29
ESTUDO SOBRE A CORIZA INFECCIOSA
DAS GALINHAS.
I. CARACTERES CULTURAIS,
BIOQUMICOS E SOROLGICOS DE
17 AMOSTRAS DE
HAEMOPHILUS ISOLADAS NO
BRASIL*
HIDEMI NARITA
Estagirio, docente voluntrio
OSMANE HIPLITO
Professor Titular
Assessor do D.T.C. Embrapa, Braslia
JOS AMRICO BOTTINO
Professor Livre Docente
Faculdade de Medicina Veterinria e
Zootecnia da USP
NARITA, H.; HIPLITO, O.; BOTTINO, J.A. E studo sobre a coriza
infecciosa das galinhas. I. Caracteres culturais, bioqum icos e
sorolgicos de 17 am ostras de Haem ophilus isoladas no Brasil.
Rev. Fac. Med. vet. Zootec. Univ. S.Paulo, 17(1/2): 29-31, 1980
RESUMO: Dezessete am ostras de organismos do gnero Haem ophilus
isoladas de galinhas com sintom as clnicos de coriza infecciosa fo
ram obtidas do seio infra-orbitrio de ayes com infeco natural. Os
organismos cresceram bem no meio Agar - 2 0 e no meio lquido
CMI-20 suplem entado com 5% de soro de galinha e 2% de extrato de
ferm ento. Esses organismos m icroaerfilos exigiam o fator V mas
no o fator X. Cinco am ostras exigiram soro de galinha alm do fa
to r V para o crescimento no meio gar-20. No houve crescimento
em passagens seriadas no meio Agar- 2 0 em condies aerobiose. O
Staphylococcus aureus foi usado como cultura alim entadora nos iso
lamentos. Todas as am ostras eram catalase e indol negativas. N enhu
ma delas produziu indol, H2S ou gs nem liquidez a gelatina. Todas
reduziram nitratos a nitritos. Eram Gram negativas, imveis e apre
sentavam bipolaridade. Todas ferm entaram glucose, m anose, fru cto
se, sacarose e destrina mas no ferm entaram arabinose, ram nose, ga
lactose, lactose, trealose, rafinose, inulina, adonitol, dulcito, inositol
e salicina. Algumas ferm entaram xilose, m altose, m anitol e sorbitol.
Quinze am ostras isoladas foram estudadas sorologicam ente e dividi
das em dois grupos. Oito das am ostras representando um tipo soro-
lgico ferm entaram a xilose mas sete representando um segundo ti
po sorolgico deixaram de faz-lo. Os resultados dos estudos coinci
diram bastante com os de outros autores. Pelo fato de no exigirem
o fator X mas sim o V, as 17 am ostras isoladas e aqui estudadas deve
riam ser denom inadas Haem ophylus paragallinarum BIBERSTEIN
e WHITE, 1969.
UNITERMOS: Coriza infecciosa, galinhas', H aem ophilusgallinarum *;
Haem ophilus paragallinarum *
Trabalho apresentado ao XVI Congresso Mundial de Avicultura, Rio
de Janeiro, 1979.
Trabalho realizado com auxlio do Conselho Nacional de Desenvol
vimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq) e da Fundao Cargill.
INTRODUO
O agente da coriza infecciosa das galinhas foi primei
ramente relatado por DE BLIECK6 na Holanda e por
NELSON11 nos Estados Unidos, em 1932. Durante as lti
mas trs dcadas, a partir destes trabalhos, muitos aspectos
da coriza infecciosa foram estudados no mundo por muitos
investigadores, entre eles ADLER e PAGEL BEACH e
