Trabajo de Espectrofotometrria

FACULTAD DE INGENIERA
DE PROCESOS
TRABAJO DE ANLISIS
INSTRUMENTAL 2
ESCUELA
TURNO: JUEVES PROFESIONAL DE
DE 5 A 7 PM
ESPECTROFOTOMETRA
INGENIERA QUMICA
INTEGRANTES:
JUAN CONDORI ALVARADO
JUAN CARLOS PEREYRA ALI

TABLA DE CONTENIDO
1 Introduccin................................................................................................. 1
2 Marco conceptual......................................................................................... 1
2.1 Espectrofotometra................................................................................ 2
2.2 Ley de Lambert. :................................................................................... 3
2.3 Ley de Beer :.......................................................................................... 4
2.4 Transmitancia (T) :................................................................................. 5
2.5 Absorbancia(A)...................................................................................... 5
2.5.1 Mediciones de transmitancia y absorbancia....................................6
2.6 Dispositivos y mecanismos....................................................................6
2.7 Espectrofotmetro................................................................................. 8
2.7.1 Redes de difraccion.........................................................................9
2.8 Tipos de espectrofotometras..............................................................10
2.9 Espectrofotometra de absorcin y de emisin atmica......................11
2.10 Equipos de espectrofotometra............................................................12
2.11 Diseo de equipos............................................................................... 14
2.11.1 Espectrofotmetro de haz simple..................................................14
2.11.2 Espectrofotmetro de doble haz....................................................14
2.12 Cmo aprovechar el potencial de estos equipos..................................15
2.12.1 Buena ubicacin............................................................................ 15
2.12.2 Preparacin de la muestra.............................................................15
2.12.3 Manejo adecuado de las cubetas..................................................16
3 Discusin.................................................................................................... 16
4 Bibliografa................................................................................................. 17
NDICE DE FIGURAS
Figura 1: Ondas de radiacin electromagntica.................................................1
Figura 2: el espectro electromagntico..............................................................2
Figura 3: espectro de absorcin de dos compuestos..........................................3
Figura 4: Ley de Lambert.................................................................................... 4
Figura 5: Ley de Beer......................................................................................... 4
Figura 6: Estructura bsica de un espectrofotmetro.........................................7
Figura 7: espectrofotmetro............................................................................... 7
Figura 8: absorbancia de 2 diferentes componentes..........................................8
Figura 9: partes del espectrofotmetro..............................................................8
Figura 10: clasificacin de espectrofotometras...............................................11
Figura 11: espectrofotometra de absorcin atmica.......................................12
Figura 12: espectrofotmetro de haz simple....................................................14
Figura 13: espectrofotmetro de haz doble......................................................15

Anlisis Instrumental 2 Turno: B
ESPECTROFOTOMETRA
1 INTRODUCCIN
2 MARCO CONCEPTUAL
Las ondas de radiacin electromagntica se componen de crestas y valles,

convencionalmente representadas las primeras hacia arriba y las segundas
hacia abajo. La distancia entre dos crestas o valles se denomina longitud
de onda (). La frecuencia de la onda esta determinada por las veces que
ella corta la lnea base en la unidad de tiempo (casi siempre medida en
segundos), esta frecuencia es tan importante que las propiedades de la
radiacin dependen de ella y est dada en Hertz. La amplitud de onda est
definida por la distancia que separa el pico de la cresta o valle de la lnea
de base, la energa que transporta la onda es proporcional al cuadrado de
la amplitud. La unidad de medida para expresar estas distancias tan
pequeas entre las crestas es el nanmetro (Figura 1)
Figura 1: Ondas de radiacin electromagntica
Los diferentes tipos de radiacin electromagntica forman en conjunto, el

