MANUAL DE LABORATORIO DE REPRODUCCIN ANIMAL

2010
E. Mellisho

PRCTICA 04
EVALUACION DE CALIDAD SEMINAL

El espermatozoide es una clula terminal, cuyo rol principal es el transporte de un paquete, constituido
por el genoma nuclear y el centriolo, hasta el ovocito. Para realizar esta tarea, el espermatozoide est
equipado con una batera de estructuras especializadas (una membrana plasmtica que muestra reas
delimitadas, organelos con disposicin especfica tales como la vaina mitocondrial, y especializaciones de
los mismos tales como el flagelo y el acrosoma) los que garantizan la interaccin particular con el tracto
genital femenino y el ovocito y sus envolturas. La viabilidad celular espermtica decrece rpido y
substancialmente luego de la eyaculacin.
Muchos investigadores, especialistas en reproduccin animal estn tratando de disear el anlisis
seminal ideal, que valore adecuadamente y prediga la fertilidad de una muestra seminal. Asi, el anlisis
de semen ideal seria aquel que de forma sencilla y eficaz permitiera conocer de manera predictiva la
capacidad fecundante de un eyaculado.
Segn Graham (1996), las cualidades que deben tener los espermatozoides de un eyaculado fecundante
son: motilidad progresiva, morfologa normal, metabolismo energtico activo, capacidad para
desarrollar una motilidad hiperactivada, integridad estructural y funcional de la membrana, integridad
de las enzimas asociadas con la fecundacin, capacidad de penetracin y transferencia optima del
material gentico. Sin embargo este anlisis integral es muy difcil de desarrollarlo, debido a la enorme
complejidad inherente a la funcin espermtica.

Graham J. 1996. Cryopreservation in stallion spermatozoa. Vet. Clin. North. Ame. 12:131-147

Objetivos.

a. Valorar reproductores seleccionados, destinados a inseminacin artificial y monta natural.

b. Determinar el nmero de dosis de inseminacin a obtener de un eyaculado.

IV. Evaluacin de calidad seminal

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Materiales y metodologa

1. Se proceder a realizar la coleccin con vagina artificial de un carnero, toro verraco con las
precauciones del caso.
2. Se transporta rpidamente el semen colectado al laboratorio.
3. Se procede a realizar la evaluacin macroscpica y microscpica del semen, segn corresponda.
4. Completar datos en el siguiente tabla:

Calidad de semen Fecha:.

Informacin de eyaculado:

Especie ________________________________ Nombre /arete ___________________

Volumen (ml) _______________ Color _________________

Aspecto

Concentracion (X 106) _______ Total Sperm (X 109) ________

Motilidad masal (%)

Motilidad Individual (%)

Esperm. Viables(%)

Morfologia (%) Normal Anormales

Conclusin de evaluacin:
.
.
.
.
:
:

IV. Evaluacin de calidad seminal

Revisin bibliogrfica

Tcnicas de anlisis de calidad seminal

El anlisis seminal o espermiograma incluye una serie de pruebas que evalan diversos factores o
funciones de la clula espermtica. Como resultado del anlisis seminal podemos calificar a la muestra
como apta o no apta para su uso en inseminacin artificial. Algunas pruebas disponibles son:

a) Concentracin espermtica
Es una las pruebas de anlisis seminal ms importante. Existe variabilidad muy grande en la
concentracin de un eyaculado a otro, siendo importante conocer el nmero de
espermatozoides por eyaculado, ya que de este parmetro depende el nmero de hembras a
inseminar.
La concentracin puede calcularse por varios mtodos a partir de una muestra de semen. Entre
estos mtodos destaca la espectrofotometra, colorimetra, citometria de flujo y uso de cmara
de recuento celular como las de Brker, Neubauer o Thoma.
La espectrofotometra es un mtodo indirecto, capaz de medir la luz monocromtica absorbida
por las partculas en suspensin o los espermatozoides. La medicin de la densidad ptica de la
muestra es comparada frente a una curva estndar patrn previamente validada.
El mtodo de citometria de flujo, es tambin un mtodo indirecto, y determina el numero de
partculas por unidad de volumen, aunque no puede asegurar que todas las partculas son
realmente espermatozoide. Esta tcnica utilizada en eyaculados de conejo puede inducir a error
debido a la gran cantidad de impurezas que presente el semen (Gonzales-Urdiales, 2002).
Gonzales-Urdiales R. 2002. Contrastacin seminal. Cunicultura, 160: 394-399.

El mtodo ms extendido es la utilizacin de la cmara de recuento celular. Este anlisis se lleva

a cabo mediante el conteo en microscopio ptico a 100X o 400X, empleando por comodidad un
contador manual.
Paulenz and Hofino (1996) determino la concentracin espermtica de semen de verraco por
diferentes mtodos, siendo el coeficiente de variacin de 12,3% en cmara de recuento, 2,9%
en el espectrofotmetro y 2,3% en el citmetro de flujo.
Paulenz H., Hofino P.O. 1996. Routine Assesment of sperm concentration at boar AI station a coulter counter. Reprod.
Dom. Anim.; 31(1):257-258

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A) B)

Figura 1: Conteo de espermatozoides en Camara Neubauer. A) Cuadriculas 5 x 5 y B) cmara

neubauer

b) Motilidad total
La motilidad es uno de los parmetros ms importantes del anlisis seminal. Existen varias
tcnicas de estudio de motilidad, pero la ms utilizada y a la vez la ms simple es la valoracin
visual subjetiva del porcentaje de espermatozoides mviles y la calidad de su movimiento. Para
la realizacin de esta valoracin todo material usado debe estar en condiciones de normocinesis
(temperatura 37 C).
Los espermatozoides pueden presentar 2 tipos de movimientos:
Movimiento de rotacin (alrededor de su eje)
Movimiento progresivo (desplazamiento de la clula), el cual a su vez puede ser lineal o circular.

