UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NAYARIT

Unidad Acadmica de Ciencias Qumico Biolgicas y

Farmacuticas
LABORATORIO DE FISIOLOGA BACTERIANA
Practica # 4: Medios de cultivo, siembra y morfologa colonial

Equipo 4 Integrantes:
Carrillo Villalobos Regina

Lpez Aguiar Perla

Prez Peraza Vctor Manuel

Robledo Gutirrez Reyna Guadalupe

Virgen Cecea Sergio Daniel

6/07/2015
OBJETIVOS.

- Realizar las diferentes tcnicas de siembra para el cultivo de bacterias in

vitro.
- Clasificar a los medios de cultivo segn el propsito con que se utilizan.
- Conocer algunos de los medios selectivos y diferenciales ms usados.
- Comprender las bases de la selectividad de los medios.
- Conocer la importancia del cultivo en las bacterias in vitro.
- Enunciar las condiciones necesarias para el cultivo de las bacterias,
nutrientes, pH, temperatura, humedad y atmosfera de incubacin.
- Diferenciar los medios de cultivo de acuerdo a sus caractersticas fsicas:
lquidos, semislidos y slidos.
- Conocer la utilidad de los medios de cultivo de acuerdo a sus
caractersticas fsicas.
- Realizar las tcnicas de siembra en los diferentes medios de cultivo:
lquidos, semislidos, y slidos.

INTRODUCCIN.
Una caracterstica importante de las clulas es su capacidad para llevar a cabo
reacciones qumicas y organizar sus molculas para formar estructuras
especficas. La expresin final de esta organizacin es el crecimiento (replicacin).
Antes de que una clula se divida, deben ocurrir mechas reacciones qumicas en
la clula, estas reacciones se denominan metabolismo. Las reacciones
metablicas o bien liberan energa, llamadas reacciones catablicas, o bien
consumen energa, llamadas reacciones anablicas.
Los medios de cultivo son las soluciones nutritivas que se usan en el laboratorio
para el cultivo se los microorganismos. En microbiologia, se usan dos tipos
generales de medios de cultivo: los quimicamente definidos y los complejos (o no
definidos). Los medios definidos se preparan aadiendo cantidades precisas de
compuestos organicos e inorganicos a un volumen en agua destilada. Por tanto,
se sabe que la composicion exacta de un medio definico. Sin embargo, en muchos
casos la composicion excata de un medio no es importatne. A menudos, los
medios complejos emplean hidrolizados de caseina, carne, soja, levaduras u otras
sustancias muy nutritivas.
Una vez que se ha preparado un medio de cultivo, puede ser inoculado y a
continuacion incubado en condisiones que favorezcan el crecimineto microbiano.
En general, se tratara del crecimineto de un cultivo axenico o puro, esto es, de un
cultivo que contiene solo un unico tipo de microorganismos. Para obtener y
mantener un cultivo axenico o puro es esencial evitar la entrada en el de otros
organismos. Un metodo importatne para obtener cultivos axenicos o puros y para
asegurar la pureza de un cultivo es el uso de medios solidos en placa de petri.
Los medios solidos inmovilizan a las celulas, permitiendoles crecer y formar masas
aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias bacterianas pueden ser de forma
y tamao variable dependiendo del organismo, las condiciones del cultivo, el
suministro de nutrientes, y otro parametros fisiologicos. Algunas bacterias
producen pigmentos que dan color a las colonias. Independientemente de su
posible pigemntacion, las colonias perimiten al microbiologo reconocer la pureza
del cultivo; las placas que contengan mas de un tipo de colonias no fueron
sembradas con un cultivo axenico o puro.
Inicialmente pueden clasificarse en dos grupos: medios liquidos y solidos.
- Medios liquidos.
Un medio liquido es una infusion que se prepara poniendo carne picada en
una olla con agua, que se lleva a ebullicion para solubilizar y extraer de la
carne las proteinas, los factores esenciales y los oligoelementos. Este calfo
se filtra para obtener un medio limpio, se aade cloruro sodico y se
esteriliza al autoclave.
- Medios solidos.
A un medio de cultivo liquido puede aadirse una sustancia gelificante,
como el agar en polvo, que se disuelve por ebullicion. Al enfriarse convierte
el medio liquido en solido, con una consistencia como la de la jalea de
membrillo. Por el calentamiento funde de nuevo y se puede verter en
diversos recipientes, en los que al enfriarse adquieren nuevamente la
consistencia solida. 1

