RECOGIDA DE MUESTRAS PARA

CULTIVO EN MICROBIOLOGA

Abreviaturas: LM: laboratorio de microbiologa; AG: aparato genital; BAL;

lavado broncoalveolar.

Introduccin
Nada es ms importante para la efectividad de un LM que una muestra
adecuadamente seleccionada, recogida y transportada, y acompaada de
informacin completa sobre el paciente, el espcimen y los estudios que se
desean. Es razonable pensar que si los datos obtenidos del estudio
microbiolgico constituyen una informacin que sirve para confirmar o
realizar un diagnstico e implantar un tratamiento correcto, los pasos citados
arriba son crticos para el estudio microbiolgico, cuya finalidad es proporcionar
informacin que potencialmente puede salvar a un paciente.
Para conseguir un cuidado apropiado de los pacientes es primordial una
comunicacin fluida entre el personal clnico y el del LM; el dilogo resulta
con frecuencia difcil y en muchas ocasiones no existe; para que sea posible
es necesario un cambio en la mentalidad de ambas partes, en las estructuras
organizativas e incluso en las infraestructuras que sustentan la comunicacin.
La comunicacin se debe desarrollar en dos momentos distintos.
Por una parte, el LM debe instruir al personal implicado en el cuidado de los
pacientes para que cada vez que vaya a tomar una muestra conozca cul es
la ms adecuada, cmo debe recogerla, eventualmente guardarla y transportarla
hasta el LM y qu informacin debe incluir en el volante para asegurarse de
que se harn las pruebas deseadas. Lograr esto, requiere un esfuerzo tanto
por parte del LM, que debe instaurar un programa de informacin frecuente
y continuamente actualizada sobre este tema, asegurndose adems de que
esa informacin es percibida por la mayor cantidad posible de destinatarios,
como por parte de estos ltimos, que deben ser conscientes de la gran
importancia de dicha informacin y actuar en consecuencia. Entre las posibles
soluciones podran estar el establecimiento de reuniones peridicas (p.ej.

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trimestrales) entre clnicos y microbilogos junto con la utilizacin de las
grandes posibilidades que ofrece la informtica (e-mail, intranet, etc.).
Cuando la muestra accede al LM, su personal debe controlar la calidad del
material recibido, comprobando que llega en condiciones adecuadas; si no
es as, la tarea del trabajador del LM no consiste en rechazarla simplemente
y pedir otra, sino en discutir con el mdico la razn por la que determinada
muestra parece ser inadecuada; en otras palabras, podemos decir que el clnico
nunca debe esperar que el LM procese cualquier cosa que se le enve, pero
el microbilogo tampoco debe rechazar unilateralmente muestras sin consultar
con el mdico. El problema, planteado en este momento, es difcil de resolver,
ya que en muchas ocasiones no se puede establecer contacto con el peticionario,
tanto por falta de una infraestructura adecuada para la comunicacin como
por problemas de disponibilidad por ambas partes. Adems, esta situacin
se plantea normalmente en numerosas ocasiones cada da, lo que hace que
la tarea consuma mucho tiempo. Para no llegar a esta situacin ms que en
las ocasiones en que realmente sea necesario es por lo que es importantsimo
el conocimiento previo por parte del personal clnico de todo lo relacionado
con la toma de las muestras para Microbiologa. Las muestras destinadas al
estudio microbiolgico pueden contener microorganismos vivos cuya deteccin
depende de una gestin competente de las muestras. La comprensin de este
sencillo concepto debe bastar para motivar a las personas que van a recoger
la muestra para actuar con arreglo a las pautas generales que se dan a
continuacin.

