UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIAS PECUARIAS

FACULTAD DE ZOOTECNIA

DETERMINACION DE LA PROTEINA POR METODOS

CUALITATIVOS Y CUANTITATIVOS

INTEGRANTES: LUNA ROSALES, Jeanpier Yojairo

DOCENTE: Ing. PAREDES ORELLANA, Walter Alberto

CURSO: BIOQUIMICA NUTRICIONAL

TINGO MARA

PER
 I. INTRODUCCION

Las protenas son, estructuralmente, un poco ms complejas que los hidratos

de carbono, qumicamente se caracterizan por ser compuestos nitrogenados,
es decir, aparte del carbono, hidrgeno y oxgeno (de los que se componan los
HC), contienen nitrgeno. Desempean mltiples funciones en nuestro cuerpo,
todas ellas de vital importancia, como formar parte de la estructura de los
msculos, huesos o tendones, funcionan como catalizadores de numerosas
reacciones qumicas, transportan numerosas sustancias como hormonas o
frmacos, participan en los sistemas de defensa y tambin pueden ser
utilizados como fuente de energa, aunque este proceso es energticamente
poco rentable para el organismo y genera productos txicos que deben ser
procesados y eliminados por el hgado y riones.

La mayora de las sustancias a cuantificar en bioqumica no poseen color. Por

lo tanto es necesario acoplar algn tipo de reaccin qumica que involucre la
aparicin o desaparicin de un cromgeno con la sustancia a cuantificar.

Objetivos

Determinar el porcentaje de protena de una muestra dada, por

medio de dos mtodos: cuantitativo y cualitativo.
Realizar la comparacin en base a resultados obtenidos
Determinar la concentracin de nitrgeno presente en la
muestra para luego ser transformado a travs de un factor en
protena.
 II. MARCO TEORICO

PROTENA

Son compuestos orgnicos constituidos por aminocidos dispuestos en unas

cadenas lineales y unidas por vnculos pptidos.

Las protenas son ensambladas a partir de los aminocidos usando la

informacin codificada en los genes. Cada protena tiene su propia secuencia
de aminocidos que se especifica por la secuencia de nucletidos del gen que
codifica esta protena.

Son la asociacin de varios aminocidos puestos en una cadena lineal.

Contienen carbono, oxgeno, nitrgeno e hidrgeno. Los aminocidos se unen
entre s por enlaces peptdicos, uniendo el extremo amino de uno con el
extremo carboxilo de otro aminocido. De acuerdo a la disposicin de estos
aminocidos en la cadena, es decir, el orden, es como va a estar dispuesto el
ADN, cdigo gentico propio de cada persona. CLARK, J.M. 1966).

La OMS recomienda un consumo diario de 0,8 a 1 gramo de protena por cada

kilo de peso para una persona adulta sana, si bien lo idneo -por saludable-
sera que la mitad de la ingesta recomendada de protena fuera de origen
vegetal, a expensas de legumbres, cereales y frutos secos. Al aplicar esta
simple operacin, se conocen los requerimientos individuales de protena. Para
una mujer adulta que lleva una vida moderadamente activa y tiene un peso
saludable de 60 kilos, sus requerimientos proteicos diarios totales son de 60
gramos (1 g x Kg peso x da = 1 g x 60 Kg x da = 60 gramos).
Propiedades

Las dos propiedades principales de las protenas, que permiten su existencia y

el correcto desempeo de sus funciones son la estabilidad y la solubilidad.

La primera hace referencia a que las protenas deben ser estables en el medio
en el que estn almacenadas o en el que desarrollan su funcin, de manera
que su vida media sea lo ms larga posible y no genere contratiempos en el
organismo.

En cuanto a la solubilidad, se refiere a que cada protena tiene una temperatura

y un pH que se deben mantener para que los enlaces sean estables.

Las protenas tienen tambin algunas otras propiedades secundarias, que

dependen de las caractersticas qumicas que poseen. Es el caso de la
especificidad (su estructura hace que cada protena desempee una funcin
especfica y concreta diferente de las dems y de la funcin que pueden tener
otras molculas), la amortiguacin de pH (pueden comportarse como cidos o
como bsicos, en funcin de si pierden o ganan electrones, y hacen que el pH
de un tejido o compuesto del organismo se mantenga a los niveles adecuados)
o la capacidad electroltica que les permite trasladarse de los polos positivos a
los negativos y viceversa.

