Plant extracts and its potential as biological control agents.

Secondary metabolites
Extractos vegetales y su potencial como controladores biolgicos. Metabolitos secundarios

Jos Daniel Herrera Gonzlez, Isaas Ruiz

ID: 402200165, 208260871
Laboratorio de Biotecnologa, Bachillerato en Qumica Industrial, Lic. Sandra Valdez Daz
Escuela de Qumica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de Costa Rica
Fecha de entrega: 2016-08-31

Abstract

The secondary metabolites are organic chemical compounds synthesized by living beings who do not
have an essential role in the growth or reproduction, i.e., unlike of primary metabolites the absence of a
secondary metabolite does not affect or prevent the survival of the organism. In plants, secondary
metabolites differ from the primary metabolites, since usually have a restricted distribution in the plant
kingdom, i.e., are often in a single plant species. The secondary metabolites are involved in the
ecological interactions between the plant and its environment, accomplishing different functions for
example, alkaloids (confer bitter taste and neuronal inhibition), saponins (affects metabolism, enzyme
inhibition), and cyanogenic glycosides (produce hydrocyanic acid, toxic). In this practice was carried
out identification of different secondary metabolites through qualitative tests (color appearances,
precipitate formation) and the bactericidal capacity and fungicidal capacity of aqueous and ethanol
extracts of plant tissues of leaves of the tree Persea americana (avocado) was studied by preparing
sensitivity discs in Petri dishes with different bacterial cultures.

Keywords: metabolites, secondary, alkaloids, saponins, cyanogenic, avocado.

Resumen

Los metabolitos secundarios son compuestos qumicos orgnicos sintetizados por los seres vivos que
no tienen un rol esencial en el crecimiento o reproduccin, es decir, a diferencia de los metabolitos
primarios la ausencia de un metabolito secundario no afecta o impide la supervivencia del organismo.
En las plantas, los metabolitos secundarios difieren de los metabolitos primarios, ya que por lo general
presentan una distribucin restringida en el reino vegetal, es decir, se encuentran con frecuencia en una
sola especie vegetal. Los metabolitos secundarios intervienen en las interacciones ecolgicas entre la
planta y su ambiente cumpliendo diferentes funciones, por ejemplo, los alcaloides (confieren sabor
amargo e inhibicin neuronal), las saponinas (afectan metabolismo, inhibicin enzimtica), y los
glucsidos cianognicos (producen cido cianhdrico, txico). En esta prctica se llev a cabo la
identificacin de diferentes metabolitos secundarios por medio de ensayos cualitativos (aparicin de
colores, formacin de precipitados) y se estudi la capacidad bactericida y fungicida de extractos
acuosos y etanlicos de los tejidos vegetales de hojas del rbol Persea americana (aguacate) mediante
la preparacin de discos de sensibilidad en placas de Petri con diferentes cultivos bacterianos.

Palabras clave: metabolitos, secundarios, alcaloides, saponinas, cianognicos, aguacate.

