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2016
Objetivos
Determinar la capacidad de los microorganismos de metabolizar ciertos azucares
Clasificar al microorganismo
Mtodo
Participantes
Materiales
Tubos de ensayo
Papel kraft
Hilo pabilo
Algodn
Aguja kohle
Mechero Bunsen
Encendedor
Rotulador
Lata
EQUIPOS
Estufa
PROCEDIMIENTO
1. FERMENTACION DE AZUCARES
Seleccionar el agar rojo fenol con maltosa, sacarosa, glucosa, lactosa en tubos de
ensayo (previamente preparados)
Enfriar hasta 45 C
Abrir el tubo de ensayo que contiene la cepa, flamear tres veces su boca
Flamear tres veces la boca del tubo que contiene el agar y taparlo
Dejar solidificar
Colocar los tubos en una lata vaca y cubrir la superficie con papel craff
Abrir el tubo de ensayo que contiene la cepa, flamear tres veces su boca
Flamear tres veces la boca del tubo que contiene el medio TSI y taparlo
Cubrir la lata con papel craft y asegurar el papel con hilo pabilo
Resultados
Discusiones
FERMENTACION DE AZUCARES
Ingredientes bsicos:
Este medio contiene lactosa con una concentracin de 1% y glucosa 0.1%, lo cual
permite la observacin de la fermentacin de uno o de ambos carbohidratos por parte de
las bacterias, adems de la produccin de gas y de cido sulfhdrico.
Por otra parte la lactosa (disacrido) ser primero degradada a sus monosacridos
correspondientes (glucosa y galactosa).
Beta-galactosidasa
Ciclo de Krebs
El medio TSI contiene una cantidad limitante de glucosa y una concentracin 10 veces
mayor de lactosa. Las Enterobacterias y los fermentadores de glucosa comienzan
metabolizando este azcar, ya que las enzimas que utilizan la glucosa estn presentes
como constituyentes de las bacterias, y stas pueden obtener mayor energa por
utilizacin del azcar ms simple.
Todos los otros carbohidratos deben ser convertidos en glucosa para entrar en el ciclo de
Embden-Meyerhof. La utilizacin de la glucosa se realiza en forma aerobia sobre la
estra, donde el oxgeno presente acta como aceptor terminal de electrones y en la parte
terminal de la columna en condiciones de anaerobiosis. Una vez que una bacteria
fermentadora de glucosa ha reducido toda la glucosa disponible a piruvato, comenzar a
metabolizar el piruvato a travs del ciclo aerbico de Krebs (sobre la estra), formando
productos finales cidos. El cido en el medio hace virar el amarillo del indicador de
pH, rojo de fenol. Entonces, luego de 6 horas de incubacin, la zona de la estra y el
fondo del tubo inoculado con un fermentador de glucosa tendrn un color amarillo. Si el
microorganismo no fermenta la glucosa, el fondo permanecer rojo (indicando que no
hay variacin del pH) o se alcalinizar (lo que puede visualizarse por un color rojo algo
ms intenso que del medio original), demostrando que la bacteria no es miembro de la
familia Enterobacteriaceae.
Despus de haber agotado la cantidad limitada de glucosa, una bacteria con capacidad
para utilizar la lactosa o sacarosa comenzar a degradarlas. Como el medio contiene 10
veces ms lactosa que glucosa, las bacterias encontrarn sustrato suficiente para
continuar la formacin de productos finales cidos. Luego 18 24 horas de incubacin
todo el medio TSI permanecer de color amarillo. Esta reaccin se denomina cido
sobre cido (A/A) y el organismo se identifica como un fermentador de lactosa. La
produccin de gas provocar la ruptura de la columna de agar o la empujar hacia la
parte superior, de modo que un fermentador de lactosa que produce gas dar una
reaccin A/A ms gas.
Las bacterias que fermentan la glucosa tambin pueden formar productos alcalinos a
partir de la utilizacin de la peptona, sobre la zona inclinada. Estas reacciones sern
K/K.
Referencias bibliogrficas
Microbiology, 2002.
http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/06anaerobicjar.html
http://www.microscience.com/STM.htm
http://www.microbiologyonline.org.uk/about.html