Nutricin

Las protenas son esenciales en la dieta. Los aminocidos que las forman
pueden ser esenciales o no esenciales. En el caso de los primeros, no los
puede producir el cuerpo por s mismo, por lo que tienen que adquirirse a
travs de la alimentacin. Son especialmente necesarias en personas que se
encuentran en edad de crecimiento como nios y adolescentes y tambin
en mujeres embarazadas, ya que hacen posible la produccin de clulas
nuevas.

Estn presentes sobre todo en los alimentos de origen animal como la carne, el
pescado, los huevos y la leche. Pero tambin lo estn en alimentos vegetales,
como la soja, las legumbres y los cereales, aunque en menor proporcin. Su
ingesta aporta al organismo 4 kilocaloras por cada gramo de protena.

El valor biolgico de las protenas hace referencia a la proporcin

de aminocidos esenciales de los alimentos y su facilidad de asimilacin por
nuestro organismo. Expresa la fraccin de nitrgeno absorbido y retenido por el
organismo y representa la capacidad mxima de utilizacin de una protena.
Las protenas de mayor valor biolgico son las de origen animal (carnes,
pescados, huevos y leche), mientras que las vegetales tiene menos valor, bien
por ser menos digeribles o asimilables por su contenido en fibra (soja, levadura
de cerveza y legumbres).

MTODO KJELDAHL

El mtodo ms comnmente utilizado para la determinacin de nitrgeno

orgnico es el llamado mtodo Kjeldahl, que se basa en una volumetra cido-
base. El procedimiento es directo, el material necesario es muy simple (aparato
de destilacin Kjeldahl), y es fcilmente adaptable al anlisis rutinario de un
gran nmero de muestras. Es el mtodo estndar para la determinacin del
contenido proteico en grano, harinas, carnes, y en general, en materiales
biolgicos.

En el mtodo Kjeldahl, la muestra se descompone en caliente medio sulfrico,

en presencia de un agente reductor catalizador (mercurio, cobre o selenio).
Tambin suele adicionarse una sal neutra para aumentar el punto de ebullicin
de la disolucin de cido sulfrico. De esta forma que aumenta temperatura de
trabajo, con lo cual se favorece la descomposicin. El tratamiento transforma el
nitrgeno de la muestra en NH4+. La posterior adicin de una base fuerte libera
el NH3, que es arrastrado hasta un frasco colector por destilacin en corriente
de vapor.
El frasco colector contiene un volumen medido de una disolucin estndar de
cido, de forma que una fraccin de cido es neutralizada por el NH3. El cido
es parcialmente Al finalizar la destilacin se procede a valorar el cido no
consumido con una disolucin de base patrn. El volumen de disolucin bsica
consumido hasta llegar al punto de equivalencia permite conocer la cantidad de
NH3, y de esta forma, la cantidad de nitrgeno en la muestra, que puede
transformarse en contenido proteico en funcin del tipo de muestra ya que la
mayora de las protenas contienen aproximadamente el mismo porcentaje de
nitrgeno.
 III. MATERIALES

LUGAR Y FECHA DE LA PRCTICA

La presente prctica se realiz en el laboratorio de bioqumica nutricional

direccionado por el ing. Walter Alberto, paredes Orellana, dicho laboratorio
perteneciente a la universidad nacional agraria de la selva con las siglas
(UNAS), ubicada en la ciudad de tingo mara, distrito rupa - rupa, departamento
de Hunuco Per. A una temperatura de 24C, a una altura de 657 metros
sobre el nivel del mar (msnm).