espectro electromagntico. Estas radiaciones presentan diferentes
longitudes de onda que van desde las de menor longitud de onda, como
son los rayos csmicos, los rayos gamma (10 -5 -10 -4 nm)) y los rayos X
1
(10 -4 -10 -1 nm), pasando por la luz ultravioleta (10 -1 -10 2 nm), la luz
visible (desde el rojo 350 nm hasta el violeta 780 nm) y los rayos
infrarrojos(10 3 -10 5 nm), hasta las ondas electromagnticas de mayor
longitud de onda, como son las microondas y las ondas de radio cuyas
longitudes de onda estn por encima de 10 5 nm
Figura 2: el espectro electromagntico
El principio que rige la espectrofotometra se basa en el empleo de las

interacciones entre la radiacin electromagntica y la materia. La
espectrofotometra es uno de los mtodos analticos de mayor
importancia y utilidad en bioqumica ya que permite medir la cantidad
relativa de luz absorbida o transmitida por la materia (ej. molculas
biolgicas en disolucin acuosa: protenas, aminocidos, metabolitos,
etc.) medida como absorbancia (Abs) o transmitancia (%T),
respectivamente.[ CITATION Uni16 \l 10250 ]
Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en

forma de energa interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de
muchos organismos, entre ellos el de la fotosntesis en plantas y
bacterias. La Mecnica Cuntica nos dice que la luz est compuesta de
fotones cada uno de los cules tiene una energa:
Efoton=hV =hc
Donde c es la velocidad de la luz, V es su frecuencia, es su longitud

de onda y h= 6.6 1-34 J.s es la constante de Planck.
Cuando decimos que una sustancia qumica absorbe luz de longitud de

onda, esto significa que las molculas de esa sustancia absorben
fotones de esa longitud de onda.
2
2.1 ESPECTROFOTOMETRA
Espectrofotometra es un mtodo para medir la cantidad de una

sustancia qumica absorbe la luz mediante la medicin de la intensidad
de la luz como un rayo de luz pasa a travs de la solucin de muestra. El
principio bsico es que cada compuesto absorbe o transmite la luz a
travs de un cierto rango de longitud de onda. Esta medicin tambin se
puede utilizar para medir la cantidad de una sustancia qumica conocida.
Espectrofotometra es uno de los mtodos ms tiles para el anlisis
cuantitativo en diversos campos como la qumica, la fsica, la bioqumica,
materiales e ingeniera qumica y sus aplicaciones clnicas.[ CITATION
VoK15 \l 10250 ]
Otro concepto de espectrofotometra nos dice lo siguiente:
La espectrofotometra es uno de los mtodos de anlisis ms usados, y

se basa en la relacin que existe entre la absorcin de luz por parte de
un compuesto y su concentracin. Cuando se hace incidir luz
monocromtica (de una sola longitud de onda) sobre un medio
homogneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y
otra transmitida, como consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea
atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la
intensidad del rayo de luz transmitido. Dependiendo del compuesto y el
tipo de absorcin a medir, la muestra puede estar en fase lquida, slida
o gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta del espectro
electromagntico, la muestra es generalmente disuelta para formar una
solucin. Cada sustancia tiene su propio espectro de absorcin, el cual
es una curva que muestra la cantidad de energa radiante absorbida,
Absorbancia, por la sustancia en cada longitud de onda del espectro
electromagntico, es decir, a una determinada longitud de onda de la
energa radiante, cada sustancia absorbe una cantidad de radiacin que
es distinta a la que absorbe otro compuesto (Fig. 3)[ CITATION UNA16 \l
10250 ]
3
Figura 3: espectro de absorcin de dos compuestos
El mtodo espectrofotomtrico se rige por dos leyes fundamentales: Ley

de Lambert y Ley de Beer.
2.2 LEY DE LAMBERT. :
Esta ley establece que cuando pasa luz monocromtica por un medio
homogneo, la disminucin de la intensidad del haz de luz incidente es
proporcional al espesor del medio, lo que equivale a decir que la
intensidad de la luz transmitida diminuye exponencialmente al aumentar
aritmticamente el espesor del medio absorbente (Fig. 4):
Figura 4: Ley de Lambert
La siguiente relacin matemtica da cuenta de esta ley: P / P0 = e kb
Po : Intensidad de la luz incidente
P : Intensidad de la luz transmitida
b : Espesor del medio absorbente
k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la

