OBTENCIN DE UN HIDROLIZADO DE SPIRULINA (ARTHROSPIRA PLATENSIS)

EN POLVO, MEDIANTE SECADO POR ASPERSIN, COMO INGREDIENTE

FUNCIONAL
Camacho Tarsis 1*, Lpez Orestes 1
Universidad Tcnica de Ambato, Facultad de Ciencias e Ingeniera en Alimentos, Carrera
Ingeniera Bioqumica, Campus Acadmico Huachi, Av. Los Chasquis y Rio Payamino,
Ambato, Ecuador.
tarsis_92_93@hotmail.com
RESUMEN
El proyecto de investigacin se bas en un anlisis a la microalga Spirulina (Arthrospira
platensis), que fue estudiada mediante la aplicacin de varios tratamientos con distintas
condiciones especficas que permitan una mejor asimilacin de la misma, en el caso de ser
aplicada como ingrediente farmacutico activo o suplemento proteico. El mejor tratamiento
obtuvo las siguientes condiciones: pH 5, relacin 1:20 de sustrato: agua y una temperatura de
hidrlisis mantenida en un rango entre 65C y 70C. El hidrolizado fue pulverizado mediante
secado por aspersin que dio un rendimiento ptimo de 73,89 % y una coloracin distinta a la
Spirulina en polvo concentrada, a causa de la modificacin estructural de las ficobiliprotenas en
el proceso hidroltico. Adems se analiz el grado de hidrlisis del polvo mediante una
comparacin del contenido de nitrgeno amnico del hidrolizado y la Spirulina en polvo
concentrada, adems se aplic tcnicas de electroforesis SDS PAGE y cromatografa RP
HPLC, que permitieron determinar que el proceso de hidrlisis fue idneo y se logr obtener
una mezcla compleja de pptidos y aminocidos libres con bajos pesos moleculares que
cumplen con las caractersticas necesarias para la futura aplicacin del hidrolizado de Spirulina
como ingrediente funcional.
Palabras clave: Spirulina, Arthrospira platensis, hidrlisis, ficobiliprotenas, electroforesis,
SDS PAGE, cromatografa, RP HPLC.
ABSTRACT
The research project was based on an analysis of the Spirulina microalgae (Arthrospira
platensis), which was studied by the application of several treatments with different specific
conditions that allow a better assimilation of the alga, in case of being applied as active
pharmaceutical ingredient or protein supplement. The best treatment was attained at the
conditions: pH 5, a concentration of 5% (in relation to 1:20 of substrate: water) and at a
hydrolysis temperature maintained in a range of 65 C to 70 C. The hydrolyzate was sprayed
by spray drying which gave an optimum yield of 73.89% and a different coloration to Spirulina
powder concentrate because of the structural modification of the phycobiliproteins in the
hydrolytic process. In addition, the degree of hydrolysis of the powder was analyzed by a
comparison of the amine nitrogen content of the hydrolyzate and Spirulina powder concentrate,
SDS - PAGE electrophoresis and RP - HPLC chromatography techniques were also applied,
which allowed to determine that the hydrolysis process was adequate and produced a complex
mixture of free amino acids and low molecular weights peptides with with the necessary
characteristics for the future application of Spirulina hydrolyzate as functional ingredient.
Keywords: Spirulina, Arthrospira platensis, hydrolysis, phycobiliproteins, electrophoresis,
SDS - PAGE, chromatography, RP - HPLC.

