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Prticas em
Biologia Celular
01 - Microscpio de luz............................................................................................... 1
06 - A Clula Vegetal................................................................................................... 36
08 - Movimentos Celulares........................................................................................ 49
09 Ncleo................................................................................................................... 55
11 - Meiose.................................................................................................................... 64
12 Microscopia Eletrnica...................................................................................... 70
Normas de Conduta no Laboratrio
Como se comportar no Laboratrio de Biologia Celular
Alguns cuidados devem ser tomados por parte dos professores, tcnicos, monitores e
estagirios durante a utilizao do Laboratrio de Biologia Celular:
1 No fumar.
17 Sempre usar material adequado e seguir o roteiro de aula prtica fornecido pelo
professor, nunca fazer improvisaes ou alterar a metodologia proposta.
23 Nunca apanhar cacos de vidro com as mos ou pano. Usar escova ou vassoura.
24 Evitar contato dos produtos com pele, olhos e mucosas, utilizar sempre que
solicitado luvas e culos de segurana.
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estruturas que so indistintos vista humana. Analisando a frmula do aumento apresentada
acima possvel concluir que para a obteno de maior aumento do objeto, com mais nitidez,
a, distncia focal (f) deve ser diminuda. Este fato implica na diminuio do dimetro da lente
utilizada na observao e, conseqentemente, na maior aproximao da lente com o olho.
Desta forma, entre os sculos XVI e XVII foram desenvolvidos os microscpios compostos que
apenas no sculo XIX atingiram padro de qualidade adequado para os estudos citolgicos.
Logo, o microscpio ptico, ou de luz, que conhecemos hoje fruto de avanos no
conhecimento das propriedades da luz e das lentes. Consiste em um microscpio composto
com um conjunto de lentes que, combinadas com uma fonte de luz, so capazes de gerar
uma imagem ampliada do objeto de estudo.
A) PARTE MECNICA:
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7 Alavanca de pr-focalizao: na lateral esquerda do brao, entre o controle
macromtrico e o brao do microscpio, encontra-se uma alavanca que impede que a lente
frontal da objetiva toque a superfcie da lmina ou lamnula. Depois de focalizar a amostra
com a ajuda do macromtrico, esta alavanca deve ser girada no sentido horrio para
estabelecer o limite superior do ajuste macromtrico. Essa pea extremamente frgil e deve
ser movimentada com um toque leve, no sendo necessrio o uso de fora por parte do
usurio.
B) PARTE PTICA:
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sendo:
AN = n sen
n = ndice de refrao do meio que separa a objetiva e a amostra; e
= metade do ngulo do cone de luz que atinge a objetiva.
Figura 1.2 Esquema representando a maior captao de luz pela objetiva. Presena
do leo de imerso entre a lmina de vidro e a lente objetiva, no lado direito do desenho.
12 Filtro: disco de vidro azul (ou verde) fixado abaixo do diafragma e que permite
a converso da iluminao de halognio em luz branca, exibindo a amostra em suas cores
naturais.
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O funcionamento do Microscpio de Luz
Agora que voc j est familiarizado com o microscpio de luz, possvel entender
como ocorre a formao da imagem produzida por este aparelho. Os efeitos de refrao e
absoro da luz so fenmenos importantes a serem considerados na formao da imagem
ao microscpio. Esses fenmenos ocorrem em consequncia da interao da luz com o meio
que ela percorre. Logo, a interao da luz com o espcime avaliado gera absoro e refrao,
criando contrastes entre o objeto e o meio que o envolve, permitindo a distino das
diferentes estruturas no material analisado.
Antes que a imagem gerada pelo microscpio chegue a retina do observador, a luz
responsvel por sua formao passa por alguns componentes do aparelho: os feixes
luminosos que saem da fonte de luz atravessam as lentes do condensador, passam pela
preparao microscpica (o espcime), atingem as lentes objetivas e por fim atravessam as
lentes oculares chegando a retina onde so focalizados. Durante todo esse percurso a luz
passa por lentes e pelo ar, sofrendo desvios que geram os ndices de refrao e absoro
discutidos acima.
O princpio para a formao de imagens nos microscpios segue leis da Fsica que no
cabem serem discutidas com detalhes aqui. Vale ressaltar somente que as lentes dos
microscpios funcionam como sistemas convexos, ou seja, so lentes convergentes cuja
formao da imagem, como apresentado anteriormente, depende da posio do objeto em
relao ao plano focal (f) ou ao centro focal da lente. Neste sentido, a lente objetiva forma
uma imagem invertida e ampliada da preparao, enquanto a lente ocular funciona apenas
como uma lupa que amplia a imagem formada pela objetiva. Como resultado, a imagem final
captada na retina do observador virtual, ampliada e invertida em relao preparao.
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10 Agora, observando atravs das oculares e utilizando o controle macromtrico,
abaixe lentamente a platina, at que o material a ser observado seja visto. Assim que isto
ocorrer, corrija a focalizao utilizando o controle micromtrico.
11 Caso seja necessrio ajuste as diferenas que podem ocorrer entre o olho
esquerdo e direito (dioptrias) por meio do anel de correo de dioptrias no tubo esquerdo.
12 Explore o material, movimentando os controles dos eixos X e Y com a mo
direita e o controle micromtrico com a mo esquerda. Coloque sempre o material a ser
analisado no centro do campo de observao, antes de passar para a objetiva de aumento
imediatamente superior.
13 Aps percorrer todo o campo, passe para a objetiva de aumento mdio e corrija
a focalizao utilizando somente o micromtrico. Observe o campo e passe para a objetiva
seguinte. A cada mudana de objetiva centralize, com o Charriot, o material que est sendo
observado. Lembre-se sempre que medida que o aumento da objetiva maior o dimetro
da lente diminuiu, assim, a objetiva seguinte focaliza o centro do campo anterior, perdendo o
campo mais perifrico. Se voc no observar tal fato, poder perder o objeto do foco, o que
lhe forar a voltar na objetiva de menor aumento.
14 Sempre ajustar a abertura do diafragma de acordo com a objetiva em uso.
15 Verifique se a focalizao melhora, se voc manipular os pontos de controle de
luz: potencimetro, diafragma e condensador.
16 A atividade ao microscpio estritamente dinmica. A postura correta, alm dos
dois olhos abertos, inclui o fato de uma das mos ficarem nos parafusos Charriot, e a outra,
no parafuso micromtrico.