longitud de onda de la luz incidente, del espesor del medio absorbente y
de la naturaleza del medio.
2.3 LEY DE BEER :
La intensidad de un haz de luz monocromtica disminuye

exponencialmente al aumentar aritmticamente la concentracin de la
4
sustancia absorbente, cuando este haz pasa a travs de un medio

homogneo (Fig. 3).
Figura 5: Ley de Beer
La relacin matemtica que da cuenta de esta ley se muestra a

continuacin:
P / P0 = e -kc
Dnde:
Po : Intensidad de la luz incidente

P : Intensidad de la luz transmitida c : Concentracin de la solucin
k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la
longitud de onda de la luz incidente, de la concentracin de la solucin,
y frecuentemente, de la naturaleza del medio.
Ambas leyes se combinan en una sola, generando la Ley de Lambert-
Beer
log P0 / P = a b c A=abc
A = log P0 / P = - log T
Dnde:
a : Absortividad
b : Longitud o espesor del medio (longitud de la cubeta)
c : Concentracin de la solucin
P/Po= T : Transmitancia
Los trminos absorbancia y transmitancia son definidos a continuacin
2.4 TRANSMITANCIA (T) :
Es la razn entre la luz monocromtica transmitida (P) por una muestra

y la energa o luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energa radiante
5
incidente como la transmitida deben ser medidas a la misma longitud de

onda.
T = P / P0 = 10-abc %T = 100 P / P0
Se acostumbra a considerar la transmitida como la razn de la luz

transmitida por la muestra y la luz transmitida por un estndar
arbitrario. Este estndar puede ser el lquido (solvente) en que esta
disuelta la muestra, aire, blanco analtico (solucin que contiene todos
los componentes de la solucin problema menos la sustancia problema)
u otra sustancia elegida arbitrariamente.
Debido a que la transmitancia de este estndar no es necesariamente

100%, es necesario especificar el estndar con el cual la muestra es
comparada.
2.5 ABSORBANCIA(A)
Se define como la cantidad de energa radiante absorbida por una

sustancia pura o en solucin. Matemticamente, corresponde al
logaritmo negativo de la transmitancia.T, transmitancia expresada como
fraccin decimal %T, transmitancia expresada como porcentaje.
A = - log T = 2 log %T
Pero.
T = P / P0 = 10-abc
Luego : A = - log ( P / P0 ) = - log 10-abc
A=abc
Esta ecuacin indica que la absorbancia es una funcin lineal de la

concentracin, donde a es una constante de proporcionalidad llamada
absortividad. La magnitud de a depende de las unidades de b y c. Si la
concentracin c est expresada en moles por litro y la longitud de la
cubeta b en centmetros, la constante a recibe el nombre de
absortividad molar ( ) . Luego:
A=bc
6
2.5.1 Mediciones de transmitancia y absorbancia.
Las mediciones de absorbancia o transmitancia se hacen por

comparacin entre la muestra problema y un estndar arbitrario o
referencia. Como la referencia debe poseer un porcentaje de
transmitancia de 100%, esta es llamada referencia de 100%., o una
absorbancia de cero.
2.6 DISPOSITIVOS Y MECANISMOS
La Figura 1 ilustra la estructura bsica de espectrofotmetros. Se

compone de una fuente de luz, un colimador, un monocromador, un
selector de longitud de onda, una cubeta de solucin de muestra, un
detector fotoelctrico, y una pantalla digital o un metro. mecanismo
detallado se describe a continuacin. La Figura 6 muestra un
espectrofotmetro de muestra (modelo: Spectronic 20D).
Figura 6: Estructura bsica de un espectrofotmetro
Un espectrofotmetro, en general, consta de dos dispositivos; un

espectrmetro y un fotmetro. Un espectrmetro es un dispositivo que
produce, por lo general se dispersa y la luz medidas. Un fotmetro
indica el detector fotoelctrico que mide la intensidad de la luz.
Espectrmetro: Se produce un intervalo deseado de longitud de onda de

