UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE DE GROHMANN DESARROLLO EMBRIONARIO DEL ERIZO DE MAR

FACULTAD DE CIENCIAS

Escuela Acadmico Profesional

De
Biologia-Microbiologia

ASIGNATURA
BIOLOGIA DEL DESARROLLO

DESARROLLO EMBRIONARIO DE
Tetrapygus Nger ERIZO NEGRO EN
CONDICIONES DE LABORATORIO DE LA
FACULTAD DE CIENCIAS

Carlos Miguel Mamani Choquegonza

2014-118010
Axel ngel lvarez Venegas
2014-118007

TACNA PERU
2016

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PRESENTACION

El presente trabajo tiene como finalidad presentar el proceso

embrionario del erizo negro de mar, desde la obtencin de
gametos tanto masculinos como femeninos para su posterior
fecundacin para poder evidenciar las divisiones sucesivas en
intervalos de tiempos, que darn lugar al nuevo organismo.

Es importante destacar que por ser un proceso de fecundacin

externa, las especies presentan algunos mecanismos para
reconocer los gametos de la misma especie, en este caso los
ovocitos, poseen una capa de gelatina que reconoce e interacta
slo con los espermatozoides de Tetrapygus niger.

En base a esto se realiz el proceso de fecundacin de esta

especie marina, aplicando tcnicas de fecundacin in vitro para
poder identificar tanto los gametos como los diferentes estados
del desarrollo embrionario en esta especie, para lo cual se
necesit aplicar 2 ml de una solucin de 0.5 molar de KCl para
inducir la expulsin de gametos, los cuales se diferencian por el
color si es blanquecino (espermatozoides) y si es rojo (vulos).

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NDICE
PRESENTACION ............................................................................................... 2
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ................................................................ 4
OBJETIVO GENERAL ....................................................................................... 4
OBJETIVO ESPECIFICOS................................................................................. 4
JUSTIFICACIN E IMPORTANCIA ................................................................... 4
MARCO TEORICO............................................................................................. 5
1. ERIZO NEGRO. .................................................................................... 5
1.1. Habitad: .......................................................................................... 5
1.2. Distribucin geogrfica: .................................................................. 5
1.3. Caractersticas: ............................................................................... 5
1.4. Comportamiento: ............................................................................ 6
1.5. Alimentacin: .................................................................................. 6
1.6. Reproduccin.................................................................................. 6
2. FECUNDACIN EN EQUINODERMOS. .............................................. 6
2.1. Desarrollo temprano del erizo de mar: ............................................ 6
MARCO METODOLOGICO ............................................................................... 8
MATERIALES Y REACTIVOS: ....................................................................... 8
MATERIAL BIOLOGICO: ............................................................................ 8
PREVIO A LA REALIZACION DEL TRABAJO: .............................................. 8
PROCEDIMIENTO: ........................................................................................ 9
LIBERACION DE LOS GAMETOS: ............................................................ 9
LA FECUNDACION:.................................................................................. 12
LAS MUESTRAS: ..................................................................................... 15
RESULTADOS ................................................................................................. 16
CONCLUSIONES............................................................................................. 22
DISCUSION ..................................................................................................... 22
Bibliografa ....................................................................................................... 22

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PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Cmo se da el proceso embrionario y larvario de Tetrapygus Nger,

erizo negro en condiciones de laboratorio inducidos con KCl 0.5 molar?

OBJETIVO GENERAL
Observar el desarrollo embrionario del erizo negro.

OBJETIVO ESPECIFICOS

Conocer tcnicas bsicas de estudio en ecologa reproductiva y larvaria

de invertebrados marinos.
Aprender tcnicas de induccin de la puesta en invertebrados marinos.
Aprender a realizar fecundaciones in vitro de invertebrados marinos.

JUSTIFICACIN E IMPORTANCIA
Este trabajo nos introduce a conceptos tericos sobre el desarrollo
embrionario de los erizos de mar, y as poder comprender el proceso de
fecundacin como la serie de divisiones que darn origen al nuevo ser. Lo
cual es de gran inters para alumnos de ciencias bilgicas y as poder
generas ms inters y posteriores investigaciones del tema.

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MARCO TEORICO

1. ERIZO NEGRO.
El erizo de mar Tetrapygus niger pertenece a la clase equinoidea del filo
equinodermos. Son del tipo dioicos es decir los sexos femenino y
masculino se presentan en individuos separados, sin embargo a simple
vista es difcil distinguir uno del otro ya que no presentan dimorfismo
sexual externo. Presentan un nmero de cinco gnadas que se ubican a
lo largo de las zonas interambulacral sobre la cara interna del caparazn.
En la regin aboral de su caparazn se encuentran las placas genitales y
en ellas un gonoporo a travs del cual se expulsan los gametos; los vulos
y los espermatozoides son depositados en el mar por contraccin de las
capas musculares de las gnadas, cada hembra puede liberar un billn
de vulos y los machos varios billones de espermatozoides
producindose despus la fecundacin.