INTRODUCCIN
La Spirulina es un alga unicelular que crece y se multiplica en aguas naturales de medio
alcalino. El nombre de Spirulina se deriva de la palabra latina espiral o hlix, que se refiere a
su configuracin fsica. Se le llama alga azul verdosa por la presencia de clorofila, que le da el
color verde, y ficocianina, que le da el color azulado [1].
El presente proyecto de investigacin trata la microalga Spirulina platensis, debido a las
caractersticas singulares que posee. La Spirulina tiene una capacidad enorme de almacenar
nutrientes y posee un alto contenido proteico. Su contenido de protenas y aminocidos es de
65%; 5% de lpidos; 7% de minerales; 20% de carbohidratos y 3% de humedad [2].
Otro aspecto que caracteriza a esta microalga y que impulsa a que las investigaciones se
expandan es su capacidad de reproduccin, el alga se divide en dos cada 7 horas, y en
condiciones ideales puede generar hasta 15000 kg/ha anuales de material seco, pero con la
aplicacin de tecnologa apropiada los rendimientos pueden mejorar [3]. La Spirulina posee
cualidades inmunolgicas, antioxidantes, antivirales, protectoras contra el cncer, retiene
metales pesados por lo que es un antitxico, y se ha demostrado que es un regulador contra la
hiperglicemia y la hiperlipidemia [11].
El propsito de esta investigacin fue obtener un hidrolizado de Spirulina mediante la
aplicacin de un proceso de hidrlisis enzimtica con papana, para una futura aplicacin se
pulveriz al hidrolizado mediante la tcnica de secado por aspersin, que permite conservar las
extraordinarias caractersticas fsico qumicas de esta microalga.
MATERIALES Y METODOLOGA
Materia prima y Reactivos
Spirulina platensis (Andes Spirulina, Ecuador), Papana soluble con la actividad de 6000 USP-
U/mg (Merck, Alemania), Formaldehdo (Merck, Alemania), Agua MiliQ (Merck, Alemania),
Metanol (Merck, Alemania), cido trifluoroactico (TFA) (Sigma Aldrich, USA).
Preparacin de los tratamientos.
Se utiliz la enzima papana (Merck - Alemania) en base a una relacin de 10 g de enzima
(papana) por kg de sustrato (Spirulina). Adems se aplic dos relaciones para la concentracin
entre la Spirulina y el agua, en base a la informacin de Zhurbenko & Martnez (2005). Se
realiz dos diluciones en la relacin entre el sustrato, Spirulina, y el disolvente, agua destilada:
relacin 1:10 (20g de Spirulina + 200 mL de agua) y relacin 1:20 (10g de Spirulina + 200 mL
de agua).
Estudio de influencia de condiciones de operacin
Se realiz 4 ensayos con distintas condiciones experimentales: donde se vari el pH entre 5 6,
se utiliz NaOH 0,1 N y HCl 0,1 N (previamente preparado) para la regulacin, y la
concentracin del sustrato (5 % y 10 %). La temperatura se mantuvo en un rango de 65 C a 70
C durante 4 horas, una vez transcurridas las 4 horas del proceso de hidrlisis se someti a
ebullicin (92 C) por 5 minutos al hidrolizado. En cada hora del proceso de hidrlisis se ajust
el pH y temperatura en los lmites establecidos. Se realiz 3 rplicas de cada tratamiento.
Preparacin del hidrolizado de Spirulina en base al mejor tratamiento.
Una vez aplicadas las corridas respectivas del diseo experimental se determin que el mejor
tratamiento se produce a las siguientes condiciones: pH = 5, concentracin del sustrato 5 %
(dilucin 1/20), temperatura de 65 C 70 C.
En un reactor con agitacin vertical y en las condiciones previamente detalladas se mezcl 200
g de Spirulina y 4 L de agua destilada (1/20), una vez alcanzada la temperatura ptima (65 C)
se agreg la enzima papana y se mantuvo la mezcla en las condiciones indicadas durante 4
horas, una vez transcurrido este tiempo del proceso de hidrlisis se aument la temperatura del
reactor hasta que llegue el hidrolizado al punto de ebullicin y se mantuvo as por 5 minutos. En
cada hora del proceso de hidrlisis se ajust el pH y temperatura en los lmites establecidos.
Anlisis fisicoqumico del hidrolizado
Determinacin de slidos totales
Se realiz en el equipo de determinacin de humedad (KERN MLS 50-3, Alemania). A peso
constante en un rango de temperatura entre 103 C 121 C, durante 40 minutos, se coloc 3 g
de muestra del hidrolizado y se determin la humedad del mismo. En base al porcentaje de
humedad obtenido, se rest del 100 % y el resultado fue el porcentaje de slidos totales. Se
efectu dos mediciones por cada muestra de hidrolizado.
Determinacin del contenido de nitrgeno amnico
Se prepar una solucin al 2 % del hidrolizado, de la solucin preparada se tom 3 mL y se
complet a 20 mL con agua destilada en un matraz de Erlenmeyer de 100 mL. Posteriormente
se coloc 20 mL de una solucin de formaldehdo a concentracin normal en un vaso de
precipitacin de 50 mL. Ambas soluciones fueron neutralizadas (pH 6,95 7,01) con solucin
de NaOH 0,1 N. Despus se agreg 2 mL de la solucin de formaldehdo neutralizada a la
solucin del hidrolizado y se mezcl. Se titul con NaOH 0,1 N la solucin final hasta un pH
entre 9,10 - 9,20. Se anot el gasto exacto de NaOH y se realiz los clculos correspondientes
en base a la siguiente frmula:
.
%. . = %.
Dnde:
ml NaOH = gasto de NaOH 0,1 N en la titulacin

