microbiana, por recuentos o por la tcnica de fu- En el efecto biolgico de un pesticida (B) interviene su maduro est el compost menos O2 es consumido. Otro nativa. Como el humus, los compost aumentan la agrega-
migacin-incubacin, recuentos de grupos microbianos concentracin y la duracin de su accin. test es la liberacin endgena de calor: compost inma- cin del suelo, la aireacin, infiltracin de agua, capaci-
que realizan procesos de inters para el ambiente (FBN, duro calienta a 65-70C en dos o tres das, uno maduro dad de retencin del agua y la capacidad de intercambio
solubilizadores, mineralizantes, etc.), actividad enzim- B = K i cdt no eleva la temperatura a ms de 30C. No debe conte- catinica.
tica: deshidrogenasas, amilasas, fosfatasas, ATPasas, Donde c es la concentracin en un momento dado (dt); K es ner fitotoxinas u otros inhibidores de la germinacin de
etc., procesos microbianos, como la FBN, mineraliza- un factor que depende del suelo (humedad, coloides, etc.). semillas, ni metales pesados. La estabilidad del compost es una caracterstica impor-
cin, oxido-reduccin, son evaluados antes y despus de tante desde el punto de vista del mercado. La descom-
la incorporacin de estas sustancias. La persistencia en ambientes naturales depende de va- Se han descrito varias tcnicas para evaluar la calidad de un posicin activa y continua del compost cuando se agre-
rios factores: la descomposicin qumica y biolgica, la compost: evaluacin de actividades respiratorias y enzimti- ga al suelo puede inhibir el crecimiento de las plantas
adsorcin a coloides, el lavado. la volatilizacin, la foto- cas del suelo con y sin aditivos, su relacin C/N, la presen- por la reduccin del oxgeno y del nitrgeno disponibles
Pesticidas en el suelo descomposicin, la remocin por vegetales que se cose- cia de sustancias fitotxicas, de metales pesados, se anali- en la zona de las races o por la presencia de compues-
chan. El cuadro 4 muestra los procesos que en el suelo zan tambin el nivel de sustancias del tipo humus. (Anexo tos fitotxicos.
La figura 1 presenta un esquema de las posibles vas a se- afectan a sustancias xenobiticas prctico) y el contenido de nutrientes (cuadro 7)(Zibilske,
guir por un pesticida cuando llega al suelo. Pongamos como 1998). Muchos compost son buenas fuentes de nutientes para En resumen: el compostaje de residuos biodegradables
ejemplo el caso de la incorporacin de un herbicida. Este se los cultivos, con cantidades apropiadas de N, P, S, etc. es un excelente camino para reducir la cantidad de resi-
puede perder por lavado, por degradacin en el suelo, o ser Cuadro 4 - Procesos que afectan a xenobiticos duos a ser incinerados o volcados a causes de agua, o
absorbido por los cultivos. El perodo en que un pesticida en el suelo Estos productos difieren de los fertilizantes inorgnicos enterrados y la cantidad de metano liberado a la atmsfe-
persiste en el suelo es de gran importancia prctica, ya que en que los compost requieren degradacin microbiana ra. Es un proceso esencialmente microbiano que puede
refleja el tiempo en que la plaga o peste estar sometida a Proceso Factores que inciden para liberar la mayora de sus nutrientes y ponerlos a ser controlado por los factores que afectan a los microor-
control, afectando tambin la polucin del ambiente: acumu- hidrlisis pH disposicin de los vegetales. En los anlisis de calidad ganismos intervinientes. La falta de sustratos adecuados,
lacin en porciones comestibles de las plantas, en corrientes transformacin microbiana enzimas degradativas, se incluye entonces su facilidad de mineralizacin. Es niveles de humedad o temperatura fuera de los rangos
de agua, transporte a pjaros va lombrices, etctera. condiciones ambientales necesario esta determinacin a los efectos de determi- ptimos y problemas con la difusin del oxgeno al interior
apropiadas nar las dosis a aplicar. Muchas veces estos productos de la pila, son los factores limitantes ms frecuentes en el
volatilizacin presin de vapor
se acompaan con fertilizantes qumicos a los efectos compostaje.
evaporacin aplicacin fotodescomposicin xido-reduccin Eh
lavado solubilidad de brindar nutrientes a los vegetales desde su aplica-
atmsfera vegetales
adsorcin coeficiente de particin pKa, cin. Se necesitan normas claras para dirigir la recoleccin y
poros del suelo el tratamiento de estos residuos, adems de buenos con-
movimiento capilar y
solubilidad, tipos de adsorbentes
gravitacional bioconcentracin coeficiente de particin pKa En promedio, un 10% del compost se mineraliza en el troles de calidad y estndares obligatorios a los efectos
fijacin/adsorcin CIC primer ao de aplicacin, luego esta tasa cae a 1 a 3%, de recomendar productos de buena calidad e inocuos para
difusin fijacin: arcillas difusin
asemejndose a la degradacin de la materia orgnica el hombre y la naturaleza.
materia orgnica
absorcin: formacin de complejos La estructura de la molcula, la posicin y naturaleza de

plantas metabolismo y con minerales
microorganismos degradacin los grupos funcionales afectan tambin la persistencia,
qumica como se aprecia en cuadro 5. Cuadro 7- Propiedades de algunos compost
lixiviacin
Figura 1- Esquema del comportamiento de un pesticida en el Descomposicin microbiana pH humedad% densidad N% P% K%

suelo (kg/m3)
Durante mucho tiempo se pens que los mecanismos de
La persistencia en el suelo, es decir la duracin de la degradacin de los pesticidas por los microorganismos Desechos municipales lquidos 6-6,5 20-35 772 2,21 0,97 0,27
efectividad de un pesticida, depende de eran similares a los de los animales. Pero a medida que
Estircol 5,8-7,2 34-61 304-400 0,7 0-0,03 0,02-0,36
las investigaciones fueron progresando, se apreciaron las
su composicin qumica Residuos alimenticios - 40 352 0,95 0,13-0,46 0,48-0,89
diferencias:
de las condiciones del medio: materia orgnica, arci- en los animales las reacciones conducen sobre todo a Slidos municipales - 45 352-481 - - -
llas, pH, humedad, tipo de suelo, etctera. convertir estas molculas en formas polares y por lo
pH : el ptimo se sita entre 6,0 y 7,5, los vegetales pre- a la microflora mesfila, coagulan protenas y provocan tanto son liberadas y los procesos ocurren en rganos como glucosa, por ejemplo, que al disminuir en el me-
sentan en general reaccin cida que se puede corregir prdidas de N como amonio. La figura 2 presenta la varia- especializados, como el hgado dio inducen las enzimas necesarias para la degrada-
agregando cal, ceniza vegetal u otro producto alcalino, cin ms frecuente de temperatura durante las distintas cin del pesticida.
evitando que el pH pase de 8,0. fases del compostaje. en los microorganismos, el objeto principal es la obten-
pH cin de energa y muy pocas molculas (algunos halo- Cuando el nivel de pesticida es bajo en relacin a otras
Humedad: la humedad ptima para mxima eficiencia del 70 8,0 genados aromticos usados como insecticidas) no son fuentes de carbono, el metabolismo incidental, dentro del
proceso est comprendida entre 60 a 65% en peso para atacadas por algn grupo de microorganismo, en el sue- cual se ubica el cometabolismo, es la forma principal de
temperatura C
50 7,0 actividad microbiana.
granulometras groseras (pajas de cereales) y de 55 a 60% lo. Se propuso un esquema general sobre la accin de
para granulometras finas (aserrn, contenido ruminal). La los microorganismos y de procesos abiolgicos, sobre
30 Las reacciones catablicas ocurren sobre todo cuando las
humedad mnima debe ser de 40%; con humedad inferior 6,0 los pesticidas (cuadro 6).
dosis de pesticidas son altas y la estructura qumica per-
al 12% la actividad biolgica cesa y muy altas inducen 10
mite su biodegradacin y su uso como fuente de carbono.
anaerobiosis y prdidas de nutrientes.
A B C D Cuadro 5 - Influencia de la estructura en la
Se controla dentro de los lmites recomendados por: mesfila termfila mesfila estabilizacin biodegradacin de xenobiticos
Cuadro 6 - Metabolismos microbianos sobre
Figura 2- Cambios en la temperatura y el pH durante el pesticidas
irrigacin al montar la pila, si la humedad de los resi- Tipo de compuesto Ms degradable Menos degradable
compostaje o sustituyentes
duos es baja I. Enzimtico
hidrocarburos alcanos superiores alcanos inferiores A. Metabolismo incidental: los pesticidas no se usan directamente
remover la pila para provocar evaporacin si la hume- (12 C) como fuente de energa.
dad es alta Calidad, anlisis, estndares y mercados alcanos alcanos de alto PM 1. metabolismo por enzimas generalmente disponibles
alifticos de alifticos ramificados a. enzimas de amplio espectro (hidrolasas, oxidasas, etc.)
La humedad se debe mantener en el entorno del 50% cadenas lineales aromticos b. enzimas especficas presentes en muchas especies
La aceptacin del producto final en el mercado depende 2. metabolismo inducido por productos anlogos (cometabolismo)
durante la fase inicial y del 30% en la fase final de de varios elementos que incluyen: el precio, la calidad y aromticos mono policclicos
y bi cclicos aromticos c. enzimas que emplean sustratos estructuralmente similares
estabilizacin. consistencia del producto, adems de las garantas de que a los de los pesticidas.
el producto no contiene niveles no aceptables de metales aromticos -OH -F B. Catabolismo: los pesticidas se emplean como fuente de energa
Aireacin: es importante para que la descomposicin sea pesados, vidrio, plantas y patgenos. sustitudos -COOH -Cl d. pesticidas o parte de su molcula son rpidamente usados
aerobia, ms rpida y eficiente que la anaerobia. Su con- -NH2 -Br e. deben inducirse enzimas especficas para su degradacin
trol es una de las tareas ms difciles y costosas. La con- La calidad del compost se refiere a las caractersticas -OCH3 -NO2 C. Detoxificacin.
centracin de O2 no debe ser inferior al 5 y 10% del vol- fsicas, qumicas y biolgicas, las que condicionan el im- f. metabolismo por microorganismos resistentes
alifticos -Cl ms 6 C -Cl menos 6 C
men de los macroporos. pacto del producto sobre el ambiente y es resultante de II. No enzimtico
clorados desde el C terminal
la calidad de los materiales iniciales y de la calidad del A. Participacin en reacciones fotoqumicas
En los digestores cerrados la aireacin se hace mecni- proceso de compostaje. B. Contribucin por cambios de pH
camente. En las pilas se produce en el mezclado o por C. Por la produccin de reactantes orgnicos o inorgnicos
Una microflora especializada es responsable de la degrada- D. Por la produccin de cofactores
sistemas de aireacin forzada.
Los estndares tienen en cuenta contaminantes, como cin de los pesticidas mediante dos mecanismos diferentes:
metales pesados y desde el punto de vista microbiano,
Temperatura: el calor es la primera informacin de que el
la ausencia de microorganismos patgenos. No existen I. la sustancia favorece el crecimiento y es empleada
proceso de descomposicin se inici. La ausencia de ca-
estndares reconocidos mundialmente para productos como fuente de carbono, energa y ocasionalmente de Procesos microbianos sobre pesticidas
lor en los primeros das indica un problema en: baja acti-
derivados de bioresiduos; los estados miembros de la nitrgeno, azufre, etc. El nmero de especies activas
vidad microbiana, falta de O2 por exceso de agua o mate- Mecanismos generales de biodegradacin
Unin Europea y Estados Unidos de Amrica aplican sus aumenta y el aislamiento se puede efectuar en medios
rial de granulometra muy fina. Las altas temperaturas son
propios estndares. El Uruguay, como en muchos pa- de cultivo en donde el pesticida acta como nica fuen-
consideradas deseables por el hecho de destruir semillas detoxificacin, conversin de molculas txicas en no
ses, se encuentra con la necesidad de establecer norte de nutrientes. Una vez que el producto es degrada-
de malezas y organismos patgenos, la mayora sensi- txicas
mas de calidad para estos biofertilizantes producidos en do, la poblacin declina
bles al calor.
el pas o importados. La madurez de los productos se degradacin, o transformacin de sustancias comple-
establece frecuentemente por el consumo de O2 o la li- II. cometabolismo: el compuesto no acta directamente jas en productos simples (puede ser sinnimo de mine-
Se produce una pasteurizacin del material. Las altas
beracin de CO2 durante su incubacin. Cuanto ms como fuente de nutrientes, sino que debe emplear otras, ralizacin, con aparicin de CO2, H2O, NH3, etc.)
temperaturas no deben extenderse mucho porque limitan
conjugacin o formacin de complejos, por reacciones pueden ser activados. As, el cianato de potasio y el da- largo: 2,5 a 3,5 m Cuadro 6- Factores que afectan el compostaje
de adicin; el microorganismo combina el pesticida con lapn se hidrolizan lentamente en agua, resultando en- altura: 1,5 a 1,8 m, que baja al final de 1/3 a 1/6
metabolitos celulares (adicin de aminocido, cidos or- tonces inefectivos como herbicidas. En suelos en am- ancho: variable, nunca menor de 2 m * Relacin C/N
gnicos, metilos, etc.); pueden conducir a bajar la toxi- biente anaerobio, la degradacin puede ser qumica y >30/1 = proceso lento
cidad microbiolgica. El peso disminuye de 50 a 80%, y el volumen total se 25-35/1 = ptimo
reduce entre un 20 y un 60%. La pila nunca puede ser < 25/1 = prdidas de nitrgeno
activacin: conversin de un producto no txico en muy alta, porque se corre el riesgo de que las capas su-
* Aireacin
molculas txicas: preparaciones comerciales, como el Adsorcin a coloides periores ejerzan presin sobre las inferiores, compactn-
necesaria para la degradacin
herbicida 4 (2,4-DB) que en el suelo se transforma en dolas, provocando anaerobiosis y los consiguientes pro-
metabolito txico para malezas (2,4-D) Son retenidos a la materia orgnica (humus) y a la frac- cesos de fermentacin y putrefaccin. * Humedad
cin arcilla, y los xidos e hidrxidos de hierro y alumi- >60% = ausencia de aire: putrefaccin
cambio en espectro de toxicidad: sustancias espe- nio juegan importante rol en suelos pobres en materia En cuanto a la forma, las pilas pueden tener seccin trian- 40-60% = ptima
cficas para un grupo de organismos, se metabolizan orgnica. En escala descendente de capacidad de ad- gular o trapezoidal: la triangular es recomendada para estacio- < 40% = reduccin de actividad microbiana
y dan productos que inhiben a otros organismos, como sorcin tendramos: humus > montmorillonita > illita > nes lluviosas, pues favorece el escurrimiento del agua, la < 12% = cesa la actividad microbiana
la conversin en el suelo del fungicida pentacloro ben- caolinita, pero intervienen tambin la temperatura, el pH, trapezoidal, por el contrario, facilita la infiltracin del agua.
zol en cido pentacloro benzoico, que acta como her- la capacidad de intercambio catinico. Los enlaces pue- Otros: temperatura, granulometra
bicida den ser de naturaleza fsica (fuerzas de Van der Waals)
o electrostticos, por puentes de hidrgeno, sobre todo Materiales a compostar Principales factores que afectan el compostaje
simplificacin: conversin de molcula no txica, que en molculas con grupos -NH, como los fenilcarbama-
puede convertirse en pesticida cuando es activada en- tos y las ureas sustituidas. Intervienen tambin enlaces En el cuadro 5 se observa la composicin de distintos Relacin C/N: cuando la materia prima presenta alta
zimticamente, en producto no txico, fcilmente de- en complejos con iones metlicos, inactivndose muchas materiales a compostar y su contenido en nitrgeno y el relacin C/N, se corrige agregando materiales ricos en
gradado. molculas fijadas. cuadro 6 resumen los principales factores que afectan al N (estircol, camas de animales, tortas vegetales, resi-
proceso de compostaje. duos de matadero, fertilizantes orgnicos nitrogenados,
La figura 2 reagrupa estos conceptos en el ejemplo del As, suelos con alto nivel de materia orgnica requie- etc.). Una relacin ideal para un compostaje rpido se
metabolismo de herbicidas fenoxialcanos. ren dosis relativamente mayores de la mayora de los sita entre 25 y 35/1.
herbicidas y suelos arcillosos niveles superiores a los Cuadro 5 - Composicin de residuos a compostar
O(CH2)3COOH OCH3
arenosos. Para predecir las dosis de herbicidas que es Un compost con materiales de C/N inferior a 30/1condu-
Cl Cl necesario aplicar en varios tipos de suelos, se han de- Materiales %N sobre peso seco Relacin C/N cen a prdidas de N como amonio, agravadas si el pH
A OH D sarrollado modelos matemticos. El nivel de materia Orina de animales 15-18 0.8 es alcalino. En este caso, se agregan materiales ricos
orgnica es uno de los parmetros del suelo que ofre- Sangre seca 10-14 3 en C, como pajas, para elevar la relacin C/N o tierra,
Cl Cl Cl
4(2,4 DB) ce las mejores correlaciones entre la adsorcin de her- Harina de cuernos 12 ND arcillas o fertilizantes minerales que pueden retener el
C A) Simplificacin (Flavobacterium)
B) Activacin en el suelo bicidas y propiedades edficas. El carbn activado, uno Harina de pescado 4-10 4-5 amonio.
B OCH COOH Torta de oleaginosa 3-9 3-15
2 Cl C) Detoxificacin (suelo, Arthorobacter) de los materiales absorbentes ms potentes, se em-
E) Degradacin (Pseudomonas, suelo)
Cl 2,4 Diclorofenol plea para proteger a las semillas de la accin de los Lodos cloacales 5.5-6.5 6-10 Al final del compostaje la mayor parte del N est en for-
herbicidas. Fangos activados 5-6 6
ma de NO3 en solucin que puede ser removido por el
E Harina de huesos 2-4 8
agua y aprovechado por las plantas. Tambin puede
Cl Cama de aves 4 ND
2,4-D CO2,H2O,Cl- Pasturas jvenes 2-4 12 ocurrir fijacin de N2 atmosfrico por microorganismos
Lavado Desechos de cervecera 3-5 15 especializados, en compost estabilizados, sin presencia
Figura 2- Pasos iniciales en el metabolismo de herbicidas Estircol de cerdo 1.9 ND de N amoniacal.
fenoxialcanos Los herbicidas de pre-emergencia que se aplican gene- Estircol vacuno 1.0-1.8 ND
ralmente en la superficie del suelo pueden ser llevados Paja de trigo 0.6 80 Granulometra: sta se adeca moliendo los materiales
por el agua a capas sub-superficiales donde germinan la Hojas recin cadas 0.4-0.1 40-80 gruesos o agregando restos como pajas en residuos de
Descomposicin qumica mayora de las semillas de malezas, que son as elimina- Restos de remolacha 0.3 150 granulometra fina como los lodos residuales u otros sus-
das por estas sustancias. Las semillas grandes deben Aserrn fresco 0.1 500 tratos con tendencia a compactarse. Tambin se pueden
Mediante reacciones de oxidacin, reduccin o hidrli- sembrarse debajo del rea de alta concentracin del her- Papel 0 infinito agregar materiales no degradables, como esferas poro-
sis se pueden degradar pesticidas, mientras que otros bicida, o bien ser resistentes a ellos. El grado de lixivia- ND: No determinado. sas de arcillas, plstico, goma.
res). Se destila el amonio formado a partir de la reduc- Microscopa cin depender de las relaciones de adsorcin entre los Persistencia en el ambiente
cin de nitritos y nitratos Colocar la preparacin herbicidas y el suelo, su solubilidad en agua y la cantidad
de agua que atraviesa el suelo. En base a estos parme- Como hemos visto depende del tipo del suelo, de la calidad
Clculos: mgN-min/kgsuelo seco= Abrir el diafragma de la fuente de luz y el del condensa- tros se puede calcular la dosis requerida en una situacin de las aguas, la temperatura, la humedad, materia orgni-
dor al mximo dada. ca, coloides minerales, actividad biolgica. Se puede eva-
14 (GM-GB) 0,005 N x h X1000 luar en ensayos controlados o de campo. Se citan datos de
peso de la muestra Colocar el objetivo de menor aumento: x10 que slo un 27 % de la variabilidad encontrada en las prdi-
Volatilizacin das de Picloram en 11 suelos, en condiciones controladas,
Encender la fuente de luz, ajustar los binoculares a la pudo relacionarse a las propiedades de los mismos. El cua-
Prcticas usuales en el laboratorio de distancia interpupilar Los steres del 2,4-D son voltiles y sus vapores pueden dro 7 (Stevenson y Cole, 1999) muestra la gran persisten-
Microbiologa perjudicar a otros cultivos. Estas sustancias se movilizan cia de insecticidas organoclorados, sobretodo DDT. Como
Enfocar la preparacin, cerrando el diafragma de la fuen- en los poros del suelo como los gases, y su concentra- resultado de su pobre degradacin, su empleo est muy
(Gua de Clases Prcticas de Microbiologa, Facultad de te luminosa hasta visualizar una imagen poligonal cin se puede medir por destilacin del agua que se eva- restringido y aun prohibida su produccin y distribucin. La
Agronoma, 2005: Curso Prctico de Microbiologa Gene- pora en la superficie del suelo. Constituye una prdida frmula de algunos de los ms persistentes pesticidas se
ral, Facultad de Qumica, 2000) Bajar el condensador hasta distinguir ntidos los contor- importante, si se consideran los volmenes de agua que presentan en la figura 3 (Alexander, 1994).
nos del polgono, si la imagen no est en el centro, cen- se pierden.
Normas bsicas de seguridad en un laboratorio trarla y ajustar el enfoque
de Microbiologa Los principales factores que afectan la volatilidad son: el Cuadro 7- Persistencia en el suelo de algunos
Deben cumplirse reglas de estricta higiene en el labora- Abrir el diafragma hasta que el polgono apenas salga grado de adsorcin al suelo, la temperatura, el viento, la pesticidas
torio, el que debe mantenerse limpio y ordenado del campo. No tocarlo ms tensin de vapor.
Pesticida Persistencia en el suelo
Minimizar el material sobre las mesadas, las que se des- Elegir el contraste ptimo ajustando el diafragma del Meses Aos
infectan con alcohol al comienzo y al final de la tarea condensador Fotodescomposicin
Insecticidas fosforados 3
Herbicidas con cidos alifticos y carbamatos 3
Trabajar e cmara de flujo laminar o en su defecto, en Verificar la iluminacin sacando los oculares y obser- Muchos herbicidas absorben en el rango del ultraviole-
Herbicidas con grupos nitrito, fenoxi, toluidina 6
zona protegida por mecheros, sin corrientes de aire vando por el tubo hacia los objetivos, ajustar el difrag- ta, pero la radiacin solar con longitudes de onda meno- Herbicidas con cido benzoico, amidas 12
ma a 2/3 abierto (2/3 de campo iluminado) res de 295 nm que llega al suelo es despreciable. El Herbicidas derivados de la urea, triazina, picloram 18
Al usar cmaras de flujo laminar, controlar su esterilidad efecto sobre los biocidas est limitado a la superficie de Insecticidas organoclorados
peridicamente, encender la lmpara de luz ultravioleta Al cambiar e objetivo modificar el diafragma de la fuente suelos y aguas; slo sern atacados (liberacin de elec- Chlordano Ms de 18
10-15 antes de la tarea, con las puertas cerradas, de- de luz y el del condensador a la apertura del objetivo trones, formacin de puentes) los pesticidas no incorpo- DDT 5
jarla en ptimas condiciones de limpieza al finalizar rados o los que ascienden por capilaridad en pocas Dieldrin 4
Cada vez que se usa: limpiar el aceite de inmersin de secas. Puede ocurrir tambin cierta sensibilizacin: Aldrin 3
Todos los accidentes o derrame de materiales deben las lentes con un algodn seco, apagar la fuente de luz y la energa es absorbida por un intermediario y transferi- hetacloro 2
comunicarse al docente y todo material contaminado cubir el microscopio con su funda. da a la molcula herbicida por colisin, la que es as
debe llevarse a la sala de limpieza en recipientes con daada. Los productos de la fotodescomposicin pue-
alcohol (pipetas, varillas, bisturs, portaobjetos). No de- Los microscopios y lupas deben limpiarse regularmente, den ser similares a los obtenidos por degradacin. Los datos de temperatura y humedad son ms tiles para
positarlos sobre la mesada de trabajo. en forma profunda, tarea realizada por tcnicos especia- predecir la desaparicin de un pesticida que el tipo de
lizados. suelo. La velocidad de degradacin aumenta con la tem-
Usar tnica y lavarse las manos al finalizar la tarea y Remocin por los cultivos peratura y la humedad.
cada vez que se sospeche contacto con material conta- La evaluacin en el campo exige numerosos ensayos,
minado Observacin de los microorganismos Ciertos cultivos se siembran con el objeto de absorber con aplicaciones en distintas pocas y durante varios
Tinciones herbicidas persistentes en suelos donde se aplicaron en aos.
No pipetear con la boca, emplear peras de goma y/o altas concentraciones para eliminar toda la vegetacin,
pipetas especiales Manipulacin asptica de los cultivos para sembrar luego plantas ornamentales. El maz se usa Contando con amplia informacin sobre datos de lluvias,
Las tcnicas en Microbiologa requieren de un trabajo para eliminar simazina y atrazina (captulo 23). evaporacin, temperatura, residuos de pesticidas, duran-
No fumar, llevar alimentos o beber en el laboratorio asptico, evitando contaminaciones del exterior a la mues
+ - -
te varios aos, se obtienen mediante modelos de predic- otros resistentes. Estos cambios pueden ser de corta vierte en contenido de materia orgnica empleando el N-NH4 , N-NO2 y N-NO3
cin, curvas de desaparicin simuladas de estas sustan- duracin, aunque la poblacin puede ser afectada en factor 1,72
cias. algunos casos por largos perodos La amonificacin y la nitrificacin se evaluan por la pro-
duccin de N-NH4+, N-NO2- y N-NO3- y su variacin en el
En general, la concordancia entre valores observados y grados de susceptibilidad: una especie puede decli- N-orgnico tiempo en el suelo mismo, solo o con distintos agregados:
simulados es buena y su empleo resulta muy til, sobre nar apreciablemente, una segunda puede alterarse slo fertilizantes, pajas, pesticidas, etc.. Los ensayos pueden
todo si se consideran las dificultades en la toma de mues- ligeramente y otras pueden resistir el efecto del pestici- En digestin con H2SO4 el N-orgnico se convierte en ser controlados en laboratorio (in-vitro) lo que evidencia
tras representativas en el campo, la variabilidad asociada da. Las hifas de los hongos y las clulas vegetativas de amonio. Se aumenta la temperatura de digestin con actividades potenciales o en el campo (in situ), donde
en la determinacin de cantidades pequeas, etc. las bacterias son an ms afectadas que los conidios o K2SO4 y el Cu y Se actan como catalizadores que incre- se evalan las actividades reales.
esclerocios de los hongos o que las endosporas bacte- mentan la velocidad de oxidacin de la materia orgnica.
rianas El N-NH4+ formado se puede determinar de varias mane- Es de destacar que estas medidas constituyen un dato
ras: colorimtricamente con reactivo de Nessler, con elec- puntual, una imagen como fotogrfica de los que realmente
efecto en interacciones biolgicas: algunos fungici- trodos especficos o por destilacin con lcali. En este caso ocurre ya que estos iones siguen numerosas vas en los
das pueden provocar estimulacin en la incidencia de el destilado se recoje en cido brico y se forma borato de ecosistemas terrestres o acuticos (captulo 10).
enfermedades, hecho que se atribuye a inhibicin de amonio, que se valora con cido clorhdrico. Los nitratos
poblaciones que compiten con la especie perjudicial y a y nitritos no se incluyen en esta valoracin, sino que se Las tcnicas de evaluacin de amonio, nitrito y nitrato son
la proliferacin de poblaciones antagnicas determinan como amonio luego de su reduccin con amal- muy variadas: colorimtricos, electrodos especficos, por
gama Dewarda (Cu, Zn en polvo). desplazamiento del amonio con una base fuerte (OMg) y
efectos sobre procesos microbianos: en las transfor- titulacin con cido, reduccin de nitritos y nitratos por
maciones de compuestos nitrogenados, se puede ge- 0,5-2g de suelo seco al aire se colocan en balones de metales reductores, desplazamiento del amonio formado
neralizar que, salvo en el caso de fungicidas presentes Kjeldahl de 100mL (semi-micro anlisis), se agrega 0,5g y su valoracin, como anteriormente (tcnica semi-micro
en el suelo en alta concentracin, la mineralizacin y de mezcla cataltica (100g de K2SO4, 10g CuSO4.5H20, Kjeldahl)
la desnitrificacin no son muy afectadas, mientras que 1g de Se) y 20mL de cido sulfrico concentrado. Ca-
la nitrificacin es uno de los procesos ms sensibles, lentar en el equipo Kjeldahl a ms de 400C hasta que
+
acumulndose amonio. Esta sensibilidad de los nitrifi- la solucin se aclara N-NH4
cantes auttrofos se usa para evaluar los efectos txi-
Enfriar a temperatura ambiente y llevar el volumen a
cos de diferentes dosis de pesticidas, mediante la eva- Colocar 2 g suelo en baln de destilacin de 100 ml,
100mL en recipiente aforado
luacin de los nitratos agregar 10 mL KCl 2N y 0,1 g de OMg
Transferir una alcuota al baln de destilacin. Colocar
Conectar el baln al aparato de destilacin con arrastre
Cuadro 8 - Rendimiento y contenido de nitrgeno 10 mL de solucin de cido brico al 10% en un erlen-
meyer donde se recoger el destilado y unas gotas de de vapor, destilar y recoger en erlenmayer de 125 mL
Figura 3- Estructura qumica de algunos de los pesticidas en leguminosas inoculadas y tratadas con con 5 mL sol. al 2% de cido brico con mezcla indica-
pesticidas en el invernculo (mg/planta) indicador, por ejemplo una mezcla de verde de bromo-
ms persistentes en el suelo dora de verde de bromocresol y rojo de metilo, destilar
cresol y rojo de metilo
hasta unos 30 mL
Semillas tratadas Semillas no tratadas
Agregar exceso de solucin de NaOH (32%p/v) al baln
Accin de los pesticidas sobre la microflora Inoculante rendimiento N rendimiento N de destilacin y calentar por 3-20 minutos por arrastre Valorar el amonio con H
2
SO4 0,005N con microbureta o
alfalfa con thiram de vapor hasta transferir todo el amonio (reaccin neu- pipeta de 5 mL hasta desaparicin de color verde y apa-
La bibliografa seala innumerables citas relativas a ca- tra en el destilado, medida con papel pH) ricin de tono rosa
sos de supresin o inhibicin de algn grupo importante ninguno 270 5,9 290 6,8
Rhizobio sensible 280 6,6 440 12,2
gasto= GM, igual procedimiento para blancos (gasto = GB)
de microorganismos por efecto de pesticidas. Valorar con cido sulfrico diludo (0,05M valorado) hasta
Rhizobio resistente 490 13,2 500 14,6
viraje del indicador. Proceder igual con los blancos
caupi con phygon N-NO3 (incluidos los nitritos)
Efectos %N = S-C x 14. 0,005 N x 100x h .100 S = gasto en la muestra
ninguno 1150 21,7 1100 23,2
Rhizobio sensible 1820 36,4 3820 97,0 Alcuota X Peso suelo C= gasto en el blanco se procede como anteriormente, agregando al mismo
modificacindel espectro de especies dominantes, 14= equivalente en N baln en que se determin el amonio y se enfri en agua,
Rhizobio resistente 3930 105 3790 106
pueden se suprimidos gneros comunes y aparecer h= factor de correccin H% 0,2 g de aleacin Devarda (mezcla de metales reducto-
Muestreo y acondicionamiento de las mues- Anlisis fsicos y quimicos La nodulacin y la fijacin del nitrgeno en legumino- 3. Fijacin simbitica del N2, en macetas: nodulacin:
tras de suelo sas pueden ser afectadas por pesticidas, sobre todo por nmero, peso, tamao, actividad nodular, rendimiento
(Bremner, 1965; Nelson y Sommers, 1982 Robertson et aquellos aplicados a las semillas que adems se inoculan vegetal.
a) un nmero adecuado de submuestras (10-20) compo- al., 1999) con rhizobios especficos. Se propone separar en el tiem-
ne la muestra de suelo, por ejemplo, 1 Kg, recogidas en po las aplicaciones de inoculante y fungicida o trabajar 4. Microorganismos particulares y antagonismos: mi-
el predio al azar pH con mutantes de rizobios resistentes a los pesticidas ms corrizas, patgenos vegetales, antagonistas.
Mezclar 1 parte de suelo con 2,5 partes de agua. Agitar y empleados. El cuadro 8 evidencia la importancia de esta
b) secar las muestras al aire, sobre papel absorbente en medir en pHmetro. Se suele medir tambin en solucin lnea de trabajo. 5. Estabilidad de agregados y mejoramiento de la es-
bandejas dentro del laboratorio o usarlas inmediatamen- de KCl tructura.
te (estado fresco) Se inform de marcada inhibicin de la actividad nitro- Los estudios incluyen distintas dosis de los productos, for-
gensica en la rizosfera de 25 variedades de sorgo, mas de aplicacin: incorporacin, pulverizacin, etctera.
c) tamizar el suelo a 2mm y guardarlo en bolsas de plstico C-orgnico cuando se emplearon dosis tres veces superiores a las Es muy importante realizar experiencias a nivel de cam-
bien cerradas y rotuladas en heladera (3-5C) hasta efec- normales de atrazina (4,5 kg/ha)(Frioni, 1999), efecto po; ya que resulta casi imposible correlacionar resultados
tuar los anlisis (no ms de 15 das-1 mes). Segn las El C-orgnico del suelo es oxidado por tratamiento con que desapareci en otro ensayo de campo, en Argenti- obtenidos bajo condiciones controladas con los logrados
determinaciones a efectuar, muchas muestras pueden dicromato de potasio y cido sulfrico concentrado en na, sin herbicida. En el mismo cultivo, se comprob en cuando estas sustancias llegan al suelo, en condiciones
guardarse congeladas a 20C hasta su empleo y a otras caliente. El Cr+3 liberado se determina coloromtricamen- otro ensayo con aplicaciones de distintas dosis de tres naturales.
se las analiza al estado fresco, como vienen del campo. te y se asume que es proporcional a la materia orgnica herbicidas: atrazina, linurn y 2,4-D amina, que la ce-
del suelo lulolisis fue inhibida por todos los tratamientos pestici- Cuando se observan efectos laterales en ensayos de
Determinacin del porcentaje de humedad das. Este efecto fue observado por otros autores y se laboratorio, los pesticidas deben llevarse a la naturaleza
Se realiza en cpsulas metlicas con tapa, numeradas y Pesar 0,5-2g de suelo seco al aire en matraz de 100mL, atribuye a la falta de sustratos carbonados (las male- y realizar all las observaciones, aunque estos trabajos
pesadas previamente = Peso Tara (PT). En caso de no agregar 20mL de solucin de dicromato de potasio zas son suprimidas) y a una inhibicin selectiva de la son largos y se debe considerar el efecto del ambiente
disponer de las mismas, usar cajas de Petri 0,33M (98,06g K2Cr207 en 1L agua, si es necesario celulasa. (temperatura, humedad, nutrientes) sobre las propieda-
calentar). Agregar cuidadosamente 15mL de cido sul- des biolgicas que evaluamos, afectadas adems por
Procedimiento frico concentrado (96-98%) bajo campana. Reposar Numerosas revisiones incluyen determinaciones de efec- los pesticidas.
a) Colocar suelo fresco en las cajas, pesar las mismas por 2-3 horas tos sobre procesos biolgicos como respiracin, mine-
(una cifra despus de la coma) = Peso Fresco (PF) ralizacin del nitrgeno, nitrificacin, datos sobre recuen- En resumen: se puede sealar que raramente la agricul-
Diluir a 100mL con agua destilada y mezclar. Dejar toda tos de ciertos grupos de microorganismos, evaluacin tura moderna dejar de emplear estos productos para lo-
b) Colocar las muestras en estufa a 105C durante 48 la noche del ATP de origen microbiano, enzimas especficas (des- grar incrementar los rendimientos. Reconocida la toxici-
horas, destapadas (conservar los rtulos) hidrogenasas, celulasa, amilasa, etc.), fijacin del nitr- dad de la mayora de ellas para el hombre, animales y
Determinacin fotomtrica: tomar 1 mL y diluir a 25mL geno. Se propuso un programa de anlisis a los que microorganismos, es de esperar que se empleen cons-
c) Poner las cajas tapadas en desecador con silica-gel con agua destilada, mezclar brevemente. Diluir solucio- deben ser sometidos los pesticidas antes de que su dis- cientemente por los tcnicos y productores y en las dosis
deshidratado o CaCl2 anhidro hasta pesar nes estandares en la misma forma tribucin sea autorizada por autoridades competentes, recomendadas, evitando contaminar recursos tan impor-
donde se incluyen estudios sobre la poblacin normal tantes como suelos y aguas, con productos altamente txi-
d) Pesar nuevamente = Peso Seco (PS) Medir las muestras a 570mn frente a blancos y calcular % del suelo, adems de los clsicos controles sobre sani- cos y escasamente biodegradables.
C-orgnico a partir de la curva de calibracin (ajuste a una dad humana y vegetal:
Clculo del H% (agua como % del peso seco del suelo) recta): ejemplo: 3,75 g de glucosa en 1L agua, equivale a Los agroqumicos parecen no ejercer efectos de larga
1,5g de C/L o 1.500 mg/L= 1.500ppm. Diluir la misma 5 1. Actividad respiratoria (CO2, O2) evaluada en el la- duracin en actividades microbianas del suelo cuando se
H% = PF - PS x 100 veces para obtener 0,3g/L y 20 veces para 0,075g/L. boratorio en muestras de suelo: sin aditivos (respira- aplican a dosis recomendadas. Sin embargo, al emplear-
PS - PT cin endgena), con glucosa (proceso activado por el las a dosis superiores, provocan efectos negativos, de
Clculo del factor de correccin de la humedad: Determinar contenido de C de alcuotas de las solucio- desarrollo microbiano) y con restos vegetales (degra- corta duracin, particularmente sobre transformaciones del
nes estandares, por ejemplo entre 0 y 1mg/mL de solu- dacin de materia orgnica compleja por sucesiones carbono y del nitrgeno.
h = 100 + H% cin por el mismo procedimiento que las muestras de microbianas).
100 suelo analizadas Las prcticas de control de plagas incluyen cada vez ms
2. Transformaciones del nitrgeno: amonificacin, ni- las tcnicas de Control Biolgico, empleando microor-
NOTA: al multiplicar los datos por h, stos se expresan Nota: Considerando que el contenido medio de carbono trificacin. ganismos antagonistas de fitopatgenos (captulo 17).
por suelo seco en la materia orgnica es de 58%, el C-orgnico se con-
Xenobiticos inorgnicos Los microorganismos poseen la capacidad de trans-

formar elementos minerales, por ejemplo, al usarlos
Muchos compuestos inorgnicos se forman como dese- como fuente de energa (Fe++ a Fe+++ por Thiobacillus),
chos en las industrias modernas, como anhdridos de S y aceptor de electrones (Mn+4 a Mn+2 por Bacillus), oxi-
N y las sales de metales pesados, que se consideran xe- dacin (As), alquilacin (CH3- + Hg+2 CH3Hg-, por
nobiticos por la elevada concentracin liberada en am- Clostridium).
bientes naturales, sobre todo aguas y suelo y los efectos
deletreos que ejercen en la biosfera. A pesar de que Efecto del suelo y las plantas sobre los metales Anexo prctico
muchos metales son abundantes en la corteza de la tie- txicos
rra, las actividades del hombre, como la combustin de Numerosas prcticas culturales se han implementado para
petrleo y derivados, minas y prcticas agrcolas, frecuen- controlar el ciclo de los minerales en el suelo, como aque-
temente incrementan su concentracin a niveles txicos. llas que disminuyen su disponibilidad por encalado que
Entre los metales txicos a alta concentracin se incluye eleva el pH o la incorporacin de residuos vegetales y Muestreo y anlisis fsico-qumicos Diversidad estructural y funcional de comunidades mi-
el arsnico, boro, cadmio, cromo, cobre, plomo, mercurio, otros materiales ricos en materia orgnica que facilitan la crobianas del suelo:
molibdeno, nquel, selenio, zinc, vanadio. quelacin de los mismos (complejos organo-metlicos), Muestreo de suelos, aguas, alimentos, conservacin de
la arada profunda que baja su concentracin en la super- las muestras, humedad: Perfil fisiolgico de la comunidad, anlisis de molculas
La aplicacin de abonos orgnicos puede conducir a la ficie y la seleccin de plantas por sus caractersticas de especficas: cidos grasos, cidos nucleicos
acumulacin de metales en el suelo, muchos de los cua- enraizamiento (del tipo profundo) y con reducida capaci- H% y factor de correccin de la humedad (h)
les pueden ser txicos para los animales y el hombre. dad de asimilar y acumular metales txicos en la porcin Recuentos microbianos: hetertrofos totales, hongos, al-
cosechable del cultivo. Anlisis fsicos y qumicos: pH, C-orgnico, N-organi- gas, protozoos, grupos fisiolgicos