1.1. Habitad:
Habita en fondos rocosos en la zona inter mareal, donde vive dentro de
grietas y cubiertos de algas calcreas en profundidades inferiores a los 20
m.

1.2. Distribucin geogrfica:

Se localiza en el Mar Mediterrneo, sobre todo meridional, costa oeste
africana, Islas Canarias, Madeira, Azores y prcticamente la totalidad de
la costa de Brasil y costa atlntica de Espaa y Portugal.

1.3. Caractersticas:

Coloracin: Negra, amarronada, de caparazn notablemente aplanado en

la regin basal y provista de una amplia apertura bucal y peristoma,
desnuda.
Pas: Macizas y puntiagudas y su longitud no suele superar el dimetro
del caparazn, que es rosado.
Pies ambulacrales desprovistos de ventosas.
Tubrculos primarios numerosos, dispuestos en series mltiples en la
zona interambulacral y en series dobles en la zona ambulacral. Tiene tres
pares de poros ambulacrales en cada placa y podios aborales sin
suctores.
Se trata de una especie capaz de soportar una fuerte insolacin, pero es
ms activa por la noche, cuando se dirige a aguas ms superficiales en
busca de las algas incrustantes (coralinceas) que le sirven de alimento,
royndolas con los cinco dientes acuminados que forman la parte ms
exterior de la llamada linterna de Aristteles.
Alcanza un dimetro, incluidas las pas, de 12 cm. El caparazn tiene un
dimetro de 5 a 8 cm.
No suele sobrepasar los 30 m hasta 40 m de profundidad.

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1.4. Comportamiento:
Esta especie de erizo es de hbitos gregarios o sea viven agrupados,
formando colonias muy numerosas. Los ejemplares jvenes se localizan
debajo de piedras, no se puede cubrir de objetos como otros erizos debido
a la carencia de ventosas o suctores en la parte superior.

1.5. Alimentacin:
Su alimentacin consiste principalmente de algas calcreas, sobre todo
de Lithophyllum incrustans en caso necesario, tambin puede alimentarse
de plancton.

1.6. Reproduccin
Especie dioica y se reproduce por fecundacin externa entre Diciembre y
Enero. La reproduccin sexual a partir de la unin de dos gametos
diferentes, vulo y espermatozoide, mediante la liberacin al agua, los
huevos fecundados tienen una etapa de vida planctnica.

2. FECUNDACIN EN EQUINODERMOS.
2.1. Desarrollo temprano del erizo de mar:

En los organismos con reproduccin sexual el vulo es fecundado por el

espermatozoide formndose el cigoto, a partir del cual se originar el
nuevo individuo. La contribucin de los gametos masculino y femenino al
cigoto es muy diferente; el vulo aporta tanto su conjunto haploide de
cromosomas como un rico citoplasma que posee los requerimientos
necesarios para que, al menos, se inicie el desarrollo. El espermatozoide,
sin embargo, principalmente aporta su ncleo y escasos componentes
citoplasmticos (centriolos).
El proceso de fecundacin comprende una serie de sucesos que en la
mayor parte de los organismos puede resumirse en:

Activacin del espermatozoide (capacitacin), que ocurre en

respuesta a las secreciones del oviducto (fecundacin interna) o al
contacto con el medio acuoso (fecundacin externa).
Reaccin acrosmica que permite que el espermatozoide se abra
paso a travs de las distintas cubiertas que posee el vulo hasta la
membrana plasmtica.
Fusin de las membranas plasmticas del espermatozoide y del
vulo. Bloqueo de la polispermia para evitar que un mismo vulo
sea fecundado por ms de un espermatozoide.
Continuacin de la meiosis en caso de que el vulo expulsado del
ovario se encuentre detenido en alguna de las fases del proceso
meitico (en humanos se encuentra en metafase II, mientras que
en equinodermos ya ha finalizado la meiosis).
Fusin de los proncleos, formndose un ncleo diploide de
fecundacin, o bien los cromosomas maternos y paternos se
ordenan directamente sobre la placa ecuatorial en la primera
divisin de segmentacin.
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Activacin metablica del huevo y comienzo del desarrollo.

