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TITULO: Influencia de Trichoderma viride y Trichoderma harzianum en el

control del mildiu (Peronospora variabilis) de la quinua (Chenopodium


quinoa Willd.) Camacani, Puno Per

AUTOR: Edith Maritza SALAZAR CANAZA

I) PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA


En el Centro Poblado de Camacani del distrito de Platera de la regin
Puno y en muchos departamentos el cultivo de quinua es muy importante
por considerarse un cultivo orgnico, adems de constituir uno de los
alimentos ms completos de la dieta del ser humano, pero la planta de
quinua como cualquier otra especie vegetal y de acuerdo al ambiente
donde se cultive, est expuesta al ataque de una serie de enfermedades
con mayor o menor intensidad, en este caso la enfermedad ms importante
de la quinua es el mildiu, causado por el patgeno Peronospora
variabilis, que afecta principalmente el follaje y puede causar una
reduccin considerable en el rendimiento. Entonces con el propsito de
desarrollar una alternativa de produccin orgnica para controlar el mildiu
de la quinua se plante la aplicacin de dos especies de microorganismos:
Trichoderma viride y Trichoderma harzianum.

II) ANTECEDENTES
Gandarillas (1979), mencionan que la mayora de los investigadores
coinciden en indicar que la quinua es originaria del altiplano que comparten
Per y Bolivia, ya que en dichas reas se encuentra la mayor diversidad de
plantas cultivadas y parientes silvestres, asimismo Mujica (1988), menciona
que se conoce que la mayora de los cultivares de quinua del altiplano son
susceptibles a la enfermedad (mildiu).
En ese sentido, Plata G. (2013) observo que de los 30 aislamientos de
Trichoderma spp., evaluados para mildiu, se han encontrado a tres
aislamientos que inhiben el avance de la enfermedad y los otros seis,
adems de controlar la enfermedad, tambin promueven el desarrollo de
las plantas.

III) JUSTIFICACIN
El cultivo de quinua en la regin de puno y en muchos departamentos es
muy importante por ser muy nutritivo, adems de ser cultivado en
condiciones adversas de clima y suelo, en estos ltimos aos, la
produccin de este grano ha adquirido mayor demanda por mercados
internacionales (EEUU y Europa). Pero al igual que otros cultivos la quinua
es afectada por diversas enfermedades entre las cuales se destaca el
mildiu de la quinua cuyo agente causal Peronospora variabilis, este
problema es ocasional en la regin, pero otros lugares esta enfermedad es
muy severa ocasionando prdidas de hasta un 50% si las plantas son
afectadas antes de la formacin de la panoja. Adems que los productores
de la zona desconocen el manejo de esta enfermedad, estn ms
acostumbrados a combatir las plagas. Por ello es imprescindible desarrollar
herramientas de control de mildiu en el marco de realizar una produccin
orgnica como lo demandan los mercados internacionales. Con este
propsito el estudio del presente trabajo de investigacin se bas en el uso
de dos especies de microorganismos (Trichoderma viride y Trichoderma
harzianum) que se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza y
que adems poseen diferentes mecanismos de accin, como el
antagonismo, parasitismo, etc., para ayuden a controlar a Peronospora
variabilis sin crear resistencia, ni residuos no permitidos en el cultivo de
quinua.

IV) MARCO TERICO Y CONCEPTUAL


4.1 MARCO TERICO
4.1.1 CONTROL BIOLGICO DE ENFERMEDADES
Mondino, P (2003), manejando la microflora existente en contacto
con las plantas es posible controlar a los patgenos de las plantas.
Es posible sacar ventaja de las interacciones benficas para la
planta favoreciendo su crecimiento y resistencia los patgenos.
Tambin es posible utilizar las interacciones antagnicas de forma
de eliminar los patgenos o impedir que estos puedan atacar a la
planta y desarrollar la enfermedad. A esto se le ha denominado
control biolgico.

Garrett (1965) El control biolgico (CB), se define como cualquier


condicin prctica por medio de la cual la sobrevivencia o actividad
de un patgeno se reduce a travs de la mediacin de cualquier otro
organismo, excepto el hombre, con disminucin de la incidencia de
la enfermedad.

4.1.2 CONTROL BIOLGICO DE ENFERMEDADES AREAS


(Fokkema, 1983), menciona que la micoflora natural area de las
plantas esta compuesta principalmente por levaduras, hongos y
bacterias, las cuales se desarrollan exponencialmente dependiendo
de los nutrientes. En condiciones controladas tales poblaciones
reducen la infeccin de fitopatgenos en un 50% por la competencia
de nutrientes en las hojas; sin embargo, bajo condiciones de campo
el incremento de la resistencia a fungicidas por los fitopatgenos se
explica, entre otros factores, por la reduccin de micoflora
antagonista nativa.

(Andrews, 1990), Se conocen pocos casos exitosos del CB de


fitopatgenos del follaje o parte area de la planta en la naturaleza.
El progreso ha sido lento, posiblemente porque el biocontrol en este
hbitat es ms difcil que se logre y se deben considerar muchos
factores, entre ellos: el hbitat debe ser el adecuado para el
crecimiento del agente de biocontrol, que stos sean capaces de
atacar a los fitopatgenos y conocer l o los mecanismos de accin
del agente de biocontrol.

