UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS

ESCUELA DE QUIMICA
QUMICA

ANLISIS CUANTITATIVO DE CARBOHIDRATOS

QUANTITATIVE ANALYSIS OF CARBOHYDRATES

Correa Fuentes Juanita Del Pilar

Sorac Prez Gina Yasmin

Fecha de entrega del informe: 18-03-2015

Resumen: Los carbohidratos presentes en las muestras problema se determinaran

por el mtodo colorimtrico fenol-sulfrico, donde las soluciones (patrn y muestras
problema) de carbohidratos se someten a una serie de reacciones con fenol y cido
sulfrico para producir complejos coloreados activos en UV-VIS, y se genera una
curva de calibracin. Se realiza el test de Nelson para determinar si los
carbohidratos son o no reductores seguido de una hidrolisis acida para los
carbohidratos no reductores. Por el mtodo de DNS se determina la concentracin
de glucosa y su peso promedio en las muestras problema, partiendo de la curva de
calibracin.

Palabras claves: UV-VIS, Soluciones patrn, Curva de calibracin.

Abstract: The carbohydrates present in the test samples by the phenol-sulfuric acid
colorimetric method in which solutions (standard and unknown samples)
carbohydrates undergo a series of reactions with phenol and sulfuric acid to produce
active complexes underwent colored UV was determined VIS, and a calibration
curve is generated. Nelson test is performed to determine whether or not reducing
carbohydrates are followed by acid hydrolysis to the non-reducing carbohydrates.
By the DNS method and the glucose concentration is determined the average weight
in the test samples, based on the calibration curve.

Keywords: UV-VIS, standard solutions, calibration curve.

Introduccin que se condensan consigo mismos y
con otros subproductos para producir
En el mtodo fenolH2SO4 los compuestos oscuros o compuestos
carbohidratos sern destruidos por coloridos, producto de la
calor y por cido, los carbohidratos condensacin denominados
son particularmente sensible a cidos compuestos fenlicos y con
fuertes y a altas temperaturas.(1) Bajo heterociclos con el nitrgeno como
estas condiciones una serie de heterotomo. La condensacin ms
reacciones complejas toman lugar comn es con fenol. Este mtodo es
empezando con una deshidratacin fcil, eficaz y rpido.(2)
simple, si se contina el
calentamiento y la catlisis cida se (Ver Anexo A)
producen varios derivados del furano

1
 UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
ESCUELA DE QUIMICA
QUMICA
Todos los azcares como
oligosacridos y polisacridos pueden
ser determinados, recordando que
estos bajo hidrlisis cida producen
monosacridos. La forma en que
procede la reaccin no es
estequiomtrica y depende de la
estructura del azcar, por lo tanto se
realiza una curva patrn.(3)
El test de Nelson se realiza para
determinar cules azucares son
reductores, por una coloracin rojo
ladrillo producida por la reduccin de
Cu+2 a Cu+1.
Azcar reductor+ Cu+2 Cu+1.+
Azcar reductor
En el mtodo de DNS para azucares
reductores, en disolucin alcalina el
azcar se enoliza produciendo un
compuesto que reduce a un grupo
nitro del DNS, para dar el producto
mono amino correspondiente. Esta
reaccin da un producto colorido en
solucin alcalina. El procedimiento
original de Dahlquist ha sido
modificado en un proceso
automatizado para anlisis de
azcares totales producidos por la
hidrlisis de polisacridos que no
contengan almidn. Para ste se
requiere tener estndares similares a
la muestra.
(Ver Anexo B)
El mtodo DNS se basa en la
reduccin del cido 3,5-dinitrosalicilico
(el cual se encuentra de color amarillo-
naranja) por la glucosa al acido 3-
amino-5-nitrosalicilico (de color rojo
oscuro), cuya presencia puede
detectarse por la lectura de la
2
NLISIS CUANTITATIVO DE CARBOHIDRATOS
absorbancia a una determinada
longitud de onda.
El reactivo de Benedict est
constituido por una disolucin de
sulfato de cobre II, citrato de sodio y
carbonato de sodio. Al tratar al azcar
con estos reactivos, experimentan
una reaccin de oxidacin. El cobre (II)
en disolucin acuosa, de color azul, se
reduce a cobre (I), el cual precipita
como oxido de cobre (I), de color rojo.
(Ver Anexo C)
Resultados y discusin
1. Determinacin Cuantitativa
(espectrofotomtrica) de azcares
totales.
Se parte de una mezcla de
carbohidratos glucosa/sacarosa con
una concentracin de [0,05 M].
La concentracin para las soluciones
de la curva de calibracin se
determinan haciendo los clculos por
dilucin, ya que para realizarla se
present la siguiente adicin de
compuestos:
Tabla 1. Curva de Calibracin.
Despus de realizar la reaccin de los
carbohidratos con fenol y cido
sulfrico se obtuvo muestras
coloreadas de marrn oscuro, esta
coloracin indica que si hay presencia
de carbohidratos y que estos al
reaccionar generaron complejos
coloridos.
 UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
ESCUELA DE QUIMICA
QUMICA