17 Terminada a observao: (i) encaixe a objetiva de menor aumento; (ii) reduza
ao potencimetro mnimo; (iii) desligue a luz; (iv) retire a lmina; (v) limpe e cubra o
microscpio; (vi) deixe seu lugar no laboratrio limpo e organizado.
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Atividade 1
Objetivos:
1. Treinar o uso do microscpio de luz.
2. Compreender as etapas necessrias para a focalizao do material de observao.
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3 - Focalizao de letras no microscpio.
Procedimento: (i) recorte as letra H, A e E de um jornal, revista, bula ou texto
qualquer; (ii) coloque uma gota de gua sobre a lmina, com o auxlio de um conta-
gotas ou pipeta; (iii) coloque as letras na posio de leitura sobre a gota; (iv) coloque a
lamnula em posio de 45o, com relao a lmina, para evitar a formao de bolhas; (v)
caso haja excesso de lquido, retire com papel absorvente, para manter a lamnula fixa;
(vi) seguir as etapas de focalizao do material.
a) Faa esquemas da posio e do tamanho das letras observadas olho nu e ao
microscpio.
Olho nu Microscpio
Olho nu Microscpio
Olho nu Microscpio
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d) Quais so as caractersticas da imagem formada pela lente ocular em relao
imagem formada pela lente objetiva?
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2 ptica do Microscpio e
Qualidade da Observao
Princpios do funcionamento do microscpio
LR = (k.)/(AN)
em que:
K = constante experimental estimada em 0,61;
= comprimento de onda da energia utilizada (luz branca = 550 nm ou feixe de eltrons);
AN = abertura numrica da lente objetiva. Esse valor calculado por meio da frmula:
AN = n sen
em que:
n = ndice de refrao do material intercalado entre a lamnula e a lente objetiva (ar, leo de
imerso, glicerina, gua, etc, dependendo do tipo de objetiva utilizada).
sen = metade do ngulo de abertura da lente objetiva (ngulo formado entre o feixe ptico
da lente objetiva e o raio de luz mais externo utilizado na formao da imagem).
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Por meio dessa frmula, verifica-se que o limite de resoluo diretamente
proporcional ao comprimento de onda da fonte de iluminao utilizada e inversamente
proporcional a abertura numrica. A diminuio do comprimento de onda () pode ser feita
utilizando-se outras fontes de iluminao como a luz ultravioleta (400 nm) ou utilizando-se
um feixe de eltrons cujo = 0,005 nm (microscpio eletrnico). A mdia dos comprimentos
de onda da luz branca de aproximadamente 550 nm ou 5,55 m o qual representa a
mdia dos comprimentos de onda do espectro da luz visvel. O quadro 2.1 mostra os
comprimentos de onda que compe a luz branca.
Com relao luz, quanto menor o comprimento de onda, menor o limite de
resoluo. De fato, detalhes estruturais menores que cerca de metade do comprimento de
onda utilizado no podem ser observados. Assim, analisando a tabela abaixo, podemos
depreender que, considerando apenas a influncia da luz, o limite de resoluo de um
microscpio ptico pode variar entre 200 nm e 400 nm.
Cor (nm)
Violeta 400 424
Azul 424 491,2
Verde 491,2 575
Amarelo 575 585
Laranja 585 647
Vermelho 647 700
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menor limite de resoluo, aumentando a abertura numrica. Isso pode ser feito por duas
maneiras: utilizando-se objetivas com diferentes aberturas angulares, isto , diferentes valores
de ; ou variando-se o meio (ndice de refrao) que separa a objetiva da lmina, utilizando-
se, por exemplo, leo de imerso.
Quando o meio que separa a lmina da objetiva o ar, normalmente ocorrem desvios
do feixe luminoso em conseqncia da diferena de ndice de refrao (n) entre os dois meios
(vidro = 1,52 e ar = 1,00). Como resultado, uma menor quantidade de luz participa da
formao da imagem. O uso do leo de imerso (n = 1,52) contorna o problema
mencionado, uma vez que a semelhana entre os ndices de refrao do leo e do vidro
minimiza o desvio do feixe luminoso permitindo um maior aproveitamento da luz, o que
fornece, conseqentemente, uma imagem com maior riqueza de detalhes (Figura 2.1).
O leo de imerso usado apenas com a lente objetiva de 100x, tambm chamada
de objetiva de imerso e caracterizada por um anel preto. Aps o uso, o leo removido com
papel absorvente ou cotonete, embebidos em ter etlico.
Para cada objetiva do microscpio podemos calcular o limite de resoluo, para que
possamos escolher a objetiva adequada para cada estudo. Para exemplificar, calcularemos o
LR de uma objetiva de 40x, cuja abertura numrica 0,65:
LR = (0,61 x 0,55 m)/0,65
LR = 0,51 m
De acordo com os dados acima, somente pontos separados a uma distncia igual ou
superior a 0,51 m podero ser observados com nitidez atravs dessa objetiva.
Para a mesma objetiva exemplificada anteriormente, teremos, com a utilizao da luz
ultravioleta, um limite de resoluo igual a:
LR = (0,61 x 0,20 m)/ 0,65
LR = 0,19 m
Como pode ser notado, com o emprego da luz ultravioleta poderemos distinguir
pontos muito prximos.
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Abaixo esto apresentados alguns exemplos de limite de resoluo de sistemas
pticos importantes para estudos citolgicos:
LR do olho humano normal = 0,1 a 0,2 mm.
LR do microscpio ptico = 0,25 m.
LR do microscpio eletrnico = 2 a 5 .
Se associarmos estes valores aos nveis de organizao dos seres vivos, fica
evidenciada a importncia do uso microscpio para o estudo das clulas e suas estruturas.
Profundidade de campo
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observado quando se movimenta o micromtrico com a objetiva de 40x encaixada. Devido
pequena profundidade de campo dessa objetiva, um reduzido nmero de planos de um
objeto ser focalizado simultaneamente. Pequenos movimentos do micromtrico permitem a
focalizao de outros planos no observados anteriormente.
Na prtica, pode-se obter uma maior profundidade de campo utilizando-se objetivas
com menores aberturas numricas, ou diminuindo-se a abertura do diafragma, o que em
princpio envolve a reduo do ngulo do cone de luz que atravessa o sistema.
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Atividade 2
Objetivos:
1. Compreender os princpios de funcionamento do microscpio de luz: aumento,
poder de resoluo e profundidade de campo.
2. Relacionar a variao do limite de resoluo com as diferentes objetivas.
3. Relacionar a variao da profundidade de campo com o uso das diferentes lentes
objetivas.
d) Qual das combinaes de lentes fornece uma imagem com mais detalhes?