4.1.3 Trichoderma spp. EN EL CONTROL BIOLGICO DE


FITOPATGENOS
El gnero Trichoderma es un habitante natural de suelos,
cosmopolita (Jensen y Wolffhechel, 1995), desde 1932, Weindling
encontr a la especie T. lignorum (Tode) parasitando hongos
fitopatgenos. La habilidad de algunas de sus especies de producir
enzimas y/o atacar o inhibir hongos fitopatgenos lo hacen excelente
para el CB (Samuels, 1996). En el control de fitopatgenos del suelo
T. harzianum y Trichoderma (= Gliocladium) virens (Miller, Giddens &
Foster) son las especies ms reportadas en CB y son efectivas
contra R. solani, Colletotrichum spp., S. sclerotiorum, Sclerotium
rolfsii Sacc., F. oxysporum, Phytophthora parasitica Dastur, P.
ultimum, Verticillium spp. y Thelaviopsis spp., entre otros (Nelson,
1991; Samuels, 1996).

4.1.4 Trichoderma spp.


Castro, A. (2012), Es un hongo Deuteromycete cuyo estado sexual
es Hypocrea. El hongo Trichoderma fue identificado por Persoon en
el ao 1794, aislado de un material recolectado en Alemania, fecha
desde la cual el hongo ha sido ampliamente estudiado. Trichoderma
es un hongo aerobio facultativo, que se encuentra de manera natural
en diferentes suelos agrcolas y en otras condiciones, especialmente
en aquellas que contienen materia orgnica o desechos vegetales
en descomposicin.

4.1.5 MECANISMOS DE ACCIN DE Trichoderma spp.


Segn Castro A. (2012), Son tres los mecanismos involucrados en la biorregulacin
de organismos patgenos por parte de Trichoderma:

Micoparasitismo. Segn Castro A. (2012), Es considerado el mecanismo de


accin ms importante, ya que es un proceso complejo donde est involucrada
la produccin de enzimas lticas tales como quitinasas, glucanasas, celulasas,
xylanasas, laminarinasas, esterasas, glucosidasas, lipasas y proteasas. En el
micoparasitismo la hifa de Trichoderma entra en contacto con la hifa del hongo
patgeno e inicia un crecimiento alrededor de la hifa, y por accin enzimtica
comienza la degradacin de la hifa del patgeno; posteriormente, ocurre
penetracin por parte del hongo antagonista, causando degradacin celular,
rompimiento hifal y destruccin total de la hifa del patgeno. Lpez et al., hacen
referencia al micoparasitismo de Trichodenrma relacionado con la expresin de
genes y su respectiva actividad enzimtica. Para ello, seleccionaron nuevos
aislamientos de Trichoderma harzianum con alta actividad antagnica contra
Fusarium oxysporum. Se analizaron 31 aislamientos por RAPDPCR y se
seleccionaron las cepas T-30 y T-78, las cuales mostraron la ms alta actividad de
las enzimas N-acetilglucosaminidasa (codificada por los genes exc1 y exc2),
Quitinasa (Chit 42 y Chit 33), Proteasa (prb1) y -1.3- glucanasa (bgn 13.1). Esta
alta actividad enzimtica muestra el gran potencial micoparastico de
Trichoderma contra F. oxysporum, siendo una estrategia conveniente para evitar
el incremento de pesticidas qumicos al momento de manejar enfermedades
fitopatgenas causadas por este hongo.
Antibiosis. Segn Castro A. (2012), Trichoderma tiene la capacidad de producir
compuestos orgnicos voltiles, como 2-propanona, 2-metil-1- butanol,
heptanal, octanal, nonanal y decanal. La actividad antibitica como tal, se refiere
a los compuestos no voltiles, dentro de los cuales existe un gran nmero de
compuestos de importancia en la actividad biorreguladora de patgenos,
algunos de ellos son harzianolida, alameticina, tricolina, viridina, gliovirina,
gliotoxina, 6-pentil- - pirona, isonitrina, trichodermina, suzucacilina y
trichorzianina. Estos compuestos juegan un papel importante inhibiendo el
crecimiento y desarrollo de microorganismos patgenos. La combinacin de
enzimas lticas y antibiticos resulta con un alto nivel de antagonismo frente a
organismos patgenos.
Competencia. Segn Castro A. (2012), La competencia por espacio o por
nutrientes ha sido considerada uno de los mecanismos clsicos de biocontrol de
Trichoderma. Este hongo tiene una rpida tasa de desarrollo, lo que hace que
sea un fuerte competidor por espacio, a la hora de colonizar la rizosfera. Por otra
parte, Trichoderma tiene una capacidad superior de movilizarse y tomar los
nutrientes del suelo, siendo muy verstil para utilizar sustratos como fuente de
carbono y nitrgeno, lo que le permite colonizar un medio rpidamente,
evitando la proliferacin de otros microorganismos en el mismo hbitat. Anke et
al. (5), reportaron la produccin de siderforos por Trichoderma spp; estos
autores, registraron la produccin de hidroxamato como un tipo de siderforo
producido por este hongo, convirtindolo en un fuerte competidor por el hierro
del suelo, el cual es necesario para la sobrevivencia de otros organismos.
Diferentes especies del gnero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas y
valoradas como antagonistas de patgenos.

Otro mecanismo de accin Segn Castro A. (2012), es tambin Promotor del


desarrollo vegetativo. Races colonizadas por Trichoderma spp. frecuentemente
aumentan el crecimiento, desarrollo, productividad del cultivo, resistencia a
estrs abitico e incremento en la toma y uso de nutrientes. Se ha demostrado
que la productividad de un cultivo en el campo puede incrementarse en ms del
300% despus de la aplicacin de T. hamatum o T. koningii. Diferentes especies
del gnero Trichoderma producen factores de crecimiento, los cuales han sido
detectados e identificados en el laboratorio, como son las auxinas, citoquininas y
etileno.

