Bioquimia

Volumen Nmero Junio

Volume 27 Number 2 June 2002

Artculo:

Clculo de la incertidumbre asociada al

resultado de la medicin de glucosa

Derechos reservados, Copyright 2002:

Asociacin Mexicana de Bioqumica Clnica, AC

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METROLOGA
Clculo de la incertidumbre asociada al resultado de
la medicin de glucosa
Alejandro Prez-Castorena*1 , Alicia Guevara-Hernndez2
1
rea de Metrologa de Materiales, Centro Nacional de Metrologa. 2 Divisin Materiales Orgnicos, Centro Nacional de Metrologa.
*Sobretiros: km 4.5 carretera a los Cus Municipio El Marques, CP 76241, Quertaro Mxico. e-mail: aperezx@cenam.mx
RESUMEN
El propsito de este trabajo es presentar de la manera ms clara
posible la estimacin de la incertidumbre asociada a la medicin
de una magnitud qumica, empleando la ley de propagacin de
incertidumbres, a travs de un ejemplo sencillo de medicin de
glucosa que muestra la forma de identificar, analizar y estimar
las contribuciones de los diferentes componentes de
incertidumbre que estn involucradas en una medicin qumica.
Adems, se describe conceptualmente el modelo de medicin,
los conceptos de error, error relativo, error sistemtico y su
diferencia respecto de la incertidumbre.
Palabras clave. Medicin, metrologa, valor verdadero,
incertidumbre de medicin, error aleatorio, Mtodo de
evaluacin tipo A de la incertidumbre, Mtodo de evaluacin
Tipo B de la incertidumbre, error, error sistemtico, trazabilidad.
Introduccin
Una gran cantidad de decisiones estn basadas en los resultados
provenientes de mediciones qumicas, estos resultados se emplean
en la emisin de diagnsticos, determinacin de rendimientos
qumicos, verificacin de los valores de una propiedad de un material
respecto de especificaciones o lmites normativos, aceptacin o
liberacin de productos, aplicacin de regulacin ambiental, entre
otras. Independientemente de las decisiones que se tomen con
base en los resultados, se requiere tener una indicacin sobre la
calidad de stos y de su fiabilidad para el propsito al que estn
destinados. Actualmente hay una necesidad o requerimiento formal,
por parte de los laboratorios que realizan mediciones qumicas, de
implantar medidas que permitan asegurar la capacidad de
proporcionar datos con la calidad requerida por los usuarios. Estos
requerimientos implican el uso de mtodos validados de anlisis,
edigraphic.com
uso de procedimientos de control de calidad internos, participacin
en pruebas de aptitud tcnica (conocidas en qumica clnica como
esquemas de evaluacin externa de la calidad), acreditacin con
base en la gua ISO 17025, establecimiento de trazabilidad de los
resultados de las mediciones y en consecuencia el clculo de la
incertidumbre asociada al resultado de dichas mediciones (todos
32
Recibido: 03/09/2001 Aceptado: 15/05/2002
ABSTRACT
The aim of this paper is to show the methodology of the
determination of uncertainty related to the measurement of a
chemical quantity, using the law of propagation, through a
simple example of glucose determination that shows the way
of identification, analysis and evaluation of the contribution
of different components of uncertainty which are involved in
a chemical measurement. Besides, the model of measurement
and error concepts (systematic and random) are described
conceptually , in order to be able of distinguish them from the
uncertainty concept.
Key words. Measurement, metrology, true value, uncertainty of
measurement, random error, Type A method of uncertainty
evaluation, Type B method of uncertainty evaluation, error,
systematic error, traceability.
stos son elementos que forman parte de la metrologa en qumica);
por lo cual en este artculo se presenta la forma de tener una
indicacin de la calidad de las mediciones a travs de la evaluacin
de la incertidumbre asociada al resultado de una magnitud qumica,
la concentracin de glucosa.
1. Medicin
La medicin, se define como el conjunto de operaciones que tienen
la finalidad de asignar un valor a una magnitud especfica 1. La
metrologa es el campo del conocimiento relativo a las mediciones.
Siendo sus principales temas de estudio las unidades de medida y
sus patrones, la medicin, los instrumentos de medicin y aquellas
cualidades referidas a la ejecucin de las mediciones 2. De acuerdo
con esto se puede decir que la metrologa en qumica es el campo
del conocimiento relativo a las mediciones qumicas.
Es til distinguir la diferencia entre tipos de mediciones.
3
Segn J. Mandel las mediciones pueden ser de tres tipos: (1).
medicin de constantes fundamentales; (2) mediciones fsicas y
qumicas para caracterizar un sistema fsico o un material especfico;
BIOQUIMIA VOL. 27 NO. 2, 32-40, 2002