la luz. En primer lugar un colimador (lente) transmite una viga recta de
luz (fotones) que pasa a travs de un monocromador (prisma) para
dividirlo en varias longitudes de onda componentes (espectro). A
continuacin, un selector de longitud de onda (hendidura) transmite slo
las longitudes de onda deseadas, como se muestra en la Figura 1.
7
Fotmetro: Despus de que el intervalo deseado de longitud de onda de

la luz pasa a travs de la solucin de una muestra en la cubeta, el
fotmetro detecta la cantidad de fotones que es absorbida y luego enva
una seal a un galvanmetro o una pantalla digital, tal como se ilustra
en la Figura 7.
Figura 7: espectrofotmetro
Es necesario un espectrmetro para producir una variedad de longitudes

de onda debido a que diferentes compuestos absorben mejor a
diferentes longitudes de onda. Por ejemplo, p-nitrofenol (forma cida)
tiene la absorbancia mxima a aproximadamente 320 nm y p-
nitrofenolato (forma bsica) absorben mejor a 400 nm, como se muestra
en la Figura 3.
Figura 8: absorbancia de 2 diferentes componentes
8
2.7 ESPECTROFOTMETRO
El espectrofotmetro. Es el nombre genrico de todos los aparatos

basados en esta tcnica. A este trminos se le aaden los adjetivos
adecuados a la subtecnica adecuada, ej. Espectrofotmetro de absorcin
atmica. El espectrofotmetro tiene un generador de radiacin lumnica
(policromca), un separador para obtener la radiacin adecuada y luego
mide la potencia radiante obtenida. Los componentes fundamentales que
tienen todos los espectrmetros son:
Figura 9: partes del espectrofotmetro
Fuente: es el dispositivo emisor de radiacin electromagntica.

Generalmente emite una banda muy amplia de radiaciones continuas
alrededor de la l deseada. Segn la zona del espectro que emite hay
tres tipos: Visible: Lmparas de filamento de Tungsteno incandescente o
de Wolframio (halgeno). Son similares a las bombillas comunes.
Ultravioleta: Tubo de hidrgeno o de descarga de deuterio. A veces
estn refrigerados con agua para disipar el elevado calor que producen.
Infrarojos: Fuentes especiales de xidos de tierras raras (disprosio,

holmio, erbio) o carburos (de silicio). Estos emiten radiacin en IR (1,5 a
2,0 mm) a elevadas temperaturas (1000-2000C). Monocromador o
selector de l: tiene como objetivo controlar la pureza de la radiacin
emitida consiguiendo el menor ancho de banda de longitud de onda
posible. Consta de un conjunto de lentes, espejos y rendijas para
dispersar y separar, enfocar y restringir la radiacin no deseada. Los
componentes de los monocromadores son: PRISMAS: producen la
9
refraccin de la luz, siendo el ngulo de refraccin mayor cuanto menor

es la l de la radiacin.
Despus del prisma hay una rendija por donde se hace pasar la
radiacin deseada. Segn el tipo de radiaciones se usan prismas de
vidrio (VIS), cuarzo o slice (UV) y cristales de NaCl para IR.
2.7.1 REDES DE DIFRACCION
Es una lmina metlica (Al) altamente pulida sobre la que se han hecho
una gran cantidad de estras (lneas paralelas). Estas estras actan
como centros de dispersin de todas las radiaciones incidentes. Hay una
dispersin lineal de las l de una determinada banda cromtica, por lo
tanto se puede usar en todas las regiones del espectro. Funciona mejor
que el prisma en el IR. Celdas para la muestra: recipientes donde se
coloca la muestra a analizar. Varan mucho segn la tcnica a utilizar,
pero como caracterstica comn deben ser transparentes en la regin
del que se va a medir. VIS y UV en cubetas cuadradas de vidrio, cuarzo
de 1 cm de lado. IR cubetas de NaCl, AgCl. Detector (transductor):
Produce una seal elctrica cuando recibe un fotn. Esta seal elctrica
luego es convertida en unidades de potencia radiante transmitida o
absorbida. Los detectores tambin dependen de la regin de l en la que
se trabaja:
FOTOTUBO. Para la zona del VIS y UV. Con el mismo principio de

