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LA PAZ- BOLIVIA
2010
2
ESTADO PLURINACIONAL DE
Gua Prctica
del Diagnstico
BOLIVIA
MINISTERIO DE SALUD Y
DEPORTES
de la Malaria
Movilizados por
154 el Derecho a la Salud y la Vida
LA PAZ- BOLIVIA
2010
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GUA PRCTICA DEL DIAGNSTICO DE LA MALARIA
R.M.: N0552
Depsito legal:
ISBN:
Elaborado por: Dra. A. Magdalena Jimnez L. (Consultora Nacional MSH/SPS)
Equipo tcnico: Dra. Arletta Aez V. (Consultora Nacional OPS/OMS) Dr. Jorge Aruni
Ch.(Responsable Laboratorio Nacional de Referencia de
Diagnstico de Malaria INLASA)
Dr. Juan Carlos Arraya T. (Responsable Estrategia de Vigilancia y
Control de la Malaria y Dengue Ministerio de Salud y Deportes)
Edicin:
Apoyo tcnico y edicin de este documento brindado por la Iniciativa Amaznica contra la Malaria,
IAM, Management Science for Health/Strategic Pharmaceutival System (MSH/SPS) y a la
Organizacin Panamericana y Mundial de la Salud (OPS/OMS).
Impreso en Bolivia
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AUTORIDADES DE SALUD NACIONALES
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PRESENTACIN
El Plan Estratgico del Programa Nacional de Vigilancia y Control de la Malaria para el perodo
2008-2012 establece como meta disminuir la morbimortalidad relacionada a la malaria en por lo
menos 50% respecto a la situacin 2007 y as cumplir con los objetivos del milenio antes del 2015.
Bajo este contexto se ha identificado una necesidad muy sentida referida al mejoramiento de la
calidad del diagnstico microscpico de la malaria a nivel nacional.
Para este fin, se ha actualizado el documento Gua Prctica del Diagnstico de la Malaria. Este
documento tiene mucho valor en esta etapa del control de la malaria en Bolivia, ya que permitir
mejorar la calidad del diagnstico de la malaria realizado por los tcnicos de vectores y
microscopistas que trabajan en condiciones precarias en rea rural de zonas endmicas de todo el
pas.
Este documento ha sido revisado por los actores claves de los laboratorios de II y III nivel de las
zonas endmicas de malaria bajo el liderazgo del laboratorio de nivel IV-Laboratorio Nacional de
Referencia de Diagnstico de Malaria de el INLASA, con el fin de estandarizar los procedimientos
operativos normados por el Ministerio de Salud y Deportes.
La actualizacin de esta gua constituye un hecho muy pertinente para la Estrategia de Vigilancia y
Control de la Malaria a nivel central como a nivel regional y local por que su implementacin va ha
permitir realizar control de calidad por el personal del nivel inmediatamente superior.
Estamos seguros que la Gua Prctica del Diagnstico de la Malaria permitir brindar a todos los
usuarios del sistema de salud un mejor servicio.
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RESOLUCIN MINISTERIAL N 0552
VISTOS Y CONSIDERANDO:
Que, la nueva Constitucin Poltica del Estado Plurinacional de Bolivia establece en los artculos 35 al 45, que
El Estado, en todos sus niveles, proteger el derecho a la salud, promoviendo polticas pblicas orientadas a mejorar la
calidad de vida, el bienestar colectivo y el acceso gratuito de la poblacin a los servicios de salud; que el Estado tiene la
obligacin indeclinable de garantizar y sostener el derecho a la salud, que se constituye en una funcin suprema y
primera responsabilidad financiera. Se priorizar la promocin de la salud y la prevencin de las enfermedades; El
Estado garantizar el acceso de la poblacin a los medicamentos. El Estado garantizar la participacin de la poblacin
organizada en la toma de decisiones, y en la gestin de todo el sistema pblico de salud.
Que el Cdigo de Salud, en sus artculos 2 y 3, sealan que la salud es un bien de inters pblico y que
corresponde a la Mxima Autoridad de Salud, la definicin de las polticas de salud, la formacin, planificacin, control y
coordinacin de todas las actividades en todo el territorio nacional;
Que, el control y vigilancia de la Malaria constituye una prioridad en todo el territorio del pas, en cuyo marco la
Estrategia de Vigilancia y Control de la Malaria, viene realizando todos los esfuerzos a su alcance para cumplir los
Objetivos del Milenio antes del 2015.
Que, la tendencia de situacin epidemiolgica de la malaria a nivel nacional en los tres ltimos aos es
claramente descendente gracias al accionar del personal de salud involucrado a nivel de toda la zona endmica.
Que, es fundamental mantener los logros alcanzados en estos cuatros ltimos aos y fortalecerlos para poder
controlar la malaria por debajo de una Incidencia Parasitaria Anual (IPA) menor a 2 x 1000 habitantes en la zona
endmica hasta antes del 2015 y erradicar la malaria por Plasmodium falciparum para esa fecha.
POR TANTO:
La Seora Ministra de Salud y Deportes, en atribuciones a la Ley 3351 de Organizacin del Poder Ejecutivo de
21 de febrero de 2006;
RESUELVE:
PRIMERO.- Aprobar la GUA PRCTICA DEL DIAGNSTICO DE LA MALARIA" para su aplicacin en el mbito
nacional, el mismo que tiene como objetivo general disminuir la malaria en ms de 50% para fines del 2012 y erradicar la
malaria por P. falciparum para fines de 2015.
