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Ce] a rr —_ Analisis de ADN y genética forense Pablo Noseda, David Gangitano, Guillermo Juvenal Lab. Huellas Digitales Genéticas, Dpto. Salud Integral, SENAF Pablo Noseda Lab. Huellas Digitales Genéticas, Dpto. Salud Integral- SENAF pnoseda@senal.gob.ar David Gangitano Forensic Sciences Program Co- lege of Criminal Justice, Sam Houston State University, USA dag006@shsu.edu Guillermo Juvenal Divisién Bioquimica Nuclear, ‘Comisién Nacional de Energia Atomica juvenal@cnea.govar Introduccion ‘Sibien el establecimiento de vin- culos biologicos data de princi- pios del siglo 20 a través del es- tudio de los sistemas de grupos sanguineos (ABO, Rh, etc.) y la idea de obtener niveles de discrimi- nacién © certeza indiscutibles era impensada hasta hace 25 afios, Con el descubrimiento de regiones polimérficas _(varia- siones en la secuencia), en el ADN y su posterior utilizacion en. la identificacién de personas a mediados de los 808, la genética tomé un rol protagénico dentro: de las ciencias forenses. La ven- taja de estudiar el ADN radica no: s6lo en su estabilidad sino tam- bién en que el ADN es idéntico tanto si se analiza en sangre, hhueso, semen, etc. Por otra parte se necesitan cantidades fimas y el analisis del ADN per- mite una inclusion superior al 99, 99%. Para entender los principios de la metodologia usada en la ac- 61 (1-3) 2011 tualidad se har una breve descripcién de! genoma humano. Genoma Humano El genoma humano esta local- izado en la mitocondria y en el nucleo celular. El ADN es un polimero formado por dos cade- nas antiparalelas constituidas por nucleétides, Unidos en forma covalente a través de uniones fosfodiester, descripta por primera vez por James Watson y Francis Crick en 1953. Cada nu- cleétido contiene: un aziear (desoxitibosa), un grupo fostato y una base nitrogenada. Estas son: adenina (A), citosina (C), guanina (G) y timina (T).. Las dos eadenas estén estabilizadas por la formacién de puentes de hidrégeno entre las bases com- plementarias de cada cadena (A con T, C con G), manteniendo juntas las dos cadenas. Esto im- plica que si en una cadena en- contramos la_—_secuencia 5°... CGTTGTAAGCC...3° en la ota debemos —_ encontrar 3°...GCAACATTCGG...5’ Acada apearamiento (A-T, G-C), lo llamamos par de bases. ADN nuclear EIADN nuclear es lineal y se en- cuentra organizado en estruc- turas llamadas cromosomas. 'Una célula diploide de un ser hu- mano cantiene 23 pares de cro- mosomas: 22 pares de ‘autosomas y un par de cromoso- mas sexuales (X:X 0 X:Y). Cada uno de estos cromosomas de un par proviene, uno del padre y otro de la madre. A cada par lo llamamos cromosomas homélo- gos. Los 23 cromosomas con- tienen en total 3 mil millones de pares aproximadamente. Una pequefia proporcién eorre- sponde a genes. En la actuali- dad luego del secuenciamiento (la lectura de las bases), del genoma humana se calcula que el numero de genes es de alrededor de 30.000 genes. El ADN es estable, sin embargo ocasionalmente ocurren muta- ciones pudiendo traer conse- cuencias severas si en esas secuencias por ejemplo reside la informacion para una proteina. La mayoria de los genes deter- minan cuales son y en que orden estarn dispuestos los aminoaci- dos de una determinada pro- teina. Aeste ADN lo conocemos ‘como ADN codificante. Sin em- bargo, la mayor parte del ADN nuclear es no codificante. Parte del ADN no codificante esta cons- ADN y Genética tituido por ADN repetitive que como Su nombre Io indica, co- mesponde a diferentes secuen- cia de ADN que se encuentran repetidas a lo largo de todo el genoma. Dentro de éstas encon- tramos las de repeticion interdis- persa o intercalada que orresponden a secuencias de numero variable de bases que se encuentra repetidas en dife- rentes lugares del genoma ‘Otras secuencias _llamadas salélites estan repetidas en tan- dem, come los vagones de un tren (Figura 1). De acuerdo a su tamafo se las clasifica en satélites, mini y microsatélites (estas secuencias pueden for- mar parte de seauencias codifi- antes). El nimero de repeticiones varia de una persona a otra, asi por ejemplo un individuo puede tener 