Coprocultivo

Numero de practica 5

Objetivo
Que el alumnos aprenda a identificar la enterobactera con ayuda del la bioqumica
y los medios de cultivo. Con todos lo ya antes aprendido en el cuarto semestre.

Fundamento
Originalmente descripta por Theodore Escherich en 1885 y llamada Bacterium coli
commune, hoy renombrada como Escherichia coli es uno de lo seres vivos mas
estudiados. Algunas cepas poseen diversos grados de patogenicidad, lo que llevo
a profundizar los mecanismos relacionados a ella.

Otros patgenos se adhieren a la clula husped pegndose a protenas

preexistentes pero, en Escherichia coli enteropatognico se encontr un
mecanismo diferente, ya que manufactura e inyecta su propio receptor en la clula
husped para adherirse a continuacin. Las protenas que intervienen se nombran
con el prefijo Esp (de Enteropatgenic Escherichia coli Secreted Proteins).

Adhesin de la bacteria a la superficie de una clula intestinal

La superficie de las clulas epiteliales del intestino esta cubierta de

microvellosidades, extensiones de la clula que incrementan la superficie
destinada a la absorcin de nutrientes. En la animacin una bacteria Escherichia
coli (en color prpura) se engancha a la superficie de la clula epitelial del intestino
(en marrn) por medio de los pili ( tetherlike pili) . Los pili estn constituidos por
hebras de largas protenas filamentosas que pueden adherirse a las
microvellosidades de la superficie de las clulas intestinales.

Una vez en contacto con la bacteria desparecen las microvellosidades de una

zona de la superficie celular, la bacteria entra en estrecho contacto con la
superficie de la clula intestinal y comienza la siguiente fase del proceso de
infeccin.

La bacteria inyecta protenas receptoras en clula intestinal

La bacteria usa ahora un sistema especializado de inyeccin a fin de enviar

algunas de sus propias protenas al interior de la clula. Este sistema de inyeccin
es fascinante y esta compuesto por numerosas protenas. En este caso se
esquematiza un sistema inyector Tipo III, el cual esta especializado para bombear
cosas a otras clulas. La bacteria usa este sistema inyector como una jeringa e
inyecta protenas bacterianas en la clula, forzndola a cooperar con su propia
infeccin.

Un tubo que hace las veces de aguja (en prpura) denominado EspA, se proyecta
desde la bacteria desde la bacteria a la superficie de la clula intestinal. Ahora
dos protenas (en verde) denominadas EspB y EspD viajan a travs del tubo para
formar una abertura en la membrana de la clula intestinal por medio de la cual
protenas bacterianas adicionales se mueven dentro de la clula configurando un
poro. Cuando este proceso se completa la bacteria inyecta una protena (en rojo)
denominada Tir dentro de la clula.

Una vez dentro de la clula la protena Tir se inserta en la membra celular y la

"cabeza" de la misma se proyecta mas all de de superficie celular y se adhiere a
a una protena de la superficie bacteriana denominada intimina ( las "ventosas"
azules). Ahora la bacteria esta adherida a la membrana de la clula intestinal, y
para la misma siguen los problemas. La protena Tir resulta fosforilada por
mecanismos pertenecientes a la clula intestinal (esferas azules) y comienza el
siguiente paso: la formacin del "pedestal".

La bacteria esta ahora adherida firmemente a la superficie celular por la

interaccin entre las protenas Tir e intimina. Comienza ahora la formacin del
pedestal, un proceso notablemente activo. Otra protena, perteneciente al
citoesqueleto de la clula intestinal (en anaranjado) se adhiere a la porcin de la
protena bacteriana Tir que se encuentra dentro de la clula.

Una vez que ello sucede, comienzan a formarse largas hebras de actina (esferas
amarillas). Los filamentos de actina se forman directamente debajo del lugar
donde la bacteria se encuentra adherida a la clula intestinal. A medida que los
mismos se alargan empujan a la membrana de la clula intestinal hacia arriba y la
bacteria queda suspendida en la cima del pedestal formado. Cuando numerosas
bacterias enteropatognicas se han adherido comienzan los sntomas de la
infeccin (diarrea).
Se cree que algunas de las protenas inyectadas por Escherichia coli ,como la
EspB, interfieren los mecanismos de seales de la clula husped lo cual lleva ,
eventualmente, al desarrollo de lesiones ultraestructurales y a la diarrea secretoria
observada durante la infeccin.
Materiales
Tetrationato Caldo.
Asa bacteriolgica
Microscopio
SS agar
MacConkey
EMB agar
XLD agar
Bioqumicas
Tincin de gran
Heces humanas
Cronometro
Mechero

Desarrollo
Se introdujo el asa bacteriolgica en las heces para agarra muestra y despus se
mezclo con el Tetrationato Caldo. Se dejo en cubar por una 1 hora (pero debe ser
incubado durante 12-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis por falta de tiempo no se
realizo correctamente)

Se estrio el medio de cultivo de la siguiente manera

MacConkey y XLD de la muestra
SS agar Y EMB agar del caldo

Calentar el asa bacteriolgica hasta que este al rojo vivo, junto al mechero abres
tu medio, enfras el asa y toma la muestra de tu caldo. Estrias haciendo linas de
izquierda a derecha. En los cuatro cuadrantes.
Resultados

Medios de cultivo
Tubo crecimientos en MacConkey, las
colonias son blancas, rodeadas de un halo de
sales biliares precipitadas

EMB: las colonias no crecieron bien, puede ser

porque necesitaron mas tiempo y se hizo un
mal estriamiento. Las colonias debieron ser asi
Verdosas con brillo metlico y centro negro
azulado.

XLD: al igual que el emb no tubo un

crecimiento a apropiados, pues ser por
estriamiento incorrecto, sus colonias son
grandes, amarillas con o sin precipitado de
bilis.

SS: no creci nada, solo se observa las lneas

del estriamiento, sus colonias debieron se de
color rosa a rojo y pueden presentar una zona
de precipitado. No creci tal ves una mal
estriamiento, el Tetrationato Caldo no se
incubo el tiempo necesario.
Bioqumicas

TSI: A/A, produccin de gas. Hubo crecimiento

LIA: K/K positivo. Hubo crecimiento

Citrato simmos: Negativono hubo crecimiento

.

Mio: positivo, movilidad positiva e indol positivo

SIM: movilidad positiva, indol positivo y

produccin de gas