Seleccionar la muestra apropiada

La seleccin de una muestra representativa de la enfermedad que se intenta
diagnosticar parece simple, pero diariamente llegan al LM muestras que han
sido incorrectamente seleccionadas, (y habitualmente llegan en escobillones,
cuya rentabilidad es baja) . Los datos obtenidos a partir de esas muestras
pueden ser engaosos y llevar a diagnsticos errneos y a tratamientos
inapropiados. Para que sea representativa la muestra debe cumplir diversos
criterios.
1. Debe ser material procedente del lugar de la infeccin, es decir, del

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lugar en que debe encontrarse el microorganismo causante de la infeccin
(ej. No se debe tomar una muestra vaginal si se sospecha gonorrea o infeccin
por Chlamydia sp.).
2. El momento oportuno para la recogida de la muestra depende de las
circunstancias. En el caso de los hemocultivos, lo ideal sera tomarlos poco
antes del prximo pico febril previsto. En el caso de la orina y el esputo, son
preferibles las muestras recogidas a primera hora del da.
Por regla general, la muestra se deber tomar cuando el proceso se encuentre
ms activo, y siempre, incluso en situaciones de urgencia, antes de dar
antibiticos o al menos despus de que hayan transcurrido como mnimo 48
horas desde la ltima dosis; si fuera necesario tomar la muestra sin suspender
el tratamiento antibitico, se deber hacer constar esta circunstancia al LM.
Siempre que sea factible, la muestra se tomar en horas de trabajo del LM,
para asegurar un rpido procesamiento, evitando retrasos que slo pueden
perjudicar el estudio solicitado.
3. La cantidad de muestra que se debe recoger, ser tanta como se pueda,
y siempre suficiente para que se puedan realizar todos los estudios solicitados.
Las excepciones pueden ser esputo y orina para cultivo, de las que una
pequea cantidad puede bastar. En algunos casos (hemocultivos, heces para
parsitos) las cantidades vienen prefijadas. El escobilln se usa con gran
frecuencia por su comodidad, pero siempre que se pueda se debe evitar, ya
que nos proporciona una cantidad mnima de material. Nunca ser admisible
muestra de 24 horas.
4. El nmero de muestras necesario para estudio microbiolgico es variable,
si bien como regla general se puede decir que basta con una bien recogida;
no se deben remitir varias muestras del mismo tipo del mismo paciente en
el mismo perodo de 24 horas. Slo para algunos tipos de muestra se han
establecido cantidades, como en el caso de heces para parsitos, esputos para
micobacterias, hemocultivos, etc.

Utilizar la tcnica y material idneos para su recogida y almacenamiento

1. Es fundamental la desinfeccin del lugar del que se va a recoger la
muestra y la toma muy cuidadosa con el fin de eliminar o minimizar la

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presencia de microorganismos contaminantes procedentes de los tejidos,
rganos o secreciones adyacentes. La piel debe limpiarse con etanol al 70%,
seguido de un compuesto yodado. Los desinfectantes deben permanecer en
contacto con la superficie cutnea durante al menos dos minutos para que
sea eliminada la mayor parte de los contaminantes. Si una infeccin se debe
a la invasin de un tejido por flora normal de la regin (ej. infecciones por
anaerobios), el material del foco de infeccin debe recogerse con cuidado
para evitar la flora normal. Del mismo modo, se debern tomar precauciones
para evitar que ciertas muestras (orina, esputo) se contaminen por flora
normal al ser emitidas.
2. Para tomar y almacenar la muestra se deben utilizar los dispositivos y
contenedores adecuados para cada una de ellas, que deben haber sido
convenientemente diseados para permitir la supervivencia del organismo
causal y para evitar las fugas y derrames, que podran suponer un peligro de
contaminacin de la muestra y para la seguridad de las personas que lo
manipulen. Los escobillones slo se usarn si la muestra no se puede recoger
por otro mtodo, y siempre se insertarn en un contenedor estril provisto
de medio de transporte.