El cuadro 9 (Stevenson y Cole, 1999) presenta los niveles co, N-NH4+, N-NO3
en minerales en abonos obtenidos por biodegradacin La seleccin vegetal es muy importante ya que distintas
anaerobia y por compostaje. especies en un mismo suelo presentan marcadas dife- Ciclos biogeoqumicos e interacciones con
rencias en la concentracin de elementos traza. Prcticas usuales en el Laboratorio de plantas
Microbiologa
Cuadro 9- Rangos en la acumulacin de Finalmente, la materia orgnica ejerce un efecto tampn Carbono: actividad mineralizante, amilolticos, celulolticos
elementos minerales (mg/kg) en dos tipos de mejorando los efectos adversos de los metales introduci- Bioseguridad, microscopa, tinciones, siembra y aislamiento
abonos orgnicos dos al suelo como contaminantes. El plomo y el cadmio, Nitrgeno: Fijacin biolgica del N 2 (FBN), minerali-
son contaminantes altamente txicos que se introducen zacin: amonificacin, nitrificacin. Prdidas: desni-
Mineral Biofertilizante Compost al suelo en grandes cantidades a partir de deposiciones Indicadores biolgicos en estudios de trificacin
de la atmsfera, en ecosistemas agrcolas y forestales. ecologa microbiana
As 6-230 1-4,8 Azufre: sulfooxidacin, sulfatorreduccin
Pero se ha visto que gran parte es inmovilizado por for-
Cd 4-846 1-13,2 Actividad respiratoria: desprendimiento de CO2
macin de complejos con la materia orgnica en el suelo
Cr 17-99.000 8,2-130 forestal, enriqueciendo las capas orgnicas con metales Fsforo: solubilizacin de P insoluble. Mineralizacin de
Hg 1-10.600 0,5-3,7 pesados. Existe el temor de que el Pb y el Cd puedan Biomasa microbiana: C de la biomasa por tcnicas de P-orgnico
Ni 10-3.500 7-100 eventualmente ser movilizados y transportados a causes fumigacin-inoculacin y fumigacin-extraccin. N-bioma-
Pb 13-19.700 22-913 de agua como complejos solubles (Stevenson y Cole, sa, P-biomasa Micorrizas: ecto y endomicorrizas del tipo arbuscular. Ino-
1999). culacin
Indices: Coeficiente de mineralizacin del C-orgnico= (C-
Muchos pases impiden el uso de abonos orgnicos a los Los vegetales se emplean tambin para depurar un am- CO2/C total) x 100
suelos si estos contienen metales pesados para evitar su biente (suelo, aguas) de metales pesados. La accin la Biodegradacin de residuos
acumulacin luego de varios aos de aplicacin. Com- ejercen o bien los microorganismos de su rizosfera o las Biomasa como %C total= (C-biomasa/C total) x 100
puestos orgnicos solubles en agua pueden formar com- propias plantas hiperacumulan los metales pesados (ca- Coeficiente respiratorio= qC-CO2/C-biomasa Evaluacin del grado de madurez de compost
plejos organo-metlicos y desplazar los metales en el suelo ptulo 23). Estas plantas (acuticas como los camalotes,
y hacia aguas freticas, incrementando los riesgos de otras especies herbceas como maz, sorgo) deben eli- Actividades enzimticas: deshidrogenasas, fosfatasas
contaminacin. minarse del ambiente y tratarse en usinas especializadas. cida y alcalina, hidlisis del acetato de fluorescena (FDA) Bibliografa
Cunningham, S. D. Y Lee, C.R. Phytoremediation: Plant- Preguntas de repaso No ocurre lo mismo con rboles, ya que los metales que- Microbiology. 1998, Sylvia, Fuhrmann, Hartel y Zu-
based remediation of contaminated soils and sedimen- dan en la madera, que no integra la cadena trfica. berer (eds), Prentice Hall, N. Jersey: 447-468
ts. En: Bioremediation: Science and Applications. 1) Defina el trmino biorremediacin Hicks, R. J., G. Stotzky y P. Van Voris. Review and Eva-
1995, Skipper y Turco (eds) Soil Science Society or 2) En qu situaciones estos procedimientos son de apli- Resumen: grandes cantidades de residuos se generan luation of the Effects of Xenobiotic Chemicals on Mi-
America. Special Publication N 43, Madison, Wis. cacin ventajosa en relacin a otros posibles? cada ao por actividades domsticas, agrcolas e indus- croorganisms in Soil. En: Advances in Applied Mi-
Eccles, H. Bioremediation 2003, British Nuclear Fuels, 3) Concepto de los trminos: bioaumentacin y bioesti- triales que deben ser manejados a los efectos de evitar crobiology, 1990 vol 35: 195-253
preston, UK, 352 pp. mulacin. Ejemplos de sus aplicaciones severos efectos contaminantes en el ambiente. Un con- Siqueira, J. O., F. M. de S. Moreira, B. M. Grisi, M. Hun-
Hickey, W. J. Biochemistry and Metabolism of Xenobio- 4) Analice el caso de inoculacin con microorganismos junto de sustancias qumicas, conocidas como recalcitran- gria y R. S. Araujo Microorganisms e Processos
tic Chemicals. En: Principles and Applications of seleccionados tes, de muy lenta degradacin son introducidas delibera- Biolgicos do Solo: Perspectiva Ambiental, 1994,
Soil Microbiology. 1998 Sylvia, Fuhrmann, Hartel y 5) Explique brevemente estrategias para obtener estos damente o por accidente en los causes de aguas y en los EMBRAPA-SPI, Brasilia, DF
Zuberer (eds), Prentice Hall, N. Jersey: 447-468 microorganismos disponibles para la inoculacin de suelos y pueden persistir por largos perodos de tiempo. Stevenson, F. J. y Cole, M. A. Cycles of Soil, Carbon,
Shannon, M. J. R. y R. Unterman Evaluating bioremedia- grandes reas contaminadas Su persistencia es incrementada por su adsorcin a la Nitrogen, Phosphorus, Sulfur, Micronutrients, 1999,
tion: Distinguishing fact from fiction. 1993 Ann. Rev. 6) Empleo de vegetales en la biorremediacin. Mecanis- materia orgnica o a la fraccin mineral del suelo. Resulta Wiley & Sons, New York
Microbiology, Palo Alto, 47, pp: 715-738 mos involucrados de suma importancia el conocimiento de los efectos de
Siqueira, J. O., F. M. de S. Moreira, B. M. Grisi, M. Hun- una nueva sustancia, por ejemplo un pesticida, sobre los
7) Discuta los procesos de degradacin de un polucio-
gria y R. S. Araujo Microorganisms e Processos principales grupos y procesos microbianos, adems de Preguntas de repaso
nante por metabolismo normal y por cometabolismo.
Biolgicos do Solo: Perspectiva Ambiental, 1994, manifestar su inocuidad sobre el hombre, antes de reco-
EMBRAPA-SPI, Brasilia, DF 8) Por qu conviene seleccionar vegetales (rboles y/o mendar su comercializacin y empleo. 1) Cite ejemplos de sustancias denominadas recalcitran-
Skipper, H. D. Bioremediation of Contamined Soils. En: herbceas) fijadoras de nitrgeno en la depuracin de tes, de origen natural y sintticas
Principles and Applications of Soil Microbiology. ambientes contaminados? 2) Qu destino tienen en la naturaleza?
1998, Sylvia, Fuhrmann, Hartel y Zuberer (eds), Pren- 9) Cul es el destino de metales pesados en caso de la Bibliografa 3) Alternativas de biodegradacin de pesticidas en el suelo
tice Hall, N. Jersey: 469-481 fitorremediacin por rboles? 4) Mecanismos fsicos, qumicos y biolgicos que puedan
Alexander, M. Biodegradation and bioremediation. 1994 explicar la desaparicin de un pesticida agregado al
Academic Press, San Diego, California, USA. suelo
Alexander, M. Introduccin a la microbiologa del sue- 5) Por qu los microorganismos son usados como orga-
lo.1994. AGT Editor, S.A. 491 pp. nismos test para determinar el efecto de un nuevo pro-
Balba, M. T. Microorganisms and detoxification of indus- ducto a ser liberado a la naturaleza?
trial waste. En: Exploitation of Microorganisms, 6) Seale algn mtodo que permita evaluar el efecto de
1993, D. G. Jones (ed), Chapman & Hall, London: 371- una nueva sustancia usada como fertilizante, en la mi-
410 croflora del suelo
Barkay, T., D. F. Schearer y B. H. Olson Toxicity Testing 7) Discuta los procesos de degradacin de un polucio-
Using Microorganisms, 1986, B. J. Dutka y G. Bitton nante por metabolismo normal y por cometabolismo
(eds) vol 2, CRC Press, Boca Raton, Florida: 133-135 8) En qu situaciones puede incrementarse el nivel de
Frioni, L. Procesos microbianos. 1999 Fundacin de la metales pesados en un suelo?
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina 9) Precauciones a tener en cuenta al respecto:
Hickey, W. J. Biochemistry and Metabolism of Xenobiotic 10) Seale algn mecanismo para la eliminacin de me-
Chemicals. En: Principles and Applications of Soil tales (Cd, Hg, Cr) del suelo
ii) palmeras plantadas en suelos marginales con 5000ppm esta tarea. Alguno de estos casos sirvi como ejemplo de
TNT redujeron el TNT en la solucin del suelo de 128 a biorremediacin.
10ppm en una semana
La biorremediacin es en general, menos riesgosa
El cuadro 10 resume algunas consideraciones en la apli- para el personal que la aplica y menos costosa que
cacin de esta tcnica de biorremediacin. los otros procedimientos ya que los contaminantes
pueden tratarse en el lugar. Por su naturaleza biol-
gica ejerce impacto menor en el ambiente ya que no
Cuadro 10- Condiciones del xito de la genera residuos.
fitorremediacin con rboles
No pueden dejarse de sealar desventajas del proce-
eleccin cuidadosa de las especies de AFN mejor adaptados a dimiento, relacionadas a: el contaminante puede pre-
las condiciones a rehabilitar: con crecimiento rpido (2m/ao en sentarse con baja biodisponibilidad, pueden darse si-
altura) tios con una mezcla de contaminantes orgnicos e in-
inoculacin con: bacterias simbiticas, hongos micorrcicos, mi- orgnicos.
croorganismos promotores del crecimiento vegetal y componen-
tes de la microfauna En estos casos puede darse la situacin de que un com-
aplicacin de tcnicas de acompaamiento: abonos, dosis mni- puesto pueda degradarse, mientras que otro sea txi-
mas de fertilizantes (P), sin olvidar la irrigacin co para los microorganismos o que las condiciones am-
bientales para los distintos contaminantes pueden ser
estudiar el efecto de la irrigacin y de los polucionantes de las
aguas en la FBN
muy diversos: aerobiosis/anaerobiosis, distintos pH, se-
quedad.
cuidar de no polucionar las napas freticas si la irrigacin no se
controla Se requieren an mayores estudios para manejar las in-
no se sabe aun si el carcter de FBN mejora o no la adaptabili- teracciones biolgicas, fsicas y qumicas en ambientes
dad y el rol depurador de la vegetacin leosa con mezcla compleja de contaminantes.
En el caso de la absorcin directa, las molculas peque- Bibliografa

as, de bajo peso molecular son favorecidas en relacin
a las de mayor peso molecular ya que las ltimas, so- Alexander, M. Biodegradation and bioremedia-
bretodo si son lipoflicas, tienden a ser excluidas de la tion. 1994 Academic Press, San Diego, Califor-
zona radical. nia, USA
Baker, K. H. and Herson, D.S. Bioremediation, 1994,
En resumen: Se analizaron procedimientos biolgicos McGraw-Hill, New York
para lograr restaurar suelos y aguas contaminados, la Balba, M. T. Microorganisms and detoxification of indus-
mayora de las veces por actividades del hombre, que trial waste. En: Exploitation of Microorganisms,
es necesario llevar a un estado saludable. Los abor- 1993 D. G. Jones (ed), Chapman & Hall, London:
dajes incluyen remediacin pasiva o activa, con aditi- 371-410
vos de fertilizantes, control de la humedad y tempera- Barkay, T., D. F. Schearer y B. H. Olson Toxicity Tes-
tura, incorporacin de gases a presin (O 2, CH4), oxi- ting Using Microorganisms, 1986, B. J. Dutka y G.
dantes (H2O2), compostaje, rellenos sanitarios y fito- Bitton (eds) vol 2, CRC Press, Boca Raton, Florida:
rremediacin. 133-135
Bouwer, E. J. Bioremediation of organic contaminants in
La literatura abunda en situaciones particulares con abor- the subsurface. En: Environmental Microbiology,
dajes realizados en general, por empresas dedicadas a 1993, Wiley-Liss, New York: 287-318
Cuadro 8- Mecanismos de fitorremediacin Ejemplos de rboles usados en la depuracin de aguas y

atmsfera
i) indirectamente, estimulando la actividad microbiana en la rizosfera
ii) directamente: absorbiendo el polucionante e inmobilizndolo (en Son seleccionados rboles fijadores de nitrgeno (AFN)
maderas, en caso de rboles) o degradndolo en sus tejidos por su rpido crecimiento y adaptacin a ambientes
23
pobres.
Se usan: plantas herbceas (flotadoras, de crecimiento rpido,
como los camalotes)
rboles: especies fijadoras de N2: Alnus glutinosa,
Especies de Casuarina pueden filtrar el aire y retener pol- Biorremediacin
vos industriales (radioactivos) y reducen el efecto inver-
Casuarina (resisten altos niveles de Cu, Cd, Zn. Pb nadero. Ejemplo Casuarina glauca y C. cunninghamiana
i) los costos de instalacin y mantencin deben ser menores que son usadas en suelos salinos o sdicos en California y se
en otros tratamientos informa que reducen el volumen de aguas salinas de dre-
naje y con nitratos. Limitan la eutroficacin de las aguas En este captulo se analizarn algunas de las estrategias tos polucionantes del suelo se consideran factibles de bio-
ii) la biomasa puede ser utilizable por el ganado (leguminosas her-
bceas) o enterrada (abono verde) con nitratos, sulfatos. biolgicas para restaurar suelos y aguas contaminadas y degradacin microbiana, por lo que la bioremediacin se
llevarlos a un estado no txico, llamado tambin estado aplica en ambientes contaminados por:
iii) en el caso de los rboles, la madera no entra en la cadena ali- saludable. Un ambiente sano es esencial no solo para sos-
Eliminan la polucin por nitratos, mediante la absorcin
mentaria humana (muebles, papel) tener la produccin de alimentos para los habitantes del derramamiento de petrleo bruto e hidrocarburos deri-
radical y activando la desnitrificacin, con microorganis-
mos estimulados en la rizosfera que emplean sustratos planeta, sino tambin para brindar una buena calidad de vados (benceno, xileno, tolueno, policclicos, etc.)
carbonados a partir del mantillo. vida. A travs del anlisis de algunos casos, se ilustrar
sobre los mecanismos de biodepuracin aplicados. solventes diversos (clorados, como el tricloroetileno,
Fitovolatilizacin Otras especies fijadoras de nitrgeno son empleadas en acetona, butanol, etilenglicol, cloruro de metilo)
Remocin de los
tratamiento de aguas servidas en el Cairo: Acacia saligna La biorremediacin, trmino no traducido al espaol, con-
contaminantes del suelo y
liberacin a la atmsfera A. nilotica, Erythrina indica, asociadas a especies no fija- siste en la aplicacin de un conjunto de tcnicas que per- otros: pentaclorofenol, TNT, halgenos, pesticidas
dores como Populus, Salix, etc. miten aumentar la biomasa microbiana del suelo y las acti-
vidades de los microorganismos y vegetales con el objeto metales, como mercurio, plomo, cadmio
Rizodegradacin Otros ejemplos incluyen (cuadro 9): de lograr la recuperacin de ambientes polucionados o con-
Metabolismo microbiano taminados. En particular se estimula la biodegradacin de radiactivos, como el radio, plutonio
del contaminante en la
rizosfera Cuadro 9- Ejemplos de fitoacumulacin productos con carcter xenobitico, originados por activi-
Fitoextraccin
Extarccin de dades del hombre y que contaminan el ambiente. pesticidas, como 2,4-D, atrazina, malation
contaminantes por los
vegetales
1- Alfalfa que hiperacumula N, absorbe gran cantidad de nitratos
2- Sebertia sp acumula hasta 25% de Ni Bajo esta denominacin se agrupan una variedad de pro- bifenilos policlorados como el araclor
3- Thlaspi sp acumula ms de 4% de Zn cesos de biotratamiento que varan en sus mecanismos
Figura 3- Procesos involucrados en la fotorremediacin 4- Tierras inundadas con vegetales que remueven uranio y selenio de accin: Estos contaminantes son introducidos a ambientes natu-
Problemas rales por las actividades del hombre. Algunos entran in-
# La hiperacumulacin es a veces especfica para un solo mineralizacin tencionalmente al suelo, como los pesticidas, o acciden-
elemento
Arboles en fitorremediacin # La mayora de las plantas crecen lentamente y con bajo
talmente, como los hidrocarburos, por prdidas de tan-
rendimiento
transformacin parcial de molculas txicas a otras sin ques, fugas en los sistemas de transporte.
A estas especies se les requiere: # Procesamiento: es necesario colectar la fitomasa y recu toxicidad
perar los contaminantes Si bien en nuestro pas, este no es un problema muy gra-
i) que produzcan una biomasa radical muy desarrollada humificacin ve, han ocurrido accidentes en relacin a derrames de
# Pueden estar asociadas a enfermedades poco estudiadas
capaz de estimular la actividad microbiana rizosfrica alteracin del potencial redox petrleo en el Ro de la Plata, contaminacin por plomo
en suelos y fugas de tanques de hidrocarburos en esta-
ii) que presenten genes que secuestren metales pesa- i) empleo de hbridos de lamos en zona talada para con- compostaje ciones de servicio.
dos o degraden sustancias indeseables (fenoles halo- vertirla a la agricultura, redujeron los nitratos un aguas
genados) subterrneas de 50-100 a 5 mgL-1, y eliminaron el 20% Algunos de los problemas de polucin ambiental pueden En USA, el servicio de proteccin ambiental (EPA) estima
de la atrazina resolverse por estos mecanismos: cerca de 300 compues- que los tanques de gasolina pierden unos 40 millones de
litros por ao, adems de salir al mercado unos 1.000 pro- albergarse en plsmidos o en el cromosoma micro- Biorremadiacin natural como depsitos de combustibles (estaciones de servicio,
ductos qumicos nuevos al ao. Dado estos volmenes biano. combustibles para aviones, etc.)
se comprende la necesidad de accin de verdaderas in- Intervienen procesos fsicos, qumicos y biolgicos no
dustrias para la depuracin de suelos y aguas y la protec- Los cuadros 1 y 2 resumen los conceptos fundamentales controlados. Se han logrado importantes resultados: los Se requiere una limpieza a fondo de los filtros y eliminan-
cin del ambiente en este tema. microorganismos se adaptan a los hidrocarburos y desa- do el biofilm que se forma contra las paredes y que resul-
rrollan vas de degradacin. ta difcil de eliminar por las tcnicas usuales de limpieza.
Para lograr una efectiva biodegradacin es necesaria la Se desarrolla un hongo, llamado hongo del queroseno,
presencia de microorganismos o de asociaciones apro- Cuadro 1- Conceptos en la biorremediacin Ej. una gran acumulacin de productos bifenilpoliclorados Cladosporium resinae a expensas de esos residuos fir-
piadas de ellos y de condiciones ambientales adecuadas (BPC) ocurri en el ro Hudson (NY) y los microorganis- memente adheridos.
para la actividad biolgica. Se requieren adems, conoci- Biorremediacin: Empleo de microorganismos, plantas o enzi- mos nativos fueron capaces de deshalogenarlos en anae-
mientos de ecologa microbiana y de bioingeniera a los mas para la depuracin de polucionantes en distintos am- robiosis. Luego los barros se airean para lograr una de- La degradacin de maderas blandas almacenadas para la
efectos de disear condiciones favorables para el desa- bientes gradacin completa. fabricacin de papel ocasiona prdidas importantes. Los
rrollo y actividad microbiana para descontaminar ambien- Biodegradacin: Transformacin parcial de polucionantes por productos de desecho se lavan, pero los micoorganismos
tes naturales. agentes biolgicos como los microorganismos Microflora activa: un hongo el Phanerochaete chrysos- se desarrollan y alteran las propiedades de los materiales.
Mineralizacin: Conversin completa de un contaminante orgni- porium es un hongo basidiomicete capaz de degradar i) la
Los procesos se realizan: co a formas inorgnicas madera (podredumbre blanca) y ii) muchas sustancias Se aplican biocidas: antes se usaban derivados de Hg,
xenobiticas como benceno, tolueno, etilbenceno, xilenos, pero actualmente se los considera muy txicos y contami-
in situ, el suelo se emplea como un gran reactor, los clorados como 2,4,5 triCl etileno (TCE) y triclorofenoles. nan los ros. Para evitar los biofilms se usa cloro, fenoles,
residuos se incorporan en camadas de aproximadamen- Estos ltimos son contaminantes de conservantes de la organosulfurados, lavado con lcali caliente. Otros pro-
te 50 cm, en el suelo o en pilas en el compostaje, donde Cuadro 2- Requisitos para lograr xito en la madera y se usan tambin como pesticidas. ductos de la industria pueden ser atacados por microor-
sufrirn el ataque microbiano, se agregan los nutrientes biorremediacin ganismos degradadores alterando la materia prima, como
necesarios y se ajusta la humedad para estimular a la Los productos son degradados actuando como nutrientes los textiles, cueros, metales, pinturas, hormign.
Los contaminantes deben estar biodisponibles, es decir no ad-
biomasa microbiana (fuentes de energa, carbono) en la fase logrartmica de
sorbido en un residuo inaccesible (arcillas, humus)
crecimiento o por cometabolismo: donde la sustancia es
en reactores, especialmente diseados, que pueden Los microorganismos degradadores apropiados deben estar pre- degradada luego del crecimiento activo. Fitorremediacin
tratar gran volumen de sustancias en perodos ms cor- sentes en el suelo, agua, o disponibles para la inoculacin
tos de tiempo. Los compuestos recalcitrantes: no son degradados a velocidad Los procesos ocurren: Algunas plantas exhiben una tolerancia excepcionalmente
razonable: ejemplo de compuestos naturales recalcitrantes: hu- alta a elementos minerales y son capaces de acumularlos
Muchas veces resulta necesario incrementar la poblacin mus, artificiales (pesticidas, plsticos) i) en la naturaleza, caso de derrames, causes contami- en sus tejidos. Estas plantas acumuladoras son en general
de microorganismos responsables de las transformacio- Los organismos deben degradar el contaminante a velocidad tal nados con derivados de petrleo, pesticidas, etc. indgenas en un suelo particular o roca madre y se em-
nes. As, la inoculacin del ambiente contaminado con que permita llevar su concentracin a estandares regulares plean para depuracin de suelos contaminados.
organismos seleccionados es una prctica muy emplea- ii) en biorreactores: aparatos diseados por la industria
Deben reunirse condiciones ambientales favorables para el de-
da en la actualidad. sarrollo microbiano: temperatura del suelo, pH, aireacin, hume-
que contienen en general una fase slida con los micro- Una estrategia muy utilizada en la actualidad, consistente
dad organismos activos adsorbidos a la misma o bien con en recrear en el sitio contaminado una comunidad planta/
El incremento de los microorganismos activos se puede enzimas como la lignina peroxidasa, piranosa oxidasa, microorganismos capaces de tolerar el polucionante y
Puede requerirse fertilizacin (N, P, K, etc.) para estimular pro-
lograr de varias maneras: activas en la degradacin de la madera, actuando al participar en su eliminacin (cuadro 8, figura 3). Se ase-
cesos degradativos
estado adsorbido. gura la degradacin de polucionantes orgnicas por plan-
estimulacin de la poblacin existente por alteraciones El costo del tratamiento debe ser menor que el de las otras tec- tas o microorganismos asociados (hongos micorrcicos,
del ambiente o agregado de nutrientes nologas disponibles metanotrficos, bacterias rizosfricas). Tambin se estn
Control de la biodegradacin desarrollando tcnicas genticas para producir plantas con
aislamiento y seleccin de organismos competentes y la capacidad de degradar atrazina y otros pesticidas. Las
posterior inoculacin La falla en alguna de estas condiciones puede conducir al Existe una gran fuente de contaminacin por el desarrollo plantas extraen los contaminantes, se cosechan y proce-
fracaso de un proceso de biorremediacin, como ocurre de microorganismos en el fondo de tanques que actan san en forma controlada (reciclaje).
uso de microorganismos construidos por ingeniera en caso de suelos muy secos, o de pH inadecuado para
gentica, con propiedades deseables que pueden la actividad biolgica.
Este suceso demostr las ventajas de estas tcnicas de El cuadro 6 resume el efecto del ambiente y caractersti- El cuadro 3 resume las estrategias en la bioremediacin. industrial, por lo cual los suelos contaminados se trans-
biorremediacin ya que ocurri en condiciones muy fras cas de los microorgnamismos en la degradacin de hidro- portan y depositan en estructuras del tipo de los biodiges-
de Alaska y se mostr ms eficiente que los tratamien- carburos tores, con las instalaciones adecuadas para la entrada
tos previos fsicos y qumicos (solventes, envasado del Cuadro 3- Estategias para la biorremediacin pasiva o forzada de gases.
petrleo).
Cuadro 6- Requisitos para la biorremediacin de Pasiva o intrnsica: natural, de un lugar contaminado por or- La bioaumentacin, es la inoculacin del sitio contami-
En la figura 2 se aprecia un ensayo de degradacin de hidrocarburos: interacciones de los factores ganismos indgenas. nado con microorganismos seleccionados para estimular
derivados del petrleo estimulada por el agregado de fer- microbianos y del ambiente Bioestimulacin: adicin de nutrientes, N, P, S, etc. para incre- la degradacin. Los inoculantes pueden estar formados
tilizantes. Mientras 80% de los hidrocarburos no voltiles mentar a los microorganismos del suelo por microorganismos nativos seleccionados para el pro-
se degradaron entre 6 meses a 1 ao, las cadenas latera- Componente del sistema requisito ceso en cuestin o bien se pueden usar aquellos genti-
Bioventilacin: donde se agregan estimulantes gaseosos al
les y los hidrocarburos aromticos llevaron ms tiempo. microorganismo capacidad de degradar el HC, para suelo, como O2, CH4, pasivamente o en forma forzada, para es- camente modificados, a los cuales por ingeniera genti-
contribuir a la bioemulsificacin timular la actividad microbiana ca se les incorporaron genes activos en la biodegrada-
1800 capacidad de FBN cin. Puede tratarse de una sola especie o de varias es-
Bioaumentacin: inoculacin de microorganismos a un sitio con-
1600 pecies (consorcio microbiano).
1400 entorno nutrientes accesorios (N,P,K,Fe) taminado. El inoculante puede tener un microorganismo natural
1200 disponibles en la misma ubicacin o modificado genticamente (solos o en consorcio), selecciona-
dos por su capacidad degradativa Los mismos se seleccionan en el laboratorio, inoculan-
1000 fsica que los microorganismos y
800
No N-P-K do con suelo o aguas, medios de cultivo con dosis cre-
+ N-P-K
el hidrocarburo Rellenos sanitarios: landfarming enterrar contaminantes en
600 ausencia de metales pesados, que cientes de la sustancia txica en estudio, por ejemplo,
suelos no contaminados, con capa impermeable inferior para
400
puedan daarlos hidrocarburos, como nica fuente de C y energa. Las
200 evitar prdidas. Se combina con los anteriores.
temperatura, pH en el rango colonias que se desarrollan en estos medios, se van se-
0 Compostaje: microorganismos aerobios, termfilos, en pilas o
n C-12 n C-17 n C-22 n C-27 n C-34 adecuado, etc. leccionando por su capacidad degradadora sobre el xe-
reactores, humedecidos. Luego de atacar materiales rpidamente nobitico.
Figura 2- Efecto de la fertilizacin en la degradacin de n- degradables, atacan a las sustancias xenobiticas
alcanos en playas con petrleo El cuadro 7 esquematiza los tratamientos antipolucionan- Fitorremediacin: empleo de plantas para sacar o transformar Rellenos sanitarios, consisten en la aplicacin e incor-
tes en aguas contaminantes (plantas hiperacumuladoras o que estimulan mi- poracin de suelos contaminados en la superficie de sue-
croorganismos rizosfricos degradadores) los no contaminados. Son en general excavaciones de
El cuadro 5 resume aspectos de la biodegradacin de hi- suelos muy pobres, con un fondo de arcillas o algn ma-
drocarburos derivados del petrleo. Cuadro 7- Biorremediacin en ambientes marinos terial impermeable, para evitar la contaminacin de las
La biorremediacin pasiva o intrnseca es la que ocurre napas freticas. El suelo contaminado es arado y se mez-
Pastillascon nutrientes y preparacin oleoflica (soluble en HC) naturalmente por accin de los microorganismos nativos. cla bien, pudindose incorporar nutrientes, inculo micro-
Cuadro 5- Degradacin de derivados del petrleo
(reduccin 30-40% de manchas en relacin a controles sin adi- Esta es la ms frecuente estrategia de degradacin de biano y gases, para acelerar el proceso.
ciones)
No son aptos para fermentar, se degradan en presencia de O2 y contaminantes, a pesar de que el proceso puede ser muy
en condiciones adecuadas de temperatura, H%, nutrientes Vapor a alta presin, altera la comunidad microbiana lento si las condiciones no son las adecuadas. Compostaje, es el uso de procesos microbianos aero-
bios y termfilos en pilas o reactores, para degradar el
Variedad de bacterias, ciertos hongos y levaduras y cianobacte- Inoculacin con microorganismos:
La biestimulacin, que incorpora nutrientes, como polucionante. Los dispositivos se mezclan peridicamen-
rias pueden oxidar HC: colonizan las gotas oleosas en superficie * aislados en zonas de campo contaminadas
* obtenidos de colecciones de cultivo seleccionadas de la fuentes de nitrgeno y fsforo, con el objeto de estimu- te y se humedecen a los efectos de lograr la mxima acti-
Los hidrocarburos voltiles llegan a la atmsfera y quedan en el vidad biolgica. Los microorganismos activos se encuen-
naturaleza lar a la microflora nativa, es corrientemente empleada.
suelo los de largas cadenas alifticas y aromticas tran en el suelo y son incrementados por el proceso de
* mejorados genticamente: Pseudomonas con plsmidos Los nutrientes pueden incorporarse con agua de riego,
Bacterias oxidantes aumentan 103 a 106 de veces en corto tiem- que degradan HC, fue patentada en 1974. en caso de suelos contaminados, o en preparados so- compostaje.
po luego del derrame lubles en hidrocarburos, en el caso de derrames de
Condiciones ideales y con HC marcados y medida de consumo petrleo en el mar. Fitorremediacin, es el empleo de vegetales para ab-
de O2 mostr que ms del 80% de los no voltiles son oxidados Pueden no resultar eficaces por diversas causas, entre ellas: sorber, remover o transformar contaminantes. Son muy
por bacterias en el 1er ao del derrame. Los de cadena ramifica- La bioventilacin, que emplea gases estimulantes, como empleadas en el caso de remocin de metales pesados,
da y los policclicos, requieren ms tiempo i) predacin por protozoos O2, CH4, en forma pasiva o forzada en los suelos a los que se acumulan en la madera en el caso de rboles o en
ii) no establecer contacto con el sustrato a degradar efectos de incrementar la actividad degradadora de la la fitomasa en herbcea, que debe tratarse luego en inci-
Los que llegan a los sedimentos, son ms difciles de eliminar
iii) no han logrado competir con la flora indgena y sobrevivir poblacin nativa, requiere dispositivos especiales, de tipo neradores.
La accin se da directamente, en plantas hiperacumulan- es generar energa y/o obtener fuentes de C, N y otros (aire y metano) HCl Casos especiales: inoculacin
CO2
tes, o indirectamente, por estimulacin de microorganis- nutrientes para su desarrollo.
mos activos en su rizosfera.
Inyeccin Recuperacin de metales a partir de minerales con ni-
Gas natural Vaco
Muchos microorganismos son hiperacumuladores de
Compresor
Calor veles muy bajos de los mismos, no aptos para fundi-
Como vimos en el captulo anterior, en la degradacin de sustancias txicas, como lo son muchos metales pe- cin. Se emplea Thiobacillus ferrooxidans y otros mi-
una molcula recalcitrante es necesario tener en cuenta sados. Algunos hongos pueden acumular ms de 2g/ Extraccin aire contaminado croorganismos, cuya gran produccin de cido permite
sus caractersticas (peso molecular, solubilidad en agua y kg de arsnico en sus cuerpos fructferos, un nivel su- extraer un 70% del hierro (biolixiviacin)
en otros solventes, sustituyentes halogenados, etc.) y las ficientemente alto como para convertirlo en txico si se
condiciones del ambiente. consume. CuSO4 + Fe Cu + FeSO4
En el cuadro 4 se resumen condiciones del ambiente a soluble (3g/L) precipita y se recoge en fosa de
tener en cuenta en el proceso. Cuadro 4- Condiciones del ambiente a tener en Zona Zona saturada sedimentacin
contaminada en agua
cuenta en la bioremediacin
Si bien las sustancias de origen biolgico naturales, son Figura 1- Ejemplo de tratamientos de suelo contaminado, por Caso del Exxon Valdez: en marzo de 1989 se derra-
Contenido de humedad, regulada usualmente por irrigacin o bacterias metanotrficas. maron 40 millones de litros de petrleo puro en Prince
degradadas por algn tipo de microorganismo en ambien-
por aerosoles William, Alaska. Cerca de 1.600 Km de costa se afecta-
tes como el suelo, las aguas y tambin lo hacen muchas
de las de origen sinttico, existen sustancias de lenta de- Niveles de oxgeno, mezclando el suelo con arados y/o aireacin ron y la limpieza total cost 1.500 millones de dlares.
gradacin, llamadas recalcitrantes. Entre las naturales Ejemplos de biorremediacin Constituye un caso muy conocido por el impacto cau-
Nutrientes, primariamente carbono, nitrgeno y fsforo, agrega-
se encuentra el humus, de lenta degradacin y entre las USA: decontaminacin de suelos con TCE (tricloroetile- sado en el ambiente, superado lamentablemente por el
dos por fertilizacin
que sintetiza el hombre, encontramos muchos pesticidas, no) y PCE (tetracloroetileno) por inyeccin de aire en ocurrido en Galicia, Espaa, en el 2003.
pH, en caso de acidez ,se puede incrementar ligeramente por
solventes, derivados clorados. tubos horizontales con 1% CH4. Aumenta el N de me-
encalado Dada la extensin del rea, la limpieza debi involucrar
tanotrficos que promueven zonas anaerbicas donde
El suelo y las aguas constituyen importantes reservorios Estructura del suelo, se favorece por agregado de aditivos (pase reducen los contaminantes: (para reducir 95% de con- microorganismos nativos.
jas, arcillas) o por mezclado con arados o aireacin taminacin se requirieron 10 aos sin CH4 y menos de
de microorganismos con variadas actividades degrada-
doras y mineralizantes. Estos microorganismos cuando Temperatura: muchos preparados se agregan en forma de aero- 4 aos con l, con ahorro de 1,5 millones de dlares) La degradacin fue estimulada por una microemulsin de
estn provistos de fuentes adecuadas de C, N y energa y soles a mayor temperatura que la ambiente nutrientes con NPK. Luego de ensayar varios fertilizan-
al encontrar condiciones ambientales adecuadas para su California,USA: derrame de 4.000 L de diesel (45% al- tes, se seleccion una emulsin, Inipol EAP22, un fertili-
desarrollo, constituyen importantes agentes para la bio- canos cclicos, 30% normales y 24% aromticos). En 6 zante oligoflico, formulado en base a agua/aceite que rin-
rremediacin de sitios polucionados. Los procesos de meses, la contaminacin baj a menos de 10-1.500 mg de 7,3/0,8/0 NPK. La fuente de N es la urea y el P, el
Se resumen a continuacin algunos de los mltiples ca- fosfato.
degradacin ocurren, como vimos, en variadas condicio- HC/kg suelo. Microorganismos degradadores nativos +
sos de biorremediacin sealados en la bibliografa (Ec-
nes, tanto aerobias como anaerobias. nutrientes (N, S) y H2O2 se mezclaron con agua y se
cles, 2003), que por otra parte es muy numerosa en la Se calienta a 90oC antes de aplicarse en spray en las cos-
inyectaron cada 2 semanas por 4 meses
Los principales intentos de biorremediacin ocurren en actualidad. El tratamiento es en general realizado por tas (300mL/m2). Cuando la emulsin se mezcla con el
aerobiosis, aunque se incrementan los tratamientos que empresas dedicadas a la conservacin del ambiente. petrleo crudo, se desestabiliza y se liberan los nutrien-
Lousiana, USA: derrame de 10.000 m3 atrazina en rea
emplean anaerobiosis. de 8 ha. Se efectu relleno sanitario arando 4 veces/ tes. Adems, un material orgnico tensoactivo, el cido
Cualquiera sea la estrategia abordada, tendrn mayor in- oleico, sirve de fuente de carbono y de energa de modo
semana. Se agregaron 880kg fert/ha (N,P,K 13-13-13)+
La degradacin se realiza en general por un consorcio ters aquellas en las cuales se obtiene un producto valo- que se logra el incremento de la poblacin nativa de de-
2.000 L de inoculante de un consorcio de microorganis-
de microorganismos, cuyos genes muchas veces conte- rizado, que se pueda recuperar y redunde en ingresos gradadores de hidrocarburos, los que una vez agotadas
mos degradadores (en 20 semanas, la atrazina bajo de
nidos en plsmidos, codifican para la degradacin en econmicos, como es el caso de realizar compostaje o las reservas del Inipol, atacan las molculas de petrleo.
100 mg/kg a menos de 10 mg/kg, con variaciones en
sucesivos pasos, hasta llegar a la mineralizacin. Mu- fitorremediacin.
las unidades por mezclado incompleto)
chas veces, un solo paso metablico, puede llegar a li- Ocurri significativa biorremediacin en 2 semanas, con
berar un producto orgnico no txico, sin llegar a los Los tratamientos, adems, debern competir en eficien- una eclosin de microorganismos degradadores de hidro-
En el subsuelo: Problemas especiales por permeabilidad
compuestos minerales. cia, rapidez, seguridad y costos, con los procedimientos carburos (1000X).
limitada (agua, O2): Pozos de inyeccin y control: nutrien-
fsicos (empleo de solventes, extraccin mecnica, etc.)
tes y fuente de O2 (aire comprimido y perxido) y/o con
Sus enzimas pueden ser intra o extracelulares y la fun- y qumicos (cidos, lcalis), empleados tambin en la El proceso ocurre tambin en condiciones naturales, pero
eliminacin fsica de vapores mediante vaco. Meses o aos
cin que cumplen los xenobiticos en la biorremediacin actualidad. a una velocidad mucho menor.
en completarse (figura 1) (Skipper, 1998)
La accin se da directamente, en plantas hiperacumulan- es generar energa y/o obtener fuentes de C, N y otros (aire y metano) HCl Casos especiales: inoculacin
CO2
tes, o indirectamente, por estimulacin de microorganis- nutrientes para su desarrollo.
mos activos en su rizosfera.
Inyeccin Recuperacin de metales a partir de minerales con ni-
Gas natural Vaco
Muchos microorganismos son hiperacumuladores de
Compresor
Calor veles muy bajos de los mismos, no aptos para fundi-
Como vimos en el captulo anterior, en la degradacin de sustancias txicas, como lo son muchos metales pe- cin. Se emplea Thiobacillus ferrooxidans y otros mi-
una molcula recalcitrante es necesario tener en cuenta sados. Algunos hongos pueden acumular ms de 2g/ Extraccin aire contaminado croorganismos, cuya gran produccin de cido permite
sus caractersticas (peso molecular, solubilidad en agua y kg de arsnico en sus cuerpos fructferos, un nivel su- extraer un 70% del hierro (biolixiviacin)
en otros solventes, sustituyentes halogenados, etc.) y las ficientemente alto como para convertirlo en txico si se
condiciones del ambiente. consume. CuSO4 + Fe Cu + FeSO4
En el cuadro 4 se resumen condiciones del ambiente a soluble (3g/L) precipita y se recoge en fosa de
tener en cuenta en el proceso. Cuadro 4- Condiciones del ambiente a tener en Zona Zona saturada sedimentacin
contaminada en agua
cuenta en la bioremediacin
Si bien las sustancias de origen biolgico naturales, son Figura 1- Ejemplo de tratamientos de suelo contaminado, por Caso del Exxon Valdez: en marzo de 1989 se derra-
Contenido de humedad, regulada usualmente por irrigacin o bacterias metanotrficas. maron 40 millones de litros de petrleo puro en Prince
degradadas por algn tipo de microorganismo en ambien-
por aerosoles William, Alaska. Cerca de 1.600 Km de costa se afecta-
tes como el suelo, las aguas y tambin lo hacen muchas
de las de origen sinttico, existen sustancias de lenta de- Niveles de oxgeno, mezclando el suelo con arados y/o aireacin ron y la limpieza total cost 1.500 millones de dlares.
gradacin, llamadas recalcitrantes. Entre las naturales Ejemplos de biorremediacin Constituye un caso muy conocido por el impacto cau-
Nutrientes, primariamente carbono, nitrgeno y fsforo, agrega-
se encuentra el humus, de lenta degradacin y entre las USA: decontaminacin de suelos con TCE (tricloroetile- sado en el ambiente, superado lamentablemente por el
dos por fertilizacin
que sintetiza el hombre, encontramos muchos pesticidas, no) y PCE (tetracloroetileno) por inyeccin de aire en ocurrido en Galicia, Espaa, en el 2003.
pH, en caso de acidez ,se puede incrementar ligeramente por
solventes, derivados clorados. tubos horizontales con 1% CH4. Aumenta el N de me-
encalado Dada la extensin del rea, la limpieza debi involucrar
tanotrficos que promueven zonas anaerbicas donde
El suelo y las aguas constituyen importantes reservorios Estructura del suelo, se favorece por agregado de aditivos (pase reducen los contaminantes: (para reducir 95% de con- microorganismos nativos.
jas, arcillas) o por mezclado con arados o aireacin taminacin se requirieron 10 aos sin CH4 y menos de
de microorganismos con variadas actividades degrada-
doras y mineralizantes. Estos microorganismos cuando Temperatura: muchos preparados se agregan en forma de aero- 4 aos con l, con ahorro de 1,5 millones de dlares) La degradacin fue estimulada por una microemulsin de
estn provistos de fuentes adecuadas de C, N y energa y soles a mayor temperatura que la ambiente nutrientes con NPK. Luego de ensayar varios fertilizan-
al encontrar condiciones ambientales adecuadas para su California,USA: derrame de 4.000 L de diesel (45% al- tes, se seleccion una emulsin, Inipol EAP22, un fertili-
desarrollo, constituyen importantes agentes para la bio- canos cclicos, 30% normales y 24% aromticos). En 6 zante oligoflico, formulado en base a agua/aceite que rin-
rremediacin de sitios polucionados. Los procesos de meses, la contaminacin baj a menos de 10-1.500 mg de 7,3/0,8/0 NPK. La fuente de N es la urea y el P, el
Se resumen a continuacin algunos de los mltiples ca- fosfato.
degradacin ocurren, como vimos, en variadas condicio- HC/kg suelo. Microorganismos degradadores nativos +
sos de biorremediacin sealados en la bibliografa (Ec-
nes, tanto aerobias como anaerobias. nutrientes (N, S) y H2O2 se mezclaron con agua y se
cles, 2003), que por otra parte es muy numerosa en la Se calienta a 90oC antes de aplicarse en spray en las cos-
inyectaron cada 2 semanas por 4 meses
Los principales intentos de biorremediacin ocurren en actualidad. El tratamiento es en general realizado por tas (300mL/m2). Cuando la emulsin se mezcla con el
aerobiosis, aunque se incrementan los tratamientos que empresas dedicadas a la conservacin del ambiente. petrleo crudo, se desestabiliza y se liberan los nutrien-
Lousiana, USA: derrame de 10.000 m3 atrazina en rea
emplean anaerobiosis. de 8 ha. Se efectu relleno sanitario arando 4 veces/ tes. Adems, un material orgnico tensoactivo, el cido
Cualquiera sea la estrategia abordada, tendrn mayor in- oleico, sirve de fuente de carbono y de energa de modo
semana. Se agregaron 880kg fert/ha (N,P,K 13-13-13)+
La degradacin se realiza en general por un consorcio ters aquellas en las cuales se obtiene un producto valo- que se logra el incremento de la poblacin nativa de de-
2.000 L de inoculante de un consorcio de microorganis-
de microorganismos, cuyos genes muchas veces conte- rizado, que se pueda recuperar y redunde en ingresos gradadores de hidrocarburos, los que una vez agotadas
mos degradadores (en 20 semanas, la atrazina bajo de
nidos en plsmidos, codifican para la degradacin en econmicos, como es el caso de realizar compostaje o las reservas del Inipol, atacan las molculas de petrleo.
100 mg/kg a menos de 10 mg/kg, con variaciones en
sucesivos pasos, hasta llegar a la mineralizacin. Mu- fitorremediacin.
las unidades por mezclado incompleto)
chas veces, un solo paso metablico, puede llegar a li- Ocurri significativa biorremediacin en 2 semanas, con
berar un producto orgnico no txico, sin llegar a los Los tratamientos, adems, debern competir en eficien- una eclosin de microorganismos degradadores de hidro-
En el subsuelo: Problemas especiales por permeabilidad
compuestos minerales. cia, rapidez, seguridad y costos, con los procedimientos carburos (1000X).
limitada (agua, O2): Pozos de inyeccin y control: nutrien-
fsicos (empleo de solventes, extraccin mecnica, etc.)
tes y fuente de O2 (aire comprimido y perxido) y/o con
Sus enzimas pueden ser intra o extracelulares y la fun- y qumicos (cidos, lcalis), empleados tambin en la El proceso ocurre tambin en condiciones naturales, pero
eliminacin fsica de vapores mediante vaco. Meses o aos
cin que cumplen los xenobiticos en la biorremediacin actualidad. a una velocidad mucho menor.
en completarse (figura 1) (Skipper, 1998)
Este suceso demostr las ventajas de estas tcnicas de El cuadro 6 resume el efecto del ambiente y caractersti- El cuadro 3 resume las estrategias en la bioremediacin. industrial, por lo cual los suelos contaminados se trans-
biorremediacin ya que ocurri en condiciones muy fras cas de los microorgnamismos en la degradacin de hidro- portan y depositan en estructuras del tipo de los biodiges-
de Alaska y se mostr ms eficiente que los tratamien- carburos tores, con las instalaciones adecuadas para la entrada
tos previos fsicos y qumicos (solventes, envasado del Cuadro 3- Estategias para la biorremediacin pasiva o forzada de gases.
petrleo).
Cuadro 6- Requisitos para la biorremediacin de Pasiva o intrnsica: natural, de un lugar contaminado por or- La bioaumentacin, es la inoculacin del sitio contami-
En la figura 2 se aprecia un ensayo de degradacin de hidrocarburos: interacciones de los factores ganismos indgenas. nado con microorganismos seleccionados para estimular
derivados del petrleo estimulada por el agregado de fer- microbianos y del ambiente Bioestimulacin: adicin de nutrientes, N, P, S, etc. para incre- la degradacin. Los inoculantes pueden estar formados
tilizantes. Mientras 80% de los hidrocarburos no voltiles mentar a los microorganismos del suelo por microorganismos nativos seleccionados para el pro-
se degradaron entre 6 meses a 1 ao, las cadenas latera- Componente del sistema requisito ceso en cuestin o bien se pueden usar aquellos genti-
Bioventilacin: donde se agregan estimulantes gaseosos al
les y los hidrocarburos aromticos llevaron ms tiempo. microorganismo capacidad de degradar el HC, para suelo, como O2, CH4, pasivamente o en forma forzada, para es- camente modificados, a los cuales por ingeniera genti-
contribuir a la bioemulsificacin timular la actividad microbiana ca se les incorporaron genes activos en la biodegrada-
1800 capacidad de FBN cin. Puede tratarse de una sola especie o de varias es-
Bioaumentacin: inoculacin de microorganismos a un sitio con-
1600 pecies (consorcio microbiano).
1400 entorno nutrientes accesorios (N,P,K,Fe) taminado. El inoculante puede tener un microorganismo natural
1200 disponibles en la misma ubicacin o modificado genticamente (solos o en consorcio), selecciona-
dos por su capacidad degradativa Los mismos se seleccionan en el laboratorio, inoculan-
1000 fsica que los microorganismos y
800
No N-P-K do con suelo o aguas, medios de cultivo con dosis cre-
+ N-P-K
el hidrocarburo Rellenos sanitarios: landfarming enterrar contaminantes en
600 ausencia de metales pesados, que cientes de la sustancia txica en estudio, por ejemplo,
suelos no contaminados, con capa impermeable inferior para
400
puedan daarlos hidrocarburos, como nica fuente de C y energa. Las
200 evitar prdidas. Se combina con los anteriores.
temperatura, pH en el rango colonias que se desarrollan en estos medios, se van se-
0 Compostaje: microorganismos aerobios, termfilos, en pilas o
n C-12 n C-17 n C-22 n C-27 n C-34 adecuado, etc. leccionando por su capacidad degradadora sobre el xe-
reactores, humedecidos. Luego de atacar materiales rpidamente nobitico.
Figura 2- Efecto de la fertilizacin en la degradacin de n- degradables, atacan a las sustancias xenobiticas
alcanos en playas con petrleo El cuadro 7 esquematiza los tratamientos antipolucionan- Fitorremediacin: empleo de plantas para sacar o transformar Rellenos sanitarios, consisten en la aplicacin e incor-
tes en aguas contaminantes (plantas hiperacumuladoras o que estimulan mi- poracin de suelos contaminados en la superficie de sue-
croorganismos rizosfricos degradadores) los no contaminados. Son en general excavaciones de
El cuadro 5 resume aspectos de la biodegradacin de hi- suelos muy pobres, con un fondo de arcillas o algn ma-
drocarburos derivados del petrleo. Cuadro 7- Biorremediacin en ambientes marinos terial impermeable, para evitar la contaminacin de las
La biorremediacin pasiva o intrnseca es la que ocurre napas freticas. El suelo contaminado es arado y se mez-
Pastillascon nutrientes y preparacin oleoflica (soluble en HC) naturalmente por accin de los microorganismos nativos. cla bien, pudindose incorporar nutrientes, inculo micro-
Cuadro 5- Degradacin de derivados del petrleo
(reduccin 30-40% de manchas en relacin a controles sin adi- Esta es la ms frecuente estrategia de degradacin de biano y gases, para acelerar el proceso.
ciones)
No son aptos para fermentar, se degradan en presencia de O2 y contaminantes, a pesar de que el proceso puede ser muy
en condiciones adecuadas de temperatura, H%, nutrientes Vapor a alta presin, altera la comunidad microbiana lento si las condiciones no son las adecuadas. Compostaje, es el uso de procesos microbianos aero-
bios y termfilos en pilas o reactores, para degradar el
Variedad de bacterias, ciertos hongos y levaduras y cianobacte- Inoculacin con microorganismos:
La biestimulacin, que incorpora nutrientes, como polucionante. Los dispositivos se mezclan peridicamen-
rias pueden oxidar HC: colonizan las gotas oleosas en superficie * aislados en zonas de campo contaminadas
* obtenidos de colecciones de cultivo seleccionadas de la fuentes de nitrgeno y fsforo, con el objeto de estimu- te y se humedecen a los efectos de lograr la mxima acti-
Los hidrocarburos voltiles llegan a la atmsfera y quedan en el vidad biolgica. Los microorganismos activos se encuen-
naturaleza lar a la microflora nativa, es corrientemente empleada.
suelo los de largas cadenas alifticas y aromticas tran en el suelo y son incrementados por el proceso de
* mejorados genticamente: Pseudomonas con plsmidos Los nutrientes pueden incorporarse con agua de riego,
Bacterias oxidantes aumentan 103 a 106 de veces en corto tiem- que degradan HC, fue patentada en 1974. en caso de suelos contaminados, o en preparados so- compostaje.
po luego del derrame lubles en hidrocarburos, en el caso de derrames de
Condiciones ideales y con HC marcados y medida de consumo petrleo en el mar. Fitorremediacin, es el empleo de vegetales para ab-
de O2 mostr que ms del 80% de los no voltiles son oxidados Pueden no resultar eficaces por diversas causas, entre ellas: sorber, remover o transformar contaminantes. Son muy
por bacterias en el 1er ao del derrame. Los de cadena ramifica- La bioventilacin, que emplea gases estimulantes, como empleadas en el caso de remocin de metales pesados,
da y los policclicos, requieren ms tiempo i) predacin por protozoos O2, CH4, en forma pasiva o forzada en los suelos a los que se acumulan en la madera en el caso de rboles o en
ii) no establecer contacto con el sustrato a degradar efectos de incrementar la actividad degradadora de la la fitomasa en herbcea, que debe tratarse luego en inci-
Los que llegan a los sedimentos, son ms difciles de eliminar
iii) no han logrado competir con la flora indgena y sobrevivir poblacin nativa, requiere dispositivos especiales, de tipo neradores.
litros por ao, adems de salir al mercado unos 1.000 pro- albergarse en plsmidos o en el cromosoma micro- Biorremadiacin natural como depsitos de combustibles (estaciones de servicio,
ductos qumicos nuevos al ao. Dado estos volmenes biano. combustibles para aviones, etc.)
se comprende la necesidad de accin de verdaderas in- Intervienen procesos fsicos, qumicos y biolgicos no
dustrias para la depuracin de suelos y aguas y la protec- Los cuadros 1 y 2 resumen los conceptos fundamentales controlados. Se han logrado importantes resultados: los Se requiere una limpieza a fondo de los filtros y eliminan-
cin del ambiente en este tema. microorganismos se adaptan a los hidrocarburos y desa- do el biofilm que se forma contra las paredes y que resul-
rrollan vas de degradacin. ta difcil de eliminar por las tcnicas usuales de limpieza.
Para lograr una efectiva biodegradacin es necesaria la Se desarrolla un hongo, llamado hongo del queroseno,
presencia de microorganismos o de asociaciones apro- Cuadro 1- Conceptos en la biorremediacin Ej. una gran acumulacin de productos bifenilpoliclorados Cladosporium resinae a expensas de esos residuos fir-
piadas de ellos y de condiciones ambientales adecuadas (BPC) ocurri en el ro Hudson (NY) y los microorganis- memente adheridos.
para la actividad biolgica. Se requieren adems, conoci- Biorremediacin: Empleo de microorganismos, plantas o enzi- mos nativos fueron capaces de deshalogenarlos en anae-
mientos de ecologa microbiana y de bioingeniera a los mas para la depuracin de polucionantes en distintos am- robiosis. Luego los barros se airean para lograr una de- La degradacin de maderas blandas almacenadas para la
efectos de disear condiciones favorables para el desa- bientes gradacin completa. fabricacin de papel ocasiona prdidas importantes. Los
rrollo y actividad microbiana para descontaminar ambien- Biodegradacin: Transformacin parcial de polucionantes por productos de desecho se lavan, pero los micoorganismos
tes naturales. agentes biolgicos como los microorganismos Microflora activa: un hongo el Phanerochaete chrysos- se desarrollan y alteran las propiedades de los materiales.
Mineralizacin: Conversin completa de un contaminante orgni- porium es un hongo basidiomicete capaz de degradar i) la
Los procesos se realizan: co a formas inorgnicas madera (podredumbre blanca) y ii) muchas sustancias Se aplican biocidas: antes se usaban derivados de Hg,
xenobiticas como benceno, tolueno, etilbenceno, xilenos, pero actualmente se los considera muy txicos y contami-
in situ, el suelo se emplea como un gran reactor, los clorados como 2,4,5 triCl etileno (TCE) y triclorofenoles. nan los ros. Para evitar los biofilms se usa cloro, fenoles,
residuos se incorporan en camadas de aproximadamen- Estos ltimos son contaminantes de conservantes de la organosulfurados, lavado con lcali caliente. Otros pro-
te 50 cm, en el suelo o en pilas en el compostaje, donde Cuadro 2- Requisitos para lograr xito en la madera y se usan tambin como pesticidas. ductos de la industria pueden ser atacados por microor-
sufrirn el ataque microbiano, se agregan los nutrientes biorremediacin ganismos degradadores alterando la materia prima, como
necesarios y se ajusta la humedad para estimular a la Los productos son degradados actuando como nutrientes los textiles, cueros, metales, pinturas, hormign.
Los contaminantes deben estar biodisponibles, es decir no ad-
biomasa microbiana (fuentes de energa, carbono) en la fase logrartmica de
sorbido en un residuo inaccesible (arcillas, humus)
crecimiento o por cometabolismo: donde la sustancia es
en reactores, especialmente diseados, que pueden Los microorganismos degradadores apropiados deben estar pre- degradada luego del crecimiento activo. Fitorremediacin
tratar gran volumen de sustancias en perodos ms cor- sentes en el suelo, agua, o disponibles para la inoculacin
tos de tiempo. Los compuestos recalcitrantes: no son degradados a velocidad Los procesos ocurren: Algunas plantas exhiben una tolerancia excepcionalmente
razonable: ejemplo de compuestos naturales recalcitrantes: hu- alta a elementos minerales y son capaces de acumularlos
Muchas veces resulta necesario incrementar la poblacin mus, artificiales (pesticidas, plsticos) i) en la naturaleza, caso de derrames, causes contami- en sus tejidos. Estas plantas acumuladoras son en general
de microorganismos responsables de las transformacio- Los organismos deben degradar el contaminante a velocidad tal nados con derivados de petrleo, pesticidas, etc. indgenas en un suelo particular o roca madre y se em-
nes. As, la inoculacin del ambiente contaminado con que permita llevar su concentracin a estandares regulares plean para depuracin de suelos contaminados.
organismos seleccionados es una prctica muy emplea- ii) en biorreactores: aparatos diseados por la industria
Deben reunirse condiciones ambientales favorables para el de-
da en la actualidad. sarrollo microbiano: temperatura del suelo, pH, aireacin, hume-
que contienen en general una fase slida con los micro- Una estrategia muy utilizada en la actualidad, consistente
dad organismos activos adsorbidos a la misma o bien con en recrear en el sitio contaminado una comunidad planta/
El incremento de los microorganismos activos se puede enzimas como la lignina peroxidasa, piranosa oxidasa, microorganismos capaces de tolerar el polucionante y
Puede requerirse fertilizacin (N, P, K, etc.) para estimular pro-
lograr de varias maneras: activas en la degradacin de la madera, actuando al participar en su eliminacin (cuadro 8, figura 3). Se ase-
cesos degradativos
estado adsorbido. gura la degradacin de polucionantes orgnicas por plan-
estimulacin de la poblacin existente por alteraciones El costo del tratamiento debe ser menor que el de las otras tec- tas o microorganismos asociados (hongos micorrcicos,
del ambiente o agregado de nutrientes nologas disponibles metanotrficos, bacterias rizosfricas). Tambin se estn
Control de la biodegradacin desarrollando tcnicas genticas para producir plantas con
aislamiento y seleccin de organismos competentes y la capacidad de degradar atrazina y otros pesticidas. Las
posterior inoculacin La falla en alguna de estas condiciones puede conducir al Existe una gran fuente de contaminacin por el desarrollo plantas extraen los contaminantes, se cosechan y proce-
fracaso de un proceso de biorremediacin, como ocurre de microorganismos en el fondo de tanques que actan san en forma controlada (reciclaje).
uso de microorganismos construidos por ingeniera en caso de suelos muy secos, o de pH inadecuado para
gentica, con propiedades deseables que pueden la actividad biolgica.
Cuadro 8- Mecanismos de fitorremediacin Ejemplos de rboles usados en la depuracin de aguas y