 CALCULO DE LA INCERTIDUMBRE
y (3) mtodos de control, los cuales pueden ser clasificados como
mediciones, cuyo propsito es diferente al de los dos anteriores, es
decir, el propsito no es establecer un valor de inters intrnseco
sino asegurar que las fluctuaciones del valor de la propiedad que se
mide permanezcan dentro de lmites especficos. En este documento
el principal inters es tratar la estimacin de la incertidumbre
asociada a las mediciones del tipo dos.
Cuando se realiza una medicin de un mensurando1, magnitud
particular sujeta a medicin, con el fin de conocer su valor verdadero
(), se emplea un sistema de medicin (por ejemplo espectrmetro
de masas, cromatgrafo de lquidos, cromatgrafo de gases,
espectrofotmetro, etc.) obtenindose como resultado un valor de
la medicin (y), que difiere en una cantidad () del mensurando.
El valor de la cantidad variar al repetir el experimento de medicin,
es decir, existe una imposibilidad de obtener el mismo valor como
resultado de la medicin del mensurando al repetir el experimento,
lo cual se debe al azar.
Este fenmeno, caracteriza al proceso de medicin como la
variabilidad de un sistema de medicin, generando una duda en el
valor obtenido del mensurando, esta actitud de duda se denomina
incertidumbre de medicin.
La realizacin de un experimento aleatorio (que se define como
aquel en el cual no se puede predecir el resultado aunque se realice
siempre en las mismas condiciones) de medicin de un mensurando,
con algn sistema de medicin, tendr una gran cantidad de resultados
posibles, los cuales en conjunto constituyen lo que se denomina
espacio muestral. A cada uno de estos resultados posibles y, se le
asocia un valor numrico que es el resultado de la medicin. A esta
funcin matemtica que le asocia un valor numrico a un resultado
experimental, se le conoce como variable aleatoria.
De acuerdo a lo anteriormente mencionado, se puede decir que
un sistema de medicin esta caracterizado por un conjunto de
valores posibles de la desviacin . Estos sern los diferentes valores
que toma la variable aleatoria .
4
La ecuacin siguiente, muestra el modelo de medicin que
expresa las ideas anteriores:
yi = + i (1)
En este modelo es el valor del mensurando que se quiere
conocer, edigraphic.com
yi es el resultado de la medicin, y la variable aleatoria
es el error aleatorio de medicin, que representa la combinacin de
diferentes fuentes de error.
El patrn de comportamiento de una variable aleatoria esta
descrito por su distribucin, si es una variable aleatoria continua
ABRIL - JUNIO 2002
su informacin se tiene en una funcin de densidad de
probabilidades f(). De la ecuacin (1) se puede observar que el
comportamiento de esta variable , se hereda a cada resultado de
cada medicin yi, que como consecuencia es tambin una variable
aleatoria con una cierta distribucin, f(y). Se puede decir entonces,
que un sistema de medicin tiene asociada una distribucin de
mediciones, f(y).
Esta relacin entre el sistema de medicin, y una cierta
distribucin, establece una estrecha relacin entre la estadstica y
la metrologa.
2. Incertidumbre
El trmino incertidumbre 1
esta definido como: parmetro, asocia-
do al resultado de una medicin, que caracteriza la dispersin de
los valores que podran ser razonablemente atribuidos al
mensurando.
En mediciones qumicas, generalmente la incertidumbre
asociada al valor de un mensurando tiene diferentes contribuciones
que tienen diferentes orgenes, por ejemplo muestreo, efectos de
matriz, interferencias, temperatura y humedad del medio ambiente
del laboratorio, variabilidad de los instrumentos para medir masa y
volumen, entre otros. Cada una de stas, se conoce como
componente de incertidumbre. Cuando se expresa cada una de
stas componentes como desviacin estndar entonces, se conocen
con el nombre de incertidumbres estndar.
2.1 Mtodos para la evaluacin de la incertidumbre
La contribucin de los diferentes componentes de incertidumbre
identificados en una medicin, se puede evaluar empleando una
de dos maneras 5, las cuales consisten en determinar o asociar una
distribucin de probabilidad (distribucin uniforme, triangular o
normal, caracterizada por su media y varianza) a los valores de
dichos componentes. A continuacin se describen estas formas de
evaluacin:
Evaluacin Tipo A. Es aquella que evala la incertidumbre
por mtodos estadsticos de una magnitud que varia de manera
aleatoria, x i, (concentracin), a partir de una serie de n
observaciones experimentales. En este caso la mejor estimacin de
la incertidumbre estndar de dicha magnitud, se obtiene por medio
de la desviacin experimental de la media de n observaciones.
(xi x )2
s
sx = = n 1 (2)
n n
33

