AO 2015
Notas Tcnicas de Prevencin
Calidad del aire interior. Contaminantes
biolgicos (II). Tipos de muestreo
Indoor air quality. Biological contaminants (II): Sample collection methods
Qualit dair intrieur. Contaminants biologiques (II): Types dchantillonnage
Autor:
Instituto Nacional de Seguridad
e Higiene en el Trabajo (INSHT)
Elaborado por:
Mara de la O Culver Gonzlez
CENTRO NACIONAL DE
NUEVAS TECNOLOGAS (INSHT)
Las NTP son guas de buenas prcticas. Sus indicaciones no son obligatorias salvo que estn recogidas
en una disposicin normativa vigente. A efectos de valorar la pertinencia de las recomendaciones
contenidas en una NTP concreta es conveniente tener en cuenta su fecha de edicin.
1. MUESTREO DEL AIRE POR IMPACTACIN
De los muestreadores que se encuentran disponibles
para el muestreo de bioaerosoles, aquellos que basan
su funcionamiento en el mtodo de impactacin son los
ms empleados para captar contaminantes biolgicos.
El parmetro que representa principalmente la eficacia
de captacin de un impactador es el dimetro de corte
(d50), que se corresponde con el dimetro aerodinmico
de la partcula (da) para el cual la eficacia de captacin
ser del 50%, asumindose que, en el caso de partcu-
las con da superior al d50, la eficacia de captacin ser
del 100%. Esto significa que, a la hora de seleccionar el
impactador adecuado, es necesario considerar su d50, el
cual no debera ser superior al da del contaminante bio-
lgico que se pretende determinar.
Otros parmetros que determinan la eficacia de capta-
cin de un impactador, afectando al d50 son:
El caudal de muestreo, Q: el empleo de caudales ele-
vados requiere tiempos de muestreo muy cortos para
evitar la desecacin de los microorganismos.
La distancia entre la entrada de aire y la superficie de
impactacin, S: debe ser lo suficientemente pequea
para permitir un flujo de aire homogneo y evitar el
rebote de las partculas, siendo el valor recomen-
dado para impactadores con orificios circulares 1
mm, y para impactadores con orificios rectangulares
>1,5 mm.
La cantidad de medio de cultivo utilizada: estudios rea-
lizados en algunos impactadores sugieren que, cuanto
mayor es sta, menor es el valor de S y d50, y mayor
es la eficiencia de captacin, reducindose, adems,
el enmascaramiento de las colonias.
El nmero de orificios: influyen en el rendimiento del
impactador a causa del flujo cruzado originado por
orificios adyacentes, originando cambios, p.ej., en la
mecnica de flujo en la zona de impactacin y en la
localizacin de los puntos de impactacin.
La longitud de los orificios de entrada de aire, W: influ-
ye en el perfil de la velocidad del aire, considerndose
adecuado si es igual o superior al dimetro del orificio.
El nmero de Reynolds, Re: se requiere un valor entre
1.065
Esta NTP es continuacin de la NTP 1.064 y ofrece una des-
cripcin de las tcnicas de muestreo a emplear para la de-
terminacin de contaminantes biolgicos en el marco de la
investigacin de problemas asociados a la calidad del aire
interior, as como de las caractersticas principales de los
equipos de muestreo ms utilizados para tal fin.
500 y 3.000 para que el flujo de aire a travs de los
orificios sea lo ms homogneo posible y la deposicin
uniforme.
En la tabla 1 se muestran algunas caractersticas de
diversos impactadores, segn los diferentes estudios
realizados.
En estos muestreadores de impactacin, los conta-
minantes biolgicos son captados o retenidos en placas
o tiras con medio de cultivo slido o semislido, en un
medio lquido o en portaobjetos de vidrio para su poste-
rior anlisis microscpico. La impactacin en placa para
microorganismos viables y cultivables presenta la ventaja
de que estos pueden ser captados directamente en el
medio de cultivo para su subsiguiente incubacin y con-
teo de las colonias que se han formado sin necesidad de
un procesamiento posterior al muestreo, a diferencia de
lo que ocurre con el impingement o muestreo en medio
lquido. No obstante, el empleo de un medio lquido para
la captacin preserva mejor la viabilidad de los microor-
ganismos, siendo mayor la eficiencia de captacin.
Muestreadores de impactacin en placa de agar
Impactador multiorificio
Se trata de muestreadores de un solo nivel en los que
la entrada de aire est constituida por mltiples orificios
circulares. La mayora puede colocarse en posicin ho-
rizontal o en vertical y operan a un caudal elevado que
permite el anlisis de ambientes con bajo nivel de conta-
minacin, o de aquellos donde se requiera el muestreo
de grandes volmenes de aire durante cortos periodos
de tiempo. Adems, suelen ser porttiles.