Desde el punto de vista de su finalidad, los medios se pueden clasificar en :

medios de aislamiento, medios para resiembra, medios de indentificacion y medios
de conservacion. 2
- Medios de aislamiento.
Deben de ser solidos. Estos medios deben ser nutricionalmente adecuados
para las bacterias que se desea aislar; es decir, usuales para bacterias no
exigentes y enriquecidos para las exigentes.
- Medios selectivos.
Cuando de una mezcla de bacterias interesa aislar especificamente un solo
tipo de bacteria que esta en escasa cantidad, es recomendable utilizar
medios selectivos. Estos permiten el crecimiento de esa bacteria, inhibiendo
al resto de las existentes en la muestra. Diversas sutancias aadidas a un
medio de cultivo pueden cumplir con esta funcion, entre otras el cloruro
sodico a concentracion elevada, el citrato sodico, el cristal violeta, las sales
biliares, asi como diversos antibioticos y antisepticos.
 - Medio de enriquecimiento.
En algun caso pueden ser util sembrar previamente la muestra en un medio
de enriquecimiento. Son medios liquidos que cumplen la misma funcion que
los selectivos; es decir, permiten la multiplicacion de las bacterias buscadas
e inhiben las otras. Tras su incubacion, debe resembrarse por agotamiento
en un medio selctivo solido para obtener colonias aisladas de las bacteria
buscada.
- Medios selectivo-diferencial.
En los medios selectivos siempre crecen algunas bacterias diferentes a la
buscada, por ello para diferenciar las distintas colonias, se aade a los
medio selectivos sustnaicas que confieren un color diferente a las colonias
segn la distinta actividad metabolica de las bacterias que las forman,
convirtiendolos en medios selectivo-diferenciales. Para este proposito se
utilizan azucares como el manitol, la lactosa, el sorbitol y otros, junto con un
indicador de pH.
- Medios para resiembra.
Cuando en los medios de aislamiento se observan colonias, debe
transferirse una colonia de cada tipo, mediante el asa, a un nueco medio
que permita su crecimineto en cultivo puro para su identificacion.
Las colonias presentan grandes variacione en su tamao, forma, aspecto, color y
otras caracteristicas. Las diferencias en la morfologia colonial son muy utiles para
separar las bacterias en un cultivo mixto y sirven, asimismo, como claves de su
identidad.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS.
Se realizaron siembras de dos cultivos mixtos diferentes, los cuales contenan dos
bacterias diferentes cada uno, se utilizaron 6 medios de cultivo diferentes para
cada cultivo mixto, los cuales fueron: agar nutritivo, Manitol sal, Cetrimida,
MacConkey, agar xilosa, lisina desoxicolato (XLD) y agar eosina y azul de metileno
(EMB).
Se obtuvieron los siguientes resultados.

- CULTIVO MIXTO A.
Contiene Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa.
Agar nutritivo.

Fig. 1: Se observan colonias de color verde claro, y

otras color blanco, hubo crecimiento en tres de los
cuadrantes sembrados.

Agar Manitol sal.

Fig. 2: Crecimiento puntiforme de

colonias amarillas, el crecimiento fue en
dos de los cuadrantes.

Agar Cetrimida.
 Fig. 3: Crecimiento de una colonia color verde,
el crecimiento fue en tres cuadrantes, se
produjo una pigmentacin color verde.

Agar MacConkey.

