Ingeniera en Biotecnologa

Universidad de las Fuerzas Armadas - ESPE

Microbiologa II

Andrs Izquierdo Ph.D.

Sangolqui, 2016
Biodegradacin aerbica de
hidrocarburos alifticos y HAPs.
 Biodegradacin aerbica de hidrocarburos alifticos

Los alcanos son molculas altamente reducidas con un elevado

contenido de carbono y energa, por lo tanto constituyen un
buen sustrato para los microorganismos (bacterias, hongos
filamentosos y levaduras)
 Biodegradacin aerbica de hidrocarburos alifticos

El metabolismo de los alcanos no es sencillo, debido a que

son muy hidrfobos y su solubilidad en agua es
extremadamente baja

Lo que plantea un problema para su absorcin

Su hidrofobicidad y la de varios de los productos generados

durante su metabolismo, facilita su acumulacin en la
membrana citoplasmtica, lo que es perjudicial para el
microorganismo
 Biodegradacin aerbica de hidrocarburos alifticos

Un suelo, arena o sedimento marino tpico contiene 104-106

microorganismos degradadores de hidrocarburos por gramo
(Rosenberg, 1993), aunque estos valores pueden aumentar
considerablemente en sitios contaminados con petrleo
(Harayama et al., 2004).
 Muchos degradadores de alcanos son bacterias con un
metabolismo muy verstil.

Sin embargo, en los ltimos aos se han identificado

especies bacterianas muy especializadas en la degradacin
de hidrocarburos, las cuales son denominadas
hidrocarbonoclsticas

Que parecen jugar un papel clave en la eliminacin de

hidrocarburos al menos en ambientes marinos

Por ejemplo, la bacteria marina Alcanivorax borkumensis

puede asimilar alcanos lineales y ramificados, pero es
incapaz de utilizar hidrocarburos aromticos, azcares,
aminocidos, cidos grasos y la mayora de los otros
sustratos comunes como fuente de carbono

Por
Alcanivorax borkumensis Oleispira
La captacin bacteriana de n-alcanos

El mecanismo no esta claro, como entran los alcanos al

interior de la clula, pero depende de:

de las especies bacterianas

del peso molecular de alcano
y de las propiedades fsico-qumicas del entorno
su solubilidad disminuye a medida que aumenta su
peso molecular
La captacin directa de alcanos en una fase acuosa slo
puede ser considerada para los compuestos de bajo peso
molecular
 Los alcanos de cadena media y larga, pueden acceder a los
microorganismos a ellos en forma de gotitas de
hidrocarburos o mediante un proceso facilitado por
tensioactivos.

La mayora de bacterias degradadoras de n-alcanos

producen y secretan biotensioactivos de diversa naturaleza
qumica que facilitan la emulsin de los hidrocarburos

Por
Vas de degradacin de n-alcanos

La degradacin aerbica se inicia mediante una

monooxigenacin en la cadena hidrocarbonada

Que en funcin de la posicin en que se produce, da lugar a

3 rutas metablicas:

oxidacin terminal
oxidacin subterminal
oxidacin

Por
Alcano hidroxilasa

Alcohol deshidrogenasa

Aldehdo deshidrogenasa
 Degradacin de n-alcanos Alcano hidroxilasas

Clase de
Caractersticas Tamao del sustrato Husped
enzima
PMR, propano Monooxigenasa hierro no-hemo similar a Bacterias
C3
monooxigenasa MMOs (Rhodococcus sp.)
Bacterias
BMOs, butano Monooxigenasa hierro no-hemo similar a
C2 C9 (P. butanovora)
monooxigenasa MMOs

BMOp, butano Bacterias

Monooxigenasa que contiene cobre C2 C9
monooxigenasa (Gram positivas)
Bacterias
CYP153 Citocromo P450 soluble C5 C12 (P. putida GPo1)

Levaduras
(Candida
CYP52 Citocromo P450 unida a la membrana C10 C16
bombicola)

Bacterias
Relacionadas
Monooxigenasa hierro no-hemo C3 C13 C10 C20 (Pseudomonas)
con Alk B

Bacterias
AlmA Monooxigenasa flavin-binding C20 C30
(Acinetobacter)
Bacterias
Monooxigenasa termoflica
LadA C10 C30 (Geobacillus)
flavin-dependiente
La familia de alcano hidroxilasa AlkB

La va de degradacin ms caracterizada y es codificada por el

plsmido OCT de P. Putida Gpo, que se ha convertido como
modelo.