Existen diversos tipos de impactadores multiorificio,
describindose a continuacin las caractersticas de al-
gunos de los ms utilizados, as como la eficiencia de
captacin que muestran segn estudios realizados: Bio-
Culture, Microbiological Air Sampler (MAS-100), Micro-
flow, Millipore Air Tester (M Air T), Sterilizable Microbial
Atrium (SMA) o Surface Air System (SAS).
El muestreador BioCulture aspira aire a travs de un
cabezal con 380 orificios con forma de cono expandido,
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Notas Tcnicas de Prevencin

TIPO DE Q N DE W o DA S D50
EJEMPLOS
MUESTREADOR (l/min) ORIFICIOS (mm) (mm) (mm)

1,25 (ext.)
BioCulture 120 380 1,7 7
2,3 (int.)
MAS-100 100 400 0,7 2,8 1,7
M Air T 140 1.000 0,46 5,84 2,3
Impactador 1,1 (ext.)
Microflow 30 - 120 378 1,89 >10 8,8
multiorificio 2,5 (int.)
SAS Super 90 90 219 0,8 n.d. 2-4
SAS Super 180 180 400 0,8 2,16 2
Duo SAS Super 360 360 219 1 n.d. 1
SMA 28,3 141,5 12 6,3 5 >10 4,8
Andersen 1 etapa 28,3 400 0,25 1,5B 0,65
1: 1,5 1: 8,0
Andersen 2 etapas 28,3 200 1,5B
2: 0,4 2: 0,95
Impactador 1: 1,18 1: 7,0
en cascada 2: 0,914 2: 4,7
3: 0,711 3: 3,3
Andersen 6 etapas 28,3 400 1,5B
4: 0,533 4: 2,1
5: 0,343 5: 1,1
6: 0,254 6: 0,65
Impactador Casella MK-II 30-700 1 0,35 2 0,67
en rendija Mattson-Garvin Air Sampler 28 1 0,152 2,5 0,53
Burkard 10 1 2 n.d. 5,2
Allergenco MK-3 15 1 1,1 n.d. 2
Trampa de
Air-O-Cell 10 1 1,1 1 2,3 2,5
esporas
Allergenco-D 10 1 1,1 0,89 1,7
Micro-5 5 1 2,1 <<1 0,8
Borboteador AGI-4, AGI-30 12,5 - - - 0,3
o impinger BioSampler 12,6 - - - 0,3
RCS High Flow 100 n.d. n.d. n.d. 1,2
Cicln Coriolis m/d 100-300 1 n.d. - <1
Muestreador Muestreador ciclnico
centrfugo 2 -4 1 1,99 - 1,5
NIOSH de una etapa
Muestreador ciclnico 2 2,6, 1,6
1 n.d. -
NIOSH de dos etapas 3,5 1,8, 1,0
A: D hace referencia a la anchura del orificio
B: valor mximo recomendado
n.d.: no disponible

Tabla 1. Parmetros fsicos estudiados de diversos impactadores

con un dimetro externo de 1,25 mm y un dimetro interno
de 2,3 mm, operando a un caudal de 120 l/min. Presenta
un d50 elevado, de 7 mm, mostrando una baja eficiencia
de captacin para partculas de da 5,2 mm, siendo sta
<10% para partculas con da 1 mm.
El muestreador MAS-100 consta de un cabezal con
400 orificios de 0,7 mm de dimetro y su caudal de aspi-
racin es de 100 l/min. Su d50 es de 1,7 mm y muestra una
eficiencia de captacin cercana al 90% para partculas
con da de 2,5 3 mm, mientras que, para partculas con
da <1 mm, sta se reduce a 30%.
El muestreador Microflow presenta un cabezal con
380 orificios (para placas de 90 mm) o 219 (para placas
de 60 mm), los cuales tienen forma de cono expandido
con un dimetro externo de 1,1 mm y un dimetro interno
de 2,5 mm. Opera a un caudal de 30 a 120 l/min, ha-
biendo mostrado una eficiencia de captacin mayor con
ste ltimo, ya que se reduce el d50 de 10 a 8,8 mm. No
obstante, sta es muy baja a la hora de captar partculas
de da <3 mm, pudiendo llegar a ser inferior al 10%.