La desviacin experimental de la media se interpreta como la incer-
tidumbre involucrada en el proceso de estimar el valor verdadero
de la magnitud, xi, a partir del promedio de un conjunto n de
mediciones experimentales.
Evaluacin Tipo B. Es aquella que evala la incertidumbre por
medios diferentes al anlisis estadstico de una serie de
observaciones. En este caso la evaluacin de la incertidumbre
estndar se basa en datos o informacin proporcionados por el
proveedor o fabricante, como certificados de materiales de
referencia, certificados de calibracin de instrumentos, catlogos
o manuales y especificaciones tcnicas, entre otros.
Esta evaluacin tipo B tambin puede realizarse empleando el
juicio cientfico o experiencia del analista. La incertidumbre
estimada de esta manera deber combinarse con otras fuentes de
incertidumbre identificadas y cuantificadas empleando los mtodos
de evaluacin tipo A y tipo B.
Para el caso de incertidumbres asignadas a referencias, como
por ejemplo la que corresponde al valor reportado de concentracin
de un material de referencia certificado, sta se encuentra indicada
en el certificado como incertidumbre expandida, es decir, como el
producto de la incertidumbre estndar y un factor de cobertura k cada fuente potencial de incertidumbre identificada. Es posible
correspondiente a un nivel de confianza especfico, que permiten
suponer una distribucin de probabilidad normal para la magnitud
concentracin, (ver seccin 3).
En otros casos por ejemplo, se dispone de informacin
proporcionada por el fabricante (como especificaciones de material
de vidrio) que consiste en los valores de los lmites superior e
inferior entre los cuales puede variar el volumen nominal del material.
En este caso el analista debe asociar a la variable aleatoria (volumen)
con una distribucin a priori, distribucin triangular o rectangular
de probabilidad generalmente.
De acuerdo al prrafo anterior, para la evaluacin de la
incertidumbre estndar deber suponerse que la variable aleatoria
esta descrita por una distribucin especfica, que para el caso de
una distribucin rectangular la expresin que evala la
incertidumbre estndar es:
ai
u ( xi ) = (3)
3
y para una distribucin triangular es:
edigraphic.com
a Y
u ( xi ) = i
6 (4)
34
PREZ CASTORENA Y COL.
donde ai, es el valor del semi-intervalo de variacin de la
desviacin estndar.
2.2 Pasos en la estimacin de la incertidumbre
La estimacin de la incertidumbre asociada con el resultado de
una medicin, es sencilla en principio. Para su estimacin es
necesario seguir cuatro pasos 6 los cuales se describen a
continuacin:
Paso 1
Especificacin del mensurando. Describir o dar un enunciado de lo
que se esta midiendo, incluyendo la relacin entre el mensurando y los
parmetros de los cuales depende, ver regla 1 y 2 en la seccin tres.
Paso 2
Identificacin de las fuentes de incertidumbre. Listar las posibles
fuentes de incertidumbre. Esta debe incluir fuentes que contribuyan
a la incertidumbre de los parmetros especificados en la relacin
mencionada en el paso 1.
Paso 3
Cuantificacin de las fuentes de incertidumbres. Estimar o medir el
tamao de las componentes de la incertidumbre asociadas con
estimar o calcular una sola contribucin asociada con un nmero
de fuentes de incertidumbres separadas.
Paso 4
Clculo de la incertidumbre combinada. La informacin obtenida
en el paso tres, consistir de un nmero de contribuciones
cuantificadas para la estimacin de la incertidumbre total, ya sea
que estn asociadas a fuentes individuales o a efectos combinados
de varias fuentes. Las contribuciones deben expresarse como
desviaciones estndar, y combinarse de acuerdo a las reglas
descritas para obtener la incertidumbre combinada, ver la seccin
3. Finalmente, aplicar el factor de cobertura apropiado para
obtener la incertidumbre expandida.
3. Ley de propagacin de incertidumbres
La incertidumbre total del resultado de una medicin y, denotada
por uc(y), se llama incertidumbre estndar combinada, y es igual
a la raz cuadrada positiva de la varianza total obtenida al combinar
todas las componentes de incertidumbre empleando la ley de pro-
pagacin de incertidumbre 5, ecuacin (2).
(5)
2
[c u ( xi ) ] = i X u ( xi )
2
u c [ y ( x1 , x 2 , x3 ,...)] = i
i i
BIOQUIMIA VOL. 27 NO. 2, 32-40, 2002
 CALCULO DE LA INCERTIDUMBRE

Y El error se considera estar formado por dos componentes, una

ci u ( xi ) = u ( xi ) (6)
X i componente aleatoria y una componente sistemtica.

