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HEMOSTASIA:

La hemostasia es el fenmeno fisiolgico que detiene el sangrado. La


hemostasia es un mecanismo de defensa que junto con la respuesta inflamatoria
y de reparacin ayudan a proteger la integridad del sistema vascular despus de
una lesin tisular. En condiciones normales la sangre circula en fase lquida en
todo el organismo. Despus de una lesin vascular la sangre se coagula slo en
el sitio de la lesin para sellar nicamente el rea lesionada. La transformacin
de sangre lquida en coagulo slido est regulada por el sistema hemosttico y
depende de una interaccin compleja entre la sangre (que contiene las clulas y
los factores que intervienen en la coagulacin) y pared vascular (el endotelio
vascular tiene un papel fundamental dentro de la coagulacin y la fibrinolisis, y
en condiciones fisiolgicas tiene propiedades anticoagulantes pero puede
presentar propiedades procoagulantes cuando se rompe el equilibrio). Por una
parte est el sistema de la coagulacin que junto con sus mecanismos de
retroalimentacin asegura la eficacia hemosttica y, por otro lado, hay el sistema
fibrinoltico que acta como regulador del sistema de la coagulacin, eliminando
la fibrina no necesaria para la hemostasia. El sistema tiene mecanismos de
seguridad: cada componente es inactivo y se tiene que activar, la mayora de los
componentes forman complejos con la superficie de las membranas que estn
localizados slo en la regin del vaso lesionado y, finalmente, existen los
inhibidores del proceso para evitar una activacin de la coagulacin y fibrinolisis
ms all de la lesin. La hemostasia resultante siempre depende del equilibrio
entre ambos sistemas, as vemos que: En las personas sanas el equilibrio es
perfecto. Si disminuyen los factores de coagulacin o el potencial fibrinoltico
sobrepasa el potencial de coagulacin se producir una hemorragia. Si el
potencial de coagulacin sobrepasa el fibrinoltico o bien disminuyen los factores
inhibidores de la coagulacin se producir una trombosis. La lesin quirrgica
estimula la respuesta hemosttica que en condiciones patolgicas puede
conducir a una hemorragia incontrolable durante la ciruga. Para evitar una
hemorragia excesiva y el riesgo que supone la transfusin es importante un
conocimiento de los problemas de la coagulacin con el objetivo de conseguir
un manejo ptimo de la hemostasia durante el periodo perioperatorio y minimizar
as las prdidas hemticas y la necesidad de transfusin.
El sistema de la coagulacin es normalmente inactivo pero se activa en pocos
segundos despus de la lesin. El estmulo que desencadenar la activacin de
la hemostasia es la lesin a nivel del endotelio (que normalmente hace de barrera
entre la circulacin y el tejido a irrigar) provocando el contacto de la sangre con
el tejido conectivo subendotelial. La respuesta hemosttica incluye tres
procesos: la hemostasia primaria, la hemostasia secundaria y la fibrinolisis;
existiendo siempre una interaccin entre la pared vascular y la sangre. La
hemostasia primaria se inicia a los pocos segundos de producirse la lesin
interaccionando las plaquetas y la pared vascular y tiene una importancia
enorme para detener la salida de sangre en los capilares, arteriolas pequeas y
vnulas. Se produce una vasoconstriccin derivando la sangre fuera del rea
lesionada. Las plaquetas se adhieren al vaso lesionado y se agrupan formando
el tapn plaquetar. As se sella la lesin de la pared y cede temporalmente la
hemorragia. La adhesin plaquetaria a la pared vascular est controlada por el
equilibrio entre las dos prostaglandinas (tromboxano A2 y prostaciclina) y
favorecida por diversas sustancias siendo una de ellas el factor von Willebrand
(FvW). La coagulacin o hemostasia secundaria es la interaccin de las
protenas plasmticas o factores de coagulacin entre s que se activan en una
serie de reacciones en cascada conduciendo a la formacin de fibrina. La fibrina
formar una malla definitiva que reforzar al trombo plaquetario
construyndose finalmente un coagulo o trombo definitivo. Intervienen en el
proceso una serie de protenas procoagulantes (los doce factores de coagulacin
responsables de la formacin de fibrina) y protenas anticoagulantes (regulan y
controlan la coagulacin evitando que los factores activados en un punto
concreto se dispersen y produzcan una coagulacin generalizada. Los ms
importantes son: antitrombina III, protena C y protena S). La coagulacin se
inicia por la exposicin del factor tisular de las clulas no vasculares que se pone
en contacto con la sangre debido a la lesin tisular formndose el complejo factor
hstico-factor VII activado. En la actualidad se cree que la activacin de los
factores IX y X por parte del factor hstico-FVIIa desempea un papel importante
en la induccin de la hemostasia. Una vez iniciada la coagulacin a travs de
esta interaccin, el inhibidor de la va del factor hstico bloquea la va y diversos
elementos de la va intrnseca en particular el factor VIII y IX se convierten en
reguladores principales de la formacin de trombina. Se activa la coagulacin
propagndose los diferentes pasos en la superficie celular en presencia de los
cofactores plasmticos unidos a las clulas y la reaccin culmina con la
formacin del coagulo de fibrina. Los monocitos y los neutrfilos circulantes
interaccionan con las plaquetas y las clulas endoteliales inicindose una serie
de uniones que producirn una interaccin estable de los leucocitos y plaquetas
en el cogulo. Los neutrfilos y los monocitos participan en la reaccin
inflamatoria local y los monocitos son inducidos a expresar el factor tisular y
contribuyen en la trombognesis y el primer nivel de curacin de la herida.
Aunque la descripcin del mecanismo de la coagulacin se divide en diferentes
fases todas estn estrechamente relacionadas entre s, es decir, las plaquetas
activadas aceleran la coagulacin plasmtica y los productos de activacin de la
coagulacin, como la trombina, inducen la activacin plaquetar.

