VDRL

Antígeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sífilis en Suero sin

inactivar, en Plasma y L.C.R. (no requiere reconstitución).

INTRODUCCIÓN:

La Sífilis es una enfermedad generalizada, producida por la bacteria treponema

pallidum, transmitida habitualmente por contacto sexual.

El diagnóstico descansa en la serología; los métodos determinan dos clases de

anticuerpos:

1) Tipo “cardiolipina” no treponema e inespecíficos, y

2) Los antitreponemas específicos.

La facilidad para su determinación ha hecho que los del tipo cardiolipina se

utilicen universalmente en las exploraciones iniciales, ya sean exámenes
individuales o encuestas de población; la técnica más comúnmente empleada
es la llamada VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) que determina la
floculación en placa (cuantitativa) del antígeno con cardiolipina y lecitina.

Se encuentran las siguientes presentaciones para la prueba:

• Equipo para 500 pruebas

• Equipo para 300 pruebas
• Equipo para 200 pruebas
• Equipo para 100 pruebas
• Equipo para 50 pruebas.

Reactivos y Material Proporcionado:

1) Antígeno en suspensión estabilizado (VDRL)

2) Control Positivo
3) Control Negativo
4) Aguja No. 21 sin bisel
5) Pipetas desechables (únicamente para presentaciones de 50 y 100
pruebas)

Estabilidad y almacenamiento del reactivo.

El antígeno del VDRL y los Sueros Controles son estables hasta su fecha de
caducidad indicada en la etiqueta cuando se almacena de 2 a 8oC). No se debe
de congelar.
Material y Equipo necesario:

1) Placa cóncava (indispensable)

2) Agitador mecánico
3) Cronómetro
4) Microscopio

Obtención de la muestra:

• Obtener 3.0 ml de sangre por punción venosa.

• Centrifugar y separar el suero.

Método Cualitativo:

1. En un anillo de la placa cóncava depositar 0.05 ml de suero

problema.
2. En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y
en otra por separado una gota de control negativo, extender sobre
la superficie del anillo.
3. Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado
previamente resuspendido en cada una de las muestras utilizando
la aguja No. 21 sin bisel.
4. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm
DURANTE 4 MINUTOS. Las pruebas realizadas en un clima
extremadamente seco puede provocar la evaporación de las
muestras, por lo tanto, la placa en rotación puede ser cubierta con
una tapa de caja petri humedecida previamente con una gasa.
5. Leer inmediatamente al microscopio con Objetivo y Ocular 10 X.

Interpretación:

Control Positivo: Presencia de floculación mediana o grande.

Control Negativo: Ausencia de floculación.

Método Cuantitativo:

1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.

2. Colocar en una gradilla 6 tubos de 12 x 75 mm y numerarlos
3. Agregar a cada uno 0.5 ml de solución salina 0.9%
4. Depositar 0.5 ml de suero al tubo No. 1 y mezclar
5. Pasar 0.5 ml del tubo No. 1 al tubo No. 2 y mezclar
6. Pasar 0.5 ml del tubo No. 2 al tubo No. 3 y mezclar
7. Continuar esta operación hasta el tubo No. 6
8. Depositar 0.05 ml de cada una de las diluciones sobre los diferentes
anillos de la placa cóncava
9. Añadir una gota de antígeno en suspensión estabilizado (VDRL)
utilizando la aguja No. 21 sin bisel a cada una de las diluciones
 10. Colocar la placa sobre el agitador mecánico a 180 rpm durante 4
minutos
11. Leer al microscopio con Objetivo y Ocular 10 X

Interpretación:

El titulo del suero problema será la última dilución que presente un resultado
positivo, ejemplo:

• Si se presenta floculación hasta wel tubo No. 3 esta es la dilución 1:8,

por lo tanto el título será 1:8

Nota:

1. Sueros extremadamente turbios o bemolizados son insatisfactorios para

la prueba.
2. Sueros débiles positivos y con fuertes evidencias clínicas de la
enfermedad es conveniente efectuar la prueba cuantitativa, ya que
ocasionalmente pueden presentar el fenómeno de prozona.
3. Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4
minutos puede secarse la reacción y causar dificultad en la
interpretación.
4. El antígeno en suspensión debe estar a temperatura ambiente antes de
ser utilizado.
 FACTOR REUMATOIDE

INTRODUCCIÓN:

El diagnóstico de Artritis Reumatoide es una prueba rápida en placa que

aglutina inmunoglobulinas anormales en suero conocidas como “Factor
Reumatoide” en presencia de partículas de látex sensibilizadas con gama
globulina humana.