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Introduccin
En hbitats naturales, las plantas estn rodeadas
por un gran nmero de enemigos potenciales. Casi
todos los ecosistemas contienen una amplia
variedad de bacterias, virus, hongos, nematodos,
arcnidos, insectos, mamferos y otros animales
herbvoros. Por su naturaleza, las plantas no
pueden escapar estos seres que las pueden
amenazar, por lo que deben protegerse de otras
formas.
La cutcula (una capa externa cerosa de la planta)
y la peridermis (tejido protector secundario),
adems de dificultar la prdida de agua,
constituyen una barrera a la entrada de bacterias y
hongos. Adems, un grupo de compuestos
vegetales conocidos como metabolitos
secundarios, defienden a las plantas de los
herbvoros y microbios patgenos. Los
compuestos secundarios pueden tener otras
funciones, como en el caso de las antocianinas [2].
Los metabolitos secundarios son una gran
cantidad y diversidad de compuestos orgnicos
que no parecen tener una funcin directa con el
crecimiento y desarrollo; tampoco tienen funcin
reconocida en los procesos de fotosntesis,
respiracin, transporte de solutos, sntesis de
protenas, asimilacin de nutrientes,
diferenciacin o formacin de carbohidratos,
protenas y lpidos. Los metabolitos secundarios
tambin difieren de los metabolitos primarios
(aminocidos, nucletidos, azcares, acil lpidos) organismos vivos para reducir la densidad de la
en que tienen una distribucin restringida en el
reino vegetal. Es decir, un metabolito secundario
determinado se encuentra con frecuencia en una o
algunas especies vegetales o grupos de especies
relacionadas, por ejemplo los alcaloides, mientras
que los metabolitos primarios se encuentran en
todo el reino vegetal [2].
2016 Universidad Nacional de Costa Rica
El estudio de los metabolitos secundarios fue
iniciado por los qumicos orgnicos del siglo XIX
y principios del siglo XX, quienes se interesaron
en estas sustancias y las llamaron productos
naturales, debido a su importancia como drogas,
venenos, sabores y materias industriales [2]. Ms
recientemente, se descubri que muchos
metabolitos secundarios tenan importantes
funciones ecolgicas en las plantas, entre las que
se pueden mencionar:
Protegen a las plantas de la ingestin por
herbvoros y de la infeccin por patgenos
microbianos (funciones de defensa).
Sirven como atrayentes de polinizadores,
dispersadores de semillas y como agentes en
la competencia entre plantas.
Intervienen en las interacciones ecolgicas
entre la planta y su ambiente [3].
La lista de metabolitos secundarios en las plantas
es amplia, pero aun as los ms identificados y
utilizados hoy en da en amplios campos de la
industria son: alcaloides, quinonas, antocianinas,
cumarinas, saponinas, esteroides, flavonoides,
leucoantocianidinas y cardiotnicos, entre otros
ms. En general, los metabolitos secundarios se
dividen en tres grupos: Terpenoides, fenlicos y
compuestos nitrogenados [2].
El control biolgico es un mtodo que emplea
poblacin de otros organismos plaga. Una plaga
es cualquier organismo que produce un dao o
reduce la disponibilidad y la calidad de un recurso
humano (Hajek, 2004) [4]. Los recursos abarcan
desde la salud humana hasta plantas o animales
destinados a fines alimenticios, de produccin, o
al esparcimiento como las mascotas y plantas en
reas recreativas. Para el manejo de plagas existen
2
varios mtodos alternativos: el uso de productos
de sntesis qumica (plaguicidas); cultivos
genticamente modificados resistentes a plagas;
control biolgico; o bien la combinacin de una o
ms de estas tcticas, el manejo integrado de
plagas.
El empleo de qumicos como los plaguicidas no
siempre es la mejor estrategia para combatir una
plaga especfica debido a que frecuentemente est
asociado a efectos negativos como la resurgencia
de la plaga blanco luego de un lapso de tiempo,
los estallidos de plagas secundarias como
consecuencia de la mortandad de los enemigos
naturales que la controlaban (resultado de la baja
especificidad del plaguicida) y/o la adquisicin de
una resistencia al plaguicida por parte de la plaga.
Es as, que el uso del control biolgico, al no dejar
residuos qumicos y al actuar de manera ms
especfica y permanente sobre la poblacin
problema, fue ganando terreno como alternativa
viable en el manejo de la salud vegetal [1].
Adicionalmente, los metabolitos secundarios son
utilizados en escala industrial para la produccin
de insecticidas, colorantes, saborizantes,
aromatizantes y medicamentos en general. Con
respecto del alto valor econmico de algunos de
estos biofrmacos, bajos niveles de productividad
han sido usualmente encontrados en los sistemas
de produccin agrcola convencionales,
ocurriendo por una serie de motivos.
Este hecho genera la necesidad de desarrollar
sistemas alternativos de produccin y en este
contexto el cultivo de clulas y tejidos vegetales
ha sido considerado como un sistema de alto
potencial para la superacin de este problema;
ms all que se presentan algunas dificultades a su
viabilidad econmica que an no han sido
superadas.
2016 Universidad Nacional de Costa Rica
En funcin de esto, diversas estrategias han sido
empleadas objetivando aumentar los valores de
productividad de compuestos bioactivos en
sistemas de cultivo de clulas y tejidos vegetales
incluyendo la manipulacin epigentica la
elucidacin de vas biosintticas y la aplicacin de
tcnicas de biologa molecular, segn un abordaje
de ingeniera de vas metablicas.
Metodologa
Se realiz la preparacin de extractos vegetales
del rbol frutal de aguacate, primeramente de
extracto seco con anticipacin de una semana en
secado y luego la maceracin de extracto fresco
durante la seccin del laboratorio. Para cada una
de las evaluaciones de los metabolitos secundarios
y sus respectivas pruebas cualitativas, se realiz
una preparacin del extracto segn correspondiera
al metabolito a analizar, ya fuese en seco o fresco,
seguidamente se les aadi los reactivos y
soluciones para que favorecieran la observacin
del resultado. El procedimiento y anlisis de
extractos vegetales y su potencial como
controladores biolgicos se realiz siguiendo la
metodologa empleada en el manual de
Laboratorio de Biotecnologa Industrial escrito
por Lic. Sandra Valds et al 2016.
Seccin Experimental
Reactivos
Agar PDA y Agar Mueller Hinton.
Reactivo de Dragendorff y Reactivo Mayer.
HCl al 5%.
Diclorometano.
H2SO4 .
FeCl3 al 1%.
Etanol al 95%.
NaOH diluido.
NaOH al 5% en amonaco al 2%.
3
Objetivos Identificacin de los metabolitos secundaros del
tejido vegetal del rbol de aguacate
Realizar el anlisis qumico de los extractos de
las plantas.
Realizar la prueba de susceptibilidad de
microorganismos, ante los extractos vegetales.
Determinar el efecto bactericida y fungicida
de extractos acuosos y etanlicos de plantas
colectadas del Valle Central, va in vitro.