funcionamiento que la clula fotoelctrica. Al golpear un fotn en el
ctodo, este emite un electrn hacia el nodo, lo cual provoca un flujo de
corriente elctrica que es medida por un voltmetro. La respuesta del
material foto emisivo depende de la l, por tanto se usan diferentes tipos
de fototubos segn la l en la que se trabaja. Cuando se utilizan
radiaciones de baja intensidad la seal elctrica es muy dbil y sujeta a
un gran error.
En este caso se utiliza el tubo FOTOMULTIPLICADOR, que incluye varios

fototubos en serie. En este caso, el choque de un fotn forma una
cascada de electrones que dan una seal ms intensa.
FOTODIODO ARRAY: Sobre un semiconductor se fabrican diodos en serie

paralelos, de manera que al incidir sobre l una radiacin difractada, se
puede tener una seal instantnea para un amplio rango del.
10
INFRAROJO. Los detectores de infrarrojos se basan en la propiedad

trmica de estas radiaciones y traducen el calor asociado a la radiacin
transmitida en una seal elctrica. Los ms utilizados son los
TERMOPARES y BOLOMETROS, formados por metales cuya resistencia
elctrica cambia con la temperatura. Registrador: En los instrumentos
ms antiguos la seal se mostraba en un medidor de aguja que tena
una escala en unidades de transmitancia y de absorbancia. Los
instrumentos ms modernos tienen un display digital, en el que aparece
el valor numrico de absorbancia o el valor de concentracin cuando
puede realizar automticamente los clculos de calibracin. En el caso
de obtener el espectro de absorcin (en un intervalo de l) de una
sustancia, el registrador nos muestra un grfico con el valor de l en
abscisas y la absorbancia en ordenadas.
2.8 TIPOS DE ESPECTROFOTOMETRAS.
En la tabla siguiente se muestra una clasificacin de los principales tipos

de espectrofotometras agrupados segn el tipo de interaccin luz-
molcula (absorcin o emisin) y segn la zona del espectro en la que se
trabaja. Y a continuacin se describen las caractersticas principales de
cada tipo, los instrumentos utilizados y las aplicaciones analticas ms
importantes.[ CITATION DeL16 \l 10250 ]
Figura 10: clasificacin de espectrofotometras
11
2.9 ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN Y DE EMISIN ATMICA.
Permite la determinacin (cuantificacin) de unos 70 elementos qumicos

en concentraciones que oscilan entre ppb a ppm. La medida de los
elementos qumicos se hace en estado atmico mediante una
atomizacin de la muestra en estado gaseoso. Estos tomos
experimentan absorcin, emisin o fluorescencia de radiaciones VIS, UV o
rayos X, debidas a transiciones electrnicas entre orbitales atmicos. Esta
tcnica no da informacin sobre enlaces moleculares en absoluto y nos
da informacin especfica sobre un elemento qumico. La principal
diferencia con las otras espectrometras es la atomizacin, proceso por el
cual la muestra se introduce en un mechero, junto con el combustible, y
se quema a elevada temperatura. Las molculas del analto se rompen
totalmente liberando los elementos qumicos en estado atmico, y estos
pueden experimentar fenmenos de absorcin, emisin o fluorescencia.
En la figura siguiente se muestra un esquema de estas posibilidades.
Segn el sistema de atomizacin, y la temperatura a la que se produce,
se tienen los siguientes mtodos de espectrofotometra atmica: llama,
electro trmico, plasma, arco voltaico y chispa elctrica.
Espectrofotometra de absorcin atmica con llama. Es el mtodo ms
utilizado de la espectrofotometra atmica. Muy adecuado para la
determinacin de ppm de Fe, Cd, Au, Pb, Zn, Cu, Mn en disoluciones
acuosas de aguas, fertilizantes, suelos, extractos vegetales, etc. Los
tomos en la llama absorben radiacin de determinadas l (VIS y UV)
segn su naturaleza, por lo que es una tcnica muy especfica para cada
elemento. La absorcin en la llama sigue la ley de Beer, pero en la
prctica es necesario hacer un calibrado con disoluciones patrn de las
que se obtienen valores de absorbancia y que permiten calcular la recta
de calibrado. El instrumento se denomina Espectrofotmetro de
Absorcin Atmica (EAA). En ingls: Flame Atomic Absorption
Spectrophotometer (F)AAS.
12
Figura 11: espectrofotometra de absorcin atmica
2.10 EQUIPOS DE ESPECTROFOTOMETRA

