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Elementos de la Expresin Gentica en Bacterias.

Transcripcin y traduccin in vitro de genes


clonados.
La tecnologa vista hasta este punto permite alcanzar objetivos impensables hace tan slo unas
dcadas; el primero de ellos, el aislamiento de secuencias puras de ADN, ha sido la base para
todo el enorme desarrollo de la gentica experimentando desde entonces; a partir de esa
posibilidad han surgido diversas aplicaciones analticas de gran trascendencia. Hasta aqu todo
el trabajo se realiza sobre fragmentos de ADN considerados el objeto del clonaje; el pasajero ha
sido una pieza de ADN muda, inerte, que se ha dejado transportar por el vector sin mayores
complicaciones. El objetivo de estos procedimientos ha sido tener acceso a cantidades
adecuadas de un fragmento puro de DNA con el fin de su anlisis.

1.1. Expresin gentica en procariotas: moldes, seales y maquinaria celular.

La expresin gentica de todas las clulas depende de los procesos secuenciales de transcrip-
cin y traduccin que, en conjunto transfieren la informacin contenida en una secuencia de
nucletidos de un gen, a una secuencia de aminocidos de una protena. Esto implica que a
partir de la dotacin gnica portada por la clula (genotipo), se expresarn un conjunto de
caractersticas evidenciables y que constituirn el fenotipo celular.

Figura 5. Comparacin entre la expresin de los genes eucariotas y procariotas. Los ARNm
procariotas son a menudo polignicos, es decir que contienen informacin para mas de una
protena. El extremo 5 se traduce cuando todava se est transcribiendo el extremo 3. Los
ARNm eucariotas son monognicos y requieren de modificaciones postranscripcionales antes
de atravezar la membrana nuclear y llegar al citoplasma donde son traducidos.

La ARN polimerasa reconoce un sitio especfico en el ADN, llamado promotor, al cual se une
iniciando la transcripcin. Un mismo transcripto, ARNm, puede contener la informacin
correspondiente a ms de un gen, por lo tanto se traducir luego en ms de un polipptido. El
conjunto de genes que son transcriptos en un nico ARNm y que por tanto se expresan en
conjunto se denomina opern. (Ver ms adelante).

Los genes procariotas no poseen intrones como los eucariotas, es decir que una vez transcripto
el ARNm, ste ser traducido directamente en una secuencia polipeptdica, sin necesidad de
realizar ningn procesamiento despus de la transcripcin.

Otra diferencia importante con la expresin de los genes eucariotas, es que como las bacterias
no tienen un compartimento nuclear definido, los procesos de transcripcin y tra-duccin estn
acoplados. Es decir que mientras se est sintetizando una molcula de ARNm, el ARN naciente
puede tomar contacto con los ribosomas e iniciar la sntesis proteica (ver figura 5). sto es una
ventaja para la bacteria y constituye una importante causa de su elevada capacidad para
adaptarse a diferentes ambientes, porque le permite responder rpidamente a los estmulos
sintetizando las protenas necesarias, en el momento adecuado.

1.2. Uso y manipulacin de seales de expresin

Otra importante aplicacin de la biologa molecular a la medicina, es la produccin de vacunas


recombinantes. Este procedimiento se basa en la expresin en bacterias de genes propios de
patgenos contra los que se desea vacunar, por ejemplo virus, parsitos u otras bacterias. El
procedimiento consiste bsicamente en el clonado de genes que codifican para antgenos de
superficie del virus o del parsito contra el que se desea vacunar. Estos antgenos sern
expresados en la cepa recombinante y purificados a partir del cultivo de la misma cepa,
usndose luego como inmungenos. As, clonando los genes apropiados en los microorga-
nismos adecuados, podrn producirse grandes cantidades del antgeno puro. Este mtodo
proporciona la ventaja de que evita trabajar con microorganismos patgenos. El desarrollo de
la vacuna contra la hepatitis B representa el primer xito de las vacunas recombinantes. sta, es
producida en una levadura que ha sido transformada previamente con un vector recombinante
que contiene el gen del antgeno de superficie del virus.
2.
Estos mtodos pueden usarse tambin para la produccin de vacunas vivas, es decir vacunas
que son administradas con virus o bacterias vivas que han sido manipuladas genticamente para
perder su virulencia, pero que mantienen intactas sus propiedades inmunognicas. Adems,
estos microorganismos denominados atenuados, pueden usarse como vectores de genes de
otros grmenes patgenos para producir vacunas que inmunicen contra ms de una
enfermedad infecciosa a la vez. Estos procedimientos son motivo de investigacin en los
laboratorios de desarrollo de vacunas en todo el mundo.