SCHALM2, BORNSTEIN e SAMBERG4 , CLARK e
GODFREY5, DELAPLANE e Cols?., YAMAMQTO e
SOMERSET13, KATO e TSUBAHARA10, HINZ9, etc.
As caractersticas culturais, bioqumicas e sorolgicas
das amostras de Haemophilus isoladas de galinhas foram es
tudadas e relatadas por BORNSTEIN e SAMBERG4 em
Israel, PA G E l2, nos Estados Unidos, KATO e
T S U B A H A R A ln o Japo e HINZ9, na Alemanha.
A ocorrncia da coriza infecciosa tem sido frequente
no Brasil por muitos anos e graas s caractersticas clnicas
bastante tpicas com que a doena ocorre nas galinhas, fa
cilmente reconhecida, porm seu agente etiolgico no ha
via sido ainda estudado entre ns. uma das mais impor
tantes doenas das aves no presente, ocasionando elevadas
perdas econmicas, sem contar as complicaes que podem
advir resultantes da associao com os agentes da chamada
doena respiratria crnica (DRC) das galinhas. Neste rela
trio, os aspectos globais das caractersticas das amostras
isoladas foram estudados como contribuio para reduzir as
perdas causadas pela coriza infecciosa.
MATERIAL E MTODOS
Dezessete amostras de Haemophilus sp. foram isola
das durante os anos 197677 a partir de material coletado
diretamente do seio infra orbitrio de galinhas com sinto
mas de coriza infecciosa. Como meios de cultura bsicos
para o isolamento e manuteno das culturas foram usados
meios lquido e slido preparados com infuso de carne de
galinha enriquecidos com soro de galinha e denominados
meios CMI-20 e gar-20, respectivamente. Como fator V
foram utilizados o sal dissdico reduzido de B-nicotinamida
adenina dinucleotdio (Kohjin) e o extrato de fermento. A
hemina, utilizada como fator X, foi obtida da Sigma Chemi
cal. Para os estudos sorolgicos foram preparados soros
imunes em coelhos inoculados com uma suspenso bacteria-
na ajustada em transmitancia (60% T) com auxlio de um
espectrofotm etro Coleman Jr. modlo 6-065 em compri
mento de onda de 540 mu. Foram utilizados os mtodos de
aglutinao lenta e rpida para a determinao dos soroti-
pos de Haemophilus sp.
RESULTADOS E DISCUSSO
Os resultados encontrados (Tabelas 1, 2 e 3) no estu
do de 17 amostras de Haemophilus sp. isoladas no Brasil de
galinhas com coriza infecciosa coincidem em sua maioria
com aqueles constatados por HINZ8,9.
Os organismos crescem bem no meio gar-20 e no
meio lquido CMI-20 suplementado com 5% de soro de gali
nha e 2% de extrato de fermento. Esses organismos micro
aerfilos exigiram o fator V mas no o fator X. Cinco amos
tras exigiram sor de galinha alm do fator V para o cresci
mento no meio gar-20. No houve crescimento em passa
gens seriadas no meio gar-20 em condies de aerobiose.
O Staphylococcus aureus foi usado como cultura alimenta
dora nos isolamentos. Todas as amostras eram catalase e in
dol negativas. Nenhuma delas produziu indol, H2S ou gs
30 NARITA, H.; HIPLITO, O ; BOTTINO. J.A.