Justifique.
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Procedimento: (i) passe o pincel seco sobre um pedao de asa de borboleta e transfira as
esacamas que se soltarem para a lmina; (ii) coloque uma gota de gua com detergente sobre o
material e cubra-o com lamnula; (iii) observe o material ao microscpio e tente visualizar as
estrias longitudinais e transversais; (iv) aps a observao complete os itens abaixo:
40x 100x
400x 1000x
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3 Demonstrao da profundidade de campo utilizando gros de plen de Hibiscus sp.
Procedimento: (i) passe o pincel no pistilo (parte amarela) da flor de hibisco que se encontra
na bancada; (ii) com um conta-gotas, coloque uma gota de soluo salina sobre uma lmina,
passe o pincel com os gros-de-plen na gota, cobrindo-a com uma lamnula; (iii) observe este
material ao microscpio, centralize um gro de plen da cor amarelo brilhante e proceda a
observao utilizando as diferentes lentes objetivas; (iv) aps a observao, responda as
questes.
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3 Preparao de lminas e
Cortes histolgicos
Preparao de material biolgico para observao no
microscpio de luz
A) Fixao
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polissacardeos); aldedos (formaldedo, paraformaldedo e glutaraldedo), que so excelentes
fixadores de protenas; cido pcrico, cido crmico e bicloreto de mercrio (fixadores de
protenas).
B) Desidratao
Aps a fixao, o material deve ser lavado em gua corrente para remoo do
excesso de fixador. Em seguida, realiza-se a desidratao utilizando-se uma soluo
apropriada, como etanol ou acetona, em banhos sucessivos de concentraes crescentes. A
retirada de gua necessria para que o material utilizado na etapa de incluso penetre nas
estruturas do corte, possibilitando maior consistncia ao mesmo.
C) Diafanizao ou clarificao
Etapa utilizada para promover a retirada do lcool e permitir que a parafina penetre
nos tecido. Alm disso, remove gorduras dos tecidos, deixando-os translcidos. So utilizadas
substncias como o Xilol, benzeno ou tolueno, vrias vezes.
D) Incluso
E) Microtomia
F) Colorao
A colorao consiste numa etapa muito importante para a visualizao das estruturas
do tecido. Normalmente so utilizados corantes hidrossolveis, sendo necessria a remoo
da parafina ou resina da pea que foi preparada nas etapas descritas anteriormente e que
permanece na lmina de vidro.
Existem muitos tipos de corantes, mas de um modo geral eles diferenciam os
componentes cidos e bsicos das clulas e os componentes fibrosos da matriz extracelular.
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G) Montagem
Deve-se ter em mente que a figura que se v representa apenas uma seco do
objeto. Essa figura bidimensional, e as clulas tm trs dimenses. Por esse motivo, deve-se
fazer uma srie de cortes sequenciais e a partir deles, faz-se a reconstruo mental, por
superposio, da forma em 3 dimenses.
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Figura 3.1 Interpretao de cortes.
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Atividade 3
Objetivos:
1. Mostrar como se faz coleta e fixao de material
2.Treinar a obteno de cortes delgados mo livre.
3.Distinguir os trs tipos de cortes.
4.Observar clulas vegetais e diferenci-las das clulas animais.
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Esquematize agora um grupo de clulas epidrmicas nos cortes paramtrico, transversal e
longitudinal, utilizando as objetivas 10 e 40 x.
5 Baseado em seus esquemas, indique como voc poderia distinguir os cortes paradrmicos,
transversal e longitudinal, em uma observao microscpica.
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4 Mtodos Citoqumicos e
Organizao Molecular
Importncia da colorao e identificao dos
componentes qumicos da clula
Citoqumica
A citoqumica uma rea da biologia celular e estrutural dedicada aos estudos dos
mtodos de colorao dos tecidos e dos constituintes celulares ou subcelulares, preocupando-
se no somente com os princpios qumicos das reaes de colorao, mas tambm com os
procedimentos protocolares para obteno de preparados a serem avaliados ao microscpio.
Muitos so os elementos que podem ser estudados citoquimicamente, tanto para a pesquisa
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cientfica como para fins de diagnstico patolgico. Dentre eles, podemos citar, os cidos
nuclicos, os polissacardeos, os lipdios, as protenas, alguns ons e enzimas.
Para que essa tcnica tenha sucesso so necessrios que sejam cumpridos alguns
princpios bsicos: a) o produto a ser pesquisado deve ser insolvel, o que evita a sua difuso
para outras regies das clulas e dos tecidos; b) indispensvel que o produto da reao
apresente cor ou, pelo menos, apresente-se na forma de um precipitado insolvel no local da
reao; c) a reao colorida desenvolvida deve ser especfica, isto , s deve ocorrer com o
composto pesquisado; d) a reao tambm deve ser sensvel para detectar quantidades muito
pequenas do produto colorido formado.
As reaes citoqumicas podem ser divididas em 3 tipos diferentes, dependendo da
natureza da reao qumica envolvida: (a) por ligaes eletrostticas; (b) por ligaes
covalentes; (c) por interaes hidrofbicas.
A) Ligaes Eletrostticas
Neste caso, um corante ionizado em uma soluo reage com um substrato de carga
inica oposta. Assim, podemos enumerar dois fenmenos citoqumicos: acidofilia e basofilia.
Entende-se por acidofilia como o fenmeno citoqumico no qual um substrato carregado
positivamente, chamado de substrato catinico, reage eletrostaticamente com um corante
carregado negativamente, dito aninico. Por ligao inica, esses dois elementos reagem e
formam um composto colorido, evidenciado ao microscpio de luz. Como exemplos de
corantes aninicos tm-se o xylidine ponceau, o Sirius Red, o Fast Green e a eosina.
J no fenmeno da basofilia, o substrato carregado negativamente chamado de
substrato aninico, reage eletrostaticamente com um corante carregado positivamente, dito
catinico. Como exemplo de corantes catinicos pode-se citar os corantes Azul de Toluidina,
Azul de metileno e o Azul de Alcien. A hematoxilina, embora no seja um corante, pode ser
considerada um complexo de corantes que comportam-se como corante catinico. Esses
corantes reagem com os elementos ionizveis nos tecidos que apresentam cargas negativas,
os grupamentos aninicos.
Uma das tcnicas de colorao, muito utilizada na citologia e na histologia animal, a
colorao pela hematoxilina e eosina (HE). A hematoxilina, por ser um corante bsico, cora o
ncleo (cor azul), devido aos cidos nuclicos presentes. A eosina por ser um corante cido
cora o citoplasma (cor rosa) dada a predominncia de protenas bsicas nesta regio celular.
Este tipo de colorao, envolvendo a afinidade cido-base, embora facilite o estudo da
morfologia celular, no possibilita maiores informaes a respeito da composio qumica das
estruturas coradas.
B) Ligaes Covalentes
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mediadas por ligaes covalentes so a reao de Feulgen, para DNA e o teste do cido
Peridico Schiff (PAS), para polissacardeos neutros. Ambas as reaes so obtidas a partir de
um mesmo reagente chamado de Reativo de Schiff, que consiste num leucoderivado do
corante Fucsina Bsica.
A reao de Feulgen utiliza como pr-tratamento do material uma hidrlise cida com
cido clordrico (HCl). Essa hidrlise remove da molcula de DNA as bases pricas, adenina e
guanina, processo chamado de depurinao do DNA, que consequentemente abre o anel
liberando grupos aldedos. No tratamento com o reativo de Schiff ocorre a reao radicais
aldedos-reativo de Schiff promovendo uma colorao rsea ou magenta ou bonina.
O teste de PAS muito utilizado para avaliaes citoqumica de polissacardeos
neutros, como o glicognio, o amido e a celulose. Ele utiliza como pr-tratamento do material
o cido peridico (HIO4). Esse cido oxida os grupos hidroxila livres em dois tomos de
carbono adjacentes (grupos gliclicos, chamados de vic-glicol ou amino glicol, dependendo do
tipo de carboidrato), produzindo radicais aldedos, ou seja, h quebra da ligao entre os
carbonos e converso aldedo. Os radicais aldedos reagem com o reativo de Schiff
promovendo uma colorao rsea ou magenta ou bonina.
Na tcnica de PAS, como vrios carboidratos respondem positivamente reao de
PAS, pode utilizar reaes complementares para se fazer a distino entre eles. A distino
entre glicoprotenas neutras e glicoprotenas cidas e de outros glicoconjugados, por exemplo,
feita associando-se tcnica PAS com a tcnica de Alcien Blue (azul de Alcien). A
positividade ao Alcien Blue indicada pelo aparecimento de componente corado de cor azul
celeste. O Alcien Blue, quando preparado em diferentes pHs, marca componentes celulares
ditintos: no pH 0,5 evidencia glicoconjugados cidos sulfatados e no pH 2,5 glicoconjugados
cidos sulfatados, glicoconjugados cidos carboxilados e glicoprotenas cidas.
Vale ressaltar que a tcnica de Feulgen semelhante do PAS, ou seja, ambas
utilizam o reativo de Schiff, aps exposio dos radicais adedos. A diferena que na tcnica
do PAS usa-se o cido peridico enquanto na de Feulgen usa-se o cido clordrico para
quebrar as molculas pesquisadas.
C) Interaes Hidrofbicas
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Atividade 4
Objetivos:
1. Conhecer os diferentes tipos de corantes.
2. Observar o material biolgico antes e aps a colorao.
3. Relacionar a constituio qumica da clula e a utilizao de corantes cidos e
bsicos.
4. Justificar a importncia dos corantes na microscopia de luz.
a) Nesta lmina podemos observar alguns detalhes das clulas da mucosa. Por que
nem todas as estruturas citolgicas puderam ser vistas?
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b) Houve dificuldade na observao das clulas antes da colorao? Justifique.
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2 Sobre a sua bancada encontram-se razes de cebola coradas com reativo de Schiff
(Reao de Feulgen). O que evidenciado pelo reativo de Schiff nas clulas dessas
razes? Qual o princpio dessa reao? Compare a reao de Feulgen com o teste de
PAS.
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a) Qual a cor predominante no citoplasma das clulas coradas e qual o corante
responsvel?
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5 Clulas Procariotas e
Eucariotas
Diferenciao das clulas procariotas e eucariotas sob o
microscpio de luz
A clula a unidade estrutural e funcional de todo ser vivo. Sabemos que o universo
biolgico constitudo por diferentes grupos de organismos que so classificados e ordenados
em gneros, famlia, ordem e reinos. Encontramos, portanto, uma diversidade de tipos
celulares nesses organismos. A Biologia Celular atua identificando tipos celulares e seus
componentes, compreendendo a organizao estrutural desses elementos e de suas
respectivas funes. Apesar dessa diversidade, apenas duas categorias celulares podem ser
reconhecidas: clulas procariotas e clulas eucariotas. Estas classes de clulas so
diferenciadas por seu tamanho e pelos tipos de estrutura interna e organelas que as
compem.
As clulas procariotas so estruturalmente mais simples e so representadas por
todos os tipos de bactrias e algas azuis que constituem o Reino Monera. Todos os outros
tipos de organismos protistas, fungos, plantas e animais so constitudos por clulas
eucariotas, mais complexas.
Ao microscpio ptico, o que mais chama a ateno a grande diferena de tamanho
entre as clulas eucariticas e procariticas tpicas. Por vezes pode-se observar clulas
procariticas, como as cianofceas, cujo tamanho est prximo ou mesmo maior que
algumas clulas eucariticas. Entretanto, a regra que os procariontes geralmente tm
clulas muito menores que os eucariontes.
Outra diferena bem marcante a presena do ncleo nos eucariontes e sua
ausncia nos procariontes. Internamente, no s a presena do ncleo difere os dois tipos de
clulas, mas tambm a intensa compartimentalizao das diversas funes celulares em
organelas envoltas por membranas o sistema de endomembranas caracterstico das
clulas eucariontes. O sistema de endomembranas de difcil visualizao ao microscpio
ptico, sendo observado somente ao microscpio eletrnico. Logo, utilizando microscpios
comuns, a caracterstica mais notvel para diferenciar os dois tipos de organizao celular a
observao de presena/ausncia de ncleo.
Nesta aula iremos ver as caractersticas gerais dos dois tipos celulares, observando as
semelhanas e divergncias referentes sua organizao. Posteriormente iremos observar
clulas eucariotas e procariotas no microscpio de luz a fim de diferenci-las.
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antes e do sufixo karyon que significa parte central ou ncleo, portanto tem o significado
de anterior ao ncleo. Sem o envoltrio nuclear, o material gentico dessas clulas ocupa
um espao denominado nucleide e est em contato direto com o citoplasma ao seu redor. O
DNA das clulas procariotas pode atingir comprimento entre 0,25mm a 3mm sendo
suficiente para codificar centenas e milhares de protenas necessrias para seu
desenvolvimento. Alm disso, o DNA organizado como um simples cromossomo circular,
constituindo um DNA nu, sem associao com protenas.
A organizao do citoplasma das clulas procariotas bastante simples: ele
desprovido de estruturas membranosas, as organelas. No citoplasma esto presentes apenas
os ribossomos, estruturas supramoleculares constitudos de protenas e RNA, que constituem
as bancadas para a sntese protica, e o nucleide.
As clulas procariotas so envoltas por membranas biolgicas, tridimensionais e por
paredes celulares rgidas, as quais protegem a delicada forma de vida presente em seu
interior. Em relao diviso celular, os procariotos tm um mecanismo simples: o DNA do
nucleide duplicado pela maquinaria protica, as duas cpias so separadas unicamente e
de forma precisa atravs do crescimento de uma membrana celular divisria.
Os procariotos so seres assexuados, possuem uma nica cpia de seu nico
cromossomo e no produzem gametas. Logo, eles no tm fertilizao verdadeira. No
entanto, alguns so capazes de trocar fragmentos de DNA entre cromossomos de clulas
diferentes, processo este denominado conjugao.
No que diz respeito motilidade, os procariotos possuem flagelos, um filamento
proticos fino que se projeta para fora da clula sendo capaz de girar. A rotao do flagelo
exerce presso no fluido circundante e fora a clula a propulsionar-se atravs do meio,
locomovendo o organismo.
Do ponto de vista evolutivo os procariotos so os seres mais antigos do planeta.
Acredita-se que durante 2 bilhes de anos eles foram os nicos residentes vivos da Terra. Os
primeiros eucariotos teriam surgido de procariotos, da as semelhanas encontradas entre
esses dois tipos de clulas, as quais sero descritas a seguir.
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gentico est associado a protenas e envolto por uma estrutura membranosa complexa
constituindo o ncleo da clula. A palavra eucarioto, portanto, tem significado de ncleo
verdadeiro em funo do prepfixo eu que significa verdadeiro, seguido do sufixo karyon. O
DNA de uma clula eucariota muito mais complexo e extenso do que de uma clula
procariota, podendo atingir metros de comprimento alm de ser distribudo em numerosos
cromossomos.
Analisando superficialmente uma micrografia eletrnica de uma clula eucariota
observa-se que seu citoplasma preenchido por uma diversidade de estruturas que
constituem as organelas membranosas. As mitocndrias so as organelas mais notveis no
citoplasma e esto presentes essencialmente em todas as clulas realizando a respirao
celular, onde energia qumica na forma de ATP produzida a partir da oxidao de molculas
orgnicas. Os plastdeos constituem outro grupo de organelas membranosas que esto
presentes apenas em cianobactrias e clulas vegetais. nos cloroplastos que ocorre a
fotossntese processo no qual a energia solar transformada em energia qumica atravs da
fixao de carbono e liberao de oxignio. Alm dessas duas organelas membranosas o
citoplasma de uma clula eucariota constitudo por uma rede de endomembranas da qual
fazem parte o retculo endoplasmtico (liso e rugoso), o complexo de Golgi, endossomos e
lisossomos. Juntas, essas organelas so responsveis pela produo, ordenao, modificao e
transporte de molculas biolgicas a partir de em produto bruto. O destino final dessas
molculas pode ser organelas celulares, membrana plasmtica, meio extracelular ou
lisossomos. Os lisossomos constituem organelas amorfas cuja funo a digesto intracelular.
Alm das organelas citadas at ento uma clula eucariota possui em seu citoplasma
inmeras vesculas membranosas simples que possuem formas, tamanhos e funes variadas.
Entre elas citam-se vesculas envolvidas no transporte de material de uma organela a outra e
vesculas enzimticas, como os peroxissomos, responsveis pela degradao do perxido de
hidrognio. Neste sentido as membranas presentes nas organelas das clulas eucariotas
funcionam como divisrias no citoplasma permitindo a compartimentalizao e especializao
de atividades celulares.
O citoplasma da clula eucariota se comporta como um gel aquoso onde est contido
um gama de molculas sendo o local de ocorrncia de muitas reaes qumicas fundamentais
a existncia da clula. Ele contm ainda tbulos e filamentos que so ancorados em uma das
extremidades das membranas que se irradiam por toda a clula, constituindo o citoesqueleto.
A rede interna de filamentos do citoesqueleto constituda por protenas e auxiliam na
estruturao e manuteno da forma da clula.
33
Atividade 5
Objetivos:
1. Diferenciar clulas procariotas e eucariotas.
2. Diferenciar clulas eucariotas animais de clulas eucariotas vegetais.
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4 Quais as caractersticas observadas nas clulas das bactrias, do levedo de po e
do catafilo? Como voc diferenciaria estas clulas atravs de suas observaes?
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6 A Clula Vegetal
Parede Celular, Vacolo e Plastdios
A biologia celular das plantas essencialmente similar dos animais, ou seja, a clula
a unidade estrutural do vegetal. No entanto, a clula vegetal apresenta alguns aspectos
especiais, como parede celular, mais ou menos rgida, envolvendo o protoplasto; um ou mais
vacolos, que so cavidades cheias de lquido que se encontram no citoplasma; e organelas
exclusivas, os plastdios, relacionados com os processos de armazenamento e fotossntese.
Nesta aula iremos ver os aspectos gerais destes trs constituintes particulares da clula
vegetal.
Parede Celular
36
Vacolo
Plastdios
A) LEUCOPLASTOS
37
1 amiloplastos, armazenamento de amido, presentes em grande quantidade em
caules e razes, alm de serem encontrados em folhas, armazenando o excedente de
carboidrato oriundo da fotossntese;
2 proteoplastos, armazenamento de protena, e
3 elaioplastos, armazenamento de lipdios, encontrados em clulas de frutos e
sementes;
B) CROMOPLASTOS
Cloroplasto
Estioplasto
Cromoplasto
Proplastdio
Elaioplasto
Amiloplasto
oooo
C) CLOROPLASTOS
38
dispem paralelamente parede celular, podendo reorientar-se na clula sob influencia da
luz.
A estrutura interna dos cloroplastos caracterizada pela ocorrncia do estroma, o
qual atravessado por um sistema de membranas na forma de sacos achatados denotados
tilacides. Acredita-se que os tilacides constituam um nico sistema interconectado. O
conjunto de tilacides empilhados denominado grana, sendo que os diferentes granum
(plural de grana) so interligados pelos tilacides que atravessam o estroma. Os carotenides
e as clorofilas esto inseridos na membrana do tilacide.
Os cloroplastos no so apenas o stio da fotossntese, mas tambm esto envolvidos
na biossntese de aminocidos e cidos graxos, e no armazenamento temporrio de
carboidratos como o amido.
39
Atividade 6
Objetivos:
1 . Diferenciar clulas de diferentes tecidos com base em suas paredes celulares.
2 .Observar a presena de substncias no vacolo.
3 . Observar incluses slidas no vacolo.
4 . Observar os cloroplastos.
40
3 Observao de amiloplastos evidenciados com lugol.
Procedimento: a) Faa cortes finos no tubrculo de Solanum tuberosum L. (batata); b)
Coloque os cortes em placa de Petri com gua e retire o excesso de plastdios com o
auxlio do pincel; d) Coloque o corte lavado sobre uma gota de lugol e cubra-o com
uma lamnula; e) Observe ao microscpio utilizando a segunda objetiva a seco.
Plastdio (s)
Classificao Esquema
presente (s)
Batata
Tomate
Imaturo
Corte Obsevado
Tomate
Maduro
Cenoura
Espada de
So Jorge
4 O que voc observou nos cortes onde se utilizou o lugol? (Espada de So Jorge,
batata e tomate verde).
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42
7 Permeabilidade Seletiva das
membranas
Introduo
43
Figura 7.1 Representao esquemtica da estrutura em mosaico fluido da membrana
celular.
44
Atividade 7
Objetivos
1. Descrever o efeito e o mecanismo de ao da acetona e da temperatura elevada
sobre a permeabilidade das membranas celulares.
2. Relacionar as alteraes de formatos das clulas com a concentrao do meio
extracelular e o fenmeno de osmose.
3. Observar e justificar a resistncia de clulas vegetais em meios hipotnicos.
45
- As clulas de levedo so esfricas ou ovaladas e podem apresentar brotamentos
(uma clula pequena unida a outra maior) caractersticos de seu processo de
reproduo. Atente para a colorao destas clulas.
Procedimento 3: Monte outra lmina colocando, com auxilio de pipetas uma gota da
suspenso de levedo do tubo nmero 2 em uma das extremidades da lmina, uma gota
da suspenso de levedo do tubo nmero 3 na outra extremidade. Ao utilizar as pipetas
cuidado para que no as misture. Cubra cada gota com uma lamnula. Observe ao
microscpio com a lente objetiva de 40X, regulando a abertura do diafragma. Aps a
observao responda as questes a, b, c e d.
Procedimento 1: Coloque sobre uma lmina, com auxlio de uma pipeta de Pasteur,
uma gota de suspenso de sangue em soluo isotnica (NaCl 0,9%) e cubra o material
com uma lamnula. Observe ao microscpio tendo o diafragma inicialmente fechado.
Ao utilizar a objetiva de 40X, regule a abertura do diafragma de modo a obter uma
imagem ntida. Observe a forma das hemcias.
Procedimento 2: Monte outra lmina colocando, com auxilio de pipetas uma gota da
suspenso de sangue em soluo hipertnica (NaCl 1,5%) em uma das extremidades da
46
lmina e uma gota de sangue em soluo hipotnica (NaCl 0,6%) na outra
extremidade. Ao utilizar as pipetas, cuidado para que no as misture. Cubra cada gota
com uma lamnula. Observe ao microscpio com a lente objetiva de 40X, regulando a
abertura do diafragma. Aps a observao responda as questes a, b e c.
47
Procedimento 1: Monte uma lmina colocando uma gota de gua em uma extremidade
e uma gota de soluo salina (NaCl 2%) na outra extremidade. Retire com auxlio de
uma pina alguns fragmentos da epiderme inferior de uma folha de Tradescantia.
Coloque os fragmentos retirados em cada uma das gotas sobre a lmina e cubra o
material com a lamnula. Observe ao microscpio, utilizando a lente objetiva de 10X.
Inicie a observao com o material montado em gua.
c) O que ocorreu com as clulas aps a substituio da soluo salina por gua
destilada? Explique.
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f) O que voc esperaria que ocorresse com clulas animais, como as hemcias, caso
fossem colocadas em gua destiladas?
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48
8 Movimentos Celulares
Princpios e exemplos de movimentos celulares
49
plasmtica para frente, formando pseudpodes, a adeso dos pseudpodes ao substrato por
protenas transmembrana e, por ltimo, a retrao do citoplasma, pela interao da actina
com a miosina, deslocando-se como um todo. O movimento amebide tem como
conseqncia o deslocamento da clula e tambm possibilita a fagocitose.
50
flagelos de eucariotos, os microtbulos so arranjados em um padro caracterstico de 9 +
2, no qual um par central de microtbulos simples circundado por nove duplas perifricas
de microtbulos. Os clios e flagelos originam-se a partir de corpsculos basais, constitudos
por microtbulos dispostos em um arranjo idntico ao dos centrolos (9 trincas perifricas,
sem microtbulos centrais).
Enquanto os microtbulos e os filamentos de actina ocorrem em todas as clulas
eucariticas, no citoesqueleto de metazorios ocorre um terceiro tipo de filamentos, os
filamentos intermedirios. Mesmo nestes organismos, h tipos celulares que tambm no
possuem filamentos intermedirios. Estes filamentos so compactos, com espessura por volta
de 10 nm e formados por uma variedade de protenas fibrosas como, por exemplo, a
queratina. Entretanto, os filamentos intermedirios, aparentemente, no participam de
movimentos celulares, eles so particularmente abundantes no citoplasma de clulas que
esto sujeitas ao estresse mecnico e sua principal funo parece ser conferir resistncia s
clulas e tecidos.
51
Atividade 8
Objetivos
1. Identificar as estruturas responsveis pelo movimento de diferentes tipos celulares
na microscopia de luz
2. Relacionar as estruturas responsveis pelos movimentos com as funes que
desempenham em diferentes tipos celulares.
52
3 Observao do movimento de flagelo em clulas de espermatozides de mamfero.
Procedimento: Coloque sobre a lmina uma gota de smen e cubra com lamnula.
Comece a focalizar com a lente objetiva de 10x, v at a de 40x e responda a prxima
questo. Esquematize um espermatozide, indicando a cabea e a cauda (flagelo)
53
b) Qual a importncia da mobilidade para os organismos unicelulares?
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9 Ncleo
Principais aspectos estruturais do ncleo
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Nmero tamanho, forma e posio dos ncleos
Em geral o nmero tamanho, forma e posio dos ncleos variam entre os tipos
celulares, estando relacionados atividade metablica da clula. Clulas que apresentem
intensa atividade de sntese protica e/ou grandes volumes podem possuir mais de um ou
ncleos maiores. A diferena de tamanho do ncleo pode ser devido duplicao ou
descondensao da cromatina durante o ciclo celular.
Algumas clulas altamente especializadas, como as hemcias de mamferos so
anucleadas quando em seu estgio final de maturao. Por este motivo estas clulas so
incapazes de se reproduzir, o que determina sua curta vida mdia (em torno de 120 dias).
Nos diferentes tipos celulares normalmente o ncleo ocupa posio central no
citoplasma, entretanto em certos casos ele pode ser deslocado do centro, em decorrncia do
acumulo de materiais no citoplasma ou ao grande tamanho de certas organelas como o
vacolo em clulas vegetais.
Normalmente a forma do ncleo acompanha a forma da clula, esfrico em clulas
cbicas e alongado em clulas cilndricas. Em leuccitos observamos ncleos multiformes e
irregulares. Por exemplo, os neutrfilos apresentam ncleos polimrficos com dois a cinco
lbulos ligados por finas pontes cromatdicas. Em moncitos os ncleos variam de ovide a
reniforme de acordo com o estgio de maturao da clula.
56
Atividade 9
Objetivos
1. Observar ao microscpio de luz, a forma, o tamanho, a posio e o nmero de
ncleos em diferentes tipos celulares.
2. Observar ao microscpio de luz, nuclolos em diferentes tipos celulares.
3. Relacionar o grau de condensao da cromatina com a atividade metablica das
clulas observadas.
4. Observar a estrutura do ncleo e do nuclolo em eletromicrografias.
57
B) Fgado de Rato (hepatcitos)
Esquematize um hepatcito em um aumento final de 400X.
58
10 Ciclo Celular - Mitose
Movimentos dos cromossomos durante a mitose
Mitose
59
Anfase: ocorre rompimento de centrmeros e separao de cromossomos em dois
conjuntos idnticos, e a posterior migrao destes para os plos opostos da clula.
Telfase: inicia quando cada um dos conjuntos cromossmicos chega aos plos do
fuso. Esta fase caracteriza-se pela reconstituio dos dois ncleos filhos, que assumem aos
poucos um aspecto interfsico.
Concomitante s duas ltimas etapas inicias-se a citocinese, diviso do citoplasma.
Esta fase difere de maneira acentuada entre clulas animais e vegetais. Nas clulas animais a
separao das clulas filhas ocorre por um mecanismo contrtil, no qual participam
microfilamentos de actina e miosina. Nas clulas vegetais a citocinese comea com o
aparecimento do fragmoplasto, que formado por componentes do fuso de diviso e por
vesculas oriundas do complexo de Golgi. A fuso destas vesculas determina a formao da
placa celular, que separa as clulas filhas, com a liberao de seu contedo para a formao
da matriz pctica.
60
Atividade 10
Objetivos:
1. Caracterizar as fases da mitose em raiz de cebola;
2. Identificar os diferentes tipos de cromossomos metafsicos;
61
b) Em que fase do ciclo celular ocorre a replicao do DNA?
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e) Por que se diz que a mitose um processo conservativo, sob o ponto de vista
gentico?
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f) O que o centrmero?
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h) O que caritipo?
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i) Qual a importncia do estudo do caritipo?
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11 Meiose
Movimentos dos cromossomos durante a meiose
As fases da Meiose
64
seguinte, alm de resultar na segregao dos homlogos, na anfase. Ao
microscpio de luz no possvel ver as quatro cromtides dos homlogos
emparelhadas, uma vez que esto intimamente associadas e pouco condensadas.
C) Paquteno os cromossomos encontram-se mais condensados e totalmente
emparelhados e o evento mais importante dessa fase a permuta ou crossing-
over, no qual cromtides homlogas trocam pedaos equivalentes, resultando em
uma nova combinao de genes dos pais.
D) Diplteno a separao dos cromossomos homlogos, iniciada no final do
paquteno, continua neste estgio, quando podem ser observados os quiasmas,
ponto nos quais cromtides de cromossomos homlogos se entrelaam. Os
quiasmas correspondem evidncia citolgica do crossing-over ocorrido na fase
anterior.
E) Diacinese os cromossomos homlogos, ainda unidos, continuam se condensando
e os quiasmas deslocam-se para as extremidades dos cromossomos, podendo
diminuir em nmero.
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Segunda diviso meitica
66
Atividade 11
Objetivos:
1. Preparar lminas a partir de anteras de Lrio (Lilium sp.) e identificar as diferentes
fases da meiose em clulas me do gro de plen
2. Relacionar o processo meitico com a reproduo sexuada.
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b) Desenhar as diferentes fases da meiose, destacando as alteraes celulares mais
relevantes.
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g) Considerando uma clula diplide em G1 apresenta nmero de cromossomos 2n =
2x, contedo de DNA = 2C e 1 cromtide por cromossomo, d o nmero de
cromtides por cromossomo, o contedo de DNA e o nmero de cromossomos por
clula em G1, G2 e nas diferentes fases da meiose.
69
12 Microscopia Eletrnica
Princpios e Funcionamento do Microscpio Eletrnico
70
Figura 12.1 Representao da estrutura de um MET.
O feixe de eltrons emitido por um filamento, ou por um emissor que age como
ctodo, situado no topo de uma coluna cilndrica com cerca de 2m de altura. Quando
submetida alta voltagem, a fonte de eltrons aquecida emitindo os eltrons que so
acelerados por meio de diferena de potencial eltrico. Dentro da coluna criado um sistema
de alto vcuo evitando a coliso entre eltrons e as molculas de ar e, consequentemente, a
disperso dos eltrons. Alm disso, um sistema de lentes eletromagnticas est disposto no
interior da coluna funcionando lente condensadora dos feixes, concentrando-os e
direcionando-os para o plano onde se localiza o material. A imagem ampliada do espcime
em observao gerada pelas lentes intermedirias que funcionam como uma lente objetiva;
posteriormente um terceiro conjunto de lentes eletromagnticas, denominadas projetoras,
atua como lentes oculares ampliando mais uma vez a imagem. Por fim, a imagem final
projetada em anteparo fluorescente, uma placa fotogrfica ou em um monitor.