SEGN ISO 3632
Capaces de medir la absorbancia entre 200 y 700 nm (3632 2 1431)

ISO/TS 3632-2, 14.3.1)
13
Nos permite:
Dar informacin sobre la naturaleza de la muestra.
Espectro tpico de un extracto acuoso azafrn

Sustancias extraas
Indicar indirectamente la cantidad de la sustancia que nos interesa que

est presente en la muestra. Por ejemplo, crocinas.
Cubeta de slice de 1 cm (ISO/TS 3632-2, 14.3.2)
14
2.11 DISEO DE EQUIPOS
2.11.1 Espectrofotmetro de haz simple
Necesita una fuente estabilizadora de voltaje para evitar errores que

resultaran de variaciones en la intensidad del haz entre la medida del
blanco y la de la muestra
Figura 12: espectrofotmetro de haz simple
2.11.2 Espectrofotmetro de doble haz
Compensan todas las fluctuaciones de la radiacin de la fuente, as

como la deriva del detector y del procesador
Compensan las variaciones de las distintas longitudes de onda
procedentes de la fuente
El diseo se adapta bien a un registro continuo de los espectros de
transmitancia o de absorbancia
15
Figura 13: espectrofotmetro de haz doble
2.12 CMO APROVECHAR EL POTENCIAL DE ESTOS EQUIPOS
2.12.1 Buena ubicacin
Sobre una base firme y sin vibraciones

En un ambiente libre de polvo y de agentes corrosivos
Sin recibir directamente la luz del sol
Con temperatura constante (15-35 C)
2.12.2 Preparacin de la muestra
Sin partculas en suspensin

Filtrada
16
2.12.3 Manejo adecuado de las cubetas
Son dispositivos pticos, forman parte del sistema ptico del equipo
con el que se usan
La calidad de los datos depende de su manejo y conservacin
Cogerlas por las superficies esmeriladas
Protegerlas de araazos
Evitar agentes de limpieza abrasivos Asegurarse de que no quedan
burbujas
Calibrar y medir con cubetas del mismo tipo y colocarlas con la
misma orientacin
Existen muchos aparatos de espectrofotmetra, cada uno presentara

alguna caracterstica especial, luego siempre que utilicemos por primera
vez un aparato demos consultar el libro de instrucciones.
De forma general, los pasos a seguir son los siguientes:
Conectar el aparato a red.

Encender la lmpara.
Seleccionar la longitud de onda deseada.
Ajustar el cero.
Realizar el blanco.
Medir la absorbancia de estndares y muestras.
Desconectar el aparato.
3 DISCUSIN
17
4 BIBLIOGRAFA
Caprette, D. (12 de Junio de 2015). RICE - Unconventional Wisdom.

Recuperado el 2 de Noviembre de 2016, de
http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/methods/protein/spectrophotometer.ht
ml
De La Torre, F. (s.f.). Recuperado el 3 de Noviembre de 2016, de
http://www.bioquimica.ucv.cl/paginas/central/bioquimica
%20clinica/apuntes%20de%20espectrofotometria.pdf
UNAD. (s.f.). Recuperado el 29 de Octubre de 2016, de
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/358005/Fundamentos_de_espec
trofotometria.pdf
Universidad de Zulia- Laboratorio de Bioquimica. (s.f.). Recuperado el 1
de Noviembre de 2016, de
http://www.fcv.luz.edu.ve/images/stories/catedras/bioquimica/04_introdu
cci%C3%B3n_espectrofotometr%C3%ADa.pdf
Vo, K. (22 de Julio de 2015). Chemistry LibreTexts. Recuperado el 4 de
Noviembre de 2016, de
http://chem.libretexts.org/Core/Physical_and_Theoretical_Chemistry/Kine
tics/Reaction_Rates/Experimental_Determination_of_Kinetcs/Spectrophot
ometry
18