liquefez a gelatina. Todas reduziram nitratos a nitritos. TABELA 1. Exigncias nutricionais de 17 am ostras de
Eram Gram-negativos, imveis e apresentavam bipolaridade. Haem ophilus isoladas de galinha com coriza infecciosa
Em nossa investigao somente loram estudadas cul Incubao em
turas catalase-negativas e patognicas mas PAGE 12 e HINZ Meio gar-20 Aero- Anaero-
8, 9 ; incluram tambm amostras catalase-positivas e no pa suplem entado com biose robiose
tognicas. A diferenciao com respeito patogenicidade das 1 . C ultura alim entadora S. aureus 0 / 1 7 0 17/17
amostras fcil quando se tom a por base a prova da catala- 2 . 10 ug NADH por ml 0/17 12/17
se. 3. 10% extrato de ferm ento 0/17 12/17
Das 23 amostras estudadas por HINZ8.9, seis exigi 4. 10 ug de hemina por ml 0/17 0/17
ram soro de galinha alm do fator V e o mesmo aconteceu 5. 5% de soro de galinha 0/17 0/17
com cinco das nossas amostras. Entretanto, no foi poss 6 . 10 ug NADH/ml + 10 ug hemina 0/17 12/17
vel no presente estudo determinar quais os fatores presentes 7. 10 ug NADH/ml + 5% soto de galinha 0/17 17/17
no soro de galinha que so exigidos para o crescimento do 8 . 10% extr. ferm ento + 10% hemina 0/17 12/17
H. paragallinarum. E bastante interessante notar que, con 9. 10% extr. ferm ento + 5% soro galinha 0/17 17/17
forme foi tambm observado por PAGE' 2 os organismos 10 C ontrole (sem suplem entao) 0/17 0/17
do gnero Haemophilus que exigiram o fator V adicionado
ao meio gar-20 cresceram bem no caldo quando o mesmo
(*) = N9 culturas positivas/ N9 culturas testadas.
recebeu tambm 5% de soro de galinha.
O estudo de 15 amostras pela prova de soro-aglutina-
o cruzada mostrou a existncia de dois grupos sorolgicos
distintos. Com base nesses estudos as demais amostras isola
das foram tambm identificadas sorologicamente. Verifi-
cou-se ainda que havia acentuada diferena na velocidade de TABELA 2: Caracteres bioqum icos de 17 am ostras de Haemophilus
sedimentao da mistura antgeno-anticorpo aps a aglutina isoladas de galinhas com coriza infecciosa.
o e nos ttulos aglutinantes entre as amostras dos dois Provas Resultado
grupos sorolgicos. bioqum icas
De acordo com os resultados pode-se concluir pela 1. Xilose 10/17 ()
identidade entre os nosso sorotipo 1 e o sorotipo A de 2. Maltose 15/17
P A G E 1 2 e H IN Z 8 ,9 . Pode-se tambem assumir a identidade 3. Sorbitol 6/17
4. M anitol 12/17
sorolgica entre o nosso grupo II e o sorotipo B dos autores
5 . Indol 0/17
citados.
6 . Catalase 0/17
As amostras pertencentes aos dois sorotipos parecem
7. Reduo de nitratos 17/17
possuir a mesma virulncia para produzir a doena experi 8 . Form ao de gs 0/17
mental em aves susceptveis. O com portam ento das dezesse
9. Liquefao da gelatina 0/17
te amostras isoladas permite classific-las como Haemophilus
0. Produo de H2S 0/17
paragallinarum BIBERSTEIN e WHITE, 1969.
Com respeito fermentao de carbohidratos, todas
fermentaram glucose, manose, fructose, sacarose e destrina,
(*) N9 de culturas positivas ou ligeiram ente positivas sobre N9 de
mas no fermentaram arabinose, ramnose, galactose, lacto culturas testadas.
se, trealose, rafinose, inulina, adonitol, dulcitol, inositol e
salicina. Algumas fermentaram xilose, maltose, manitol e
sorbitol.
Esses resultados coincidiram bastante com os dados ci TABELA 3: Relao entre ferm entao de xilose e sorotipos de 15
tados por HINZ 8 >9. Em primeiro lugar, dez de nossas amos am ostras de Haem ophilus isoladas de casos de coriza
tras fermentaram a xilose, o mesmo acontecendo com seis infecciosa.
do autor citado. Na prova de fermentao da galactose hou
ve completa coincidncia. Mas KATO e TSUBAHARA10, Am ostra ou Ferm entao Sorotipo I Sorotipo II
PAGE12 e BORNSTEIN e SAMBERG4 relataram que ne A ntgeno da Xilose Am ostra B - 2 Am ostra S - 4
nhuma de suas amostras ferm entou a xilose e algumas delas M -l - + -