Se encuentran las siguientes presentaciones para la prueba:

1. Equipo para 100 pruebas:

• Frasco (1) con 5.0 ml de Látex-Globulina

• Frasco (2) con 0.5 ml de suero control positivo
• Frasco (3) con 0.5 ml de suero control negativo
• Frasco (4) con 10.0 ml de regulador glicina-salina pH 8.2 concentrado
• Placa de reacción.

2. Equipo para 40 pruebas:

• Frasco (1) con 2.0 ml de Látex-Globulina

• Frasco (2) con 0.5 ml de suero control positivo
• Frasco (3) con 0.5 ml de suero control negativo
• Frasco (4) con 4.0 ml de regulador glicina-salina pH 8.2 concentrado
• Placa de reacción.

Obtención de la muestra:

1. Obtener 3.0 ml de sangre por punción venosa

2. Centrifugar y separar el suero
3. Preparar el regulador: Aforar el frasco (4) de glicina-salina pH 8.2
concentrado a 100 ml (para 100 pruebas) o a 40 ml (para 40 pruebas)
con agua destilada.

Método Cualitativo:

1. Colocar en una gradilla 1 tubo (13 x 100 mm)

2. Depositar 1 ml de frasco No. 4 (regulador glicina-salina pH 8.2) diluido
3. Añadir 0.05 ml de suero problema
4. Después de haber agregado el suero problema la dilución obtenida es
1:20 y está lista para su uso
5. En un anillo de la placa depositar 0.05 ml de suero diluido
6. En otro anillo depositar una gota del frasco No. 2 (suero control positivo)
7. En un tercer anillo depositar una gota del frasco No. 3 (suero control
negativo)
8. Añadir a cada uno de los tres anillos una gota del frasco No. 1 (Látex-
Globulina) previamente resuspendido
9. Mezclar manualmente la placa de reacción durante 2 minutos.
 10. Realizar la lectura del resultado en este momento.
Interpretación:

Resultado Positivo: Presencia de agregados macroscópicos (aglutinación

comparable al control positivo).

Resultado Negativo: Ausencia de agregados macroscópicos (sin aglutinación,

comparable al control negativo)

Método Semicuantitativo:

1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.

2. Colocar en una gradilla 8 tubos de 12 x 75 mm y numerarlos
3. Depositar al tubo No. 1, 1 ml del frasco No. 4 (regulador glicina-salina pH
8.2) diluido
4. Depositar del tubo No. 2 al 8, 0.5 ml del frasco No. 4 (regulador glicina-
salina pH 8.2) diluido
5. Añadir al tubo No. 1, 0.05 ml del suero problema y mezclar
6. Pasar 0.5 ml del tubo No. 1 al tubo No. 2 y mezclar
7. Pasar 0.5 ml del tubo No. 2 al tubo No. 3 y mezclar
8. Continuar esta operación hasta el tubo No. 8
9. Depositar 0.05 ml de cada una de las diluciones en anillos diferentes de
la placa.
10. Añadir una gota del frasco No. 1 (Látex-Globulina previamente
resuspendido) a cada una de las diluciones
11. Mezclar manualmente la placa de reacción durante dos minutos
12. Realizar la lectura del resultado en este momento.

Interpretación:

El título del suero problema será la última dilución que presente agregados
macroscópicos (aglutinación).

Ejemplo:
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 Resultado
Dil. 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560
+ + - - - - - - Pos 1:40
+ + + - - - - - Pos 1:80
+ + + + + - - - Pos 1:320

Precaución:

Los sueros control positivo y negativo son de origen humano. Los donadores
cuya sangre se ha utilizado para la fabricación de este producto fueron
negativos a las pruebas de VIH y VHB, sin embargo, debido a que no existen
pruebas que garanticen que no contienen virus VIH y VHB y otro, manéjese
como potencialmente infeccioso.

Limitaciones del Método:

1. No deben utilizarse sueros turbios, bemolizados o contaminados para

realizar la prueba.
 2. Para evitar falsos resultados NO es recomendable realizar la prueba
después de los 2 minutos.
BRUCELLA ROSA DE BENGALA

Prueba Cualitativa de aglutinación rápida en placa para la detección de

aglutininas específicas de brucella

INTRODUCCIÓN:

Cuando algún agente microbiano patógeno produce una infección en el

humano, si sintetizan diversos anticuerpos. Muchos de estos anticuerpos son
las aglutininas, cuando es combinada con antígeno homólogo (aglutinógeno)
bajo condiciones controladas es capaz de causar una aglutinación. Una
suspensión de Brucella, que posea un contenido antigénico estandarizado
puede aglutinar cuando es expuesta a sus anticuerpos homólogos. Esta
aglutinación forma grumos de bacterias los cuales son visibles
macroscópicamente.