NLISIS CUANTITATIVO DE CARBOHIDRATOS

Al agregar el cido sulfrico a los Solucin 6

carbohidratos, se present una CD=0,5 ml * 0,05 M / 0,5 ml = 0,05 M
reaccin exotrmica en todas las Dilucin 1/10 ml
muestras, y se formaron dos fases la Cd=0,5 ml * 0,05 M / 5ml
superior marrn oscura y la inferior Cd= 5*10-4 M
amarilla, luego se homogenizaron.
CC*VC=CD*VD
En la tabla se muestran las
Solucin 1 absorbancias y concentraciones de
La concentracin es cero, pues no se las soluciones, las muestras problema
le adiciono solucin de carbohidratos. X1, X2 y X3 utilizaron un factor de
dilucin 1/20 ml.
Solucin 2
CD=0,4 ml * 0,05 M / 0,5 ml = 0,04 M Azucares Totales
Esta solucin resultante tena una A492nm Concentracin
coloracin marrn muy fuerte, 1 0 0
indicaba una gran concentracin que 2 0,042 0,004
estara por encima del lmite de 3 0,073 0,003
deteccin del instrumento de UV-VIS, 4 0,109 0,002
por este motivo para poder leer su 5 0,213 0,001
absorbancia en l, se realiz una 6 0,362 0,0005
dilucin 1/10 ml: X1 0,952 0,952
X2 1,092 1,092
X3 0,561 0,561
Cd=0,5 ml * 0,04 M / 5 ml = 4*10-3 M
Tabla 2. Absorbancias de las muestras
tomada en UV-VIS a = 492 mn.
Solucin 3
CD=0,3 ml * 0,05 M / 0,5 ml = 0,03 M Absorbancias
Dilucin 1/10 ml
0,4
Cd=0,5 ml * 0,03 M / 5ml = 3*10-3 M
Absorbancia (492nm)

y = 0,0674x - 0,1027
0,3
Solucin 4 0,2
CD=0,2 ml * 0,05 M / 0,5 ml = 0,02 M
Dilucin 1/10 ml 0,1

Cd=0,5 ml * 0,05 M / 5ml = 2*10-3 M 0

0 0,004 0,003 0,002 0,001 0,0005
-0,1
Solucin 5 Concentracin [M]
CD=0,1 ml * 0,05 M / 0,5 ml = 0,01 M
Dilucin 1/10 ml Grfica 1. Absorbancia Vs. Concentracin
[M].
Cd=0,5 ml * 0,01 M / 5ml = 1*10-3 M
Ecuacin aproximada de la recta es:
y = 0,0674x 0,1027

3
 UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA
Donde Y: absorbancia
X: concentracin de la muestra
Abs = 0,0674x 0,1027
X= abs + b/ m
La concentracin de las muestras
problemas se determinan de la
siguiente forma:
X1= (0,952 + 0,1027 / 0,0674) * 20
X1=0,782
X2= (1,092 + 0,1027 / 0,0674) * 20
X2=0,886
X3= (0,561 + 0,1027 / 0,0674) * 20
X3=0,492
522.46 1000 /
1 /
)( 1
= 2,18mg carbohidratos/ml de solucin
2. Reconocimiento poder reductor
de la muestra
Test de Nelson para muestras
problema
La formacin de un precipitado de
Cu2O color pardo indica que el azcar
redujo el Cu2+ presente en el reactivo
de Nelson a Cu+ probndose as el
efecto reductor del azcar. En la fig4.
las muestras de carbohidratos 1 y 2 si
son reductoras, pero la muestra de
jugo no era reductora ya que sus
carbohidratos constituyentes no
redujeron el Cu y no se form
coloracin.
(Ver Anexo D)
Hidrlisis cida
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
ESCUELA DE QUIMICA
QUMICA
NLISIS CUANTITATIVO DE CARBOHIDRATOS
Los carbohidratos presentes en la
muestra de jugo no eran un azcares
reductores, por tanto fue necesario
realizarle la hidrolisis acida con HCl
concentrado, para separarlos en sus
monmeros.
(Ver Anexo E)
3. Determinacin Cuantitativa
(peso promedio) de azcares
reductores.
El reactivo de Benedict es una fuente
confiable para confirmar la existencia
de glucosa. La glucosa contiene
oxgeno y ste se combina con el
sulfato de cobre contenido en el
reactivo y le da la coloracin
1
)(1000 ) anaranjada o rojiza que le caracteriza
a los xidos. Pero el reactivo de
Benedict solo reacciona con la
glucosa, la cual es un monosacrido,
por lo que para detectar los
carbohidratos contenidos en las
sustancias o productos, primero se
debe descomponer en monosacridos
mediante un proceso qumico, en este
caso fue mediante el calentamiento de
las sustancias.
Peso Peso
Peso
Tubo tubo con
final
vaco muestra
1 25,1509 28,0214 (Blanco)
2 15,0311 21,9471 3,9884
3 18,7425 22,3674 0,0871
4 20,8702 24,5764 0,0555
X1 18,8304 21,7124 0,650
X2 18,6342 21,5851 0,688
X3 17,5249 20,8599 0,2879
4
 UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
ESCUELA DE QUIMICA
QUMICA