atmsfera
i) indirectamente, estimulando la actividad microbiana en la rizosfera
ii) directamente: absorbiendo el polucionante e inmobilizndolo (en Son seleccionados rboles fijadores de nitrgeno (AFN)
maderas, en caso de rboles) o degradndolo en sus tejidos por su rpido crecimiento y adaptacin a ambientes
23
pobres.
Se usan: plantas herbceas (flotadoras, de crecimiento rpido,
como los camalotes)
rboles: especies fijadoras de N2: Alnus glutinosa,
Especies de Casuarina pueden filtrar el aire y retener pol- Biorremediacin
vos industriales (radioactivos) y reducen el efecto inver-
Casuarina (resisten altos niveles de Cu, Cd, Zn. Pb nadero. Ejemplo Casuarina glauca y C. cunninghamiana
i) los costos de instalacin y mantencin deben ser menores que son usadas en suelos salinos o sdicos en California y se
en otros tratamientos informa que reducen el volumen de aguas salinas de dre-
naje y con nitratos. Limitan la eutroficacin de las aguas En este captulo se analizarn algunas de las estrategias tos polucionantes del suelo se consideran factibles de bio-
ii) la biomasa puede ser utilizable por el ganado (leguminosas her-
bceas) o enterrada (abono verde) con nitratos, sulfatos. biolgicas para restaurar suelos y aguas contaminadas y degradacin microbiana, por lo que la bioremediacin se
llevarlos a un estado no txico, llamado tambin estado aplica en ambientes contaminados por:
iii) en el caso de los rboles, la madera no entra en la cadena ali- saludable. Un ambiente sano es esencial no solo para sos-
Eliminan la polucin por nitratos, mediante la absorcin
mentaria humana (muebles, papel) tener la produccin de alimentos para los habitantes del derramamiento de petrleo bruto e hidrocarburos deri-
radical y activando la desnitrificacin, con microorganis-
mos estimulados en la rizosfera que emplean sustratos planeta, sino tambin para brindar una buena calidad de vados (benceno, xileno, tolueno, policclicos, etc.)
carbonados a partir del mantillo. vida. A travs del anlisis de algunos casos, se ilustrar
sobre los mecanismos de biodepuracin aplicados. solventes diversos (clorados, como el tricloroetileno,
Fitovolatilizacin Otras especies fijadoras de nitrgeno son empleadas en acetona, butanol, etilenglicol, cloruro de metilo)
Remocin de los
tratamiento de aguas servidas en el Cairo: Acacia saligna La biorremediacin, trmino no traducido al espaol, con-
contaminantes del suelo y
liberacin a la atmsfera A. nilotica, Erythrina indica, asociadas a especies no fija- siste en la aplicacin de un conjunto de tcnicas que per- otros: pentaclorofenol, TNT, halgenos, pesticidas
dores como Populus, Salix, etc. miten aumentar la biomasa microbiana del suelo y las acti-
vidades de los microorganismos y vegetales con el objeto metales, como mercurio, plomo, cadmio
Rizodegradacin Otros ejemplos incluyen (cuadro 9): de lograr la recuperacin de ambientes polucionados o con-
Metabolismo microbiano taminados. En particular se estimula la biodegradacin de radiactivos, como el radio, plutonio
del contaminante en la
rizosfera Cuadro 9- Ejemplos de fitoacumulacin productos con carcter xenobitico, originados por activi-
Fitoextraccin
Extarccin de dades del hombre y que contaminan el ambiente. pesticidas, como 2,4-D, atrazina, malation
contaminantes por los
vegetales
1- Alfalfa que hiperacumula N, absorbe gran cantidad de nitratos
2- Sebertia sp acumula hasta 25% de Ni Bajo esta denominacin se agrupan una variedad de pro- bifenilos policlorados como el araclor
3- Thlaspi sp acumula ms de 4% de Zn cesos de biotratamiento que varan en sus mecanismos
Figura 3- Procesos involucrados en la fotorremediacin 4- Tierras inundadas con vegetales que remueven uranio y selenio de accin: Estos contaminantes son introducidos a ambientes natu-
Problemas rales por las actividades del hombre. Algunos entran in-
# La hiperacumulacin es a veces especfica para un solo mineralizacin tencionalmente al suelo, como los pesticidas, o acciden-
elemento
Arboles en fitorremediacin # La mayora de las plantas crecen lentamente y con bajo
talmente, como los hidrocarburos, por prdidas de tan-
rendimiento
transformacin parcial de molculas txicas a otras sin ques, fugas en los sistemas de transporte.
A estas especies se les requiere: # Procesamiento: es necesario colectar la fitomasa y recu toxicidad
perar los contaminantes Si bien en nuestro pas, este no es un problema muy gra-
i) que produzcan una biomasa radical muy desarrollada humificacin ve, han ocurrido accidentes en relacin a derrames de
# Pueden estar asociadas a enfermedades poco estudiadas
capaz de estimular la actividad microbiana rizosfrica alteracin del potencial redox petrleo en el Ro de la Plata, contaminacin por plomo
en suelos y fugas de tanques de hidrocarburos en esta-
ii) que presenten genes que secuestren metales pesa- i) empleo de hbridos de lamos en zona talada para con- compostaje ciones de servicio.
dos o degraden sustancias indeseables (fenoles halo- vertirla a la agricultura, redujeron los nitratos un aguas
genados) subterrneas de 50-100 a 5 mgL-1, y eliminaron el 20% Algunos de los problemas de polucin ambiental pueden En USA, el servicio de proteccin ambiental (EPA) estima
de la atrazina resolverse por estos mecanismos: cerca de 300 compues- que los tanques de gasolina pierden unos 40 millones de
ii) palmeras plantadas en suelos marginales con 5000ppm esta tarea. Alguno de estos casos sirvi como ejemplo de
TNT redujeron el TNT en la solucin del suelo de 128 a biorremediacin.
10ppm en una semana
La biorremediacin es en general, menos riesgosa
El cuadro 10 resume algunas consideraciones en la apli- para el personal que la aplica y menos costosa que
cacin de esta tcnica de biorremediacin. los otros procedimientos ya que los contaminantes
pueden tratarse en el lugar. Por su naturaleza biol-
gica ejerce impacto menor en el ambiente ya que no
Cuadro 10- Condiciones del xito de la genera residuos.
fitorremediacin con rboles
No pueden dejarse de sealar desventajas del proce-
eleccin cuidadosa de las especies de AFN mejor adaptados a dimiento, relacionadas a: el contaminante puede pre-
las condiciones a rehabilitar: con crecimiento rpido (2m/ao en sentarse con baja biodisponibilidad, pueden darse si-
altura) tios con una mezcla de contaminantes orgnicos e in-
inoculacin con: bacterias simbiticas, hongos micorrcicos, mi- orgnicos.
croorganismos promotores del crecimiento vegetal y componen-
tes de la microfauna En estos casos puede darse la situacin de que un com-
aplicacin de tcnicas de acompaamiento: abonos, dosis mni- puesto pueda degradarse, mientras que otro sea txi-
mas de fertilizantes (P), sin olvidar la irrigacin co para los microorganismos o que las condiciones am-
bientales para los distintos contaminantes pueden ser
estudiar el efecto de la irrigacin y de los polucionantes de las
aguas en la FBN
muy diversos: aerobiosis/anaerobiosis, distintos pH, se-
quedad.
cuidar de no polucionar las napas freticas si la irrigacin no se
controla Se requieren an mayores estudios para manejar las in-
no se sabe aun si el carcter de FBN mejora o no la adaptabili- teracciones biolgicas, fsicas y qumicas en ambientes
dad y el rol depurador de la vegetacin leosa con mezcla compleja de contaminantes.
En el caso de la absorcin directa, las molculas peque- Bibliografa

as, de bajo peso molecular son favorecidas en relacin
a las de mayor peso molecular ya que las ltimas, so- Alexander, M. Biodegradation and bioremedia-
bretodo si son lipoflicas, tienden a ser excluidas de la tion. 1994 Academic Press, San Diego, Califor-
zona radical. nia, USA
Baker, K. H. and Herson, D.S. Bioremediation, 1994,
En resumen: Se analizaron procedimientos biolgicos McGraw-Hill, New York
para lograr restaurar suelos y aguas contaminados, la Balba, M. T. Microorganisms and detoxification of indus-
mayora de las veces por actividades del hombre, que trial waste. En: Exploitation of Microorganisms,
es necesario llevar a un estado saludable. Los abor- 1993 D. G. Jones (ed), Chapman & Hall, London:
dajes incluyen remediacin pasiva o activa, con aditi- 371-410
vos de fertilizantes, control de la humedad y tempera- Barkay, T., D. F. Schearer y B. H. Olson Toxicity Tes-
tura, incorporacin de gases a presin (O 2, CH4), oxi- ting Using Microorganisms, 1986, B. J. Dutka y G.
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America. Special Publication N 43, Madison, Wis. cacin ventajosa en relacin a otros posibles? cada ao por actividades domsticas, agrcolas e indus- croorganisms in Soil. En: Advances in Applied Mi-
Eccles, H. Bioremediation 2003, British Nuclear Fuels, 3) Concepto de los trminos: bioaumentacin y bioesti- triales que deben ser manejados a los efectos de evitar crobiology, 1990 vol 35: 195-253
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Hickey, W. J. Biochemistry and Metabolism of Xenobio- 4) Analice el caso de inoculacin con microorganismos junto de sustancias qumicas, conocidas como recalcitran- gria y R. S. Araujo Microorganisms e Processos
tic Chemicals. En: Principles and Applications of seleccionados tes, de muy lenta degradacin son introducidas delibera- Biolgicos do Solo: Perspectiva Ambiental, 1994,
Soil Microbiology. 1998 Sylvia, Fuhrmann, Hartel y 5) Explique brevemente estrategias para obtener estos damente o por accidente en los causes de aguas y en los EMBRAPA-SPI, Brasilia, DF
Zuberer (eds), Prentice Hall, N. Jersey: 447-468 microorganismos disponibles para la inoculacin de suelos y pueden persistir por largos perodos de tiempo. Stevenson, F. J. y Cole, M. A. Cycles of Soil, Carbon,
Shannon, M. J. R. y R. Unterman Evaluating bioremedia- grandes reas contaminadas Su persistencia es incrementada por su adsorcin a la Nitrogen, Phosphorus, Sulfur, Micronutrients, 1999,
tion: Distinguishing fact from fiction. 1993 Ann. Rev. 6) Empleo de vegetales en la biorremediacin. Mecanis- materia orgnica o a la fraccin mineral del suelo. Resulta Wiley & Sons, New York
Microbiology, Palo Alto, 47, pp: 715-738 mos involucrados de suma importancia el conocimiento de los efectos de
Siqueira, J. O., F. M. de S. Moreira, B. M. Grisi, M. Hun- una nueva sustancia, por ejemplo un pesticida, sobre los
7) Discuta los procesos de degradacin de un polucio-
gria y R. S. Araujo Microorganisms e Processos principales grupos y procesos microbianos, adems de Preguntas de repaso
nante por metabolismo normal y por cometabolismo.
Biolgicos do Solo: Perspectiva Ambiental, 1994, manifestar su inocuidad sobre el hombre, antes de reco-
EMBRAPA-SPI, Brasilia, DF 8) Por qu conviene seleccionar vegetales (rboles y/o mendar su comercializacin y empleo. 1) Cite ejemplos de sustancias denominadas recalcitran-
Skipper, H. D. Bioremediation of Contamined Soils. En: herbceas) fijadoras de nitrgeno en la depuracin de tes, de origen natural y sintticas
Principles and Applications of Soil Microbiology. ambientes contaminados? 2) Qu destino tienen en la naturaleza?
1998, Sylvia, Fuhrmann, Hartel y Zuberer (eds), Pren- 9) Cul es el destino de metales pesados en caso de la Bibliografa 3) Alternativas de biodegradacin de pesticidas en el suelo
tice Hall, N. Jersey: 469-481 fitorremediacin por rboles? 4) Mecanismos fsicos, qumicos y biolgicos que puedan
Alexander, M. Biodegradation and bioremediation. 1994 explicar la desaparicin de un pesticida agregado al
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Alexander, M. Introduccin a la microbiologa del sue- 5) Por qu los microorganismos son usados como orga-
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Balba, M. T. Microorganisms and detoxification of indus- ducto a ser liberado a la naturaleza?
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1993, D. G. Jones (ed), Chapman & Hall, London: 371- una nueva sustancia usada como fertilizante, en la mi-
410 croflora del suelo
Barkay, T., D. F. Schearer y B. H. Olson Toxicity Testing 7) Discuta los procesos de degradacin de un polucio-
Using Microorganisms, 1986, B. J. Dutka y G. Bitton nante por metabolismo normal y por cometabolismo
(eds) vol 2, CRC Press, Boca Raton, Florida: 133-135 8) En qu situaciones puede incrementarse el nivel de
Frioni, L. Procesos microbianos. 1999 Fundacin de la metales pesados en un suelo?
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina 9) Precauciones a tener en cuenta al respecto:
Hickey, W. J. Biochemistry and Metabolism of Xenobiotic 10) Seale algn mecanismo para la eliminacin de me-
Chemicals. En: Principles and Applications of Soil tales (Cd, Hg, Cr) del suelo
Xenobiticos inorgnicos Los microorganismos poseen la capacidad de trans-

formar elementos minerales, por ejemplo, al usarlos
Muchos compuestos inorgnicos se forman como dese- como fuente de energa (Fe++ a Fe+++ por Thiobacillus),
chos en las industrias modernas, como anhdridos de S y aceptor de electrones (Mn+4 a Mn+2 por Bacillus), oxi-
N y las sales de metales pesados, que se consideran xe- dacin (As), alquilacin (CH3- + Hg+2 CH3Hg-, por
nobiticos por la elevada concentracin liberada en am- Clostridium).
bientes naturales, sobre todo aguas y suelo y los efectos
deletreos que ejercen en la biosfera. A pesar de que Efecto del suelo y las plantas sobre los metales Anexo prctico
muchos metales son abundantes en la corteza de la tie- txicos
rra, las actividades del hombre, como la combustin de Numerosas prcticas culturales se han implementado para
petrleo y derivados, minas y prcticas agrcolas, frecuen- controlar el ciclo de los minerales en el suelo, como aque-
temente incrementan su concentracin a niveles txicos. llas que disminuyen su disponibilidad por encalado que
Entre los metales txicos a alta concentracin se incluye eleva el pH o la incorporacin de residuos vegetales y Muestreo y anlisis fsico-qumicos Diversidad estructural y funcional de comunidades mi-
el arsnico, boro, cadmio, cromo, cobre, plomo, mercurio, otros materiales ricos en materia orgnica que facilitan la crobianas del suelo:
molibdeno, nquel, selenio, zinc, vanadio. quelacin de los mismos (complejos organo-metlicos), Muestreo de suelos, aguas, alimentos, conservacin de
la arada profunda que baja su concentracin en la super- las muestras, humedad: Perfil fisiolgico de la comunidad, anlisis de molculas
La aplicacin de abonos orgnicos puede conducir a la ficie y la seleccin de plantas por sus caractersticas de especficas: cidos grasos, cidos nucleicos
acumulacin de metales en el suelo, muchos de los cua- enraizamiento (del tipo profundo) y con reducida capaci- H% y factor de correccin de la humedad (h)
les pueden ser txicos para los animales y el hombre. dad de asimilar y acumular metales txicos en la porcin Recuentos microbianos: hetertrofos totales, hongos, al-
cosechable del cultivo. Anlisis fsicos y qumicos: pH, C-orgnico, N-organi- gas, protozoos, grupos fisiolgicos