El antígeno de Brucella Rosa de Bengala, fabricado a partir de la cepa Brucella

abortus No. 1119-3 fase lisa es usado para la detección rápida de agultininas
de Brucella (Brucella abortus, B. melitensis y B. suis).

Sensibilidad del reactivo: 18.5 a 22.2 Ul/ml de acuerdo al ISABS (Suero

Estándar Internacional de B. abortus).

Se encuentran las siguientes presentaciones para la prueba:

1. Catálogo INI514:

• Reactivo en frasco gotero 1.0 ml

• Suero control positivo 0.5 ml
• Suero control negativo 0.5 ml
• 30 palillos

2. Catálogo INI517:

• Reactivo en frasco gotero 2.0 ml

• Suero control positivo 1.0 ml
• Suero control negativo 1.0 ml
• 60 palillos

3. Catálogo INI521:

• Reactivo en frasco gotero 5.0 ml

• Suero control positivo 5.0 ml
• Suero control negativo 5.0 ml
• 150 palillos
El gotero descarga 30± 5µl de antígeno de Brucella Rosa de Bengala.

Material y equipo necesario:

1. Centrífuga
2. Lámpara
3. Pipeta serológica de 0.1 ml o micro pipeta para medir 30 microlitros
4. Cronómetro.
Conservar los reactivos entre 2o y 8oC.
Obtención de la muestra:
1. Obtener 5 ml de sangre por punción venosa en un tubo sin
anticoagulante (tapón rojo)
2. Dejar la sangre por 10 0 15 minutos
3. Separar el coágulo de la pared del tubo con un palillo
4. Tapar el tubo y centrifugar 5 minutos a 3000 rpm
5. Extraer el suero y refrigerar hasta ser examinado.
Método Cualitativo:
1. Todos los reactivos y muestras de suero a temperatura ambiente (20 a
25oC)
2. Agitar el frasco del antígeno suavemente para obtener una suspensión
uniforme
3. Con una pipeta serológica de 0.1 ml o micro pipeta depositar una gota
30 µl del suero problema en un anillo de la placa
4. Con el gotero del reactivo deposite una gota de antígeno Brucella Rosa
de Bengala que descarga 30± 5µl en el anillo del suero problema.
5. Mezcle utilizando un palillo
6. Repita estos casos para el suero control positivo y suero control negativo
7. Efectuar movimiento rotatorio en la placa por 4 minutos en un agitador
mecánico a 100 rpm
8. Realizar la lectura del resultado en este momento.
Interpretación:
Resultado Positivo: Aglutinación en cualquier grado
Resultado Negativo: No presenta ninguna aglutinación
Esta prueba es una prueba tamiz solamente para la detección de aglutininas de
Brucella. Si el resultado es positivo, éste puede ser confirmado por otra prueba
serológica para Brucelosis por ejemplo SAT Y 2-Mercaptoetanol.
Las aglutininas detectadas no siempre son producidas por infecciones
bacterianas. En algunos casos las aglutininas no específicas, pueden aparecer,
las cuales pueden reaccionar con los antígenos de Brucella. Por ejemplo,
sueros de adictos o narcóticos han sido reportados que contienen aglutininas
significativas a los antígenos febriles.
Reacciones cruzadas pueden ocurrir por la relación antigénica entre especies
lisas de Brucella y Francisella tularensis, Eschenchia coli, serogrupo 0:157,
serotipos de Salmonella del grupo N de Kaufmann White, Pseudomonas
maltophila, Vibrio cholerae y Yersinia enterocolítica serovar 0:9.
DIAGNÓSTICO DE EMBARAZO

Es una prueba para el diagnóstico de embarazo y a la vez para cuantificación

de hormona gonadotrofina humana (HCG)

INTRODUCCIÓN:

Se fundamenta en la detección inmunológica por inhibición de la

hemoaglutinación de la hormona gonadotrofina coriónica humana.

Tiene una sensibilidad de 1,000 UI (unidades internacionales) de HCG/litro de

orina o 1.0 UI/mililitro.