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JUAN CARLOS PEREYRA ALI

2.2 Ley de Lambert. :................................................................................... 3

2.3 Ley de Beer :.......................................................................................... 4

2.4 Transmitancia (T) :................................................................................. 5

2.5.1 Mediciones de transmitancia y absorbancia....................................6

2.6 Dispositivos y mecanismos....................................................................6

2.7.1 Redes de difraccion.........................................................................9

2.8 Tipos de espectrofotometras..............................................................10

2.9 Espectrofotometra de absorcin y de emisin atmica......................11

2.10 Equipos de espectrofotometra............................................................12

2.11 Diseo de equipos............................................................................... 14

2.11.1 Espectrofotmetro de haz simple..................................................14

2.11.2 Espectrofotmetro de doble haz....................................................14

2.12 Cmo aprovechar el potencial de estos equipos..................................15

2.12.1 Buena ubicacin............................................................................ 15

2.12.2 Preparacin de la muestra.............................................................15

2.12.3 Manejo adecuado de las cubetas..................................................16

Figura 1: Ondas de radiacin electromagntica.................................................1

Figura 2: el espectro electromagntico..............................................................2

Figura 3: espectro de absorcin de dos compuestos..........................................3

Figura 4: Ley de Lambert.................................................................................... 4

Figura 5: Ley de Beer......................................................................................... 4

Figura 6: Estructura bsica de un espectrofotmetro.........................................7

Figura 8: absorbancia de 2 diferentes componentes..........................................8

Figura 9: partes del espectrofotmetro..............................................................8

Figura 10: clasificacin de espectrofotometras...............................................11

Figura 11: espectrofotometra de absorcin atmica.......................................12

Figura 12: espectrofotmetro de haz simple....................................................14

Figura 13: espectrofotmetro de haz doble......................................................15

Las ondas de radiacin electromagntica se componen de crestas y valles,

Figura 1: Ondas de radiacin electromagntica

Los diferentes tipos de radiacin electromagntica forman en conjunto, el

Figura 2: el espectro electromagntico

El principio que rige la espectrofotometra se basa en el empleo de las

Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en

Donde c es la velocidad de la luz, V es su frecuencia, es su longitud

Cuando decimos que una sustancia qumica absorbe luz de longitud de

Espectrofotometra es un mtodo para medir la cantidad de una

Otro concepto de espectrofotometra nos dice lo siguiente:

La espectrofotometra es uno de los mtodos de anlisis ms usados, y

Figura 3: espectro de absorcin de dos compuestos

El mtodo espectrofotomtrico se rige por dos leyes fundamentales: Ley

2.2 LEY DE LAMBERT. :

Figura 4: Ley de Lambert

La siguiente relacin matemtica da cuenta de esta ley: P / P0 = e kb

Po : Intensidad de la luz incidente

P : Intensidad de la luz transmitida

b : Espesor del medio absorbente

k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la

2.3 LEY DE BEER :

La intensidad de un haz de luz monocromtica disminuye

sustancia absorbente, cuando este haz pasa a travs de un medio

Figura 5: Ley de Beer

La relacin matemtica que da cuenta de esta ley se muestra a

Po : Intensidad de la luz incidente

Los trminos absorbancia y transmitancia son definidos a continuacin

2.4 TRANSMITANCIA (T) :

Es la razn entre la luz monocromtica transmitida (P) por una muestra

incidente como la transmitida deben ser medidas a la misma longitud de

Se acostumbra a considerar la transmitida como la razn de la luz

Debido a que la transmitancia de este estndar no es necesariamente

Se define como la cantidad de energa radiante absorbida por una

Luego : A = - log ( P / P0 ) = - log 10-abc