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ndice
Captulo 1. Mtodo de Diagnstico Parasitolgico Directo...........................................................................13
1.1 Procedimiento de la toma de muestra.......................................................................................................13
1.2 Procedimiento Tcnico de muestra hemtica............................................................................................17
a) Tcnica de Tincin Romanowsky................................................................................................................17
b) Tcnica de Tincin Giemsa.........................................................................................................................19
1.3 Calidad de la Gota Gruesa........................................................................................................................20
1.4 Calidad del Frotis.......................................................................................................................................20
1.5 Criterios del Diagnstico Microscpico de Malaria....................................................................................20
1.6 Identificacin Microscpica del Parsito....................................................................................................22
1.7 Caractersticas Microscpicas del Plasmodium falciparum.......................................................................22
1.8 Caractersticas Microscpicas del Plasmodium vivax...............................................................................23
Captulo 2. Determinacin de la densidad parasitaria...................................................................................28
2.1 Mtodo semicuantitativo por cruces o mtodo simple...............................................................................28
2.2 Clculo del nmero de parsitos por microlitro de sangre en gota gruesa...............................................28
Captulo 3. Descripcin del Microscopio ptico............................................................................................30
3.1 Aspectos Generales...................................................................................................................................30
3.2 Gua del manejo del microscopio ptico....................................................................................................30
3.3 Mantenimiento y cuidado del microscopio ptico......................................................................................31
Captulo 4. Pruebas de Diagnstico Rpido de la Malaria............................................................................33
4.1 Fundamento de las Pruebas Rpidas para el Diagnstico de la Malaria..................................................33
Captulo 5. Control de Calidad.......................................................................................................................34
5.1 Metodologa de la Evaluacin Externa del Desempeo (EED.................................................................. 34
5.2 Metodologa del Control de Calidad Indirecto (CCI)..................................................................................35
5.3 Anlisis de los resultados...........................................................................................................................37
5.3.1 Anlisis de los resultados de la calidad diagnstica...............................................................................37
5.3.2 Anlisis de los resultados de la calidad tcnica......................................................................................37
Anexos
Form.1 Formulario EED...................................................................................................................................38
Form. 2 Formulario CCI...................................................................................................................................41
Bibliografa
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Abreviaciones
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Captulo N1
Mtodo de Diagnstico Parasitolgico Directo
Gota gruesa/frotis sanguneo
b) Frotis o extendido sanguneo. Es un procedimiento tcnico con el que se separan los elementos formes
de la sangre en una capa delgada de clulas separadas entre s, las cuales una vez coloreadas facilitaran la
observacin de las caractersticas morfolgicas de los parsitos presentes en el interior de los glbulos rojos,
sobre todo permitir identificar la especie del parsito y otras caractersticas relacionadas con los estadios y
especie de los mismos.
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Despus que los datos del paciente han sido registrados en forma apropiada en el formulario de
registro individual para malaria, se deber proceder de la siguiente manera:
Preparar previamente los insumos y materiales necesarios para la toma de la muestra hemtica, 2
muestras por paciente, torundas de algodn secas y embebidas en alcohol, portaobjetos
desengrasados, lanceta estril y guantes.
Explicar al paciente a cerca de los procedimientos que se van a realizar para la obtencin de la
muestra hemtica.
Sostener firmemente la mano menos hbil del paciente, elegir el dedo anular o medio parte lateral
externa con la palma dispuesta frente al examinador y solicitar la flexin del resto de los dedos de la
mano. En el caso de pacientes peditricos se puede tomar la muestra del pie: borde lateral externo o
la parte angular del taln.
Limpiar la zona de eleccin con una torunda de algodn embebida en alcohol, utilizando golpes
firmes para eliminar la grasa, la suciedad y al mismo tiempo estimular la circulacin de la sangre.
Puncionar la zona de eleccin con una lanceta estril a travs de un movimiento rpido y presionar
suavemente el dedo para extraer las primeras gotas de sangre. Eliminar las dos primeras gotas de
sangre limpindolas con una torunda de algodn seca y asegurar que ninguna hilacha de algodn
pueda mezclarse posteriormente con la sangre.
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Colocar el portaobjetos abajo y la zona de toma de la muestra arriba de este, colecte rpidamente
la sangre apretando suavemente el dedo cuidando que el pulpejo no toque la lmina portaobjetos,
depositar 1 gota de sangre en el centro de uno de los extremos de la lmina para la gota gruesa y
otra gota en el centro de la mitad de la lmina portaobjetos para realizar el frotis.
Limpiar la zona con una torunda de algodn humedecida en alcohol y solicitar al paciente que
presione el lugar de la puncin para que la compresin impida el sangrado.
Realizar inmediatamente el extendido sanguneo en capa fina (frotis) en una superficie plana y
firme, sujetando el portaobjetos del extremo que contiene la muestra para la gota gruesa ejercer
presin con un dedo. Utilizando otro portaobjeto como extensor (el cual tenga un borde liso y sin
deformaciones) tocar el borde de la gota de sangre y esperar que discurra la sangre a lo largo del
borde biselado, deslizar el portaobjetos con firmeza hacia un extremo sobre el primero
manteniendo un ngulo de 45 haciendo que los dos portaobjetos estn siempre en contacto. En
caso de tener mucha sangre se puede levantar el portaobjetos extensor luego de que discurra la
sangre a travs del borde biselado, llevar unos milmetros hacia delante y proceder de la misma
forma.
Foto N 5 Foto N 6
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Fotos N 5-7: Ejecucin del frotis en ngulo de 45
Utilizar un ngulo del portaobjetos extensor y mezclar rpidamente la gota de sangre a travs de
movimientos giratorios y suaves, se debe proceder a la desfibrinizacin por 30 segundos para
obtener una pelcula homognea, de 1 cm. de dimetro. De preferencia, realizar la
homogenizacin de la muestra en una sola direccin, en forma concntrica (de adentro hacia
afuera). Identificar la muestra con lpiz negro en el sector inicial o grueso del extendido colocando
el Nmero de Clave de la Muestra correspondiente al nmero del Formulario de Registro Individual
para Malaria que se registro.
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Dejar secar las muestras a temperatura ambiente, en posicin horizontal, cuidando de no dejar
expuestas al sol, al polvo y protegida de los insectos.
Secar. Sacar la muestra del recipiente y dejar secar a temperatura ambiente en posicin vertical, la gota
gruesa siempre debe estar en la parte inferior.
Fijacin. Una vez seca, colocar el portaobjeto en posicin horizontal y utilizando una pipeta cubrir toda la
muestra con alcohol al 96% por espacio de 3 a 5 minutos (alcohol Caimn, Guabir, etc.). Otra opcin para
efectuar este procedimiento consiste en sumergir la muestra en metanol por espacio de 30 segundos.
Secado. Dejar secar la muestra a temperatura ambiente. Antes de la coloracin asegrese que la gota
gruesa y el frotis estn secos.
Coloracin. Dos tcnicas son las habituales y sirven para la coloracin de las muestras hemticas las cuales
se describen a continuacin:
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Preparacin del colorante:
1. Agua amortiguada o tamponada con pH de 7,2 a 7,4 ml (ver preparacin de agua
Colocar la lmina portaobjeto en posicin horizontal sobre la parrilla de tincin cuidando de que el
lado del portaobjetos que contiene la muestra sea el correcto.