MATERIALES Y REACTIVOS

Para determinacin cuantitativa

- Sulfato de cobre
- Oxido de selenio
- Sulfato de potasio
- cido clorhdrico
- cido sulfrico
- hidrxido de sodio
- Papel libre de nitrgeno
Otros materiales
- Protena patrn : casena con pureza del 99.12%
- Solucin problema: casena, gelatina, leche en tarro 5%, leche vaca,
solucin de ovoalbmina, almidn, yema de huevo.
- Calculadora
- Tubos de ensayo
METODOLOGA

Identificacin cuantitativa de protenas

a) Mtodo kjendahl
- En un papel libre de nitrgeno, colocar la muestra problema 0.3 gr. Se
le pone 1 gr. Del catalizador (sulfato de cobre, oxido de selenio,
sulfato de potasio), envolver el papel y colocar en un tubo d ensayo.
Adicionar 5 ml. De cido concentrado (cido clorhdrico o cido
sulfrico).
- se torna de color oscuro como caf tinto, llevar al m. kjendahl. Se
vuelve transparente. Agregar a la solucin NaOH.

b) preparacin de la solucin Patrn

- En una fiola de 100 ml. ; colocar 1 gr. De casena y luego aforrar,
seguidamente agregar agua hasta lograr llegar a 100 ml. Con 99.12%.
 IV. RESULTADOS

Mtodo cuantitativo

Determinacin de protena por Espectrofotometra (colorimetra)

X Y
S0 0.0 0.01
A = 0.002595
S1 0.20 0.197
S2 0.60 0.589 B = 0.991309
S3 1.20 1.197
R = 0.99990109
M1 0.04479 0.047
M2 0.25603 0.257
M3 0.98537 0.980
M4 1,24525 1.240

Concentracin de protena:

1gprot.
100ml
x
1ml 1g de casena = 0.9912 g
de protena pura
x 0.01g/ml

1g
100%
x
99.12%
x 0.9912g.prot.pura

0.9912 g
100ml
x
1ml
x 0.009912 g / ml
1g
1000mg
0.009912 g
x
x 9.912mg / ml

Hallando estndares

1ml
9.912mg
0.20ml
x
S1 x = 1.9824 mg

1ml
9.912mg
0.60ml
x
S2 x = 5.9472 mg

1ml
9.912mg
1.20ml
x
S3 x = 11.8944 mg

Hallando muestras

1ml
9.912mg
0.3684ml
x
M1 x = 3.6516mg

1ml
9.912mg
0.3293ml
x
M2 x =3.2640 mg

1ml
9.912mg
6.2236ml
x
M3 x = 61.688 mg
 a) Mtodo de Kjeldahl

Peso de Gasto de titulacin

muestra (PM) (GT.)
1 soya 0.3104 16.8
2 pasto kudzu 0.300 7.4
3 pasto Camern 0.3100 3.3
4 harina de 0.3100 24.6
pescado
Frmula para cuantificar nitrgeno:

N total%= Gasto de Titulacin x Normalidad x 0.014 = x 100

Peso de muestra
16.8mlx0.1x0.014
1) Soya %N total = x100
0.3104 g
%N total = 7.577
% Prot. = 7.577 x 6.25 = 47.358

7.4mlx0.1x0.014
2) pasto kudzu %N total = x100
0.300 g
%N total = 3.4533
% Prot = 3.4533 x 6.25 = 21.583

3.3mlx0.1x0.014
3) Pasto Camern %N total = x100
0.3100 g
%N total = 1.4903
% Prot = 1.4903 x 6.25 = 9.3144

24.6mlx0.1x0.014
4) Harina de pescado %N total = x100
0.3100 g
%N total = 11.1097
% Prot = 11.1097 x 6.25 = 64.4356
 V. CONCLUSION

Se logr determinar el porcentaje de protena de una muestra dada, por lo dos

mtodos: cuantitativo y cualitativo.

Se realiz la comparacin en base a resultados obtenidos

Se determin la concentracin de nitrgeno presente en la muestra para luego

ser transformado a travs de un factor en protena.
 VI. BIBLIOGRAFIA

- CLARK, J.M. 1966. Bioqumica Experimental, 1 Ed, Editorial Acribia,

1234567Zaragoza.

- https://es.khanacademy.org/science/biology/macromolecules/proteins-and-
amino-acids/a/introduction-to-proteins-and-amino-acids

- http://blogs.runners.es/nutricion/2009/04/01/introduccion-a-las-proteinas/