4.1.6 QUINUA
Rivera (1995) La quinua es una planta, herbcea de ciclo anual y
perteneciente a la familia de los Chenopodiaces. Su tamao vara
desde 1 m a 3.5 m. segn las diferentes variedades y ecotipos.

Tapia (1997), Es un grano alimenticio que se cultiva ampliamente en


la regin andina, desde Colombia hasta el norte de la Argentina para
las condiciones de montaas de altura, aunque un ecotipo que se
cultiva en Chile, se produce a nivel del mar. Domesticada por las
culturas prehispnicas, se la utiliza en la alimentacin desde por lo
menos unos 3000 aos.

4.1.6.1 Caractersticas Botnicas

Rivera (1995), Sus caractersticas botnicas la sitan como una


planta de tallo erguido, y segn su tipo de ramificaciones pueden
presentarse con un tallo principal y varias ramas laterales cortas
caractersticas de la zona de altiplano o de ramas de igual tamao,
caracterstico en los ecotipos que se cultivan en los valles
interandinos.

Rivera (1995), La forma de sus hojas es muy variada y sus bordes


son dentados pudiendo ser pronunciados o leves segn las
variedades. La coloracin de estas varia de verde claro a verde
oscuro, las que a su vez van transformando en amarillas, rojas o
prpuras segn su estado de maduracin.

Rivera (1995), Sus races son mas o menos profundas pudiendo


llegar desde 0.50 m. hasta mas de 2 m. Posee una inflorescencia
denominada pancula, de forma glomerulada, y pueden tener un
aspecto laxo y compacto.

Rivera (1995), Esta inflorescencia puede alcanzar hasta 0.70 m. de


su tamao y densidad depende en gran parte su rendimiento.

Rivera (1995), Las flores son pequeas y pueden ser hermafroditas


y femeninas, lo que le permite una gran variacin sexual segn los
diferentes ecotipos y variedades.

Rivera (1995), El fruto de la quinua es un aquenio, pequeo y


presenta diferentes coloraciones. La capa externa que la cubre es de
superficie rugosa y seca que se desprende con facilidad al ser
puesta en contacto con agua caliente o ser hervida. En esta capa se
almacenan la sustancia amarga denominada saponina, cuyo grado
de amargor varia segn los tipos de quinua.

4.1.6.2 Posicin Taxonmica

Segn Mjica (1993), la quinua est ubicada dentro de la seccin


Chenopodia y tiene la siguiente posicin taxonmica:

Reino : Vegetal
Divisin : Fanergamas
Clase : Dicotiledneas
Orden : Angiospermas
Familia : Chenopodiceas
Genero : Chenopodium
Seccin : Chenopodia
Subseccin : Cellulata
Especie : Chenopodium quinoa, Will

4.1.7 MILDIU (Peronospora variabilis)


Causado por Peronospora variabilis, es un Oomicete, que pertenece a la
familia Peronosporaceae, orden Peronosporales, cuyos miembros son
parsitos obligados altamente especializados que parasitan plantas
vasculares. Peronospora variabilis ataca especies de la familia
Chenopodiaceae a la cual pertenecen los gneros Beta, Spinacia y
Chenopodium.
Los Oomicetes han sido excluidos del reino hongos verdaderos (Fungi)
debido a diferencias en la composicin de la pared celular y en su ploida.

2.1 Sntomas
La sintomatologa difiere en las distintas variedades y estados de desarrollo
de la planta, generalmente, la enfermedad se le reconoce porque las hojas
afectadas presentan manchas amarillas o rojizas, estas manchas se
observan en la cara superior de las hojas (haz), pero en la cara inferior
(envs), crece una pelusilla de color plomo, las manchas van creciendo en
tamao y nmero.
4.1.8 En la parte inferior o envs de las hojas correspondiente las reas
amarillentas o rojizas se observa la caracterstica pelusilla de color gris
violceo.
4.1.9 La presencia de esta enfermedad inicia de las hojas de la base o
inferiores y luego pasa a las hojas superiores.
4.1.10 Es raro observar plantas enfermas en poca de sequa.
4.1.11 Los sntomas en los tallos y ramas se manifiestan en forma de
manchas menos pronunciadas que en hojas, las panojas son oscuras
solo cuando la infeccin es intensa en toda la planta. A travs de los
granos de las plantas enfermas se transmiten la enfermedad a la
siguiente campaa agrcola.

