UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERA
INGENIERA AGROINDUSTRIAL

PRCTICA N9:
ESPECTROFOTOMETRA
DOCENTE:
Ing. Castro Zavaleta Vctor

INTEGRANTES:
Alegra Rodrguez Rony
Caballero Iparraguirre Anthony
Caballero Sopn Jhonny
INTRODUCCIN
La espectrofotometra es uno de los mtodos de anlisis ms usados, y se basa en
la relacin que existe entre la absorcin de luz por parte de un compuesto y su
concentracin. Cuando se hace incidir luz monocromtica (de una sola longitud de
onda) sobre un medio homogneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el
medio y otra transmitida, como consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea
atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la intensidad
del rayo de luz transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo de absorcin a
medir, la muestra puede estar en fase lquida, slida o gaseosa. En las regiones
visibles y ultravioleta del espectro electromagntico, la muestra es generalmente
disuelta para formar una solucin. Cada sustancia tiene su propio espectro de
absorcin, el cual es una curva que muestra la cantidad de energa radiante
absorbida, Absorbancia, por la sustancia en cada longitud de onda del espectro
electromagntico, es decir, a una determinada longitud de onda de la energa
radiante, cada sustancia absorbe una cantidad de radiacin que es distinta a la que
absorbe otro compuesto (Fig. 1)

El mtodo espectrofotomtrico se rige por dos leyes fundamentales: Ley de Lambert

y Ley de Beer.
LEY DE LAMBERT: Esta ley establece que cuando pasa luz monocromtica por un
medio homogneo, la disminucin de la intensidad del haz de luz incidente es
proporcional al espesor del medio, lo que equivale a decir que la intensidad de la
luz transmitida disminuye exponencialmente al aumentar aritmticamente el
espesor del medio absorbente (Fig. 2)

LEY DE BEER: La intensidad de un haz de luz monocromtica disminuye

exponencialmente al aumentar aritmticamente la concentracin de la sustancia
absorbente, cuando este haz pasa a travs de un medio homogneo (Fig. 3)
ESPECTROFOTMETRO: Un espectrofotmetro es un instrumento usado en
el anlisis qumico que sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la
relacin entre valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces
de radiaciones y la concentracin o reacciones qumicas que se miden en una
muestra.

Hay varios tipos de espectrofotmetros, que son de absorcin atmica, de absorcin

molecular (que comnmente se conoce como espectrofotmetro UV-VIS), y no debe
ser confundido con un espectrmetro de masa.

PARTES DE UN ESPECTROFOTMETRO. El espectrofotmetro, en general,

consta de dos dispositivos; un espectrmetro y un fotmetro. Un espectrmetro es
un dispositivo que produce, dispersa y mide la luz. Un fotmetro tiene un detector
fotoelctrico que mide la intensidad de la luz.

Espectrmetro: Produce un rango deseado de longitud de onda de luz. Primero un

colimador (lente) transmite un haz recto de luz (fotones) que pasa a travs de un
monocromador (prisma) para dividirlo en varias componentes de longitudes de onda
(espectro). Entonces un selector de longitud de onda (ranura) transmite slo las
longitudes de onda deseadas.

Fotmetro: Despus de que el rango deseado de longitud de onda de luz pasa a

travs de la solucin muestra en la cubeta, el fotmetro detecta la cantidad de
fotones que se absorbe y luego enva una seal a un galvanmetro o una pantalla
digital.

COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTMETRO

Fuente de luz

La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes condiciones:
estabilidad, direccionabilidad, distribucin de energa espectral continua y larga
vida. Las fuentes empleadas son: lmpara de wolframio (tambin
llamado tungsteno), lmpara de arco de xenn, lmpara de deuterio y
lmpara LED que se utilizan en los laboratorios.
Monocromador

El monocromador asla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o

se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromtica.

Est constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de

dispersin. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es
un lente que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de
onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la
longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija
de salida.

Compartimiento de Muestra

Es donde tiene lugar la interaccin con la materia (debe producirse donde no haya
absorcin ni dispersin de las longitudes de onda). Es importante destacar, que
durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su mxima expresin,
con base en sus leyes de absorcin, en lo que concierne al paso de la molcula
de fundamental-excitado.