12 repeticiones de deter- minada secuencia en un cromo- soma, heredadas de padre, y 13 repeticiones en el otro cromo- soma homélogo, heredadas de la madre. Mientras que en otro: individuo la misma secuencia se encuentra 15 veces repetida, es. decir que lo que varia es el largo. del “tren’, en ambos cromoso- mas por ejemplo. Si bien dos in- dividuos no emparentados pueden llegar a tener el mismo. numero de repeticiones de una determinada Secuencia, es muy dificil que dos individuos presen- ten el mismo perfil (genotipo obtenida de analizar un determi- nado grupo de marcadores), salvo que sean gemelos, una vez analizados varios mar- adores (0 secuencias). Justa- mente el anélisis del ADN en 60 jentificacién forense se basa en el analisis de estas repeticiones. de corto tamafio denominados STR (Short Tandem Repeat) Cada niimero de repeticiones corresponde a un alelo determi nado. Cada par de alelos se ubica en igual locus a lugar del cromosoma. Por alelo enten- demos las diferentes formas posibles de un marcador genético. En el caso que una persona tenga dos mismos ale- los para un determinado mar- cador se dice que es homocigota, si los alelos son diferentes para un mismo mar- cador entonces es heteracigota. Existen alelos que son mas probables de ser compartidos por diferentes individuos de una misma etnia. Se hace impres- cindible contar por lo tanto con una base de datos (frecuencia de un alelo en una determinada poblacién), a fin de poder inter- pretar los resultados y realizar estudios de estadisticos adecua- dos. Los comienzos La aplicaci6n al estudio de estas secuencias en el campo de la medicina forense fue descu- rta por Alec Jeffreys de la Uni: versidad de Leicester en Inglaterra en 1984, condecorado més tarde con el titulo de Sir. En 1985 se emple6 por primera vez el analisis del ADN en el ambit de la justicia para la resolucion de un caso de inmigracion en el que estaba involucrada una fa- milia procedente de Ghana y que residia en el Reino Unido. Uno. de los nifios fue a visitar a su padre a Ghana y al regreso a 61 gran Bretafia el funcionario de inmigracién no lo dejé entrar aduciende que la documentaci¢n era falsa. Luego de realizados los estudios, llevade a cabo en el laboratorio de Jeffreys, com- parando el ADN del nifio con el de su madre y hermanos se pudo resolver su identidad (Jet- freys analiz6 marcadores mini- satélites multilocus mediante la tecnica de Southern Blot). Posteriormente, el mismo grupo pudo esclarecer un caso de vio- lacion y asesinato. En 1983 en Narborough, una pequefia local idad cercana a Leicester, una nifia de 15 afios fue violada y asesinada. Tres afios mas tarde otra victima fue asesinada de la misma forma en Enderby, cerca de Narborough. La policia arres- toa Rodney Auckland, un joven de 17 afios, quien luego de un extenso interrogatorio admitio ser el autor del asesinato de la segunda joven pero no de la primera. La policia, convencida que el joven habia sido el autor de las dos violaciones, envid muestvas de semen recogidas de las vietimas y una muestra de sangre del acusado. El laborato- Fio de Jeffreys determind que los dos homicidios habian sido ‘cometidos por la misma persona pero que no correspondia a Auckland convirtiéndose en el primer caso en que gracias a esta técnica pude demostrarse la inocencia del acusado. La policia comenz6 a realizar una enorme busqueda a fin de dar con el cue pable. Se tomaron muestras de todos los hombres de Narbor- ough y suburbios aledafios, alrededor de 5000. Al comienzo no se puda determinar al culpa- Ce] ble, pero lan Kelly en una re- unién de amigos confesé que se habia hecho pasar por una per- sona de apellide Pitchfork por dinero. Alguien presente en el pub hizo la denuncia a la policia. Poco tiempo después, mediante el andlisis de ADN se pudo de- terminar que Pitchfork habia sido. el responsable de los asesinatos. Metodologia En el caso de un estudio de pa temidad se toman muestras de sangre 0 hisopados bueales, generalmente, de los supuestos: padres y del hijo y se obtienen los respectives ADN. Los alelos presentes en el hijo deben en- ‘sontrarse en los del padre y de la madre. En un homicidio 