El muestreador M Air T consta de un cabezal con una
rejilla microperforada con 1.000 orificios de 0,46 mm de
dimetro y emplea secuencialmente dos caudales dife-
rentes, uno de 140 l/min para los primeros 500 litros de
aire muestreado y, a continuacin, uno de 180 l/min al
que cambia automticamente, durando el ciclo completo
aproximadamente unos 6 minutos. Su eficiencia de cap-
tacin supera el 60% para partculas con da 3 mm, pero
se ha observado una disminucin considerable cuando
opera a un caudal de 180 l/min, y parece ser debida
a la desecacin del agar durante la primera etapa de
140 l/min. Para partculas con da 1 mm, muestra una
eficiencia de captacin muy pequea, de aproximada-
mente el 5%.
El muestreador SMA tiene un cabezal con 12 orificios
de 6,3 mm de dimetro y opera a un caudal de 28,3
141,5 l/min. Al igual que ocurre con Microflow, la eficiencia
de captacin aumenta con el caudal ms elevado, ya que
muestra una disminucin del d50 de >10 a 4,8 mm. Pre-
senta una eficiencia de captacin en torno al 50% para

Notas Tcnicas de Prevencin
partculas con da de 5 mm, siendo <10% en el caso de
partculas con da 1 mm.
El muestreador SAS presenta uno o dos cabezales
con 219 o 401 orificios de unos 0,8 1 mm de dime-
tro. Existen diversos modelos, como el SAS Super 90,
el SAS Super 180 y el DUO SAS Super 360 que operan,
respectivamente, a unos caudales de 90 l/min, 180 l/min
y 360 l/min. El muestreador DUO SAS Super 360 cons-
ta de dos cabezales, cada uno de los cuales funciona
con un caudal de 180 l/min. Esto permite la realizacin
de duplicados simultneamente, as como el muestreo
de dos tipos distintos de microorganismos. No obstante,
estudios realizados han mostrado una desviacin de los
resultados obtenidos con los dos cabezales, probable-
mente debida a una distribucin desigual del flujo de aire,
no consiguindose el mismo caudal en ambos. La mayor
eficiencia de captacin la muestra el muestreador SAS
Super 180, siendo >80% para partculas con da 3 mm,
aunque es <10% para partculas con da 1 mm.
Lo anteriormente indicado permiti concluir en los es-
tudios realizados que este tipo de muestreadores tienden
a infravalorar la concentracin de partculas de pequeo
tamao, como bacterias individuales, pudiendo resultar
ms adecuados para partculas ms grandes como agre-
gados microbianos o esporas fngicas de mayor tamao.
Impactador en cascada: Muestreador Andersen
Se trata de un muestreador multiorificio en cascada que
separa automticamente las partculas en fracciones se-
gn su tamao. Existen modelos de 2 y 6 niveles, que
constan de cabezales perforados de 200 y 400 orificios,
respectivamente, cuyo dimetro disminuye progresiva-
mente en sentido descendente, y operan a un caudal de
28,3 l/min. Suele utilizarse como muestreador de refe-
rencia para valorar la eficacia de otros muestreadores.
Tambin existe la versin de una etapa, adaptada de la
ltima fase del muestreador Andersen de 6 etapas.
Impactador en rendija
En este tipo de muestreadores, el aire pasa a travs de
una rendija y las partculas impactan en una placa de 15
x 150 mm situada sobre una base rotativa que gira a una
velocidad previamente seleccionada. De esta manera,
los microorganismos son separados espacialmente y se
efecta un anlisis basado en el tiempo.
Existen diversos tipos de impactadores en rendija,
como el muestreador Casella MK- II que opera a un cau-
dal de 30 700 l/min y tiene un d50 de 0,67 mm, mos-
trando una eficacia de captacin elevada para partculas
con da >1 mm. Otro ejemplo lo constituye el muestreador
Mattson-Garvin Air Sampler, que opera a un caudal de
28 l/min y presenta un d50 de 0,53 mm.
Muestreadores de impactacin en portaobjetos o
lminas
En este tipo de muestreadores, se acelera un volumen
de aire conocido (normalmente de 50 a 150 litros en am-
bientes no pulverulentos) a travs de un orificio o hendi-
dura estrecha, producindose la impactacin de las par-
tculas en una superficie impregnada con una sustancia
adhesiva. El anlisis se realiza empleando tcnicas de
microscopa.
Se emplean lminas o portaobjetos de vidrio con una
sustancia adhesiva transparente (p.ej. aceite de silicona
o adhesivos a base de vaselina). La naturaleza adhesiva
3
del medio evita la prdida de partculas durante el proce-
so de tincin y reduce el riesgo de prdida de la muestra
por vibraciones durante la manipulacin y el transpor-
te. La sustancia adhesiva a emplear debe permitir que
la superficie se mantenga lo ms hmeda posible para
minimizar el rebote de las partculas. Adems, debe ser
capaz de resistir condiciones climticas adversas y ser
compatible con tinciones y montajes del portaobjetos. Los
colorantes ms empleados son el naranja de acridina y
el azul de lactofenol.