=
%S.T = Porcentaje de slidos totales
Anlisis del tamao de partcula del hidrolizado de Spirulina mediante Microscopia
Electrnica de Barrido.
El tamao, forma y superficie de las partculas del hidrolizado de Spirulina se analiz mediante
la tcnica de microscopa electrnica de barrido, la muestra se prepar fijando una mnima
cantidad sobre una placa porta muestras metlica (dimetro 1 cm), luego se fij la muestra a un
metalizador al vaco (Q150R, Reino Unido), donde se recubri con oro a 20 nm de espesor;
finalmente se coloc en el microscopio electrnico de barrido (Phenom 1255, Eindhoven), los
parmetros utilizados fueron: resolucin de 30 nm y un voltaje de aceleracin de 5kV.
Secado por aspersin del hidrolizado de Spirulina
Se utiliz 2500 mL del hidrolizado de Spirulina, se instal la manguera de absorcin del equipo
Spray Dryer (BUCHI B-290, USA) y se estableci en el panel una temperatura de entrada de
140 C y una temperatura de salida de 80 C. Seguidamente la manguera de absorcin succion
la solucin del hidrolizado, concluido el proceso se recolect todo el polvo secado y se pes
para la determinar el rendimiento de secado.
Electroforesis en gel de poliacrilamida con Dodecil-sulfato sdico (SDS-PAGE)
Se realiz una comparacin del polvo obtenido de Spirulina hidrolizada con la Spirulina
concentrada mediante el proceso de electroforesis SDS-PAGE.
Se caracteriz el hidrolizado de Spirulina en polvo, siguiendo la metodologa descrita por
Laemmli (1970). Se utiliz geles de poliacrilamida al 12 %, para determinar los pesos
moleculares aproximados de la Spirulina concentrada y del hidrolizado.
Se agreg con la micropipeta 20 L de muestra en los pocillos del gel, la electroforesis se llev
a cabo en el equipo PowerPacTM Basic (BIO-RAD, USA) a 200 voltios durante 30 minutos,
posteriormente se realiz la tincin de las bandas de polipptidos con el colorante azul de
Coomassie G-250 durante aproximadamente 12 horas, y se desti con una solucin de cido
actico (5%), agua y metanol (50 %). Se revel las bandas del gel en el equipo CHEMIDOC
MP (BIO-RAD, USA).
Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia en Fase Reversa (RP-HPLC)
Se analiz el perfil de aminocidos del hidrolizado de Spirulina mediante la tcnica de
Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia en Fase Reversa aplicando el mtodo descrito por
Niessen et al. (2005). Se examin el hidrolizado, la Spirulina concentrada y la enzima papaina
en RP-HPLC utilizando el Cromatgrafo lquido de alta resolucin (Agilent Technologies,
USA). El eluyente A que se emple fue 100 % de agua MilliQ con cido Trifluoroactico
(TFA) a concentracin 0,027 % (v/v), el eluyente B fue 70 % de metanol con TFA al 0,027 %
(v/v).
El sistema de cromatografa HPLC, se equip con una bomba cuaternaria, un detector de
longitud de onda variable a 280 nm y un inyector automtico, todos de la serie Agilent 1100. El
sistema de adquisicin de datos fue OpenLAB CDS ChemStation Edition.
Se emple una columna en fase inversa C18 Hi-pore (250 x 4,6 nm de dimetro interno) (Bio-
Rad, Richmond; USA). El volumen de inyeccin fue de 100 L, con una concentracin de la
muestra de 5 mg/mL disuelta en la fase A. La muestra del hidrolizado se eluy con un gradiente
lineal del 0 % al 70 % en fase B hasta 5 minutos a un flujo de 1 ml/min. Y a una presin de 200
400 bar. El tiempo de corrida fue de 12 minutos por muestra.
RESULTADOS
Resultados del estudio de influencia de las condiciones de operacin
En los ensayos realizados para determinar las condiciones idneas de operacin para el
hidrolizado de Spirulina, se efectu 3 rplicas de cada tratamiento; el pH tuvo un efecto
altamente significativo en el proceso de hidrlisis, debido a que la disminucin de la
concentracin de iones de hidrgeno en las disoluciones es un indicativo de que la hidrlisis
enzimtica se ejecut de manera efectiva.
Resultados obtenidos de los parmetros fsico-qumicos de los tratamientos
