El nacimiento de una nueva era

En la dcada de 1950 se descubri que los genes no eran nada ms y nada menos que cadenas de nucletidos. Un
descubrimiento que parece tan sencillo desencaden, sin embargo, el nacimiento de una nueva era: la de la tecnologa del ADN
recombinante.

La primera molcula de ADN recombinante fue creada por Paul Berg, a comienzos de los 70. Para aquella poca, los bilogos
moleculares haban aprendido a alterar genes individuales, cortar y pegar pedazos de ADN de diferentes organismos y moverlos
de uno a otro.

Otros pioneros de esta tecnologa fueron Stanley Cohen, un genetista estadounidense, y Herbert Boyer, un bioqumico de la
misma nacionalidad. Cohen estaba interesado en aprender cmo los genes de plsmidos otorgan resistencia a las bacterias y
Boyer trabajaba con enzimas de restriccin (ver apartado 3.3.), por lo que decidieron trabajar juntos en la combinacin de dos
plsmidos resistentes a antibiticos diferentes para crear una bacteria resistente a ambos.

Qu es la tecnologa del ADN recombinante?

ADN recombinante es una molcula que proviene de la unin artificial de dos fragmentos de ADN. Por lo tanto, la tecnologa de
ADN recombinante es el conjunto de tcnicas que permiten aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulacin e
insercin en otro diferente. De esta manera podemos hacer que un organismo (animal, vegetal, bacteria, hongo) o un virus
produzcan una protena que le sea totalmente extraa.

Estas tcnicas se emplean normalmente para la produccin de protenas en gran escala, ya que podemos hacer que una bacteria
produzca una protena humana y lograr una superproduccin, como en el caso de la insulina humana, que actualmente es
producida por bacterias en grandes recipientes de cultivo, denominados biorreactores. Como las bacterias se multiplican muy
rpidamente y pueden expresar grandes cantidades de protenas, es posible lograr una sobreproduccin de la protena deseada.
A esto justamente se dedica la biotecnologa, es decir a la utilizacin de organismos vivos o de sus productos con fines prcticos.

El desarrollo de la tecnologa del ADN recombinante fue posible gracias a varias lneas de investigacin: 1) el conocimiento de las
enzimas de restriccin, 2) la replicacin y reparacin de ADN, 3) la replicacin de virus y plsmidos y 4) la sntesis qumica de
secuencias de nucletidos.

Cmo cortar y pegar el ADN? Tijeras moleculares: enzimas de restriccin

En 1975 Daniel Nathans y Hamilton O. Smith descubrieron un tipo de protenas las enzimas endonucleasas o enzimas de
restriccin que actan como "tijeras moleculares", cortando la doble cadena de ADN a travs del esqueleto de fosfatos sin
daar las bases. El descubrimiento de estas enzimas condujo a dichos microbilogos al Nobel en 1978 y dio origen a la ingeniera
gentica.

Las enzimas de restriccin son producidas por bacterias como mtodo de defensa contra virus y degradan el ADN extrao.

A su vez, el propio genoma bacteriano est protegido contra sus enzimas de restriccin mediante metilaciones (es decir, el
agregado de un grupo metilo [-CH3]) en un tomo especfico de ciertos nucletidos.

Estas molculas son indispensables para la ingeniera gentica, ya que producen fragmentos que se pueden unir entre s
fcilmente (con la ayuda de un "pegamento molecular": la enzima ligasa).

Las enzimas de restriccin cortan dejando extremos cohesivos o romos. Los extremos cohesivos son generados cuando la enzima
corta las dos hebras asimtricamente, dejando los extremos de cada hebra de simple cadena complementarios entre s. Por otro
lado, los extremos romos son generados cuando la enzima corta las dos hebras por el mismo lugar, generando dos extremos
doble cadena.
 Figura 1. Enzimas de restriccin. Este tipo de endonucleasas puede dejar dos tipos de extremos. En el primer caso, el corte genera
nucletidos de simple cadena llamados extremos cohesivos. Estos extremos se pueden unir por medio de otra enzima, la ADN
ligasa. En el segundo caso, se generan extremos doble cadena (extremos romos). Estos extremos tambin pueden ser unidos con
la ayuda de una enzima ligasa pero, como no los extremos no son complementarios, la unin ser ms inespecfica.

Las enzimas de restriccin permiten cortar el genoma de cualquier organismo en pequeos fragmentos llamados fragmentos de
restriccin. La coleccin de miles o millones de estos fragmentos se llamabiblioteca gnica.

Cmo introducir ADN recombinante en las bacterias?

Una vez que los bilogos encontraron cmo fabricar ADN recombinante usando enzimas de restriccin y ligasas, el desafo
siguiente fue cmo producir grandes cantidades de genes y cmo introducirlos en bacterias u otras clulas husped. El primer
problema fue solucionado con el uso de plsmidos, pequeas molculas de ADN circular presente en muchas bacterias.

Los plsmidos contienen uno o ms genes de resistencia a antibiticos y son capaces de autorreplicarse, ya que contienen una
secuencia de iniciacin. Esto les permite replicarse de manera independiente del ADN genmico.

Podemos crear una molcula de ADN recombinante usando un plsmido. Este proceso consta de las siguientes etapas:

1. Cortamos el ADN circular del plsmido con enzimas de restriccin, para generar extremos cohesivos.
2. Cortamos el ADN que queremos multiplicar. Debemos asegurarnos de que los extremos del plsmido y los del ADN a
insertar sean complementarios y puedan unirse.
3. Unimos el gen que queremos introducir (inserto) por medio de la enzima ADN-ligasa y luego introducimos el plsmido
con inserto en bacterias.
4. Seleccionamos las bacterias que hayan introducido el plsmido con la ayuda de antibiticos. Dado que los plsmidos
contienen un gen de resistencia a antibitico, al exponer las bacterias a ese antibitico, solo las que hayan incorporado
el plsmido (y con l la resistencia) sobrevivirn, mientras que las que no lo tengan morirn.

Esta es una manera relativamente eficaz de obtener millones de copias del ADN incorporado. Dado que todas las copias del gen
provienen de una sola molcula multiplicada a partir de una nica bacteria que dio origen a la colonia, esta tcnica lleva el
nombre de clonacin. El trmino clon proviene de la jardinera; desde hace siglos los jardineros generan plantas nuevas a partir
de gajos. Estas plantas son genticamente idnticas y constituyen un clon.

Un clon es un grupo de clulas u organismos genticamente idnticas.

Fuente: recuperado de http://www.educ.ar/recursos/ver?rec_id=91636 (revisado el 3 de abril del 2015).

Despus de leer, los estudiantes responden las siguientes preguntas:

1. Qu es la biotecnologa?
2. Qu son las enzimas?
3. Cmo se forma un plsmido recombinante?
4. Cmo se obtiene el ADN recombinante?
5. Se puede usar en la obtencin de las vacunas?
6. Se puede usar en la agricultura, en la salud, en la alimentacin?