Trampa de esporas Burkard
Es el muestreador estndar para la captacin de polen y
esporas en el aire exterior. El aire es succionado a 10 l/
min hacia el interior de una cmara a travs de una hen-
didura de 2 x 14 mm orientada en la direccin del viento
gracias a una veleta de viento que, adems, la protege de
las inclemencias del tiempo. La corriente de aire impacta
sobre la superficie de un tambor que gira a 2 mm/h en
el sentido de las agujas del reloj, y las partculas quedan
adheridas en una cinta de plstico transparente impreg-
nada con una sustancia adhesiva y colocada alrededor
del tambor.
Su principal ventaja es que permite el monitoreo con-
tinuo durante 7 das, pudiendo, adems, adaptarse para
muestreos de 24 horas y para muestreos en aire interior
retirando la veleta. Presenta una eficiencia de captacin
elevada, principalmente para partculas de tamao infe-
rior a 10 mm.
Trampa de esporas Allergenco MK-3
Se trata de un muestreador porttil en el que el aire es
aspirado a 15 l/min a travs de un orificio rectangular de
1,1 x 14,5 mm, y es dirigido a un portaobjetos impregnado
con una sustancia adhesiva. Tiene un temporizador que
se puede programar para captar una muestra durante 10
minutos cada hora, tras la cual el portaobjetos cambia
de posicin, lo cual permite la captacin de muestras
secuenciales en un mismo portaobjetos. Puede operar
hasta 24 horas.
Impactador en portaobjetos desechable: Air-O-Cell,
Allergenco-D, Micro-5.
Estos muestreadores presentan unas dimensiones redu-
cidas, por lo que pueden emplearse en espacios estre-
chos como cavidades de paredes para investigar la pre-
sencia de moho oculto, o en el interior de los conductos
del sistema HVAC. Permiten tiempos de muestreo muy
cortos, de hasta 10 min.
El muestreador Air-O-Cell presenta un orificio de entra-
da rectangular de 1,1 x 14,4 mm y opera a un caudal de
15 l/min., siendo el tiempo de muestreo normalmente de 5
a 10 min. La entrada es cnica con las esquinas afiladas,
lo cual hace que puedan crearse turbulencias de aire en
la zona de impactacin y no se depositen las partculas
de manera uniforme.
En cuanto al muestreador Allergenco-D, el orificio de
entrada tambin es rectangular, con unas dimensiones
de 1,1 x 14,5 y emplea un caudal de 15 l/min. El tiempo
de muestreo recomendado es de 1 a 10 minutos. Al igual
que el anterior, la entrada es cnica, pero presenta una
seccin recta de 4 mm, lo cual, segn estudios realiza-
dos, permite que el flujo de aire sea ms homogneo y la
captacin de partculas pequeas ms eficiente ya que,
adems, se reduce la S y el d50.
4
Notas Tcnicas de Prevencin
Por otro lado, el muestreador Micro-5 presenta un ori-
ficio de entrada circular de 2,1 mm de dimetro y opera
a un caudal de 5 l/min, siendo el tiempo de muestreo
recomendado de 1 a 10 min. Si bien presentan un dime-
tro de corte reducido, de 0,8 mm, la S es muy pequea,
siendo el ratio S/W <<1, lo cual no es recomendable, ya
que una distancia demasiado corta potencia el rebote de
las partculas, haciendo que la deposicin de las mismas
en el portaobjetos no resulte homognea.
Muestreadores de impactacin en medio lquido.
Borboteo o impigement
En estos equipos, el aire es aspirado a travs de una en-
trada curvada que simula el tracto respiratorio superior y
las partculas impactan en un volumen conocido de lqui-
do de captacin, emplendose normalmente agua des-
mineralizada, tampn fosfato salino o agua peptonada.
A fin de preservar la viabilidad de los microorganismos,
se le aaden aditivos como protenas, antiespumantes y
anticongelantes.
Se trata de uno de los equipos de muestreo ms ver-
stiles, ya que el lquido de captacin puede analizarse
empleando diversas tcnicas, como cultivo, microscopa,
as como ensayos para determinar componentes, produc-
tos, o metabolitos microbianos.