4.2 MARCO CONCEPTUAL


Diagnstico: caractersticas que permiten reconocer a una planta
enferma.
Ciclo de la enfermedad: todos los eventos incluidos en el desarrollo de
la enfermedad, incluyendo las etapas de desarrollo del patgeno y el
efecto de la enfermedad sobre el hospedero.
Hongos antagnicos: cada aislado puede expresar uno o ms de ellos
en forma simultnea, frente a un determinado patgeno. De ah que sea
importante poder establecer cuantos y cuales mecanismos esta
expresado un hongo antagonista frente a un determinado fitopatgeno, y
si tiene la capacidad de expresar esos mismos mecanismos frente a
otros patgenos.
Patgeno: los agentes que causan enfermedades en las plantas se
caracterizan por ser infecciosas (las bacterias, hongos, micoplasmas,
nematodos y virus).
Infeccin: El organismo colonizador es perjudicial para el
funcionamiento normal y supervivencia del husped, por lo que se
califica al microorganismo como patgeno.
Necrtico: la muerte patolgica de un conjunto de clulas o de cualquier
tejido del organismo.
Hongos: grupo de organismos eucariota entre los que se encuentran los
mohos, las levaduras y las setas.
Inoculo: introducir en el organismo por medios artificiales el virus o la
bacteria de una enfermedad de una enfermedad contagiosa.
Enfermedad: proceso y l estatus consecuente de afeccin de un ser
vivo. Las enfermedades que afectan a las plantas y dems botnicos
conciernen a la fitopatologa.
Infeccin: invasin y desarrollo de un microorganismo, generalmente
parasito (virus, bacteria, hongo protozoo o invertebrado).
Saprofito: puede ser planta o microorganismo que se alimenta de
materia orgnica en descomposicin, las plantas saprofitas no realizan
fotosntesis.
Micelio: aparato vegetativo de los hongos que constituye su talo,
formado por filamentos muy ramificados.
Polimorfismo: propiedad de ciertos cuerpos que pueden cambiar de
forma sin variar su naturaleza.
Incidencia: el aumento que una enfermedad o epidemia pude mostrar a
lo largo del tiempo, permitiendo as su anlisis y posible solucin.
Infestacin: la invasin de un organismo vivo por agentes parsitos
externos o internos. Invadir un lugar.
Control biolgico: es un mtodo de control de plagas, enfermedades y
malezas mediante la utilizacin de microorganismos con el objetivo de
controlar las poblaciones de otro organismo.
Fitosanitario: perteneciente o relativo a la prevencin y curacin de las
enfermedades de las plantas.
Diseminacin: dispersin natural de las semillas, capacidad de un
microorganismo de entrar en un cuerpo y esparcirse a travs de los
tejidos. Esta distribucin puede transformar o no en infeccin o
enfermedad.
UFC: Unidad formadoras de colonias.

5 OBJETIVOS DE ESTUDIO
OBJETIVO GENERAL
Determinar la Influencia de Trichoderma viride y Trichoderma
harzianum en el control del mildiu (Peronospora variabilis) de la
quinua (Chenopodium quinoa Willd.) Camacani, Puno Per
OBJETIVOS ESPECIFICOS
o Determinar cul de las dos especies de trichoderma spp. Controla
mejor el mildiu (Peronospora variabilis)
o Determinar la dosis optima de Trichoderma viride, para el control
de mildiu (Peronospora variabilis).
o Determinar la dosis optima de Trichoderma harzianum, para el
control de mildiu (Peronospora variabilis).

6 HIPTESIS
Ho: La aplicacin de Trichoderma viride, controlara la enfermedad del
mildiu (Peronospora variabilis) de la quinua (Chenopodium quinoa
Willd.)
Ha: La aplicacin de Trichoderma viride, no controlara la enfermedad
del mildiu (Peronospora variabilis) de la quinua (Chenopodium
quinoa Willd.)
Ho: La aplicacin de Trichoderma harzianum, controlara la
enfermedad del mildiu (Peronospora variabilis) de la quinua
(Chenopodium quinoa Willd.)
Ha: La aplicacin de Trichoderma harzianum, no controlara la
enfermedad del mildiu (Peronospora variabilis) de la quinua
(Chenopodium quinoa Willd.)

7 UTILIDAD DE LOS RECURSOS DEL ESTUDIO


Por la necesidad de tener una alternativa econmica y ecolgicamente
limpia, el presente trabajo de investigacin pretende brindar conocimientos
a los productores de quinua sobre el control de la enfermedad del mildiu
(Peronospora variabilis) del cultivo de la quinua (Chenopodium quinoa
Willd.) con la aplicacin de dos especies de microorganismos:
Trichoderma harzianum y Trichoderma viride, ya que estas dos
especies se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza.
8 MATERIALES Y MTODOS DE LA INVESTIGACIN
8.1 MATERIALES
8.1.1 MATERIAL GENTICO
A) Semillas de quinua
A.1 Nombre de la variedad: Salcedo INIA
A.2 Descripcin morfologa
Descripcin general:
o Tipo de Crecimiento : Herbceo
o Hbito de crecimiento : Simple
o Ciclo Vegetativo : 150 das para el altiplano; 135 das para
valles interandinos; 120 das para costa
o Altura de planta : 1,48 a 1,70 m
o Rendimiento promedio de grano : 2,50 t/ha en zona alto
andina : 6.50 t/ha en costa y valles interandinos
Caractersticas del tallo
o Forma del tallo principal : Sin ngulos
o Dimetro del tallo : 1,90 a 2,30 cm
o Presencia de axilas pigmentadas : Ausentes
o Presencia de estras : Presentes
o Color de las estras : Verde claro
o Color del tallo principal : Verde
o Presencia de ramificacin : Ausente
Caractersticas de la hoja
o Borde de las hojas inferiores : Dentado
o Dientes de las hojas : 12 a 30 dientes
o Longitud mxima del peciolo : 5,10 a 6,30 cm
o Longitud mxima de las hojas : 10,40 a 11,20 cm
o Anchura mxima de las hojas : 8,60 a 10,50 cm
o Color de las hojas : Verde
Caractersticas dela panoja
o Color de la panoja en la floracin : Verde
o Intensidad del color de la panoja en la floracin : Tenue
o Color de la panoja en la madurez fisiolgica : Blanca
o Intensidad del color de la panoja en la madurez fisiolgica :
Tenue
o Forma de la panoja : Glomerulada
o Longitud de panoja : 34,00 a 40,00 cm
o Densidad de la panoja : Compacta
o Dimetro de panoja : 8,40 a 10,90 cm
o Longitud de los glomrulos : 6,30 a 8,50 cm
o Nmero de panojas por planta : 1
Caractersticas del grano
o Aspecto del grano : Opaco
o Color del perigonio : Verde
o Color del pericarpio : Crema
o Color del episperma : Blanco
o Color del perisperma : Blanco
o Forma del borde del grano : Afilado
o Forma del grano : Cilndrico
o Uniformidad del color del grano : Bastante uniforme
o Latencia de la semilla : Ausente Dimetro del grano : 2,00
mm
o Rendimiento de semillas por planta : 40,00 a 48,73 g en el
altiplano Peso de 1 000 granos (g) : 3,10 a 3,70 g