El cuadro 9 (Stevenson y Cole, 1999) presenta los niveles co, N-NH4+, N-NO3
en minerales en abonos obtenidos por biodegradacin La seleccin vegetal es muy importante ya que distintas
anaerobia y por compostaje. especies en un mismo suelo presentan marcadas dife- Ciclos biogeoqumicos e interacciones con
rencias en la concentracin de elementos traza. Prcticas usuales en el Laboratorio de plantas
Microbiologa
Cuadro 9- Rangos en la acumulacin de Finalmente, la materia orgnica ejerce un efecto tampn Carbono: actividad mineralizante, amilolticos, celulolticos
elementos minerales (mg/kg) en dos tipos de mejorando los efectos adversos de los metales introduci- Bioseguridad, microscopa, tinciones, siembra y aislamiento
abonos orgnicos dos al suelo como contaminantes. El plomo y el cadmio, Nitrgeno: Fijacin biolgica del N 2 (FBN), minerali-
son contaminantes altamente txicos que se introducen zacin: amonificacin, nitrificacin. Prdidas: desni-
Mineral Biofertilizante Compost al suelo en grandes cantidades a partir de deposiciones Indicadores biolgicos en estudios de trificacin
de la atmsfera, en ecosistemas agrcolas y forestales. ecologa microbiana
As 6-230 1-4,8 Azufre: sulfooxidacin, sulfatorreduccin
Pero se ha visto que gran parte es inmovilizado por for-
Cd 4-846 1-13,2 Actividad respiratoria: desprendimiento de CO2
macin de complejos con la materia orgnica en el suelo
Cr 17-99.000 8,2-130 forestal, enriqueciendo las capas orgnicas con metales Fsforo: solubilizacin de P insoluble. Mineralizacin de
Hg 1-10.600 0,5-3,7 pesados. Existe el temor de que el Pb y el Cd puedan Biomasa microbiana: C de la biomasa por tcnicas de P-orgnico
Ni 10-3.500 7-100 eventualmente ser movilizados y transportados a causes fumigacin-inoculacin y fumigacin-extraccin. N-bioma-
Pb 13-19.700 22-913 de agua como complejos solubles (Stevenson y Cole, sa, P-biomasa Micorrizas: ecto y endomicorrizas del tipo arbuscular. Ino-
1999). culacin
Indices: Coeficiente de mineralizacin del C-orgnico= (C-
Muchos pases impiden el uso de abonos orgnicos a los Los vegetales se emplean tambin para depurar un am- CO2/C total) x 100
suelos si estos contienen metales pesados para evitar su biente (suelo, aguas) de metales pesados. La accin la Biodegradacin de residuos
acumulacin luego de varios aos de aplicacin. Com- ejercen o bien los microorganismos de su rizosfera o las Biomasa como %C total= (C-biomasa/C total) x 100
puestos orgnicos solubles en agua pueden formar com- propias plantas hiperacumulan los metales pesados (ca- Coeficiente respiratorio= qC-CO2/C-biomasa Evaluacin del grado de madurez de compost
plejos organo-metlicos y desplazar los metales en el suelo ptulo 23). Estas plantas (acuticas como los camalotes,
y hacia aguas freticas, incrementando los riesgos de otras especies herbceas como maz, sorgo) deben eli- Actividades enzimticas: deshidrogenasas, fosfatasas
contaminacin. minarse del ambiente y tratarse en usinas especializadas. cida y alcalina, hidlisis del acetato de fluorescena (FDA) Bibliografa
Muestreo y acondicionamiento de las mues- Anlisis fsicos y quimicos La nodulacin y la fijacin del nitrgeno en legumino- 3. Fijacin simbitica del N2, en macetas: nodulacin:
tras de suelo sas pueden ser afectadas por pesticidas, sobre todo por nmero, peso, tamao, actividad nodular, rendimiento
(Bremner, 1965; Nelson y Sommers, 1982 Robertson et aquellos aplicados a las semillas que adems se inoculan vegetal.
a) un nmero adecuado de submuestras (10-20) compo- al., 1999) con rhizobios especficos. Se propone separar en el tiem-
ne la muestra de suelo, por ejemplo, 1 Kg, recogidas en po las aplicaciones de inoculante y fungicida o trabajar 4. Microorganismos particulares y antagonismos: mi-
el predio al azar pH con mutantes de rizobios resistentes a los pesticidas ms corrizas, patgenos vegetales, antagonistas.
Mezclar 1 parte de suelo con 2,5 partes de agua. Agitar y empleados. El cuadro 8 evidencia la importancia de esta
b) secar las muestras al aire, sobre papel absorbente en medir en pHmetro. Se suele medir tambin en solucin lnea de trabajo. 5. Estabilidad de agregados y mejoramiento de la es-
bandejas dentro del laboratorio o usarlas inmediatamen- de KCl tructura.
te (estado fresco) Se inform de marcada inhibicin de la actividad nitro- Los estudios incluyen distintas dosis de los productos, for-
gensica en la rizosfera de 25 variedades de sorgo, mas de aplicacin: incorporacin, pulverizacin, etctera.
c) tamizar el suelo a 2mm y guardarlo en bolsas de plstico C-orgnico cuando se emplearon dosis tres veces superiores a las Es muy importante realizar experiencias a nivel de cam-
bien cerradas y rotuladas en heladera (3-5C) hasta efec- normales de atrazina (4,5 kg/ha)(Frioni, 1999), efecto po; ya que resulta casi imposible correlacionar resultados
tuar los anlisis (no ms de 15 das-1 mes). Segn las El C-orgnico del suelo es oxidado por tratamiento con que desapareci en otro ensayo de campo, en Argenti- obtenidos bajo condiciones controladas con los logrados
determinaciones a efectuar, muchas muestras pueden dicromato de potasio y cido sulfrico concentrado en na, sin herbicida. En el mismo cultivo, se comprob en cuando estas sustancias llegan al suelo, en condiciones
guardarse congeladas a 20C hasta su empleo y a otras caliente. El Cr+3 liberado se determina coloromtricamen- otro ensayo con aplicaciones de distintas dosis de tres naturales.
se las analiza al estado fresco, como vienen del campo. te y se asume que es proporcional a la materia orgnica herbicidas: atrazina, linurn y 2,4-D amina, que la ce-
del suelo lulolisis fue inhibida por todos los tratamientos pestici- Cuando se observan efectos laterales en ensayos de
Determinacin del porcentaje de humedad das. Este efecto fue observado por otros autores y se laboratorio, los pesticidas deben llevarse a la naturaleza
Se realiza en cpsulas metlicas con tapa, numeradas y Pesar 0,5-2g de suelo seco al aire en matraz de 100mL, atribuye a la falta de sustratos carbonados (las male- y realizar all las observaciones, aunque estos trabajos
pesadas previamente = Peso Tara (PT). En caso de no agregar 20mL de solucin de dicromato de potasio zas son suprimidas) y a una inhibicin selectiva de la son largos y se debe considerar el efecto del ambiente
disponer de las mismas, usar cajas de Petri 0,33M (98,06g K2Cr207 en 1L agua, si es necesario celulasa. (temperatura, humedad, nutrientes) sobre las propieda-
calentar). Agregar cuidadosamente 15mL de cido sul- des biolgicas que evaluamos, afectadas adems por
Procedimiento frico concentrado (96-98%) bajo campana. Reposar Numerosas revisiones incluyen determinaciones de efec- los pesticidas.
a) Colocar suelo fresco en las cajas, pesar las mismas por 2-3 horas tos sobre procesos biolgicos como respiracin, mine-
(una cifra despus de la coma) = Peso Fresco (PF) ralizacin del nitrgeno, nitrificacin, datos sobre recuen- En resumen: se puede sealar que raramente la agricul-
Diluir a 100mL con agua destilada y mezclar. Dejar toda tos de ciertos grupos de microorganismos, evaluacin tura moderna dejar de emplear estos productos para lo-
b) Colocar las muestras en estufa a 105C durante 48 la noche del ATP de origen microbiano, enzimas especficas (des- grar incrementar los rendimientos. Reconocida la toxici-
horas, destapadas (conservar los rtulos) hidrogenasas, celulasa, amilasa, etc.), fijacin del nitr- dad de la mayora de ellas para el hombre, animales y
Determinacin fotomtrica: tomar 1 mL y diluir a 25mL geno. Se propuso un programa de anlisis a los que microorganismos, es de esperar que se empleen cons-
c) Poner las cajas tapadas en desecador con silica-gel con agua destilada, mezclar brevemente. Diluir solucio- deben ser sometidos los pesticidas antes de que su dis- cientemente por los tcnicos y productores y en las dosis
deshidratado o CaCl2 anhidro hasta pesar nes estandares en la misma forma tribucin sea autorizada por autoridades competentes, recomendadas, evitando contaminar recursos tan impor-
donde se incluyen estudios sobre la poblacin normal tantes como suelos y aguas, con productos altamente txi-
d) Pesar nuevamente = Peso Seco (PS) Medir las muestras a 570mn frente a blancos y calcular % del suelo, adems de los clsicos controles sobre sani- cos y escasamente biodegradables.
C-orgnico a partir de la curva de calibracin (ajuste a una dad humana y vegetal:
Clculo del H% (agua como % del peso seco del suelo) recta): ejemplo: 3,75 g de glucosa en 1L agua, equivale a Los agroqumicos parecen no ejercer efectos de larga
1,5g de C/L o 1.500 mg/L= 1.500ppm. Diluir la misma 5 1. Actividad respiratoria (CO2, O2) evaluada en el la- duracin en actividades microbianas del suelo cuando se
H% = PF - PS x 100 veces para obtener 0,3g/L y 20 veces para 0,075g/L. boratorio en muestras de suelo: sin aditivos (respira- aplican a dosis recomendadas. Sin embargo, al emplear-
PS - PT cin endgena), con glucosa (proceso activado por el las a dosis superiores, provocan efectos negativos, de
Clculo del factor de correccin de la humedad: Determinar contenido de C de alcuotas de las solucio- desarrollo microbiano) y con restos vegetales (degra- corta duracin, particularmente sobre transformaciones del
nes estandares, por ejemplo entre 0 y 1mg/mL de solu- dacin de materia orgnica compleja por sucesiones carbono y del nitrgeno.
h = 100 + H% cin por el mismo procedimiento que las muestras de microbianas).
100 suelo analizadas Las prcticas de control de plagas incluyen cada vez ms
2. Transformaciones del nitrgeno: amonificacin, ni- las tcnicas de Control Biolgico, empleando microor-
NOTA: al multiplicar los datos por h, stos se expresan Nota: Considerando que el contenido medio de carbono trificacin. ganismos antagonistas de fitopatgenos (captulo 17).
por suelo seco en la materia orgnica es de 58%, el C-orgnico se con-
+ - -
te varios aos, se obtienen mediante modelos de predic- otros resistentes. Estos cambios pueden ser de corta vierte en contenido de materia orgnica empleando el N-NH4 , N-NO2 y N-NO3
cin, curvas de desaparicin simuladas de estas sustan- duracin, aunque la poblacin puede ser afectada en factor 1,72
cias. algunos casos por largos perodos La amonificacin y la nitrificacin se evaluan por la pro-
duccin de N-NH4+, N-NO2- y N-NO3- y su variacin en el
En general, la concordancia entre valores observados y grados de susceptibilidad: una especie puede decli- N-orgnico tiempo en el suelo mismo, solo o con distintos agregados:
simulados es buena y su empleo resulta muy til, sobre nar apreciablemente, una segunda puede alterarse slo fertilizantes, pajas, pesticidas, etc.. Los ensayos pueden
todo si se consideran las dificultades en la toma de mues- ligeramente y otras pueden resistir el efecto del pestici- En digestin con H2SO4 el N-orgnico se convierte en ser controlados en laboratorio (in-vitro) lo que evidencia
tras representativas en el campo, la variabilidad asociada da. Las hifas de los hongos y las clulas vegetativas de amonio. Se aumenta la temperatura de digestin con actividades potenciales o en el campo (in situ), donde
en la determinacin de cantidades pequeas, etc. las bacterias son an ms afectadas que los conidios o K2SO4 y el Cu y Se actan como catalizadores que incre- se evalan las actividades reales.
esclerocios de los hongos o que las endosporas bacte- mentan la velocidad de oxidacin de la materia orgnica.
rianas El N-NH4+ formado se puede determinar de varias mane- Es de destacar que estas medidas constituyen un dato
ras: colorimtricamente con reactivo de Nessler, con elec- puntual, una imagen como fotogrfica de los que realmente
efecto en interacciones biolgicas: algunos fungici- trodos especficos o por destilacin con lcali. En este caso ocurre ya que estos iones siguen numerosas vas en los
das pueden provocar estimulacin en la incidencia de el destilado se recoje en cido brico y se forma borato de ecosistemas terrestres o acuticos (captulo 10).
enfermedades, hecho que se atribuye a inhibicin de amonio, que se valora con cido clorhdrico. Los nitratos
poblaciones que compiten con la especie perjudicial y a y nitritos no se incluyen en esta valoracin, sino que se Las tcnicas de evaluacin de amonio, nitrito y nitrato son
la proliferacin de poblaciones antagnicas determinan como amonio luego de su reduccin con amal- muy variadas: colorimtricos, electrodos especficos, por
gama Dewarda (Cu, Zn en polvo). desplazamiento del amonio con una base fuerte (OMg) y
efectos sobre procesos microbianos: en las transfor- titulacin con cido, reduccin de nitritos y nitratos por
maciones de compuestos nitrogenados, se puede ge- 0,5-2g de suelo seco al aire se colocan en balones de metales reductores, desplazamiento del amonio formado
neralizar que, salvo en el caso de fungicidas presentes Kjeldahl de 100mL (semi-micro anlisis), se agrega 0,5g y su valoracin, como anteriormente (tcnica semi-micro
en el suelo en alta concentracin, la mineralizacin y de mezcla cataltica (100g de K2SO4, 10g CuSO4.5H20, Kjeldahl)
la desnitrificacin no son muy afectadas, mientras que 1g de Se) y 20mL de cido sulfrico concentrado. Ca-
la nitrificacin es uno de los procesos ms sensibles, lentar en el equipo Kjeldahl a ms de 400C hasta que
+
acumulndose amonio. Esta sensibilidad de los nitrifi- la solucin se aclara N-NH4
cantes auttrofos se usa para evaluar los efectos txi-
Enfriar a temperatura ambiente y llevar el volumen a
cos de diferentes dosis de pesticidas, mediante la eva- Colocar 2 g suelo en baln de destilacin de 100 ml,
100mL en recipiente aforado
luacin de los nitratos agregar 10 mL KCl 2N y 0,1 g de OMg
Transferir una alcuota al baln de destilacin. Colocar
Conectar el baln al aparato de destilacin con arrastre
Cuadro 8 - Rendimiento y contenido de nitrgeno 10 mL de solucin de cido brico al 10% en un erlen-
meyer donde se recoger el destilado y unas gotas de de vapor, destilar y recoger en erlenmayer de 125 mL
Figura 3- Estructura qumica de algunos de los pesticidas en leguminosas inoculadas y tratadas con con 5 mL sol. al 2% de cido brico con mezcla indica-
pesticidas en el invernculo (mg/planta) indicador, por ejemplo una mezcla de verde de bromo-
ms persistentes en el suelo dora de verde de bromocresol y rojo de metilo, destilar
cresol y rojo de metilo
hasta unos 30 mL
Semillas tratadas Semillas no tratadas
Agregar exceso de solucin de NaOH (32%p/v) al baln
Accin de los pesticidas sobre la microflora Inoculante rendimiento N rendimiento N de destilacin y calentar por 3-20 minutos por arrastre Valorar el amonio con H
2
SO4 0,005N con microbureta o
alfalfa con thiram de vapor hasta transferir todo el amonio (reaccin neu- pipeta de 5 mL hasta desaparicin de color verde y apa-
La bibliografa seala innumerables citas relativas a ca- tra en el destilado, medida con papel pH) ricin de tono rosa
sos de supresin o inhibicin de algn grupo importante ninguno 270 5,9 290 6,8
Rhizobio sensible 280 6,6 440 12,2
gasto= GM, igual procedimiento para blancos (gasto = GB)
de microorganismos por efecto de pesticidas. Valorar con cido sulfrico diludo (0,05M valorado) hasta
Rhizobio resistente 490 13,2 500 14,6
viraje del indicador. Proceder igual con los blancos
caupi con phygon N-NO3 (incluidos los nitritos)
Efectos %N = S-C x 14. 0,005 N x 100x h .100 S = gasto en la muestra
ninguno 1150 21,7 1100 23,2
Rhizobio sensible 1820 36,4 3820 97,0 Alcuota X Peso suelo C= gasto en el blanco se procede como anteriormente, agregando al mismo
modificacindel espectro de especies dominantes, 14= equivalente en N baln en que se determin el amonio y se enfri en agua,
Rhizobio resistente 3930 105 3790 106
pueden se suprimidos gneros comunes y aparecer h= factor de correccin H% 0,2 g de aleacin Devarda (mezcla de metales reducto-
res). Se destila el amonio formado a partir de la reduc- Microscopa cin depender de las relaciones de adsorcin entre los Persistencia en el ambiente
cin de nitritos y nitratos Colocar la preparacin herbicidas y el suelo, su solubilidad en agua y la cantidad
de agua que atraviesa el suelo. En base a estos parme- Como hemos visto depende del tipo del suelo, de la calidad
Clculos: mgN-min/kgsuelo seco= Abrir el diafragma de la fuente de luz y el del condensa- tros se puede calcular la dosis requerida en una situacin de las aguas, la temperatura, la humedad, materia orgni-
dor al mximo dada. ca, coloides minerales, actividad biolgica. Se puede eva-
14 (GM-GB) 0,005 N x h X1000 luar en ensayos controlados o de campo. Se citan datos de
peso de la muestra Colocar el objetivo de menor aumento: x10 que slo un 27 % de la variabilidad encontrada en las prdi-
Volatilizacin das de Picloram en 11 suelos, en condiciones controladas,
Encender la fuente de luz, ajustar los binoculares a la pudo relacionarse a las propiedades de los mismos. El cua-
Prcticas usuales en el laboratorio de distancia interpupilar Los steres del 2,4-D son voltiles y sus vapores pueden dro 7 (Stevenson y Cole, 1999) muestra la gran persisten-
Microbiologa perjudicar a otros cultivos. Estas sustancias se movilizan cia de insecticidas organoclorados, sobretodo DDT. Como
Enfocar la preparacin, cerrando el diafragma de la fuen- en los poros del suelo como los gases, y su concentra- resultado de su pobre degradacin, su empleo est muy
(Gua de Clases Prcticas de Microbiologa, Facultad de te luminosa hasta visualizar una imagen poligonal cin se puede medir por destilacin del agua que se eva- restringido y aun prohibida su produccin y distribucin. La
Agronoma, 2005: Curso Prctico de Microbiologa Gene- pora en la superficie del suelo. Constituye una prdida frmula de algunos de los ms persistentes pesticidas se
ral, Facultad de Qumica, 2000) Bajar el condensador hasta distinguir ntidos los contor- importante, si se consideran los volmenes de agua que presentan en la figura 3 (Alexander, 1994).
nos del polgono, si la imagen no est en el centro, cen- se pierden.
Normas bsicas de seguridad en un laboratorio trarla y ajustar el enfoque
de Microbiologa Los principales factores que afectan la volatilidad son: el Cuadro 7- Persistencia en el suelo de algunos
Deben cumplirse reglas de estricta higiene en el labora- Abrir el diafragma hasta que el polgono apenas salga grado de adsorcin al suelo, la temperatura, el viento, la pesticidas
torio, el que debe mantenerse limpio y ordenado del campo. No tocarlo ms tensin de vapor.
Pesticida Persistencia en el suelo
Minimizar el material sobre las mesadas, las que se des- Elegir el contraste ptimo ajustando el diafragma del Meses Aos
infectan con alcohol al comienzo y al final de la tarea condensador Fotodescomposicin
Insecticidas fosforados 3
Herbicidas con cidos alifticos y carbamatos 3
Trabajar e cmara de flujo laminar o en su defecto, en Verificar la iluminacin sacando los oculares y obser- Muchos herbicidas absorben en el rango del ultraviole-
Herbicidas con grupos nitrito, fenoxi, toluidina 6
zona protegida por mecheros, sin corrientes de aire vando por el tubo hacia los objetivos, ajustar el difrag- ta, pero la radiacin solar con longitudes de onda meno- Herbicidas con cido benzoico, amidas 12
ma a 2/3 abierto (2/3 de campo iluminado) res de 295 nm que llega al suelo es despreciable. El Herbicidas derivados de la urea, triazina, picloram 18
Al usar cmaras de flujo laminar, controlar su esterilidad efecto sobre los biocidas est limitado a la superficie de Insecticidas organoclorados
peridicamente, encender la lmpara de luz ultravioleta Al cambiar e objetivo modificar el diafragma de la fuente suelos y aguas; slo sern atacados (liberacin de elec- Chlordano Ms de 18
10-15 antes de la tarea, con las puertas cerradas, de- de luz y el del condensador a la apertura del objetivo trones, formacin de puentes) los pesticidas no incorpo- DDT 5
jarla en ptimas condiciones de limpieza al finalizar rados o los que ascienden por capilaridad en pocas Dieldrin 4
Cada vez que se usa: limpiar el aceite de inmersin de secas. Puede ocurrir tambin cierta sensibilizacin: Aldrin 3
Todos los accidentes o derrame de materiales deben las lentes con un algodn seco, apagar la fuente de luz y la energa es absorbida por un intermediario y transferi- hetacloro 2
comunicarse al docente y todo material contaminado cubir el microscopio con su funda. da a la molcula herbicida por colisin, la que es as
debe llevarse a la sala de limpieza en recipientes con daada. Los productos de la fotodescomposicin pue-
alcohol (pipetas, varillas, bisturs, portaobjetos). No de- Los microscopios y lupas deben limpiarse regularmente, den ser similares a los obtenidos por degradacin. Los datos de temperatura y humedad son ms tiles para
positarlos sobre la mesada de trabajo. en forma profunda, tarea realizada por tcnicos especia- predecir la desaparicin de un pesticida que el tipo de
lizados. suelo. La velocidad de degradacin aumenta con la tem-
Usar tnica y lavarse las manos al finalizar la tarea y Remocin por los cultivos peratura y la humedad.
cada vez que se sospeche contacto con material conta- La evaluacin en el campo exige numerosos ensayos,
minado Observacin de los microorganismos Ciertos cultivos se siembran con el objeto de absorber con aplicaciones en distintas pocas y durante varios
Tinciones herbicidas persistentes en suelos donde se aplicaron en aos.
No pipetear con la boca, emplear peras de goma y/o altas concentraciones para eliminar toda la vegetacin,
pipetas especiales Manipulacin asptica de los cultivos para sembrar luego plantas ornamentales. El maz se usa Contando con amplia informacin sobre datos de lluvias,
Las tcnicas en Microbiologa requieren de un trabajo para eliminar simazina y atrazina (captulo 23). evaporacin, temperatura, residuos de pesticidas, duran-
No fumar, llevar alimentos o beber en el laboratorio asptico, evitando contaminaciones del exterior a la mues
etileno puro diluido en frasco de antibitico cerrados. El Desinfeccin: colocar los ndulos en tubo de ensayo tra en estudio. Trabajar en cmara de flujo laminar o entre Las estructuras de los hongos se aprecian muy bien to-
etileno se consigue en pequeos balones o se prepara con tapa rosca o en sistema preparado cortando jerin- dos mecheros encendidos. cando las colonias suavemente con una cinta adhesiva,
por reduccin del etanol con cido sulfrico gas de plstico y adhiriendo con banda elstica en un la que luego se pega sobre un portaobjeto, de esta ma-
extremo del cilindro una gasa para sumergirlo en las Toma de muestras para observaciones micros- nera se evita la rotura del micelio que ocurre con el uso
los resultados se expresan en micro o nano moles de distintas soluciones : alcohol 70% durante 1 minuto, cpicas o para siembra de ansas, puntas, etc. Tambin se aprecian colocando la
etileno (nM C2H4/g raz seca/hora) cambiar a NaClO al 2% por 3-5 minutos, agitando, lavar tomar el tubo de ensayo con la mano izquierda, de modo caja de Petri sobre la platina del microscopio y tratando
5-6 veces con agua destilada estril que su base toque la palma de la mano y aflojar el tapn de enfocar a bajo aumento, regulando la luz a niveles ade-
efectuar dos controles: raz sin acetileno (produccin cuados.
endgena del mismo) y otro con acetileno, sin raz (im- Maceracin del ndulo con auxilio de varilla de vi- tomar el ansa con la mano derecha, con los dedos pul-
purezas de etileno) drio, bistur o ansa estril, puede efectuarse entre gar, ndice y mayor dejando libres el anular y meique a Bacterias
dos portaobjetos o en un borde de la tapa de la caja los efectos de poder asir el tapn al estado fresco, sin teir
En cilindros de suelo con planta entera donde se efectuar el aislamiento, con unas gotas
clulas fijadas, teidas con colorantes
introducir un cilindro de acero abierto en ambos extre- de agua quemar el ansa introduciendo la punta en el cono fro de
mos, alrededor de las plantas y retirar el sistema radical la llama del mechero en posicin vertical y luego ir le-
lo ms intacto posible. Sellar sobre un plato de plstico vantndola hasta que quede toda al rojo, pasarla por la Las bacterias vivas son difciles de observar sin teir ya
en la base llama en un ngulo de 60 con la vertical, mantenindo- que su ndice de refraccin es muy similar al del agua, no
la siempre en posicin paralela al cuerpo. se aprecia contraste con el medio que las rodea. Una pro-
colocar en bolsa de polietileno, tipo Saran dejando la piedad importante se aprecia al estado fresco es la mo-
parte area libre, sellar alrededor del tallo con banda de flambear el metal adyacente vilidad
goma y solucin de agar (7 g/L) luego de unas 24 horas
se coloca la preparacin (cultivo jven de bacterias en
en invernculo para equilibrar el sistema cerca del mechero, tomar el tapn de algodn o de
plstico del tubo con los dedos anular y meique de la medio lquido) entre porta y cubreobjeto o en portaobje-
una tubuladura lateral de goma permite efectuar los in- mano derecha y quitarlo girando el tubo, flambear la tos excavados y se observa en el microscopio ptico a
tercambios gaseosos. Si no se cuenta con medidor de boca del tubo x40 con mnima iluminacin o en microscopio de con-
flujo para volmenes grandes, se puede generar el ace- traste de fases. Debe distinguirse el movimiento flage-
tileno en la bolsa a partir de carburo de calcio y agua. A introducir el ansa tocando la pared fra dentro del tubo lar que desplaza rpidamente a la clula, del movimien-
los efectos de calcular el volmen de la bolsa y posibles (sin soltar el tapn) para que el ansa se enfre y luego to por arrastre de corrientes de conveccin o del movi-
prdidas se introduce volumen conocido de propano, introducirla en el cultivo lquido o deslizarla sobre la su- miento browniano de las bacterias inmviles
Figura 1- Aislamiento de rhizobios a partir de ndulos e
como estndar interno perficie de un cultivo slido de abajo hacia arriba, para
inoculacin de plntulas Tinciones
tomar el cultivo a transferir (inculo)
leer luego de 1-2 horas de introduccin del acetileno Las coloraciones de bacterias tienen por objeto:
aumentar el contraste de las clulas con el medio, lo
sacar el ansa cargada del tubo, flambear la boca y
Aislamiento que permite distinguir forma y tamao
efectuar blanco de suelo sin plantas taparlo
1. en superficie: sembrar por agotamiento con ansa
en superficie de medio EMA (extracto de levadu- diferenciar grupos bacterianos por su reaccin frente a
transferir el inculo a un portaobjeto o a otro medio de
ra manitol agar), llamado tambin M-79, con rojo ciertos colorantes
Asociacin Rhizobium-leguminosa Congo
cultivo (siembra)
(Balatti y Jardim Freire, 1996; FAO, 1983 y 1984; Duhoux
evidenciar ciertas estructuras internas (endoesporas)
y Nicole, 2004; Graham y Vance, 2000; Milnitsky et al., quemar nuevamente el ansa
2. en inclusin: colocar 1 mL de agua estril en 3 cajas de
1997; NifTAL, 1981)
Petri vacas. Con el ansa flambeada tomar contenido Los colorantes usados son sales en las cuales el anin o
nodular y diluirlo sucesivamente en las 3 cajas. Agregar el catin son responsables del color (colorantes cidos y
Aislamiento de rhizobios a partir de ndulos (figura 1)
el medio en sobrefusin (menos de 45C) y por repeti-
Algas, hongos y protozoos
lavar cuidadosamente las races noduladas bajo el agua Dado su mayor tamao en relacin a las bacterias, su bsicos, respectivamente). Las bacterias tienen afinidad
dos movimientos mezclar con el inculo por los colorantes bsicos, como el azul de metileno o el
de la canilla observacin se realiza en general, al estado fresco, sin
fijar ni teir, colocando las muestras entre porta y cubre- cristal violeta. Cuando se usan colorantes cidos como la
incubar las cajas en posicin invertida a 28C: las colo- eosina y la nigrosina, estos no se unen al citoplasma car-
elegir ndulos grandes y vigorosos, separarlos de la raz objeto o en portaobjetos excavados que permiten obser-
nias de rhizobios de crecimiento rpido aparecen a los gado negativamente, sino que se depositan alrededor de
dejando pequea porcin de sta a cada lado del ndulo var una gota de lquido suspendida.
ellas coloreando el fondo y contrastando con las clulas Gram positivas, retienen el primer colorante- cristal vio- Determinacin del efecto rizosfrico (R/S) de ve- leer entre los 3- 5 das por la aparicin de una pelcula
incoloras (coloracin negativa o indirecta). leta o violeta de Genciana- y se ven violetas y Gram getales sobre estos diazotrofos sub-superficial, determinar el nmero caracterstico y
negativas, que se decoloran con alcohol, acetona o mez- plantas de gramneas se llevan al laboratorio con el pan calcular la densidad con ayuda de la tabla de Mc Crady
Coloraciones simples: usan un solo colorante, como el cla de ambos y se se tien con el segundo colorante, de suelo, se corta la parte area y se sacude la raz con
azul de metileno, safranina, cristal violeta. Todas las clu- como la safranina y se ven rosadas. El complejo forma- suaves movimientos: el suelo que queda adherido se verificar capacidad de fijacin del N2 de las pelculas,
las se tien uniformemente. do por el cristal violeta y el iodo del lugol (mordiente) es considera rizosfrico (R) sustituyendo el algodn de los frascos por tapn de
extrado, mientras que en las G+ esto no ocurre por una goma y precinto de aluminio, medir reduccin del aceti-
Coloraciones compuestas, cuando se emplean dos o diferente composicin y estructura de la pared celular colocar la raz en erlenmeyer de 250 mL y peso seco leno a etileno (actividad nitrogensica)
ms colorantes. La coloracin diferencial, como la de (captulo 2). conocido con 100 mL de agua destilada estril o solu-
Gram, es una coloracin compuesta. cin NFb salina (sin azcares) efectuar observaciones morfolgicas de los cultivos y
Las levaduras, eucariotas con paredes gruesas pero sin aislamientos en cajas de medio NFb con extracto de
Preparacin de un frotis peptidoglicano, se tien como Gram+, en este caso no es agitar 10 minutos a 70 rpm en agitador elctrico levadura (N combinado); las colonias aparecen en 1 o 2
extendido del material (cultivo slido o lquido) sobre un la composicin qumica sino la estructura fsica de la padas, pero se dejan incubar por 1 semana; son blancas,
portaobjeto limpio y desengrasado con alcohol. Si se par- red lo que le confiere la Gram positividad. decantar y realizar suspensiones-diluciones (10-1-10-4) secas y pequeas y frecuentemente se introducen en
te de material slido (alimentos, suelo, colonias sobre agar) el agar. Verificar su capacidad de reducir el N2 en medio
colocar una gota de agua en el portaobjeto y disgregar el Tcnica coloracin de Gram retirar la raz con pinza, enjuagarla con agua que se semi-slido, sin N
material en una fina capa sobre el vidrio con ayuda del colocar el frotis sobre un soporte para tinciones recoge en el erlenmeyer. Este se lleva a estufa a 105C
ansa para evaporar toda el agua y determinar peso seco del (R/S)= N m.o./g suelo rizosfrico
cubrir con solucin de cristal violeta y dejar actuar 1 suelo rizosfrico (peso erlenmeyer con suelo seco-peso N m.o./g suelo no rizosfrico
secado: en forma lenta y evitando ebullicin del agua del minuto erlenmeyer vaco). Colocarlo en desecador con Cl2Ca o
frotis (las clulas se aglomeran y resulta dificultosa su vi- (cristal violeta, 2g con 20mL etanol 96%, oxalato de amo- slico gel para enfriarlo antes de pesar. Actividad nitrogensica (Dbereiner, 1980)
sualizacin) nio 1% (v/v). Disolver el colorante en etanol, agregar el Reduccin del acetileno a etileno en races cortadas
recoger las plantas temprano en la tarde para permitir
oxalato de amonio y dejar 48h antes de usar, filtrar por con suelo no rizosfrico (S) realizar suspensiones-dilu-
fijado: mata y fija a los microorganismos, coagulando el papel colorantes viejos) ciones (10-1-10-4) mxima acumulacin de fotosintetizados, separar la par-
citoplasma y permite su adhesin al portaobjeto. Si esta te area y exceso de suelo y colocar las races en reci-
etapa no se realiza correctamente, las clulas se lavan y lavar suavemente con agua de la canilla Azotobacter pientes con agua destilada, llevar inmediatamente al
se pierden en la tincin. Se usa el calor: cortando la pre- inocular 3 cajas/dilucin con 0,2 ml de suspensiones- laboratorio
paracin 3-4 veces en el cono azul del mechero de gas, cubrir con lugol y dejar 1 minuto, lavar de la misma for- diluciones
sostenida con una pinza de madera. Se pueden usar otros ma. colocar las races en frasco que pueda cerrarse her-
procedimientos, como la fijacin por metanol, formol, que (Lugol: iodo 1g, ioduro de K, 2g, agua destilada 300mL : 10
-1
-10-4 del suelo (S) y del (R) del erlenmeyer inicial y mticamente: de suero, tipo antibitico o los emplea-
permite observar mejor clulas animales o vegetales que disolver el iodo y el IK en agua, dejar de un da para el 10 -10-3
-1 dos como biberones, tapar con tapn de goma y pre-
pueden acompaar a las bacterias otro para disolver completamente, guardar en frasco os- cinto de aluminio. Reemplazar el aire por N2 y 5% de
curo) extender el inculo en toda la superficie con varilla de aire, dejar a temperatura ambiente toda la noche para
Ejemplo de coloracin simple: una vez fro el frotis se vidrio doblado 90, secar a estufa a 37C e incubar in- superar la fase de latencia en la reduccin observada
coloca en un soporte adecuado sobre una pileta y se le cubrircon solucin de safranina y dejar 1 minuto. Lavar vertidas a 28C en gramneas
agrega el colorante (azul de metileno, por ejemplo), du- y secar
reemplazar un 10% de la atmsfera por acetileno y 1% O
rante 1 minuto, se lava al chorro suave de la canilla o (safranina: 2,5% (p/v) en alcohol 95%, 10mL, agua desti- leer entre 5-7 y hasta 14 das: colonias tpicas transpa- 2
con ayuda de una piseta, se seca con papel absorbente lada 100mL) rentes, brillantes, distinguir de contaminantes.
incubar a 32C y efectuar mediciones en las 2 o 3 horas
del lado de atrs y cerca de la llama del mechero. Se
observa a x40 y luego con inmersin (x100) con una gota observar
+ -
en inmersin: G violetas, G rosadas y deter- Clculo de R/S, como se explic anteriormente a partir de 0,5-1 mL de muestra tomada con jeringa de
de aceite. minar forma y tamao relativo plstico, en cromatgrafo de gases con columna de Po-
Azospirillum rapax Q, N o T a 80C temperatura y 100C en el inyec-
Coloracin diferencial (Gram): evidencia diferencias en Coloracin de esporas inocular 3 frascos/dilucin con 0,1 mL cada uno en el tor, gas portador: N2
la composicin fsica y qumica de las bacterias y permite preparar un frotis pasando 10 veces por la llama para medio semi-slido, con las mismas suspensiones-dilu-
los picos de etileno se comparan con los producidos en
diferenciarlas entre si: fijar ciones que para Azotobacter, incubar a 28C
las mismas condiciones y sensibilidad por muestras de
Amilolticos Ciclo biolgico del nitrgeno colocarlo sobre un soporte que permita calentamiento superficie del agar con movimiento en zigzag desde el fondo
Medio a la parte superior, cuidando de no romper el agar
Fijacin por organismos en vida libre y en la cubrir con pequeos trozos de papel de filtro, impreg-
solucin salina estndar 50 mL narlos con solucin de verde de malaquita y calentar
rizosfera Agar parado: se siembran introduciendo la punta hasta el
extracto de suelo 10 mL con mechero suavemente por 5 minutos, evitando ebu- fondo y levantandola suavemente (siembra en picadura)
Aislamientos y recuentos llicin, agregar colorante de ser necesario.
almidn 1,5 g Azotobacter y Derxia medio LG (Verde de malaquita: 0,5g, agua destilada 100mL) Siembra en placas
NH4NO3 1,0 g (Dbereiner, 1980)
en superficie: por baado, colocar 0,1-0,5mL de la mues-
sacarosa 20 g lavar con agua
agua 940 mL tra con pipeta estril en el centro de la caja y distribuir a
K2HPO4 0,05 g
toda la caja con un rastrillo de vidrio estril
agar 20 g KH2PO4 0,15 g contrastar con solucin de safranina 30 segundos
CaCl2 0,01 g
lavar con agua, secar y observar en inmersin en estras, cargar el ansa y efectuar estras paralelas en
MgSO4 7 H2O 0,20 g
la cuarta parte de la caja, se quema el ansa y se enfra, se
Solucin salina estndar Na2MoO42H2O 0,002 g
Las esporas se ven verdes y las clulas vegetativas rosa- gira la caja 90 y se vuelve a estriar tocando 3-4 veces el
K2HPO4 5g FeCl3 0,01 g
das. Sin teir se pueden observar en microscopio de con- rea sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de
azul bromotimol (0,5% en etanol) 2,0 mL
MgSO4 2,5 g traste de fases y muchas veces se aprecian en la colora- caja. Por ltimo, sin quemar el ansa, se estra el resto de
CaCO3 1,00 g
cin de Gram de cultivos viejos. la superficie sin sembrar. De esta forma se facilita el aisla-
NaCl 2,5 g agar 15 g
miento de colonias
agua 1 litro
Fe2 (SO4)3 0,05 g pH 6,8 (color verde) Cpsulas
Colocar una gota de tinta china en un portaobjeto limpio
por inclusin: colocar 1mL de la muestra en una caja de
MnSO4 0,05 g Petri estril y vaca, sobre ella se agregan 15-20mL de
Para Derxia: reemplazar sacarosa por almidn o glu- y mezclar con una ansada de cultivo
agua 1 litro cosa, omitir el carbonato de calcio y agregar 0,01g medio de cultivo fundido y mantenido en sobrefusin a
NaHCO3 Cubrircon cubreobjeto y observar en inmersin 45C, se agita la placa para mezclar intimamente, mo-
Las cpsulas (definidas) y las capas mucosas (ms laxas) vindola 4 veces en sentido horario, 4 en sentido contra-
Recuento en medio slido: como para microflora hete- Azospirillum (NFb) (Dbereiner, 1980) se ven como zonas claras alrededor del organismo sobre rio y hacia ambos costados, antes de que el agar se soli-
rtrofa total cido mlico 5,0 g difique.
un fondo oscuro (coloracin negativa)
K2HPO4 0,5 g
Recuento en el mismo medio lquido: inocular 3 o 5 tu- MgSO4 7 H2O 0,2 g Las cajas se incuban invertidas, para evitar que el agua
bos/dilucin (1 mL). Incubar 15 das NaCl 0,1 g Siembra y aislamiento de condensacin caiga sobre el medio dando crecimiento
CaCl2 0,02 g confluente e impidiendo la formacin de colonias.
Lectura: pasar 1 mL de cada tubo a un tubo vaco Na2MoO4 2 H2O 0,002 g Sembrar o inocular es introducir artificialmente un in-
de hemlisis; agregar 1 gota de reactivo iodo-iodu- MnSO4 H2O 0,01 g culo microbiano en un medio adecuado, con el fin de es- Cada clula viable dar origen a una colonia,
Fe EDTA 91,64% peso/vol, agua) 4,0 mL tudiarlo, propagarlo, aislarlo en cultivo puro. Puede reali- de modo que la siembra en placas se usa para
rado (Lugol): iodo= 10 g; IK= 25 g; agua= 1 litro.
azul bromotimol (0,5% p/vol. en etanol) 3,0 mL zarse en medio slido, semislido o lquido, con ayuda de cultivar, aislar y contar a los microorganismos.
Agregar 2-3 ml de agua. Tubos (+ ) ligeramente co- KOH 4,5 g
loreados de amarillo; tubos (- ) color azul a violeta y ansa, pipeta, punta, hisopo.
biotina 0,1 mg Aislamiento: obtencin de cultivos puros, se realiza en
marrn. agua 1 litro en forma directa (por agotamiento en superficie slida),
En medio lquido: en matraces, tubos, fermentadores
pH 6,8 (color verde) antes de industriales. El crecimiento se manifiesta por enturbiamien- cuando la muestra contiene al microorganismo en canti-
Nota: Se emplea tambin caldo simple o agar simple con agregar el agar (semi-slido) 1,75 g agar dad adecuada, o por enriquecimiento previo, cuando se
to (velo, pelcula, sedimento) y/o por desaparicin de un
0,2% de almidn u otro azcar cuya utilizacin se desee sustrato o aparicin de productos del metabolismo (deter- encuentra en baja densidad. Se aumenta el nmero de
Distribuir en frascos chicos de antibiticos (7-10 mL) a
estudiar. minaciones qumicas de amonio, nitratos, sulfatos, etc.). microorganismos del tipo deseado por pasaje en medio
razn de la mitad de su volumen, esterilizar como de
lquido, en condiciones selectivas. El aislamiento termina
costumbre.
Caldo simple: peptona, 10 g; NaCl= 5 g; extracto de En medio slido: en tubos o placas de Petri por agotamiento en medio slido (colonias).
Nota: Para realizar cajas agregar 20 mg extracto de leva-
carne= 10 g; agua= 1 litro
dura y 15 g de agar/L. Tubos con agar inclinado (pico de flauta) para sembrarlos Cultivo puro: a partir de colonias del mismo tipo se reali-
se mueve el ansa o la punta cargada con el inculo sobre la za un examen microscpico a fin de mostrar clulas se-
mejantes en relacin al Gram y a su morfologa. Puede incubar a 28C 7-10 das determinar el nmero ms probable (NMP) de microorga- Ciclo biolgico del carbono
ser necesario efectuar un reaislamiento. nismos, con ayuda de tablas construdas a partir de algu-
preparar blancos de reactivos (sin suelo) nos datos de recuentos de viables en medio slido (ca- Celulolticos aerobios
Conservacin de cultivos: en el refrigerador, en tubos jas) y luego por clculos estadsticos se infieren todas las Medio
de agar inclinado: deben efectuarse repiques cada 3-4 determinar el CO 2: transvasar el contenido del vaso combinaciones posibles. Se entra en la tabla correspon- K2HPO4 1g
meses para evitar desecacin del medio interno a un erlenmeyer de 125 mL con ayuda de diente con el nmero caracterstico y se lee en NMP en la NaNO3 0,5 g
agua alcuota sembrada en la dilucin correspondiente al pri-
MgSO4 0,5 g
congelados: a -20 y a -70C en tubos eppendorf con el mero de los nmeros del N caracterstico.
medio lquido y 50% de glicerol estril (se evita el conge- agregar 5 mL solucin de Cl2Ba 2% y 2-3 gotas de fe- FeSO4 0,01 g
lamiento que puede daar a las clulas) nolftalena (0,1% en etanol al 70%) ejemplo 1 agua 1 litro
N caracterstico: 321 (10-4) NMP 15,0 microorganismos
liofilizados: tratamiento que deseca a los cultivos aplican- valorar desde bureta con ClH 0,5 N (valorado con car- en 1 mL dilucin 10-4 Repartir en tubos de ensayo a razn de 8 mL cada uno
do ciclos de vaco y congelamiento. Los cultivos se con- bonato de calcio anhidro) hasta desaparicin color rosa: y agregar una banda de papel de filtro como nica fuen-
servan desecados en ampollas de vidrio. Al usarlas se les gasto = GM N microorganismos/g suelo seco = 15,0 x 104 x h = 1,5 te de carbono y energa
agrega medio de cultivo lquido y se incuba. x10-5 x h
igual procedimiento para los blancos, gasto = GB Esterilizar 20 minutos a 3/4 atmsfera
ejemplo 2
N caract. 532 (10-4) NMP 14,0 microorganismos en
Indicadores biolgicos en estudios de Clculos 1 mL de la dilucin 10-4 Sembrar con 1 mL de las suspensiones-diluciones de
ecologa microbiana a) suelo (10-2-10-7) 3 o 5 tubos/dilucin
mg C-CO2/100 g suelo seco = (GB-GM) N(HCL) 6 x h x 100 N microorganismos/g suelo seco = 14,0 x 104 x h = 1,4
Actividad respiratoria 7 das a 28C peso de la muestra x 105 x h Incubar por 15 das a 28C: tomar como positivos
(Frioni, 1999, Paul y Clark, 1996) los tubos en donde se visualice el ataque al papel,
Se evala el CO2 liberado por el suelo solo (respiracin 6mg= equivalente en C del HCl 1N porque: Nota: si se siembra con una alcuota menor de 1 mL es pigmentacin, desarrollo microbiano. A veces es ne-
endgena) y/o con el agregado de sustancias cuya de- CO2 (44g)C (12g) PE=PM/2 necesario tenerlo en cuenta en los clculos. Promediar cesario evaluar la integridad del papel con ayuda
gradacin y efecto sobre la microflora se desea estudiar los resultados de las repeticiones efectuadas. de un ansa: positivo, si ste se disgrega con facili-
(hidratos de carbono, abonos verdes, pajas, fertilizantes, h = 100 + H% factor de correccin de humedad para dad
pesticidas), por tcnicas de absorcin en el infrarrojo, cro- 100 llevar los clculos a suelo seco a 105C Tablas de Mc Crady
matografa gaseosa, conductividad elctrica, gravimetra Expresar los resultados: N celulolticos / g suelo seco
o volumetra (luego de absorberlo en solucin alcalina). H% = humedad referida a peso seco a 105C 3 tubos/dilucin con ayuda de la tabla de Mc Crady.
1 2 1 2 1 2
Analizaremos la tcnica volumtrica b) coeficiente de mineralizacin del carbono en 7 das: Aislamiento en medio slido
000 0.0 201 1.4 302 6.5
Sembrar con una alcuota de las diluciones ms con-
Cm = (mg C-CO2/100 g) X 100 001 0.3 202 2.4 310 4.5
Tcnica centradas (10-1) la superficie de caja de Petri con el me-
C org.% (g/100 g) 010 0.3 210 1.5 311 7.5
100 g de suelo fresco o seco al aire y tamizado (2 mm), dio anterior solidificado con 15 g/L de agar. Colocar en-
011 0.6 211 2.0 312 11.5
de humedad conocida, solo y con los aditivos que se cima un disco de papel de filtro estril del dimetro de la
Expresar el numerador y denominador en las mismas uni- 020 0.6 212 3.0 313 16.0
desean estudiar, se colocan en recipientes de vidrio que caja. Incubar
dades (mg/100g/mg/100g), por ejemplo multiplicar el nu- 100 0.4 220 2.0 320 9.5
se puedan cerrar hermticamente de un volumen de
merador por 10-3 101 0.7 221 3.0 321 15.0
aproximadamente 1 litro (3 repeticiones). Se puede re- Observar colonias tpicas en zonas atacadas del
102 1.1 222 3.5 322 20.0
ducir proporcionalmente las muestras: por ej. 30 g. en papel
c) coeficiente respiratorio = qCO2= C-CO2/C-biomasa microbiana 110 0.7 223 4.0 323 30.0
recipientes de 250mL.
111 1.1 230 3.0 330 25.0
Efectuar una coloracin Gram de un trocito del mismo,
Valoracin del cido clorhdrico 120 1.1 231 3.5 331 45.0
se lleva a humedad fija (por ejemplo 75% de la capaci- describir los organismos dominantes y su relacin con
Pesar exactamente 0,5g de CO3Na2 anhidro (mantenido 121 1.5 232 4.0 332 110.0
dad de campo o la deseada) y se mezcla las fibras de celulosa.
24h en estufa a 105C y luego en desecador hasta uso), 130 1.6 300 2.5 333 110.0
colocar en Erlenmeyer de 250mL disolver en agua (3 re- 200 0.9 301 4.0 140.0
colocar un vasito en el fondo del frasco (o en sistema
suspendido desde la tapa) con 15 mL de solucin NaOH peticiones), agregar gotas de azul de bromo timol (disol- 1 = N caracterstico; 2 = NMP
0,5 N y cerrar hermticamente ver 100mg de colorante con 1,5mL de NaOH 0,5N en un
luego de esterilizado y en sobrefusin bajar el pH a 4,5- co: celulolticos (aerobios o anaerobios), fijadores de ni- mortero, llevar a 100mL con agua). Valorar con el cido llevar a los recipientes para evaluar desprendimiento de
5,0 con cido lctico y/o ctrico trgeno, etc. Los recuentos se efectan en 0,5N hasta viraje. CO2, y a capacidad de campo o a la humedad deseada
con agua e inocular con 0,4% de suelo fresco, mezcla-
Algas I. medio slido, sembrando un volumen conocido de las PE CO3Na2 anhidro = 53g do cuidadosamente con el resto del suelo
Medio suspensiones-diluciones en superficie o en inclusin
KH2PO4 0,5g (antes de agregar el medio sobrefundido y a menos de Clculo de la normalidad: el suelo no fumigado se mantuvo el mismo perodo a
NaNO3 0,5g 40C el que se mezcla ntimamente con el inculo an- 28C y luego se llev a la misma humedad
tes de solidificar) N-real x gasto= N-terica x 18,87mL
MgSO4 0,15g
las muestras se incuban en frascos hermticamente ce-
CaCl2 0,05g II. medios lquidos que se siembran con una alcuota de N-real = 0,5 x 18,87 rrados para la evaluacin del CO2, con 20 mL NaOH 0,5N
NaCl 0,05g las suspensiones-diluciones a razn de 3 o 5 tubos por gasto
FeCl3 0,01g cada una. Luego de la incubacin se consideran positi- evaluar a los diez das de incubacin a 28C (procedi-
agua corriente 1000mL vos aquellos tubos: miento ya analizado)
Biomasa microbiana
Incubar a la luz con burbujeo de aire, seguir el enrique- a. que presentan desarrollo (turbidez) las muestras no fumigadas se incuban por otros 10 das
cimiento por el incremento de los pigmentos y efectuar Esta importante y dinmica fraccin de los ecosistemas con soda fresca
aislamientos en el mismo medio slido. b. o por la desaparicin del sustrato o aparicin de (carbono, N, P, orgnico que se encuentra en clulas mi-
productos del metabolismo: formacin de nitratos a crobianas vivas) se evala por: Resultados:
Protozoos partir de amonio, en los nitrificantes. Biomasa (mg C-CO2/100 g suelo seco) = X-Y/k donde:
Medio Recuentos microbianos y clculo de la biomasa (kg/ha)
NaCl 5g Clculo del nmero ms probable de microorga- conociendo el peso promedio de los organismos en estu- X = mg C-CO2/100 g suelo fumigado, reinoculado e incu-
agar 10g nismos por el mtodo de Mc Crady dio: se expresa en kg biomasa/ha (captulo 8) bado durante 0-10 das
sembrar 3 o 5 tubos por cada suspensin-dilucin con 1
agua destilada 1000mL
pH neutro mL cada uno Tcnica de fumigacin/inoculacin (FI) de Jenkinson y Y = mg C-CO2/100 g suelo no fumigado e incubado entre
Powlson (1976), por anlisis del C-CO2 liberado en mues- 10 y 20 das (dato ms representativo para muchos auto-
incubar a la temperatura apropiada y el tiempo requeri-
Repartir en cajas de Petri y antes de solidificar colocar tras de suelo previamente fumigadas con cloroformo, des- res de la actividad de la microflora del suelo, al eliminarse
do en cada caso fumigadas y posteriormente inoculadas con suelo fresco el efecto del pre-tratamiento de la muestra: secado al aire,
anillos de vidrio estriles, o perforar el agar con saca-
bocado y sembrar toda la caja con cultivo denso de una anotar el nmero de tubos positivos en cada suspen- y otras muestras con suelo sin fumigar y de fumigacin- tamizado, rehumedecimiento)
bacteria, como Aerobacter sp. sin-dilucin extraccin (FE).
k = constante determinada por varios autores, se usa en
determinar el nmero caracterstico (3 cifras): la ltima Tcnica: general 0,45, que representa la fraccin de la biomasa
inocular con 0,05 mL de las suspensiones-diluciones de
suelo en cada orificio, incubar a 28C dilucin (de izquierda a derecha) donde todos los tubos las muestras de suelo, frescas o secadas al aire y tami- total del suelo que puede ser mineralizada en estas con-
son positivos, es la primera cifra y las dos restantes se zadas a 2 mm se dividen en dos partes de 50 g cada diciones (10 das, 28C)
examinar luego de 15 das el desarrollo colocando la forman con el nmero de tubos positivos en las siguien- una, una de ellas se expone a los vapores de clorofor-
caja sobre la platina del microscopio tes diluciones. mo puro, obtenidos al efectuar vaco en desecador de Biomasa como fraccin del C%
vidrio cerrado hermticamente, con las muestras de Se expresa la proporcin del carbono orgnico total que
se observan los protozoos por su movilidad, a bajo au- Ejemplo suelo en tapas de cajas de Petri y el cloroformo en vasi- es biomasa viva
mento 1) 3 tubos/dilucin 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 to central. Colocar papel humedecido con agua en las
paredes para evitar la desecacin C-biomasa% = mg C-CO2/100 g suelo x 100
N tubos positivos: 3 3 3 2 1 0 C% (g/100)
Nmero caracterstico: 321 (dilucin 10-4) dejar en contacto con los vapores por 24 h a 25C
Grupos fisiolgicos
Nota: igualar las unidades en numerador y denominador.
2) 5 tubos/dilucin 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 retirar el resto del cloroformo y desfumigar por repetidas
Su estudio se realiza empleando medio y/o condiciones
de cultivo selectivos, que permiten poner en evidencia N tubos positivos: 5 5 5 3 2 0 aspiraciones con bomba de vaco hasta desaparicin Se pueden expresar los resultados como N-biomasa pro-
organismos que realizan determinado proceso metabli- del olor tpico del cloroformo cediendo a extraer el N-NH4+ de las muestras incubadas
N caracterstico: 532 (dilucin 10-4)
con KCl 2N y valorando con electrodos especficos o desti- tin de vidrio con tapa rosca, aadir 1 mL K2Cr 206 agitar en agitador magntico un tiempo establecido (10 contar las cajas que contengan entre 30 y 300 colonias,
lacin por arrastre de vapor. P-biomasa: extrayendo el P (0,0667M) y 5 mL cido sulfrico concentrado. Tapar no minutos), se obtiene as la dilucin 1/10 = 10-1 (se pue- efectuar promedio de las tres cajas y multiplicar por la
soluble luego de las incubaciones. hermticamente de partir de 30 g en 270 mL, etc.) inversa de la dilucin y por el factor de correccin de la
humedad. Ejemplo:
Colocar en estufa a 150 C por 30 minutos. Incluir un tomar 1 mL de la primera suspensin-dilucin y pa-
C-biomasa por el mtodo de fumigacin-ex- blanco con agua en lugar del extracto sarlo a otro tubo con 9 ml de agua estril (dilucin promedio colonias en 3 cajas de dilucin 10-7 = 58
traccin 10-2) H% = 20 y h = 1,20
Dejar enfriar a temperatura ambiente por 30 y luego en
(Vance et al., 1987)
agua 15
proceder como anteriormente hasta la suspensin-dilu- N microorg./g suelo seco=58 x10 7 x1,20=69,6 x10 7 =7,0x10 8
El cloroformo es un biocida efectivo que acta sobre los Medir en espectrofotmetro a 600 nm y comparar con cin adecuada segn la densidad microbiana de las
lpidos de las membranas, lisando a las clulas pero no curva patrn (ajuste a una recta), realizada con glucosa muestras (10-7, 10-8, etc.). Cambiar los punteros de la Actinomicetes
solubiliza a la materia orgnica del suelo ni la hace ms o ftalato de potasio (ej: solucin madre de ftalato de K: pipeta automtica en cada paso o usar una pipeta est- Medio
biodegradable. Los contenidos de las clulas lisadas se 6,382 g/L posee 3,0 g/L de C), a partir de ella se efec- ril y enjugarla 5 o ms veces en una dilucin antes de glicerol 10g
extraen con solucin salina de sulfato de potasio. tan diluciones pasar a la siguiente
asparaginato de Na 1g
Materiales Se puede leer hasta 24 h ms tarde K2HPO4 1g
desecador con conexin a vaco, bomba de vaco Microflora hetertrofa total agar 15g
cloroformo puro, libre de etanol C-biomasa/100g suelo seco = (CF - C noF) 50 X 10 X 2,64 X h agua destilada 1000 mL
K2SO4 0,5 M 4 Medio
Agitador glucosa 10g Proceder como anteriormente para el recuento; colonias
CF = valor C-suelo Fumigado
filtros K2HPO4 0,2 g tpicas, secas, adheridas firmemente al medio.
C noF = valor C- suelo no Fumigado
cido sulfrico concentrado
2, 64 es el factor de correccin propuesto por los autores agar 15g
K2Cr206 0,0667M Hongos
(aproximadamente un 38% del C-biomasa total es eva- extracto de suelo 20 mL
estufa a 150C Medio
luado en estas condiciones) agua 1.000 mL
espectrofotmetro peptona 5g
50 = vol. de extraccin de 10g de suelo, 4mL, alcuota
curva patrn (glucosa, ftalato de K)
analizada Extracto de suelo glucosa 10g
Tcnica autoclavar durante 1 hora a 120C 1 kg de suelo frtil y KH2PO4 1g
h= factor de correccin de humedad = 100 + H%
Proceder como en la tcnica de FI con las muestras neutro en 1,5 litro de agua corriente MgSO4 0, 5g
100
fumigadas (F) y no fumigadas (NF) agar 2g
decantar y filtrar por batera de filtros de papel hasta
clarificar sol. acuosa de Rosa de
Extraccin del C-biomasa en muestras fumigadas (F) y N-biomasa por la tcnica de fumigacin-ex-
Bengala al 1/300 100 mL
no fumigadas (no F) con K2SO4 0,5M en relacin 1:5 traccin completar a 1 litro con agua destilada
(suelo/solucin). Ej: 10g suelo con 50 mL K2SO4 0,5M (Brookes et al., 1985, Schinner et al., 1996) agua destilada 900 mL
(en frascos con tapa rosca) repartir en pequeos volmenes y esterilizar 20 minu-
Fumigar el suelo como para la determinacin del C-bio- tos a 120C y guardar hasta su uso Agregar en cada caja estril 1 mL de solucin de sulfato
Agitar 30 minutos en agitador elctrico masa, pero no eliminar el cloroformo. Mezclar el suelo de estreptomicina (75 mg/100 mL) esterilizada por filtra-
fumigado con solucin de sulfato de potasio 0,5M (1/4 Repartir el medio de cultivo fundido en cajas de Petri cin con filtros millipore de 45 micras y luego el medio en
Filtrar con papel filtro N 42 plegado y recoger en reci- partes), agitar por 30 minutos y filtrar (triplicado). Repe- estriles de 15-20 mL cada una y dejar solidificar sobrefusin
pientes con tapa. El pH de los filtrados debe estar entre tir el procedimiento en suelo sin fumigar
6,5 y 6,8 sembrar en superficie 0,1 mL de suspensiones-dilucio- Se emplea tambin:
Analizar los filtrados por N% por el mtodo de Kjeldahl nes altas: 10-5 en adelante, 3 cajas/dilucin extracto de malta 20g
Guardar en congelador si no se analizan el mismo da (o guardar a 4C hasta anlisis) agar 20g
incubar las cajas invertidas a 28-30C y leer entre el 5
y 8 da agua 1L
Tcnica: colocar 4 mL de extracto en un tubo de diges- El N-total del filtrado se convierte en N-biomasa
de purificacin ni de amplificacin, lo que facilita el trabajo la informacin sobre las secuencias de los ADN clona- gN-biomasa.g-1 = S-C . h Solucin de trabajo (2,8 g N-leucina.mL-1): en frasco afo-
(Garland, 2004). dos, el nombre de los genes, intensidad de emisin, se 0,54 rado de 100 mL, diluir 10 mL de la solucin estandar y
correlacionan con cada seal detectada llevar a volumen con agua destilada. Preparar diluciones
Contraindicaciones: interacciona negativamente la au- S= media de las muestras C= media de los controles para constuir la curva de calibracin y proceder igual que
tofluorescencia de muestras de suelo; no todos los orga- los datos de cada hibridacin simple que ocurre en cada h= factor de correccin de la H% para las muestras.
nismos se permeabilizan en la misma forma por los proto- pozo de la placa, se obtienen segn la poporcin nor- 0,54 = fraccin del N-biomasa mineralizado en las condi-
colos disponibles; resulta difcil la cuantificacin en biofil- malizada de seales ciones de la experiencia
ms y/o agregados microbianos. P-biomasa por la misma tcnica
las desviaciones significativas a partir de 1 (no cambio), Variante: con reactivo ninhidrina (Brookes et al., 1982)
Microarreglos (microarrays) representan aumentos (>1) o disminuciones (<1) de los Fumigar el suelo hmedo con cloroformo durante 10
Se usa como un anlisis de expresin del genoma en niveles de expresin gnica en referencia a la muestra das a 25C. Repetir el procedimiento para el suelo no Se determina por la diferencia en P extrable entre mues-
su totalidad, para explorar cuales de las expresiones testigo y se crean asi perfiles de expresin gnica fumigado. Tres repeticiones tras fumigadas y no fumigadas Fumigar las muestras (3
gnicas son reordenadas en determinados microorga- repeticiones) con cloroformo por 24h a 25C, como pre-
nismos en respuesta a cambios en el ambiente (varia- Extraer el suelo con KCl (2M) (1/5 partes) y filtar cedentemente
ciones de pH, temperatura, potencial redox, nutrien- Metagenmica
tes, xenobiticos). Se pueden reconocer genes induci- El N-aminocidos de los filtrados se evala en la reac- Agitar las muestras y los controles (no fumigados) por
dos o reprimidos en las diferentes condiciones (Wilson Constituye un nuevo concepto en el estudio de las co- cin con la ninhidrina: en tubo de ensayo mezclar: 0,1 30 minutos solucin de bicarbonato de sodio (0,5M, pH
et al., 2002). munidades microbianas, conjugndose todas las tcni- mL de los filtrados con 0,5 mL de sol. de citrato de Na 8,5: disolver 42g de NaHCO3 en 700mL agua destilada,
cas de gentica molecular en una unidad llamada meta- (0,4M) y agitar bien. Agregar 0,5 mL de la mezcla de ajustar el pH a 8,5 con NaOH 1M y llevar a 1Lcon agua).
primero se amplifican las secuencias clonadas y alma- genmica que involucra el estudio de los genomas co- reactivos: Relacin 1g suelo/20mL. Filtar
cenadas de los genes a estudiar por PCR obteniendo lectivos de los microorganismos en las comunidades,
clones de molculas de ADN copia, luego de su purifi- como las del suelo. ninhidrina en etilenglicol monometileter, 4% p/v, cloruro Tomar 5-10mL de los filtrados de las muestras y los con-
cacin, cien o mil de estas sondas de ADN copia dife- estaoso: 80mg Cl2St.2H2O en mezcla de 25 mL de buffer troles para P-soluble: ajustar el pH a 5,0 con cido sul-
rentes se unen directamente a la superficie slida de Se clona el ADN extrado del suelo en amplios fragmen- de acetato de sodio, 50 mL del reactivo de ninhidrina y 25 frico y llevar a 20mL con agua destilada
placas (vidrio, plstico, sintticas). tos (100kb) en hospederos cultivables que luego se anali- mL de agua destilada.
za por secuenciacin, clonacin y con el uso de genes Agregar 16 mL de heptamolibdato de amonio (0,01M
una alcuota de cada muestra es ordenada y dispues- reporteros para estudios de actividad, como la galacto- Los tubos se colocan en bao Mara por 30 minutos, =disolver 12,6g (NH 4) 6Mo 70 24.4H 20 en 400mL de
ta en los pozos microcpicos de la placa, usando un sidasa, por el gen lacz, luminiscencia, por el gen lux, fos- luego se enfran bajo agua de la canilla y se le agregan agua destilada caliente, enfriar y agregar 140mL de
sistema robtoco de alta velocidad controlado por com- fatasa alcalina, por el gen phoA, etc. la actividad puede 5mL de etanol cido sulfrico concentrado (96-98%). Luego de
putadora evidenciarse e medios de cultivo slidos o lquidos (Jose- enfriar llevar a 900mL con agua destilada y agregar
phson y Pepper, 1998). Agitar los tubos y medir absorbancia a 570nm frente a 0,5g de tartrato de antimonio y potasio). Agregar 2
el ARN total de muestras testigo y de referencia se mar- blancos de reactivos, antes de 1 h mL de cido ascrbico (4,4g en 1L agua destilada)
ca por fluorescencia o radioactividad, con ciclo de trans- Con genes reporteros se puede monitorear la actividad y mezclar
cripcin reversa bacteriana en muestras del ambiente in situ y los estudios g ninhidrina-N.g-1 = S.V.h
prosiguen en la bsqueda de nuevos genes que puedan g Luego de 15 minutos medir el color de la mezcla a
las molculas marcadas se mezclan y se someten a ser empleados en estos estudios. (g) Peso suelo (alcuota del filtrado) 882 nm frente a los blancos de reactivos (sin suelo)
hibridacin con los ADN copias en la placa
S= valores medios de las muestras, V= volumen de ex- gP.g-1suelo seco = (S-C). 20, h
luego de incubacin, se leen las placas por las marcas Recuentos microbianos traccin. h= factor de correccin de la H% 1g suelo X alcuota del filtrado
incorporadas: las emisiones producidas generan un es-
pectro carcterstico en aparatos adecuados (escaner, Suspensiones-diluciones del suelo Solucin estandar stock (28 g N-leucina.mL-1) S= media P en muestras
microscopio laser confocal) (captulo 4) C= media P en los controles
pesar 10 g suelo fresco, de contenido de humedad co- Disolver 0,262g de leucina en 100mL de HCl 0,1M, llevar el h= factor de correccin de la H%
las imgenes son importadas a un software especfico nocido, introducirlo aspticamente en un frasco con 90 volumen a 1000mL con agua destilada en baln aforado. 20=volumen del extracto
en el cual son superpuestas y coloreadas mL agua destilada estril, solucin fisiolgica (ClNa al
0,85%) u otro medio mineral
Actividades enzimticas Dejar decantar, si es necesario filtrar y/o centrifugar en da, como desnaturalizacin de las molculas, agregado Hibridacin in-situ fluorescente (FISH)
Deshidrogenasas tubos eppendorf y medir a 464 nm, acetona como blan- de buffers, establecimiento de temperatura adecuada, etc. (Aman, 1995) (captulo 8)
(Frioni, 1999; Paul y Clark, 1996; Schinner et al., 1995) co, junto a la curva patrn (no usar celdas de plstico) Emplea sondas conjugadas con colorantes fluorescentes
Solo las colonias que contienen la secuencia especfica y permite el examen microscpico.
Fundamento: las muestras de suelo se mezclan con clo- Clculos: Leer en la curva patrn (ajuste a una recta) y de ADN darn una seal colorimtrica o radioactiva.
ruro de p-iodo nitrotetrazolium (INT) y se incuban 2 horas calcular No es necesario cultivar al microorganismo e implica el
a 40 C, el p-iodo formazn formado (rojo) se extrae con Tambin se puede realizar el proceso en bacterias fijadas uso de sondas de oligonucletidos marcados con fluores-
acetona, metanol y/o etanol y N-dimetilformamida (1/1), mg INTF g-1 suelo seco/h = (S-C) X h en portaobjetos. cencia (15-25pb) en combinacin con tcnicas de biolo-
se mide en espectrofotmetro a 464 nm con curva patrn 2h ga molecular y microscopa.
de INTF. S = valor en la muestra
C = control estril Tcnicas de estudio de la fraccin activa de Existen ms de 1000 sondas presintetizadas disponibles,
Soluciones h= factor de correccin de la H% la comunidad muchas para los ARNr 16S bacterianos.
* HCL 3M : 100 mL concentrado (37%) con 300 mL de
agua destilada Se puede expresar la actividad como LH transferidos/g-1 Nuevas tcnicas permiten establecer perfiles molecula- Tcnica:
suelo seco multiplicando los mg INTF por 150,35 res de la fraccin activa de la comunidad, que escapan a Fijacin de los microorganismos, con etanol, metanol,
* Buffer Tris 1M, pH 7,0: 30,28g Tris (hidroximetil-amino- este texto. aldehidos (3-4% de formaldehdo) para bacterias G- y
metano) en 200 mL de agua destilada, ajustar pH 7,0 50% etanol, etanol/formol o calor para las Gram+ . Pue-
con HCL y llevar a 250 mL en matraz aforado. Hidrlisis del acetato de fluorescena (FDA) Se mencionarn slo algunas: den requerirse otros pasos de permeabilizacin de las
(Alef, 1998) anlisis de los ARN mensajeros codificados por genes clulas (lisozima para Gram+ e hidrlisis cida modera-
* Sustrato: 500 mg INT + 2mL N-dimetilformamida, agitar especficos que se recuperan a partir de muestras de da (1M HCl), para micobacterias
vigorosamente y llevar a 100 mL con agua destilada (afo- El mtodo se basa en la estimacin de la fluorescena diversos ambientes y que poseen particularidas como
rado). Prepararlo cada vez y guardarlo en oscuridad. liberada en suelo tratado con solucin de FDA e incubado vida media de slo unos minutos y son producidos in- Hibridacin: el buffer con formamida y las sondas fluo-
a 24C mediatamente antes de la sntesis proteica rescentes se precalientan y se adiciona a las mues-
* Solucin stock: 100 mg de INTF/mL (10 mg en matraz tras (de 30 minutos a varias horas de incubacin en
aforado de 100mL, diluir con 80 mL de acetona y llevar Soluciones se analizan tambin los ARN ribosomales constituyen- cmara hmeda, oscura y a 37- 50C). Las condicio-
a 100 con la misma). Fosfato de sodio buffer (60mM, pH 7,6), ajustar a pH 7,6 tes de la maquinaria de traduccin. Su contenido es pro- nes adecuadas para la complementacin se pueden
con HCl 0,1N porcional a la actividad microbiana y su determinacin regular con la concentracin del formaldehdo, que
* Curva de calibracin: aadir 0, 1, 2 y 5 mL de INTF es- Acetona resulta muy til en estudios de ecologa gentica debilita los puentes de H y variando la temperatura de
tndar en 4 tubos y llevar a 13,5 mL con solucin de Solucin de FDA 2mg/mL acetona, guardar a 20C hibridacin
extraccin (acetona), Corresponde a 0, 100, 200 y 500 Solucin estndar de fluorescena: 5mg/mL acetona, guar- En la figura 1 se esquematizan algunos de los anlisis de
mg INTF en el volumen de reaccin (13,5mL) (PM = dar a 20C la fraccin activa de comunidades microbianas. Se cita- Lavado: con agua desionizada y/o buffer salino (0-900
471,3 g) rn dos de ellos: hibridacin fluorescente in-situ (FISH) y mM NaCl) para remover la sonda no hibridada.
Procedimiento la de microarreglos (microarrays).
Procedimiento Suelo hmedo se tamiza a 2 mm se guarda a 5C antes Deteccin: microscopia variada: epifluorescente, micros-
1 g suelo hmedo en tubos con tapa rosca, aadir 1,5 del anlisis. perturbacin copio laser confocal o citometra de flujo
mL buffer Tris y 2 mL solucin de sustrato. Envolver cada Tomar : 1g suelo y 20mL fosfato buffer 60mM, en frascos