Se encuentran las siguientes presentaciones para la prueba:

1. Equipo para 30 pruebas:

• Frasco (1) con 7.5 ml de suero anti-HCG

• Frasco (2) con 2.0 ml de eritrocitos de carnero sensibilizados con HCG
• 30 tubos de vidrio 10 x 50 mm
• 30 pipetas desechables

2. Equipo para 45 pruebas:

• Frasco (1) con 11.5 ml de suero anti-HCG

• Frasco (2) con 3.0 ml de eritrocitos de carnero sensibilizados con HCG
• 45 tubos de vidrio 10 x 50 mm
• 45 pipetas desechables

Método Cualitativo:

Obtención de la muestra:

1. Utilizar la orina de la primera micción matutina

2. Enfriar la orina problema en refrigeración durante 5 minutos
3. Centrifugar o filtrar la orina

Técnica Cualitativa:

1. Colocar en una gradilla 1 tubo de los proporcionados en el equipo,

cuidando que esté absolutamente vertical
2. Depositar 0.25 ml (4 gotas) de la orina problema en el tubo
3. Añadir con el frasco gotero No.1 (suero anti-HCG) 4 gotas (0.25 ml) al
tubo problema
4. Agitar ligeramente el tubo
 5. Resuspender los Eritrocitos de carnero sensibilizados con HCG
contenidos en el frasco No.2, agitando ligeramente y agregar una gota al
tubo
6. Agitar ligeramente el tubo.
Después de determinar el procedimiento, mantener la gradilla a temperatura
ambiente en un lugar libre de vibraciones durante dos horas.
Generalmente orinas positivas pueden ser reportadas en un hora. En orinas
negativas no deberá reportarse el resultado hasta después de haber
transcurrido las 2 horas.

Interpretación:
Resultado Positivo: Formación de anillo o botón en el fondo del tubo problema
Resultado Negativo: Ausencia de anillo o botón en el fondo del tubo problema.

Método Cuantitativo:

La prueba puede realizarse en orina o suero.

Obtención de la muestra:
Deberá de utilizarse la orina de 24 horas.
1. Medir el volumen de la orina problema
2. Tomar 5.0 ml del volumen de la orina y enfriar en refrigeración durante 5
minutos
3. Centrifugar o filtrar la orina
Técnica Cuantitativa:
1. Colocar en una gradilla 9 tubos proporcionados en el equipo, cuidando
que estén absolutamente verticales, numerar del 1 al 9
2. Depositar 0.25 ml de Solución Salina 0.85% a los tubos del 1 al 9
3. Añadir al tubo No. 1 0.25 ml de la orina problema
4. Agitar y pasar 0.25 ml del tubo No. 1 al tubo No. 2
5. Agitar y pasar 0.25 ml del tubo No. 2 al tubo No. 3
6. Continuar esta operación hasta el tubo No. 9, eliminar 0.25 ml de este
tubo
7. Añadir con el frasco gotero No. 1 (Suero anti-HCG) 4 gotas (0.25 ml) a
los tubos del 1 al 9
8. Agitar ligeramente cada uno de los tubos
9. Resuspender los eritrocitos de carnero sensibilizados con HCG
contenidos en el frasco No. 2, agitando ligeramente
10. Añadir con el frasco gotero No. 2 (eritrocitos sensibilizados con HCG)
1 gota a cada uno de los 9 tubos.
11. Agitar ligeramente cada uno de los tubos.
Después de terminar el procedimiento, mantener la gradilla a temperatura
ambiente en un lugar libre de vibraciones durante 2 horas.
Ejemplo:
Si hay formación de anillo o botón hasta el tubo No. 5 (dilución 1:32)
Cálculos: 32 X volumen de orina 24 horas X sensibilidad del reactivo
32 X 0.94 litros (940 ml) X 1000 = 30,080 UI de HCG/litro
Técnica para cuando la muestra problema sea suero:

1. Colocar 1.0 ml de suero problema en un tubo 13 X 100 mm

2. Agregar 0.17 ml de ácido clorhídrico 0.5 N y mezclar
3. Añadir 4 ml de acetona y mezclar
4. Filtrar en papel filtro Whatman No. 42
5. Enjuagar el tubo de ensaye utilizando otros 2 ml de acetona
6. Secar el precipitado a temperatura ambiente por lo menos durante 24
horas
7. Recuperar el precipitado del papel filtro en un tubo de ensaye
8. añadir 1.0 ml de solución salina 0.85% fría y mezclar
9. Centrifugar para clasificar
10. Efectuar la técnica de diluciones como en el caso de orina.

Ejemplo:

Última dilución que de resultado positivo X sensibilidad del reactivo

Cálculos: 32 X 1000 = 32,000 UI/ml

Limitaciones:

A) Deberá evitarse el intercambio de reactivos de lotes diferentes

B) Muestras de pacientes con coriocarcinoma, mola hidatiforme y
tumores testiculares secretan hormona gonadotrofina coriónica
que puede dar resultado positivo
C) Un resultado negativo no indica ausencia de embarazo, sino que
la concentración de HCG está disminuida

Si continua el retraso menstrual recomendamos repetir la prueba 10 días

después.
 CREATININA

INTRODUCCIÓN:

En 1988 Jaffe describe un método para la determinación de creatinina

haciendo reaccionar un filtrado libre de proteínas con ácido pícrico en una
solución alcalina. Aunque desde entonces se han descrito muchos métodos, la
reacción clásica de Jaffe es la más utilizada.