Identificar y transportar la muestra al LM

1. El contenedor de la muestra debe rotularse correctamente, sealando el
tipo de muestra, la procedencia anatmica si es preciso, el nombre y apellidos
del paciente, su nmero de identificacin, su localizacin en el hospital o
fuera de l y la fecha y hora de la toma.
2. La eficacia en el transporte de las muestras es tan importante como la
correcta recogida; de modo convencional, se recomienda que no transcurran
ms de dos horas desde la recogida hasta el procesamiento (10 minutos si
se sospecha la presencia de anaerobios). Cuando el LM slo est abierto
durante un tiempo limitado, muchas veces es necesario el almacenamiento
de la muestra; en ese caso, deberemos asegurarnos de que se realiza
adecuadamente, y a una temperatura que no dae los microorganismos
eventualmente presentes. Con el fin de posibilitar y facilitar el control de la
calidad de la muestra, es preferible que el almacenamiento se haga en el

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lugar donde se ha tomado la muestra, y no en el LM.
Cumplimentar correctamente los volantes de peticin
Por desgracia, con frecuencia el volante de peticin es el nico medio para
establecer la comunicacin, incompleta en tanto que unidireccional, entre el
peticionario y el LM, lo que confiere gran importancia a su cumplimentacin
correcta.
Para que el procesamiento sea adecuado, el LM necesita informacin del
clnico en relacin con el paciente y la muestra, y la finalidad del volante de
peticin es suministrar esa informacin; por desgracia, raramente aportan
todos los datos necesarios para hacer el estudio adecuado y la correcta
interpretacin de los resultados obtenidos. Cuanta menos informacin haya
en el volante, ms difcil es interpretar los resultados de los cultivos, y menos
valor tendrn stos para el cuidado del paciente.
Frecuentemente las peticiones estn slo parcialmente cumplimentadas, o
lo estn con letra ilegible, lo que priva al LM de datos tan importantes como
el lugar anatmico de procedencia de las muestras, el diagnstico (que en
ocasiones se expresa con siglas de significado desconocido salvo en mbitos
restringidos), datos relevantes de la historia clnica, antimicrobianos
administrados, etc. A veces ni siquiera es posible leer el nombre de los
pacientes, y con frecuencia no constan ni la edad ni un nmero para su
identificacin inequvoca (historia, Seguridad Social, etc.). Normalmente ah
acaba toda la comunicacin, ya que no es habitual que una vez tomada la
muestra el peticionario contacte con el microbilogo para consultar o para
suministrar ms datos, y es imposible para los trabajadores del LM establecer
contacto con todos los peticionarios que cada da envan volantes mal
rellenados, lo que implica procesar las muestras a ciegas, con la consiguiente
prdida de valor de los resultados.
Ante cualquier duda sobre cmo hacer la toma o ante cualquier peticin
inhabitual, el personal sanitario debe consultar con el LM, lo que evitar
llegar a situaciones de difcil o imposible solucin una vez tomada la muestra
y enviada al laboratorio. (p. ej. cuando se ha recogido inmediatamente antes
de iniciar un tratamiento antimicrobiano o durante el acto quirrgico).

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Resumiendo, el volante de peticin debe incluir, con letra legible, la siguiente
informacin:
- Nombre completo del/la paciente, edad y sexo y localizacin en el hospital
o fuera de l.
- Nombre del mdico y lugar donde se le puede localizar.
- Lugar anatmico concreto del que se ha tomado la muestra.
- Fecha y hora de la toma.
- Diagnstico, determinacin(es) solicitada(s) y datos relevantes de la historia
del/la paciente.
- Forma de obtencin de la muestra.
- Antimicrobianos que el paciente est recibiendo (especificar si no los est
recibiendo).