La fibrinolisis es el ltimo proceso en el que se elimina la fibrina no necesaria


para la hemostasia con la finalidad de la reparacin del vaso y el restablecimiento
del flujo vascular. Los principales activadores fisiolgicos de la fibrinolisis son el
activador tisular del plasmingeno (t-AP) y el activador urinario del plasmingeno
(u-AP) que difunden desde las clulas endoteliales y convierten el plasmingeno,
absorbido en el cogulo de fibrina, en plasmina. La plasmina degrada el polmero
de fibrina en pequeos fragmentos que son eliminados por el sistema de limpieza
monocito-macrfago. Aunque la plasmina tambin puede degradar el
fibringeno, la reaccin es localizada debido a: Primero, el t-AP y algunas formas
del u-AP activan el plasmingeno de forma ms efectiva cuando est absorbido
por el cogulo de fibrina; segundo, cualquier molcula de plasmina que pase a
la circulacin es rpidamente neutralizada por el 2-antiplasmina (es el principal
inhibidor de la plasmina); y tercero, las clulas endoteliales liberan el inhibidor
del activador del plasmingeno (IAP) que bloquea directamente la accin del t-
AP. Ante un estmulo quirrgico la respuesta del sistema de la coagulacin ser
procoagulante en condiciones normales, por ello en el periodo perioperatorio se
pautar una profilaxis antitrombtica (basada principalmente en medidas
farmacolgicas, mecnicas y movilizacin precoz) que ya est muy protocolizada
en funcin de la ciruga realizada, patologa del paciente y el perodo de
inmovilizacin para evitar las complicaciones trombticas.
Sin embargo esta respuesta puede estar alterada por:
1. Alteraciones de la coagulacin congnitas.
2. Alteraciones de la coagulacin adquiridas por la patologa del paciente o
frmacos.
3. Alteraciones en relacin al procedimiento quirrgico.