Resultados
Foto 1. Presencia de alcaloides. Foto tomada
Cuadro 1. Identificacin de los metabolitos
desde una cmara de celular por Jos Daniel
secundaros del tejido vegetal del rbol de
Herrera.
aguacate.

Metabolito
Resultado
secundario
Alcaloides Positivo (+)
Esteroides Positivo (+)
Saponinas Negativo (-)
Fenlicos y taninas Positivo (+)
Flavonoides
Leucoantocianidinas Negativo (-)
Cardiotnicos
Quinonas Negativo (-) Foto 2. Presencia de esteroides. Foto tomada
Antocianinas Positivo (+) desde una cmara de celular por Isaas Ruiz.
Cumarinas Positivo (+)

Foto 3. Ausencia de saponinas. Foto tomada

desde una cmara de celular por Jos Daniel
Herrera.

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Foto 4. Presencia de fenlicos. Foto tomada desde Foto 7. Presencia de antocianinas. Foto tomada
una cmara de celular por Jos Daniel Herrera. desde una cmara de celular por Jos Daniel
Herrera.

Foto 5. Ausencia de flavonoides,

Foto 8. Presencia de cumarimas. Foto tomada
leucoantocianidinas y cardiotnicos. Foto tomada
desde una cmara de celular por Isaas Ruiz.
desde una cmara de celular por Jos Daniel
Herrera.

Foto 6. Ausencia de quinonas. Foto tomada desde Foto 9. Ausencia de cardiotnicos, Foto tomada
una cmara de celular por Isaas Ruiz. desde una cmara de celular por Jos Daniel
Herrera.
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Anlisis de resultados
Al observar los resultados obtenidos, en la
fotografa 1 se puede observar la formacin de
turbidez en los tubos de ensayo, indicador de un
positivo para la presencia de alcaloides en el
extracto, esto se explica por el hecho, de que los
alcaloides son bases nitrogenadas que en
presencia de un cido diluido pueden convertirse
en sus respectivas sales [3].
Para el reconocimiento de esteroides y
triterpenoides en la fotografa 2 se observ la
aparicin de una coloracin verde oscuro casi
negra, indicador positivo de la presencia de
esteroides, lo cual se genera debido a que al
reaccionar con los reactivos anhdrido actico y
cido sulfrico, que actan como agentes
deshidratantes en grupos hidroxilos que propician
un aumento en la conjugacin de la insaturacin
en el anillo fusionado adyacente, generando
grupos cromforos que permiten su determinacin
[5].
En los ensayos realizados para la identificacin de
saponinas, se considera positiva la prueba si
despus de una agitacin vigorosa del extracto
hay formacin de espuma que persista al menos
por cinco minutos, los resultados obtenidos fueron
negativos para dicha prueba, indicativo de la
ausencia de saponinas en el extracto, evidenciable
en la fotografa 3.
En el reconocimiento de compuestos fenlicos y
taninos, en la fotografa 4 se logr visualizar en
los tubos de ensayo la aparicin de una coloracin
de azul violeta, indicador positivo de la presencia
de compuestos fenlicos y/o taninos en el
extracto, esto se explica por el hecho de el cloruro
frrico con fenol forma un complejo coloreado
llamado tetrakis fenol hierro III [6].
En los ensayos realizados para el reconocimiento
de flavonoides, leucoanocianidinas y
cardiotnicos, se considera positiva la aparicin
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de colores naranaja, rojo o violetas para
flavonoides, coloraciones rojas para
leucoantocianidinas y coloraciones prpuras o
violetas para cardiotnicos, sin embargo, durante
estas pruebas no se obtuvo dichas coloraciones,
indicativo de la ausencia de estos compuestos en
los extractos, evidenciable en las fotografas 5 y 9
[3].
En la identificacin de quinonas, se considera
positivo la aparicin de un color rojo cereza en la
capa acuosa del extracto que indica la presencia
de quinonas en la muestra, en la fotografa 6 se
evidencia la ausencia de las mismas al no
encontrarse rastro de dicha coloracin.
Para el reconocimiento de antocianinas, se
considera positiva la prueba ya que estos
compuestos se reconocen por generar diferente
color a pH alcalino y a pH cido, en la fotografa
7 se evidencia la presencia de stas en el extracto,
ya que a pH cido hay una coloracin amarillenta
tenue y a pH alcalino hubo una coloracin marrn
rojiza [3].
En la identificacin de cumarinas, se considera
positivo la aparicin de coloraciones verdes,
amarillas o rojizas, bajo la luz ultravioleta a
365nm aproximadamente, en la fotografa 8 se
logr observar una coloracin rojiza en el papel
filtro, indicativo de la presencia de cumarinas en
el extracto.
Finalmente con respecto a la evaluacin de la
capacidad bactericida y fungicida no se
observaron halos de inhibicin significativos para
las bacterias E. coli y Serratia por lo que se
concluye que los extractos acuosos de las hojas de
aguacates no tienen componentes bioactivos que
las defiendan ante dichos microorganismos.
6
Conclusiones
En los ltimos tiempos el desarrollo de la
prctica del control biolgico ha surgido
principalmente de la necesidad de
encontrar una alternativa a mtodos de
elevada toxicidad y persistencia como el
control qumico.

Referencias

1. Villacide J & Corley J. 2012. Introduccin a

la teora del control biolgico de plagas.
INTA EEA Bariloche. Argentina.
2. Taiz L & Zeiger E. 2006. Fisiologa vegetal.
Volumen 1. Universitat Jaume. USA.
3. Valds S. Manual de laboratorio de
Biotecnologa para qumica industrial.
Catedra de qumica orgnica y bioqumica;
2016, p 17.
4. Hajek A.E. 2004. Natural Enemies. An
introduction to biological control. Cambridge
University Press, New York.
5. Sandoval, M. (2013). Reconocimiento del
Colesterol. Accesado el 15/10/16. Disponible
en
http://es.slideshare.net/Milisanm/reconocimien
to-del-colesterol-quimica
6. Universidad Privada San Juan Bautista.
Identificacin de algunos compuestos
orgnicos. Accesado el 15/10/16. Disponible
en
http://html.rincondelvago.com/identificacion-
de-algunas-clases-de-compuestos-
organicos.html

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