Fig. 4: Crecimiento de tres colonias diferentes,

unas verde oscuro, unas rosas, y otras tintas,
el crecimiento fue en todos los cuadrantes. La
colonia color verde, produjo pigmentacin
verde.
Estas tres colonias diferentes pertenecen a
tres bacterias diferentes, debido a que se
contamino el medio, por falta de una buena
esterilizacin del asa al momento de la
siembra.
Agar XLD.

Fig. 5: Crecimiento de colonias color amarillas,

extendidas por tres cuadrantes, con una
pigmentacin amarilla.
Agar EMB.

Fig. 6: Crecimiento de colonias moradas

extendidas en dos de los cuadrantes.

CULTIVO MIXTO B.
Contiene Escherichia coli y Salmonella thyphimurium.
Agar nutritivo.

Fig. 7: Crecimiento de colonias blancas,

unas ms pequeas que otras, y
extendidas en su mayora en el primer
cuadrante, pero unas pocas en el segundo
cuadrante.

Agar Manitol sal.

 Fig. 8: Crecimiento de colonias amarillas,
extendidas por dos de los cuadrantes,
presenta una pigmentacin amarilla.

Agar Cetrimida.

Fig. 9: Crecimiento de colonias blancas,

extendidas en dos de los cuadrantes.

Agar MacConkey.

Fig. 10: crecimiento de colonias rosas y

colonias ambarinas, extendidas en tres de
los cuadrantes.
Agar XLD.

Fig. 11: Crecimiento de colonias amarillas

y negras, extendidas en tres de los
cuadrantes, las colonias amarillas
produjeron pigmentacin amarilla.

Agar EMB.

Fig. 12: Crecimiento de colonias color

verde brillante y color moradas.
Las colonias verde brillantes se
extendieron en tres de los cuadrantes, y
produjeron una pigmentacin verde.
Las colonias moradas, crecieron
nicamente en uno de los cuadrantes.
Tabla 1. Resultados obtenidos en los medios de cultivo sembrados con el
cultivo mixto A.
Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa
MEDIO Morfologa Morfologa
Crecimiento Crecimiento
colonia colonial
Irregular, Irregular,
algunas color algunas color
verde y otras verde y otras
Agar nutritivo ++ color blanco, ++ color blanco,
elevacin plana elevacin plana
y bordes y bordes
enteros. enteros.
Puntiforme,
color amarillas,
Manitol sal + elevacin plana - -
y bordes
enteros.
Irregular, color
verde,
elevacin
Cetrimida - - +++ plana, bordes
enteros y
pigmentacin
verde.
Irregular, color
verdes, rosas y
tintas,
elevacin
MacConkey - - ++
plana, bordes
enteros y
pigmentacin
verde.
Irregular, color
amarillas,
elevacin
XLD - - +++ plana, bordes
enteros y
pigmentacin
amarilla.
Irregular, color
moradas,
EMB - - +++ elevacin
elevada,
bordes enteros.
+: Crecimiento escaso.
++: Crecimiento moderado
+++: Crecimiento abundante.
Tabla 2. Resultados obtenidos en los medios de cultivo sembrados con el
cultivo mixto B.
Escherichia coli Salmonella Typhimurium
MEDIO Morfologa Morfologa
Crecimiento Crecimiento
colonia colonial
Irregulares, Irregulares,
color blancas, color blancas,
Agar nutritivo ++ elevacin plana ++ elevacin plana
y bordes y bordes
enteros. enteros.
Irregulares,
color amarillas,
elevacin
Manitol sal ++ plana, bordes - -
enteros y
pigmentacin
amarilla.
Irregulares,
color blancas,
Cetrimida - - ++ elevacin plana
y bordes
enteros.
Irregular, color
Irregular, color
ambarina,
rosa, elevacin
MacConkey ++ +++ elevacin
plana, bordes
plana, bordes
enteros
enteros
Irregulares,
color amarillas, Irregulares,
elevacin color negras,
XLD +++ elevada, +++ elevacin
bordes enteros elevada y
y pigmentacin bordes enteros.
amarilla.
Irregulares,
color verde
Irregulares,
brillante,
color moradas,
elevacin
EMB +++ ++ elevacin
elevada,
elevada,
bordes enteros
bordes enteros.
y pigmentacin
verde.
+: Crecimiento escaso.
++: Crecimiento moderado
+++: Crecimiento abundante.
Tincin de Gram.

CULTIVO
TINCIN AGAR COLONIA
MIXTO
1 MacConkey A Verde
2 MacConkey A Rosa
3 MacConkey A Tinto
4 XLD B Negro
Se realiz tincin de Gram a 4 colonias, tres de a cuales pertenecen al medio de
cultivo MacConkey inoculado con el cultivo mixto A y la otra colonia pertenece al
agar XLD inoculado con el cultivo mixto B.

Tabla 3. Orden de las tinciones, y a que colonia, agar, y cultivo pertenecen.

Fig. 13. Placa para tincin de Gram con 4 muestras diferentes.

Resultados.

TINCIN GRAM FORMA

1 Negativa Bacilar alargada
2 Negativa Bacilos
3 Negativa Bacilos
4 negativa Bacilos cortos
Observaciones.

- Fig. 14: Tincin 1.

- Fig. 15: Tincin 2.

- Fig. 16: Tincin 3.

- Fig. 17: Tincin 4.

DISCUSIN
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
denominado Medio de Cultivo y el crecimiento Cuadro 1

de los microorganismos es el Cultivo.

[ CITATION Con12 \l 2058 ].
Los medios de cultivos pueden ser
clasificados segn su estado fsico, su origen o
por su utilidad. Por su estado fsico se
clasifican en tres; en lquidos, en slidos y
semislidos.
Los medios lquidos se denominan
comnmente caldos y estn constituidos por
nutrientes en solucin acuosa; los medios
solidos se obtiene aadiendo a un medio de cultivo liquido agar de 1.5 a 2% para
solidificar al medio, estos pueden ser ya sea en una caja de Petri o en un tubo de
ensayo. Por ultimo tenemos a los medios semislidos que son medios de cultivos
lquidos y con un agregado de 0.3 o 0.5% de agar un porcentaje mucho menor a
comparacin del cultivo slido. Este cultivo tiene la especialidad que se utiliza para
determinar la motilidad de los grmenes.[ CITATION Neg07 \l 2058 ]
En la primera parte de la prctica se realiz la siembra de E. coli en diferentes
medios de cultivos, los cuales fue un medio slido y un medio lquido, no se hizo
en medio semislido porque no se contaba con el medio. Los resultados del
cultivo arrojaron una turbidez en los dos medios tanto slido como semislido
seal de que creci la bacteria en el entorno aun que se ocupara otras pruebas
para fundamentarlo. Tericamente en el medio de cultivo semislido se debi de
haber reflejado la movilidad de la bacteria E. coli por la turbidez del medio esto es
porque E.coli es una bacteria Gram negativa que dentro de sus caractersticas se
encuentra la presencia de flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), lo que le
permite tener una alta motilidad en el medio circundante.[ CITATION Pr08 \l
2058 ]
En la segunda parte de la prctica se abord sobre la utilidad de los medios de
cultivos para el aislamiento microbiano. La clasificacin presentada por su utilidad
se encuentra en el cuadro 1 donde tenemos divido los medios de cultivos en,
comunes, enriquecidos, selectivos, diferenciales, de transporte y especiales. En la
prctica se utilizaron medios de cultivos comunes, selectivos y diferenciales en los
cuales se le agregaron un cultivo mixto A que contiene Stahpylococcus aureus y
Pseudomonas aeuruginosa y un cultivo mixto B que contiene E. coli y Salmonella
tyohimurium.
El agar nutritivo est catalogado en los medios comunes o bsicos ya que solo se
utiliza para propsitos generales, aislamiento y recuento de microorganismos, se
fundamenta siendo un medio no selectivo en el cual la pluripeptona es la fuente de
carbono, nitrgeno y de energa para los microrganismos.[ CITATION Bri08 \l 2058
] El crecimiento observado en este medio de cultivo fue un poco abundante, en el
cual no se diferencia las dos distintas bacterias de cada cultivo mixto como se ve
en la (Fig 1, Fig7), pero en el cultivo mixto A (Fig1) se observa un ligero color
verde que es excretado por la Pseudomona aeruginosa.
Otra clase de medio de cultivo es el medio selectivo que son utilizados para
favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin
polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar
nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especfica y adems
inhibir el crecimiento de otras bacterias por medio de sustancias antimicrobianas,
sales inorgnicas o sales biliares. Los medios selectivos utilizados en esta prctica
fueron el MacConkey, sal y manitol y XLD.

El agar MacConkey es un medio que se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram

negativos contiene peptonas (nutrientes), lactosa que es el sustrato fermentable
para identificar las bacterias fermentadoras por medio de un indicador rojo neutro;
y para inhibir el crecimiento de las bacterias Gram positivas contiene sales biliares
y cristal violeta. En la prctica solamente una bacteria de los cultivos mixtos es
Gram positiva (Staphylococcus aureus) que se encuentra en el cultivo mixto A pero
por lo que se observa en la Figura 4 tericamente debi de crecer una sola
bacteria en ese medio de cultivo con el cultivo mixto A que es la Pseudomonas
aeruginosa pero en el medio de cultivo crecieron tres tipos de colonias una de
color verde, rosa y otra tinta. Se infiera que la colonia de color verde sea
Pseudomonas aeruginosa pero las otras colonias que se presentan puede ser
porque el aza al momento de cultivar no estaba lo suficientemente esterilizada
porque al parecer las otras dos colonias que se encuentran ah son las del cultivo
mixto B, es sabido que la E. coli es fermentadora de lactosa y dar una coloracin
rosa por la acidez de su fermentacin y el viraje del indicador rojo neutro, por otro
lado est la Salmonella typhimurium aunque esta no da una pigmentacin (no
fermenta), para comprobar sus diferencias se hizo un tincin de gram para los tres
tipos de bacterias presentes en el MacConkey en las cuales todas se
comprobaron que son Gram negativas, viendo su morfologa se encuentra que las
bacterias de la colonia verde que es la Pseudomonas aeruginosa (Fig 14) lo es
por su forma bacilar alargada recta o curva, las bacterias de color rojo en el medio
de cultivo se podra inferir que son fermentadoras y podra sr la E. coli la cual en
la tincin tenina una forma bacilar corta (Fig 15),por ultimo las dos posteriores
muestras de tincin de gram (Fig 16, Fig17) serian de la misma cepa al ser las dos
Salmonella typhimurium una muestra se obtuvo del cultivo XLD que tenan un
punto negro y la otra muestra de la misma caja de Petri del MacConkey,
similarmente contiene la misma morfologa aun que en la ltima tincin (Fig 17)
podra ser que al excederse de cantidad de bacterias en el frotis no se pueda
apreciar bien la forma.
Otro cultivo selectivo empleado en la prctica es el sal y manitol y el XLD. El sal y
manitol es un cultivo que tambin es diferencial para estafilococos, este contiene
peptona (nutrientes) adems de cloruro de sodio (que se encuentra en alta
concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora
acompaante, el rojo fenol es el indicador de pH que junto con el manitol indica si
la bacteria es fermentadora. [ CITATION Bri081 \l 2058 ]El cultivo mixto A en este
medio (Fig 2) solo creci Staphylococcus aureus al ser una bacteria halfila
mientras que Pseudomona aeruginosa no creci en este tipo de condiciones; el
cultivo mixto B (Fig8) paso lo mismo tenemos una bacteria halfila que es la E.
coli y una no halfila que no creci como es la Salmonella typhimurium , las dos
bacterias halfilas de los dos diferentes cultivos mixtos presentaron un color
amarillo alrededor por lo que indica que adems de ser halfilas son
fermentadoras de manitol. Por ltimo el XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un
medio selectivo diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de
patgenos entricos Gram negativos por medio del desoxicolato de sodio que es
un inhibidor de los microorganismos Gram positivos destruyendo la pared de
peptidoglicano, la degradacin de los carbohidratos presentes en el medio (xilosa,
lactosa y sacarosa) genera la produccin de cido haciendo virar el indicador (rojo
fenol) de rojo a amarillo. El medio tambin tiene la capacidad de detectar la
produccin de H2S, a travs del sistema indicador tiosulfato de sodio y citrato
frrico amonio. Cuando el microorganismo produce H 2S se observan colonias con
el centro negro.[ CITATION htt \l 2058 ] En la practica el cultivo mixto A (Fig 5) en
este medio solo creci Pseudomona aeruginosa por las condiciones inhibidoras
hacia Gram positivas (S. aureus ) abundando en el medio adems de presentar
fermentacin debido al color amarillo presentado pero no forma H 2S. Por otra parte
el cultivo mixto B (Fig 11) se obtuvo un abundante crecimiento bacteriano de los
dos gneros de bacterias diferencindose en que E.coli presento una coloracin
amarilla por su fermentacin y Salmonella typhimurium tuvo una coloracin negra
la formacin de H2S de su metabolismo adems que no fermetnta sino tomo los
nutrientes de la lisina del medio que esta a su vez hacia que vire el indicador a
color rojo.

Los medios diferenciales se utilizan para poner en evidencia caractersticas

bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar
fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. En este tipo de
medios tambin puede entrar el MacConkey.[ CITATION Con12 \l 2058 ] El EMB
es un medio para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de
enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciacin
entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son
incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno;
stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas.
[ CITATION Bri082 \l 2058 ] El cultivo mixto A sembrado en este medio (Fig 6) no
hubo un crecimiento de S. aureus al ser una bacteria Gram positiva pero si de P.
aeruginosa siendo su crecimiento abundante con una coloracin morada lo cual
indica la fermentacin de lactosa del medio. En cambio en el cultivo mixto B (Fig
12) debido a que Salmonella typhimurium no presenta fermentacin de lactosa
sus colonias se vern incoloras y un poco abundantes pero E. coli presenta una
caracterstica particular en este medio que es un color verde brilloso metlico y
centro negro azulado al igual que las cepas de Citrobacter spp.
El ltimo de los medios de cultivos utilizados es la cetrimida este es un medio
utilizado para el aislamiento selectivo y diferencial de la P. aeruginosa (cultivo
mixto A). Su formulacin permite el crecimiento selectivo de Pseudomonas
aeruginosa y estimula la formacin de pigmentos. El cloruro de magnesio y el
sulfato de potasio promueven la formacin de piocianina, pioverdina, piomelanina
y fluorescena de P. aeruginosa. La cetrimida es un detergente catinico que acta
como agente inhibidor, libera el nitrgeno y el fsforo de las clulas de casi toda la
flora acompaante, aunque inhibe tambin algunas especies de Pseudomonas.
Como ya se mencion la P. aeruginosa se encuentra en el cultivo mixto A (Fig 3) y
al cultivarlo en cetrimida dio la formacin de un cultivo irregular con pigmentacin
verde muy abundante. Por otro lado cuando se cultiv el cultivo mixto B (Fig 9) se
observa crecimiento pero muy poco y no se logra identificar que bacteria es entre
E. coli o Salmonella typhimurium porque no hay algo en el medio que las
diferencie una de la otra.

CONCLUSIN
En conclusin los medios de cultivos son esenciales para el crecimiento
bacteriano controlado, estos medios de cultivos nos pueden dar mucha
informacin acerca de una muestra bacteriolgica aunque de forma general y no
tan especifica como las pruebas bioqumicas pero aun as es utilizado en el campo
clnico y alimenticio.
Se logr hacer todas las siembras bacterianas satisfactoriamente en cultivos
lquidos (E.coli) y solidos (cultivo mixto A y B), adems que se verifico las
diferentes caractersticas que poseen las bacterias en cada uno de los cultivos
como si son Gram positivas o Gram negativas, si fermentan lactosa o no, o si
forman H2S como lo formo Salmonella typhimurium en el medio XLD.

CUESTIONARIO SESIN A

1. Determinar el nmero relativo de bacterias encontrado en su caja

mediante la tcnica de aislamiento.
La mayora de las cajas de Petri mostraron una capa homognea que es
incontable salvo en el cultivo de Sal y manitol se contaron 89 colonias de
S. aureus y en EMB que fueron 44 colonias de Salmonella typhimurium

2. Explique cul es la importancia en el laboratorio de microbiologa de la

tcnica de aislamiento en cultivo puro.
Debido a que la tcnica nos permite obtener cultivos con colonias diferenciadas
(es decir perteneciente a cada especie de bacteria) en una mezcla de bacterias,
nos ayudara en la identificacin (a partir de la morfologa colonial) y cuantificacin
de una bacteria con importancia mdica, principalmente patolgica aunque para
corroborar el resultado se deben de hacer las pruebas bioqumicas ya que son
ms especficas.

3. Explique la importancia mdica de las especies bacterianas

trabajadas.
Staphylococcus aureus: agente etiolgico de un gran nmero de
infecciones en el hombre. Pueden producir procesos inflamatorios
supurativos en casi cualquier tejido, los cuales son desde muy leves, hasta
de alta gravedad y muerte. Adems son fabricantes de toxinas que
provocan cuadros clnicos de muy diversas manifestaciones.
Pseudomona aeruginosa: produce infecciones nosocomiales y adquiridas
en la comunidad. Puede manifestarse como infeccin de vas urinarias
nosocomial (en pacientes con sondas), meningitis, septicemia, bacteriemia,
ectima gangrenoso, enterocolitis, infecciones de quemaduras y heridas,
neumona primaria y necrotizantes, infecciones pulmonares crnicas,
osteomielitis, infecciones de piel y tejidos blandos, otitis crnica externa,
otitis media crnica y otitis externa maligna endocarditis, infecciones
oculares.2
Escherichia coli: es considerada parte de la flora normal de aparato
digestivo del hombre y muchos animales pero, al mismo tiempo, es la
enterobacteria que con frecuencia causa sepsis bacteriana, meningitis
neonatal, infeccin del tracto urinario y gastroenteritis. La gastroenteritis se
produce por entrada de cepas patgenas al aparato digestivo; el resto son
infecciones endgenas.

Salmonella typhimurium: provoca fiebre tifoidea. En la primera semana se

presenta fiebre, malestar general, mialgias, cefalea, anorexia y dolor abdominal
la fiebre alcanza los 40-40.5C. En la segunda semana continua la
constipacin o puede desarrollar diarrea y tos. Podra presentarse manchas
rosas en el pecho.
Cuestionario sesin B.

1- Mencione las diferencias que existen entre los siguientes medios de

cultivo: bsico, enriquecido, diferencial, selectivo, de enriquecimiento
y de transporte. Cite tres ejemplos de cada tipo de medio.
Medio Caracterstica particular. Ejemplos
Contienen sustancias nutritivas
bsicas para el crecimiento de
bacterias metablicamente no Agar nutritivo, caldo
Bsico. exigentes, su preparacin es a nutritivo y agar de soya.3
base de carne, aadiendo agar y
se le puede aadir una pequea
cantidad de peptona, extracto de
levadura y glucosa3.
Medios bsicos a los que se les
aaden suero, sangre o factores Agar sangre, medio de
esenciales especficos, como Lwestein Jensen y agar
Enriquecido. vitaminas o cofactores. Permiten desoxicolato-lactosa
el crecimiento de bacterias (DLA)4.
exigentes en requerimientos
3
nutritivos .
Permiten la diferenciacin de Medio base de rojo fenol,
colonias de microorganismos agar eosina azul de
Diferencial. semejantes, sobre la base de metileno (EMB) y agar SS
alguna propiedad bioqumica del (Salmonella Shiguella).5
germen desarrollado5.
Permiten el crecimiento de un
determinado grupo de Medio manitol-sal, medio
Selectivo microorganismos, mientras inhibe Sabouraud y el medio de
el desarrollo de la microbiota rogosa6.
acompaante en la muestra a
estudiar5.
Medio lquido que favorece la Caldo thioglicolato, caldo
De enriquecimiento. multiplicacin de bacterias cuando tetrationato y caldo de
la muestra obtenida es muy agua o peptona alcalina.
pobre4.
Se utiliza para asegurar la
viabilidad de las bacterias y evitar Medio de Stuart, medio
De transporte. que se reproduzcan alterando el de transporte VMGA III y
nmero de bacterias iniciales, Cary Blair.
desde el momento de toma de la
muestra hasta su posterior
siembra en el laboratorio4.
2- Mencione un mnimo de 5 substancias inhibitorias en los medios de
cultivo y explique su accin.
Citrato-desoxicolato-agar (CD): que contiene desoxicolato una sal biliar que
puede alterar la superficie de los neumococos lo cual activa una amidasa
autoltica que rompe las uniones entre el cido murmico y el aminocido
alanina.6
Agar anaerobio de lecitina-lactosa: que contiene azida de sodio, un potente
inhibidor de sistemas enzimticos bacterianos implicados en el transporte
de electrones y sulfato de neomicina, inhibe la sntesis de protenas
bacterianas mediante su unin irreversible a la subunidad ribosmica 30S
de las bacterias susceptibles.7
Agar cicloserina-cefoxitina-fructosa-yema de huevo (CCFA): contiene
cicloserina inhibe la formacin de la pared celular, al ser un interferente en
la formacin de los precursores en el citoplasma, inhibe la conversin de L-
alanina a D-alanina8. Mientras que la cefoxitina se fija a una o ms
protenas fijadoras de penicilina (PBP) que son transpeptidasas y de esta
forma se inhibe la unin cruzada de las uniones de peptidoglucano. 8

3- Explique por qu no todas sus cepas crecieron en los medios

inoculados. existen inhibidores? Cules son? Cmo actan?
- Agar manitol-sal: agar selectivo que inhibe el crecimiento en este
experimento de Pseudomona aeruginosa, debido a la concentracin de sal
elevada (7.5%) slo organismos que puedan soportar la presin osmtica
sobreviven, por tanto slo se obtiene crecimiento de Staphylococcus
aureus.
- Agar cetrimida: derivado de amonio cuaternario con capacidad
emulsionante y detergente, con actividad bactericida Gram+ y Gram-.
Inhibe el crecimiento de Staphylococcus aureus pero propicia el crecimiento
de Pseudomona aeruginosa.9
- Agar MacConkey: separa las bacterias fermentadoras de lactosa de las no
fermentadoras. Contiene sales biliares (propician la autolisis de la bacteria
al deteriorar la superficie bacteriana) y cristal violeta que inhiben a bacterias
Gram+ y Gram- que no pertenecen a la familia Enterobacteriaceae.
- Agar XLD: medio selectivo para Salmonella typhimurium inhibe el
crecimiento de E. coli debido a la presencia de desoxicolato (mecanismo
expuesto anteriormente).10
- Agar EMB: solo creci Pseudomona aeruginosa, Staphiylococcus aureus no
creci debido a que es un Gram positivo. La diferenciacin entre
organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son
incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de
metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de
bacterias Gram positivas.11
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