En donde el producto ciu(xi), representa la contribucin de Error aleatorio, es el resultado de una medicin menos la media
cada uno de los componentes a la incertidumbre total y ci denota que resultara de un nmero infinito de mediciones del mismo
la derivada parcial del mensurando respecto de cada componente, mensurando realizadas bajo condiciones de repetibilidad. El error
mejor conocido como coeficiente de sensibilidad. aleatorio surge de variaciones no predecibles de magnitudes de
influencia. Estos efectos aleatorios generan variaciones en
En algunos casos, la expresin para combinar incertidumbres se observaciones repetidas del mensurando. Lo anterior, es consistente
reduce a dos reglas simples: con el modelo de medicin dado en la ecuacin (1).

Regla 1. Para modelos que involucran solo sumas o restas, Error sistemtico, se define como el componente del error que
y=(x1+x2+x3+...) o y=(x1-x2-x3-...), la incertidumbre estndar combi- durante el curso de un nmero de anlisis del mismo mensurando
nada uc(y) esta dada por la expresin: permanece constante o vara en una forma predecible. Es por lo
tanto independiente del nmero de mediciones realizadas.
(7)

uc [ y ( x1 , x2 , x3 ,...)] = u 2 ( x1 ) + u 2 ( x2 ) + u 2 ( x3 ) + ... Finalmente, la incertidumbre no debe confundirse con el error

en virtud de que la primera proviene de un conjunto de
componentes que contribuyen al valor de la incertidumbre total
Regla 2. Para modelos que involucran un producto o cociente,
asociada al valor del mensurando, y se expresa en la forma de un
y=(x1x2x3...) o y=x3/(x1x2...), la incertidumbre estndar com-
intervalo de confianza, en tanto que error es nicamente la
binada uc(y) esta dada por:
diferencia de una sola medicin y el valor verdadero del mensurando.
(8)
2 2 2 A continuacin, se presenta un ejemplo ilustrativo para estimar
u ( x1 ) u ( x2 ) u ( x3 )
u c [ y ( x 1 , x 2 , x 3 ,...)] = y x + x + x + ... la incertidumbre asociada a la medicin de la concentracin de
1 2 3
glucosa obtenida experimentalmente, durante la medicin de una
muestra de suero o plasma.
Para la mayora de los propsitos en mediciones qumicas, se
emplea la incertidumbre expandida, (U), la cual proporciona un
intervalo dentro del cual se espera se site el valor verdadero de un
mensurando con un nivel de confianza especfico. U se obtiene
5. Evaluacin de la incertidumbre asociada
multiplicando uc(y) por un factor o multiplicador llamado factor a la medicin de glucosa
de cobertura (k). El valor de este factor se elige de acuerdo al nivel
De acuerdo a la seccin anterior, para realizar la cuantificacin de
de confianza deseado. Normalmente se elige k=2 para un nivel de
la incertidumbre asociada a la medicin de glucosa en suero o
confianza de aproximadamente el 95 % . La forma de expresar la
plasma por espectrofotometra, sta se debe realizar en varios pa-
incertidumbre expandida ser entonces U = kuc(y).
sos, stos se describen a continuacin.

4. Error Paso 1: Especificacin del mensurando.

Error, esta definido como el resultado de una medicin menos el
valor verdadero del mensurando 1. En esta definicin puede notarse
que error es un concepto idealizado, que no puede ser conocido
con exactitud. En principio el valor de un error puede ser aplicado
como una correccin al resultado.
El objetivo de este paso es describir de manera clara el proceso de
medicin y al mensurando. En esta etapa se describe la preparacin
de la muestra, la medicin y la relacin entre el mensurando y las
magnitudes de las cuales depende. En este ejemplo se considera
que la medicin de glucosa se realiza sobre una muestra en sangre

Por otra parte, la incertidumbre toma la forma de un intervalo,

edigraphic.com
proveniente de una persona sujeta a ayuno previo.
La informacin especfica acerca de cmo preparar la muestra
es decir, si sta se estima para una medicin analtica y para un tipo y los patrones, generalmente se encuentra en el procedimiento
de muestra especfica entonces puede aplicarse a todas las correspondiente dentro del Manual de Operaciones del laboratorio.
determinaciones de este tipo, por lo que no debe ser confundida En la figura 1, se esquematiza y describe el proceso de preparacin
con el error. de la muestra.