Descartar el colorante y lavar la lmina con agua corriente bajo un chorro suave cuidando de que el
agua no desprenda la muestra.
Ortofosfato disdico 4g
Ortofosfato monopotsico 5g
Se mezclan las sales de forma que se tenga un polvo homogneo, se toma 1 gr. de la mezcla y se
disuelve en un litro de agua destilada, agitar y medir con un peachimetro y ajustar a un pH de 7,2 a
7,4.
Preparacin de la solucin A
Pese los siguientes reactivos
Azur I o azur B 2g
Preparacin de la solucin B
Pese el reactivo:
1
8
Eosina amarilla hidrosoluble 4g
Preparacin del colorante. El colorante se prepara en una proporcin 1/9 (10%), con esta proporcin,
el tiempo adecuado de tincin suele ser de 30 minutos.
1. Agua tamponada con pH 7,2 a 7,4 9 ml (ver preparacin de agua tamponada o recurrir a opciones
comerciales de agua tamponada disponibles en el mercado como el Naturagua cuyo pH es de 7,3)
Preparar una dilucin 1:10 mezclando la solucin madre de Giemsa y el agua tamponada.
Homogeneizar los ingredientes cuidadosamente.
Cubrir completamente la muestra hemtica con el colorante preparado utilizando una pipeta
19
Descartar el colorante y lavar la lmina con agua corriente bajo un chorro suave cuidando de que el
agua no desprenda la muestra.
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Grfico N 1
La sangre est constituida por una fase lquida, el plasma en el que se encuentran en suspensin los
siguientes elementos formes:
1. Glbulos rojos o eritrocitos. Los eritrocitos son redondeados, bicncavos, carecen de ncleo,
tienen un dimetro promedio de 7,5 m, estn llenos de hemoglobina lo que le confiere a la sangre
su caracterstico color rojo y estn encargados del transporte de O2 a los tejidos. Estas clulas son
muy elsticas lo que les confiere una gran capacidad de soportar deformaciones. De acuerdo a la
tincin pueden verse de color naranja o azul plido.
Neutrfilos. Granulocito, en general todos los leucocitos granulares tienen un dimetro aproximado
de 12 a 15 m, con un ncleo caracterstico, dividido en 3 a 5 lbulos lo que le confiere el nombre
particular de polimorfonuclear, contienen en su citoplasma numerosos grnulos finos que apenas
pueden observarse.
Eosinfilos. Granulocito, contienen un ncleo con dos grandes lbulos unidos por un filamento de
cromatina. El citoplasma est prcticamente cubierto por grnulos eosinfilos grandes, fuertemente
coloreado de color rosado o anaranjado.
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3. Plaquetas o trombocitos. Miden 3 m de largo. A menudo se agrupan formando pequeos
grumos, se observan estas clulas de color rosado o naranja.
Partes constitutivas del parsito. El parsito consta de un ncleo compuesto de cromatina, el cual es
generalmente redondo y se colorea de un rojo intenso (rojo grosella). El citoplasma es de color azul variando
ligeramente de tonalidad y puede tomar diferentes formas, desde una forma de anillo a una totalmente
irregular. Consta de una vacuola donde se realizan las funciones metablicas del parasito, en la cual se
absorbe la hemoglobina, que posteriormente es eliminada producto de la digestin, en forma de un pigmento
llamado Hemozoina o pigmento malrico, este pigmento se encuentra almacenado en el parsito en forma
de grnulos, los cuales sern ms evidentes en estadios maduros del parsito.
Trofozoitos: Son formas anulares pequeas, las cuales pueden presentar un punto de cromatina anillo en
engarce de rub o dos puntos de cromatina, en forma de sonrisa feliz y formas semejando una coma o signo
de interrogacin con un punto de cromatina, pueden encontrarse en el borde del eritrocito en forma de
appliques, en algunos casos llegan a rebasar la membrana celular y adoptan la forma de palillo de
tambor. Las manchas de Maurer aparecen en estadios maduros y generalmente cuando las parasitemias son
altas.
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Esquizontes: Los que muy raras veces salen a la sangre perifrica y pueden generar entre 18 - 32
merozoitos. Aparecen en pacientes con parasitemias altas, en cuadros severos, pueden ser incontables y son
indicadores de mal pronstico.
Gametocitos: Formas sexuadas que asemejan a una salchicha o una banana y pueden ser pequeas o
grandes, en algunas ocasiones se encuentran redondas, es frecuente observar la membrana del glbulo rojo
durante la maduracin del gametocito.
Grfico N 3
Por lo general solo se observan trofozoitos jvenes y gametocitos en sangre perifrica de Plasmodium
falciparum.
En el glbulo rojo y en sangre perifrica: Esta especie tiene cierta preferencia por los glbulos rojos ms
jvenes los cuales se agrandan con facilidad y su forma puede variar de redonda, oval a ligeramente
ameboide en estadios maduros. Todos los estadios de P.vivax pueden ser identificados en sangre perifrica.
Los trofozoitos son las formas jvenes de P. vivax, se mueven libremente al interior del glbulo rojo, lo que
da origen a prolongaciones del citoplasma, por lo cual se pueden observar numerosas y variables formas de
trofozotos que van desde formas anulares, pequeos, medianos y grandes, ameboides, a manera de
mapas hasta formas muy irregulares principalmente en la formas maduras. Los trofozoitos jvenes
habitualmente miden alrededor de un tercio del dimetro de los glbulos rojos, Los grnulos de Schuffner se
hacen visibles en el parasito desde estadios jvenes hasta los estadios maduros. En cambio, los trofozoitos
adultos adquieren un gran tamao ocupando totalmente el glbulo rojo, presentan una vacuola de gran
tamao y los granos de pigmento se encuentran dispersos en todo el citoplasma
23
Grfico N 4: Caractersticas microscpicas de los trofozoitos de Plasmodium vivax
Los esquizontes se presentan como una masa de citoplasma condensado que contiene varios grnulos de
cromatina y pigmento malrico, pueden presentar de 12 a 24 merozoitos, lo que le da el aspecto de racimo
de uva y que al romperse dar origen a merozoitos eritrocticos que invadirn a otros glbulos rojos. El
esquizonte maduro esta constituido por merozotos bien diferenciados compuestos de una mancha de
cromatina rodeada de una pequea masa de citoplasma con gran cantidad de granulaciones de Schffner.