0 vio- lacién se compara el ADN ex- traido de diferentes fuentes tales ‘como manchas de sangre, semen o saliva, depositados en. ropa, vasos, cigartillos, sobres, hisopados vaginales o anales ‘obtenidos de victimas de vio- lacién, objetos personales como. peines, maquinas de ateitar, cepillos dé dientes, ete obtenidas en la escena del erimen con el ADN de las posi- bles sospechosos. Con la invencién de la Reaccién en Cadena de la Polimerasa 0 PCR (Polymerase Chain Reac- tion) por Kary Mullis y la posibili- dad de amplificar pequenias regiones polimérficas repetitivas. del + ADN + (microsatélites), ‘comenz6 un cambio tecnologico: dentro de la Genética Forense que puso en jaque a la técnica desarrollada por Jeffreys dado que esta requeria gran cantidad de ADN (cuestién dificil de en- 61 (1-3) 2011 contrar en el Ambito forense) y era laboriosa y costosa. Esta técnica hace posible pro- ducir millones de copias de una determinada secuencia de ADN. Para ello se desnaturaliza el DN obtenido y se lo incuba luego con oligonucledtidos o primers que estén compuestos de aproximadamente una vein- tena de nucledtidos que son complementarios a los extremos. de la secuencia de ADN a ampli- ficar. La polimerizacion la realiza una enzima que es la Taq polimerasa. Esta enzima inicial- mente fue obtenida de Thermus aquaticus (en la actualidad se obtiene por ingenieria genética), una bacteria termofila que habita en géiseres y por lo tanto resiste. altas temperaturas. Se debe tener en cuenta que la desnatu- ralizacién del ADN requiere tem- peraturas de 95°C y ninguna enzima de organismos superio- res puede trabajar a esta tem- peratura. Luego de alrededor de 30-35 ciclos, se obtienen millo- nes de copias (2"2), donde n es. el niimero de cictos. Una vez amplificada la regi6n deseada del ADN, en este caso. las secuencias repetidas en tan- dem, se identifica el tamafio de los alelos mediante una electro- foresis en gel y posterior com- paracion con marcadores de tamajo conocido (Figura 2). En la actualidad se dispone de equipos automatizados. Estos equipos permiten el andlisis de varios marcadores @ la vez. Esta técnica permitio analizar muestras degradadas por el paso del tiempo 0 con niveles muy bajos de ADN que hacian (aparece ote cna | 2 ekdaetape tarate se copes ADN y Genética 3° GCTGATTG..(CGT)n..CCTATGCT 5° CTAAC _ CCTAT 5° CGACTAAC..(GCA)n..GGATACGA 3” Figura 2. Reaccion en cadena de la Polimerasa (PCR). Se ejemplifica un caso tipico de paternidad donde hay dos supuestos padres. La muestra de ADN de cada individuo se amplifica con “primers” es- .ecificos para Gada marcador (para simplificar la figura se muestra un solo marcador y la Secuencia del ‘primer” esté acortada). Electroforesis: M: marcador (alelos 11 al 18), Ma: madre (homocigota para el alelo 16), H: hijo (alelos 14, 16). P1: supuesto padre 1 (alelos 13, 14) P2: supuesto padre 2 (alelos 15, 46). Se observa que el hijo hered6 el alelo 16 de su madre, por lo tanto el otro alela (14) debe provenir de su padre (P1). imposible la utilizacian de ta téc- nica de Jeffreys, A su vez la creacion de PCRs multiplex que permitieron la co-amplificacion de varias seouencias © mar- adores en una misma reaccion de PCR, lograron desplazar a los minisatélites en poco tiempo. A partir de los afios 90 comen- zaron a ser descubiertos mas y mas marcadores STRs, exis- tiendo cientos de ellos, sin em- bargo solo unos 30 fueron utlizados en identificacion hu- mana debido a que cumplian ‘iertos requisites, como ser: facil diferenciacian entre _alelos, buena amplificacién, unidad de repelticion regular y que sea polimérficos en la poblacién (alta heterocigocidad). éCémo se utilizan estos sistemas en la actualidad? Sabiendo que existen un gran numero de marcadores la pre- gunta es: ¢Cudles se deberian utlizar? Para mediados de los afios 90 esto se volvié un obje- tivo esencial puesto que si se uti- lizan los mismnos marcadores se pueden cruzar los datos, para 63 comparar perfiles obtenides en distintas jurisdicciones. Para el ambito civil, en la reali- zaci6n de estudios de filiacién 0 vineulos biologicos no es impres- cindible el uso de determinados marcadares, puesto