ABRIL - JUNIO 2002 35


Muestra Blanco Patrn
Reactivo de color 2mL Reactivo de color Reactivo de color
+ 2mL
Suero Plasma
0,02 mL
Incubar 10 minutos a Agitar
37 C
Agregar 2 mL de agua a
cada muestra
Agitar
Leer: Longitud de onda: 510 nm
Temperatura: 37C
Paso de luz: 1 cm
Ajuste del cero con blanco de reactivo
Figura 1. Describe el proceso de preparacin de la muestra.
En cada uno de tres tubos de ensaye, a los que previamente se les
agreg un mililitro de solucin tampn, se disuelve un mililitro de
reactivo de color, ver tabla 2 (Que contiene Glucosa oxidasa,
Peroxidasa y 4-aminobenzofenona). El tubo uno es para la mues-
tra, el tubo dos es para el blanco y el tubo tres es para el patrn.
Adicionar 0,02 mL de muestra (suero o plasma) al tubo uno y
mezclar perfectamente, adicionar 2,02 mL de agua al tubo tres y
0,02 mL del patrn al tubo tres. Inmediatamente, incubar los tres
tubos durante 10 minutos a una temperatura de 37 C, al finalizar
los 10 minutos agregar en cada tubo dos mililitros de agua y
mezclar perfectamente.
Leer la respuesta en absorbancia de la muestra y el patrn,
empleando un espectrofotmetro a una longitud de onda de
510 nm de acuerdo a la secuencia dada en el paso 2.
Clculos:
El mensurando en este problema es la concentracin de glucosa, la
cual depende de la absorbancia de la muestra, la absorbancia del
patrn y de la concentracin del patrn, la ecuacin (9) relaciona
stos factores:
A
y = m [Patrn ] manera que una variacin del tiempo por t alrededor del tiempo
Ap
y = cantidad de glucosa en la muestra en unidades de mg/dL
Am, Ap = absorbancia de la muestra y del patrn respectivamente.
[Patrn] = concentracin del patrn, mg/dL
Paso 2: Identificacin y anlisis de las fuentes de incertidumbre.
El propsito de este paso es listar todas las fuentes de incertidum-
bre para cada una de las magnitudes que afectan el valor del
mensurando.
36
PREZ CASTORENA Y COL.
Con el fin de facilitar la identificacin de las fuentes de incerti-
dumbre, el proceso para la determinacin de la concentracin de
glucosa en plasma se puede desglosar en varias etapas:
2 mL
+ I. Preparacin del paciente
Patrn II. Muestreo
III. Medio en que se encuentra la muestra despus de la separacin
de los elementos formados en sangre del plasma.
IV. Preparacin de la muestra
V. Medicin
I. Preparacin del paciente
Esta etapa involucra la condicin de ayuno del paciente y algunos
factores adicionales como ansiedad y tensin, los cuales afectan el
valor de concentracin de la glucosa que ser medir.
II. Muestreo
El muestreo se realiz en el paciente en estado de ayuno y de manera
venosa lo cual tiene un efecto en la concentracin de glucosa.
III. Medio en el que se encuentra la muestra despus de la
separacin de los elementos formados en sangre del plasma.
La medicin de la concentracin de glucosa requiere una separa-
cin de los elementos formados en sangre del plasma, la cual pue-
de ser realizada por medio de la centrifugacin. Por otra parte se
sabe que la glucosa en plasma sufre una degradacin (la cual es
dependiente de la temperatura del laboratorio, transporte y prepa-
racin de la muestra) debido a la gliclisis, la cual tiene un efecto
en la incertidumbre final.
IV. Preparacin de la muestra previa a la medicin
Temperatura del bao, TBao.
La magnitud de influencia temperatura del bao afectar al valor
del mensurando, concentracin de glucosa, la cual no esta repre-
sentada en la ecuacin (9). Una variacin de la temperatura por
T alrededor de la temperatura T0 = 37 C causar variaciones en
la concentracin de glucosa.
Tiempo de incubacin, tI.
Este parmetro afecta de la misma forma que la temperatura, de
(9) t0=10 minutos causar variaciones en la concentracin de glucosa.
Profundidad de inmersin del contenido de los tubos respecto del
nivel del agua del bao, Ntubo.
Existe la posibilidad de que esta profundidad afecte el valor de la
concentracin, al igual que la temperatura y el tiempo, por lo que
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debe ser investigada .
Agitacin
Se deber determinar el tiempo ptimo de agitacin con el fin de
