Ao de la Diversificacin Productiva y del Fortalecimiento de la Educacin

BIOQUMICA
LAB.07: BIOENSAYO DE TOXICIDAD DEL Pb CON SEMILLAS DE LECHUGA

Blga. :

Terry Borjas Carmen Rosa

INTEGRANTES:

Ascona Riveros Jean Pierre

Bravo Zavala Koral
Fajardo Fernandez Cristel
Gonzales Canahuire Linda
Prez Pachas Melissa

2015

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BIOENSAYO DE TOXICIDAD DEL Pb CON
SEMILLAS DE LECHUGA

Prctica de laboratorio n07

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INTRODUCCION

Los ensayos biologicos o bioensayos son herramientas de diagnosticos adecuadas para

determinar el efecto de agentes fisicos y quimicos sobre organismos de prueba bajo
condiciones experimentales especificas y controladas. Estos efectos pueden ser tanto de
inhibicion como de magnificaion, evaluados por a reaccion de los organismos, tales como la
muerte, crecimiento, proliferacion, multiplicacion, cambios morfologicos, fisiologicos o
histologicos.

Los efectos pueden manifestarse a diferentes niveles, desde estructuras subcelulares o

sistemas de enzimas, hasta organismos completos, poblaciones comunidades. Por tanto, la
toxicidad sera la capacidad de uan sustancia para ejercer un efecto nocivo sobre unos
organismos o la biocenosis, y dependeras tanto las propiedades quimicas del compuesto como
de su concentracion, segn sea la duracion y frecuencia de la exposicion al toxico, y su relacion
con el ciclo de vida de organismo.

OBJETIVOS

Conocer la aplicacin de los bioensayos en estudios de toxicidad con compuestos

xenobioticos
Evaluar bioensayos en semillas d elechuga
Determinar los efectos del xenobioticos en semillas de lechuga.

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MATERIALES

Placas Petri.
Matraces.
Pipetas.
Pinzas.
Semillas de lechuga.
Balanza analtica.
Papel toalla.
Guantes.
Mascarilla.
Tijera.
Hipoclorito de sodio al 10%.
Cmara oscura de temperatura controlada (22C).

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METODOLOGA

1.- DESINFECCIN DE SEMILLAS

Para desinfectar las semillas, estas se sumergen en la solucin de hipoclorito de sodio
al 10% por 15 minutos, luego se lava con agua destilada y finalmente se coloca en un
recipiente con agua destilada durante 15 minutos para eliminar los residuos de
hipoclorito.

2.- PRUEBA DE VIABILIDAD DE LAS SEMILLAS

Previo a la implementacin de la prueba, es recomendable verificar que las semillas
que se utilice tenga un porcentaje de germinacin superior al 90% y baja variabilidad
en la elongacin de la radcula e hipocotilo.
a.) Procedimiento

Colocar en una placa Petri un disco de papel toalla doble.

Marcar correctamente la placa Petri con la fecha y hora de inicio y
trmino del bioensayo.
Saturar el papel toalla con 2 o 3ml de agua destilada evitando que se
formen bolsas de aire.
Con la ayuda de una pinza, colocar cuidadosamente 20 semillas
previamente desinfectadas, dejando espacio suficiente entre las semillas
y para permitir la elongacin de las races.
Tapar las placas Petri y colocarlas en bolsas plsticas para evitar la
prdida de humedad. Dado que algunas variedades se semillas de
lechuga requieren oscuridad para que se produzca la germinacin, las
cajas de Petri deben cubrirse de la luz inmediatamente despus de
colocarlas las semillas en su interior y durante el periodo de ensayo.
Incubar por 5 das a una temperatura de 22C.

3.- BIOENSAYO DE LA TOXICIDAD DEL Pb EN SEMILLAS DE LECHUGA

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 b.) Preparacin de las concentracin del xenobitico

Preparar 10ml de 4 concentraciones diferentes de acetato de plomo

10%, 1%, 0.1%, 0.01%
Acetato de plomo Pb(CH3COO)2 PM=325.2g/mol
Usar mascarilla y guantes para preparar las soluciones.

c.) Procedimiento

Colocar en cada placa Petri (5) un disco de papel toalla doble.

Marcar correctamente cada caja con la concentracin correspondiente,
as como la fecha y hora de inicio y trmino del bioensayo.
Saturar el papel toalla con 4 o 5ml de las 4 concentraciones y un control,
evitando que se formen bolsas de aire.
Con la ayuda de una pinza, colocar cuidadosamente 20 semillas,
dejando espacio suficiente entre las semillas para permitir la elongacin
de las races.
Tapar las placas Petri y colocarlas en bolsas plsticas para evitar la
prdida de humedad. Dado que algunas variedades se semillas de
lechuga requieren oscuridad para que se produzca la germinacin, las
cajas de Petri deben cubrirse de la luz inmediatamente despus de
colocarlas las semillas en su interior y durante el periodo de ensayo.
Incubar por 5 das a una temperatura de 22C.
Realizar repeticiones para cada concentracin ensayada.

d.) Datos a evaluar

Longitud de hipocotilo.
Longitud de la radcula.
Necrosis.
Inhibicin del crecimiento.
% de germinacin.
Cambios morfolgicos.
Cambios histolgicos.