A.3 fenologa de la variedad:


Fase Vegetativa
o Germinacin
o Emergencia de plantula
o Dos hojas verdaderas
o Cuatro hojas verdaderas Ramificacin
o Seis hojas verdaderas
o Ramificacin
Fase Reproductiva
o Inicio de panoja y floracin
o Madurez fisiolgica
Das hasta la emergencia de plntulas a la superficie del suelo :
7 das
Das hasta el inicio de panoja : 57 das
Das hasta la floracin : 95 das
Das hasta la madurez fisiolgica: 150 das

B) Cepas de Trichoderma harzianum


Caractersticas morfolgicas y fsico-qumicas
Macroscpicamente el hongo presenta un micelio blanco algodonoso, que se
torna de color verde, debido a la rpida y abundante esporulacin. Es un
hongo que posee conidias hialinas, uniceluladas y ovoides, que tienden a
agregarse formando masas; presenta un conidiforo hialino, largo y no
verticilado. Tiene la capacidad de producir clamidosporas que son globosas o
subglobosas, ubicadas en la parte terminal o intermedia de las hifas y miden
menos de 15 m de dimetro; stas son estructuras de resistencia, vitales e
importantes para la sobrevivencia del hongo bajo condiciones adversas. El
rango de temperatura para el crecimiento de Trichoderma oscila entre 15 y
30C, con un ptimo de 25C, temperaturas mayores a 30C limitan el
crecimiento y desarrollo del hongo, e inicia la formacin de clamidosporas. Las
condiciones adecuadas de humedad estn en el 70%, sin embargo, tiene la
capacidad de crecer en una rango entre 20% y 80%. La condicin de pH flucta
entre 5,5 y 7,5, con un ptimo de 6,6. Si se encuentra en medios con pH
alcalinos (por encima de 7,0) tiene la capacidad de acidificar el medio
mediante la liberacin de cidos orgnicos
C) Esporas de mildiu

8.1.2 MATERIAL DE LABORATORIO


A) Microscopio - Descripcin
Modelo: EUM-F62
Microscopio Binocular inclinado 45, giratorio 360
Oculares: WF10X, WF15X
Revolver cudruple
Objetivos: 4X, 10X, 40X, 100X (195mm)
Platina mecnica con movimiento ortogonal
Diafragma Iris
Iluminacin 6V/20w halgeno con regulacin de intensidad
Condensador Abbe, AN 1,25 pion y cremallera
Suministrado en caja de metal, kit de limpieza, filtros, funda,
aceite inmersin.
B) Estereoscopio descripcin
Modelo: SZX10
Marca : Olympus
produce una resolucin de 600 pares de lneas por milmetro.
Relacin de zoom de 10:1
C) Autoclave descripcin
Marca: Adner
Una autoclave de laboratorio es un dispositivo que sirve para
esterilizar material de laboratorio, utilizando vapor de agua a alta
presin y temperatura, evitando con las altas presiones que el
agua llegue a ebullir a pesar de su alta temperatura.
D) Balanza analtica descripcin
Modelo : KERN ABS-1204N
Uso simple de frmulas/documentacin con funcin combinada
tara/imprimir. Adems los componentes de la mezcla se numeran
automticamente y se imprimen con nmero/valor de peso
Nmero de identificacin de 4 dgitos, libremente programable, se
imprime en el protocolo de ajuste Salida de datos automtica en el
ordenador/impresora despus de cada parada de la bscula
E) Horno microondas descripcin
Modelo: Ms-0746t
Marca: LG
El horno microondas sencillo, capacidad 0,7pies3, 700w de
potencia, con control de un toque y sistema intelo wave para
coccin uniforme
Descongelamiento automtico
Pantalla led
Men de un toque
F) Medio de Cultivo
Ser elaborado a base de 250g. papa, 18g. agar y 10g. azcar
para obtener un litro de medio de cultivo.

8.1.3 INSUMOS
Agar
Alcohol de 70
Agua mineral
Extracto de malta al 1%
Carbonato de calcio

8.2 METODOLOGA
Comprender dos fases:
8.2.1. FASE DE LABORATORIO
Preparacin de inculo Para preparar el inculo, se recolectaron hojas enfermas de
plantas de quinua de parcelas de agricultor con alta incidencia en el Altiplano de Oruro.
Estas hojas fueron colectadas y colocadas en una cmara hmeda, y para favorecer la
esporulacin de las hojas se prepar el inculo en laboratorio. Se seleccionaron grupos
de cinco hojas naturalmente enfermas, se las introdujo en tubos Falcn con
aproximadamente 5 ml de agua destilada estril, inmediatamente se agit
manualmente para lavar las esporas del envs de las hojas Una vez obtenida la solucin
fue filtrada con la ayuda de una gasa y con un hemacit- metro se la concentr a 1x105
esporangios/ml

Tratamiento en invernadero Una vez que las plantas alcanzaron una altura entre los 10 a
15 cm, con la ayuda de un gotero, se inocularon tres hojas/planta (Figura 5). Las plantas
inoculadas fueron colocadas dentro de bolsas plsticas de color negro para estimular la
apertura de los estomas y favorecer el ingreso del patgeno. Transcurridas las 24 horas
se quit la bolsa y se las dej en una cmara hmeda (ambiente con riego por
nebulizacin cada 3 horas) por 5 das, tiempo en el cual la enfermedad alcanza
normalmente una severidad entre el 5 al 15%. Figura 5. Secuencia de inoculacin de
plantas de quinua con mildiu. Inmediatamente, se procedi a aplicar los extractos en
diferentes concentraciones: pura y diluida. La aplicacin se realiz con un aspersor para
lograr una buena distribucin y adherencia del extracto en las hojas (Figura 6).