Uno de los principales indicadores fsico qumicos que se determin al concluir el proceso de
hidrlisis fue el porcentaje de slidos totales en base a la humedad del hidrolizado. En el caso de
la muestra 2 y sus respectivas rplicas; se diferenci que existe mayor contenido de nitrgeno
amnico que en las otras muestras cuyos resultados son muy anlogos entre replicas.
Tabla 1. Concentracin de Slidos totales y Nitrgeno Amnico
ml sustrato
Replica Relacin ml NaOH %ST %N.ami
2%
1 1:10 1,2 1,45 10,07 1,60
1 1:10 1,2 1,55 9,78 1,76
1 1:10 1,2 1,3 9,91 1,45
2 1:20 0,6 0,65 4,89 2,95
2 1:20 0,6 0,6 4,95 2,69
2 1:20 0,6 0,625 5,04 2,75
3 1:10 1,2 1,45 9,37 1,72
3 1:10 1,2 1,7 9,53 1,98
3 1:10 1,2 1,55 10,02 1,71
4 1:20 0,6 0,5 5,02 2,21
4 1:20 0,6 0,6 5,23 2,54
4 1:20 0,6 0,65 5,38 2,68
Determinacin del mejor tratamiento para el hidrolizado de Spirulina
En la determinacin del mejor tratamiento para la obtencin del hidrolizado se emple un
diseo factorial 22, se aplic un anlisis estadstico que engloba a todos los tratamientos
propuestos, y se bas en la respuesta experimental del porcentaje de nitrgeno amnico
contenido en el hidrolizado de Spirulina.
Para el anlisis estadstico se tom en cuenta los parmetros pH y la concentracin del sustrato,
de esta manera se expres estos factores en funcin del porcentaje de nitrgeno amnico. El
diseo experimental fue aplicado en el programa estadstico STATGRAPHICS Centurion XV,
se evaluaron los datos experimentales mediante un anlisis de varianza al 95% de nivel de
significancia. El anlisis de varianza indic estadsticamente la significancia de cada efecto
mediante la comparacin de los cuadrados medios contra un estimado del error experimental.
Anlisis fsico qumico del hidrolizado de Spirulina a pH 5 y concentracin de sustrato
5%
Determinacin de la humedad y slidos totales del hidrolizado
Se obtuvo 4,89%0,65%, de slidos totales en el hidrolizado, esto concuerda con lo reportado
por Zhurbenko & Martnez (2005), en donde el porcentaje de slidos totales obtenidos en el
hidrolizado de Spirulina fue de 4,30% 0,60%. La diferencia es mnima con el experimento
comparado y el valor experimental concuerda con el rango del valor bibliogrfico.
Determinacin del contenido de nitrgeno amnico
El nitrgeno amnico para Hicks (2001) representa aproximadamente el 16% del peso de las
protenas y su valor biolgico se basa en los aminocidos; por esta razn la determinacin de
este parmetro fue muy importante en el proyecto de investigacin, ya que la Spirulina adems
de los aminocidos esenciales que posee, presenta cantidades significativas de los no esenciales.
El nitrgeno amnico obtenido en el hidrolizado fue de 2,58%0,61 que es un valor significativo
en el producto obtenido, segn Zhurbenko & Martnez (2005) el rango porcentual de
nitrgeno amnico que debe contener un hidrolizado de Spirulina es de 2,69% 0,10%.
Tambin se analiz el contenido de nitrgeno amnico del polvo concentrado de Spirulina, que
result un valor cercano a 0, lo que tiene sentido ya que en ste existe una mnima cantidad de
grupos amino libres de los aminocidos y pptidos, lo contrario al hidrolizado.
Anlisis del tamao de partcula mediante Microscopa Electrnica de Barrido
Se analiz la forma y la superficie del hidrolizado de Spirulina en polvo mediante microscopa
electrnica de barrido. En la Figura 1 se observa las partculas formadas por el proceso de
hidrlisis, se puede determinar que la morfologa de las partculas del hidrolizado en polvo es
indefinida y porosa, caracterstica de las partculas de hidrolizados proteicos, las protenas al ser
sometidas a un proceso de hidrlisis y en este caso a un posterior proceso de secado por
aspersin adquieren esta morfologa esfrica. El dimetro de partcula indicado en la imagen a)
con un aumento de 2450x es de aproximadamente 10 m. En el caso de la imagen b) que fue
aumentada 9900x se consigui determinar un dimetro de partcula ms exacto de 8 m.