obtener un efecto despreciable en el valor de concentracin de
glucosa.
BIOQUIMIA VOL. 27 NO. 2, 32-40, 2002
 CALCULO DE LA INCERTIDUMBRE
Volumen de agua, reactivo de color y patrn, V
El efecto de la variabilidad de los volmenes de agua, reactivo de
color y patrn, en la concentracin medida a travs de la
absorbancia, estar incluido y se reflejar en la variabilidad de los
valores de absorbancia. Por lo que no se requiere determinar el
efecto de stos en un experimento separado.
V. Medicin
Absorbancias, Am, Ap
Los valores de absorbancia se obtienen a partir de la siguiente
secuencia de medicin:
Blanco, Patrn, Blanco, M1, Blanco, M2, Blanco, Patrn, Blanco, M3,
Blanco, M4, Blanco, Patrn, Blanco,....
La fuente de incertidumbre de los valores de las absorbancias,
tanto de la muestra y del patrn, esta sujeta nicamente a la
repetibilidad del instrumento y a la preparacin previa a la medicin
tanto de la muestra, como del blanco y el patrn.
Patrn, P
La incertidumbre estndar correspondiente al valor del patrn se obtiene
del certificado del mismo, es decir, a partir del valor de incertidumbre
expandida reportada en l y expresada con un factor de cobertura k =
2 para un nivel de confianza de aproximadamente el 95 %.
La figura 2, muestra a travs de un diagrama de causa efecto, las
fuentes potenciales de incertidumbre que podran contribuir al
valor de la incertidumbre asociada al valor medido de la
concentracin de glucosa (mensurando).
II I Los efectos de la agitacin, temperatura del bao, TBao , profundidad
Am
Apatrn
MRC
y = concentracin de glucosa
III IV V
Figura 2
Paso 3: Cuantificacin de los componentes de incertidumbre.
En este paso cada fuente potencial de incertidumbre identificada
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se mide directamente o estima usando resultados experimentales
previos o resultados derivados de anlisis tericos. Para las etapas
del proceso de medicin I, II y III se emple informacin determinada
en experimentos previos y publicada en la referencia 7, por lo que la
ABRIL - JUNIO 2002
incertidumbre estndar de cada una de estas etapas se debe calcular
empleando al mtodo de evaluacin tipo B de acuerdo a la
ecuacin (3), cuyos resultados se encuentran a continuacin.
I. Preparacin del paciente urel(PP)
Los factores involucrados en la preparacin del paciente se consi-
deran una fuente de incertidumbre para la concentracin de glu-
cosa y de acuerdo a la referencia [7] es del 5 % relativo. Empleando
la ecuacin (3), la incertidumbre estndar relativa es:
u rel ( PP ) = 5 / 3 = 2 ,9 %
II. Muestreo urel(M)
En el muestreo venoso se estima que la contribucin a la incerti-
dumbre total es el 1,7% relativa (referencia 7), ya que algunas
veces puede variar de un individuo a otro y an en muestreos
consecutivos a travs de la misma aguja.
u rel ( M ) = 1, 7 / 3 = 0 ,98 %
III. Medio en el que se encuentra la muestra urel(MM)
La contribucin de este componente de incertidumbre se ha esti-
mado ser del orden del 1,39 % relativo (referencia 7).
u rel ( MM ) = 1,39 / 3 = 0 ,802 %
IV. Preparacin de la muestra posterior a obtener la muestra de
plasma y previa a la medicin
de inmersin del contenido de los tubos respecto del nivel del
agua del bao, Ntubo y del tiempo de incubacin, tI , se redujeron al
mnimo en virtud de que las condiciones experimentales
correspondientes al bao termosttico de agua y ubicacin de los
tubos dentro de ste, fueron tales que el nivel de inmersin del
contenido de los tubos se encontraba 5 cm por debajo del nivel de
agua del bao, el control de la temperatura del bao era de 0,5 C,
realizndose el monitoreo de la temperatura del agua con un
termmetro de 0,1 C de resolucin y una agitacin homognea.
Tambin se ubicaron los tubos lo ms cerca posible al centro del bao.
En experimentos previos fue determinado un tiempo de
incubacin ptimo, cuyo efecto en la concentracin de glucosa
fue despreciable.
V. Medicin
Absorbancia: Am, Ap
La absorbancia, cuadro 1, fue medida de acuerdo a la secuencia
descrita en el Paso 2.
37
 PREZ CASTORENA Y COL.