Detector

El detector es el encargado de captar la radiacin y, a su vez, dejarla en evidencia

para su estudio posterior. Existen dos tipos:

a) los que responden a fotones;

b) los que responden al calor.

Fotodetectores

En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores para

percibir la seal en forma simultnea en 16 longitudes de onda, cubriendo
el espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes mviles
del equipo.
Celdas

Son los recipientes donde se depositan las muestras lquidas a analizar. El material
del cual estn hechas vara de acuerdo a la regin que se est trabajando; son
de vidrio o plstico si se trabaja en la regin visible, de cuarzo si se trabaja en la
ultravioleta y de NaCl si se trabaja la regin de infrarrojo. Se caracterizan por tener
dos paredes correspondiente a los lados pticos por donde cruza el haz de luz.

En el laboratorio de la universidad contamos con un espectrofotmetro de absorcin

SQ 2800 UV-VIS.

SQ-2800 es el diseo de uso general ms econmico en la lnea de SpectroQuest.

Se trata de un modelo autnomo con un ancho de banda fijo 4 nm y tiene todas las
caractersticas que ofrece la lnea SpectroQuest para una unidad independiente. Se
proporciona un excelente rendimiento para mediciones en el rango de 190 nm a
1100 nm. Cuenta con una gran pantalla LCD de ngulo con ajuste de contraste para
una visualizacin cmoda. El compartimento de la muestra grande se adapta a una
amplia gama de soportes celulares y accesorios, incluyendo sorber peristltica y
sistema Peltier. Opcional software de descarga de PC y software de aplicacin para
PC Windows hacen de este instrumento muy verstil.

Fig. 4. Espectrofotmetro de absorcin SQ 2800 UV-VIS.

OBJETIVOS

Determinar la longitud de onda adecuada (longitud mxima de absorcin)

y los niveles de concentracin adecuados para el anlisis cuantitativo por
espectrofotometra.

MATERIALES Y MTODOS

Probeta Balanza Analtica Pizeta con agua

Espectrofotmetro de
Azul de metilo absorcin SQ 2800
DISCUSIONES
Segn (patricia L, 2007) la principal materia colorante de la biga o achiote es la
bixina y la norbixina; (Normas Oficiales Mexicanas, NOM-119-SSA1 1994) indica
que la espectrofotometra mxima de la bixina es de 502nm y de la norbixina es de
482 nm, pero estos varian segn las concentraciones.
Segn (Wentworth, 1966). En ptica la ley de Beer Lambert, tambin conocida
como ley de Beer oley de Beer Lambert Bouguer es una relacin emprica que
relaciona la absorcin de luz con las propiedades del material atravesado
Segn (Ricci, Ditzler y Nestor, 1994.) La absorbancia es importante porque es
directamente proporcional a la concentracin (c), de la especie que absorbe la luz
en la muestra.
Segn (Perez Bendito D. y Pino Perez F. 1983) La espectrofotometra de
absorcin ultravioleta se basa en la absorcin de la radiacin ultravioleta visible por
el analito, como consecuencia de la cual se origina un estado activado que
posteriormente elimina su exceso de energa en forma de calor, pero como el calor
liberado es cuantitativamente pequeo, el trastorno que se genera por este
fenmeno es mnimo, garantizando resultados confiables.
RECOMENDACIONES
Haber dejado unos das considerables la norbixina para que esta est lo
suficientemente seca.
Debemos tener en cuenta de que mientras menos cantidad de azul de metileno,
se usa menor cantidad de agua destilada (segn la formula C1V1=C2V2), por ello
se prepara solo la muestra necesaria.
Como se requieren muestras de peso muy bajo se recomienda el uso de una
balanza analtica, ya que esta da ms precisin al trabajar con 4 o 5 decimales.

CONCLUSIONES

Segn esto la longitud y la absorbancia son proporcionales hasta que se

obtenga el punto mximo y de all empieza a descender, Segn su
concentracin varia la absorbancia del compuesto. Se determin la longitud de
onda ptima a las tres soluciones coloreadas teniendo como resultados las
siguientes: para solucin de color azul 586 nm, la solucin de color rojo una
longitud de onda de 371 nm y para la norbixina una longitud de onda de 900 nm
concluyendo que los datos obtenidos experimentalmente, estn dentro de los
datos tericos.