que el grupo familiar completo se analiza en un laboratorio hasta la con- clusion del estudio, sin necesi- dad de comparar con otro laboratorio, en cambio en el sis- tema penal, la utilizacion de Evidencia on ee dene aw sbabecy Ce] bases de datos es impres- cindible para resolver erimenes. La generacion de bases de datos de perfiles de ADN re- quiere del uso sistemattico de los mismos marcadores, para poder ‘comparar el perfil de una eviden- cia, con una de referencia \(Sospechoso), dentro de la base de datos. Una de las primeras es. ladel FBI de Estados Unidos de- nominada CODIS (Combine ‘Mest Dysz 61 (1-3) 2011 DNA Index System), que con- siste en perfiles de 13 sistemas 'STRs mas un marcador de sexo, el gen de la amelogenina. Con- tiene mas de 9 millones de per- files de ADN, tanto de sospechosos como de muestras tomadas en las escenas del crimen (evidencias). Con ef co- rer de los afios distintos paises fueron desarrollando sus propias bases de datos, incluyendo otros, marcadores STRS pero res- pyszev! | pvsaw | nys3e0 1 Evadencin 3 Sceprchoro 1 Culpable a Sespechoso 2 Tnocente a Sospechoso2 Figura 3. Electratenograma abtenido al tipificar 4 marcadores de Gromosoma Y para una muestra de una escena del crimen (evidencia) y su comparacion contra dos sospechosos. El sospechoso 1 posee el mismo perfil que el hallado en la evidencia, mientras que el sospechoso 2 no, por lo que se lo elimina como sospechoso. petando una base de STRs que les permite comparar los perfiles entre paises. Existen varios sistemas multiplex comerciales que incluyen los marcadores STR encontrados en las distintas bases de datos del mundo. Estos kits comer- ciales han ayudado a la ge- neracién de las distintas bases de datos, por su rapidez de uso (permite el andlisis simultaneo de entre 7 y 16 marcadores STRs, basados en la utilizacion de la Electroforesis Capilar y la detecci6n de distintos fluorocro- mos por un detector léser) y su gran estandarizacion, impres- sindible en el ambiente de la Justicia Criminal. Marcadores STR no autosémicos Si bien la utilizacion masiva ha sido la de mareadores autosomi- 0s, es decir no presentes en los ‘cromosomas sexuales, para re- solver determinados casos, se han desarrollado ottos mar- cadores: los de cromosoma ¥ (Y- STRs) y los de cromosoma X OGSTRS). Una caracteristica que hace dis- tintivo al uso de STAs de cromo- soma Y es que solo se heredan por via paterna y no tienen re- ‘combinacian con el cromosoma X. Por esto el perfil de ADN de varios marcadores de cromo- soma Y para un integrante mas- culino de la linea paterna en una familia (haplotipa), sera idéntico I de otro integrante de la misma inea patema. O sea hermanos, padre y abuelo paterno, todos poseen el mismo haplotipo. Su aplicacion en estudios de fi- ADN y Genética liacién ha sido muy importante para establecer él vinculo pa- temo. Aunque no puede diseri- minar entre los distintos integrantes. de la patrilinea su uso complementario es sin dudas de gran ayuda en casos ‘complejos donde el padre ale- ‘gado no se encuentra disponible. Pero en cuanto all uso en cien- cias forenses, la caracteristica més atractiva es que solo se en- cuentra en hombres. Particular- mente su uso en casos de violacién donde existe una mez- la de células de la victima y del victimario (semen), no sera necesaria una extraccion de ADN diferencial de semen, puesto que de la mezcl ‘obtenida de ADN solo ampli- ficaran los marcadores Y-STRs del violador, Se han desarrollado- sistemas multiplex comerciales donde se co-amplfican hasta 12 Y-STRs. En cuanto a los marcadores de ‘cromosoma X, si bien comen- zaron a ser utilizados antes que los -STRs, no han sido explota- dos hasta recientemente. Su uti- lizacién no és tan evidente en Genética Forense como los Y- 'STRs por lo que todavia muchos forenses no los han adoptado. Sin embargo el hecho que no tengan recombinacion al pasar por hombres (estado de ha- plotipo), y si al pasar por mu- jeres, los hace por lo pronto particulates. Son de gran utilidad en el ambito del establecimiento. de vinculos biolégicos complejos. en ausencia de progenitores y en la resolucion de casos de in- cesto. Por ejemplo