Los equinodermos se usan habitualmente en estudios de biologa
del desarrollo ya que sus gametos se obtienen en grandes
cantidades, pueden ser inseminados fcilmente in vitro (en medio
acuoso donde la fecundacin ocurre de forma natural) y tambin
son sencillos de mantener en el laboratorio. Adems, la
fecundacin en equinodermos y en mamferos tiene muchos
puntos en comn.
Tras la fecundacin comienza el proceso de segmentacin. En
equinodermos se habla de una segmentacin holoblstica radial,
esto es, todo el embrin se divide y los planos de divisin son
perpendiculares unos a otros. Las dos primeras divisiones del
cigoto y los blastmeros son meridionales, si bien perpendiculares
entre s, lo cual significa que el surco de divisin se forma desde el
polo animal al polo vegetativo del embrin. La tercera divisin, en
cambio, es perpendicular a las dos anteriores, ecuatorial,
determinando un embrin de ocho clulas de idntico tamao. A
partir de este momento, las subsiguientes divisiones originarn
blastmeros de diferente tamao, definindose stos como
macrmeros, mesmeros y micrmeros, cuya disposicin en
relacin a los polos del embrin determinar finalmente el destino
de dichas clulas y la posterior formacin de las tres hojas
embrionarias principales: endodermo, ectodermo y mesodermo,
respectivamente.

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MARCO METODOLOGICO
MATERIALES Y REACTIVOS:

Campo estril
Vasos precipitados
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas Petri
Jeringa de 2 ml
Microscopio y cmara fotogrfica
Viales y frascos
Guantes
1 litro de agua de mar
KCl 0.5 molar
Albumina de Mayer

MATERIAL BIOLOGICO:

2 ejemplares de la especie Tetrapygus niger (macho-hembra)

extrados del litoral de Tacna.

PREVIO A LA REALIZACION DEL TRABAJO:

Se asegur de que los erizos que se colectaron en Vila Vila estn vivos,
para ello nos fijamos que tenga todas sus pas y observar que hace
pequeos movimientos de las mismas. Es difcil saber si el erizo es macho
o hembra, para lo cual se tuvo que asegurar los sexos de los mismos en
la extraccin con la suministracin de KCl 0.5.

Ilustracin 1: Colecta de erizos de mar.

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Ilustracin 2: Determinacin del sexo de los erizos

PROCEDIMIENTO:
Se usaron 2 ejemplares de la especie Tetrapygus niger provenientes del
litoral tacneo (Vila-Vila), los cuales fueron transportados al Laboratorio
Biloga de la facultad de ciencias.

LIBERACION DE LOS GAMETOS:

La liberacin de los gametos se lleva a cabo mediante el mtodo de

estmulo qumico, que consiste en la aplicacin de un compuesto qumico
o reactivo (KCl) 0.5 molar en el individuo (2ml), el cual acta directamente
sobre las gnadas induciendo la salida de los gametos.
Se debe inyectar en la cavidad en la cavidad del cuerpo del erizo y no en
la boca. Luego se sacude suavemente el erizo para mezclar la solucin
de KCl dentro de l.

En esta etapa como no sabemos diferenciar el macho de la hembra al no

presentar dimorfismo sexual. Se debe esperar la salida de los gametos,
depositando cada uno de los animales en una placa de Petri, una vez
comenzada la salida de gametos, de acuerdo a la coloracin se depositan
en un vaso precipitado, lleno de agua de mar con la parte aboral hacia
abajo.

Cabe mencionar que la coloracin de los gametos es roja para las

hembras y blanco para los machos

Ante de proceder a la fecundacin hemos de asegurarnos de que

realmente tenemos gametos, tomamos una muestra tanto de los vasos
donde creemos que tenemos espermatozoides y vulos, luego los
miramos al microscopio.

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Ilustracin 3: Liberacin de gametos femeninos

Ilustracin 4: Liberacin de gametos masculinos

Ilustracin 5: Muestra de espermatozoides

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Ilustracin 6: Erizo con la parte aboral hacia abajo

Ilustracin 7: Observacin de gametos

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LA FECUNDACION:

Es importante destacar que por ser un proceso de fecundacin externa,

las especies presentan algunos mecanismos para reconocer los gametos
de la misma especie, en este caso los ovocitos poseen una capa de
gelatina que reconoce e interacta solo con los espermatozoides de los
erizos negros.

La fecundacin se hizo en un vaso de precipitado donde se coloc 75 ml

de agua de mar, despus se procedi a colocar 10 ml de vulos (cogidos
del fondo del vaso donde sedimentaron), posterior a eso se procedi a
colocar 4 gotas de espermatozoides extrados directamente del erizo,
despus se procedi a homogenizar la suspensin de espermatozoides
y ovulo spa la correcta fecundacin de los mismos.