NLISIS CUANTITATIVO DE CARBOHIDRATOS

Hallamos las concentraciones de la

glucosa en mg.
Tubo1 Blanco Reaccin cido Mucico
(Ver anexo)
0,05C6H12O6 180,15C6H12O6
Tubo2 C=
1C6H12O6
6 1 1000
1000 = 54C6H12O6 Conclusiones
1
La prueba de fenolH2SO4 fue
0,05C6H12O6 adecuada para determinar una
Tubo3 C=
concentracin de carbohidratos en
180,15C6H12O6 7 1 1000
1000 = la muestras problema.
1C6H12O6 1
63 C6H12O6 Debido a que los carbohidratos
presentes en el jugo no tenan
0,05C6H12O6 180,15C6H12O6 grupos aldehdo y cetona libres, la
Tubo4 C=
1C6H12O6 muestra de jugo no se clasifica
7,5 1 1000
1000 = 67, C6H12O6 como mezcla de azucares
1
reductores.
El cido mucico es el menos
CONCENTRACIN DE GLUCOSA Vs PESO
PRODUCTO OBTENIDO soluble en agua acidificada de
todos los cidos sacricos, este
PESO PRODUCTO OBTENIDO (g)

5
4
y = -0,3116x + 20,543 precipito formando cristales
R = 0,8971 transparentes e indicando la
3
2 presencia de galactosa en la
1 solucin.
0
-1 0 50 100 Bibliografa
(1) FORNAGUERA, JAIME. GMEZ,
CONCENTRACIN DE GLUCOSA (mg)
GEORGINA. 2004. Bioqumica la
ciencia de la vida. Madrid Espaa
Mediante la ecuacin y = -0,3116x + 1 edicin. Editorial EUNED. Pgs
20,543 hallamos las concentraciones 170-172.
(2) MULLER
de X1, X2 y X3. WERNER. 2008.
Bioqumica fundamentos para la
, medicina y ciencias de la vida.
X=
, Buenos Aires Argentina. Editorial
reverte. Pg 66.
0,65020,543 (3) VARIOS
C X1 = = 63,84mg AUTORES. 2006.
0,3116
0,68820,543 Fundamentos de bioqumica
C X2 = = 63,71mg
0,3116 estructural. Madrid Espaa.
0,287920,543
C X3 = = 65mg Editorial Tebar. Pg 167.
0,3116

5
 UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
ESCUELA DE QUIMICA
QUMICA

NLISIS CUANTITATIVO DE CARBOHIDRATOS

Anexos
Anexo A

Fig1. Reaccin que representa el mtodo fenol-sulfrico.

Anexo B

Fig2. Esquema de reaccin del mtodo DNS.

Anexo C

Fig3. Esquema de reaccin para prueba positiva (+) de Benedict.

6
 UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
ESCUELA DE QUIMICA
QUMICA

NLISIS CUANTITATIVO DE CARBOHIDRATOS

Anexo D

Fig4. Test de Nelson. Tubo 1 (X1) Tubo 2 (X2) Tubo 3 (Jugo).

Anexo E

Fig5. Hidrolisis cida de la muestra de jugo

Anexo cido Mucico

Reaccin del cido Mcico
Este ensayo es exclusivo de la galactosa o de los azcares que la contienen y sirve
para confirmar la presencia del azcar anterior en algn hidrato de carbono. El HNO3
oxida tanto al grupo aldehdo como el alcohlico primario de cualquier azcar para
originar cidos dicarboxilicos que han recibido el nombre general de cidos
sacridos. La molcula de lactosa (disacrido) por accin del HNO3, se hidroliza
dando glucosa y galactosa (monosacridos) los cuales sufren una oxidacin
inmediata transformndose en cido glutmico soluble en agua y en cido mcico
insoluble, respectivamente; ambos son cidos dicarboxlicos y puesto que el que
proviene de la galactosa es insoluble en agua, precipita en forma de finos cristales.
El cido mcico es el menos soluble en agua acidificada de todos los cidos
sacridos.

7
 UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
ESCUELA DE QUIMICA
QUMICA

NLISIS CUANTITATIVO DE CARBOHIDRATOS

Figura. Reaccin del cido mucico

En la prueba realizada se formaron cristales de coloracin transparente en la

muestras de lactosa y galactosa, la glucosa es un carbohidrato soluble en agua, por
tanto se disolvi en el agua de la disolucin del cido y no se formaron cristales.