tubo con papel de aluminio para evitar la luz. de 125mL y la mezcla se incuba en agitador a 24C por identificacin de En poblaciones activas con sntesis proteica en clulas
muestras extraccin ADN captura de los organismos:
15 minutos, luego 100L de sol. stock de 2mg/mL de FDA
de las muestras los ADN genes de ARNr, en divisin o no, los niveles de ARNr son altos y se ob-
ambientales
Tapar los tubos, agitar brevemente en vortex, incubar (sustrato) a las muestras, no a los controles. Incubar agi- marcados ARNm tienen seales importantes. En contraste, con bacterias
por 2 h a 40C en oscuridad en estufa o bao de agua. tando 2 horas a 24C con carencias nutricionales, en estrs o cerca de la fase
Control: suelo autoclavado por 20 e igual procedimiento marcacin: de muerte, los niveles de ARNr son bajos y hasta inde-
anterior Parar la reaccin agregando 20mL acetona (concentracin sustratos con tectables.
C13, istopos
final 50% v/v). Agregar 100 L de sustrato a los controles. no radiactivos
Extraccin: 10 mL de acetona a cada tubo, agitar y dejar Centrifugar a 6000rpm por 5 minutos, filtrar con Whatman La tcnica es muy usada para microorganismos en mues-
1 h a temperatura ambiente en la oscuridad, agitar fuer- N4 y leer D-ptica del sobrenadante claro a 499 mn (si Figura 1- Estudios de la comunidad microbiana luego de una tras ambientales y mdicas. Los protocolos y sondas es-
te en el vortex cada 20 da ms de 0,8 diluir las muestras en acetona) perturbacin tn disponibles. Es de resaltar que no se requieren pasos
Polimorfismo en los fragmentos de restriccin Los pasos iniciales en esta tcnica son las mismas que Curva de calibracin h) Solucin estndar stock: 1 mg de p-nitrofenol/mL: di-
del ADN del genoma o de plsmidos luego de tra- para TRFLP: aislamiento del ADN, purificacin y amplifi- Preparar como se seala arriba, de modo que la relacin solver 1 g en agua destilada y llevar a 1000 mL. Guar-
tamiento con enzimas de restriccin cacin por PCR. Luego los productos se separan por es- concentracin de flourescena y la densidad ptica sea dar a 4C
(restriction fragment lenth polymorphism, RFLP) tos mtodos electroforticos. El comportamiento de estas lineal.
(Schneider y De Bruijn, 1996). molculas se compara con el de otras molculas de se- i) Solucin estndar de trabajo: 20 g de p-nitrofenol/mL:
Mapas detallados usando estos marcadores estn dispo- cuencia conocida, para verificar las proporciones de mi- Resultados: en microgramos de fluorescena/g suelo diluir 2 mL de solucin estndar en 100 mL de agua
nibles para el hombre y un nmero de especies vegeta- gracin y su PM. seco/hora= mg/kg suelo seco/h destilada
les, animales y microoganismos de importancia agron-
mica. La identificacin de rhizobios mediante un cdigo (CG)%: por esta tcnica es posible deducir el conteni- j) Curva: pipetear 0 (reactivo blanco), 1, 2, 3, 4 y 5 mL de
de barras (ADN fingerprinting) ha permitido su seguimien- do de este par de bases, ms resistente a la desnatu- Fosfatasa cida y alcalina solucin estndar de trabajo en 6 tubos, ajustar los vo-
to en ambientes contaminados, como lo es el suelo. ralizacin. (Schinner et al., 1995) lmenes a 5 mL con agua destilada y agregar 1 mL de
CaCl2 y 4 mL de NaOH 0,5 M, mezclar bien, filtrar por
Polimorfismo en los fragmentos de Las molculas presentes en las bandas se pueden ex- Fundamento: el sustrato empleado es el fosfato de p- dos papeles
restriccin terminales traer y caracterizarse a partir de su secuenciacin. nitrofenil. Las muestras se incuban una hora a 37C en
(TRFLP, Terminal Restriction Fragment Length Plymor- estufa o bao de agua. El p-nitrofenol liberado por la enzi- Se obtiene: 0. 20, 40, 60, 80 y 100 g de p-nitrofenol
phism) (Dunbar et al., 2001) Hibridacin en la comunidad y empleo de sondas ma se evala luego de la extraccin, se genera color con
Constituye uno de los mtodos ms eficaces en ecologa gnicas NaOH y se mide a 400 nm, con curva patrn. Procedimiento:
microbiana para comparar rpidamente la diversidad de Esta tcnica es muy empleada para determinar la presen- Colocar 1 g de suelo en tubo con tapa rosca de unos
secuencias del ADN bacteriano extradas de muestras del cia de organismos de inters en ambientes naturales. El Soluciones: 150mL. (5 muestras = 3 para anlisis y 2 para con-
ambiente, amplificadas por PCR. Se basa en la variacin fenmeno se basa en la eficiencia y velocidad en que a) Sustrato para la fosfatasa cida: disolver 4,268 g de trol) agregar 1 mL de sustrato (en buffer cido o al-
de la posicin de los sitios de restriccin entre secuencias molculas del ADN de hebra simple se asocian para for- fosfato de p-nitrofenil.6 H2O disdico en buffer para fos- calino) y 4 mL de buffer de distinto pH a 3 de los
y en la determinacin del largo de fragmentos terminales mar molculas de doble hebra hbrida, siguiendo el princi- fatasa cida y llevar el volumen a 1000 mL con el mis- tubos. A los dos controles agragar slo 4 mL de bu-
marcados con fluorescencia, mediante electroforesis en pio de complementariedad de bases. mo buffer en matraz aforado (hacerla cada da) ffer
gel de alta resolucin. Se excluyen del anlisis los frag-
mentos que no son terminales ya que no se marcan y no El sondeo gnico aprovecha la habilidad del ADN de ser b) Sustrato para OH-: dem, pero en buffer para fosfatasa Agitar, tapar e incubar una hora a 37C
se observan en el gel. El largo y la secuencia de los frag- desnaturalizado (el ADN se desenrolla en dos hebras alcalina
mentos de ADN marcados se determinan en secuencia- simples) y renaturalizado (hibridacin entre molculas Agregar 1 mL de CaCl2 y 4 mL de NaOH al control y a
dor automtico. simple hebra del mismo individuo o de la misma espe- c) Buffer: 12,1 g tris (hidroximetil) aminometano, 11,6 g de las muestras
cie) y la posibilidad de hibridacin entre una molcula cido mlico, 14 g de cido ctrico monohidratado y 6,3
Electroforesis en gel con gradientes de ADN blanco y una molcula especfica, ms peque- g de cido brico en 500 mL de NaOH 1 M y diluir a 1 mL de solucin sustrato (cido o alcalino) luego de la
desnaturalizantes y de temperatura a, denominada sonda gnica. Se pueden formar hbri- 1000 mL con agua destilada (aforado). Guardar a 4C incubacin a los controles
(DGGE, Denaturing Gradient gel Electrophoresis; TGGE, dos y reconocer, identificar, y caracterizar la presencia
Temperatura Gradient Gel Electrophoresis) (Garland, de ciertas secuencias gnicas en un genoma o fragmento d) Acida: pH 6,5: mezclar 200 mL de stock buffer y 500 mL Para diluir (de ser necesario, si la concentracin es muy
2004) del mismo. de agua destilada Ajustar a pH 6,5 con HCl, llevar a elevada) agregar 90 mL de agua destilada a las mues-
Al aplicar voltaje al gel, los fosfatos del ADN cargados 1000 mL con agua destilada tras y los controles, agitar brevemente, filtrar
negativamente, causan migracin de la molcula hacia el Para construir sondas se requiere experiencia en investiga-
nodo. Para cada molcula de ADN existe un sitio del gel cin y fuerte base de biologa molecular (Josephson y Pep- e) Alcalina: pH 11: mezclar 200 mL de buffer y 500 mL de Medir la densidad ptica a 400 nm y calcular los g
donde se detiene. Asi aparecen varias bandas. En estas per, 1998). Usualmente se envan a construir las sondas a agua destilada. Ajustar a pH 11 con NaOH y llevar a NP.g-1.h-1 con ayuda de la ecuacin de ajuste a una rec-
tcnicas se produce la desnaturalizacin de las molcu- centros especializados. Las de cidos nucleicos son trozos 1000 mL con agua destilada ta (datos de la curva patrn)
las de ADN extrado de los suelos, como consecuencia de ADN de simple hebra marcadas para facilitar su deteccin
de los cambios en la fuerza inica de las soluciones em- (ejemplo con los genes de la fijacin de nitrgeno). f) Solucin CaCl2 0,5 M: disolver 36,74 g de CaCl2.2H2O Expresin resultados: g NP.g-1.h-1 = (S - C) x 10 x h
pleadas. Con un gradiente de temperatura sucede lo mis- en agua destilada, llevar a 500 mL en matraz aforado h = factor suelo seco
mo, se separan gradualmente las dos hebras de la mol- Tambin se puede hibridizar una colonia: tocando con 10 = factor dilucin extracto
cula, hasta alcanzar la temperatura de fusin, donde el papel de filtro para adherir algunas clulas de cada una g) Solucin NaOH 0,5 M: disolver 20 g en agua destilada S =media de muestras
estado bicatenario deja de presentarse a lo largo de toda en el papel. Se lisan sobre este papel y se realizan los y llevar a 1000 mL con agua destilada C=media de controles
la molcula. pasos necesarios para permitir la hibridacin con la son-
Diversidad estructural y funcional de comu- tes de carbono (White el al., 1998), estableciendo correla- Anlisis de los steres metilados de los cidos gra- Las tcnicas no son sencillas y muchos de los pasos
nidades microbianas ciones entre patrones de utilizacin de sustratos con cier- sos (FAME, fatty acids methyl esters) sealados deben ser repetidos a los efectos de evitar
tas especies bacterianas contenidas en bases de datos. interferencias con las partculas del suelo, el humus, las
Se comentan algunas de las tcnicas empleadas en el Sistema de identificacin bacteriano que ha sido desarro- arcillas.
anlisis de la biodiversidad de comunidades microbianas, Es frecuentemente usada para valorar la estabilidad de la llado por Microbial ID Inc. y se conoce como sistema MIDI.
sin recurrir al aislamiento de los microorganismos, como comunidad ante cambios en el uso y manejo del suelo. Consiste en el anlisis cromatogrfico en fase gaseosa Se remite a Saano y Lindstrm, 1995, Miller et al., 1999,
son el perfil fisiolgico de la comunidad o la determina- de los steres metilados de cidos grasos derivados de la Roose-Amsaleg et al., 2001.
cin de molculas bsicas del metabolismo: protenas to- Variante: medida del CO2 liberado luego del agregado de membrana y de los lipopolisacridos. Se usa mucho en
tales, cidos nucleicos, cidos grasos, isoenzimas, perfil sustratos a muestras de suelo contenidas en recipientes taxonoma (sistema taxoqumico) y existe base de datos Lisis celular: tratamientos qumicos (detergentes o clo-
de plsmidos. Los protocolos van siendo modificados por cerrados y/o titulacin del O2 consumido. con ms de 8.000 bacterias analizadas. roformo para desarticular las membranas), enzimticos
diversos autores y escapan a los objetivos de este texto. (lisozima, enzimas proteolticas) y fsicos (calentamiento,
Una revisin de estas tecnologas fue efectuada en nues- Requiere el aislamiento de microorganismos y su cultivo en congelamiento-descongelamiento, ultrasonido). La eficien-
tro laboratorio por Ferrari (2005). Anlisis de molculas especficas medio de agar-soja tripticasa (TSA) a 25C. El mtodo no cia de la extraccin en la lisis no es siempre alta y todos
se presta para anlisis de organismos no cultivables. A partir los procedimientos tienden a obtener alto rendimiento de
Protenas totales Lpidos y cidos grasos del anlisis FAME a extractos de lpidos se puede determi- ADN, de alta pureza, evaluada por distintos mtodos: elec-
Por electroforesis en gel de dodecil sulfato-poliacrilamida Fosfolpidos (PLFA, phospholipids fatty acids) muy til nar la biomasa microbiana, el nivel nutricional y la composi- troforesis en gel de agarosa: 0,7-1,2%, con controles de
(SDS-PAGE). Las bacterias crecen en medio EMA lqui- para evaluar la biomasa viable global y la proporciin recin de la comunidad de diversos suelos (Hitzl et al., 1997) PM conocido, pasaje por columnas de slica gel, precipi-
do, son cosechadas por centrifugacin y lavadas 2 veces lativa de grupos microbianos diferentes (Pinkart et al., tacin con acetato de amonio, filtracin en Sephadex G-
con buffer 10 mM Tris-HCl, pH 7,0. Muestras con 10-20 2002), se analizan los cambios en la integridad de las 200 (una de las ms recomendadas).
mg de protenas/mL corren en el gel con patrones de PM membranas de los microorganismos, luego de la muerte Acidos nucleicos
conocido celular y se valora el fosfato lipdico total por colorimetra. (Kowalchuk et al., 2004) Rendimientos: del orden de 50g/g de suelo, con frag-
mentos de ADN de 500-1000pb hasta 25KB, segn los
Plsmidos Tcnica: (Zelles, 1996, 1999) Las metodologas moleculares basadas en estudios de procedimientos empleados.
Modificaciones de la tcnica de Eckhardt (1978) son em- Limpiar meticulosamente los materiales a emplear par- los cidos nucleicos constituyen ramas importantes de
pleadas con plsmidos de PM conocido. ta evitar contaminaciones analisis que permiten: Caracterizacin de los cidos nucleicos
Reaccin en cadena de la polimerasa
Las muestras se conservan a -80C o liofilizadas (sin i) Evaluacin de la hibridacin en la comunidad La mayora de las tcnicas amplifica la muestra de ADN
Perfil fisiolgico de la comunidad aditivos) por la reaccin en cadena con polimerasa (Polymerasa
ii) Anlisis del fingerprinting de la comunidad Chain Reaction, PCR), tcnica que ha revolucionado las
El sistema Biolog (Biolog, Inc. Hayward, California), con- Se extraen los lpidos con cloroformo/metanol, con agre- metodologas en biologa molecular y es un protocolo ne-
siste en encubar las muestras de suelo, agua, rizosfera, gado de tampn fosfato en caso de suelos muy arcillo- iii) Estudio de la fraccin activa de la comunidad cesario en laboratorios de microbiologa ecolgica (Jose-
en placas especficamente diseadas con 95 orificios con sos (separacin de fases): 100g de suelo en baln de phson y Pepper, 1998, Rodrguez y Frioni, 2003).
distintas fuentes de carbono y un control con un indicador fondo redondo de 1L + 200 mL. de sol. de fosfato buffer Se requiere el aislamiento previo de los microorganis-
2,3,4 trifenil tetrazolio (TTC) que se reduce por la oxida- (0,05M, pH 7,4) + 500 mL. de metanol y 250,L. de cloro- mos o de los cidos nucleicos de las muestras del eco- Un protocolo de PCR da slo una idea bsica del procedi-
cin de los compuestos carbonados a la sal formazan, formo. sistema miento y para cada especie de ADN particular que se
roja, la que se valora colormetricamente (Lehman et al., desea amplificar, los cebadores (primers) a usar y las con-
1995), durante algunos das de incubacin. Agitar vigorosamente en agitador 2h, agragr 250,L. de Extraccin de los cidos nucleicos diciones deben estandarizarse en cada caso y es nece-
agua destilada y 250,L. de cloroformo y dejar toda la Extraccin de clulas microbianas del suelo y luego se sario ajustar la tcnica.
Suelo: se requiere un inculo transparente, libre de car- noche. Retirar la fase acuosa obtiene el ADN de las mismas
bono: se realiza extraccin con pirofosfato de sodio, y se Se revela la presencia o ausencia de una secuencia de
incuba con agitacin 24 horas. El sobrenadante se flocu- El extracto lipdico disuelto en cloroformo se pasa por Extraccin directa del ADN del suelo por lisis, siguiendo ADN de inters en el suelo, pero no indica su concentra-
la con sales de calcio y magnesio y la fraccin lmpida se columna de slice y se recogen las fracciones: neutra los siguientes pasos: lisis de las clulas bacterianas, cin. Para esto se estn implementando nuevas tcni-
inocula en cada uno de los hoyos de la placa. de glucolpidos (cidos grasos libres, esteroles, qui- separacin del ADN de otros componentes de las clu- cas que usan cromatografa lquida de alta presin
nonas, tri-glicridos, poli hidroxialcanos) y la polar, por las como polisacridos y protenas, remocin del ADN (HPLC) o la deteccin de cebadores marcados con fluo-
Las comunidades pueden identificarse por la presencia o elusin con solvente con gradiente de polaridad (fos- de la matriz del suelo y precipitacin de ADN. rescencia.
ausencia de respuestas especficas ante distintas fuen- folpidos)
Diversidad estructural y funcional de comu- tes de carbono (White el al., 1998), estableciendo correla- Anlisis de los steres metilados de los cidos gra- Las tcnicas no son sencillas y muchos de los pasos
nidades microbianas ciones entre patrones de utilizacin de sustratos con cier- sos (FAME, fatty acids methyl esters) sealados deben ser repetidos a los efectos de evitar
tas especies bacterianas contenidas en bases de datos. interferencias con las partculas del suelo, el humus, las
Se comentan algunas de las tcnicas empleadas en el Sistema de identificacin bacteriano que ha sido desarro- arcillas.
anlisis de la biodiversidad de comunidades microbianas, Es frecuentemente usada para valorar la estabilidad de la llado por Microbial ID Inc. y se conoce como sistema MIDI.
sin recurrir al aislamiento de los microorganismos, como comunidad ante cambios en el uso y manejo del suelo. Consiste en el anlisis cromatogrfico en fase gaseosa Se remite a Saano y Lindstrm, 1995, Miller et al., 1999,
son el perfil fisiolgico de la comunidad o la determina- de los steres metilados de cidos grasos derivados de la Roose-Amsaleg et al., 2001.
cin de molculas bsicas del metabolismo: protenas to- Variante: medida del CO2 liberado luego del agregado de membrana y de los lipopolisacridos. Se usa mucho en
tales, cidos nucleicos, cidos grasos, isoenzimas, perfil sustratos a muestras de suelo contenidas en recipientes taxonoma (sistema taxoqumico) y existe base de datos Lisis celular: tratamientos qumicos (detergentes o clo-
de plsmidos. Los protocolos van siendo modificados por cerrados y/o titulacin del O2 consumido. con ms de 8.000 bacterias analizadas. roformo para desarticular las membranas), enzimticos
diversos autores y escapan a los objetivos de este texto. (lisozima, enzimas proteolticas) y fsicos (calentamiento,
Una revisin de estas tecnologas fue efectuada en nues- Requiere el aislamiento de microorganismos y su cultivo en congelamiento-descongelamiento, ultrasonido). La eficien-
tro laboratorio por Ferrari (2005). Anlisis de molculas especficas medio de agar-soja tripticasa (TSA) a 25C. El mtodo no cia de la extraccin en la lisis no es siempre alta y todos
se presta para anlisis de organismos no cultivables. A partir los procedimientos tienden a obtener alto rendimiento de
Protenas totales Lpidos y cidos grasos del anlisis FAME a extractos de lpidos se puede determi- ADN, de alta pureza, evaluada por distintos mtodos: elec-
Por electroforesis en gel de dodecil sulfato-poliacrilamida Fosfolpidos (PLFA, phospholipids fatty acids) muy til nar la biomasa microbiana, el nivel nutricional y la composi- troforesis en gel de agarosa: 0,7-1,2%, con controles de
(SDS-PAGE). Las bacterias crecen en medio EMA lqui- para evaluar la biomasa viable global y la proporciin recin de la comunidad de diversos suelos (Hitzl et al., 1997) PM conocido, pasaje por columnas de slica gel, precipi-
do, son cosechadas por centrifugacin y lavadas 2 veces lativa de grupos microbianos diferentes (Pinkart et al., tacin con acetato de amonio, filtracin en Sephadex G-
con buffer 10 mM Tris-HCl, pH 7,0. Muestras con 10-20 2002), se analizan los cambios en la integridad de las 200 (una de las ms recomendadas).
mg de protenas/mL corren en el gel con patrones de PM membranas de los microorganismos, luego de la muerte Acidos nucleicos
conocido celular y se valora el fosfato lipdico total por colorimetra. (Kowalchuk et al., 2004) Rendimientos: del orden de 50g/g de suelo, con frag-
mentos de ADN de 500-1000pb hasta 25KB, segn los
Plsmidos Tcnica: (Zelles, 1996, 1999) Las metodologas moleculares basadas en estudios de procedimientos empleados.
Modificaciones de la tcnica de Eckhardt (1978) son em- Limpiar meticulosamente los materiales a emplear par- los cidos nucleicos constituyen ramas importantes de
pleadas con plsmidos de PM conocido. ta evitar contaminaciones analisis que permiten: Caracterizacin de los cidos nucleicos
Reaccin en cadena de la polimerasa
Las muestras se conservan a -80C o liofilizadas (sin i) Evaluacin de la hibridacin en la comunidad La mayora de las tcnicas amplifica la muestra de ADN
Perfil fisiolgico de la comunidad aditivos) por la reaccin en cadena con polimerasa (Polymerasa
ii) Anlisis del fingerprinting de la comunidad Chain Reaction, PCR), tcnica que ha revolucionado las
El sistema Biolog (Biolog, Inc. Hayward, California), con- Se extraen los lpidos con cloroformo/metanol, con agre- metodologas en biologa molecular y es un protocolo ne-
siste en encubar las muestras de suelo, agua, rizosfera, gado de tampn fosfato en caso de suelos muy arcillo- iii) Estudio de la fraccin activa de la comunidad cesario en laboratorios de microbiologa ecolgica (Jose-
en placas especficamente diseadas con 95 orificios con sos (separacin de fases): 100g de suelo en baln de phson y Pepper, 1998, Rodrguez y Frioni, 2003).
distintas fuentes de carbono y un control con un indicador fondo redondo de 1L + 200 mL. de sol. de fosfato buffer Se requiere el aislamiento previo de los microorganis-
2,3,4 trifenil tetrazolio (TTC) que se reduce por la oxida- (0,05M, pH 7,4) + 500 mL. de metanol y 250,L. de cloro- mos o de los cidos nucleicos de las muestras del eco- Un protocolo de PCR da slo una idea bsica del procedi-
cin de los compuestos carbonados a la sal formazan, formo. sistema miento y para cada especie de ADN particular que se
roja, la que se valora colormetricamente (Lehman et al., desea amplificar, los cebadores (primers) a usar y las con-
1995), durante algunos das de incubacin. Agitar vigorosamente en agitador 2h, agragr 250,L. de Extraccin de los cidos nucleicos diciones deben estandarizarse en cada caso y es nece-
agua destilada y 250,L. de cloroformo y dejar toda la Extraccin de clulas microbianas del suelo y luego se sario ajustar la tcnica.
Suelo: se requiere un inculo transparente, libre de car- noche. Retirar la fase acuosa obtiene el ADN de las mismas
bono: se realiza extraccin con pirofosfato de sodio, y se Se revela la presencia o ausencia de una secuencia de
incuba con agitacin 24 horas. El sobrenadante se flocu- El extracto lipdico disuelto en cloroformo se pasa por Extraccin directa del ADN del suelo por lisis, siguiendo ADN de inters en el suelo, pero no indica su concentra-
la con sales de calcio y magnesio y la fraccin lmpida se columna de slice y se recogen las fracciones: neutra los siguientes pasos: lisis de las clulas bacterianas, cin. Para esto se estn implementando nuevas tcni-
inocula en cada uno de los hoyos de la placa. de glucolpidos (cidos grasos libres, esteroles, qui- separacin del ADN de otros componentes de las clu- cas que usan cromatografa lquida de alta presin
nonas, tri-glicridos, poli hidroxialcanos) y la polar, por las como polisacridos y protenas, remocin del ADN (HPLC) o la deteccin de cebadores marcados con fluo-
Las comunidades pueden identificarse por la presencia o elusin con solvente con gradiente de polaridad (fos- de la matriz del suelo y precipitacin de ADN. rescencia.
ausencia de respuestas especficas ante distintas fuen- folpidos)
Polimorfismo en los fragmentos de restriccin Los pasos iniciales en esta tcnica son las mismas que Curva de calibracin h) Solucin estndar stock: 1 mg de p-nitrofenol/mL: di-
del ADN del genoma o de plsmidos luego de tra- para TRFLP: aislamiento del ADN, purificacin y amplifi- Preparar como se seala arriba, de modo que la relacin solver 1 g en agua destilada y llevar a 1000 mL. Guar-
tamiento con enzimas de restriccin cacin por PCR. Luego los productos se separan por es- concentracin de flourescena y la densidad ptica sea dar a 4C
(restriction fragment lenth polymorphism, RFLP) tos mtodos electroforticos. El comportamiento de estas lineal.
(Schneider y De Bruijn, 1996). molculas se compara con el de otras molculas de se- i) Solucin estndar de trabajo: 20 g de p-nitrofenol/mL:
Mapas detallados usando estos marcadores estn dispo- cuencia conocida, para verificar las proporciones de mi- Resultados: en microgramos de fluorescena/g suelo diluir 2 mL de solucin estndar en 100 mL de agua
nibles para el hombre y un nmero de especies vegeta- gracin y su PM. seco/hora= mg/kg suelo seco/h destilada
les, animales y microoganismos de importancia agron-
mica. La identificacin de rhizobios mediante un cdigo (CG)%: por esta tcnica es posible deducir el conteni- j) Curva: pipetear 0 (reactivo blanco), 1, 2, 3, 4 y 5 mL de
de barras (ADN fingerprinting) ha permitido su seguimien- do de este par de bases, ms resistente a la desnatu- Fosfatasa cida y alcalina solucin estndar de trabajo en 6 tubos, ajustar los vo-
to en ambientes contaminados, como lo es el suelo. ralizacin. (Schinner et al., 1995) lmenes a 5 mL con agua destilada y agregar 1 mL de
CaCl2 y 4 mL de NaOH 0,5 M, mezclar bien, filtrar por
Polimorfismo en los fragmentos de Las molculas presentes en las bandas se pueden ex- Fundamento: el sustrato empleado es el fosfato de p- dos papeles
restriccin terminales traer y caracterizarse a partir de su secuenciacin. nitrofenil. Las muestras se incuban una hora a 37C en
(TRFLP, Terminal Restriction Fragment Length Plymor- estufa o bao de agua. El p-nitrofenol liberado por la enzi- Se obtiene: 0. 20, 40, 60, 80 y 100 g de p-nitrofenol
phism) (Dunbar et al., 2001) Hibridacin en la comunidad y empleo de sondas ma se evala luego de la extraccin, se genera color con
Constituye uno de los mtodos ms eficaces en ecologa gnicas NaOH y se mide a 400 nm, con curva patrn. Procedimiento:
microbiana para comparar rpidamente la diversidad de Esta tcnica es muy empleada para determinar la presen- Colocar 1 g de suelo en tubo con tapa rosca de unos
secuencias del ADN bacteriano extradas de muestras del cia de organismos de inters en ambientes naturales. El Soluciones: 150mL. (5 muestras = 3 para anlisis y 2 para con-
ambiente, amplificadas por PCR. Se basa en la variacin fenmeno se basa en la eficiencia y velocidad en que a) Sustrato para la fosfatasa cida: disolver 4,268 g de trol) agregar 1 mL de sustrato (en buffer cido o al-
de la posicin de los sitios de restriccin entre secuencias molculas del ADN de hebra simple se asocian para for- fosfato de p-nitrofenil.6 H2O disdico en buffer para fos- calino) y 4 mL de buffer de distinto pH a 3 de los
y en la determinacin del largo de fragmentos terminales mar molculas de doble hebra hbrida, siguiendo el princi- fatasa cida y llevar el volumen a 1000 mL con el mis- tubos. A los dos controles agragar slo 4 mL de bu-
marcados con fluorescencia, mediante electroforesis en pio de complementariedad de bases. mo buffer en matraz aforado (hacerla cada da) ffer
gel de alta resolucin. Se excluyen del anlisis los frag-
mentos que no son terminales ya que no se marcan y no El sondeo gnico aprovecha la habilidad del ADN de ser b) Sustrato para OH-: dem, pero en buffer para fosfatasa Agitar, tapar e incubar una hora a 37C
se observan en el gel. El largo y la secuencia de los frag- desnaturalizado (el ADN se desenrolla en dos hebras alcalina
mentos de ADN marcados se determinan en secuencia- simples) y renaturalizado (hibridacin entre molculas Agregar 1 mL de CaCl2 y 4 mL de NaOH al control y a
dor automtico. simple hebra del mismo individuo o de la misma espe- c) Buffer: 12,1 g tris (hidroximetil) aminometano, 11,6 g de las muestras
cie) y la posibilidad de hibridacin entre una molcula cido mlico, 14 g de cido ctrico monohidratado y 6,3
Electroforesis en gel con gradientes de ADN blanco y una molcula especfica, ms peque- g de cido brico en 500 mL de NaOH 1 M y diluir a 1 mL de solucin sustrato (cido o alcalino) luego de la
desnaturalizantes y de temperatura a, denominada sonda gnica. Se pueden formar hbri- 1000 mL con agua destilada (aforado). Guardar a 4C incubacin a los controles
(DGGE, Denaturing Gradient gel Electrophoresis; TGGE, dos y reconocer, identificar, y caracterizar la presencia
Temperatura Gradient Gel Electrophoresis) (Garland, de ciertas secuencias gnicas en un genoma o fragmento d) Acida: pH 6,5: mezclar 200 mL de stock buffer y 500 mL Para diluir (de ser necesario, si la concentracin es muy
2004) del mismo. de agua destilada Ajustar a pH 6,5 con HCl, llevar a elevada) agregar 90 mL de agua destilada a las mues-
Al aplicar voltaje al gel, los fosfatos del ADN cargados 1000 mL con agua destilada tras y los controles, agitar brevemente, filtrar
negativamente, causan migracin de la molcula hacia el Para construir sondas se requiere experiencia en investiga-
nodo. Para cada molcula de ADN existe un sitio del gel cin y fuerte base de biologa molecular (Josephson y Pep- e) Alcalina: pH 11: mezclar 200 mL de buffer y 500 mL de Medir la densidad ptica a 400 nm y calcular los g
donde se detiene. Asi aparecen varias bandas. En estas per, 1998). Usualmente se envan a construir las sondas a agua destilada. Ajustar a pH 11 con NaOH y llevar a NP.g-1.h-1 con ayuda de la ecuacin de ajuste a una rec-
tcnicas se produce la desnaturalizacin de las molcu- centros especializados. Las de cidos nucleicos son trozos 1000 mL con agua destilada ta (datos de la curva patrn)
las de ADN extrado de los suelos, como consecuencia de ADN de simple hebra marcadas para facilitar su deteccin
de los cambios en la fuerza inica de las soluciones em- (ejemplo con los genes de la fijacin de nitrgeno). f) Solucin CaCl2 0,5 M: disolver 36,74 g de CaCl2.2H2O Expresin resultados: g NP.g-1.h-1 = (S - C) x 10 x h
pleadas. Con un gradiente de temperatura sucede lo mis- en agua destilada, llevar a 500 mL en matraz aforado h = factor suelo seco
mo, se separan gradualmente las dos hebras de la mol- Tambin se puede hibridizar una colonia: tocando con 10 = factor dilucin extracto
cula, hasta alcanzar la temperatura de fusin, donde el papel de filtro para adherir algunas clulas de cada una g) Solucin NaOH 0,5 M: disolver 20 g en agua destilada S =media de muestras
estado bicatenario deja de presentarse a lo largo de toda en el papel. Se lisan sobre este papel y se realizan los y llevar a 1000 mL con agua destilada C=media de controles
la molcula. pasos necesarios para permitir la hibridacin con la son-
Actividades enzimticas Dejar decantar, si es necesario filtrar y/o centrifugar en da, como desnaturalizacin de las molculas, agregado Hibridacin in-situ fluorescente (FISH)
Deshidrogenasas tubos eppendorf y medir a 464 nm, acetona como blan- de buffers, establecimiento de temperatura adecuada, etc. (Aman, 1995) (captulo 8)
(Frioni, 1999; Paul y Clark, 1996; Schinner et al., 1995) co, junto a la curva patrn (no usar celdas de plstico) Emplea sondas conjugadas con colorantes fluorescentes
Solo las colonias que contienen la secuencia especfica y permite el examen microscpico.
Fundamento: las muestras de suelo se mezclan con clo- Clculos: Leer en la curva patrn (ajuste a una recta) y de ADN darn una seal colorimtrica o radioactiva.
ruro de p-iodo nitrotetrazolium (INT) y se incuban 2 horas calcular No es necesario cultivar al microorganismo e implica el
a 40 C, el p-iodo formazn formado (rojo) se extrae con Tambin se puede realizar el proceso en bacterias fijadas uso de sondas de oligonucletidos marcados con fluores-
acetona, metanol y/o etanol y N-dimetilformamida (1/1), mg INTF g-1 suelo seco/h = (S-C) X h en portaobjetos. cencia (15-25pb) en combinacin con tcnicas de biolo-
se mide en espectrofotmetro a 464 nm con curva patrn 2h ga molecular y microscopa.
de INTF. S = valor en la muestra
C = control estril Tcnicas de estudio de la fraccin activa de Existen ms de 1000 sondas presintetizadas disponibles,
Soluciones h= factor de correccin de la H% la comunidad muchas para los ARNr 16S bacterianos.
* HCL 3M : 100 mL concentrado (37%) con 300 mL de
agua destilada Se puede expresar la actividad como LH transferidos/g-1 Nuevas tcnicas permiten establecer perfiles molecula- Tcnica:
suelo seco multiplicando los mg INTF por 150,35 res de la fraccin activa de la comunidad, que escapan a Fijacin de los microorganismos, con etanol, metanol,
* Buffer Tris 1M, pH 7,0: 30,28g Tris (hidroximetil-amino- este texto. aldehidos (3-4% de formaldehdo) para bacterias G- y
metano) en 200 mL de agua destilada, ajustar pH 7,0 50% etanol, etanol/formol o calor para las Gram+ . Pue-
con HCL y llevar a 250 mL en matraz aforado. Hidrlisis del acetato de fluorescena (FDA) Se mencionarn slo algunas: den requerirse otros pasos de permeabilizacin de las
(Alef, 1998) anlisis de los ARN mensajeros codificados por genes clulas (lisozima para Gram+ e hidrlisis cida modera-
* Sustrato: 500 mg INT + 2mL N-dimetilformamida, agitar especficos que se recuperan a partir de muestras de da (1M HCl), para micobacterias
vigorosamente y llevar a 100 mL con agua destilada (afo- El mtodo se basa en la estimacin de la fluorescena diversos ambientes y que poseen particularidas como
rado). Prepararlo cada vez y guardarlo en oscuridad. liberada en suelo tratado con solucin de FDA e incubado vida media de slo unos minutos y son producidos in- Hibridacin: el buffer con formamida y las sondas fluo-
a 24C mediatamente antes de la sntesis proteica rescentes se precalientan y se adiciona a las mues-
* Solucin stock: 100 mg de INTF/mL (10 mg en matraz tras (de 30 minutos a varias horas de incubacin en
aforado de 100mL, diluir con 80 mL de acetona y llevar Soluciones se analizan tambin los ARN ribosomales constituyen- cmara hmeda, oscura y a 37- 50C). Las condicio-
a 100 con la misma). Fosfato de sodio buffer (60mM, pH 7,6), ajustar a pH 7,6 tes de la maquinaria de traduccin. Su contenido es pro- nes adecuadas para la complementacin se pueden
con HCl 0,1N porcional a la actividad microbiana y su determinacin regular con la concentracin del formaldehdo, que
* Curva de calibracin: aadir 0, 1, 2 y 5 mL de INTF es- Acetona resulta muy til en estudios de ecologa gentica debilita los puentes de H y variando la temperatura de
tndar en 4 tubos y llevar a 13,5 mL con solucin de Solucin de FDA 2mg/mL acetona, guardar a 20C hibridacin
extraccin (acetona), Corresponde a 0, 100, 200 y 500 Solucin estndar de fluorescena: 5mg/mL acetona, guar- En la figura 1 se esquematizan algunos de los anlisis de
mg INTF en el volumen de reaccin (13,5mL) (PM = dar a 20C la fraccin activa de comunidades microbianas. Se cita- Lavado: con agua desionizada y/o buffer salino (0-900
471,3 g) rn dos de ellos: hibridacin fluorescente in-situ (FISH) y mM NaCl) para remover la sonda no hibridada.
Procedimiento la de microarreglos (microarrays).
Procedimiento Suelo hmedo se tamiza a 2 mm se guarda a 5C antes Deteccin: microscopia variada: epifluorescente, micros-
1 g suelo hmedo en tubos con tapa rosca, aadir 1,5 del anlisis. perturbacin copio laser confocal o citometra de flujo
mL buffer Tris y 2 mL solucin de sustrato. Envolver cada Tomar : 1g suelo y 20mL fosfato buffer 60mM, en frascos