Esta reacción esta sujeta a interferencias a causa de varias sustancias, como

proteínas y glucosa. Para combatir esta desventaja se han desarrollado
algunas modificaciones. Los métodos cinéticos son los más utilizados por ser
más rápidos, simples y sin interferencias.

El presente método se basa en una modificación de reacción de Fabinay y

Eringhausen:

Álcali
Creatinina + Ácido Pícrico Complejo de creatinina-
picrato (amarillo-naranja)

La creatinina reacciona con el ácido pícrico en un medio alcalino para formar

un complejo de color el cual absorbe a 510 nm. La velocidad de formación del
color es proporcional a la concentración de creatinina en la muestra.

Se encuentran las siguientes presentaciones para la prueba:

• Equipo para 100 pruebas

Reactivos y Material Proporcionado:

1. Creatinina Acida; solución acuosa de ácido pícrico, 3.6 mmol/l (100 ml)
2. Creatinina Base; solución acuosa de hidróxido de sodio, 240 mmol/l
(100 ml)
3. Estándar de creatinina – 5 mg/dl; solución acuosa de creatinina con
cloruro de zinc, 5.0 mg/dl (6 ml)

Precauciones:

Para uso de diagnóstico In-Vitro. El hidróxido de sodio debe manejarse con

cuidado por ser cáustico. El ácido pícrico es un agente oxidante fuerte. Evite
contacto con la piel. Limpie cualquier salpicadura ya que el ácido pícrico seco
es explosivo.

Preparación del reactivo:

Mezcle una parte de Ácido Pícrico y una parte del reactivo Base para preparar
el “Reactivo de Trabajo”. El estándar y el reactivo de trabajo están listos para
su uso.

Estabilidad y almacenamiento:

Los frascos de reactivo sin abrir son estables a temperatura ambiente 288-303
K (15-30oC) hasta su fecha de caducidad. El reactivo de trabajo es estable
durante 30 días almacenado entre 15-30oC. El estándar de creatinina es
estable hasta su fecha de caducidad indicada en la etiqueta cuando se
conserva de 15-30oC. No utilizar los reactivos si estos están turbios.

Material adicional requerido:

1. Espectrofotómetro capaz de medir absorbancias a 510 nm

2. Cronómetro
3. Tubos de ensaye o celdillas
4. Pipetas serológicas o de precisión
5. Agitador.

Recolección y manejo de la muestra:

Suero: Separar rápidamente el suero del coágulo para prevenir la hemólisis

Orina: Orina de 24 horas, diluir la muestra 1:20 con agua destilada y mezclar

Estabilidad de la muestra:

La creatinina sérica es estable durante 24 horas si se almacena de 275 a 281 K

(2 a 8oC) y por varios meses a 253 K (-20oC) en recipientes bien cerrados que
eviten la evaporación y la contaminación de la muestra. La muestra de orina
debe conservarse añadiendo 15 gramos de ácido bórico. La orina es estable de
4 a 7 días a temperatura ambiente 288-298 K (15-25oC).

Sustancias interferentes:

Varias sustancias afectan la exactitud de la determinación de Creatinina. (Ver

lista completa de Young et al)

Los siguientes parámetros deben ser considerados en el momento de

programar la prueba en el instrumento. Para mayores detalles de programación
se debe consultar el manual de operación del instrumento.
Parámetro de Prueba

Longitud de onda……………………….. 510 nm

Tipo de reacción………………………… Cinética
Dirección de la reacción………………... Incremento
Temperatura de reacción………………. 310 K (37oC)
Relación muestra/reactivo……………… 1:20
Tiempo de equilibrio…………………….. 20 segundos
Tiempo de lectura……………………….. 60 segundos
Límite de absorbancia del blanco……… > 0.200
Cambio de absorbancia alta/mín………. 0.625 ∆
A/min.
Valor normal bajo………………………... 0.7 mg/dl
Valor normal alto………………………… 1.5 mg/dl
Linearidad………………………………… 20 mg/dl
Paso de luz………………………………. 1 cm
pH…………………………………………. 12.4 ± 1.0
Absorbancia inicial………………………. < 0.500
Valor del estándar……………………….. 5 mg/dl

Procedimiento manual: