Bollenino di Microbiologia e Indagin di Laboratorio vo. 12, m. 2 192 : Sensibilita ad antibiotici di Listeria monocytogenes (L.m.) da alimenti M. Zavanella Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Lombardia e dell Emilia - Brescia Riassunto. 200 ceppi di Lm. islati da cami sono stati sagglati verso 22 antibiotici con un kit per antibiogramma, Numerosi casi di resistenza (ca 80%) si sono presentati con sulfadimetossina,nitrofu- razone e penicilina, mente risulatifavorevoll si sono avuti con ampicilina ¢ cefalotine Le MIC determinate con un kit per MIC erano basse per penicilina, ampicilin,eritromicina, cefa- lotina ed elevate per gentamicina etetracictina. ‘Summary. Antimicrobial susceptbiliy for Listeria monocytogenes (L.m.). 200 stain isolated from ‘meat were investigated against 22 antibiotics using a antibiotic sensitivity kit. Poor activity was obse ved with sulphadimethoxine, nitrofurazone and penicilin, Good results have been obtained with am- picillin and cephalothine. MICs determined on 60 strains with a kit for MIC were low for penicillin, ampicillin, erythromicin and cephalethine, while gentamicin and teiracycline required high concentra- Introduzione La listeriosi 2 nota da tempo specialmente in bovini, pecore e capre. Nell'uomo provoca principalmente meningoencefaliti neonatali e aborti (Gray, 1966). E stata riconosciuta tra le malattie di possibile origi- ne alimentare dopo alcuni focolai epidemici in Ame- rica ed Europa tra persone a rischio. Senza questi episodi clamorosi, la listeriosi sarebbe rimasta un problema trascurabile, sia in veterinaria che in medicina umana, essendo Ja sua incidenza modesta, La diffusione del germe responsabile, Listeria mo- nocytogenes (L.m.) & invece di ben altra portata (Blenden e Coll., 1987). Di conseguenza non mancano studi su Lm. soprat- tutto per la diagnosi e la prevenzione. Meno descrit- to, invece, risulta il controllo dell'infezione con gli antibiotici. Nonostante che le forme di batteriemia ¢ di meningite da L.m. vadano correttamente trattate con antibiotici, non esiste un accordo generale su un regime ottimale di terapia. Le esperienze in vitro di Larsson Coll. (1985) sug~ geriscono l'uso di tetraciclina, ampicillina, penicilli- 1, eritromicina, Moellering e Coll. (1972), visto che frequetemente L.m. viene inibita solo da elevate concentrazioni di singoli antibiotici (inattuabili in soggett compromessi) consigliano delle combinazioni siner- giche, del tipo penicillina + ampicillina. Altri Autori, constatate allergie da penicillina ¢ scar- so effetto battericida, ma solo batteriostatico, di pid sostanze (tra cui tetracicline, sulfamidici e cloramfe- nicolo), hanno proposto farmaci altemativi, in parti- colare cefalosporine semisintetiche, Beta-lattamici ¢ chinoloni. Sull’effetto di questi farmaci verso ceppi della prati- ca non se ne sa molto, come pure si hanno limitate notizie sulla sensibilita di L.m. isolate da uomo 0 da immuno-animali (Wetzler € Coll., 1967; Buchner ¢ Coll., 1968; Larsson ¢ Coll., 1985). Scarsissime informa- zioni si trovano inoltre in letteratura sul comporta- mento di ceppi da alimenti. Pertanto si@ ritenuto in- teressante portare un contributo alle conoscenze verificando la sensibilits di ceppi di L.m. di prove- nienza alimentare. Materiali e metodi Ceppi Baterici Sono stati saggiati 200 ceppi isolati da eami identifica Lm. ‘con prove biochimiche, sierologiche e biologiche (test su top0) seconde FDA (1987) Test di sensibilitd E stato scelto un kt (Sensititre veterinary - Radiometer [Biolife] Cod. APB-VET 2A) con antbiotici adatti per ceppi di origine animale 1 kit consente di determinare visualmente su piastra microtiter Bid predisposta il “break-point” sensbile-esstente per 4 ceppi Contemporaneamente verso 22 antibiotic Le piastre sono conservabli a temperatura ambiente per un anno. Per Mesecuzione del test con Lm. si prepara una sospensione del ceppo in Trypticase Soy Bréoth (TSB) + 06% estano di" lievto con torbidita di circa 0.5 MC Farland e Si esegue una dluzione 1:10 nelo stesso brodo es disuibusce 450 mel nei pozzet su tre colonne, usando prefeibilmente una piptta multicanae Dopo copertura delle paste con foglio adesivo, si incuba a + 37°C in termosato per 18:24 or. Le lewura di “sensibil” se il pozzettorimane limpdo. oppure Ai “resstete™ se si forma il classico precpitato a botione sul fondo. Per control sao fat riferimento al metodo di Kirby-Bauer, stminando i ceppi su pasta di Mueller-Hinton Agar con di schetti Sensi-Dise (BBL) secondo la tecnica deserita da Carer (1973), Gi anibiotic saps in parallel sono evidenziat nella tabla Minima concentrazione inibente (MIC) E stata determinata su 60 ceppi selerionat tr i precedent in ba se alla resistenza dimostrata verso almeno due dei quattro anti- biotici consiglati da Larsson e Coll. (1985): tetraciclina, ami cillia, penicilina,eritvomicina ‘Si 2 utilizzato un kit (Sensitite Mic ~ Radiometer [Biolfe) - ‘Cod. APOL) adaito per eram-positvi Figura 1. Risultati degli antibiogrammi di 200 ceppi di Listeria monocytogenes isola da aliment “eSensibilidad antibiotic di listeria monocytogenes (Lim, da amet Figura 2. MIC di 60 ceppi di Listeria monocytogenes igolati da alimenti kit consente di determinare visualmente su piastra microtiter la MIC verso 11 antibiotic Le piastre sono conservabili a temperatura ambiente per 6 mes er Tesecuzione del test si procede in modo analogo al test di sensiblita gid descritto, ad eccezione della diluizione di lavoro, che in questo caso & di 1:1.000. ‘Si considera MIC Ia pit bassa concentrazione di antibiotico ca pace di inibire Ia crescta del microrganismo. Cid equivale, in pratica, al primo pozzetto senza precipitato che si legge vertical mente nella colonna della piasira contenente le diluizioni scalar Vofilizate di ciasun antibiotico. Come ceppo di contrllo @ stato usato lo S. aureus ATCC 29213. Risultati Sono riportati nelle tabelle 1 © 2. Li) LTS TAG TLL LATTE ay a TA] 7 TW Discussione e conclusioni Come risulta dalla tabella 1, le maggiori percentuali di resistenza sono verso sulfadimetossina (85,5%), nitrofurazone (85%) e penicillina (79%). Buona effi- cacia in vitro hanno dimostrato invece ampicillina € cefalotina. Questi risultati concordano in larga misura con le ‘osservazioni, limitate a pochi ceppi di origine ani- male, di Wetzler e Coll. (1968). La sovrapponibilita del kit con il metodo classico di Kirby-Bauer & stata totale. Come risulta dalla tabella 2, le MICs» pitt basse so- no quelle di penicillina € ampicillina (0.25 - 0.5 megiml) nonché di eritromicina (<0.25 meg/ml) € cefalotina (2-4 meg/ml). Questi risultati concordano ampiamente con quanto rilevato nell’uomo da Moellering ¢ Coll. (1972) ne- gli USA e da Larsson e Coll, (1985) in Svezia. Da notare solo che i ceppi da alimenti avevano MICs elevate verso gentamicina (>32 meg/ml) ¢ comportamento eterogeneo verso tetraciclina (da 0.5 a 16 meg/ml),Bibliografia 1, Blenden D.C. ¢ Coll, Listeriosis. Javma, 191, 1546-1551, 1987. 2, Buchner LH. ¢ Coll. Clinical and Laboratory Aspects of Lis seria monocytogenes Infections, Am. J. Med., 45, 904-921. 1968. 3. 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