ou todas fermentaram a galactose. M -2 + _

B -l - + _

B -2 - + _

G - + _
CONCLUSES
M -3 - + -

T - + -
As dezessete amostras de organismos isolados do seio
B -3 + +
infra-orbitrio de galinhas com doena natural clinicamente
B -4 + +
diagnosticada como coriza infecciosa exigiam o fator V mas
S -l + +
no o fator X para o seu crescimento. Isso leva concluso
S -2 + +
de que tais organismos so idntidos ao Haemophilus para
S -3 + +
gallinarum BIBERSTEIN e WHITE3, 1969.
S -4 + +
Sob o ponto de vista sorolgico, as dezessete amostras
M -4 + +
estudadas foram divididas em dois grupos com base no m
M -5 + +
todo da soroaglutinao. O achado curioso foi que a fer
mentao da xilose, pelo menos no presente estudo, serviu
- Negativo + Positivo
para diferenciar os dois grupos.

Rev. Fac. Med. vet. Z ootec. Univ. S. Paulo, 17(1-2): 29-31, 1980
 Estudo sobre a Coriza Infecciosa das Galinhas. I. Caracteres Culturais, Bioqumicos e Sorolgicos de 31
17 amostras de H aem ophilus isoladas no Brasil.

NARITA, H.; HIPLITO, O.; BOTTINO, J.A . S tu d ieso n infectious

coryza o f chickens. I. C ultural biochem ical and serological cha
racteristics o f 17 strains o f Haem ophilus isolated in Brazil. Rev.
Fac. Med. vet. Z ootec. Univ. S. Paulo, 17 (1/2): 29-31,
1980.
SUMMARY: Seventeen strains of organism s o f the genus Haem ophilus
were isolated from the infra-orbital sinuses o f chickens w ith clinical
sym ptom s o f infectious coryza. The isolates grew well in the
A g a r-2 0 m edium and in the CMI20 liquid m edium supplem ented
with 5 per cent chicken serum and 2 per cent yeast extract. These
organisms required factor V but not factor X for grow th in A g a r-2 0
m edium. No grow th was obtained in serial passages in A g a r-2 0 m e
dium in aerobic conditions. Staphylococcus aureus was used as fee
ding culture for isolation purposes.
All strains were catalase and indol negative. N one produced
indol, H2S and gas or liquefied gelatin. All reduced nitrates to nitri
tes and were Gram negative, im m otile and presented bipolarity. All
ferm ented glucose, m annose, fructose, saccharose and dextrin but
not arabinose, rham nose, galactose, lactose, trehalose, raffinose, inu-
lin, adonitol, dulcitol, inositol and salicin. A few ferm ented xylose,
maltose, m annitol and sorbitol.
Nine strains were studied serologically and divided into tw o
groups. All strains o f one serological group ferm ented xylose while
none o f the other group did it.
Sinse all strains studied did not require factor X but only
factor V they should be classified as Haem ophilus paragallinarum ,
BIBERSTEIN e WHITE, 1969.
UNITERMS: Infectious coryza, chickens*; Haem ophilus gallinarum *
Haem ophilus paragallinarum *.
8 HINZ, K.H. Beitrag zur differenziarung von Haem ophi
lus ;stammen aus Hhnern. I. Mitteilung: Kultu
relle und biochemische Untersuchungen. Avian.
Path., 2 (3): 2 1 1 -2 9 , 1973.
9 HINZ, K. H. Beitrag zur differenzierung von
Haerm ophilus Stmmen aus Hhnern. II. Mittei
lung: Serologische Untersuchungen in objekttager
- agglutinations - Test. Avian Path., 2 : (4)
2 6 9 -7 8 , 1973 a.
10 KATO, K. & TSUBAHARA, H. Infectious coryza of
chickens. II. Identification o f isolates. Bull. Nat.
Inst. Anim al H ealth, 45 : 2126, 1962.
11 NELSON, J. B. Studies on an uncomplicated coryza
o f the domestic fowl. I. The isolation o f a bacillus
which produces a nasal discharge. J. Exp. Med.,
58: 289, 1933
12 PAGE, L.A. Haemophilus infections in chickens. I.
Characteristics o f 12 Haemophilus isolates reco
vered from diseased chickens. Amer. J. V et. Res.,
2 3 :8 5 -9 5 , 1962.
13 - YAMAMOTO, R.& SOMERSETT, D.T. Antibody res
ponse in chickens to infection with Haem ophilus
gallinarum. Avian D is., 8 :4 4 1 53, 1964.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Recebido para publicao em: 24/03/80
Aprovado para publicao em: 18/08/80
1 - ADLER, H.E. & PAGE, L. A. Haemophilus infections in
chickens. II. The pathology o f the respiratory
tract. Avian Dis., 6:16,1961.

2 - BEACH, J.R. & SCHALM, O.W. Studies o f the chemi

cal manifestation and transmissibility o f infec
tious coryza o f chickens. Poultry Sei., 15: 466
70, 1936.

3 - BIBERSTEIN, E.L. & WHITE, D.C. A proposal for the

establishment o f two new Haemophilus species.
J. Med. Microb., 2: 7 5 -7 8 , 1969.

4 - BORNSTEIN, S. 8< SANBERG, Y. The therapeutic

effect o streptomycin on infectious coryza of
chickens caused by Haemophilus gallinarum. II.
Isolation and culture o f Haemophilus gallinarum
and some of its biochemical reactions. Amer. J.
Vet. Res., 15 :6 1 2 -1 6 , 1954.

5 - CLARK, D.S. & GODFREY, J.F. Studies o f on inacti

vated Haemophilus gallinarum vaccine for immu
nization of chickens against infectious coryza.
Avian Dis., 5 : 3747, 1961.

6 DEBLIECK, L.A A haemoglobinophilic bacterium as

the cause o f contagious catarrh o f the fowl. Vet.
J., 88 :9 - 1 3 ,1 9 3 2 .

7 - DELAPLANE, J.P; ERWIN, L.E. & STUART, H. 0 .

The isolation o f a haemophilus bacillus in pure
culture and the reactions o f chickens to intrana
sal inoculation the reof. J. Agr. Res., 52 : 37783,
1936.

Rev. Fac. Med. vet. Z ootec. Univ. S. Paulo, 17(1-2): 29-31, 1980