RESULTADOS

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 MUESTRA CONTROL
HIPOCOTILO RADICULA
1.2 cm 0.9 cm
1.5 cm 0.9 cm
1.5 cm 0.9 cm
1.2 cm 0.6 cm
1.5 cm 0.8 cm
1 cm 0.8 cm
1.6 cm 0.9 cm
1.2 cm 0.8 cm
1.4 cm 0.7 cm
1 cm 1.3 cm
1.3 cm 1 cm
1.1 cm 1 cm
1.1 cm 0.8 cm
0.4 cm 1.2 cm
0.1 cm 0.5 cm
0.1 cm 0.3 cm

ACETATO DE PLOMO al 10%

Hipocotilo Radcula
0 cm 0 cm

ACETATO DE PLOMO al 1%
Hipocotilo Radcula
0.4 cm 0.1 cm
0.4 cm 0.1 cm

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 0.2 cm 0.1 cm
0.3 cm 0.1 cm
0,2 cm 0.1 cm
0.2 cm 0.1 cm
0.3 cm 0.1 cm
0.2 cm 0.1 cm
0.2 cm 0.1 cm
0.3 cm 0.1 cm
0.5 cm 0.1 cm
0.2 cm 0.1 cm
0.2 cm 0.1 cm
0.2 cm 0.1 cm

ACETATO DE PLOMO al 0.1%

Hipocotilo Radcula
1.3 cm 0.6 cm
1.7 cm 0.7 cm
1 cm 0.8 cm
0.7 cm 1.3 cm
1 cm 0.8 cm
0.9 cm 0.5 cm
1.2 cm 1.1 cm
1.2 cm 0.8 cm
0.1 cm 0.7 cm

ACETATO DE PLOMO al 0.01%

Hipocotilo Radcula
1.5 cm 0.9 cm
1.5 cm 0.8 cm
1.6 cm 0.7 cm
1 cm 1.1 cm
1 cm 0.8 cm
1.7 cm 0.9 cm
0.6 cm 0.5 cm
1.5 cm 0.7 cm
2 cm 1.1 cm
1.4 cm 0.8 cm
1.5 cm 0.8 cm
1.7 cm 0.9 cm
0.5 cm 1.3 cm
0.4 cm 1 cm
0.6 cm 0.6 cm

DATOS A EVALUAR

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INHIBICIN DEL CRECIMIENTO

INHIBIERON
Muestra control 4
Acetato de plomo al 10 % 20
Acetato de plomo al 1% 6
Acetato de plomo al 0.1 % 11
Acetato de plomo al 0.01% 5

% DE GERMINACIN

% GERMINACIN
Muestra control 80%
Acetato de plomo al 10 % 0%
Acetato de plomo al 1% 70%
Acetato de plomo al 0.1 % 45%
Acetato de plomo al 0.01% 75%

ANLISIS DE RESULTADOS

Se pudo observar que el ensayo con acetato de plomo al 10% no germin ninguna
semilla por lo que claramente en la radcula se pudo observar necrosis (presencia de
tejidos muertos) se evidencia como manchas localizadas de color marrn.
En cuanto al ensayo con acetato de plomo al 1% se pudo observar que los pelos
absorbentes estn poco desarrollados y que la elongacin de la radcula y el hipocotilo
han disminuido.
En el ensayo con acetato de plomo al 0.1% las radculas presentan un crecimiento
ensortijado y la elongacin de la radcula y el hipocotilo es cercana al promedio de la
elongacin del ensayo control debido a la baja concentracin de acetato de plomo.
En el ensayo con acetato de plomo al 0.01% las caractersticas son similares a las del
ensayo control debido que la concentracin de acetato de plomo es muy baja por lo
que tambin la elongacin de la radcula y el hipocotilo estn en promedio con la
elongacin del ensayo control.
En el ensayo control pudimos observar tallos semi-firmes, radcula cubierta de pelos
moderadamente y el promedio de la elongacin de la radcula es de 0.84 cm y del
hipocotilo es de 1.1cm.

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 CONCLUSIONES

En los bioensayos de toxicidad del Pb en semillas de lechuga realizados, mostraron que a mayor
concentracin del acetato de plomo el crecimiento de la raz comienza a inhibirse.

El porcentaje de germinacin de las semillas fue disminuyendo a medida que incrementaban el

porcentaje de acetato de plomo, ya que el plomo en altas concentraciones puede afectar la
viabilidad y las funciones celulares.

Esto demuestra que los principales blancos de toxicidad de los metales son protenas, muchas
de ellas con actividad enzimtica, afectando a diversos procesos bioqumicos y la integridad de
las membranas celulares y de los organelos.

RECOMENDACIONES:

Ser acuciosos con la manipulacin del acetato de Pb.

Pesar el acetato de Pb con exactitud, pues de ello depende la concentracin correcta
de las soluciones de acetato de plomo.
Desinfectar de manera correcta las placas Petri.
Tomar las medidas del hipcolito y de la raz con exactitud, para as llegar a las
conclusiones adecuadas.

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 BIBLIOGRAFIA

Efecto de metales pesados sobre el crecimiento de la raz primaria de Arabidopsis

thaliana L..Leticia Vargas-Palominos1 , Miguel Martnez-Trujillo1 , Randy Ortiz-Castro2 ,
Jos Lpez-Bucio2 1 Facultad de Biologa, 2 Instituto de Investigaciones Qumico-
Biolgicas, UMSNH.
Foti, M. N; Lallana, V. H. 2005. Bioensayo de germinacin con semillas de Eruca sativa
Mill. para la deteccin de salinidad y presencia de herbicida en agua. Revista FABICIB
(9):9-16.
IDRC/IMTA. 2004. Ensayos toxicolgicos y mtodos de evaluacin de calidad de aguas.
Estandarizacin, intercalibracin, resultados y aplicaciones. Editado por Gabriela
Castillo. 202 p.
Ensayos toxicolgicos para la evaluacin de sustancias qumicas en agua y suelo.
Patricia Ramirez. Instituto Nacional de Ecologa. Mxico.

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