Grfico N 5: Esquizontes de Plasmodium vivax
Los gametocitos, son formas sexuadas, ovaladas, irregulares, con citoplasma denso y compacto, poseen
adems pigmento malrico muy visible, de color amarillo metlico y su cromatina puede ser central o
perifrica, los grnulos de Schffner tambin son manifiestos en este estadio. Los macrogametocitos son por
lo general grandes y azules y tienen una pequea masa compacta de cromatina excntrica a diferencia de
este los microgametocitos tienen una masa difusa de cromatina que se tie de rosado.
24
A continuacin un cuadro comparativo de las cuatro especies parasitarias.
Invade preferentemente
Primariamente invade Invade las clulas viejas
preferentemente las Glbulos rojos de
Parasita eritrocitos de los reticulocitos y
clulas jvenes. tamao normal o
todas las edades hemates jvenes.
Glbulos rojos de menor. Frecuentemente
Se conserva el tamao Aumentan el tamao de mayor tamao, bordes se tien con mayor
Glbulo rojo
normal del glbulo rojo. los glbulos rojos. desflecados o intensidad. Ocupan a
Ocupan 1/5 a 1/3 del Frecuentemente teido
astillados. Ocupan 2/3 del dimetro,
dimetro. con palidez. Ocupan
a 2/3 del dimetro. aunque por lo general
a 2/3 del dimetro.
se observan como
formas en banda
1
Los individuos adultos en especial suelen desarrollar inmunidad en las regiones endmicas y, en consecuencia, se reduce
la densidad de los parsitos
25
Criterios P. falciparum P. vivax P. ovale P. malariae
(Cuartana)
(Terciana maligno) (Terciana benigno) (Terciana benigno)
Generalmente no Finas, abundantes y Presentes en todos Ausente ; muy
26
Grfico N 6: Comparativo de las distintas especies del Plasmodium spp . en frotis
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Captulo N 2. Determinacin de la Densidad Parasitaria
Es un mtodo simplificado de recuento de parsitos en la gota gruesa, el cual se realiza mediante una clave
de uno a cuatro cruces para indicar el nmero de formas asexuadas por campos microscpicos. En la tabla
No 1 se expresan los resultados de la lectura en cruces y la interpretacin parasitolgica.
Tabla N o 1
Resultados de laboratorio expresado en cruces
2.2 Clculo del nmero de parsitos por microlitro de sangre en gota gruesa.
Es un mtodo prctico y ms preciso de conteo de parsitos por microlitro de sangre (l), se mide cotejando
el nmero de parsitos asexuados (trofozoitos y esquizontes) con relacin a un promedio de leucocitos y al
nmero estndar de leucocitos de 6.000 leucocitos por l de sangre. Para poner en prctica este mtodo se
necesitan dos contadores manuales, uno para contar los parsitos y otro para contar los leucocitos.
Para determinar la densidad parasitaria se debe aplicar los siguientes criterios, segn se presente el caso:
En el caso de contar hasta 200 leucocitos y contar igualmente 10 parsitos o ms, aplicar la
formula de acuerdo al siguiente ejemplo:
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Si despus de contar 200 leucocitos y menos de 10 parsitos han sido identificados y contados,
continuar con el recuento de leucocitos hasta llegar a 500 leucocitos.
En caso de una parasitemia alta, realizar el recuento en funcin del nmero de parsitos,
registrando el recuento hasta 500 y aplicar la frmula con la cantidad de leucocitos encontrados.
DP= 19 x 6.000 = 561.57 redondeando a 562 parsitos por microlitro de sangre. 203
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Captulo N 3. Descripcin del Microscopio ptico
El condensador tiene como funcin reunir los rayos de luz reflejados por el espejo o emitidos por la fuente
de luz (lmpara). Al lado izquierdo del condensador se encuentra un tomillo cremallera con el cual se acerca
o se aleja el condensador de la platina del microscopio. En la parte inferior existe una pequea palanca para
abrir o cerrar el diafragma que sirve para regular la cantidad de luz que pasa al condensador.
Realizar la limpieza superficial diariamente, quitando todo tipo de suciedad que pueda prenderse al
equipo.
Deber limpiarse tambin la parte mecnica con un pao de hilo o franela, sin emplear nunca alcohol
para tal efecto, pues este ataca al esmalte; la gasolina en cambio resulta muy apropiada para limpiar las
piezas esmaltadas pero no as las de goma
La parte mecnica se deber lubricar solamente cuando sea necesario. Emplese vaselina, en todas las
superficies mviles.
El microscopio debe ser cubierto con forro de tela (nunca de plstico sobre todo en medio tropical) en un
sitio fresco poco hmedo para evitar la aparicin de hongos.
No tocar con los dedos las partes internas de los oculares, objetivos ni del condensador.
Si quedan pelusas en el exterior o interior de los oculares y objetivos, quitar estas con un pincel de cerda
fina o con pinza.
El aceite de inmersin se limpia del objetivo con ayuda de gasa humedecida en alcohol o gasolina. No
dejar demasiado tiempo con gasolina el objetivo de inmersin.
Se recomienda el cambio de los objetivos de inmersin idealmente cada 2 aos y como tiempo mximo
cada 10 aos
Tiempo promedio de servicio del foco halgeno (fuente de luz) de 100 hrs.
Si se trata de cambiar bombillas halgenas, nunca agarre con las manos directamente o en caso contrario
lmpielas con alcohol.
31
Una vez concluido el trabajo habr de limpiarse bien todas las partes del microscopio.