tubo con papel de aluminio para evitar la luz. de 125mL y la mezcla se incuba en agitador a 24C por identificacin de En poblaciones activas con sntesis proteica en clulas
muestras extraccin ADN captura de los organismos:
15 minutos, luego 100L de sol. stock de 2mg/mL de FDA
de las muestras los ADN genes de ARNr, en divisin o no, los niveles de ARNr son altos y se ob-
ambientales
Tapar los tubos, agitar brevemente en vortex, incubar (sustrato) a las muestras, no a los controles. Incubar agi- marcados ARNm tienen seales importantes. En contraste, con bacterias
por 2 h a 40C en oscuridad en estufa o bao de agua. tando 2 horas a 24C con carencias nutricionales, en estrs o cerca de la fase
Control: suelo autoclavado por 20 e igual procedimiento marcacin: de muerte, los niveles de ARNr son bajos y hasta inde-
anterior Parar la reaccin agregando 20mL acetona (concentracin sustratos con tectables.
C13, istopos
final 50% v/v). Agregar 100 L de sustrato a los controles. no radiactivos
Extraccin: 10 mL de acetona a cada tubo, agitar y dejar Centrifugar a 6000rpm por 5 minutos, filtrar con Whatman La tcnica es muy usada para microorganismos en mues-
1 h a temperatura ambiente en la oscuridad, agitar fuer- N4 y leer D-ptica del sobrenadante claro a 499 mn (si Figura 1- Estudios de la comunidad microbiana luego de una tras ambientales y mdicas. Los protocolos y sondas es-
te en el vortex cada 20 da ms de 0,8 diluir las muestras en acetona) perturbacin tn disponibles. Es de resaltar que no se requieren pasos
de purificacin ni de amplificacin, lo que facilita el trabajo la informacin sobre las secuencias de los ADN clona- gN-biomasa.g-1 = S-C . h Solucin de trabajo (2,8 g N-leucina.mL-1): en frasco afo-
(Garland, 2004). dos, el nombre de los genes, intensidad de emisin, se 0,54 rado de 100 mL, diluir 10 mL de la solucin estandar y
correlacionan con cada seal detectada llevar a volumen con agua destilada. Preparar diluciones
Contraindicaciones: interacciona negativamente la au- S= media de las muestras C= media de los controles para constuir la curva de calibracin y proceder igual que
tofluorescencia de muestras de suelo; no todos los orga- los datos de cada hibridacin simple que ocurre en cada h= factor de correccin de la H% para las muestras.
nismos se permeabilizan en la misma forma por los proto- pozo de la placa, se obtienen segn la poporcin nor- 0,54 = fraccin del N-biomasa mineralizado en las condi-
colos disponibles; resulta difcil la cuantificacin en biofil- malizada de seales ciones de la experiencia
ms y/o agregados microbianos. P-biomasa por la misma tcnica
las desviaciones significativas a partir de 1 (no cambio), Variante: con reactivo ninhidrina (Brookes et al., 1982)
Microarreglos (microarrays) representan aumentos (>1) o disminuciones (<1) de los Fumigar el suelo hmedo con cloroformo durante 10
Se usa como un anlisis de expresin del genoma en niveles de expresin gnica en referencia a la muestra das a 25C. Repetir el procedimiento para el suelo no Se determina por la diferencia en P extrable entre mues-
su totalidad, para explorar cuales de las expresiones testigo y se crean asi perfiles de expresin gnica fumigado. Tres repeticiones tras fumigadas y no fumigadas Fumigar las muestras (3
gnicas son reordenadas en determinados microorga- repeticiones) con cloroformo por 24h a 25C, como pre-
nismos en respuesta a cambios en el ambiente (varia- Extraer el suelo con KCl (2M) (1/5 partes) y filtar cedentemente
ciones de pH, temperatura, potencial redox, nutrien- Metagenmica
tes, xenobiticos). Se pueden reconocer genes induci- El N-aminocidos de los filtrados se evala en la reac- Agitar las muestras y los controles (no fumigados) por
dos o reprimidos en las diferentes condiciones (Wilson Constituye un nuevo concepto en el estudio de las co- cin con la ninhidrina: en tubo de ensayo mezclar: 0,1 30 minutos solucin de bicarbonato de sodio (0,5M, pH
et al., 2002). munidades microbianas, conjugndose todas las tcni- mL de los filtrados con 0,5 mL de sol. de citrato de Na 8,5: disolver 42g de NaHCO3 en 700mL agua destilada,
cas de gentica molecular en una unidad llamada meta- (0,4M) y agitar bien. Agregar 0,5 mL de la mezcla de ajustar el pH a 8,5 con NaOH 1M y llevar a 1Lcon agua).
primero se amplifican las secuencias clonadas y alma- genmica que involucra el estudio de los genomas co- reactivos: Relacin 1g suelo/20mL. Filtar
cenadas de los genes a estudiar por PCR obteniendo lectivos de los microorganismos en las comunidades,
clones de molculas de ADN copia, luego de su purifi- como las del suelo. ninhidrina en etilenglicol monometileter, 4% p/v, cloruro Tomar 5-10mL de los filtrados de las muestras y los con-
cacin, cien o mil de estas sondas de ADN copia dife- estaoso: 80mg Cl2St.2H2O en mezcla de 25 mL de buffer troles para P-soluble: ajustar el pH a 5,0 con cido sul-
rentes se unen directamente a la superficie slida de Se clona el ADN extrado del suelo en amplios fragmen- de acetato de sodio, 50 mL del reactivo de ninhidrina y 25 frico y llevar a 20mL con agua destilada
placas (vidrio, plstico, sintticas). tos (100kb) en hospederos cultivables que luego se anali- mL de agua destilada.
za por secuenciacin, clonacin y con el uso de genes Agregar 16 mL de heptamolibdato de amonio (0,01M
una alcuota de cada muestra es ordenada y dispues- reporteros para estudios de actividad, como la galacto- Los tubos se colocan en bao Mara por 30 minutos, =disolver 12,6g (NH 4) 6Mo 70 24.4H 20 en 400mL de
ta en los pozos microcpicos de la placa, usando un sidasa, por el gen lacz, luminiscencia, por el gen lux, fos- luego se enfran bajo agua de la canilla y se le agregan agua destilada caliente, enfriar y agregar 140mL de
sistema robtoco de alta velocidad controlado por com- fatasa alcalina, por el gen phoA, etc. la actividad puede 5mL de etanol cido sulfrico concentrado (96-98%). Luego de
putadora evidenciarse e medios de cultivo slidos o lquidos (Jose- enfriar llevar a 900mL con agua destilada y agregar
phson y Pepper, 1998). Agitar los tubos y medir absorbancia a 570nm frente a 0,5g de tartrato de antimonio y potasio). Agregar 2
el ARN total de muestras testigo y de referencia se mar- blancos de reactivos, antes de 1 h mL de cido ascrbico (4,4g en 1L agua destilada)
ca por fluorescencia o radioactividad, con ciclo de trans- Con genes reporteros se puede monitorear la actividad y mezclar
cripcin reversa bacteriana en muestras del ambiente in situ y los estudios g ninhidrina-N.g-1 = S.V.h
prosiguen en la bsqueda de nuevos genes que puedan g Luego de 15 minutos medir el color de la mezcla a
las molculas marcadas se mezclan y se someten a ser empleados en estos estudios. (g) Peso suelo (alcuota del filtrado) 882 nm frente a los blancos de reactivos (sin suelo)
hibridacin con los ADN copias en la placa
S= valores medios de las muestras, V= volumen de ex- gP.g-1suelo seco = (S-C). 20, h
luego de incubacin, se leen las placas por las marcas Recuentos microbianos traccin. h= factor de correccin de la H% 1g suelo X alcuota del filtrado
incorporadas: las emisiones producidas generan un es-
pectro carcterstico en aparatos adecuados (escaner, Suspensiones-diluciones del suelo Solucin estandar stock (28 g N-leucina.mL-1) S= media P en muestras
microscopio laser confocal) (captulo 4) C= media P en los controles
pesar 10 g suelo fresco, de contenido de humedad co- Disolver 0,262g de leucina en 100mL de HCl 0,1M, llevar el h= factor de correccin de la H%
las imgenes son importadas a un software especfico nocido, introducirlo aspticamente en un frasco con 90 volumen a 1000mL con agua destilada en baln aforado. 20=volumen del extracto
en el cual son superpuestas y coloreadas mL agua destilada estril, solucin fisiolgica (ClNa al
0,85%) u otro medio mineral
con KCl 2N y valorando con electrodos especficos o desti- tin de vidrio con tapa rosca, aadir 1 mL K2Cr 206 agitar en agitador magntico un tiempo establecido (10 contar las cajas que contengan entre 30 y 300 colonias,
lacin por arrastre de vapor. P-biomasa: extrayendo el P (0,0667M) y 5 mL cido sulfrico concentrado. Tapar no minutos), se obtiene as la dilucin 1/10 = 10-1 (se pue- efectuar promedio de las tres cajas y multiplicar por la
soluble luego de las incubaciones. hermticamente de partir de 30 g en 270 mL, etc.) inversa de la dilucin y por el factor de correccin de la
humedad. Ejemplo:
Colocar en estufa a 150 C por 30 minutos. Incluir un tomar 1 mL de la primera suspensin-dilucin y pa-
C-biomasa por el mtodo de fumigacin-ex- blanco con agua en lugar del extracto sarlo a otro tubo con 9 ml de agua estril (dilucin promedio colonias en 3 cajas de dilucin 10-7 = 58
traccin 10-2) H% = 20 y h = 1,20
Dejar enfriar a temperatura ambiente por 30 y luego en
(Vance et al., 1987)
agua 15
proceder como anteriormente hasta la suspensin-dilu- N microorg./g suelo seco=58 x10 7 x1,20=69,6 x10 7 =7,0x10 8
El cloroformo es un biocida efectivo que acta sobre los Medir en espectrofotmetro a 600 nm y comparar con cin adecuada segn la densidad microbiana de las
lpidos de las membranas, lisando a las clulas pero no curva patrn (ajuste a una recta), realizada con glucosa muestras (10-7, 10-8, etc.). Cambiar los punteros de la Actinomicetes
solubiliza a la materia orgnica del suelo ni la hace ms o ftalato de potasio (ej: solucin madre de ftalato de K: pipeta automtica en cada paso o usar una pipeta est- Medio
biodegradable. Los contenidos de las clulas lisadas se 6,382 g/L posee 3,0 g/L de C), a partir de ella se efec- ril y enjugarla 5 o ms veces en una dilucin antes de glicerol 10g
extraen con solucin salina de sulfato de potasio. tan diluciones pasar a la siguiente
asparaginato de Na 1g
Materiales Se puede leer hasta 24 h ms tarde K2HPO4 1g
desecador con conexin a vaco, bomba de vaco Microflora hetertrofa total agar 15g
cloroformo puro, libre de etanol C-biomasa/100g suelo seco = (CF - C noF) 50 X 10 X 2,64 X h agua destilada 1000 mL
K2SO4 0,5 M 4 Medio
Agitador glucosa 10g Proceder como anteriormente para el recuento; colonias
CF = valor C-suelo Fumigado
filtros K2HPO4 0,2 g tpicas, secas, adheridas firmemente al medio.
C noF = valor C- suelo no Fumigado
cido sulfrico concentrado
2, 64 es el factor de correccin propuesto por los autores agar 15g
K2Cr206 0,0667M Hongos
(aproximadamente un 38% del C-biomasa total es eva- extracto de suelo 20 mL
estufa a 150C Medio
luado en estas condiciones) agua 1.000 mL
espectrofotmetro peptona 5g
50 = vol. de extraccin de 10g de suelo, 4mL, alcuota
curva patrn (glucosa, ftalato de K)
analizada Extracto de suelo glucosa 10g
Tcnica autoclavar durante 1 hora a 120C 1 kg de suelo frtil y KH2PO4 1g
h= factor de correccin de humedad = 100 + H%
Proceder como en la tcnica de FI con las muestras neutro en 1,5 litro de agua corriente MgSO4 0, 5g
100
fumigadas (F) y no fumigadas (NF) agar 2g
decantar y filtrar por batera de filtros de papel hasta
clarificar sol. acuosa de Rosa de
Extraccin del C-biomasa en muestras fumigadas (F) y N-biomasa por la tcnica de fumigacin-ex-
Bengala al 1/300 100 mL
no fumigadas (no F) con K2SO4 0,5M en relacin 1:5 traccin completar a 1 litro con agua destilada
(suelo/solucin). Ej: 10g suelo con 50 mL K2SO4 0,5M (Brookes et al., 1985, Schinner et al., 1996) agua destilada 900 mL
(en frascos con tapa rosca) repartir en pequeos volmenes y esterilizar 20 minu-
Fumigar el suelo como para la determinacin del C-bio- tos a 120C y guardar hasta su uso Agregar en cada caja estril 1 mL de solucin de sulfato
Agitar 30 minutos en agitador elctrico masa, pero no eliminar el cloroformo. Mezclar el suelo de estreptomicina (75 mg/100 mL) esterilizada por filtra-
fumigado con solucin de sulfato de potasio 0,5M (1/4 Repartir el medio de cultivo fundido en cajas de Petri cin con filtros millipore de 45 micras y luego el medio en
Filtrar con papel filtro N 42 plegado y recoger en reci- partes), agitar por 30 minutos y filtrar (triplicado). Repe- estriles de 15-20 mL cada una y dejar solidificar sobrefusin
pientes con tapa. El pH de los filtrados debe estar entre tir el procedimiento en suelo sin fumigar
6,5 y 6,8 sembrar en superficie 0,1 mL de suspensiones-dilucio- Se emplea tambin:
Analizar los filtrados por N% por el mtodo de Kjeldahl nes altas: 10-5 en adelante, 3 cajas/dilucin extracto de malta 20g
Guardar en congelador si no se analizan el mismo da (o guardar a 4C hasta anlisis) agar 20g
incubar las cajas invertidas a 28-30C y leer entre el 5
y 8 da agua 1L
Tcnica: colocar 4 mL de extracto en un tubo de diges- El N-total del filtrado se convierte en N-biomasa
luego de esterilizado y en sobrefusin bajar el pH a 4,5- co: celulolticos (aerobios o anaerobios), fijadores de ni- mortero, llevar a 100mL con agua). Valorar con el cido llevar a los recipientes para evaluar desprendimiento de
5,0 con cido lctico y/o ctrico trgeno, etc. Los recuentos se efectan en 0,5N hasta viraje. CO2, y a capacidad de campo o a la humedad deseada
con agua e inocular con 0,4% de suelo fresco, mezcla-
Algas I. medio slido, sembrando un volumen conocido de las PE CO3Na2 anhidro = 53g do cuidadosamente con el resto del suelo
Medio suspensiones-diluciones en superficie o en inclusin
KH2PO4 0,5g (antes de agregar el medio sobrefundido y a menos de Clculo de la normalidad: el suelo no fumigado se mantuvo el mismo perodo a
NaNO3 0,5g 40C el que se mezcla ntimamente con el inculo an- 28C y luego se llev a la misma humedad
tes de solidificar) N-real x gasto= N-terica x 18,87mL
MgSO4 0,15g
las muestras se incuban en frascos hermticamente ce-
CaCl2 0,05g II. medios lquidos que se siembran con una alcuota de N-real = 0,5 x 18,87 rrados para la evaluacin del CO2, con 20 mL NaOH 0,5N
NaCl 0,05g las suspensiones-diluciones a razn de 3 o 5 tubos por gasto
FeCl3 0,01g cada una. Luego de la incubacin se consideran positi- evaluar a los diez das de incubacin a 28C (procedi-
agua corriente 1000mL vos aquellos tubos: miento ya analizado)
Biomasa microbiana
Incubar a la luz con burbujeo de aire, seguir el enrique- a. que presentan desarrollo (turbidez) las muestras no fumigadas se incuban por otros 10 das
cimiento por el incremento de los pigmentos y efectuar Esta importante y dinmica fraccin de los ecosistemas con soda fresca
aislamientos en el mismo medio slido. b. o por la desaparicin del sustrato o aparicin de (carbono, N, P, orgnico que se encuentra en clulas mi-
productos del metabolismo: formacin de nitratos a crobianas vivas) se evala por: Resultados:
Protozoos partir de amonio, en los nitrificantes. Biomasa (mg C-CO2/100 g suelo seco) = X-Y/k donde:
Medio Recuentos microbianos y clculo de la biomasa (kg/ha)
NaCl 5g Clculo del nmero ms probable de microorga- conociendo el peso promedio de los organismos en estu- X = mg C-CO2/100 g suelo fumigado, reinoculado e incu-
agar 10g nismos por el mtodo de Mc Crady dio: se expresa en kg biomasa/ha (captulo 8) bado durante 0-10 das
sembrar 3 o 5 tubos por cada suspensin-dilucin con 1
agua destilada 1000mL
pH neutro mL cada uno Tcnica de fumigacin/inoculacin (FI) de Jenkinson y Y = mg C-CO2/100 g suelo no fumigado e incubado entre
Powlson (1976), por anlisis del C-CO2 liberado en mues- 10 y 20 das (dato ms representativo para muchos auto-
incubar a la temperatura apropiada y el tiempo requeri-
Repartir en cajas de Petri y antes de solidificar colocar tras de suelo previamente fumigadas con cloroformo, des- res de la actividad de la microflora del suelo, al eliminarse
do en cada caso fumigadas y posteriormente inoculadas con suelo fresco el efecto del pre-tratamiento de la muestra: secado al aire,
anillos de vidrio estriles, o perforar el agar con saca-
bocado y sembrar toda la caja con cultivo denso de una anotar el nmero de tubos positivos en cada suspen- y otras muestras con suelo sin fumigar y de fumigacin- tamizado, rehumedecimiento)
bacteria, como Aerobacter sp. sin-dilucin extraccin (FE).
k = constante determinada por varios autores, se usa en
determinar el nmero caracterstico (3 cifras): la ltima Tcnica: general 0,45, que representa la fraccin de la biomasa
inocular con 0,05 mL de las suspensiones-diluciones de
suelo en cada orificio, incubar a 28C dilucin (de izquierda a derecha) donde todos los tubos las muestras de suelo, frescas o secadas al aire y tami- total del suelo que puede ser mineralizada en estas con-
son positivos, es la primera cifra y las dos restantes se zadas a 2 mm se dividen en dos partes de 50 g cada diciones (10 das, 28C)
examinar luego de 15 das el desarrollo colocando la forman con el nmero de tubos positivos en las siguien- una, una de ellas se expone a los vapores de clorofor-
caja sobre la platina del microscopio tes diluciones. mo puro, obtenidos al efectuar vaco en desecador de Biomasa como fraccin del C%
vidrio cerrado hermticamente, con las muestras de Se expresa la proporcin del carbono orgnico total que
se observan los protozoos por su movilidad, a bajo au- Ejemplo suelo en tapas de cajas de Petri y el cloroformo en vasi- es biomasa viva
mento 1) 3 tubos/dilucin 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 to central. Colocar papel humedecido con agua en las
paredes para evitar la desecacin C-biomasa% = mg C-CO2/100 g suelo x 100
N tubos positivos: 3 3 3 2 1 0 C% (g/100)
Nmero caracterstico: 321 (dilucin 10-4) dejar en contacto con los vapores por 24 h a 25C
Grupos fisiolgicos
Nota: igualar las unidades en numerador y denominador.
2) 5 tubos/dilucin 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 retirar el resto del cloroformo y desfumigar por repetidas
Su estudio se realiza empleando medio y/o condiciones
de cultivo selectivos, que permiten poner en evidencia N tubos positivos: 5 5 5 3 2 0 aspiraciones con bomba de vaco hasta desaparicin Se pueden expresar los resultados como N-biomasa pro-
organismos que realizan determinado proceso metabli- del olor tpico del cloroformo cediendo a extraer el N-NH4+ de las muestras incubadas
N caracterstico: 532 (dilucin 10-4)
mejantes en relacin al Gram y a su morfologa. Puede incubar a 28C 7-10 das determinar el nmero ms probable (NMP) de microorga- Ciclo biolgico del carbono
ser necesario efectuar un reaislamiento. nismos, con ayuda de tablas construdas a partir de algu-
preparar blancos de reactivos (sin suelo) nos datos de recuentos de viables en medio slido (ca- Celulolticos aerobios
Conservacin de cultivos: en el refrigerador, en tubos jas) y luego por clculos estadsticos se infieren todas las Medio
de agar inclinado: deben efectuarse repiques cada 3-4 determinar el CO 2: transvasar el contenido del vaso combinaciones posibles. Se entra en la tabla correspon- K2HPO4 1g
meses para evitar desecacin del medio interno a un erlenmeyer de 125 mL con ayuda de diente con el nmero caracterstico y se lee en NMP en la NaNO3 0,5 g
agua alcuota sembrada en la dilucin correspondiente al pri-
MgSO4 0,5 g
congelados: a -20 y a -70C en tubos eppendorf con el mero de los nmeros del N caracterstico.
medio lquido y 50% de glicerol estril (se evita el conge- agregar 5 mL solucin de Cl2Ba 2% y 2-3 gotas de fe- FeSO4 0,01 g
lamiento que puede daar a las clulas) nolftalena (0,1% en etanol al 70%) ejemplo 1 agua 1 litro
N caracterstico: 321 (10-4) NMP 15,0 microorganismos
liofilizados: tratamiento que deseca a los cultivos aplican- valorar desde bureta con ClH 0,5 N (valorado con car- en 1 mL dilucin 10-4 Repartir en tubos de ensayo a razn de 8 mL cada uno
do ciclos de vaco y congelamiento. Los cultivos se con- bonato de calcio anhidro) hasta desaparicin color rosa: y agregar una banda de papel de filtro como nica fuen-
servan desecados en ampollas de vidrio. Al usarlas se les gasto = GM N microorganismos/g suelo seco = 15,0 x 104 x h = 1,5 te de carbono y energa
agrega medio de cultivo lquido y se incuba. x10-5 x h
igual procedimiento para los blancos, gasto = GB Esterilizar 20 minutos a 3/4 atmsfera
ejemplo 2
N caract. 532 (10-4) NMP 14,0 microorganismos en
Indicadores biolgicos en estudios de Clculos 1 mL de la dilucin 10-4 Sembrar con 1 mL de las suspensiones-diluciones de
ecologa microbiana a) suelo (10-2-10-7) 3 o 5 tubos/dilucin
mg C-CO2/100 g suelo seco = (GB-GM) N(HCL) 6 x h x 100 N microorganismos/g suelo seco = 14,0 x 104 x h = 1,4
Actividad respiratoria 7 das a 28C peso de la muestra x 105 x h Incubar por 15 das a 28C: tomar como positivos
(Frioni, 1999, Paul y Clark, 1996) los tubos en donde se visualice el ataque al papel,
Se evala el CO2 liberado por el suelo solo (respiracin 6mg= equivalente en C del HCl 1N porque: Nota: si se siembra con una alcuota menor de 1 mL es pigmentacin, desarrollo microbiano. A veces es ne-
endgena) y/o con el agregado de sustancias cuya de- CO2 (44g)C (12g) PE=PM/2 necesario tenerlo en cuenta en los clculos. Promediar cesario evaluar la integridad del papel con ayuda
gradacin y efecto sobre la microflora se desea estudiar los resultados de las repeticiones efectuadas. de un ansa: positivo, si ste se disgrega con facili-
(hidratos de carbono, abonos verdes, pajas, fertilizantes, h = 100 + H% factor de correccin de humedad para dad
pesticidas), por tcnicas de absorcin en el infrarrojo, cro- 100 llevar los clculos a suelo seco a 105C Tablas de Mc Crady
matografa gaseosa, conductividad elctrica, gravimetra Expresar los resultados: N celulolticos / g suelo seco
o volumetra (luego de absorberlo en solucin alcalina). H% = humedad referida a peso seco a 105C 3 tubos/dilucin con ayuda de la tabla de Mc Crady.
1 2 1 2 1 2
Analizaremos la tcnica volumtrica b) coeficiente de mineralizacin del carbono en 7 das: Aislamiento en medio slido
000 0.0 201 1.4 302 6.5
Sembrar con una alcuota de las diluciones ms con-
Cm = (mg C-CO2/100 g) X 100 001 0.3 202 2.4 310 4.5
Tcnica centradas (10-1) la superficie de caja de Petri con el me-
C org.% (g/100 g) 010 0.3 210 1.5 311 7.5
100 g de suelo fresco o seco al aire y tamizado (2 mm), dio anterior solidificado con 15 g/L de agar. Colocar en-
011 0.6 211 2.0 312 11.5
de humedad conocida, solo y con los aditivos que se cima un disco de papel de filtro estril del dimetro de la
Expresar el numerador y denominador en las mismas uni- 020 0.6 212 3.0 313 16.0
desean estudiar, se colocan en recipientes de vidrio que caja. Incubar
dades (mg/100g/mg/100g), por ejemplo multiplicar el nu- 100 0.4 220 2.0 320 9.5
se puedan cerrar hermticamente de un volumen de
merador por 10-3 101 0.7 221 3.0 321 15.0
aproximadamente 1 litro (3 repeticiones). Se puede re- Observar colonias tpicas en zonas atacadas del
102 1.1 222 3.5 322 20.0
ducir proporcionalmente las muestras: por ej. 30 g. en papel
c) coeficiente respiratorio = qCO2= C-CO2/C-biomasa microbiana 110 0.7 223 4.0 323 30.0
recipientes de 250mL.
111 1.1 230 3.0 330 25.0
Efectuar una coloracin Gram de un trocito del mismo,
Valoracin del cido clorhdrico 120 1.1 231 3.5 331 45.0
se lleva a humedad fija (por ejemplo 75% de la capaci- describir los organismos dominantes y su relacin con
Pesar exactamente 0,5g de CO3Na2 anhidro (mantenido 121 1.5 232 4.0 332 110.0
dad de campo o la deseada) y se mezcla las fibras de celulosa.
24h en estufa a 105C y luego en desecador hasta uso), 130 1.6 300 2.5 333 110.0
colocar en Erlenmeyer de 250mL disolver en agua (3 re- 200 0.9 301 4.0 140.0
colocar un vasito en el fondo del frasco (o en sistema
suspendido desde la tapa) con 15 mL de solucin NaOH peticiones), agregar gotas de azul de bromo timol (disol- 1 = N caracterstico; 2 = NMP
0,5 N y cerrar hermticamente ver 100mg de colorante con 1,5mL de NaOH 0,5N en un
Amilolticos Ciclo biolgico del nitrgeno colocarlo sobre un soporte que permita calentamiento superficie del agar con movimiento en zigzag desde el fondo
Medio a la parte superior, cuidando de no romper el agar
Fijacin por organismos en vida libre y en la cubrir con pequeos trozos de papel de filtro, impreg-
solucin salina estndar 50 mL narlos con solucin de verde de malaquita y calentar
rizosfera Agar parado: se siembran introduciendo la punta hasta el
extracto de suelo 10 mL con mechero suavemente por 5 minutos, evitando ebu- fondo y levantandola suavemente (siembra en picadura)
Aislamientos y recuentos llicin, agregar colorante de ser necesario.
almidn 1,5 g Azotobacter y Derxia medio LG (Verde de malaquita: 0,5g, agua destilada 100mL) Siembra en placas
NH4NO3 1,0 g (Dbereiner, 1980)
en superficie: por baado, colocar 0,1-0,5mL de la mues-
sacarosa 20 g lavar con agua
agua 940 mL tra con pipeta estril en el centro de la caja y distribuir a
K2HPO4 0,05 g
toda la caja con un rastrillo de vidrio estril
agar 20 g KH2PO4 0,15 g contrastar con solucin de safranina 30 segundos
CaCl2 0,01 g
lavar con agua, secar y observar en inmersin en estras, cargar el ansa y efectuar estras paralelas en
MgSO4 7 H2O 0,20 g
la cuarta parte de la caja, se quema el ansa y se enfra, se
Solucin salina estndar Na2MoO42H2O 0,002 g
Las esporas se ven verdes y las clulas vegetativas rosa- gira la caja 90 y se vuelve a estriar tocando 3-4 veces el
K2HPO4 5g FeCl3 0,01 g
das. Sin teir se pueden observar en microscopio de con- rea sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de
azul bromotimol (0,5% en etanol) 2,0 mL
MgSO4 2,5 g traste de fases y muchas veces se aprecian en la colora- caja. Por ltimo, sin quemar el ansa, se estra el resto de
CaCO3 1,00 g
cin de Gram de cultivos viejos. la superficie sin sembrar. De esta forma se facilita el aisla-
NaCl 2,5 g agar 15 g
miento de colonias
agua 1 litro
Fe2 (SO4)3 0,05 g pH 6,8 (color verde) Cpsulas
Colocar una gota de tinta china en un portaobjeto limpio
por inclusin: colocar 1mL de la muestra en una caja de
MnSO4 0,05 g Petri estril y vaca, sobre ella se agregan 15-20mL de
Para Derxia: reemplazar sacarosa por almidn o glu- y mezclar con una ansada de cultivo
agua 1 litro cosa, omitir el carbonato de calcio y agregar 0,01g medio de cultivo fundido y mantenido en sobrefusin a
NaHCO3 Cubrircon cubreobjeto y observar en inmersin 45C, se agita la placa para mezclar intimamente, mo-
Las cpsulas (definidas) y las capas mucosas (ms laxas) vindola 4 veces en sentido horario, 4 en sentido contra-
Recuento en medio slido: como para microflora hete- Azospirillum (NFb) (Dbereiner, 1980) se ven como zonas claras alrededor del organismo sobre rio y hacia ambos costados, antes de que el agar se soli-
rtrofa total cido mlico 5,0 g difique.
un fondo oscuro (coloracin negativa)
K2HPO4 0,5 g
Recuento en el mismo medio lquido: inocular 3 o 5 tu- MgSO4 7 H2O 0,2 g Las cajas se incuban invertidas, para evitar que el agua
bos/dilucin (1 mL). Incubar 15 das NaCl 0,1 g Siembra y aislamiento de condensacin caiga sobre el medio dando crecimiento
CaCl2 0,02 g confluente e impidiendo la formacin de colonias.
Lectura: pasar 1 mL de cada tubo a un tubo vaco Na2MoO4 2 H2O 0,002 g Sembrar o inocular es introducir artificialmente un in-
de hemlisis; agregar 1 gota de reactivo iodo-iodu- MnSO4 H2O 0,01 g culo microbiano en un medio adecuado, con el fin de es- Cada clula viable dar origen a una colonia,
Fe EDTA 91,64% peso/vol, agua) 4,0 mL tudiarlo, propagarlo, aislarlo en cultivo puro. Puede reali- de modo que la siembra en placas se usa para
rado (Lugol): iodo= 10 g; IK= 25 g; agua= 1 litro.
azul bromotimol (0,5% p/vol. en etanol) 3,0 mL zarse en medio slido, semislido o lquido, con ayuda de cultivar, aislar y contar a los microorganismos.
Agregar 2-3 ml de agua. Tubos (+ ) ligeramente co- KOH 4,5 g
loreados de amarillo; tubos (- ) color azul a violeta y ansa, pipeta, punta, hisopo.
biotina 0,1 mg Aislamiento: obtencin de cultivos puros, se realiza en
marrn. agua 1 litro en forma directa (por agotamiento en superficie slida),
En medio lquido: en matraces, tubos, fermentadores
pH 6,8 (color verde) antes de industriales. El crecimiento se manifiesta por enturbiamien- cuando la muestra contiene al microorganismo en canti-
Nota: Se emplea tambin caldo simple o agar simple con agregar el agar (semi-slido) 1,75 g agar dad adecuada, o por enriquecimiento previo, cuando se
to (velo, pelcula, sedimento) y/o por desaparicin de un
0,2% de almidn u otro azcar cuya utilizacin se desee sustrato o aparicin de productos del metabolismo (deter- encuentra en baja densidad. Se aumenta el nmero de
Distribuir en frascos chicos de antibiticos (7-10 mL) a
estudiar. minaciones qumicas de amonio, nitratos, sulfatos, etc.). microorganismos del tipo deseado por pasaje en medio
razn de la mitad de su volumen, esterilizar como de
lquido, en condiciones selectivas. El aislamiento termina
costumbre.
Caldo simple: peptona, 10 g; NaCl= 5 g; extracto de En medio slido: en tubos o placas de Petri por agotamiento en medio slido (colonias).
Nota: Para realizar cajas agregar 20 mg extracto de leva-
carne= 10 g; agua= 1 litro
dura y 15 g de agar/L. Tubos con agar inclinado (pico de flauta) para sembrarlos Cultivo puro: a partir de colonias del mismo tipo se reali-
se mueve el ansa o la punta cargada con el inculo sobre la za un examen microscpico a fin de mostrar clulas se-
ellas coloreando el fondo y contrastando con las clulas Gram positivas, retienen el primer colorante- cristal vio- Determinacin del efecto rizosfrico (R/S) de ve- leer entre los 3- 5 das por la aparicin de una pelcula
incoloras (coloracin negativa o indirecta). leta o violeta de Genciana- y se ven violetas y Gram getales sobre estos diazotrofos sub-superficial, determinar el nmero caracterstico y
negativas, que se decoloran con alcohol, acetona o mez- plantas de gramneas se llevan al laboratorio con el pan calcular la densidad con ayuda de la tabla de Mc Crady
Coloraciones simples: usan un solo colorante, como el cla de ambos y se se tien con el segundo colorante, de suelo, se corta la parte area y se sacude la raz con
azul de metileno, safranina, cristal violeta. Todas las clu- como la safranina y se ven rosadas. El complejo forma- suaves movimientos: el suelo que queda adherido se verificar capacidad de fijacin del N2 de las pelculas,
las se tien uniformemente. do por el cristal violeta y el iodo del lugol (mordiente) es considera rizosfrico (R) sustituyendo el algodn de los frascos por tapn de
extrado, mientras que en las G+ esto no ocurre por una goma y precinto de aluminio, medir reduccin del aceti-
Coloraciones compuestas, cuando se emplean dos o diferente composicin y estructura de la pared celular colocar la raz en erlenmeyer de 250 mL y peso seco leno a etileno (actividad nitrogensica)
ms colorantes. La coloracin diferencial, como la de (captulo 2). conocido con 100 mL de agua destilada estril o solu-
Gram, es una coloracin compuesta. cin NFb salina (sin azcares) efectuar observaciones morfolgicas de los cultivos y
Las levaduras, eucariotas con paredes gruesas pero sin aislamientos en cajas de medio NFb con extracto de
Preparacin de un frotis peptidoglicano, se tien como Gram+, en este caso no es agitar 10 minutos a 70 rpm en agitador elctrico levadura (N combinado); las colonias aparecen en 1 o 2
extendido del material (cultivo slido o lquido) sobre un la composicin qumica sino la estructura fsica de la padas, pero se dejan incubar por 1 semana; son blancas,
portaobjeto limpio y desengrasado con alcohol. Si se par- red lo que le confiere la Gram positividad. decantar y realizar suspensiones-diluciones (10-1-10-4) secas y pequeas y frecuentemente se introducen en
te de material slido (alimentos, suelo, colonias sobre agar) el agar. Verificar su capacidad de reducir el N2 en medio
colocar una gota de agua en el portaobjeto y disgregar el Tcnica coloracin de Gram retirar la raz con pinza, enjuagarla con agua que se semi-slido, sin N
material en una fina capa sobre el vidrio con ayuda del colocar el frotis sobre un soporte para tinciones recoge en el erlenmeyer. Este se lleva a estufa a 105C
ansa para evaporar toda el agua y determinar peso seco del (R/S)= N m.o./g suelo rizosfrico
cubrir con solucin de cristal violeta y dejar actuar 1 suelo rizosfrico (peso erlenmeyer con suelo seco-peso N m.o./g suelo no rizosfrico
secado: en forma lenta y evitando ebullicin del agua del minuto erlenmeyer vaco). Colocarlo en desecador con Cl2Ca o
frotis (las clulas se aglomeran y resulta dificultosa su vi- (cristal violeta, 2g con 20mL etanol 96%, oxalato de amo- slico gel para enfriarlo antes de pesar. Actividad nitrogensica (Dbereiner, 1980)
sualizacin) nio 1% (v/v). Disolver el colorante en etanol, agregar el Reduccin del acetileno a etileno en races cortadas
recoger las plantas temprano en la tarde para permitir
oxalato de amonio y dejar 48h antes de usar, filtrar por con suelo no rizosfrico (S) realizar suspensiones-dilu-
fijado: mata y fija a los microorganismos, coagulando el papel colorantes viejos) ciones (10-1-10-4) mxima acumulacin de fotosintetizados, separar la par-
citoplasma y permite su adhesin al portaobjeto. Si esta te area y exceso de suelo y colocar las races en reci-
etapa no se realiza correctamente, las clulas se lavan y lavar suavemente con agua de la canilla Azotobacter pientes con agua destilada, llevar inmediatamente al
se pierden en la tincin. Se usa el calor: cortando la pre- inocular 3 cajas/dilucin con 0,2 ml de suspensiones- laboratorio
paracin 3-4 veces en el cono azul del mechero de gas, cubrir con lugol y dejar 1 minuto, lavar de la misma for- diluciones
sostenida con una pinza de madera. Se pueden usar otros ma. colocar las races en frasco que pueda cerrarse her-
procedimientos, como la fijacin por metanol, formol, que (Lugol: iodo 1g, ioduro de K, 2g, agua destilada 300mL : 10
-1
-10-4 del suelo (S) y del (R) del erlenmeyer inicial y mticamente: de suero, tipo antibitico o los emplea-
permite observar mejor clulas animales o vegetales que disolver el iodo y el IK en agua, dejar de un da para el 10 -10-3
-1 dos como biberones, tapar con tapn de goma y pre-
pueden acompaar a las bacterias otro para disolver completamente, guardar en frasco os- cinto de aluminio. Reemplazar el aire por N2 y 5% de
curo) extender el inculo en toda la superficie con varilla de aire, dejar a temperatura ambiente toda la noche para
Ejemplo de coloracin simple: una vez fro el frotis se vidrio doblado 90, secar a estufa a 37C e incubar in- superar la fase de latencia en la reduccin observada
coloca en un soporte adecuado sobre una pileta y se le cubrircon solucin de safranina y dejar 1 minuto. Lavar vertidas a 28C en gramneas
agrega el colorante (azul de metileno, por ejemplo), du- y secar
reemplazar un 10% de la atmsfera por acetileno y 1% O
rante 1 minuto, se lava al chorro suave de la canilla o (safranina: 2,5% (p/v) en alcohol 95%, 10mL, agua desti- leer entre 5-7 y hasta 14 das: colonias tpicas transpa- 2
con ayuda de una piseta, se seca con papel absorbente lada 100mL) rentes, brillantes, distinguir de contaminantes.
incubar a 32C y efectuar mediciones en las 2 o 3 horas
del lado de atrs y cerca de la llama del mechero. Se
observa a x40 y luego con inmersin (x100) con una gota observar
+ -
en inmersin: G violetas, G rosadas y deter- Clculo de R/S, como se explic anteriormente a partir de 0,5-1 mL de muestra tomada con jeringa de
de aceite. minar forma y tamao relativo plstico, en cromatgrafo de gases con columna de Po-
Azospirillum rapax Q, N o T a 80C temperatura y 100C en el inyec-
Coloracin diferencial (Gram): evidencia diferencias en Coloracin de esporas inocular 3 frascos/dilucin con 0,1 mL cada uno en el tor, gas portador: N2
la composicin fsica y qumica de las bacterias y permite preparar un frotis pasando 10 veces por la llama para medio semi-slido, con las mismas suspensiones-dilu-
los picos de etileno se comparan con los producidos en
diferenciarlas entre si: fijar ciones que para Azotobacter, incubar a 28C
las mismas condiciones y sensibilidad por muestras de
etileno puro diluido en frasco de antibitico cerrados. El Desinfeccin: colocar los ndulos en tubo de ensayo tra en estudio. Trabajar en cmara de flujo laminar o entre Las estructuras de los hongos se aprecian muy bien to-
etileno se consigue en pequeos balones o se prepara con tapa rosca o en sistema preparado cortando jerin- dos mecheros encendidos. cando las colonias suavemente con una cinta adhesiva,
por reduccin del etanol con cido sulfrico gas de plstico y adhiriendo con banda elstica en un la que luego se pega sobre un portaobjeto, de esta ma-
extremo del cilindro una gasa para sumergirlo en las Toma de muestras para observaciones micros- nera se evita la rotura del micelio que ocurre con el uso
los resultados se expresan en micro o nano moles de distintas soluciones : alcohol 70% durante 1 minuto, cpicas o para siembra de ansas, puntas, etc. Tambin se aprecian colocando la
etileno (nM C2H4/g raz seca/hora) cambiar a NaClO al 2% por 3-5 minutos, agitando, lavar tomar el tubo de ensayo con la mano izquierda, de modo caja de Petri sobre la platina del microscopio y tratando
5-6 veces con agua destilada estril que su base toque la palma de la mano y aflojar el tapn de enfocar a bajo aumento, regulando la luz a niveles ade-
efectuar dos controles: raz sin acetileno (produccin cuados.
endgena del mismo) y otro con acetileno, sin raz (im- Maceracin del ndulo con auxilio de varilla de vi- tomar el ansa con la mano derecha, con los dedos pul-
purezas de etileno) drio, bistur o ansa estril, puede efectuarse entre gar, ndice y mayor dejando libres el anular y meique a Bacterias
dos portaobjetos o en un borde de la tapa de la caja los efectos de poder asir el tapn al estado fresco, sin teir
En cilindros de suelo con planta entera donde se efectuar el aislamiento, con unas gotas
clulas fijadas, teidas con colorantes
introducir un cilindro de acero abierto en ambos extre- de agua quemar el ansa introduciendo la punta en el cono fro de
mos, alrededor de las plantas y retirar el sistema radical la llama del mechero en posicin vertical y luego ir le-
lo ms intacto posible. Sellar sobre un plato de plstico vantndola hasta que quede toda al rojo, pasarla por la Las bacterias vivas son difciles de observar sin teir ya
en la base llama en un ngulo de 60 con la vertical, mantenindo- que su ndice de refraccin es muy similar al del agua, no
la siempre en posicin paralela al cuerpo. se aprecia contraste con el medio que las rodea. Una pro-
colocar en bolsa de polietileno, tipo Saran dejando la piedad importante se aprecia al estado fresco es la mo-
parte area libre, sellar alrededor del tallo con banda de flambear el metal adyacente vilidad
goma y solucin de agar (7 g/L) luego de unas 24 horas
se coloca la preparacin (cultivo jven de bacterias en
en invernculo para equilibrar el sistema cerca del mechero, tomar el tapn de algodn o de
plstico del tubo con los dedos anular y meique de la medio lquido) entre porta y cubreobjeto o en portaobje-
una tubuladura lateral de goma permite efectuar los in- mano derecha y quitarlo girando el tubo, flambear la tos excavados y se observa en el microscopio ptico a
tercambios gaseosos. Si no se cuenta con medidor de boca del tubo x40 con mnima iluminacin o en microscopio de con-
flujo para volmenes grandes, se puede generar el ace- traste de fases. Debe distinguirse el movimiento flage-
tileno en la bolsa a partir de carburo de calcio y agua. A introducir el ansa tocando la pared fra dentro del tubo lar que desplaza rpidamente a la clula, del movimien-
los efectos de calcular el volmen de la bolsa y posibles (sin soltar el tapn) para que el ansa se enfre y luego to por arrastre de corrientes de conveccin o del movi-
prdidas se introduce volumen conocido de propano, introducirla en el cultivo lquido o deslizarla sobre la su- miento browniano de las bacterias inmviles
Figura 1- Aislamiento de rhizobios a partir de ndulos e
como estndar interno perficie de un cultivo slido de abajo hacia arriba, para
inoculacin de plntulas Tinciones
tomar el cultivo a transferir (inculo)
leer luego de 1-2 horas de introduccin del acetileno Las coloraciones de bacterias tienen por objeto:
aumentar el contraste de las clulas con el medio, lo
sacar el ansa cargada del tubo, flambear la boca y
Aislamiento que permite distinguir forma y tamao
efectuar blanco de suelo sin plantas taparlo
1. en superficie: sembrar por agotamiento con ansa
en superficie de medio EMA (extracto de levadu- diferenciar grupos bacterianos por su reaccin frente a
transferir el inculo a un portaobjeto o a otro medio de
ra manitol agar), llamado tambin M-79, con rojo ciertos colorantes
Asociacin Rhizobium-leguminosa Congo
cultivo (siembra)
(Balatti y Jardim Freire, 1996; FAO, 1983 y 1984; Duhoux
evidenciar ciertas estructuras internas (endoesporas)
y Nicole, 2004; Graham y Vance, 2000; Milnitsky et al., quemar nuevamente el ansa
2. en inclusin: colocar 1 mL de agua estril en 3 cajas de
1997; NifTAL, 1981)
Petri vacas. Con el ansa flambeada tomar contenido Los colorantes usados son sales en las cuales el anin o
nodular y diluirlo sucesivamente en las 3 cajas. Agregar el catin son responsables del color (colorantes cidos y
Aislamiento de rhizobios a partir de ndulos (figura 1)
el medio en sobrefusin (menos de 45C) y por repeti-
Algas, hongos y protozoos
lavar cuidadosamente las races noduladas bajo el agua Dado su mayor tamao en relacin a las bacterias, su bsicos, respectivamente). Las bacterias tienen afinidad
dos movimientos mezclar con el inculo por los colorantes bsicos, como el azul de metileno o el
de la canilla observacin se realiza en general, al estado fresco, sin
fijar ni teir, colocando las muestras entre porta y cubre- cristal violeta. Cuando se usan colorantes cidos como la
incubar las cajas en posicin invertida a 28C: las colo- eosina y la nigrosina, estos no se unen al citoplasma car-
elegir ndulos grandes y vigorosos, separarlos de la raz objeto o en portaobjetos excavados que permiten obser-
nias de rhizobios de crecimiento rpido aparecen a los gado negativamente, sino que se depositan alrededor de
dejando pequea porcin de sta a cada lado del ndulo var una gota de lquido suspendida.
2-3 das y las de crecimiento lento, al cabo de 1 sema- rante, o sobre algodn y papel de filtro en cajas estri-
na. Son grandes, incoloras, mucosas, de superficie lisa les, para su germinacin a la oscuridad y temperatura
y brillante. Los contaminantes generalmente se colo- adecuada a cada leguminosa.
rean con el rojo Congo, aunque hay excepciones como
Agrobacterium radiobacter y cultivos viejos de rhizobio Siembra e inoculacin
Para leguminosas de semilla pequea (Medicago, Tri-
repicar las colonias representativas en tubos de agar folium, etc.) tubos grandes (19 x 2 cm) con 25 mL de me-
inclinado con medio EMA con azul de bromotimol dio salino para plntulas, como el de Jensen :
Medio EMA con rojo Congo CaHPO4 1,0 g
manitol 10 g K2HPO4 0,2 g
K2HPO4 0,5 g MgSO4 7H2O 0,2 g
MgSO4 7 H2O 0,2 g NaCl 0,2 g
NaCl 0,1 g Cl3Fe 0,1 g
extracto de levadura 1g agua 1 litro
agar 15 g agar 8 g
rojo Congo (sol. acuosa 1/400) 10 mL pH 6,8-7,2
agua destilada 1 litro
sembrar dos plntulas por tubo con ayuda de ansa
Medio EMA con azul de bromotimol llevara solario y a la semana inocular con 0,2 mL de
el mismo medio anterior: se sustituye el rojo Congo por una suspensin densa de clulas (109/mL) de las ce-
1 mL por litro de solucin alcohlica al 1,6% de azul de pas a estudiar (el contenido de un tubo de agar incli-
bromotimol. Ajustar el pH 6,8-7,0, repartir en frascos nado crecido 2-3 das se suspende con 5 mL de agua
(para preparar cajas) o en tubos de ensayo, esterilizar estril). Efectuar 8 o ms repeticiones de cada trata-
e inclinar antes de solidificar miento
se incluyen dos testigos:

Seleccin de cepas de rhizobio T = sin inocular y sin nitrgeno
N = 0,2 mL solucin KNO3 al 0,05%
Se realiza a tres niveles: laboratorio, invernculo o c-
mara controlada y campo. Se parte de una coleccin llevara cmara de cultivo con temperatura, fotoperodo
de cepas autctonas y otras cedidas por centros de co- e intensidad luminosa controlados de acuerdo a la le-
leccin. guminosa con que se trabaje. Las races no deben que-
dar expuestas a la luz. Los ndulos comienzan a apare-
Desinfeccin de las semillas: colocar la cantidad de cer en las primeras semanas. Anotar fecha de inicio de
semillas de leguminosas necesarias, de buen poder ger- nodulacin y aspecto de sta
minativo, en un frasco y sumergirlas en alcohol a 70%,
agitando por 3-5 minutos. Volcar y agregar hipoclorito Evaluacin: la experiencia concluye cuando se obser-
de sodio al 2%, por 3-5 minutos. Lavar varias veces con va la mxima diferenciacin entre los tratamientos (T) y
agua destilada estril. (N), pero antes que los primeros comiencen a secarse
(6-8 semanas). Con ayuda de ansa o varilla se sacan
Germinacin: en los mismos recipientes se pueden dis- las plantas con el medio, se corta la parte area, se
tribuir las semillas sobre las paredes con una pequea coloca en sobre de papel con su correspondiente nu-
cantidad de agua del ltimo lavado, o bien colocarlas meracin y se determina su peso fresco y luego su peso
sobre la superficie de agar-agua o medio EMA sin colo- seco a 65C, hasta peso constante.
El N% de la parte area y la produccin de N por tubo dros intactos de suelo que se obtienen en el campo
se realiza por la tcnica de semi-micro Kjeldahl, aun- con ayuda de un cilindro metlico que se entierra para
que en este primer ensayo suele efectuarse determina- extraer un pan que se coloca luego en bolsas duras
ciones de peso seco de la parte area y nodulacin: de plstico o en macetas. En este caso no hay altera-
nmero, peso de los mismos a 65C, ubicacin veloci- cin del mismo.
dad de aparicin.
Pero son sin duda los ensayos de campo los que permi-
Para para leguminosas de semilla grande (soja, man, tirn emitir opinin ms acertada sobre el comportamien-
poroto) to simbitico de combinaciones rhizobio-leguminosa.
se emplean unidades de siembra mayores, como las
clsicas botellas de Leonard: botellas comunes de Ensayos de campo
unos 700 mL a las que se les quit el fondo y que van Eleccin del lugar: los suelos con bajo nmero de rhi-
invertidas sobre un frasco de boca ancha (1 litro) con zobios y nitrgeno disponible son probablemente los ms
solucin nutritiva para plntulas que asciende por capi- tiles para el ensayo de cepas, pero para probar otras
laridad a travs de una mecha de gasa enrollada, a la cualidades adems de la eficiencia, como la capacidad
botella invertida llena de arena fina lavada y neutra o competitiva, se requiere una alta poblacin de rhizobios
vermiculita donde se desarrollar el sistema radical. Todo nativos. El lugar debe estar lo suficientemente nivelado
el dispositivo sin la solucin se envuelve en bolsa de para evitar el lavado luego de una lluvia y la contamina-
papel y se esteriliza en autoclave; antes de su uso se le cin de las parcelas. Elegir el diseo experimental ms
coloca solucin nutritiva (Jensen, Norris, etc.) Pueden conveniente
hacerse ms chicos, o con dos vasos de plstico uno
con arena/vermiculita y con una mecha no degradable Tratamientos al suelo: si el propsito es comparar la Se termin de imprimir en mayo de 2006
sumergida en la solucin del vaso externo. eficiencia de un grupo de cepas, las dems condiciones en el Departamento de Publicaciones de la Facultad de Agronoma
no deben ser limitantes: nivel mnimo de fertilidad, pH, Universidad de la Repblica
Siembra: con semillas desinfectadas o con plntulas dosis de inoculante, riego para evitar prdidas por sequa, Montevideo - URUGUAY
creciendo aspticamente, o micropropagadas, 5-6 se- etc. Por el contrario, si se desea comparar la capacidad
millas para luego ralear a 2 por dispositivo de las cepas para sobrevivir y nodular en el campo, las
condiciones deben ser las naturales
Inoculacin: puede incluirse con la semilla (peletea-
da) o agregarse una vez emergidas las plntulas a Inoculacin: a menos que el ensayo se establezca para
razn de 1 mL de suspensin con 10 9 clulas/mL por comparar distintos mtodos de inoculacin, sta debe efec-
cada planta. Cuando las plantas estn establecidas, tuarse segn las normas de prctica comn en la zona.
se cubre la superficie de arena con 2-3 cm de arena Se desea establecer entre 1.000 a 10.000 rhizobios via-
parafinada o trozos de espuma plstica para evitar bles/semilla
desarrollo de algas y excesiva evaporacin
Evaluacin: en el momento del raleo ya se aprecia no-
Incubacin: el ensayo (cepas y testigos) se lleva a c- dulacin, pero sta se evala al comienzo de la floracin,
mara de cultivo controlado o invernculo. Se repone la en unas 10 plantas por parcela: nmero y peso seco de
solucin a medida que se requiera, alternndola con los mismos. Cosecha: una superficie determinada (1 m2)
agua estril para cultivos forrajeros y las lneas centrales para los cul-
tivo de grano. Se evala: peso fresco y seco de la parte
La evaluacin es la misma que efectuamos en el ensa- area, N% y produccin de nitrgeno por hectrea. En
yo de laboratorio caso de granos: nmero de cajas o vainas por planta, peso
seco de las mismas y de los frutos, N% de frutos y se
Ensayos de invernculo o cmara con suelo calcula la produccin de nitrgeno = N% x materia
se emplea suelo seco al aire y tamizado o bien cilin- seca(kg/ha)
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da por causas climticas, germinacin retardada por falta DellAbate, M. T., Canali, S., Trinchera, A., Benedetti, A., Graham, P.H. and Vance, C.P. Nitrogen fixation in pers-
de humedad, pero suele secar el preparado, por lo que su Preparar solucin del cloruro de calcio al 1% estril y and Segui, P. Thermal analysis in the evaluation pf com- pective: an overview of research and extension needs.
uso debe controlarse. Algunos pases expenden la semi- agitada con barra magntica. post stability: a comparison with humification parame- 2000 Field Crops Res. 65 (2): 93-106
lla pre-inoculada, con 105 rhizobios/semilla. En muchos ters. 1998 En: Nutrient cycling in Agroecosystems, Gua de Clases Prcticas de Microbiologa, 2005, AEA,
casos se recomienda el pellet mltiple o super pellet El inoculante se forma dejando caer gotas de medio- Kluver Academic Publishers: 217-224 Facultad de Agronoma y en www.fagro.edu.uy/micro-
para obtener semillas con elevado nmero de rhizobios, alginato sobre el cloruro de calcio, con pipeta o filtro de Dbereiner, J. Forage grasses and grain crops 1980 En: biologia
mejorando el establecimiento en casos en que la densi- porcelana con pequeos orificios. Se forman pequeas Methods for evaluating biological nitrogen fixation, Hitzl, W., Henrich, M., Kessel, M. and Insam, H. Applica-
dad de cepas nativas infectivas sea muy elevada. esferas de alginato de calcio (gel) con las clulas atra- F. J. Bergersen. Wiley & Sons: 535-555 tion of multivariate analysis of variance and related te-
padas que se lavan para eliminar exceso de Cl2Ca con Duhoux, E. y Nicole, M. Biologie Vgtale: Associatio- chniques in soil studies with substrate utilization tests,
En el suelo agua estril y se dejan secar una noche bajo flujo lami- ns et interactions chez les plantes. 2004, Dunod, 1997 J. of Microbiol Methods 30: 81-89
Cuando se aplican pesticidas, o cuando la semilla puede nar. El gel desecado ocupa pequeo volumen y se man- Pars Honrubia, M., P., Torres, P, Diaz, G. y Cano, A. Manual
daarse fcilmente con el manipuleo como en el caso de tiene en frascos o bolsas en lugar fresco hasta su uso. Dunbar, J., Ticknor, L. O. and Cheryl, R. Phylogenetic para micorrizar plantas en viveros forestales. 1992.
la de man, se pueden aplicar tcnicas de inoculacin al specificity and reproducibility and new methods for ICONA Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentacin.
suelo con formas lquidas o granuladas de inoculantes. Se puede colocar este preparado seco junto con la analysis of terminal restriction fragment profiles of 16S LUCDEME VIII, Monografas 54, 45 pp
semilla o previamente se disuelve en buffer fosfato, rRNA genes from bacterial communities. Applied & Honrubia, M., P., Torres, P, Diaz, G. y Morte, A. Biotec-
granular, en general son a base de turba preparados pH 7,0 o buffer de citrato de sodio, igual pH. Environm. Microbiol. 67(1): 190-205 nologa forestal: tcnicas de micorrizacin y mi-
como las raciones de animales, comprimiendo peque- Eckhardt, T. A rapid method for the identification of plas- cropropagacin de plantas, 1994 Universidad de
os cilindros. Son comunes con aplicaciones de in- La figura 2 muestra un sencillo dispositivo para preparar mid deoxyribonucleic acid in bacteria. 1978 Plasmid Murcia, Ciheam, Instituto Agronmico Mediterrmneo
secticidas y herbicidas. Se aplican debajo de la semi- inoculantes con bacterias, Frankia, en este caso, incluida 1: 584-588 de Zaragoza, Murcia, 168 pp
lla en el surco y resulta ser un mtodo muy eficaz en en la matriz de alginato de calcio. El peso seco de estas FAO Technical handbook on symbiotic nitrogen fixa- Josephson, K. and Pepper, I. Molecular genetic analysis
la inoculacin en man, soja y otros cultivos. El inocu- bolitas fue de 1,2 a 1,9 mg. La figura 3 presenta el aspec- tion legume/rhizobium, 1983, Roma in soil ecology, 1998. En: Principles and Applicatio-
lante se puede colocar a la distancia que se desee de to de este inoculante antes del secado al aire, con distin- FAO Legume inoculants and their use, 1984, Roma ns of Soil Microbiology, Sylvia, Fuhrmann, Hartel y
la semilla. tas concentraciones de bacteria, coloreado con INT (iodo- Ferrari, V. Anlisis de la diversidad estructural y funcional Zuberer (eds), Prentice Hall.
nitrofenil tetrazolio) que se reduce a INT-formazn rojo de comunidades microbianas del suelo, 2005 Trabajo Jenkinson, D.S. and Powlson, D.S. The effect of bioci-
lquidos se emplean al igual que los anteriores cuan- por actividad bacteriana (Frioni, et al., 1994). Especial I de la Lic. de Bioqumica de la Facultad de dal treatments on metabolism in soil. V-a method for
do se desea evitar el manipuleo de la semilla, pero Ciencias, Universidad de la Repblica, Montevideo, 70 measuring soil biomass, 1976, Soil Biol. Biochem.,
se requiere transporte de agua y maquinaria con pul- pp 8: 209-213
verizador. Fisher and Yates Statistical tables, 4 ed., 1953, Oliver Kalbitz, K. and Geyer, W. Humification indices of water-
& Boyd, Londres soluble fulvic acids derived from synchronous fluores-
otros tipos se extiende el uso de inoculantes donde Frioni, L. , A. Spinelli y A. Maggi Nodulacin y fijacin de cence spectra-effects of spectrometer type and con-
los microorganismos se atrapan en geles de poliacrila- nitrgeno en especies de Casuarina y Allocasuarina centration-. 2001 J. of Plant Nutrition & Soil Sci.
mida y otros productos como alginato, xantano, que cultivadas en el pas. 1991 Bol. Inv. Fac. Agr. 30: 1-20 164(3):259-265
protegen a las clulas. Se mostraron tan eficaces como Frioni, L., Le Roux, C., Dommergues, Y. R. and Diem, I. Komalchuk, G. A., de Bruijin, F. J., Head, I. M., Akkermans,
los inoculantes a base de turba, con la ventaja de que H. G. Inoculant made of encapsulated Frankia: as- A. D. L. and Van Elsas, J. D. Molecular Microbial Eco-
se puede inocular muchos das antes de la siembra (30 sessment of Frankia growth withing alginate beads. logy Manual. 2004, Springer, 1780 pp.
o ms das). 1994, World J. Microbiol. & Biotech 10: 118.121 Lassagno, M. y Frioni, L. Obtencin de mutantes de rhizo-
Frioni, L. Procesos microbianos.1999 Fundacin de la bium meliloti resistentes a antibiticos. 1988 Bol. Inv.
Inoculante a base de alginato de calcio Universidad Nacional de Ro Cuarto, Argentina, tomo II Fac. Agron., N 17:1 - 12. Montevideo
(figuras 2 y 3, Frioni et al., 1994) Garland, J. Methods of Microbial Community Anlisis, Lehman, R. M., Colwell, F. S.. Ringelberg, D. B. and
Esterilizar alginato de sodio al 4% en agua (es muy viscoso) Figura 2- Inoculantes a base de alginato 2004, Curso de post grado dictado en la Facultad de White, D. C. Combined microbial community-level
Se sabe que la materia orgnica ms polimerizada, del Estas tcnicas se combinan con datos termoanliticos y agregar de una vez el polvo de recubrimiento mezclan-
tipo de los cidos hmicos, absorbe sobre todo en el ul- colorimtricos a los efectos de evaluar la maduracin y do suavemente hasta que toda la semilla quede recu-
travioleta (280nm), mientras que la menos polimerizada estabilidad de un compost (DellAbate et al., 1998) per- bierta y separada
(humus en vas de formacin, materia orgnica fresca) lo mitiendo distinguir compuestos pobremente estabiliza-
hace a longitudes de onda ms larga. Se interpretan los dos de los ms evolucionados. Se correlacionan, ade- extender la semilla inoculada al abrigo de la luz solar y
cocientes de extincin como ndices del estado de poli- ms con el ndice de humificacin (IH) y el grado de hu- dejar orear antes de su empleo
merizacin de la materia orgnica. mificacin (GH).
Recomendaciones sobre cantidades de goma arbica e
Extraccin del C-orgnico con 0,1M NaOH + 0,1M inoculante a emplear en algunas leguminosas
Na4P207 a 65 por 24 horas Bibliografa
Centrifugar a 5.000g y filtrar el sobrenadante por filtro semillas(g) inoculante (g) goma
millipore de 0,20 (CTE=Ctotal extrado) Alef, k. Methods in applied soil microbiology and bio- arbiga(mL)
chemistry. 1998, Alef y Nannipieri. (eds) Academic
Arachis hypogea 100 10 4,0
La fraccin tipo cidos hmicos (AH) se separa de la Press, N.York: 232-233 Glycine max 100 10 3,0
fraccin tipo cidos flvicos (AF) y la no humificada (NH) Aman, R. I. Fluorescently labelled, rRNA-targeted oligo- Figura 3- Inoculante en alginato de calcio con Frankia a
Medicago sativa 50 0,2-5 4,0
por precipitacin luego de acidificacin de la solucin nucleotide probes in the study of microbial ecology, diferentes concentraciones. La coloracin roja del INT-
Phaseolus vulgaris 100 8 2,5
alcalina a pH menor de 2,0 1995, Mol. Ecol 4: 543-554 formazn permite evaluar la viabilidad de la bacteria
Balatti, A. y Jardim Freire, J. Legume inoculants. Selec-
NH se separa de la AF por cromatografa en columna
tion and characterization of strains. Production,
de PVP (polivinilpirrolidona)
Use and Management, 1996 Ed. Kingraf, La Plata,
Inoculacin simple
seguir atentamente las instrucciones del inoculante co- Reconocimiento de rhizobios
AF se combianan con AH (fraccin AH+ AF) Argentina, 148 pp
mercial a emplear, preparar el adhesivo y agregar el
Bremner, J.M., 1965 Total nitrogen e inorganic nitrogen. Serologa
El C-orgnico de cada fraccin (CTE, NH, AH, AF) se volumen recomendado
En: Methods of soil analysis, Black (ed.), Amer. Soc. Se han empleado las reacciones antgeno-anticuerpo:
determina por oxidacin con dicromato de potasio en of Agronomy: 1149-1178 y 1179-1237
agregar el inoculante a base de turba u otro preparado aglutinacin: interviene la totalidad de la clula
caliente (Walkey y Black) Brookes, P. C., Powlson, D. S., Jenkinson, D. S. Measu-
siguiendo las instrucciones y mezclar bien hasta elimi-
rement of microbial biomass phosphorus in soil. 1982 precipitacin: slo los antgenos solubles
1) Indice de humificacin (IH) = NH nacin de los grumos
Soil Biol. Biochem. 14: 319-329
AH + AF Brookes, P. C., Landman, A., Pruden, G., Jenkinson, D. S.
agregar el inoculante y adhesivo a la semilla y mez- Obtencin de antisuero con alto ttulo por inmuniza-
Chloroform fumigation and the release of soil nitrogen: cin en conejos; se cultiva el rhizobio en medio EMA,
2) Grado de humificacin (GH%) = AH + AF X 100 clar hasta que toda la semilla quede uniformemen-
a rapid direct extraction method to measure microbial slido o lquido (este ltimo evita la excesiva acumula-
CTE te recubierta por una capa negra de inoculante
biomass nitrogen in soil. 1985 Soil Biol Biochem 17: cin de polisacridos extracelulares que acumulan mu-
837-842 chas cepas), se prepara una suspensin densa (108 c-
extender las semillas inoculadas fuera de la luz directa
Otro ndice (Campitelli et al., 2005) Brundrett, M., Bougher, N., Dell, B., Grove, T. y Malajc-
del sol y dejar orear antes de su empleo lulas/mL) luego de repetidos lavados de las clulas en
1 g de suelo + 50 mL NaOH 0,5N se agitan 2 horas en zuk, N. Working with mycorrhizas in forestry and solucin fisiolgica.
agitatador elctrico agriculture, 1996, Aciar monograph 32 : 374 pp, Csi-
Pildorizacin (pelletizacin)
ro, Canberra Si se calienta previamente el antgeno 30 minutos a
Dejar toda la noche en reposo preparar la solucin adherente, por ejemplo: celofx-A
Burket, J. Z y R. P. Dick Microbial and soil parameters in 100C se destruyen los antgenos flagelares (H): protei-
50g/L de agua o solucin de goma arbica al 40%, con
Centrifugar 25 minutos a 3.000rpm relation to n mineralization in soils of diverse genesis cos y se obtienen los somticos (0): polisacridos, pro-
24 horas de antelacin
under differing managements systems. 1998 Biol & tenas solas o con lpidos. En este caso slo se pueden
Leer la absorbancia del sobrenadante a: 280nm, 472nm
Fertil Soils 27:430-438 efectuar las reacciones de aglutinacin, pero si se de-
y 664nm agregar el inoculante y mezclar bien para deshacer los
Campitelli, P., Velasco, M. y Ceppi, S. Evaluacin de la sea el conejo puede luego volver a ser inmunizado con
grumos
Calcular relaciones: calidad de compost: parmetros qumicos y espectros- el cultivo entero y obtener un antisuero completo para
Q 2/4 = Ab280/Ab472 cpicos. 2005, XIV Congreso Argentino de Fsico Qu- reacciones de precipitacin.
agregar la solucin adherente con el inoculante a las
Q 4/6 = Ab472/Ab664 mica y Qumica Inorgnica, Termas del Ro Hondo,
semillas, mezclar bien hasta que toda la semilla quede
Q 2/6 = Ab280/Ab66 Santiago del Estero Ttulo: ltima dilucin en la que se observa aglutina-
recubierta por el inoculante
cin. Los sueros se conservan congelados, con el agre- tan varias cavidades en agar-agua muy puro solidifi- Los pH superiores a 7,6, son caractersticos de com- lerable y con apariencia modificada; el pH debe ser al-
gado de algn antisptico, en pequeos volmenes, cado en caja de Petri o sobre un portaobjeto. post bioestabilizado, en proceso de humificacin. calino y la celulosa estar presente. Se toma 1 g de com-
que facilitan su empleo. La determinacin del ttulo post en un vaso de 100 ml se moja con algunas gotas de
puede efectuarse en tubos chicos de hemlisis o en ELISA, mtodo indirecto muy sensible que emplea IgG- 6. Test de nitrgeno mineral etanol si el compost estuviera seco y se agrega 20 mL
bandejas: anticonejo conjugado con fosfatasa alcalina y el sustrato Para indicar la presencia de amonio o de nitrato en el com- de cido perclrico al 36%. Se agita 5 minutos y se filtra.
p-nitrofenil fosfato. La enzima libre se lee a 405 nm luego post, que caracterizan fases en el compostaje: una mues- Se agrega 2 mL de solucin de iodo al filtrado y se
diluir el antisuero (0,08 mL, con pipeta especial) en de 30 minutos a temperatura ambiente, con la solucin tra de compost se humedece con agua destilada y se pre- agita. Se colocan algunas gotas en una placa de vidrio y
un primer tubo con 2 mL sol. fisiolgica (NaCl del sustrato como blanco. siona sobre un papel de filtro. El papel de filtro con la so- se examina la coloracin y la cantidad de precipitado
0,85%), dilucin 1/50; llevar 1 mL a un segundo tubo lucin del compost se divide en dos partes para analizar formado.
con 1 mL de sol. fisiolgica y as sucesivamente Inmunofluorescencia: se emplean mucho en estudios amonio y nitratos:
(cada uno de los tubos diluye a la mitad) tirar el l- ecolgicos: se combina el anticuerpo con una sustan- Coloracin amarilla y poco precipitado, significa com-
timo mililitro cia que fluoresce en UV, como isocianato de fluores- a. Test para amonio: en una de las mitades del disco de post maduro.
cena o naranja de acridina que al reaccionar con el papel de filtro se colocan gotas de reactivo de Nessler:
agregar a cada tubo 1 mL de suspensin concentrada antgeno especfico produce una fluorescencia que se si el reactivo toma color pardo, indica presencia de amo- Coloracin azul intenso y fuerte precipitado, com-
de antgeno (109/mL), agitar suavemente. Tubos con- visualiza en el microscopio equipado con luz fluores- nio, lo que significa que el compost no est maduro, si post pobre y no maduro.
trol: solucin fisiolgica (ClNa 0.09%) y antgeno (sin cente no cambia de color, no hay amonio, y se procede al test
suero) no debe presentar aglutinacin siguiente: La secuencia de coloracin para el proceso de compos-
taje es la siguiente: azul oscuro, azul claro, ceniza, verde
lectura: rpida: poner los soportes en bao Mara a Empleo de cepas marcadas por resistencia a b. Test para nitrito y nitrato: en la otra mitad del disco y amarillo. La coloracin roja se encontrar en composts
52C y leer en 1-2 horas las reacciones flagelares y en antibiticos de papel, agregar gotas de naftilamina (0,1g en 250 parcialmente degradados.
4 h las somticas. Lenta: a 37C los tiempos se extien- mL de cido actico al 20%) y gotas de cido sulfanlico
den 4 horas y toda la noche, respectivamente. Leer en Desarrollo de resistencia a antibiticos (1,5 g en 250 ml de cido actico al 20%) (reactivo de Tcnicas cuantitativas de evaluacin de la bio-
iluminacin indirecta contra fondo oscuro. Reaccin fla- (Lassagno y Frioni, 1988) Gries): si aparece color rojo es porque hay nitrito, si no madurez
gelar: agregados grandes, floculentos, que decantan en conocer la resistencia natural de las cepas a emplearse se colorea, se agrega una pequea cantidad de polvo Evaluacin de sustancias tipo humus- Indices de
forma lenta y que, si van acompaados de reaccin en la inoculacin de leguminosas reductor (Zn en polvo); si hay nitratos, sern reducidos humificacin
somtica, dejan una marcada turbidez en el lquido so- a nitritos que dan color rojo, en un corto intervalo. Son numerosas las correlaciones entre parmetros fsi-
brenadante seleccionar mutantes en cajas con medio EMA con y sin cos y qumicos con los biolgicos. Entre los primeros, el
antibitico (dosis creciente), por ejemplo con estrepto- Un compost bien maduro presenta nitratos en abundan- nivel y la calidad de la materia orgnica de los compost
Reaccin somtica: comienza con la aparicin de granu- micina y espectinomicina cia y apenas trazas de amonio; un compost semimaduro han recibido mucha atencin y son empleados numero-
laciones finas y pueden dar lugar a depsito compacto de tiene amonio y no hay nitratos. sos ndices que relacionan el grado de madurez de la frac-
sobrenadante transparente. transferir colonias de cepas resistentes a medio EMA cin orgnica.
lquido y a agar inclinado Si la muestra presenta amonio y nitratos, es porque se
Aglutinacin con ndulos triturados: resulta til cuan- trata de una mezcla de abonos con distinto tiempo de Se extrae la materia orgnica y se determinan distintos
do se desea identificar a las cepas que dieron origen a un sembrar cepas en caldo con resistencias a estreptomi- preparacin, o que se han agregado fertilizantes minera- ndices que reflejan el grado de madurez de los compost
gran nmero de ndulos. Se trabaja con el contenido no- cina a cajas con espectinomicina (y viceversa) les. Con trazas de nitrato o amonio, el compost se en- (Kalbitz y Geyer, 2001). La tcnica de Mondini et al. (2003)
dular, sin efectuar el aislamiento. Los ndulos lavados se cuentra en fase intermedia de fermentacin, en la cual determina dos ndices evaluando el C-orgnico de distin-
maceran uno por uno en 1-2 mL de sol. fisiolgica; se transferir mutantes dobles a EMA slido, confirmar re- casi todo en nitrgeno est en forma de protena (nitrge- tas fracciones.
calienta a 100C unos minutos y se pipetea unas gotas sistencia a ambos antibiticos sembrando en cajas con no orgnico).
dentro de pequeos tubos o en bandejas de plstico con los dos antibiticos No corresponde hablar de sustancias hmicas en los com-
cavidades individuales (tipo para ELISA). Se agregan unas 7. Test para almidn post por el perodo de tiempo requerido para su sntesis,
gotas de los antisueros de las cepas que se desean iden- confirmar la eficiencia simbitica de las mutantes Tres tipos de carbohidratos son encontrados en el com- de cientos a miles de aos en los suelos, pero los autores
tificar, se cubre con un vidrio la bandeja para evitar eva- post: azcares, almidn y celulosa. Los azcares son analizan el grado de madurez de la materia orgnica de
poracin y se observa la aglutinacin a la media hora. las cepas seleccionadas se siembran (0,1 mL) en cajas: los primeros componentes en ser metabolizados, gene- los compost y para ello, como en los estudios del humus,
sin antibiticos; con estreptomicina y con espectinomi- ralmente en una semana; el almidn en la cuarta a quin- extraen la materia orgnica estabilizada tipo humus con
Test de precipitacin: ha llegado a ser muy especfico cina para conocer la respuesta a concentraciones de ta semana ya est en la fase mxima de descomposi- solucin alcalina y evalan la absorbancia a distintas lon-
gracias a la tcnica de inmunodifusin en gel: se efec- antibiticos cin y el compost est bioestabilizado, con olor ms to- gitudes de onda.
Se extraen las races colonizadas, se las secciona en libre de barro negro, con olor a moho, el compost dividir cada caja en 4 secciones con una fibra, colocar Recuento de Rhizobios
segmentos de 1 cm: el inoculante est constituido por est pronto para ser usado discos con distinta concentracin del antibitico en el
fragmentos de races colonizadas y esporas homoge- centro de cada seccin (4 discos/placa); incubar 26- 1. Recuento total en cmara: en cmara cuenta-gl-
neizadas con la mezcla suelo-arena. Se mantienen a 3. Test de temperatura 28C y observar halos de sensibilidad; se esperan ms bulos se aplica a cultivos en fase exponenecial de cre-
un 50 % de la capacidad de campo y a bajas tempera- Con un termmetro se puede acompaar el proceso de de 30 colonias resistentes con una velocidad de mu- cimiento, contenidos nodulares, caldos, en el laborato-
turas hasta su empleo en inoculaciones experimenta- compostaje, midiendo la temperatura entre 40 y 60 cm de tacin de 1.105 (en muchas cepas esta velocidad llega rio o en la fbrica de inoculante, antes de impregnar la
les en vivero. Aun no se logr propagar esta tcnica a profundidad. a 1.107 turba, donde se postula que todas las clulas estn via-
nivel de campo. bles. Puede evaluarse tambin la turbidez (densidad
4. Test de coloides seleccionar por resistencia a ambos antibiticos ptica a 600 nm) frente a escala patrn confeccionada
En el compostaje la materia orgnica se va fraccionando, por recuento de viables en caja.
Control de maduracin en los compost pasando de materiales groseros al estado coloidal, con Identificacin de las cepas en los ndulos
2. Recuento de viables en medio slido: procedimiento
(DellAbate et al., 1998; Mathur et al., 1993; Mondini et partculas que no sedimentan cuando se hace una sus- preparar cajas de medio EMA (por triplicado) con:
habitual a partir de diluciones seriadas de la muestra,
al., 2003; Mustin, 1987) pensin del material con solucin de sulfato de amonio. estreptomicina 40 g/mL; espectinomicina, 250 g/
por siembra en superficie(0,2mL) o en inclusin (1 mL)
Otra prueba muy sencilla: se toma una muestra del com- mL y sin antibitico. Los antibiticos se agregan de
en medio EMA. Lectura en cajas con entre 30 y 300
Tcnicas clsicas post en la palma de la mano y se agrega agua suficiente solucin madre: estreptomicina = 4 mg/mL y es-
colonias. Se emplea con cultivos puros, con inoculan-
1. Alteracin de las caractersticas para formar una pasta, que debe ser trabajada con la punta pectinomicina 250 mg/mL, esterilizadas por filtra-
tes a base de turba estril y tambin con turba no es-
Reduccin del volumen: la masa final de la pila debe de los dedos, amasndola. Separando las manos se pue- cin con milipore de 0,20 micras y mantenidas en
tril, ya que los contaminantes pueden ser del orden
ser por lo menos 1/3 de la del material original. de observar: heladera
de 106/g y el rhizobio debe superar 108/g. En las lti-
mas diluciones predominan las colonias tpicas de esta
Coloracin o aspecto: el color inicial es ceniciento y Compost crudo: las palmas de las manos estarn prc- dividir las cajas en unos 20 cuadrados, numerarlos y
bacteria y pueden contarse.
sin brillo; con el correr del proceso la masa se va tornan- ticamente limpias porque el material se desprendi en seguir el modelo
do ms oscura y brillante cuando hmeda (como el hu- partculas sueltas. 3. Recuento de viables en plantas: emplea la capaci-
mus). Debido a la acentuada descomposicin, la mayor cada ndulo se separa, se desinfecta y se siembra en dad de cada cepa de rhizobio para nodular con una le-
parte de la materia prima original no se reconoce, que- Compost semimaduro: pequea parte de la mues- un cuadrado guminosa y presume que una sola clula agregada a la
dando una masa moldeable cuando se humedece. tra permanecer en las manos, colorendolas de planta test puede originar una poblacin que nodule a
marrn. Otro mtodo: separar la raz con ndulos, colocarla las leguminosa especfica.
El olor caracterstico de ciertas materias primas se va sobre un papel de filtro en caja de Petri estril, darle un
perdiendo con el compostaje que pasa a tener olor a Compost maduro: las palmas de las manos se mos- nmero a cada posicin nodular, sacar los ndulos con sembrar semillas germinadas estrilmente en tubos con
tierra mojada, tolerable a agradable. trarn como se estuviesen recubiertas por una grasa un bistur, siguiendo un orden, y sembrar. Se puede as agar-Jensen para las leguminosas de grano pequeo
negra. Lavndolas, el agua tomar una coloracin ne- describir que ndulos fueron los formados por la cepa
La humedad se reduce, los que se aprecia al apretar el a los 7 das inocular 2 tubos con 0,2 mL de cada una de
gra, como el humus, cosa que no ocurrir con el com- introducida marcada, la localizacin y distribucin de
material con la mano: pasa de una consistencia mojada post semimaduro. ellos en el sistema radical las suspensin-dilucin de: suelo, inoculante, etctera
a hmeda en el inicio a casi seca cuando madura.
5. Test del pH incubar a 28C y efectuar observaciones diarias, al- evaluar la nodulacin; las plntulas que no recibieron
2. Test de maduracin Midiendo el pH durante el compostaje, se puede saber gn contaminante puede ser resistente a los niveles rhizobio se marchitan y mueren
Se introduce una vara de madera en la pila de compost como se desarrolla la descomposicin, principalmente si de antibiticos empleados (cuidar el paso de la desin-
durante todo el proceso. Al removerla se verifica: los datos se asocian a otros tests. feccin) tomar en cuenta el nmero de tubos positivos (con n-
dulos) en 4 diluciones con tubos positivos y negativos
fra y mojada: no hay degradacin, probablemente por leer por crecimiento en las 3 cajas
Si el material es cido, con pH inferior a 6,0 el compost
exceso de agua en la masa puede ser considerado crudo, en fase inicial de degra- leer la tabla de Fisher y Yates en NMP en la alcuota
dacin. Informar: ndulos con cepas resistentes a cada anti- (0,2 mL) de la primera dilucin de la izquierda; expersar
levemente tibia y seca, con filamentos de micelio de bitico y a ambos los resultados por g de suelo o de turba.
hongos: la pila necesita ms agua
Si es neutro a levemente alcalino (6,0-7,6) el compost
caliente, hmeda y manchada de pardo oscuro: las se encuentra en la fase de bioestabilizacin, o sea, se-
condiciones de compostaje son correctas mimaduro.
Determinacin del nmero ms probablemente (NMP) diluciones de suelo y/o inoculante, a razn de 5 bolsas/ hervir las races en solucin de azul de tripn (0,05% en lupa y se agrupan por morfologa con ayuda de varilla
por el mtodo de dilucin en planta dilucin. Las bolsas llevan solucin mineral para pln- vinagre 5%) durante 3 minutos de vidro hmeda y las claves disponibles. Se conser-
tulas van hasta su empleo en frascos con agua estril en el
N unidades positivas en: NMP en la alcuota en: enjuar varias veces en agua correinte refrigerador (figura 8).
4 diluciones en ensayos de la menor dilucin las bolsas se colocan paradas entre soportes metlicos.
Duplicado Cuadruplicado Se intercalan controles (sin inocular) para observar po- observar estructuras fngicas (vesculas, arbsculos,
8 16 sibles contaminaciones esporas, hifas)
15 >700
7 14 690 se observa nodulacin, se consideran negativas si no si las races se cortaron en fragmentos de 1cm se pue-
13 340 los presentan en 2 semanas para alfalfa y 3 para soja de calcular la longitud de raz colonizada por alguna es-
6 12 180 tructura de los hongos endomicorrcicos y/o calcular el
11 100 NMP con la tabla de Cochran que reproducimos en % de segmentos colonizados
5 10 59 parte
9 31 Extraccin y cuantificacin de propgulos de
4 8 17 hongos arbusculares
7 10 NMP para usar con diluciones decimales y 5 tu- Tamizado hmedo y decantacin
3 6 5.8 bos por dilucin Una muestra de 50 g de suelo rizosfrico se suspende