A B

Figura 1. Morfologa del hidrolizado de Spirulina en polvo. Medicin del dimetro de

partculas del polvo a diferentes aumentos (A) 2450x B) 9900x) mediante microscopia
electrnica de barrido.
Anlisis del rendimiento del Secado por aspersin del hidrolizado de Spirulina
Para la obtencin del hidrolizado de Spirulina en polvo se sec la solucin del hidrolizado en el
Spray Dryer, de la cual se utiliz un volumen de 2500 mL, de este se obtuvo 133,37 g de
hidrolizado en polvo. En base al clculo de peso terico la cantidad de polvo obtenido deba ser
180,5 g, este valor result del clculo aplicado en la [Ec. 4] se compar los pesos obtenidos
tanto terica como el experimentalmente para determinar el rendimiento que result de la
aplicacin de la [Ec. 3] dando un rendimiento neto de 73,89 %, este rendimiento es ptimo para
la cantidad de solucin del hidrolizado que se sec, incluso pudo tener un mayor rendimiento el
hidrolizado en polvo pero en el proceso de secado por aspersin se adhieren a las paredes
internas de la cmara de secado una mnima cantidad del polvo el cual no puede ser retirado por
completo y es desechado. Sin embargo la cantidad obtenida supera al 50 % de rendimiento, en
la investigacin de Lopez, et al. (2008) quien especifica que en el proceso de secado por
aspersin de extractos acuosos los rendimientos obtenidos superan el 50%, adems la aplicacin
de esta metodologa asegura la calidad del principio activo ya que elimina todo tipo de
impurezas que existan en la muestra.
Una de las caractersticas ms evidentes de la hidrlisis de Spirulina fue la coloracin que
present al concluir el proceso, ya que de una solucin acuosa color verde pasin, caracterstico
de la Spirulina, se obtuvo una solucin color caribe verde lima, esta solucin al ser sometida a
secado por aspersin se present como en la figura 2. Los colores de ambos polvos de Spirulina
fueron asignados segn la tabla internacional de colores.

Figura 2. Spirulina concentrada en polvo (Izquierda) y Spirulina hidrolizada obtenida mediante

secado por aspersin (Derecha).