en un supuesto caso de abuso sexual 64 del abuelo matemo (Figura 4), donde nace una nifia, ana- izando los perfiles genéticos de X-STR de la madre y la nifia, podemos descartar © no al abuelo materno como el padre bioldgico. Otro ejemplo, intere- sante es la filiacion patema de dos hermanas biolagicas; al menos deberan compartir un alelo, puesto que su padre solo posee un alelo posible para cada marcador X-STR YeXP xM1 XM2 H Figura 4. Segregacién de Cro- mosoma X y su uso en casos de incesto paterno. Nétese que M recibe el Unico cromosoma X de su padre (XP) y uno de los X de su madre recombinado (XM 1 0 2). Por |o tanto H, en caso de in- cesto, recibira (XP_y combi- nacion de XP + XM 1 a 2) Entonces, sino contamos con el padre, podemos detectar si hay incesto 0 no, con solo estudiar a la madre (M) y alla hija (H), com= parando los marcadores de XP. En caso de no incesto, los mar- cadores encontrados en el XP de la M, seran distintos a los XP de la H ‘STRs no humanos Otros marcadores que estan siendo bastante utilizados en las escenas del crimen, san los mar- cadores para identificar masco- tas. Es sabido que todo aquel que tiene mascotas, sobre todo gatos, puede acarrear sus pelos para todos lados. Asimismo, un ‘criminal puede dejar los pelos de SU gato 0 perro en una escena del crimen. Se han encontrado STRs tanto de perro como de gato y se han desarrollado sis- temas multiplex para la co-am- plificacion de varios STRs, como por ejemplo el Meowplex en gatos (11 STR mas un indicador de sexo), para ligar un sospe- choso con una escena del crimen, Estos —marcadores pueden también ser utilizados para confeccionar y rastrear ani- males de pedigr! o para identifi- eacién de razas. Se los ha utiizados también para determi- nar patemidades e incluso en ‘comunas donde se dispone de una base de datos de los canes, multar por ej. al duefio de un perro por haber defecado en la calle 0 en lugares piblicos. ADN mitocondrial (ADNmt) En lo que respecta al ADNmt, éste es una doble hélice circular de 16.569 pares de bases. Den- tto de éstas se encuentra una region de aproximadamente 1.100 pares de bases cuya se- cuencia presenta gran variabili- dad entre individuos (regiones hipervariables HV1 y HV2). El andlisis del ADNmt se basa jus- tamente en las secuencias de esta region. Este presenta varias ventajas respecto al analisis del ADN nu- clear. Por una parte, el ADNmt se hereda unicamente por via materna; y al no tener practica- Ce] mente recombinacién, la se- cuencia del ADNmt es idéntica para todos los familiares mater- nos salvo que existan muta- ciones. La transmision es ‘constante, calculéndose una mu- tacién cada 30 generaciones aproximadamente. Estas carac- teristicas son de suma utilidad en el caso del analisis, por ejem- plo de hijos de desaparecidos en los que se pueda acceder al ADN de la abuela materma Por otto lado, la cantidad de mi- tocondrias en una célula suele ser mucho mayor a 1, pudién- dose encontrar hasta mas de 1.000 mitocondrias en determi- nados tipos celulares. Par lo tanto la Sensibilidad de las técni- ADNmt es significativamente mayor que utllizando ADN nu- clear, donde encontramos ‘copia por oélula. Sumado a esto el ADNmt esta protegide por 2 membranas mitecondriales y una membrana celular; una mis que el ADN nuclear. De esta manera es de gran utilidad su utlizacién en casos donde el material sé encuentra muy degradado y en muy baja canti- dad. También es de utilidad este tipo de andlisis en estudios de evolucién, bioarqueologia y mi- graciones. ‘SNPs, miniSTRs Los SNPs 0 Polimorfismos de Nucle6tido Unico, son sistemas. donde solo existen dos variantes. en la poblacion. Si bien son poco: informativos se utilizan una gran cantidad de ellos para llegar a obtener de niveles de discrimi- nacién similares a los STRs. 61 (1-3) 2011 Ademas, debido a su pequefio. tamafo, su uso en muestras al- tamente degradadas los hace muy atraetivo. Los primeros y mas utilizados SNPs en Genética Forense fueron los de ADNmt. Las regiones hipervariables HV1 y HV2 pueden ser analizadas por secuenciacion directa y ser utilizadas con el mismo fin que los marcadores microsatélites Actualmente también se ha maximizado la sensibilidad de los mareadores microsatélites tradicionales con el uso de los denominados miniSTRs, donde se ha reducido el amplicon a su minima expresiOn para poder uti- izar estos marcadores tanto au- tosémicos como de cromosoma Y en casos de muestras alta- mente degradadas 9 en muy baja cantidad, conservando todas las caracteristicas de los ‘STRs. También se ha logrado un efecto similar aumentando el numero de ciclos de PCR, téc- nica que tomo el nombre de Touch-DNA.