Justo en el momento de aadir los espermatozoides a los vulos,

anotamos la hora y consideraremos como el tiempo 0.

Posterior al considerar el tiempo 0 se procede a verificar la fecundacin,

y preservar la muestra se coloca una gota de la suspensin en un
portaobjetos (anteriormente con una fina capa de fijador: Albumina de
Mayer) luego cubrir con un cubreobjetos y observar la dominancia corona
de espermatozoides rodeando al vulo.

Ilustracin 8: Mezcla de Agua de mar con el sedimento de vulos

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Ilustracin 9: Mezcla de espermatozoides con vulos

Ilustracin 10: Aplicacin de una fina capa de Albumina de Mayer

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Ilustracin 11: Preparacin de la muestra a observar

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LAS MUESTRAS:

A partir de ese momento, se fue tomando muestras de forma peridica,

anotando el tiempo y observando al microscopio las diferentes fases del
desarrollo embrionario: Mrula, Gstrula, Blstula, y Larva. Se fue
tomando fotografas, anotando los aumentos con los que vemos las
muestras. La toma de muestras se hizo durante 48 horas, para ir viendo
el desarrollo embrionario.
En el momento de tomar las muestras es importante revolver la
suspensin con una varilla de vidrio para homogenizarla, con una jeringa
tomaremos las muestras en el centro del vaso precipitado que se forma al
revolver de manera que nos aseguramos de que cogemos.

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RESULTADOS

Se tienen las observaciones de las etapas de desarrollo embrionario del

erizo de mar.

Hora Estado de desarrollo Tiempo en alcanzar esa fase

3:30 pm Tiempo 0 0 minutos
3:32 pm Fecundacin 2 minutos
3:35 pm Membrana de fecundacin 5 minutos
4:40 pm 2 clulas 1 hora 10 minutos
5:00 pm 4 clulas 1 hora 30 minutos
6:10 pm 16 clulas 2 horas 40 minutos
3:30 pm Gstrula 24 horas
3:30 pm Larva Pluteus 48 horas

Ilustracin 12: Espermatozoides 400x

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Ilustracin 13: vulo sin fecundar 400x

Ilustracin 14: Fecundacin 400x

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Ilustracin 15: Membrana de fecundacin

Ilustracin 16: 2 clulas 400x

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Ilustracin 17: 3 clulas 400x

Ilustracin 18: 4 clulas 400x

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Ilustracin 19: Mrula, Blstula, Gstrula 100x

Ilustracin 20: Aumento 400x. G) Mrula; H) Blstula; i) Gstrula (referencial)

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Ilustracin 21: Larva Pluteus

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CONCLUSIONES
Analizando los datos obtenemos los siguientes resultados:

Al cabo de 2 minutos los vulos se han fecundado, despus de 3 minutos

de ser fecundado crea una membrana de fecundacin la hora y 10 minutos
se encuentran en el estadio de 2 clulas, a la hora y 30 minutos se
encuentran en el estadio de 4 clulas, aproximadamente a las 6 horas
estn pasando de mrula tarda a blstula temprana, a las 12 horas estn
pasando de blstula tarda a gstrula temprana, a las 24 horas se
encuentran en la fase de gstrula y a las 48 horas son larvas Pluteus.

DISCUSION
Los resultados coinciden con ligeras variaciones en algunos tiempos en
algunas divisiones, debido la diferencia de especies, como el caso del
erizo de mar Paracentrotus lividus los cuales sus resultados fueron

- 5 min Membrana de fecundacin

- 1 h 1 Divisin de segmentacin
- 2 h 30 min Embrin de 16 clulas
- 6-12 h Blstula
- 24 h Gstrula
- 48 h Larva Pluteus

Los tiempos mostrados son los que parameramos de acuerdo a la

observacin con muestras diferentes debido a la dificultad de observar las
divisiones al instante, por la aplicacin de la Albumina de Meyer que
funcionaba como pegamento, la cual fijaba automticamente la muestra y
haca imposible el seguimiento de la misma muestra, para la cual se
sacaba otra en su remplazo, esto puede generar un margen de error.

La observacin de algunos estadios fue interrumpido por la falta de

disponibilidad del microscopio y laboratorio necesarios, as como la hora
de observacin.

Bibliografa
Hugo Gonzales, B. H. (2013). FECUNDACIN Y DESARROLLO
EMBRIONARIO DE Tetrapygus niger ERIZO NEGRO DE MAR EN
PRESENCIA DE SULFATO DE ZINC. SCIENTIA revista del centro de
investigacin de la universidad ricardo palma, 240.

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