5 3.1 en unos 2 litros de agua, se agita y se deja reposar

2 4 1.7 durante unos segundos para que sedimenten las part-
3 1.0 MNP para los valores de p3 culas de suelo
1 2 0.58
0 1 <0.5 p1 p2 0 1 2 3 4 5 Se decanta a travs de una cadena de tamices de 500,
0 250, 125 y 53 m, las partculas de suelo quedan rete-
5 0 0.23 0.31 0.43 0.58 0.76 0.95
5 1 0.33 0.46 0.64 0.84 1.1 1.3 nidas en los primeros tamices
NMP/g turba o suelo = (m x d) / (v x g)
5 2 0.49 0.70 0.95 1.2 1.5 1.8
m= NMP de la tabla Se recoge el sedimento retenido en cada uno de los
5 3 0.79 1.1 1.4 1.8 2.1 2.5
v= volumen de la alcuota
5 4 1.3 1.7 2.2 2.8 3.5 4.3 tamices
d= menor dilucin de la serie
5 5 2.4 3.5 5.4 9.2 16 - Figura 8- Seleccin y propagacin de esporas de hongos
g = peso seco de la turba en la dilucin inicial
Lmite de confianza aprox. al 5%: duplicado = 6 cuadruplicado = 3.5 Se puede aadir un agente antiespumante (Tween 80 endomicorrcicos en plantas trampa
Efectuar varias repeticiones de cada recuento 0,1-0,5%) para evitar la formacin de espuma, en sue-
Clculos los arcillosos se puede emplear pirofosfato de sodio 0,1
p1 es el N bolsas positivas en la dilucin menos concen- M para precipitar las partculas. Inoculantes
Para leguminosas de semilla grande deben emplear- trada en donde todas las unidades son positivas, o donde Una de las mayores dificultades en la aplicacin prctica
se los dispositivos de Leonard o modificaciones que se encuentra el mayor N de tubos o bolsas positivos, p2 En el tamiz de 500 micras quedan los trozos de raz, en el de inoculantes con estos cultivos es la imposibilidad del
permiten el desarrollo de las plntulas, que ocupan y p3 son los N de unidades positivas en las 2 siguientes de 250 los esporocarpos y esporas grandes, en el de 125 hongo para propagarse en medio de cultivo. Luego de tra-
mucho espacio y son trabajosas de preparar, esterili- diluciones. Leer en la tabla el valor correspondiente a p3: m la mayora de las esporas y en el de 53 m las espo- bajoso aislamiento de esporas a partir del suelo por tcni-
zar, etctera NMP en la alcuota de la segunda dilucin. ras pequeas. cas de tamizado hmedo y flotacin, se caracterizan las
mismas segn claves apropiadas (morfologa, color, tipos
NMP de rhizobios usando bolsas de plstico para el Ejemplo: Se recoge el sedimento retenido en el tamiz ms peque- de paredes). Cada tipo de espora se propaga en las llama-
desarrollo de la leguminosa: bolsas de plstico con un 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 o y se coloca en tubos de centrfuga (unos 25 mL de das plantas trampas, especies como sorgo, cebolla.
papel de filtro en su interior permite el desarrollo de la positivos: 5 5 3 1 0 sedimento con 55 ml de agua), se centrifuga 3 minutos a
raz y la impregnacin con solucin mineral. Las semi- 895g, se tira el sobrenadante y se aade una solucin Tcnica: el inculo se coloca 2-3 cm ms abajo donde se
llas pregerminadas se colocan en repliegue superior del p1= 5; p2 = 3 y p3 = 1 de sacarosa a 480g/l y se centriguga 15 segundos a 895g colocarn las semillas en macetas con mezcla de suelo y
papel de filtro (2 semillas para soja y unas 15 para alfal- arena (1:2 v/v) con pH ligeramente cido. A los 3-4 meses
fa) y se inocularon con alcuota de las suspensiones- NMP = 1,1 en inculo de 10-6 N de rhizobios/g = 1,1 x 106 Se pasa el sobrenadante por el tamiz de 53m, lavando en invernculo se observa la colonizacin endomicorrtica
con agua para eliminar la sacarosa. Se observan a la y el aumento del nmero de esporas en el suelo (figura 8)
Materiales Nota: Algunos pases emplean un mtodo sencillo de eva-

segmentos de races finas de 1 cm luar la calidad de inoculantes en turba no estril: se inocu- Sol. Oligoelementos (g/L) vitaminas del BAP mg/L
KOH al 10 % lan unas 50 semillas con una alcuota de inoculante cal- H3BO3 2.86 HCl-tiamina 10
H2O2(10 vol) culada segn las indicaciones de la bolsa; se siembran MnCl2 1.81 ac. nicotnico 50
azul de tripn 0,05 % en lactofenol stas en jarras de Leonard (unas 3-4 por cada inoculante) ZnSO4 0.22 HCl-piridoxina 50
colocando testigos sin inocular. A las 2-3 semanas se ob- CuSO4 0.08 biotina 22.5
lactofenol Na2MoO4 H2O 0.025 c. flico 10
serva nodulacin: por lo menos 2 ndulos/planta. Si no se
forman estos ndulos, su calidad es inferior, o no posee el pantotenato Ca 10
Tcnica riboflavina 10
inculo especfico.
Transferir segmentos de raz a frasco con tapa rosca de
unos 15 mL, cubrir con sol. KOH al 10 %, tapar y calen- agar: 12-15 g/L.sol.final C activo: 0.15 g/L
tar a 90C 1-2 h o a temperatura ambiente por 1 da (en
Simbiosis Frankia-no leguminosa
races muy oscuras puede tratarse en autoclave 13-20
(Frioni et al., 1991, 1994; Stowers et al., 1987) Soluciones madre
Figura 6- Inoculante con hongo ectomicorrcicos con granos
minutos)
Medios de cultivo empleados 1) KH2PO4 100 g/L
Eliminar la KOH y sumergir las races en H O 10 vol. 15
2 2
minutos 2) MgSO47H20 10 g/L
Endomicorrizas QMOD
Observacin (figura 7) g/L sol.final mLsol.madre N sol.madre 3) CaCl2 2H2O 1 g/L
Lavar con agua corriente y comprobar con HCl 0,1 N si
la decoloracin es correcta Extracto de levadura 0.5 4) KCl 20 g/L
Bacto peptona 5 5) NH4Cl 53,5 g/L
Transferir la masa de segmentos de raz con ayuda de Glucosa 10 6) propionato de Na 96,1 g/L
esptula a frasco, agregar un volumen de azul de tripn MgSO4 2H2O 0.2 20 2
al 0,05 % en lactofenol igual al volumen de raz durante 7) lecitina 0,5 g/100 mL: disolver 500 mg lecitina de
KCl 0.2 10 4
5 minutos soja en 50 ml alcohol absoluto, agregar 50 mL agua
Lecitina 5 mg 1 7 destilada
Eliminar el colorante y adicionar lactofenol, donde pue- FeNa Edta 0.02 M 1 9
8) CoCl2 0,1 g/100 mL
den dejarse las races por mucho tiempo Sol. Oligoelementos =
a la de BAP 1 10 9) FeNa EDTA 0,734/100 mL
Montar entre porta y cubreobjeto un trozo de raz colo- tampn K2HPO4 0.3 g 10 17 10) sol.oligoelementos (son los del BAP)
reada, aplastarlo ligeramente para separar los tejidos NaH2PO4 0.26 g
11) vitaminas base: en 100 ml: tiamina 1 mg (pesar 10 g +
observar a la lupa o al microscopio (10x, 40x) la presen-
10 mL agua y tomar 1 mL), c. nicotnico 5 mg y
cia de arbsculos, vesculas, esporas y sus relaciones piridoxina 5 mg
BAP
con las clulas conc.final g/L ml sol.madre N sol. 12) vitaminas del BAP a 100 mL de la sol. (11) agregar:
1 ml sol. biotina (4,5 mg en 2 mL agua)
Esta tcnica clsica descripta por Philips y Hayman en 1970 MgSO4 2H2O 0.2 mM 0.05 5 2 1 ml sol. c. flico (5 mg en 2 mL agua)
ha sido simplificada obtenindose buenos resultados: CaCl2 2H2O 0.07 mM 0.01 10 3 1 ml sol. pantotenato de Ca (5 mg en 5 mL agua)
NH4Cl 5.0 mM 0.267 5 5 1 ml sol. riboflavina (5 mg en 5 mL agua)
lavar las races con agua corriente para eliminar restos Propionato de Na 5 mM 0.48 5 6 Filtrar por filtro bacteriolgico y guardar en helade-
de suelo FeNa EDTA 0.02 mM 0.1 1 9 ra por poco tiempo
Sol. Oligoelementos 1 10 13) K2HPO4 1M 136,09 g/L
hervir las races en solucin de KOH al 10% durante 3
vit BAP 1 12 14) K2HPO4 1M 174,18 g/L
minutos, en Bao Mara
tampn
Figura 7- Observacin de endomicorrizas arbusculares con KH2PO4/K2HPO4 10 mM 10 15 15) sol. tampn BAP: KH2P04- K2HPO4 pH 6,7: mezclar
lupa y microscopio (luego de tratamiento de las races) enjuar varias veces con agua corriente aprox. 560 m sol. (13) y 320 mL sol. (14) Luego
ajustar a pH 6,7 con ambas soluciones, con ayuda lavandina al 20%), Cl2Hg,1% acidificado, como para Inoculacin de plantines en viveros
de pH-metro. ndulos de leguminosas Suelo y mantillo de montes establecidos
16) Tampn QMOD K2HPO4 30 g y NaH2PO4 20 g en 1 litro Esterilizacin
lavar varias veces con agua destilada estril Carpforos picados o licuados, seleccionados en en
pinza
17) Tampn QMOD puede hacerse con sols. (14) y (16), vecindad de rboles: se seleccionana los hongos que
llegando a pH 6,7 con ayuda de ambas. cada lbulo se fragmenta aspticamente con ayuda de dominan en el predio forestal bien establecido luego de
bistur en fragmentos de aprox. 50-200 micras, que se 70% etanol picados o licuados se aplican a los plantines. Las espo-
lavan sobre tamiz de gasa con agua estril (eliminar Trozos en ras pierden viabilidad rpidamente, por lo que deben
Aislamiento taninos y polifenoles txicos) tubos ser empleadas a la brevedad (figura 5).
Tomar hifas A partir de micelio de hongos seleccionados, cultivados
Directamente de ndulos siembra depositando los trocitos en superficie de medio internas
Resulta bastante difcil por la presencia de numerosos slido en medio BAP con o sin C activo o medio ms en el laboratorio e includos en soportes slidos: turba-
contaminantes que se desarrollan en los medios de culti- rico QMOD vermiculita, frascos con granos de cebada, centeno, maz,
vo empleados. Conviene partir de ndulos frescos. Nu- con medio para hongos (figura 6). El micelio se desarro-
Coleccin lla bien rodeando a los granos que liberan sustancias pro-
merosos desinfectantes superficiales, se han empleado: puede agregarse una segunda capa en sobrefusin so-
hipoclorito de Na o de Ca, Cl2Hg, H2O2 OsO4, glutaraldehi- bre los trozos que facilita la observacin posterior al mi- motoras del crecimiento de los hongos. Se inoculan es-
Incubar
do. Procedimientos empleados hasta el presente en el croscopio. tos granos en las macetas o tubetes junto a la semilla de
aislamiento de Frankia: Purificacin pino, eucalipto, etc. otros soportes empleados son: tur-
cerrar las cajas con Parafilm, incubar por 4 semanas a ba, vermiculita/turba, inoculante en alginato de calcio.
centrifugacin de ndulos macerados en gradiente de 29C
sacarosa, incubacin selectiva de trozos de ndulos des-
infectados en medios ricos, como el QMOD por 6 sema- observar ausencia de contaminantes y colonias tpi- Confirmar pureza
nas; los tubos o cajas con turbidez se descartan por los cas de Frankia pequeas, de unos 0,5 mm de dime-
contaminantes tro al mes, se aprecian a la lupa: hifas finas creciendo
radialmente, algunas cepas forman esporangios y ve-
Figura 4- Aislamiento de hongos ectomicorrcicos
filtracin de macerados de ndulos por 52 y 20 micras, sculas (stas sobre todo en medio sin N), y otras pig-
los restos nodulares quedan arriba y vesculas u otras mentos rojos. Inicialmente difusas, luego ms densas.
estructuras en el de 20 micras; dilucin seriada y siembra El C activo facilita el pasaje del estado endoftico al Existen numerosos medios, citaremos el de Melin-Nor-
en medios apropiados (pero se requiere alta relacin de saproftico krans, modificado
inculo para iniciar el desarrollo de Frankia)
Nota: conviene trabajar con ndulos frescos, de otra ma- CaCl2

Microlobiologa Bsica Ambiental y Agricola Lilian Friomi 2006

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Microbiologa

Bsica, ambiental y agrcola

Bsica, ambiental y agrcola

Lillian Frioni / Facultad de Agronoma

Estructuras permanentes En la figura 2 se observan estas diferencias en la pared

Cuadro 2- Superficies celulares en clulas Gram positivas y Gram negativas

Archeae: no presentan peptidoglicano tpico, su tincin es Gram positiva o negativa

Cuadro 3- Breve historia de la Microbiologa

Figura 6- Observaciones de microorganismos al microcopio ptico. Izquierda: algas al

Otros mtodos de estudio de los microorganismos Preguntas de repaso

En general los microorganismos son fijados (frotis) y tei-

Fijacin: se realiza en general secando suavemente el Tabla de contenidos

Los microorganismos y la proteccin ambiental Entamebas Hongos

Figura 4- Bacteria, Archae y Eukarya

Captulo Pgina Captulo Pgina

Pgina donde dice debe decir

27 Texto: La figura 12 presenta la La figura 12 presenta la

150 Cuadro 10 Hongos celulolticos Hongos celulolticos son:

422 Tcnica coloracin de Gram: se Decolorar con alcohol-cetona

No se diferencian en tejidos ni rganos, ni presentan espe-

Luego de la evidencia de la existencia de los dos tipos de

Protistas inferiores, con clula procariota, que incluye a

Protistas superiores, con estructura eucariota, que com-

Cuadro 1- Aspectos que estudia la Microbiologa Cuadro 2- Impacto de los microorganismos

Figura 1- Bacterias, hongos, algas y protozoos

Figura 1- Bacterias, hongos, algas y protozoos

Cuadro 1- Aspectos que estudia la Microbiologa Cuadro 2- Impacto de los microorganismos

No se diferencian en tejidos ni rganos, ni presentan espe-

Luego de la evidencia de la existencia de los dos tipos de

Protistas inferiores, con clula procariota, que incluye a

Protistas superiores, con estructura eucariota, que com-

Los microorganismos y la proteccin ambiental Entamebas Hongos

Figura 4- Bacteria, Archae y Eukarya

En general los microorganismos son fijados (frotis) y tei-

Fijacin: se realiza en general secando suavemente el Tabla de contenidos

Figura 6- Observaciones de microorganismos al microcopio ptico. Izquierda: algas al

Otros mtodos de estudio de los microorganismos Preguntas de repaso

Cuadro 3- Breve historia de la Microbiologa

Estructuras y funciones de las

Cuadro 1- Estructuras en clulas procariotas

Flagelos Protenas, movimiento, con carcter taxonmico

Estructuras permanentes En la figura 2 se observan estas diferencias en la pared

Cuadro 2- Superficies celulares en clulas Gram positivas y Gram negativas

Archeae: no presentan peptidoglicano tpico, su tincin es Gram positiva o negativa

Cuadro 2- Macronutrientes en la naturaleza y en los medios de cultivo

Plsmidos: pueden presentarse una o ms molculas

Como material gentico adicional pueden encontrarse en

Aparato de Golgi si no donde se acumulan el calcio y el cido dipicolnico y el nas

En algunas bacterias el ADN se integra al genoma y se

rizan por: lticos o lisognicos.

Figura 12- Ultraestructura de una endospora bacteriana y

Figura 12- Ultraestructura de una endospora bacteriana y

Aparato de Golgi si no donde se acumulan el calcio y el cido dipicolnico y el nas

En algunas bacterias el ADN se integra al genoma y se

rizan por: lticos o lisognicos.

Plsmidos: pueden presentarse una o ms molculas

Como material gentico adicional pueden encontrarse en

Cuadro 2- Macronutrientes en la naturaleza y en los medios de cultivo

como la celulosa, lignina.

Compuestos orgnicos Flujo de C anaerobiosis, respiracin anaerobia

Flujo de e- CH3NH2 KNO3 Hyphomicrobium

Respiraciones aerobias glucosa,

Reacciones de biosntesis matizar:

ii) poder reductor NAD NAD