La primera enzima de esta ruta es la AlkB (monooxigenasa con

dihierro no-hemo ligado a la membrana)

Que hidroxila los alcanos en posicin terminal y que requiere

dos protenas solubles de transferencia de electrones, una
rubredoxina (AlkG) y una rubredoxina reductasa (AlkT)

Por
La familia de alcano hidroxilasa AlkB

Por
Citocromo P450 monooxigenasa

Son protenas con un grupo hemo unido a cistena mediante su

tiolato que catalizan la oxigenacin de un gran nmero de
compuestos

Se encuentran en todos los reinos y pueden ser agrupadas en

ms de 100 familias en base a su similitud de secuencias

La mayora de las P450 eucariotas son enzimas unidas a las

enzimas, mientras que la mayora de P450 procariotas son
soluble
Por
Citocromo P450 monooxigenasa

Por
Alcano hidroxilasa de n-alcanos de cadena larga

Se han descrito que varias bacterias son capaces de asimilar

alcanos de ms 20 carbonos

Las enzimas encargadas de la oxidacin de tales alcanos, son

slidos a temperatura ambiente y no se encuentran muy bien
caracterizados.

Acenitobacter DSM 17874, crece en alcanos C13-C44, posee

una enzima designada almA, que codifica para una
monooxigenasa de unin flavina y ha sido identificado en otras
bacterias.
 La bacteria termfila Geobacillus thermodenitrificans NG80-
2, se ha identificado una hidrooxilasa de alcanos de cadena
larga (C15-C36), de nominada LadA.

Mycobacterium, Nocardioides o Rhodococcus, se ha

detectado la presencia de monooxigenasas similares al AlkB y
citocromos P450, que presentan la capacidad de oxidar
distintos compuestos de distintos rangos de tamao.

Nocardioides
Degradacin de alcanos de cadena ramificada

Existen varias cepas bacterianas que pueden degradar alcanos

ramificados simples como el isooctano o compuestos ms
complejos como el pristano.

pristano
Degradacin de alcanos de cadena ramificada

Los miembros de Alcanivorax pueden degradar alcanos

ramificados, lo que les confiere una ventaja competitiva en el
agua de mar contaminada con petrleo.
Degradacin de alcanos de cadena ramificada

Las vas metablicas de la degradacin de alcanos ramificados

estn menos caracterizados que las n-alcanos y puede implicar
una o oxidacin de la molcula de hidrocarburo.

Gordonia amicalis
Gordonia amicalis
Mycobacterium gilvum
Degradacin aerbica de HAPs

La degradacin microbiana de HAPs depende de su tasa de

captacin y de su metabolismo

Se conoce poco como los HAPs atraviesan las membranas

bacterianas para alcanzar las enzimas catablicas presentes en
citoplasma.

Incluyen difusin pasiva como una captacin dependiente de

energa que se activa durante el crecimiento con HAPs como
nica fuente de carbono.
Degradacin de HAPs
Dioxigenasa dihidroxilante de anillo (RHD)

OH
H OH

OH
OH

Dioxigenasa de ruptura de anillo

OH O
COOH

OH
Metabolismo central
OH
Degradacin de HAPs

Dioxigenasas dihidroxilantes del anillo aromtico (RHDs)

Organizacin de la naftaleno dioxigenasa de Pseudomonas sp. NCIB 9816-4

(Adaptado de Gibson & Parales, 2000)

Degradacin de HAPs

Clasificacin de las RHDs propuesta por Nam y colaboradores (2001).

Familia Representantes
Tipo I Hidroxilasas compuestas solo de subunidades , muy distintas de otras
dioxigenasas en secuencia de AA y rango de substratos
Tipo II Benzoato/toluato dioxigenasas (Benzoato 1,2 dioxygenase (benA))
Tipo III Naftaleno y HAP dioxigenasas (Naftaleno 1,2 dioxigenasa (phnAc))
Tipo IV Bifenil y tolueno dioxigenasas (Bifenil 2,3 dioxigenasa (bphA))

Tipo V Dioxigenasas de Gram-positivos (NidA)

26
 Degradacin de alquilHAPs

H3 C

OH
HO

HOH2C
H3 C
OH
COOH

H3 C OHC

OH

H3 C COOH HOOC
Monooxigenacin cometablica de los grupos metilo de los
alquilHAPs
 Dioxigenacin y ruptura de anillo de alquilHAPs
Oxidacin del C alquilico de alquilHAPs
CH3 COOH
COOH
Accin de la Mycobacterium AP1 sobre HAPs

H3C H3C COOH

CH3 H3C COOH

H3C
COOH
H3C H3C IV
COOH
COOH
H3C H3C H3C
III COOH
COOH H3C V
H3C COOH
VI
5e+5 II COOH

HOOC OH VII
4e+5
H3C COOH
COOH
I COOH COOH
Abundace

3e+5

COOH HO COOH
2e+5

1e+5

0
Vila et al., 2009 10 15 20 25 30 35