32
Captulo N 4. Pruebas de Diagnstico Rpido de Malaria
Las pruebas rpidas para el diagnstico de la malaria denominadas tambin pruebas inmunocromatogrficas
(ICT) o pruebas de diagnstico rpido (PDRs), se basan en la deteccin de antgenos presentes en los
parsitos del gnero Plasmodium spp. mediante reacciones antgeno-anticuerpo que se traducen sobre tiras
de nitrocelulosa (inmunocromatografa). Estas pruebas alcanzan de forma general niveles de sensibilidad y
especificidad ptimos mayores al 90% con relacin a la gota gruesa. Son pruebas muy fciles de realizar,
rpidas, sensibles y no precisan microscopio. Estas pruebas de ninguna forma sustituyen al frotis y la gota
gruesa, ya que tienen limitaciones, puede presentar resultados falsos negativos o falsos positivos y no son
cuantitativos. El uso de las PDRs puede ser efectivo en las siguientes circunstancias:
i) En zonas donde el servicio de laboratorio existente no garantiza un diagnstico oportuno y de
calidad.
ii) En zonas donde no existen servicios de diagnstico.
iii) Regiones donde no se tiene personal capacitado en el diagnstico microscpico de la malaria.
4.1 Fundamento de las pruebas rpidas para el diagnstico de la malaria.
Las PDRs contienen una tira de papel revestida por una membrana de nitrocelulosa, en la cual se han
impregnado anticuerpos monoclonales o policlonales especficos para ciertos antgenos de las cuatro
especies del gnero Plasmodium spp. que parasitan al hombre. Constan de una banda que se encuentra
impregnada con anticuerpos anti-P. falciparum (protena 2 rica en histidina, HRP2) y se basan en la deteccin
de HRP2 del plasmodium. Estas PDRs son de uso comercial y entre ellas tenemos: Parasight test, Malar-
Check Pf Paracheck, ICT AMRAD Pf/Pv, etc.
Otras PDRs se encuentran impregnadas con anticuerpos anti - isoenzima Lactato deshidrogenada (LDH)
que permite diferenciar la especie del parsito, P. falciparum del P.vivax, entre ellas tenemos: prueba
OptiMAL- IT, CareStare, ect. En nuestro pas, la utilizacin de PDRs en el diagnstico de la malaria en reas
endmicas por P. vivax ha demostrado que la prueba OptiMAL-IT tienen una alta sensibilidad y especificad
para el diagnstico de esta especie2.
La enzima pLDH expresa altos niveles durante el estadio eritroctico del parsito, por tanto revela la
presencia del parasito vivo. En cambio la HRP2, es un antgeno parasitario que puede seguir circulando en la
sangre hasta por 72 horas despus de negativizarse la gota gruesa, de manera que no revela la presencia del
parasito vivo, fenmeno conocido como perodo de antigenemia.
Existen otros antgenos que estn presentes en las cuatros especies del Plasmodium spp., que son
utilizados en combinacin con la deteccin de la HRP2. Estos se denominan antgenos panmalricos.
Los anticuerpos monoclonales pueden ser inmunoglobulinas de tipo Ig G e Ig M. La reaccin antgeno -
anticuerpo utiliza un conjugado que contiene sulfonamidas y oro coloidal (ICT), ligadas a un colorante para
fijar la reaccin.
La sensibilidad de OptiMAL IT disminuye cuando la parasitemia es menor a 50 100 parsitos /l.
Limitaciones.
No es posible diferenciar infecciones mixtas
No permite cuantificar la densidad parasitaria
No detecta parasitemias bajas, principalmente en los casos asintomticos de la infeccin.
No permite realizar el seguimiento y conocer la evolucin de la enfermedad con la instauracin del
tratamiento
2
Informe IAM Prosin Evaluacin del Efectividad de las Pruebas Rpidas para el Diagnstico y Tratamiento de la Malaria, usadas por Colaboradores
Voluntario de Salud, en Poblacin Recolectora de Castaa de la Regin Amaznica Boliviana, 2004 2005
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Captulo N 5. Control de Calidad
El SGCDM est dirigido tambin a orientar, reducir los errores, garantizar la reproductividad de los procesos,
estandarizar los mecanismos operacionales de sus componentes, los cuales se citan a continuacin:
1. Supervisin
2. Capacitacin
3. Monitoreo
4. Evaluacin y certificacin de rendimiento y de competencias a travs de los programas de
Control de Calidad:
Programa de Evaluacin Externa del Desempeo
Programa de Control de Calidad Indirecto
Como se cit anteriormente el SGCDM comprende dos programas de evaluacin, de los cuales el primero, la
Evaluacin Externa de Desempeo, tiene la finalidad de evaluar a los funcionarios con relacin a las
competencias y destrezas en el diagnstico microscpico de malaria, mediante paneles de lminas
estandarizados. El segundo componente, el Control de Calidad Indirecto, est dirigido a evaluar la calidad
tcnica del procesamiento de las muestras hemticas obtenidas por los funcionarios en forma rutinaria en los
distintos niveles de la red.
Los grupos de paneles deben ser uniformes entre s respecto a las caractersticas de las lminas de
forma que la evaluacin sea comparable, esto podr conseguirse utilizando sangre de un mismo paciente
para elaborar varias lminas
Laminas con diferentes densidades parasitarias
Lminas con infecciones mixtas
Lminas negativas
El nmero de lminas por panel no deber ser menor a cinco lminas, pudiendo ser ms. Por ejemplo, un
panel de cinco lminas estar compuesto por las siguientes muestras:
a. 1 lmina negativa
b. 1 lmina de Plasmodium falciparum con una densidad parasitaria <100 p/mm3
c. 1 lmina de Plasmodium vivax con densidades parasitarias < 100p/mm3
d. 1 lmina de Plasmodium vivax con densidades parasitarias >100p/mm3
e. 1 lmina con infeccin mixta por P. vivax y P. falciparum
34
El patrn anteriormente citado, podr variar de acuerdo al perfil epidemiolgico de cada regin.
Todas las lminas deben ser de calidades ptimas y procesadas de acuerdo a los procedimientos
estandarizados.
Cada caso deber contar con informacin clnico-epidemiolgica y antecedentes del paciente
(descripcin breve)
Las lminas en los paneles debern ser identificadas segn sistema de codificacin diferenciado por
laboratorio. Tal informacin debe ser manejada en forma confidencial y ser de conocimiento exclusivo
del nivel inmediatamente superior.
Adjuntar una carta en la que se especifique el plazo del lmite para presentacin de resultados y
devolucin de material de evaluacin, el envo de los paneles es responsabilidad del Laboratorio Nacional
de Referencia de Diagnstico de malaria(LNRDM)-Laboratorio de Parasitologa del Instituto Nacional de
Laboratorios de Salud (INLASA)en coordinacin con la Estrategia Nacional de Vigilancia y Control de la
Malaria, debiendo los niveles evaluados, notificar inmediatamente al LNRDM la recepcin de los mismos.
El plazo de respuesta no ser mayor a un mes despus de recibido el material para la EED.
El envo de los paneles, en todo momento debe ser realizado cumpliendo las normas de bioseguridad
vigentes en el pas.
En caso de extravi de los paneles de evaluacin se deber notificar inmediatamente al nivel superior
correspondiente y en caso necesario deber repetirse la evaluacin al laboratorio respectivo.
Los niveles evaluados debern llenar los formularios de registros de resultados segn instructivo, los
cuales debern ser remitidos a nivel central junto al material respectivo.
La EED podr ser realizada de forma directa in situ durante las actividades de visita o supervisin de los
laboratorios de la red, cumpliendo los criterios metodolgicos anteriormente sealados.
La nueva metodologa del CCI tiene criterios simples y comprende la revisin de un nmero mnimo de
lminas y garantiza la disminucin de la carga de trabajo de los evaluadores. El fin de este programa es
evaluar la capacitad individual de los microscopistas, en la toma y procesamiento de la gota gruesa/ frotis que
realizan rutinariamente. La metodologa se basa en la proporcin de acuerdos o desacuerdos existentes entre
los resultados de la primera lectura del laboratorio evaluado y los resultados de la segunda lectura efectuada
por el laboratorio evaluador. La seleccin de muestras tiene las siguientes caractersticas:
El CCI se realizar en toda la red de laboratorios de diagnstico de malaria y debe ser efectuada desde el
nivel superior al nivel inferior correspondiente (Nivel IV a nivel III, ste al nivel Il y nivel II a nivel I).
La evaluacin se llevar a cabo trimestralmente por lo que el laboratorio evaluado deber enviar al
laboratorio evaluador, el 100% de las muestras obtenidas en los tres meses correspondientes al periodo
de evaluacin.
Los laboratorios evaluados enviarn junto al 100% de muestras hemticas procesadas durante un
trimestre, los Formularios de Registro Individual para Malaria correspondientes. Adems de lo citado, los
microscopistas debern informar la tcnica utilizada en el procesamiento de las muestras reportadas.
Las muestras enviadas, no deben ser marcadas como positivas o negativas ni indicar la especie
parasitaria encontrada.
Se seleccionarn 10 muestras por cada mes del trimestre evaluado.
En el laboratorio evaluador, una persona que no participe del CCI seleccionar del 100% de lminas
producidas mensualmente y en forma aleatoria, 5 muestras positivas de baja densidad parasitaria (1 o
2 cruces).
En las regiones donde corresponda, de las 5 muestras positivas seleccionadas tres debern ser
infecciones por P. vivax, una por P falciparum y una infeccin mixta. En las regiones donde exista
prevalencia de una sola especie parasitaria, las 5 muestras positivas seleccionadas correspondern a
sta.
35
Tambin se seleccionarn 5 muestras provenientes del total de muestras negativas.
En el caso de laboratorios con produccin mensual menor a 5 muestras positivas, se deber realizar el
control del 100% de stas y la evaluacin del 10% del total de las muestras negativas obtenidas.
Metodolgicamente se recomienda ser ms riguroso en la revisin de muestras en el caso de laboratorios
donde se tenga menor produccin de muestras hemticas.
Los resultados del CCI deben ser registrados en el formulario respectivo.
Una buena gota gruesa tiene las siguientes caractersticas: a simple observacin, debe ubicarse en el centro
de una de las mitades del portaobjetos, estar completa, medir mnimamente 1 cm. de dimetro, y al
microscopio, no se deben observar glbulos rojos ni restos de hemoglobina, debe tener fondo claro y una
concentracin adecuada de 10 a 20 leucocitos por campo.
El frotis debe ocupar la otra mitad del porta objetos. Un buen frotis debe ser delgado y constar de 3 partes:
cabeza, cuerpo y cola sin que existan cogulos, restos de grasa o partculas. Microscpicamente se deber
visualizar una sola capa de elementos formes separados entre s.
3. Calidad de la Coloracin:
ptima: La calidad de la coloracin debe ser uniforme, los eritrocitos deben tener una
tonalidad entre rosado naranja (Giemsa) o azul plido (Romanowsky), y leucocitos
evidenciarn un ncleo violeta oscuro y citoplasma azul.
Tanto en el frotis como en la gota gruesa es importante que se puedan distinguir los
parsitos con su cromatina (ncleo) de color rosa intenso (Giemsa) o violeta
(Romanowsky), su citoplasma deber ser de color azul. En el caso de P. vivax
presentar granulaciones oscuras y el pigmento malrico se ver de color amarillo
oscuro o ligeramente caf. Tanto la gota gruesa como el frotis no deben tener residuo
de colorante ni precipitados.
Regular: En el caso de coloraciones regulares se pueden encontrar deficiencias en las
caractersticas citadas en el prrafo anterior, las cuales podrn dificultar la identificacin
tanto de formas celulares como de parsitos.
Deficiente: Una coloracin deficiente no permite la identificacin de los componentes
celulares de una muestra hemtica y por sobretodo, dificulta la distincin de las
caractersticas morfolgicas.
36
5.3 Anlisis de los Resultados
Todos los criterios descritos anteriormente sern calificados segn las caractersticas que presenten las
muestras evaluadas. La calificacin asignada en el proceso ser de 2 puntos cuando la calidad sea
ptima , de 1 punto cuando se considere regular y de 0 cuando sta sea deficiente .
a = N total de placas Verdadero Positivas: Muestras positivas reportadas en los registros como
positivas b = N total placas Falso Positivas: Muestras negativas reportadas en los registros como
positivas
c = N total placas Falso Negativas: Muestras positivas reportadas en los registros como negativas
d = N total de placas Verdadero Negativas: Muestras negativas reportadas en los registros como
negativas
Calcular y registrar los resultados de la sensibilidad y de especificidad aplicando las siguientes formulas:
Sensibilidad: (Verdadero Positivas / Verdadero Positivas + Falso Negativas) x 100 =
Especificidad:(Verdadero negativas / Verdadero Negativas + Falso Positivas) x 100 =
Concordancia en especie:(Puntaje total obtenido / Puntaje ideal) x 100 =
Concordancia en estadio: (Puntaje total obtenido/ Puntaje ideal) x 100 =
El anlisis de los resultados de los criterios evaluados sobre la Calidad tcnica del procesamiento de las
muestras gota gruesa / frotis se realizarn de acuerdo al siguiente clculo
Columna N 11: Anotar el puntaje obtenido asignando 3 puntos cuando el resultado sea correcto o se trate
de una monoinfeccin y cuando se identifiquen las 2 especies parasitarias en una infeccin mixta; (2) cuando
en una infeccin mixta se identifique solamente P. falciparum y NO P. vivax; (1) en el caso contrario, cuando
se identifique solamente P.vivax y NO P. falciparum (0) cuando el resultado sea incorrecto.