Normas para la recogida de muestras especficas

Orina
Es la muestra ms frecuente en el LM. La destinada a cultivo se puede recoger
de tres formas: por miccin limpia, por cateterizacin y por puncin
suprapbica. En el primer caso, es importante que se limpien bien los genitales
externos con jabn lquido y que ste se elimine con agua o suero fisiolgico
antes de recoger la muestra; se despreciar la primera orina emitida,
recogindose la correspondiente a la parte media de la miccin; la orina se
recoger directamente en un bote estril, que se tapar bien. Si la persona ya
tiene colocado un catter, la orina se recoger pinchando con jeringa y aguja,
previa desinfeccin del punto de extraccin; se desaconseja cateterizar para
recoger orina, por el riesgo de producir una infeccin ascendente. La toma
por puncin suprapbica debe ir precedida de cuidadosa limpieza y antisepsia
de la piel del rea de la puncin. En estos dos casos, la orina se remitir al
LM en la misma jeringa usada para la toma. En el caso de pacientes peditricos,
no es conveniente usar bolsas para recoger orina destinada a cultivo.
Si es el paciente quien recoge la orina en su casa, se le deben dar instrucciones
claras y concisas para que lo haga correctamente.
Aparato genital
Las muestras se tomarn con escobilln, que se girar suavemente una vez

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en la posicin de recogida. Se debe evitar tocar cualquier punto que no sea
aqul del que se va a tomar la muestra. Si se sospecha gonococo, se procurar
que la muestra llegue al LM inmediatamente despus de la toma.
A.G. Femenino. La muestra vaginal se recoge de fondo de saco posterior. La
muestra cervical se toma del canal cervical previa limpieza del orificio externo
con algodn estril. La muestra uretral se recoger previa limpieza del meato
con algodn seco estril. Hay que tener claro que la muestra vaginal slo
sirve para aislamiento de patgenos especficos vaginales (Gardnerella,
Candida, Trichomonas), pero no para bsqueda de N. gonorrhoeae,
Mycoplasma/Ureaplasma o Chlamydia, que se deben buscar en muestras
cervicales.
A.G. Masculino. La muestra uretral se recoger con escobilln, previa limpieza
del meato con algodn seco estril.
Hemocultivo
En cuadros agudos, normalmente basta con uno slo para conseguir el
diagnstico microbiolgico, si bien es aconsejable hacer al menos dos. En
casos de evolucin no aguda, aumentan las probabilidades de aislamiento si
se extraen dos o tres, y adems sta es una prctica que se ha hecho habitual
en cualquier situacin; las probabilidades no aumentan si se extraen cuatro
o ms (salvo en endocarditis, dos hemocultivos dan un 90% de probabilidades
de aislamiento, y tres dan el 99%). En la endocarditis aguda se deben extraer
3 hemocultivos, separados por una hora entre s, y en la subaguda se debe
hacer lo mismo, pero obteniendo otros tres si los primeros son negativos a
las 24 horas; si el paciente ha recibido antibiticos, se tomarn tandas de dos
hemocultivos en tres das sucesivos. En cuanto al intervalo entre hemocultivos,
no hay pautas fijas, y depende de la urgencia de la situacin; as, puede ir
de minutos a unas horas; incluso se pueden hacer dos extracciones simultneas
en dos puntos diferentes. El momento ms adecuado depende de la situacin;
en caso de fiebre intermitente, lo ideal es hacer la extraccin una hora antes
del siguiente pico febril previsto. En relacin con los hemocultivos debe
quedar claro:
1. Es fundamental limpiar y desinfectar cuidadosamente la superficie en la
que se va a hacer la puncin. La tcnica debe ser muy cuidadosa,

