SEGUNDA UNIDAD: PRACTICA N01

RECOLECCIN PROCESAMIENTO Y SIEMBRA DE MUESTRAS DE SUELO

DE CULTIVO DE ARROZ

PRIMERA PARTE:

I. MATERIALES:
Un depsito ancho de 1 litro
Agua esterilizada
Tierra del cembrio de arroz
04 Laminas
Mechero

II. PROCEDIMIENTO:
Se verti un kilo de tierra del cembrio de arroz en el depsito de 1 litro y se
mesclo con agua esterilizada hasta la tierra tenga una consistencia humedad.

Se esterilizo las lminas a flameo con ayuda del mechero para que sean
introducidas al depsito con tierra que ser un medio para la obtencin de
biopelculas.
Se agreg agua esterilizada al cultivo cada 2 das; para que los
microorganismos puedan aumentar en todo ese tiempo el proceso duro 3
semanas.

III. RESULTADOS:

Muestra: Tierra de cultivo del cembrio de arroz

 Objetivo: Preparacin de ambiente ptimo para el crecimiento bacteriano para
formar biopelculas en las lminas adheridas.

Trascurrido las tres semanas se realiz la coloracin gran para observar

las bacterias que estn en el medio de cultivo

I. MATERIALES:
Lminas de la muestra de ase tres semanas trascurridas
Microscopio compuesto
Colorantes a utilizar: Violeta de genciana, lugol, alcohol
acetona, safranina.
Aceite de cedro

II. PROCEDIMIENTO:
a) Con la ayuda de una esptula se abri la tierra al alrededor de la lmina para
que se extrada.
b) Se lav con sumo cuidado asta sacar la tierra; que no se desprendan las
biopelculas formadas en la lmina.
c) Agregamos violeta de genciana hasta cubrir toda la porta lmina y dejar actuar
al colorante por espacio de 1 y 2 minutos.
d) Eliminamos el exceso de colorante y, sin lavar la lmina, agregamos lugol
hasta cubrir la muestra por espacio 1 y 2 minutos y luego eliminamos con agua.
e) Decoloramos con alcohol acetona (1/5 de acetona por 4/5 de alcohol etlico)
hasta que la lmina deje de chorrear colorante en el proceso de decoloracin.
f) Agregamos el colorante de contraste safranina hasta cubrir totalmente la
muestra y dejamos actuar por espacio de 1 minuto.
g) Lavamos y secamos.
h) Observamos en el microscopio con una gota de aceite de cedro.
III. RESULTADOS:

Primera lamina
Material biologico : tierra de cultivo de cembrio de arroz

Tipo de preparado: En seco

Objetivo: 100X

Aumento: 1000A

Observaciones: Bacillus de color rojo en Gram (-)

 Segunda lamina

Material biologico : tierra de cultivo de cembrio de arroz

Tipo de preparado: En seco

Objetivo: 100X

Aumento: 1000A

Observaciones: Bacillus de color rojo en Gram (-)

 Tercera lamina

Material biologico : tierra de cultivo de cembrio de arroz

Tipo de preparado: En seco

Objetivo: 100X

Aumento: 1000A

Observaciones: Bacillus de color rojo en Gram (-)

 PRACTICA N02

ESTUDIO DE FACTORES DE VIRULENCIA EN BACTERIAS

1. RECONOCER STAPHYLOCOCCUS AUREUS EN AGAR BAIRD

PARKER

I. MATERIAL DE LABORATORIO:
Agar baird Parker
Bacteria Staphylococcus aureus
II. PROCEDIMIENTO:
a. Preparacin del agar baird Parker
Composicin:
Triptona 10g
Extracto de carne 5g
Extracto de levadura 5g
Piruvato sdico 10g
Glicina 12g
Cloruro de lito 5g
Agar 20g
Agua destilada 1.000mL
III. RESULTADOS:

Muestra: cultivo Staphylococcus aureus en Agar baird Parker

Observacin: se puede observar de que hay halos de lipolisis donde el

Staphylococcus aureus a hidrolizado y tambin podemos observar colonias que
no han podido hidrolizar los lpidos.
 PRUEBA DE LA CATALASA

I. MATERIALES:
Cultivos puros de bacterias crecidos 18-24 horas en agar nutritivo.
Asa bacteriolgica.
Portaobjetos limpios.
Agua oxigenada.
Mechero

II. PROCEDIMIENTO:
a) Colocar una gota de H2O2 (agua oxigenada) en una lmina portaobjetos
limpia.
b) Con la ayuda de la asa bacteriolgica, coger una muestra de cultivo de
Staphylococcus aureus y hacer una suspensin con el perxido

III. RESULTADOS
Muestra: Staphylococcus aureus y Escherichia coli.

Interpretacin de resultados:

* Prueba positiva: formacin inmediata de burbujas bien visibles (desprendimiento de

O2).

* Prueba negativa: no hay formacin de burbujas (no se forma O2).

 PRUEBA DE HEMOLISINA

I. MATERIALES

Agar sangre al 7%
Bacteria Staphylococcus aureus

II. PROCEDIMIENTOS

a) Preparacin del Agar Sangre

III. RESULTADOS

Muestra: Staphylococcus aureus en Agar Sangre.

OBSERVACION: Se observ que las colonias Staphylococcus aureus ha degradado

la hemoglobina de los glbulos rojos y se puede observar la transparencia alrededor
de la colonia formando halos.
 PRACTICA N03

COLORACIN EN SECO Y PREPARACIN EN FRESCO PARA

OBSERVAR BACTERIAS FITO PATGENAS

1. PREPARACIN EN FRESCO

METODOLOGIA

a) Sujetamos una lmina portaobjetos por los bordes, mantenindole en

posicin horizontal.
b) Con un asa bacteriolgica, colocamos sobre la lmina previamente
esterilizada (al fuego del mechero), la muestra extrada de la lesin del fruto
u hortaliza suspendida en gotas de agua.
c) Cubrimos con laminilla, evitando derramar la muestra
d) Llevamos el preparado al microscopio y lo colocamos la lmina en el centro
de la platina, sujetndola con la pinza.
e) Abrimos completamente el diafragma
f) Colocamos el objetivo de 20x en posicin de observacin.
g) Accionamos el tornillo macro mtrico hasta lograr imagen en el campo
microscpico; luego accionamos el micromtrico hasta lograr una imagen
ntida.
Observacin de bacterias en lesiones de Mango ciruelo

Muestra: lesin de mango ciruelo.

Preparacin: en fresco
Objetivo: 40x
Aumento: 400A
Observacin: presencia de hongos

Observacin de bacterias en lesiones de escabeche

Muestra: lesin de escabeche.

Preparacin: en fresco
Objetivo: 20x
Aumento: 200 A
Observacin: Bacilos.
Observacin de bacterias en lesiones de carambola

Muestra: lesin de carambola

Preparacin: en fresco
Objetivo: 40x
Aumento: 400 A
Observacin: hongos y bacterias al fondo.

Observacin de bacterias en lesiones de Noni

Muestra: lesin de Noni

Preparacin: en fresco
Objetivo: 40x
Aumento: 400 A
Observacin: bacilos.