El ensayo se realiz en los invernaderos de la Fundacin PROINPA ubicada en la zona de


El Paso. Los materiales empleados fueron los siguientes: 30 aislamientos de
Trichoderma sp. 2 variedades de quinua, procedentes de Tiraque: quinua blanca
(susceptible) y quinua roja (resistente). Macetas con sustrato estril para el desarrollo
de las plantas. Papel facial, pinzas, bolsas negras y aspersores para la inoculacin. Los
tratamientos resultaron de la combinacin de dos variedades, 30 aislamientos de
Trichoderma sp. y 2 tipos de inoculacin. Los tratamientos fueron evaluados bajo el
diseo experimental de bloques completos al azar con 3 repeticiones. Donde la unidad
experimental constituy una maceta de 250 gr con 3 plantas. 457 Produccin Ecolgica
Los 30 aislamientos de Trichoderma fueron multiplicados en bolsas de polietileno con
sustrato de arroz estril, incubados a temperatura ambiente en estantes hasta que todo
el arroz se cubrier de conidias. Cada una de las variedades fueron sembradas en
macetas, se sembraron 5 semillas por maceta; sin embargo, despus de la emergencia
se raleo, dejando las 3 mejores plantas. Cuando las plantas tenan una altura de 12 a 20
cm. se inocul P. variabilis en una solucin lquida. Dado que P. variabilis es un patgeno
obligado, se colect inculo de plantas enfermas de campo. Estas hojas fueron lavadas
con agua destilada, preparndose una solucin lquida a una concentracin de 1x105
esporas/ml. Simultneamente, se prepar suspensiones lquidas de cada uno de los
aislamientos de Trichoderma a una concentracin de 1x105 conidias/ml. De las seis
macetas sembradas por aislamiento: 3 macetas fueron tratadas con Trichoderma y las
otras 3 macetas se inocularon con mildiu + Trichoderma. Las plantas permanecieron en
una cmara hmeda por el lapso de 20 das, tiempo en el cual se evaluaron las
siguientes variables: Severidad. La severidad de la enfermedad fue determinada con la
metodologa de Stover modificada por Gaughl et al. (1995) mediante la siguiente
frmula: Donde: n=nmero de hojas en cada grado, b=grado(0=sin sntomas; 1=menos
del 1% de la lmina con sntomas; 2=1-5% de la lmina con sntomas; 3= 6-15% de la
lmina con sntomas; 4= 16-33% de la lmina con sntomas; 5= 34-50% de la lmina con
sntomas; 6= 51-100% de la lmina con sntomas), N=nmero de grados empleados en
la escala (7) y T=total de hojas evaluadas. Altura de planta. Se midi el tamao de planta
desde el nivel del suelo hasta el pice de la planta. Anlisis estadstico. La variable
severidad se ajusta a una distribucin binomial fue evaluado bajo la teora de los
modelos lineales generalizados, bajo el siguiente modelo estadstico con el PROC
GENMOD del SAS (2001)
8.2.2. FASE DE CAMPO
UBICACIN DEL CAMPO EXPERIMENTAL
El presente trabajo de investigacin ser instalado en una parcela
donde anteriormente se sembr papa.
MERCADO DE PARCELAS DEMOSTRATIVAS
El marcado del campo experimental se efectuara los das 17 y 18
de octubre, de acuerdo a la distribucin de bloques y parcelas.
PREPARACIN DE TERRENO
La preparacin del campo experimental se realizara del 19 al 24
de octubre, se efectuara con la ayuda del tractor agrcola.
MUESTREO DE SUELO
Para la obtencin del suelo y realizar el respectivo anlisis fsico
qumico, se realizar muestreos dentro del campo experimental a
una profundidad de 10 a 15 cm., luego el tamizado
correspondiente hasta la obtencin de 1 kg. de suelo.
ANLISIS FSICO QUMICA DE SUELO
El anlisis fsico qumico del suelo se realizara en el laboratorio
de suelo de la Facultad de Ciencias Agrarias, UNA Puno.
Para determinar la presencia de cualquier organismo patgeno.
INOCULACIN DE LA SEMILLA
Siguiendo la tcnica sugerida, ms las dosis adecuadas, teniendo
en cuenta la densidad de siembra de la quinua que es de 10
kg/ha. Se procede de la siguiente manera:

INOCULACIN DE LA SEMILLAS DE QUINUA CON ESPECIES


Trichoderma viride y Trichoderma harzianum.

o Inoculacin de Trichoderma viride: comprende 3


dosificaciones:
- D0: Testigo
- D1: 1 X 107 conidios/ml
- D2: 1 X 106 conidios/ml
- D3: 1 X 105 conidios/ml
o Inoculacin de Trichoderma harzianum: comprende 3
dosificaciones:
- D0: Testigo
- D1: 1 X 107 conidios/ml
- D2: 1 X 106 conidios/ml
- D3: 1 X 105 conidios/ml

SIEMBRA
La siembra se realizara el 30 octubre del 2015, la cantidad de
semillas que se va utilizar en la siembra ser de acuerdo a la
dosis de siembra e inoculacin se van a sembrar en hileras a
chorro continuo a una profundidad de 1 cm., que sern tapados
en forma manual, el riego despus de la siembra va ser legero
con una regadera.
INFESTACIN DE ENFERMEDAD DEL MILDIU (Peronospora
variabilis)
La infestacin se va realizar cuando las plantas tengan
DESHIERBO Y APORQUE
Se efectuara dos deshierbas y un apoque durante el periodo del
cultivo, el primer deshierbe ser apenas haya la presencia de
malezas despus de la siembra (aproximadamente a los 10 o 15
dias), en forma manual.

El segundo deshierbe se realizara despus de 45 a 50 das.


EVALUACIN DEL CULTIVO
Las evaluaciones se realizaran de acuerdo a los requerimientos
de los datos, en la siguiente poca del cultivo.
- Las primeras evaluaciones se harn en el estado de
emergencia de las plantas, nmero de plantas emergidas, etc.
- Posteriormente se realizaran evaluaciones de altura de planta,
incidencia de la enfermedad, severidad de la enfermedad, en
cada parcela.
COSECHA
La cosecha se realizara cuando ms del 50% de las panojas de
cada parcela presenten madurez fisiolgica (antes que se
produzca la dehiscencia del fruto) este ser aproximadamente a
los 150 das despus de la siembra.
El proceso de cosecha se efectuara en forma manual con la
ayuda de una hoz, ya que esta operacin es la ms importante y
delicado del cultivo, porque se puede producir la dehiscencia del
cultivo. Luego se realizara las ltimas evaluaciones en relacin
con las variables de respuesta planteada.

8.3 MATERIAL EXPERIMENTAL


- Conidios : Trichoderma viride y Trichoderma harzianum
- Esporas : Peronospora variabilis
- Semilla de quinua : Salcedo INIA

8.4 FACTORES EN ESTUDIO


o Inoculacin de Trichoderma viride:
- D0: Testigo
- D1: 1 X 107 conidios/ml
- D2: 1 X 106 conidios/ml
- D3: 1 X 105 conidios/ml
o Inoculacin de Trichoderma harzianum:
- D0: Testigo
- D1: 1 X 107 conidios/ml
- D2: 1 X 106 conidios/ml
- D3: 1 X 105 conidios/ml
o Tratamientos:
- Tratamiento 1 (T1) D0
- Tratamiento 2 (T1) D1
Trichoderma viride
- Tratamiento 3 (T1) D2
- Tratamiento 4 (T1) D3
- Tratamiento 5 (T1) D0
- Tratamiento 6 (T1) D1
Trichoderma harzianum
- Tratamiento 7 (T1) D2
- Tratamiento 8 (T1) D3
8.5 VARIABLE DE RESPUESTA
- Porcentaje de incidencia / planta
- Porcentaje de severidad /planta
- Rendimiento en g/planta y kg/ha
8.6 OBSERVACIONES A REALIZAR
- Datos meteorolgicos
- Altura de planta
- Daos a la cosecha
- Presencia de plagas y otras enfermedades
- Presencia de malezas
- Fenologa del cultivo
8.7 DISEO EXPERIMENTAL
Para el anlisis de varianza y la distribucin de los tratamientos se
utilizara el Diseo de Bloque Completo al Azar con 4 tratamientos y 4
repeticiones; haciendo un total de 16 unidades experimentales.
8.7.1 ANLISIS DE VARIANZA
FUENTES DE VARIACIN G.L.
Bloque (r 1) 4 1= 3
Tratamiento (t 1) 81=7
Error (r 1) (t 1) (4 1) (8 1) = 21
Total (r t 1) (4 X 8 1) = 31

8.7.2 CARACTERSTICAS DEL CAMPO EXPERIMENTAL


A) REA DEL EXPERIMENTO
Largo del campo experimental : 17.0 m
Ancho del campo experimental : 33.8 m
rea total del experimento : 574.6 m2
B) BLOQUES
Numero de repeticiones :4
Largo del bloque : 16.9 m
Ancho del bloque : 3.5 m
rea del bloque : 118.3 m2
C) PARCELAS
N de parcelas por bloque : 4.0
Largo de la parcela : 4.0 m
Ancho de la parcela : 3.5 m
rea de cada parcela : 14.0 m2
N total de parcelas : 32
D) CALLES
N de calles por bloque :3
Largo : 33.8 m
Ancho : 1.0 m
N de calles por tratamiento :3
Largo : 17.0 m
Ancho : 0.3 m
E) SURCOS
N de surcos por parcela : 6 surcos /parcela
Distanciamiento entre surcos : 0.7 m
Largo del surco : 0.4 m

9 MBITO DE ESTUDIO
9.1 LOCALIZACIN
El presente trabajo de investigacin se llevara a cabo en el Centro de
Investigacin y Produccin de Camacani de la facultad de Ciencias
Agrarias de la Universidad Nacional del Altiplano, ubicado a 26 km de la
carretera Puno Platera.
Ubicacin de Camacani:
Distrito : Platera
Provincia : Puno
Regin : Puno
Ubicacin Geogrfica:
Latitud sur : 15 56' 34" S
Longitud oeste : 69 51' 27.7" W
Altitud : 3842 m.s.n.m.

9.2 DURACIN DE PROYECTO


Fecha de inicio : Octubre del 2015
Fecha de finalizacin : Abril del 2016

10 RECURSOS
10.1 RECURSOS HUMANOS
Ejecutor
Director
Asesores (Fitoplogo y fitotecnia)
10.2 RECURSOS MATERIALES Y EQUIPOS
Semillas de quinua Alcohol
Inculos de mildiu Equipo de diseccin
Inculos de Trichoderma Sustrato de arroz
spp. Botellas de vidrio (500ml)
Microscopio Mechero
Estereoscopio Wincha mtrica (30 cm)
Placa Petri Libreta de campo
Matraz Lpiz, lapicero
Vaso precipitado Plumones
Vagueta Papel bond
Horno microondas Cinta adhesiva
Balanza analtica Bolsas de plstico
Autoclave Cmara fotogrfica
Papel aluminio otros
Algodn

10.3 PRESUPUESTOS

A. MANO DE OBRA unidad cantidad Precio s/.


De instalaciones a cosecha. Jornal 90 1080.00
Pasajes y viticos. Jornal 4 200.00
Alimentacin Meses 6 600.00
SUB TOTAL S/. 1880.00
B. EQUIPOS Y MATERIALES
Semilla de quinua 1 18.00
Kilos
Adherente 20.00
Kilos
Agar (250 gr) 1 25.00
Unidad
Balde de 15 litros 1 5.00
Unidad
1 20.00
Equipo de diseccin Unidad
1 3.50
Arroz Kilo
1 5.00
Alcohol 70 Unidad
1 7.00
Algodn Unidad
1 10.50
Papel aluminio Unidad
1 26.00
Papel tohalla Unidad
1 24.50
Agua mineral (2 gl.) Unidad
5.80
Extracto de Malta kilo
1.00
kilo
Carbonato de calcio SUB TOTAL 171.30
C. MATERIALES Y TILES
DE ESCRITORIO
Libreta de campo Unidad 1 5.00
Lpiz Unidad 1 1.00
Lapicero Unidad 2 1.00
Cinta adhesiva Unidad 1 3.50
Plumones Unidad 2 3.00
Papel bond Paquete 1 12.00
SUB TOTAL 25.50
D. MATERIAL
FOTOGRFICO
Cmara fotogrfica Unidad 1 150.00
SUB TOTAL S/. 150.00
E. SERVICIOS
Revelado de fotos Unidad 1 60
Anlisis de suelo Anlisis de suelo 1 320.00
SUB TOTAL S/. 380.00
F. PUBLICACIN
Impresin Unidad 150 75.00
Empastados Unidad 8 240.00
SUB TOTAL S/. 315.00
G.PRESUPUESTO BASE
Mano de obra 1880.00
Equipo y materiales 171.30
Materiales de escritorio 25.50
Material fotogrfico 150.00
Servicios 380.00
Publicacin 315.00
TOTAL 2921.80

11 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
MESES
ACTIVIDADES
S O N D E F M A M J J A
Obtencin de semillas X
Preparacin del terreno X
Anlisis de suelo X
Trazado de parcelas X
Inoculacin de Trichoderma viride y
X
Trichoderma harzianum
Siembra X
Infestacin de enfermedad del mildiu
X
(Peronospora variabilis)
Deshierbes X X
aporques X
Cosecha X
Evaluaciones X X X X X X
Procesamiento de datos X X

11.1 FINANCIAMIENTO
Estudiante : 100%

12 BIBLIOGRAFA Y OTRAS FUENTES DE INFORMACIN


- Apaza, V.; Cceres, G.; Estrada, R. y Pinedo, R. 2013. Catlogo de
Variedades Comerciales de Quinua en el Per. Ed. JB Grafic E.I.R.L.
Lima, Per. pp. 42 45.
- Mamani, L. 2003. Evaluacion de campo de la tolerancia de mildiu
(Peronospora farinosa) en material seleccionado de quinua
(Chenopodium quinoa Wild.). Tesis. Facultad de Agronoma. La Paz,
Bolivia. 110p.
- Vargas, M. 2013. Congreso cientfico de la Quinua (Memorias). Ed.
Grafica leal. La Paz, Bolivia. pp. 445.
- Gandarillas H. Mejoramiento de la
Quinua. En: La Quinua y la Kaiwa:
Cultivos
- Andinos. M. Tapia (ed.). Centro
- Internacional de Investigacin para el
- Desarrollo, Santaf de Bogot.
1979;65-82
- pp.
Mujica, A. 1988. Parmetros genticos e
ndices de seleccin en quinua
(Chenopodium quinoa Willd.). Tesis de
Doctorado. Colegio de Postgraduados,
Centro de Gentica. Montecillos, Mxico.
122 pp.
Tapia et al. 1979. La Quinua y la Kaiwa. Cultivos
Andinos. Ed. IICA.Bogota.227p.
Rivera, R. 1995. Cultivos Andinos en el Per.
Investigaciones y Perspectivas de su Desarrollo. Ed.
Minerva. Lima, Per. 417 p.
13 ANEXOS
ANEXO N 01
CROQUIS DEL CAMPO EXPERIMENTAL

33.8 m
4.0
0.3 m m
T1 T4 T5 T2 T5 T7 0.3
T6 T4
3.5
m
m

T5 T3 T7 T8 T3 T6 T1 T7

17 m

T2 T1 T8 T1 T2 T4 T3 T8

T6 T8 T4 T3 T6 T7 T5 T2
LEYENDA:

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