En la preparacin de la muestra, del reactivo de color y del patrn se Am

y = [Patrn ]
sigui el esquema de adicin de volmenes mostrado en la cuadro 2. Ap
0 , 237 (11)
La variabilidad debida al instrumento y a la inexactitud en la
y = (102 , 40 ) = 85 , 40 mg / L
0 , 284
adicin del volumen se encuentra reflejado en el valor estimado de y = 4 , 744 mmol / L
incertidumbre estndar de la absorbancia del patrn y de la mues-
tra (desviacin estndar de la media tanto del patrn y como de la
La incertidumbre combinada asociada al valor de concentracin
muestra) cuadro 1.
calculado proveniente nicamente de la repetibilidad del instru-
mento, etapa V, se obtiene sustituyendo dentro del smbolo de
Cuadro 1 radical de la ecuacin (8) los valores correspondientes a las
absorbancias del patrn y de la muestra, as como el valor de la
No. Lectura Ap Am
concentracin de patrn y los valores de las incertidumbres corres-
1 0,284 0,235 pondientes a cada uno de los parmetros involucrados en la expre-
2 0,285 0,243 sin (9). Y dividiendo el resultado de la raz cuadrada de la suma de
3 0,283 0,233 los cocientes de las incertidumbres y absorbancias correspondien-
Media 0,284 0,237 tes elevados al cuadrado, por el valor 0,0139, se obtiene la incer-
Desviacin estndar 0,001 0,005 tidumbre combinada, uc(glucosa).
Desviacin estndar de la media 0,0006 0,0031
(12)

2
u c ( medicin ) u 2 ( Am ) u ( A p ) u 2 ( P )
Cuadro 2 = + + =
y A m2 A p2 P2
Tubo de Tubo de Tubo de
muestra, blanco, patrn, 0 , 0031 2 0 , 0006 2 0 , 42 2
+ + = 0 , 0139
V1(mL) V2(mL) V3(mL) 0 , 237 2 0 , 284 2 102 ,33 2

Muestra 0,02 u c ( glu cos a ) = 1,19 mg / dL

Reactivo de color 1 1 1
Agua 2 2,02 2
La incertidumbre estndar combinada en trminos relativos
Patrn 0,02
correspondiente a las etapas I, II, III y V se calcula empleando la
ecuacin (8), debido a que sus valores estn disponibles en trminos
relativos.
Patrn, P (13)
Se emple un material de referencia certificado de concentracin 2
uc ( glu cos a) u (medicin) 2 2 2
102,330,84 mg/dL, cuya incertidumbre expandida se determin = c + u rel ( PP) + u rel (M ) + urel (MM )
y y
con un factor de cobertura de k=2 para un nivel de confianza de
aproximadamente del 95 % segn lo muestra el certificado, por lo u c ( glu cos a )
= 0,0139 2 + 0,029 2 + 0,0098 2 + 0,00802 2
que su incertidumbre estndar es: y
u c ( glu cos a )
= 0,03414
U 0,84 y
uc = = = 0,42mg / dL (10)
k 2 u c ( glu cos a ) = y 0,0341 = 2,915 g / dL
u c ( glu cos a ) = 0,1619 mmol / L

Paso 4: Clculo de la incertidumbre combinada edigraphic.com

Sustituyendo en la ecuacin 9, los valores correspondientes a la
absorbancia de la muestra, del patrn y el valor de la concentra-
cin del patrn, ver tabla 3, se obtiene el valor de la concentracin
de glucosa siguiente,
Finalmente, en los cuadros 3 y 4, se muestra el resumen de los
resultados del clculo de incertidumbre relacionado a la repetibilidad
del instrumento y a la concentracin de glucosa, respectivamente.
La figura 3, presenta de manera grfica la contribucin de cada
componente y la incertidumbre estndar combinada, expresadas en
forma relativa.

38 BIOQUIMIA VOL. 27 NO. 2, 32-40, 2002

 CALCULO DE LA INCERTIDUMBRE

Cuadro 3. Incertidumbre asociada a la repetibilidad del instrumento

Fuente de la Magnitud Valor del Fuente de Valor de la Distribucin/tipo Incertidumbre Incertidumbre

incertidumbre parmetro informacin incertidumbre de evaluacin estndar (ui ) estndar relativa
(Vi ) obtenida de la fuente (Vi /ui )
de la informacin

Repetibilidad Absorbancia Medicin

del de la 0,237 experimental 0,0031 Normal/Tipo A 0,0031 0,0131
instrumento muestra
Absorbancia Medicin
del patrn 0,283 experimental 0,0006 Normal/Tipo A 0,0006 0,0021

Concentracin Certificado
102,33 del material 0,84 Normal/Tipo B 0,42 0,0041
de referencia
Incertidumbre
estndar 1,19 mg/dL
combinada
Incertidumbre
estndar 0,0139
combinada relativa