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recomendndose el uso de guantes estriles si es posible. El aislamiento en
hemocultivo de estafilococos coagulasa-negativos y de otros saprfitos de
la piel es habitualmente indicio de una deficiente tcnica en la toma, al tiempo
que ocasiona aumento de las cargas de trabajo del LM y de los costes en el
cuidado del paciente, proporcionando una informacin intil.
2. Dos hemocultivos son dos muestras recogidas en distinto momento y en
distinta localizacin. Dos o ms hemocultivos con la misma puncin son
slo un hemocultivo, por lo que no se aaden probabilidades de aislamiento
y se encarece el procedimiento. Se deben evitar.
3. Cuando se extraigan dos o ms hemocultivos, es importante que los frascos
de cada extraccin se rotulen adecuadamente nada ms efectuarla, haciendo
constar si es la primera, la segunda o la tercera. Se debe evitar hacer parejas
cruzadas con los frascos de los hemocultivos una vez extrados todos (ej.
aerobio de la primera extraccin con anaerobio de la segunda y viceversa),
porque esa maniobra puede llevar a interpretaciones errneas de los resultados.
Catteres intravasculares
Desinfectar el lugar de insercin, retirar el catter con pinzas estriles, cortar
con tijera estril los cuatro centmetros distales e introducir el fragmento en
un bote estril.
Esputo y otras muestras de aparato respiratorio bajo
El esputo no es habitualmente una muestra muy adecuada para el diagnstico
de neumona, pues con gran frecuencia est contaminado por secreciones
orofarngeas; quizs el hemocultivo es una muestra ms valiosa. Se debe
pedir a los pacientes que antes de obtener la muestra se laven la boca o hagan
grgaras con agua, y que se quiten la dentadura postiza si la usan. El esputo
debe ser el resultado de una tos productiva, y no debe contener saliva. Se
debe obtener a primera hora de la maana, ya que as tiene ms probabilidades
de proceder de zonas profundas del rbol respiratorio. La muestra se debe
recoger en contenedor estril de boca ancha (tubo Falcon si es para cultivo
de micobacterias).
El BAL es mejor que el aspirado bronquial para diagnosticar neumona, y
es muestra de eleccin cuando no se pueden obtener muestras de esputo sin
contaminar. Especialmente recomendado si se desea bsqueda de Legionella sp.

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En el caso de que se busquen micobacterias, se aconseja recoger al menos
tres muestras, no siendo admisible ms de una muestra del mismo da y
tampoco una muestra de 24 horas.
Muestras farngeas
Las muestras de nasofaringe se toman para detectar portadores de N.
meningitidis, C. diphteriae, S. pyogenes y B. perthussis. Tambin se usan
para diagnosticar tos ferina. En todos esos casos se debe contactar previamente
con el LM. La toma se hace con un escobilln de mango fino y flexible que
se introduce suavemente por la fosa nasal hasta llegar a la nasofaringe, donde
se presiona y gira suavemente y se retira.
Las muestras de orofaringe se toman para diagnosticar faringoamigdalitis
por S. pyogenes. En este caso el escobilln se introduce por la boca, cuidando
de no tocar en ningn sitio hasta llegar a las amgdalas y la pared posterior
de la faringe, donde se presionar y se girar el escobilln.
Heces
Las muestras para cultivo se deben recoger lo antes posible en el curso de
la enfermedad, siendo poco aconsejable recogerlas con escobilln. Se pondrn
en un bote estril de tapn ancho.
Si se desea investigacin de parsitos, se recogern tres muestras en tres das
distintos (no en el mismo da) y se pondrn en un bote estril provisto de
lquido preservador. La muestra de heces no sirve para bsqueda de huevos
de oxiuro, que se buscan mediante el test de Graham.
Fluidos orgnicos
En ellos incluimos los lquidos peritoneal, pleural, pericrdico y sinovial, as
como la bilis y la mdula sea. Deberemos recogerlos con jeringa y aguja,
expulsar todo el aire de la jeringa y enviarlos al LM. Opcionalmente, estas
muestras se pueden enviar en tubos de hemocultivo, lo que aumenta las
probabilidades de aislamiento, si bien esto tiene dos desventajas: dificulta
la interpretacin en caso de aislamientos mixtos o de contaminacin cutnea,
y nos priva de la tincin, que es un arma muy valiosa. Por ello lo mejor es
enviarlas en frasco de hemocultivo ADEMS, y no EN LUGAR DE.
Lquido cefalorraqudeo
Se extrae con una aguja especial de puncin lumbar, recogindose el lquido