Columna N 12 -14: Marcar con una X en las casillas correspondientes de acuerdo a los estadios
parasitarios que se identifiquen: Trofozoitos, Esquizontes y Gametocitos y (-) en la caso de no estar
presentes.
Columna N 12- 15: Se asigna el valor de 1 punto para cada casilla y 3 puntos como puntaje ideal total.
Columna N 16: Se anotara un punto para cada casilla con resultado correcto y que se trate de una
monoinfeccin y (0) cuando el resultado sea incorrecto
Columna N 17: Registrar la Densidad Parasitaria en p/ul de sangre de acuerdo a
normas. Columna N 18: El puntaje ideal asignado ser de 1 punto para cada una de las
casillas.
Columna N 19: Se asigna el valor de 1 punto considerando que la concordancia de la densidad parasitaria
sea menor o igual a un 10% y 0 puntos si la concordancia es mayor al 10%
3ra Parte. Anlisis de los Resultados. Seccin correspondiente al laboratorio evaluador. Cotejar los
resultados de las lecturas del laboratorio evaluado versus los del laboratorio evaluador:
En la parte correspondiente a Calificacin Final determinar: (Puntaje Obtenida / Puntaje ideal) x 100 = (
) y registrar los resultados en los espacios correspondientes a las columnas de resultado, especie, estadio y
de la densidad parasitaria
Clasificar los resultados de las lecturas considerando los siguientes criterios:
a = N total de placas Verdadero Positivas: Muestras positivas reportadas en los registros como
positivas b = N total placas Falso Positivas: Muestras negativas reportadas en los registros como
positivas
c = N total placas Falso Negativas: Muestras positivas reportadas en los registros como negativas
d = N total de placas Verdadero Negativas: Muestras negativas reportadas en los registros como
negativas Calcular y registrar los resultados de la sensibilidad, especificidad, concordancia en especie y en
estadio aplicando las siguientes formulas:
En la ltima parte de esta seccin anotar los datos que identifican al laboratorio evaluado y al evaluador
40
INSTRUCTIVO DEL FORMULARIO DE CONTROL DE CALIDAD INDIRECTO
Columnas N 4-8: Estos espacios estn destinados para anotar los resultados del laboratorio evaluador.
Columna N 4: Marcar con una X en la casilla que corresponda de acuerdo a la infeccin parasitaria
identificada, monoinfeccin, infeccin mixta o Negativo.
Columnas N 5-7: Estas casillas estn orientadas a evaluar el procesamiento tcnico de la muestra. Cada
uno de los criterios debern ser evaluados de acuerdo a la siguiente escala de calificacin: anotar 0 en caso
de ser Deficiente, 1 que ser = a Regular y 2 que ser = a ptimo
Columna N 8: Anotar la densidad parasitaria registrada por el laboratorio evaluador expresada en p/ul de
sangre.
Observaciones. En esta parte se debe anotar cualquier aspecto que usted considere relevante durante la
evaluacin y con relacin a la calidad diagnstica o tcnica de la muestra hemtica
3ra Parte. Anlisis de los resultados.
A. Calidad Diagnstica. Cotejar los resultados de las lecturas del laboratorio evaluado versus los del
laboratorio evaluador y clasificarlos de acuerdo con los siguientes criterios:
a = N total de placas Verdadero Positivas: Muestras positivas reportadas en los registros como
positivas b = N total placas Falso Positivas: Muestras negativas reportadas en los registros como
positivas
c = N total placas Falso Negativas: Muestras positivas reportadas en los registros como negativas
d = N total de placas Verdadero Negativas: Muestras negativas reportadas en los registros como negativas
Calcular y registrar los resultados de la sensibilidad y de especificidad aplicando las siguientes formulas:
Sensibilidad: (Verdadero Positivas / Verdadero Positivas + Falso Negativas) x 100 =
Especificidad:(Verdadero negativas / Verdadero Negativas + Falso Positivas) x
43
BILBIOGRAFA.
3. Gilles H.M y Warrel D.A. Bruce-Chwatts essential malariology. Cap 2(12-34); Tercera edicin. USA.
1993
7. Manual de Tcnicas Bsicas para un Laboratorio de Salud. , serie PALTEX para tcnicos medios y
auxiliares, Vol . 2; No 439.
8. Boquet, JE, Boquet FM, Carren MJ. El Paludismo, etiologa, diagnstico y profilaxis. Situacin en
Bolivia. Sociedad Boliviana de Patologa ;2001
10. Curso de Capacitacin sobre Normas para el buen Manejo y Mantenimiento de Microscopios pticos.
Instituto Nacional de Laboratorios de salud (INLASA). Laboratorio Nacional de Referencia en
Bacteriologa Clnica (LNRBC), 2007.
11. WHO, SEARO/WPRO Workshop on Quality assurance for Malaria Microscopy. Malaria Light
Microscopy, Creating a Culture of Quality. Malaysia; Abril, 2005.
12. World Health Organization, Headquarters. Informal Consultation on Quality Control of Malaria
Microscopy. Geneva; Marzo, 2006
13. Propuesta de un grupo Tcnico, Gua para la Implementacin de un Sistema de Gestin de Calidad
en el Diagnstico Microscpico de la Malaria, Estandarizacin de procedimientos y herramientas
sobre el control de calidad y la evaluacin externa del desempeo en las rede de laboratorio.
Caracas, Venezuela, Julio de 2004.
14. Peeling WR, Smith GP, Bousuyt MP. Evaluation Diagnostics: A guide for diagnostic evaluations,
septiembre 2006
15. Okada K, Banco Interamericano de Desarrollo. Manual de Administracin de la Calidad Total y
Crculos de Control de calidad. Octubre 2003.