Dentro de la motilidad total un caso especial hace referencia a la denominada motilidad masal
que es nicamente evaluable en eyaculaciones de mamferos con concentraciones espermticas
elevadas, como es el caso de rumiantes.
Primero se estima, el porcentaje de espermatozoides que muestran algn tipo de movimiento o
motilidad total, segundo, el porcentaje de espermatozoides motiles que presentan un
movimiento progresivo o motilidad progresiva.

IV. Evaluacin de calidad seminal

c) Integridad de la membrana espermtica

La integridad de la membrana espermtica ha sido uno de los parmetros mas estudiados, por
su papel clave en la funcin espermtica. De hecho, el estado de la membrana espermtica
marca la integridad morfolgica y funcional de la clula. La evaluacin morfolgica se realiza
usando la ptica de contraste diferencial de interferencia, la ptica de contraste de fase o las
tinciones supravitales como el verde rpido/eosina, la eosina/azul de anilina, el azul
tripan/giemsa o el amarillo de naftol/eritrocina.
Tincin eosina-nigrosina: la proporcin de espermatozoides vivos pueden ser determinados por el uso de
tcnicas de tincin basados en el cual la membrana de clulas daadas o muertas pueden tomar algunos
colorantes

Figura 2 : Tincin Eosina-nigrosina Test

Figura 3: Mezcla de clulas espermatozoides vivos y muertos, teidos con LIVE/DEAD Sperm Viability Kit
(Cat. no. L7011). El espermatozoide vivo tiene membrana intacta y tienen la capacidad de teir con verde
fluorescente, y los espermatozoides muertos se pueden teir con fluorescente rojo-naranja (Imagen de L.
Garner, School of Veterinary Medicine, University of Nevada, USDA)

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Figura 3: Reaccin del acrosoma en la superficie de la zona pelcida a 400X. A) tincin de ADN. B) tincin
del acrosoma C) imgenes combinadas. a y e: espermatozoides con reaccin acrosomal; b:
espermatozoide con acrosoma intacto; c y d: espermatozoide sin acrosoma

d) Test hipo osmtico.

La prueba de endosmosis (hypoosmotic swelling test, HOST) consiste en someter a los
espermatozoides a un medio de presin osmotica mas baja que la fisiolgica, lo que causa una
entrada de agua en la clula en un intento de equilibrar la presin osmotica interna con la del
medio externo. Para que esta respuesta se produzca, la membrana plasmtica del
espermatozoide debe estar integra y con los mecanismos de intercambio de fluidos funcionando
correctamente. La entrada de agua provoca en estas clulas un inchamiento y enrollamiento del
flagelo. Las clulas con la membrana fsica o funcionalmente daada no experimentara cambios
en la forma del flagelo
La Prueba- Hypo Osmotic Swelling Test; es una simple prueba basada en la semipermeabilidad
de la membrana de una clula intacta en presencia de agua, expandiendo el volumen de la clula

Figura 4: - Hypo Osmotic Swelling Test

IV. Evaluacin de calidad seminal

 Tabla 1: Caractersticas del eyaculado - Fracciones

Especie Tiempo (lapso) de eyaculacin Composicin del eyaculado

Toro 1 segundo Fraccin simple
Carnero 1 segundo Fraccin simple
Verraco 5-25 minutos Fraccionado
Libre - espermtica
Rica espermtica
Cogulo
Potro 30-60 segundos Fraccionado
Libre - espermtica
Rica espermtica
Mucus
Hombre 10-30 segundos Fraccin simple pero coagulado

Fuente: J. Parrish, Department of Animal Science, University of Wisconsin-Madison

Tabla 2: Caractersticas del eyaculado - especies

Total
Concentracin
Eyaculado Espermatozoides %
Especie Espermtica (X % Normales
Volumen (ml) por Eyaculado Motilidad
109/ml)
(109)
Toro 8.0 1.5 12 75 95
Carnero 1.0 3.0 3 95 95
Verraco 200 0.25 50 70 90
Potro 80 0.15 12 70 40 - 90
Hombre 2-6 0.15 0.9 65 30 - 70

Fuente: J. Parrish, Department of Animal Science, University of Wisconsin-Madison

CUESTIONARIO
1- Completar la informacin de la calidad de semen de la practica
2- Metabolismo del espermatozoide, explique
3- Caractersticas seminales de alpaca, llama, cuy
4- A qu tipo de anormalidades se les considera anormalidades primarias, y por qu?
5- Qu parmetros considera el anlisis computarizado de semen, CASA?
6- Cul es la correlacin de los anlisis de semen de laboratorio con la fertilidad?