Mecanismos moleculares generadores de mutaciones

Mecanismos de reparación del ADN

 Anormalidades genéticas: Tipos y frecuencia de ocurrencia
TIPO FRECUENCIA
Mal segregación cromosomica 10-2 por división celular
((ej.:
j aneuploidías)
p )
Reordenamiento cromosomal 6 x 10-4 por división celular
(traslocaciones) o deleciones de
largos segmentos cromosómicos
Mutaciones puntuales y pequeñas 10-10 por pb./ división celular
deleciones o inserciones o 10-5 – 10-6 por gen / generación

Polimorfismo en el genoma:
- ∼1 diferencia cada 500 pb
- ∼10
107 diferencias por genoma diploide.
diploide
- Estas diferencias fueron causadas por mutaciones
Nuevas mutaciones en células germinales:
- cada espermátide contiene ∼100 nuevas mutaciones
∼ 1 de cada 10 espermátides contiene una nueva mutación perjudicial.
Las mutaciones son la causa
de la evolución y divergencia
de las especies
p
Tipos de mutaciones puntuales

secuencia normal:
CATTCACCTGTACCA
GTAAGTGGACATGGT

Transición (T-A a CG) Transversión (T-A a GC)

CATCCACCTGTACCA CATGCACCTGTACCA
GTAGGTGGACATGGT GTACGTGGACATGGT

Deleción Inserción
CATCACCTGTACCA CATCTCACCTGTACCA
GTAGTGGACATGGT GTAGAGTGGACATGGT

Deleciones e inserciones pueden involucrar a más de 1 pb

pb.
Las transiciones son la forma más
frecuente de mutaciones puntuales

Mecanismos que dan lugar a

transiciones espontáneas:

1) Mal apareamiento de formas

t t éi
tautoméricas

2) Desaminaciones:
a) de C (origina U que se aparea con A
dando lugar a transición G-C Æ A-T)

b) de A (origina hipoxantina que se aparea

con C dando lugar a transición A-T Æ GC)
Mal apareamiento entre formas tautoméricas de las bases nitrogenadas
 Mal apareamiento entre formas tautoméricas de las bases nitrogenadas

- La relación de concentración de tautómero raro / tautómero normal es de ~10-4

- La actividad correctora de la ADN pol disminuye estos errores a ~10-8
- Mecanismos de reparación post-replicativos bajan la tasa de mutaciones a ~10-10 -10-11
Si no son corregidos, estos cambios
resultarán en mutaciones (se perpetuarán)
en la 2da. ronda de replicación.
Resumen de las alteraciones espontáneas
que requieren reparación del ADN. (A) Sitios
modificados por daño oxidativo espontáneo
(fl h rojas),
(flechas j ) ataque
t hid
hidrolítico
líti (flechas
(fl h
azules), y metilación no controlada por S-
adenosilmetionina (flechas verdes), con el
tamaño de las flechas indicando la frecuencia
d l evento.
del t (B) Los
L dímeros
dí de
d pirimidicas
i i idi (T
o C) introducidos por radiación UV.
Agentes mutagénicos (aumentan la frecuencia
de mutaciones)
Mutágenos específicos:
A ál
Análogos d
de b
bases: 5-bromouracilo
5b il (análogo
( ál d
de T) y 2-
2
aminopurina (análogo de A) producen transiciones A-T ÅÆ G-C
Agentes desaminantes: Acido nitroso y sulfuroso desaminan A a
hipoxantina y C a U.
Ot
Otros: Hid il i reacciona
Hidoxilamina i con C ddando
d un dderivado
i d que
aparea con A (transición G-C Æ A-T).
Radiaciones ionizantes: La ionización de una base desplaza el
equilibrio hacia el tautómero raro
La alquilación de bases también puede generar mutaciones específicas
Mutágenos no específicos:
Agentes intercalantes: producen inserciones o deleciones (acridinas)
Agentes
g q
que p
producen lesiones diversas en el ADN:
Radiaciones (UV, X, gamma), radicales libres y otros agentes químicos pueden alterar o
eliminar bases, romper enlaces fosfodiester, formar uniones intra- o inter-hebras.
 Detección de agentes mutagénicos

Cepas de Salmonella
tiphimurium con una
mutación que las hace
dependientes de histidina

Extractos de hígado se usan

para testear sii una sustancia
i
puede adquirir
mutagenicidad luego de
biotransformación

Se pueden diseñar cepas

bacterianes sensibles a
diferentes tipos de
mutaciones
Resumen de lesiones en el ADN y agentes causantes

Base faltante: depurinación por ácido o calor (∼104 purinas diarias por célula en humanos)
Base alterada: radiaciones ionizantes, agentes alquilantes
Base incorrecta Base incorrecta: por mal apareamiento de tautómeros o bases ionizadas
por radiaciones, desaminación
Deleción-inserción: reactivos intercalantes (acridinas, bromuro de etidio)
Dí
Dímeros entre bases
b adyacentes:
d radiación
di ió UV
Ruptura de hebras: radiaciones ionizantes, radicales oxigenados, reactivos
químicos (bleomicina)
Unión covalente de ambas hebras: mitomicina C, derivados de psoralen

Estas lesiones son contínuamente reparadas

en la célula. Si el daño afecta a una sola hebra,
la información de la otra hebra es usada en la
reparación. Si afecta a ambas hebras, la
información debe prevenir de otra molécula de
ADN (recombinación)

Mecanismos de reparación más comunes:

a) -Acción correctora de ADN polimerasas
b) -Reparación post-replicación de mal
apareamientos
p de bases p
por escición.
-Reparación en cualquier tiempo
por
escición de bases o de nucleótidos
Actividad
A ti id d correctora
t de
d la
l
ADN polimerasa
- Si ell ddaño
ñ es en una hhebra,
b se usa lla otra como molde
ld para la
l reparación
ió
- Cuando ambas hebras están dañadas, se usa otra molécula de ADN homóloga como molde
Reparación
R ió de
d par de
d
bases erroneo
(mismatch)
Diferentes exonucleasas son usadas dependiendo de la localización relativa del daño al
sitio de corte
Un sistema similar opera en
eucariotes para reparar pares
d bases
de b erroneos
Reparación por escición de bases en procariotes
Reparación
p ppor
escición de
bases en
eucariotes
Reparación de daños por escición de nucleótidos
Escición de nucleótidos en eucariotes
Reparación directa de O6-metilguanina
Reparación directa de metiladenina y metilcitosina
Reparación directa
d dímeros
de dí de
d
timina
Reparación acoplada a la
t
transcripción
i ió

La ARN ppolimerasa ppuede

reclutar a las enzimas de
reparación al encontrar un daño
en el ADN