Para Cabranes et al. (2000), las ficobiliprotenas son pigmentos protenas fluorescentes
naturales, que presentan grupos cromforos denominados bilinas, las cuales son tetrapirroles
lineales unidos a su esqueleto covalente, responsable de las caractersticas pticas de la
Spirulina, estas protenas al ser hidrolizadas, en especial la ficocianina responsable de la
coloracin verde azulada de la microalga, provocan que se den cambios en estas estructuras y
alteren las caractersticas en la coloracin de producto final.
Comparacin del concentrado de Spirulina y del hidrolizado de Spirulina mediante
Electroforesis en gel de poliacrilamida con Dodecil-Sulfato Sdico (SDS-PAGE)
Se compar el polvo del hidrolizado de Spirulina con el polvo concentrado de Spirulina
mediante SDS-PAGE, no se utiliz ningn tipo de estndar de peso molecular, debido a que el
propsito de la electroforesis fue comprobar que las protenas de la Spirulina fueron
hidrolizadas, es decir que se formaron pptidos de distintos pesos moleculares lo cual permiti
el paso de los mismos a travs del gel. Para esta determinacin se realiz varias repeticiones a
distintas concentraciones de las muestras y se defini la imagen de los geles con dos contrastes:
el normal de coloracin azul y en contraste plata que fue el que permiti una mejor definicin
de las bandas del gel.
En todas las muestras se puede distinguir dos bandas con mayor intensidad, una ubicada en la
parte superior del gel, lo cual indica que tiene un peso molecular alto y probablemente pertenece
a las C-ficocianinas (CPC) y la que se encuentra en la parte inferior que puede corresponder a
las subunidades y de las ficocianinas y aloficocianinas, esto se corrobora con el estudio de
Martnez, et al. (2014), que presenta perfiles electroforticos de las protenas de Spirulina y
explica, que la fraccin principal de las protenas de Spirulina se encuentra en forma de
disposiciones supramoleculares conocidas como ficobilisomas, que estn constituidas por
polipptidos pigmentados (ficobiliprotenas) y no pigmentados (pptidos de unin), las
ficobiliprotenas ms importantes son la C-ficocianina (CPC) y aloficocianina (APC), que en
conjunto representan ms del 60% de la protena total.
En la Figura 3 se present un gel de 1.00 mm de grosor en donde se carg 4 muestras con
mayor concentracin, aqu se compar los perfiles electroforticos a diferentes contrastes a) y
b), en el contraste b) en color plata es donde se tuvo mejor definicin de las bandas de las
muestras. Las muestras 1 y 2 fueron cargadas en ausencia de 2-mercaptoetanol mientras que las
3 y 4 se carg con el reactivo, esto nos permiti definir que en presencia del 2-mercaptoetanol
se puede tener una mejor apreciacin de las bandas proteicas. Adems en este gel se visualiz
como, en el carril 4 correspondiente al hidrolizado, se fraccionaron las protenas en pptidos de
menor peso molecular hasta llegar al final del carril, al contrario del carril 3 perteneciente a la
Spirulina concentrada cuyas bandas son intensas cuando tienen pesos moleculares ms altos.

1 2 3 4 1 2 3 4
B
A

Figura 3. Perfil electrofortico SDS PAGE de las protenas de Spirulina platensis.

A) Gel de electroforesis en contraste azul B) Gel de electroforesis en contraste plata. Carril 1:
Spirulina sin 2-mercaptoetanol, Carril 2: Hidrolizado de Spirulina sin 2-mercaptoetanol, Carril
3: Spirulina con 2-mercaptoetanol, Carril 4: Hidrolizado de Spirulina con 2-mercaptoetanol.

En la Figura 4 se observa el gel donde se compar la Spirulina concentrada (1) con el

hidrolizado de Spirulina (2) aqu se puede distinguir las bandas de protenas de alto peso
molecular presentes en el concentrado, adems se visualiza que al final del carril existe una
banda con mayor intensidad que todas, al comparar con la investigacin de Martnez, et al.
(2014), esta banda podra corresponder a las subunidades de las principales ficobiliprotenas. En
el caso del hidrolizado (carril 2) se distingue la disociacin que tuvieron las protenas siendo
fraccionadas en molculas de bajos pesos moleculares por lo que tendieron a precipitar.
 1 2

Disposicin
hexamrica de CPC

Subunidades
de CPC y APC

Figura 4. Electroforesis SDS PAGE de Spirulina y el hidrolizado en polvo (10g/L) en

contraste plata. Carril 1: Spirulina con 2-mercaptoetanol, Carril 2: Hidrolizado de Spirulina
con 2-mercaptoetanol.
Anlisis del hidrolizado de Spirulina en polvo mediante Cromatografa Liquida de Alta
Eficiencia en Fase Reversa (RP-HPLC)
Para conocer el perfil cromatogrfico del hidrolizado de Spirulina en polvo se utiliz la tcnica
de RP-HPLC, en este anlisis se confirm que las protenas de la Spirulina concentrada fueron
hidrolizadas gracias a la accin de la papana. Se inyect una muestra de la Spirulina
concentrada, otra del hidrolizado y una de la enzima papana. Los perfiles cromatogrficos de
las 3 muestras contienen una seal alta aproximadamente en el minuto 1 del anlisis, esta seal
se debe a la presencia del TFA, es por eso que en el mismo tiempo de cada muestra se form el
pico caracterstico a este compuesto.
Existen varios picos cromatogrficos que coindicen en el mismo tiempo entre el hidrolizado y la
Spirulina concentrada, pero con diferencia de absorbancias. Segn se compar con la
investigacin de Hanaa et al. (2003), donde se enfoca en los perfiles cromatogrficos por RP-
HPLC de los carotenoides y el tocoferol de Spirulina platensis, existen seales entre los minutos
2 y 4 que son exclusivos de este tipo de compuestos. Adems el pico con ms absorbancia que
se da en el minuto 2,7 aproximadamente representa a la seal de la ficocianina, ya que es el que
present mayor concentracin que el resto.
Se realiz un grfico de comparacin de los 3 cromatogramas como se muestra en la Figura 5,
donde se puede distinguir la relacin de ciertos picos cromatogrficos, entre el hidrolizado y el
concentrado, y entre el hidrolizado y la enzima, pero con distintas absorbancias. Adems, en el
hidrolizado, se observa que existen picos que presentan absorbancias similares a los de la
papana, esto se debe a que existen componentes de la papana que fueron desnaturalizados al
momento de aumentar la temperatura para concluir el proceso de hidrlisis.

1000

800
Absorbancia (mAU)

600
Concentrado
400
Hidrolizado
200
Enzima
0
0 5 10 15
-200
Tiempo (min)

Figura 5. Comparacin de los cromatogramas de la Spirulina concentrada, Spirulina

Hidrolizada y la enzima papana.
 CONCLUSIONES
Se obtuvo un hidrolizado de Spirulina (Arthrospira platensis) en polvo, mediante secado por
aspersin, el mismo que podra ser utilizado como ingrediente funcional, es decir, este
hidrolizado tiene la multifuncionalidad de ser aplicado como ingrediente farmacutico activo o
como suplemento proteico. Se evaluaron las condiciones ptimas de obtencin del hidrolizado
de Spirulina, en base a los ensayos experimentales y al diseo experimental aplicado se
determinaron que las mejores condiciones para la hidrlisis fueron las empleadas en el ensayo
experimental 2, en el que se estabiliz el pH a 5, con concentracin del sustrato de 5% en base a
la relacin 1/20 de sustrato: agua y un rango de temperatura entre 65C y 70C. Se obtuvo
mediante secado por aspersin un hidrolizado de Spirulina en polvo, logrando un rendimiento
ptimo de 73,89 % a partir de la cantidad de solucin del hidrolizado que se sec y present un
color caribe verde lima, comparado con el polvo concentrado de Spirulina que presenta un color
verde pasin, los cambios en la coloracin se debe a modificaciones estructurales de las
ficobiliprotenas en el proceso de hidrlisis. Se caracteriz el producto obtenido en cuanto a
grado de hidrlisis mediante una comparacin con la Spirulina concentrada. Los anlisis
mediante electroforesis SDS PAGE, y Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia en Fase
Reversa (RP-HPLC) permitieron establecer que por el proceso de hidrlisis se gener una
mezcla compleja de pptidos de bajos pesos moleculares y de aminocidos libres a diferencia
del polvo concentrado que presenta protenas de pesos moleculares elevados.
MATERIAL DE REFERENCIA
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