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en dos o tres tubos estriles. Es importante que si se desea cultivo se enve
al LM el ltimo tubo.
Abscesos
Tanto si son superficiales como si son profundos, se procurar tomar la
muestra con aguja y jeringa, recogiendo el pus de la parte ms profunda de
la lesin. Se evitar el escobilln siempre que sea posible.
Lesiones cutneas y de tejidos blandos
Siempre se limpiar muy bien la piel circundante con alcohol al 70% antes
de tomar la muestra. Si la lesin es abierta (quemadura, herida, lcera, fstula,
etc.) la muestra debe tomarse con escobilln previamente humedecido con
suero estril. Si la lesin es cerrada (vescula cutnea, petequia, celulitis),
se debe limpiar la piel y luego tomar la muestra con jeringa y aguja (en el
caso de la celulitis del borde en avance de la lesin). Si no se puede aspirar
material, se debe introducir y retirar con la misma aguja suero salino estril.

Criterios de rechazo de las muestras

Muestra mal o no rotulada y/o volante
mal o no cumplimentado
Tiempo de transporte prolongado
Orina: >1h a temperatura ambiente
Gonorrea: > 1h sin medio de transporte
Contenedor no adecuado (no estril)
Contenedor roto o mal tapado
Contaminacin orofarngea evidente
Contaminacin externa evidente
Muestras duplicadas recibidas al mismo
tiempo
Muestras duplicadas en el mismo da con
la misma peticin (salvo hemocultivos)
Muestra no adecuada para el cultivo pedido
Cantidad insuficiente
Si no hay suficiente para varias peticiones
se pedir al clnico que especifique la
prioridad de las mismas

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Muestras desaconsejadas por producir informacin cuestionable
Tipo de Muestra Comentario
Escobilln de lesin superficial oral o Preferible tejido o aspirado con aguja y
periodontal jeringa
Escobilln de lcera de decbito Preferible tejido o aspirado con aguja y
jeringa
Escobilln de lcera varicosa Preferible tejido o aspirado con aguja y
jeringa
Escobilln de herida por quemadura Preferible tejido o aspirado con aguja y
jeringa
Escobilln de lesin gangrenosa Preferible tejido o aspirado con aguja y
superficial jeringa
Escobilln de absceso perirrectal Preferible tejido o aspirado con aguja y
jeringa
Contenido intestinal No se procesar
Vmito No se procesar
Punta de catter de Foley No se procesar
Material de colostoma No se procesar
Loquios No se procesar
Aspirado gstrico de neonato No se procesar

Temperatura de almacenamiento de las muestras para Microbiologa

Estufa 360C o temperatura ambiente Frigorfico (2-80C)

Abscesos, fstulas, celulitis,
exudados de heridas en general Punta de catter
Hemocultivos Coprocultivo
Lquido cefalorraqudeo Lquido pericrdico
Lquido peritoneal/asctico Lavado gstrico
Lquido articular/sinovial Lavado bronquial

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 Lquido pleural Lavado broncoalveolar
Bilis Aspirado traqueal
Muestras de aparato genital femenino Esputo
Muestras de aparato genital masculino Orina obtenida por miccin
Lesiones cutneas Orina obtenida por catter
Frotis oral
Frotis nasal
Frotis nasofarngeo u orofarngeo
Puncin suprapbica (orina en jeringa)

Bibliografa
1. L.B. Reller, P.R. Murray y J.D. MacLowry. Cumitech 1 A. Blood Cultures
II. J.A. Washington II coord. ed. ASM. Wahshington DC 1982
2. Dorothy Branson. Procedure manual for clinical bacteriology. C. Thomas
Publisher. Springfield. Illinois (USA). 1983.
3. J. Michael Miller y Berttina B. Wentworth eds. Methods for Quality control
in diagnostic microbiology. APHA. Washington DC.1985
4. J. Michael Miller. A guide to specimen management in clinical microbiology.
2nd ed. ASM press. Washington DC (USA) 1999.

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