« Low Copy Number, que permite amplificar ADN de sospechosos que tocaron 0 ma- nipularon objetos. Pero esta téc- nica tiene muchos detractores porque una pequefia contami- nacién puede cambiar el curso de una investigacién haciendo Sus resultados contraversiales. Los SNPs utilizados del genoma nuclear se podrian diferenciar en dos grupos Aquellos pertenecientes a re- giones con recombinacién, au- tosdmicos y regianes del cromosoma X (que presentan altas tasas de recombinacién ADN y Genética 66 } > aT = Regién de ADN Renetitiva Primer tradicional, alejado de de regién repetitiva del STR. Amplicén total “?" romedio de 250 pb > Primer de miniSTR, cercano a la regién repetitiva del STR. Amplicén total promedio de 100 pb Figura 5. Estrategia en la generaciin del producto de PCR © amplicén para los microsatélites tradi- ionales (en rojo) y los miniSTAs (verde). Los primers de los miniSTRs, al tener complementariedad de bases mas cerca de la regién repetitiva, generan amplicones mas pequefios que los STRs. Por esta razon, son mas sensibles en muestras altamente degradadas (fagmentos de ADN moide mas pe- quefio), similares a las tasas encon- tradas en los autosémicos) y los pertenecientes a los cromoso- mas sexuales. Los SNP de cromosoma Y, al no tener recombinacién (haplotipos) y tipificando al menos unos 50 ‘SNPs pueden serde gran ayuda para establecer vinculos pater- os. Su uso al igual que el det estudio de ADNmt es esencial para establecer linajes en casos de desaparecidos o de desas- tres en masa. En cambio, el estudio de SNP autosémicos en Genttica Forense es menos claro, porque se deberian utilizar entre 50 y 400 SNPs para ser tan discrimi- natives como los STRs, sobre todo para el establecimiento de vinculos bioldgicos, y ademas su uso en mezclas de ADN no es todavia muy comprendido. Sin embargo, existen estuerzos para disenar métodos que permitan generar estos perfiles a costos similares a los de STRs uti- izando gran cantidad de ellos. Un futuro cercano Pero los SNPs pueden ser apli- cados en otra direccién, no para detectar una identidad sino con ‘el fin de establecer una etnia 0 caracteristicas fenotipicas de un individuo. En muchos casos donde no hay sospechosos y el perfil encontrado en la escena de! crimen no arroja un match dentro de las bases de datos, la investigacin llega a un punto lego. El objetivo es poder con- tarcon una serie de marcadores SNPs. que puedan. informar sobre el fenatipo probable det agresor. Las estrategias que se estan llevando a cabo son dos. Por un lado los marcadores AIM (Ancestry Informative Markers) marcadores que pretenden in- ferir sobre el origen ancestral de un individu, basados en el hecho que 10s diferentes mar- cadores SNP autosémicos uti- lizados ocurren en las distintas poblaciones mundiales en fre- suencias diferentes. Si bien no pueden inferir las caracteristicas fisicas de una persona, podran inferir la etnia de la misma. La otra estrategia busca poder determinar caracteristicas fisicas (lenotipicas) de! sospechoso, ayudando de esta manera a los oF Cel HapMap para AIMs 61 (1-3) 2011 ‘@Alricanos Haplotipos de SNPs BHispancs AEuropeos Individuos Figura 6. Los mapas de haplotipos permiten mostrar genotipos que son caracteristicos para las distintas etnias. En funcion del haplotipo que resulte de una muestra proveniente de una escena del crimen, se podra inferir sobre la atnia del sospechoso, investigadores. También serian de gran ayuda en trabajos de re- construccidn facial en el ambito de la antropologia forense. Ac- tualmente os trabajos se llevan a cabo sabre los polimorlismos involucrados en la pigmentacion tanto de la piel, come el pelay el