Los borboteadores ms empleados son AGI-30 y AGI-
4, que operan a un caudal de 12,5 l/min y tienen un di-
metro de corte de 0,3 mm. En el interior del vaso contienen
una boquilla de aceleracin situada, respectivamente, a
30 mm y 4 mm del fondo del mismo. Esta boquilla con-
siste en un tubo capilar curvado y ha sido diseada para
reducir el dao a las clulas cuando el aire se dispersa a
travs del lquido de captacin y las partculas son atrapa-
das en l. No obstante, el movimiento de burbujeo gene-
rado por el flujo de aire incrementa la posibilidad de que
las partculas captadas, principalmente las ms pequeas
(con un dimetro inferior a 1 mm), vuelvan a aerosolizarse,
lo cual dara lugar a una infravaloracin de su concentra-
cin. Esto es ms acusado en el caso del AGI-4, ya que
una distancia de 4 mm genera un mayor estrs fsico en
los microorganismos, con el consiguiente aumento de la
posibilidad de rebote y aerosolizacin. Adems, hay que
tener en cuenta que las soluciones acuosas no captan
eficientemente los microorganismos menos hidrosolubles
(p.ej. Bacillus). Estas soluciones se evaporan fcilmente,
no recomendndose efectuar el muestreo durante ms de
30 minutos. No obstante, presenta una elevada eficacia
de captacin para partculas de 0,3 a 5,0 m de dimetro
y, en comparacin con las tcnicas de impactacin en
placa de agar o en tiras con medio de cultivo, preserva
mejor la viabilidad de los microorganismos debido a que
se reduce el riesgo de desecacin al emplear un medio
lquido para efectuar su captacin. Adems, los borbotea-
dores pueden emplearse para captar elevadas concen-
traciones de contaminantes, ya que pueden diluirse para
su posterior anlisis.
Otro ejemplo es el BioSampler, cuya diferencia fun-
damental con respecto a los anteriores radica en que en
el interior del vaso contiene tres boquillas orientadas en
ngulo hacia la pared del muestreador y el aire es aspi-
rado a travs de cada una de ellas a un caudal de 4,2 l/
min, siendo el caudal total de 12,6 l/min. El aire es impul-
sado tangencialmente y las partculas impactan en las
paredes, siendo arrastradas por el lquido de captacin,
en el que se produce un movimiento de remolino. Por tan-
to, la captacin de partculas tiene lugar por las fuerzas
combinadas de impactacin tangencial y centrifugacin.
El movimiento de remolino genera pocas burbujas, re-
ducindose la probabilidad de rebote de las partculas
y de su reconversin en aerosoles. Adems, permite el
empleo de lquidos no evaporativos (p.ej. glicerol, aceite
mineral) y, por tanto, tiempos de muestreo ms largos
(hasta 8 horas), manteniendo una eficacia fsica de cap-
tacin relativamente constante.
Centrifugacin
Muestreador RCS (Reuter Centrifugal Sampler)
Se trata de un muestreador porttil en el que la fuerza
centrfuga generada por un rotor de aspa origina la im-
pactacin de los microorganismos en el medio de cultivo
contenido en una tira de plstico.
Dentro de estos equipos, cabe destacar el RCS High
Flow, que opera a un caudal de 100 l/min. Ha mostrado
una eficiencia de captacin 75% para partculas con
d a >2, mientras que, en el caso de partculas de 1 mm,
sta se reduce al 40%.
Cicln
En estos equipos, el aire es introducido tangencialmente
en el interior del equipo y va descendiendo efectuando un
movimiento de remolino por la accin de la fuerza centr-
fuga, haciendo que las partculas ms grandes impacten
las paredes del cicln y las ms pequeas se depositen
en el fondo del tubo.
Existen dos tipos, de pared hmeda y de pared seca,
que captan, respectivamente, muestras lquidas y secas,
las cuales pueden ser analizadas empleando diversas
tcnicas, de igual manera que los borboteadores.
En comparacin con los borboteadores AGI y, al igual
que ocurre con BioSampler, el movimiento efectuado ge-
nera un menor estrs a los microorganismos, reducindo-
se el rebote de las partculas y aumentando, por tanto, la
eficiencia de captacin. De esta manera, se pueden cap-
tar grandes concentraciones durante periodos de tiempo
ms largos. Adems, suelen ser equipos porttiles y, en
algunos casos, permiten el muestreo personal.
Un ejemplo de cicln de pared hmeda es el Coriolis.
Este muestreador consta de una cmara con forma de
cono invertido donde se produce la captacin de conta-
minantes empleando los mismos lquidos de captacin
que los borboteadores.
Existen diversos modelos, como Coriolis m y Coriolis
d, emplendose este ltimo para el muestreo en aire ex-
terior. Operan a un caudal de 100 300 l/min y el tiempo
de muestreo suele ser de 1 a 10 min, aunque, en el caso
de Coriolis d, ste puede extenderse hasta 6 horas si se
renueva el lquido de captacin.
Estos muestreadores muestran una eficacia de cap-
tacin relativamente elevada para partculas pequeas,
dado su bajo d50 (<1 mm), aunque sta es inferior a la de
BioSampler. No obstante, estudios realizados muestran
que su mayor eficacia de captacin la consiguen a la hora
de muestrear partculas ms grandes, llegando a ser del
100% en el caso de partculas con da de 4.4 mm, y del
109% para las de da de 16 mm.
Por otro lado, entre los ciclones de pared seca, cabe
destacar los muestreadores NIOSH. Se trata de mues-
treadores personales que emplean para la captacin de
partculas tubos de microcentrfuga Eppendorf de 1,5 ml,
y disponen de un filtro de respaldo para captar partculas
ms pequeas, como, por ejemplo, fragmentos fngicos.
Existen dos modelos, de una y dos etapas. En el caso

Notas Tcnicas de Prevencin
del cicln de una etapa, el caudal empleado es de 2 a 4
l/min y su d50 es de 1,5 mm, presentando una elevada efi-
ciencia de captacin para partculas de hasta 16 mm de da.
En cuanto al muestreador ciclnico de dos etapas, ste
opera a dos caudales distintos, de 2 l/min y de 3,5 l/min., y
utiliza dos tubos de microcentrfuga Eppendorf de 1,5 ml. El
da de las partculas captadas depende del caudal utilizado:
2 l/min: en la primera etapa se captan partculas de
da >2,6 mm, mientras que, en la segunda, se recogen
aquellas con da entre 1,6 y 2,6 mm. El filtro de respaldo
capta partculas de da 1,6 mm.
3,5 l/min: en la primera etapa se captan partculas de
da >1,8 mm, mientras que, en la segunda, se recogen
aquellas con da entre 1 y 1,8 mm. El filtro de respaldo
capta partculas de da 1 mm.
Estudios realizados muestran que el cicln de dos etapas
presenta una elevada eficiencia de captacin para par-
tculas de da 3,5 mm a ambos caudales, mientras que,
para partculas ms grandes, el equipo capta con mayor
eficiencia cuando emplea el caudal ms alto.
2. MUESTREO DEL AIRE POR FILTRACIN
Mediante esta tcnica, las partculas son captadas en
filtros de un tamao de poro determinado por diversos
mecanismos como la impactacin, la interceptacin o la
difusin, as como por fuerzas elctricas o gravitaciona-
les. La eficacia de captacin depende del tipo de filtro, de
su tamao de poro (normalmente entre 0,01 y 10 mm), y
del caudal empleado para el muestreo.
Se emplea para la captacin de microorganismos to-
tales (viables y no viables) y otros contaminantes biolgi-
cos, permitiendo tiempos de muestreo largos, as como
el muestreo personal. La muestra obtenida puede anali-
zarse empleando diversas tcnicas, incluyendo el cultivo
de los microorganismos captados.
Suelen presentar una mayor eficacia de captacin para
un mayor rango de tamaos de partculas en compara-
cin con los impactadores, siempre que se empleen con
los filtros adecuados.
Los filtros pueden estar fabricados con materiales muy
diversos, como politetrafluoroetileno (PTFE), steres mix-
tos de celulosa (MCE), policarbonato, cloruro de polivinilo
(PVC), gelatina, o fibra de vidrio. La seleccin del filtro va a
depender, fundamentalmente, del contaminante de inters
y de la tcnica de anlisis que se va a emplear.
Por ejemplo, los filtros de fibra de vidrio y de PVC son
higroscpicos, por lo que pueden emplearse para reali-
zar anlisis gravimtricos. Los filtros de MCE y de poli-
carbonato pueden hacerse transparentes con acetona y
aceite de inmersin, respectivamente, y ser analizados
al microscopio ptico, mientras que las membranas de
policarbonato de color negro y los filtros de PTFE pue-
den observarse con el microscopio de epifluorescencia.
Adems, los filtros de policarbonato y de PTFE se lavan
fcilmente, por lo que tambin son adecuados para su
anlisis con el microscopio electrnico de transmisin
y el microscopio electrnico de barrido. Por ltimo, el
anlisis de diversos componentes y metabolitos micro-
bianos puede llevarse a cabo empleando filtros de po-
licarbonato, PTFE, MCE y filtros de fibra de vidrio, y el
cultivo de microorganismos puede realizarse con filtros
de policarbonato y gelatina, siendo ste ltimo, en prin-
cipio, ms adecuado, ya que preserva mejor la viabilidad
de los microorganismos, aunque resulta frgil y se seca
con facilidad, de manera que no puede emplearse para
tiempos de muestreo largos.
5
Muestreador Button
Consta de un cuerpo de aluminio, siendo la superficie de
entrada curvada con numerosos orificios de 381 mm de
dimetro. El caudal empleado es de 4 l/min, y se utiliza
con filtros de 25 mm.
Permite el muestreo de la fraccin inhalable, presen-
tando baja sensibilidad a la velocidad y a la direccin del
viento, pudiendo captar partculas grandes, al mismo tiem-
po que reduce la captacin de partculas de da >100 m.
Adems, con este muestreador se consigue una mayor
uniformidad en la captacin y en el depsito de partculas.
Muestreador IOM
Consta de un cuerpo de plstico conductor o de acero
inoxidable y la entrada de aire se produce a travs de un
orificio circular de 15 mm de dimetro. Opera a un caudal
de 2 l/min y se emplea con filtros de 25 mm.
Permite el muestreo de la fraccin inhalable, pudien-
do emplearse tambin para el muestreo de la fraccin
respirable mediante la incorporacin de un disco de una
espuma plstica porosa, como la espuma de poliuretano.
Muestreador de cassette de 37 mm
Consiste en un cassette de tres piezas, cerrado o abierto,
fabricado en poliestireno y con un orificio de entrada de
aire de 4 mm de dimetro. Suele operar a un caudal de 1
a 5 l/min, y se emplea con filtros de 37 mm. Su eficacia
de captacin se reduce considerablemente en condicio-
nes de elevada humedad, as como a la hora de captar
partculas de tamao superior a 30 mm. Presenta tambin
otros inconvenientes, como prdidas en las paredes in-
ternas y deposicin no uniforme en el filtro de captacin.
3. MUESTREO DE SUPERFICIES
Este mtodo resulta apropiado para confirmar la presen-
cia de microorganismos, permitiendo detectar el foco
de contaminacin y el grado de extensin de la misma
cuando la inspeccin visual resulta ambigua (p.ej. en el
caso de que se observen manchas o decoloraciones y se
desconozca si son debidas a moho). Tambin puede ser
empleado para comprobar la eficacia de un procedimien-
to de limpieza o de desinfeccin de superficies.
No se trata de un mtodo cuantitativo (salvo el mues-
treo con placas de contacto), pero es til para identificar
gneros o especies de microorganismos. Por otro lado,
debido a la gran variabilidad de los resultados obtenidos y
a la escasa correlacin mostrada con las mediciones del
aire, este tipo de muestreo no puede utilizarse como nico
mtodo para evaluar el riesgo de exposicin, siendo una
herramienta complementaria para la evaluacin ambiental.
Muestreo con torunda
Se utiliza para el muestreo en materiales lisos, y consis-
te en el empleo de una torunda de algodn estril que
debe humedecerse en un lquido estril en caso de que
la superficie est seca, no siendo esto necesario cuando
sta se encuentra hmeda. Se aplica la torunda con un
ligero movimiento de vaivn en varias direcciones en un
rea determinada (normalmente de 100 cm2) y delimitada
por una plantilla. A continuacin, se introduce la torunda
en un tubo con un lquido estril apropiado, pudiendo
ste ser el mismo tipo de lquido que el empleado para
6
Notas Tcnicas de Prevencin
humedecerla. El anlisis se realiza por cultivo mediante
siembra del contenido con la torunda, ya sea directamen-
te, o tras diluir el mismo.
Muestreo con esponja
El empleo de esponjas estriles resulta til para el mues-
treo de superficies grandes y/o irregulares. Se frota la es-
ponja (la cual puede hidratarse de la misma manera que
la torunda) sobre un rea determinada de la superficie a
muestrear y el contenido es extrado y diluido antes de
su anlisis, que se realiza por cultivo.
Muestreo con placa de contacto
Este mtodo se emplea en superficies lisas y consiste en
la aplicacin, mediante una ligera presin, de una placa
de contacto (normalmente una placa RODAC) con un
medio de cultivo ligeramente en exceso, siendo sta a
continuacin incubada para la posterior identificacin y
recuento de las colonias.
La ventaja que presentan estos tres mtodos es que
permiten la determinacin relativa de la concentracin
de microorganismos, expresndose sta en ufc/cm2 (uni-
dades formadoras de colonias por centmetro cuadrado
de superficie), aunque los resultados obtenidos no son
precisos.
Muestreo con cinta adhesiva
Este mtodo tambin requiere que la superficie sea lisa
y se lleva a cabo presionando ligeramente una cinta im-
pregnada con una sustancia adhesiva sobre la superficie
a muestrear y efectuando la identificacin de las part-
culas atrapadas con un microscopio. A diferencia de los
anteriores, no puede emplearse para determinar con-
centraciones de microorganismos y, adems, no suele
permitir la caracterizacin a nivel de especie.
4. MUESTREO DE MATERIALES
Este mtodo se emplea para el anlisis de porciones de
material (p.ej. papel pintado, revestimiento de conductos
del sistema HVAC, moquetas), de polvo depositado o de
agua, con el fin de determinar si presentan contaminantes
biolgicos que puedan constituir la causa del problema
que se est investigando.
Materiales distintos de polvo o agua
Los materiales pueden encontrarse completamente lim-
pios, mostrar alguna decoloracin, o presentar un creci-
miento microbiano visible, pudiendo ser requerido su an-
lisis para identificar la contaminacin presente. La muestra
debe tener un tamao lo suficientemente pequeo como
para poder ser transportada y analizada fcilmente. No
obstante, si, por ejemplo, presenta diferentes tonos de de-
coloracin, el tamao debe ser tal que permita representar
el dao del material, o deberan cogerse diversas muestras
que puedan proporcionar una representacin completa del
contaminante o de los contaminantes biolgicos presen-
tes en el rea daada. El anlisis efectuado confirmar la
presencia o ausencia de contaminacin, permitiendo, en
su caso, la identificacin del contaminante.
Reservados todos los derechos. Se autoriza su reproduccin sin nimo de lucro citando la fuente: INSHT, n NTP, ao y ttulo. NIPO: 272-15-025-5
Polvo depositado
El muestreo y anlisis de polvo es un mtodo adecuado
para la determinacin de diversos contaminantes bio-
lgicos, tales como: esporas, fragmentos, alrgenos y
metabolitos fngicos (micotoxinas, b-1,3 glucanos), en-
dotoxinas bacterianas, caros, fragmentos de insectos,
o descamaciones de animales. Se encuentra menos in-
fluenciado por la variacin temporal a corto plazo en las
concentraciones de contaminantes, y permite la aplica-
cin de diversos anlisis a las muestras. No obstante, la
interpretacin de los resultados obtenidos resulta comple-
ja, ya que la diversidad de contaminacin presente va a
depender principalmente del movimiento de las personas
y del nivel de limpieza.
La muestra se puede coger directamente mediante el
empleo de una cuchara o una esptula, o puede efectuar-
se la captacin de polvo con un aspirador convencional
provisto de un filtro HEPA (del ingls, High Efficiency Par-
ticulate Air), o mediante cassettes con filtro de 37 mm o
25 mm acoplados a una bomba de aspiracin, siendo
normalmente el caudal empleado de 20 a 25 l/min cuando
se utilizan los de 37 mm, y de 10 a 20 l/min cuando se
utilizan los de 25 mm. Se delimita el rea a muestrear y
se aspira a una velocidad determinada (por ejemplo, 1 m2
cada 1 2 min.) en una direccin y, despus, en direccin
perpendicular a la anterior.
Una vez obtenida la muestra, se procede a la extrac-
cin de los contaminantes empleando un medio adecua-
do y se analiza el lquido resultante mediante la tcnica
de anlisis que resulte ms apropiada. Los resultados se
suelen expresar en trminos de concentracin del conta-
minante de inters por gramo de polvo.
Agua
Este mtodo consiste en introducir un volumen determina-
do de agua en un recipiente estril y proceder a su anlisis,
ya sea mediante cultivo, como por tcnicas microscpicas
o ensayos, y se emplea para el muestreo de bacterias
como Legionella pneumophila o de protozoos en el agua
de las torres de refrigeracin (u otras instalaciones de ries-
go), y de otros elementos del sistema HVAC.
5. MUESTREO DE COMPUESTOS ORGNICOS
VOLTILES MICROBIANOS
Aunque algunos pueden detectarse olfativamente, los
COVM se encuentran a bajas concentraciones en el aire
interior, de manera que su determinacin resulta difcil,
incluso empleando mtodos con una resolucin muy ele-
vada. Adems, no suele ser comn su realizacin en este
tipo de ambientes.
En caso de que resulte conveniente la determinacin
de este tipo de contaminantes, uno de los mtodos reco-
mendados es la captacin en un sorbente como carbn
activo, seguida de una desorcin trmica (para lo cual se
emplea calor y un flujo de un has inerte como el helio), en
combinacin con una cromatografa de gases acoplada
a una espectrometra de masas (GC/MS).
BIBLIOGRAFA
Se relaciona en la NTP 1.064.