Cuadro 4. Incertidumbre estndar combinada relativa

Fuente de la Magnitud Valor del Fuente de Valor de la Distribucin/tipo Incertidumbre Incertidumbre

incertidumbre parmetro informacin incertidumbre de evaluacin estndar estndar relativa
obtenida de la
fuente de la
informacin

I. Preparacin Concentracin Referencia [7] 5% Rectangular/Tipo B 0,029

del paciente

II. Muestreo Concentracin Referencia [7] 1,7 % Rectangular/Tipo B 0,0098

III. Medio en el Concentracin Referencia [7] 1,39 % Rectangular/Tipo B 0,00802

que se encuentra
la muestra

V. Repetibilidad Concentracin Medicin 0.0139 Normal/Tipo A 0,0139

del instrumento experimental
Incertidumbre 0,0346
estndar combinada
relativa (IECR)

Contribucin de incertidumbre 6. Comentario final

IECR
incertidumbre

V Las mediciones realizadas en el rea de la qumica clnica, se

Fuente de

III
encuentran entre las ms importantes que se llevan a cabo dentro
II
I de la qumica, en virtud de su trascendencia en la salud humana y
0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04 por los efectos que pudiera tener un diagnstico basado en un
Incertidumbre estndar relativa
resultado poco fiable de una medicin. Lo anterior implica que un
laboratorio u organismo que preste el servicio de anlisis clnicos
Figura 3
deba estar conciente de su responsabilidad al ser una fuente de
informacin inmediata hacia la poblacin, por lo que debe analizar
El resultado final se expresa de la manera siguiente:
Concentracin de glucosa: (4,740,324) mmol/L
edigraphic.com seriamente el grado de rigor que desea dar a la estimacin de
incertidumbre sin olvidar algunos factores importantes como: los
en donde la incertidumbre reportada es una incertidumbre requisitos del mtodo de ensayo, las necesidades del cliente y la
expandida calculada empleando un factor de cobertura k = 2 existencia de lmites estrechos sobre los cuales se basen las decisiones
(2*0,1619 mmol/L), el cual genera un intervalo de confianza de de conformidad con una especificacin. Por otra parte existe una
aproximadamente el 95 %. necesidad de los laboratorios que realizan la medicin de este tipo

ABRIL - JUNIO 2002 39


de magnitudes de integrar en su laboratorio sistemas de calidad
que les ayuden a ser competitivos y les permitan cumplir con los
requisitos de acreditacin ante cualquier grupo o entidad dedicada
a este fin; por lo que es recomendable que el laboratorio haga todo
lo posible para realizar una estimacin de la incertidumbre del
resultado de una medicin qumica siguiendo los mtodos descritos
en la referencia [5], sobre todo cuando se realicen anlisis de alta
exactitud que repercutan en riesgos para la salud o el ambiente.
Finalmente, este artculo ms que tratar de presentar de una
forma detallada la evaluacin de la incertidumbre, intenta ilustrar
de manera sencilla la metodologa para su evaluacin, siendo la
incertidumbre el eslabn que da la fuerza y enlaza las cadenas de
la trazabilidad.
edigraphic.com
40
PREZ CASTORENA Y COL.
Agradecimientos
A la Q.B. Ma. Del Refugio Amado Flores, profesor de la Facultad de
Qumica de la Universidad Autnoma de Quertaro, por sus
comentarios acerca de la medicin experimental de magnitudes
del rea clnica.
Referencias
1. BIPM, IEC, IFCC, ISO, IUPAC. IUPAC, OIML, ISO. International vocabulary
of basic and general terms in metrology, ISO, Geneva,1993.
2. OIML. Vocabulario De Metrologa Legal Trminos fundamentales,
traduccin espaola del texto oficial francs, 1978.
3. Mandel J. The statistical Analysis of Experimental Data. 1. Edicin.
Nueva York; 1964. p.4-6.
4. Villa Diharce E. Estadstica y metrologa. Notas de curso CIMAT,
Guanajuato;1999 .
5. ISO. Guide to the expression of uncertainty in measurement. ISO,
Geneva, 1993.
6. EURACHEM. Quantifying uncertainty in analytical measurement.
Laboratory of the Government Chemist (LGC), London, 1995.
7. Kallner A WaldenstrmJ. Does the Uncertainty of Commonly Performed
Glucose Measurement allow Identification of Individuals at high Risk
for Diabetes?. Clin Chem Lab Med 1999;37(9):907-912.
BIOQUIMIA VOL. 27 NO. 2, 32-40, 2002