16. Greenberg RS, Epidemiologa mdica; Pruebas para diagnstico. Cap. 6(81-95); Mxico; 1ra edicin.
1995
17. Hunt CA, Chiodini LP, Doherty T, Moody HA, Ries J, Pinder M. Comparison Of A Parasite Lactate
Deshydrogenase-Based Inmunochromatogrphic Antigen Detection Assay(OPTIMAL) With Microscopy
For The Detection Of Malaria Parasites In Human Blood Samples. Am J trop Med Hyg 1999;
60(2):173-176.
18. Zavalaga LF, Villacorta VJ, Reyes LR, Lecca GL, Mendoza RD, Mayca PJ, Velsquez H J.
Evaluacin De La Prueba ICT Malaria P.f/P.v(AMRAD) Para La Deteccin De P. falciparum Y P. vivax
en una Zona Endmica De La Amazona Peruana. Rev Peru Med Exp Salud Pblica 2002; 19(1):39-
43.
19. PalmerJC, Lindo FJ, Klaskala IW, Quesada AJ, KaminsKy R, Baum KM, Ager LA. Evaluation Of The
Optimal Test For Rapid Diagnosis Of Plasmodium vivax And Plasmodium falciparum Malaria. Journal
Of Clinical Microbiology 1998; 36(1): 203-206
20. Gatti S, Bermuzzi MA, Bisoff Z,Raglio A, Matteelli A, Scaglia Massimo, SIRL. Studio Multicentrico
Sulla Sensibilita E Especificita Del Test Inmunocromatografico ICT Malaria P.f/P.v Vs. Lmoscopia
Clsica In Pazienti Con Infezione Malarica Dmportazione. Giornale Italiano Di Medicina Tropicale
2001; 6(2,2): 53-54
21. Fryauff JD, Purnomo, Mochammad A, sutamihardja, Iqbal R, Elyazar, Susanti I, Krisin, Subianto B,
Marwoto H. Performance Of The Optimal Assay For Detection An Identification Of Malaria Infection In
Asymptomatic Residents Of Irian Jaya, Indonesia. Am J trop Med Hyg 2000; 63(3,4):139-145
22. Coleman ER, Maneechai N, Rachapaew N, Kumpitak Ch, Soyseng I, Miller SR, Thimasarn K,
Sattabongkot J. Field Evaluation Of The ICT Malaria Pf/Pv Inmunochromatographic Test For The
Detection Of Asymptomatic Malaria In A Plasmodium falciparum/vivax Endemic Area In Thailand. Am
J trop Med Hyg 2002; 66(4): 379-383.
23. Avila EP, Kirchgatter K, Drunialti SC, Olieira MA, Siciliano F.Rinaldo, Di Santi MS. Evaluation Of A
Rapid Dispstick Tes, Malar-Chek, For The Diagnosis Of Plasmodium falciparum Malaria In Brazil. Rev
Inst Med trop S Paulo 2002; 44(5):293-296.
24. Figueiredo FFA, Figueredo CM, Nascimento MJ, Pachiano CSV, Marins PM, Dantas MLR.
Performance Of An Inmunochromatography Test For vivax Malaria In The Amazon Region, Brazil.
Rev Sade Pblica 2003; 37/3): 390-392.
25. Tarazona SA, Zerpa SL, Requena MD, Cuentas LA, Magill A. Evaluation Of The Rapid Diagnostic
Test Optimal) For Diagnosis Of Malaria Due To Plasmodium vivax. The Brazilian Journal of Infectious
Diaseases 2004; 8(2): 151-155
26. Iqbal J, Hira RP, Sher A, Ass AA. Diagnosis Of Imported Malaria By Plasmodium Lactate
Dehydrogenase (pLDH) And Histidine-Rich Protein 2(PfHRP2) Based Inmunocapture Assay. Am J
Trop Med Hyg 2001; 64(1,2): 20-23
45
27. Jelinek T, Grobusch MP, Schwenke S, Steidl S, Sonnenburg VF, Nothdurft HD, Klein E, Loscher T,
Sensitivity And Specificity Of Dipstick Test For Rapid Diagnosis Of Malaria In Noinmune Travelers.
Journal of Clinical Microbiology 1999 marzo; 37(3):721-723
28. Park KS, Lee WK, Hong HS, Kim SD, Lee HJ, Jhon HB, Kim SW, Shim JH, An HS, Park H.
Development Kit For The Detection of Antibody To Plasmodium vivax Infection In South Korea. Yonsei
Medical Journal 2003; 44(4): 747-750.
29. Coleman ER, Maneechal N, Ponlawar A, Kumpitak C, Rachapaew N, Miller R, Sarrabongkot J. Short
Report: Failure Of The Optimal Rapid Malaria Test As A Tool For The Detection Of Asymptomatic
Malaria In An Area Of Thailand Endemic For Plasmodium falciparum And P. vivax. Am J Trop Med
Hyg 2002; 67(6):563-565
30. Roper MH, Carrion RT, Gava GC, Andersen EM, Guarda A, Calampa C, Hightower AW, Magill AJ.The
Epidemiology of Malaria in an Epidemic Area of the Peruvian Amazon. Am. J. Trop. Med. Hyg 2000;
62: 247-256.
31. Roshanravan B, Kari E, Gilman HR, Cabrera L, Lee E, Metcalfe J, Calderon M, Lescano AG,
Montenegro HS, Calampa C, Vinetz MJ. Endemic Malaria in the Peruvian Amazon Region of Iquitos.
Am. J.Trop. Med. Hyg.2003; 69: 45-52
32. Coleman R, Maneechai N, Rachaphaew N, Kumpitak Ch, Scott RM, Soyseng V, Krongthong T,
Sattanbongkot. Comparison of Field and Expert Laboratory Microscopy for Active Surveillance for
Asymptomatic Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax in Western Thailand. Am. J. Trop. Med.
Hyg 2002; 67: 141-144
33. Joseph M, Vinetz, Robert H. Gilman. Asymptomatic Plasmodium Parasitaemia and The Ecology of
Malaria Transmission. Am. J. Trop. Hyg. 2002; 66: 639640
46
47
ANEXO EDITORIAL
48
49
Bolivia Digna, Soberana, Democrtica y
Productiva
PARA VIVIR BIEN
50