color de ojos. El problema con este objetivo es que se estaria analizando ADN codificante y una de las bases de la identifi- ‘cacién por marcadores molecu- lares es que justamente no se utiliza este tipo de ADN. El use de estos SNPs puede prover in- formacién personal o privada sobre e| donante, raz6n por la ‘ual la sociedad podria rechazar su utilizacion Existen nuevas direcciones y avances tecnoldgicos significa- tivos que generaran una nueva revolucién dentro de la genética forense. Uno de ellos es la robotizacian ‘que permitira un manejo mas ox- tenso de muestras y reducira significativamente los tiempos de procesamiento. Por su parte, la Electroforesis Capilar en ‘crochips (uCAE), una tecnologia que ya esta entre nosotros, as gura que se podra hacer todo el analisis de STRs en un equipo portatil dentro de la misma es- cena del crimen en menos de 2 horas, reduciendo de esta man- ‘era él manipuleo y contami- nacién de la evidencia. ‘Otro objetive es la utilizacion de. ARN en vez de ADN en mues- tras frescas. A diferencia del ADN donde todas las células de: un individuo tienen el mismo ADN, el ARN varia segin el tipo celular 0 io. De esta manera los CS! buscaran diferenciar el origen de las distintas manchas, por ejemplo sangre menstrual de sangre venosa, 0 por ejemplo en un caso de violacién los investi- gadores podrian determinar si las muestras correspondientes al agresor son de semen, saliva 0 células epiteliales. Pero en Genética Forense los cambios y la introduccién de nuevas tecnologias suele ser un camino lento y complejo. Cada nuevo protocole 6 técnica debe ser validado por una serie de pruebas, como ser las aconse- jadas por los lineamientos del SWGDAM (Scientific Working Group on DNA Analysis Me- thods). Estas validaciones deben ser incluidas tanto para las nuevas tecnologias en si, como para los distintos laboratorios al adoptarlas. Es por esto, que no todos los avanees tecnolagicos son incorporades répidamente por la comunidad forense inter- nacional Bibliogratia Budowle B., van Daal A., Foren- sically relevant SNP classes. BioTechniques. 44: 603-610, 2008, Greenspoon, S., Micrachip Gap- illary Electrophoresis: Progress toward an Integrated Forensic Analysis System. Profiles in DNA, Promega, Septe-mber, 2007. duvenal GJ, Gangitano D., Padula R., ADN y anélisis forense. Revisia CNEA N°4, 2001. Phillips, M.L., Crime Scene Ge- netics: Transforming Forensics ‘Science through Molecular Tech- nologies. BioScience. 58 N°6, 2008, Walsh, S., Recent advances in forensic genetics. Expert Rev Mol Diagn 4: 31-40, 2004 www.cstl_nist.gov/biotech/str- base! Created by J. Butler y otros. Glosario ADN satélite: secuencias cortas, generalmente, que se repiten en tandem. AIM: Marcadores de Informaci¢n Ancestral, son sistemas que pre- ADN y Genética tenden inferir sobre el origen an- cestral de un individuo 0 sobre etnia, Alelo: “Version” de un gen que esld presente en un locus dado Un alelo es cada una de las for- mas altemativas (Secuencia) que puede tener un gen y que ocupa la misma posicion en cada par de cromosomas homblogos Una célula diploide posee dos alelos de cada gen, uno de ellos procedente del padre y el otro de la madre, ODIS: Combine DNA Index ‘System. Es la base de datos de Estados Unidos donde se alma- ‘cena los perfiles geneticos tanto de Evidencias como de ‘Criminales. CSI: Investigadores de la Esce- na del Crimen. Electroforesis: Técnica que per- mite la separacién de moléculas. de ADN de distinto tamafio apli- eando un campo eléctrico y ha- ciendo que ADN se mueva sobre lun sustrato poroso. Recombinacién: Intercambio de material genético entre cromoso- mas homélogos durante la di- vision celular que formara las gametas. ‘SNPs: Polimorfismos de Nucle- ‘tido Unico, son sistemas donde s6lo existen dos variantes en la poblacién. Si bien son poco in- formativos se utilizan una gran cantidad de ellos para llegar a obtener de niveles de discrimi- nacién similares a los STRs. ‘STR: (Short Tandem Repeat) se- 68 cuencia de ADN consistente en un numero variable de pequefias (25 pb) secuencias repetidas en tandem, por ej (TGCA)n.

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