A imagem gerada no MET depende na disperso diferencial de eltrons que, ao se
chocar com os ncleos dos tomos do espcime, se dispersam para fora da abertura das
lentes objetivas. A conseqncia da disperso a formao de uma imagem com pontos
eletrodensos e eletrolcidos. Os pontos eletrodensos so observados em funo de elementos
como ferro, smio, chumbo e ouro, enquanto pontos eletrolcidos so observados quando os
eltrons encontram elementos como hidrognio, carbono, nitrognio ou oxignio. Os materiais
biolgicos so ricos nesses ltimos elementos, portanto geram imagem eletrolcidas, sendo
necessrio contrastar o material com metais pesados, antes da sua observao no MET, a fim
de conseguir um bom contraste na imagem final observada.
71
Diante dessas informaes possvel montar um quadro comparativo abordando as
principais diferenas entre as microscopias ML e MET quanto aos aspectos de funcionamento
e formao da imagem como mostrado a seguir:
Microscopia Eletrnica
Aspectos Microscopia de luz
de Transmisso
Fonte Luz visvel Feixe de eltrons
Lentes Vidro Eletromagnticas
Limite de Resoluo 200 nm 0,2 nm
Formao da Imagem Absoro Eltron-opacidade
72
superfcie do mesmo com grande nitidez de detalhes. Logo, a MEV amplamente utilizada
para examinar superfcies de objetos quaisquer, seja biolgico ou no, fornecendo imagens
tridimensionais dos mesmos. Alm disso, MEV pode ser aplicado em estudos de objetos
grandes, inteiros, como vermes, insetos ou cabea de um animal; em clulas livres como gro
de plen, bactrias, vrus; em tecidos animais e vegetais; em fragmentos geolgicos para
estudos de granulometria e textura de solos, ou objetos inanimados como prego, fibras, etc..
A estrutura de um MEV bem diferente de um MET como pode ser observado na
figura 12.3:
73
A MEV difere em vrios aspectos da MET apesar de em ambos os casos a imagem
ser formada a partir da interao de eltrons com lentes eletromagnticas. As principais
diferenas esto relacionadas com a formao da imagem, como pode ser observado na
figura 12.4.
74
tecido ou material a ser analisado dever ser cortado de modo que tenha no mximo 1mm de
espessura, facilitando a etapa de fixao (o ideal so amostras com 1mm).
Aps a coleta o material deve ser imediatamente fixado. Esta etapa critica para a
MET, pois uma m fixao pode danificar organelas celulares e prejudicar as anlises. Os
fixadores que so utilizados na ME so os aldedos (gluteraldedo, para-formaldedo,
gliceraldedo, etc.) e o tetrxido de smio. comum realizar duas fixaes, a primeira com
uma combinao de aldedos (para-formaldedo e glutaraldedo), combinando a rapidez de
penetrao do formol nas clulas com a capacidade de preservao das protenas e estrutura
celular do gluteraldido; e a segunda com tetrxido de smio, este penetra na clula
lentamente, reage com os carboidratos e lipdeos preservando a membrana plasmtica. Alm
disso, o smio um metal pesado sendo capaz de dispersar os eltrons aumentando o
contraste da amostra na ocasio da observao no MEV.
Uma vez o material fixado deve-se realizar a desidratao no mesmo j que o
funcionamento do ME (vcuo, eltrons, etc) requer amostras sem umidade. A desidratao
realizada atravs de sries alcolicas ou acetnicas onde a gua das clulas e tecidos
lentamente substituda por um solvente.
Como a MET requer amostras extremamente finas o material deve ser incluso em
resinas para permitir os cortes ultrafinos sem danificar a amostra. As principais resinas
utilizadas neste processo so as plsticas, de epxi (Epon ou araladite) ou Spurr e as acrlicas
(LRWhite). Durante a incluso o liquido utilizado na desidratao substitudo pela resina, de
forma que a resina ocupe todos os espaos vazios da clula, proporcionando um corte
perfeito.
Aps o emblocamento na resina, realizado em formas de silicone ou suportes de
plstico, o material deve ser cortado em um ultra-micrtomo. As sees obtidas com a ultra-
microtomia so realizadas com lminas de vidro ou diamante de forma que sua espessura
no ultrapasse 100m. Os cortes obtidos so posteriormente coletados com telinhas de liga
metlica que fazem a funo da lmina na ML. Em geral as telinhas so confeccionadas com
cobre, ouro ou nquel e possuem 3 mm de dimetro.
Uma vez que a amostra est na telinha necessrio realizar a contrastao, etapa
que pode ser relaciona com a colorao na ML. A contrastao da amostra permite melhor
distino dos componentes celulares em funo da diferenciao de elementos eletrodensos e
eletrolcidos gerando grande riqueza de detalhes na imagem. Nesta etapa utiliza-se acetato
de uranila ou citrato de chumbo, metais pesados que se ligam as macromolculas fornecendo
densidade atmica necessria para dispersar os raios de eltrons.
A preparao de amostras para o MEV um pouco mais simples que para MET j
que no necessrio fazer cortes no material. O material a ser fixado pode ter mais que
1mm de espessura recomendando-se no mximo 3 cm em funo da distncia de trabalho
do MEV. A fixao realizada semelhana do MET com uma fixao primria em aldedos
e secundria no tetrxido de smio. Neste caso o smio usado apenas para aumentar a
condutividade dos eltrons na superfcie das amostras.
75
Aps a fixao faz-se o processo de desidratao do material com sries de lcool ou
acetona. Posteriormente o material levado a um aparelho de ponto crtico onde todo o
solvente retirado, deixando o material totalmente seco, sem umidade, semelhante a uma
esponja. O material seco montado em suporte especial para o MEV denominado stub.
Segue a impregnao da superfcie do material com banho de ouro, facilitando a conduo de
eltrons e a amostra est pronta para ser visualizada no MEV.
Microscopia Eletrnica de
Microscopia Eletrnica de Varredura
Transmisso
Fixao com aldedo
Ps-fixao com tetrxido de smio
Desidratao em srie alcolica ou acetnica
Incluso do material em resinas Secagem especial em ponto crtico
Ultra-microtomia para obteno de cortes Banho de ouro na superfcie do material a
ultrafinos (< 100m de espessura) ser analisado
Contrastao com metal pesado Sem contrastao
76
Atividade 12
(D)
78