TIEMPO DE SANGRIA

OBJETIVO:
Obtencin del tiempo que dura la hemorragia en el borde del lbulo de la oreja

MARCO TEORICO:
El tiempo de sangria es un examen basico de orientation en el estudio de la hemostasis
de un paciente. Es un me'todo "in vivo", que en condiciones fisiologicas mide la
capacidad de las plaquetas para funcionar normalmente formando el "tapon plaquetario"
de la hemostasis primaria. Para la interpretation de la funcion plaquetaria normal o
patologica se requiere que el recuento de plaquetas sea superior a 100.000 x mm3 : El
tiempo de sangria es un examen sencillo, de gran uso y utilidad, por ello es necesario
determinar el rango de sus valores normales. De esta manera se define tambien el nivel
patologico que dara una orientation ctinica importante en el preoperatorio o en el
enfermo que sangra. Fue nuestro interes determinar el tiempo de sangria en las
diferentes edades pediatricas, usando un metodo bien standarizado y obtener sus
rangos normales de variacin.

MATERIALES:
Lanceta desechable esteril
Tiras de papel filtro
Cronometro de mano
Torundas de alcohol

PROCEDIMIENTO
1. Se limpia perfectamebte con una torunda de algodn con alcohol el lbulo de la
oreja.
2. Puncione con la lanceta esteril el sitio elegido e inmediatamente poner en
marcha el cronometro.
3. Seque la sangre sin tocar la piel con el papel filtro cada 30 segundos, hasta que
cese la hemorragia, se detiene el cronometro anotando el tiempo transcurrido

FORMACION DE FIBRINA
OBJETIVO:
Determinar el tiempo de formacin de fibrina de sangre venosa tomada de la vena
mediana del antebrazo

MARCO TEORICO:

Formacin del cogulo de fibrina. La principal funcin hemosttica de la formacin del


cogulo de fibrina es proveer un apoyo estructural para la formacin del trombo in vivo.
El proceso inicia con la conversin de fibrin- geno a fibrina por la accin de la trombina,
formndose monmeros de fibrina; el ensamblaje es en un inicio espontneo, no
enzimtico, por uniones no covalentes de los monmeros de fibrina y la polimerizacin
de sta, y finalmente uniones intermoleculares covalentes por la presencia del FXIIIa.

El fibringeno, como se coment con anterioridad, consiste de un dominio E en donde


se encuentra la unin por puentes de disulfuro del FPA y FPB de las cadenas A y B,
respectivamente; la accin de la trombina sobre el fibringeno es producir protelisis y
liberacin del FPA al romper la unin en el dominio central E, y subsecuentemente la
liberacin del FPB de una manera ms lenta, exponiendo sitios de polimerizacin. Las
molculas de fibrina, una vez formadas, tienen un dominio E central y dos dominios
externos D; el ensamblaje entre ellos es no covalente. En presencia del FXIIIa, las
uniones entre fibrina se convierten de no covalentes a covalentes por la formacin de
uniones isopeptdicas entre cadenas - y - (figura 7). Los coagulos de fibrina con
uniones no covalentes, cuando son sujetos a estrs o fuerzas, presentan una
deformacin viscosa algunas veces irrecuperable; y con la incorporacin de uniones
covalentes entre las unidades de fibrina cambian radicalmente sus propiedades de
viscoelasticidad, siendo ms rgidos, con elasticidad perfecta, y gran resistencia a la
deformacin irrecuperable.

La conversin de fibringeno en fibrina se produce en 3 etapas:

1. Accin de la trombina sobre el fibringeno, con generacin de los fibrinopptidos A y


B y monmeros de fibrina.
2. Polimerizacin espontnea de los monmeros de fibrina.
3. Estabilizacin del cogulo de fibrina por formacin de enlaces covalentes entre los
monmeros de fibrina gracias a la accin de una transglutaminasa, el factor XIIIa15.

MATERIALES:
Ligador
Aguja calibre 22G
Toruntulas de algodn
Alcohol yodado
Lamina portaobjetos
Tubo de ensayo

PROCEDIMIENTO
1. Limpiar la zona de donde se extraer la muestra de sangre venosa.
2. Insertar de manera adecuada la aguja
3. Extraer aproximadamente 20 ml de sangre venosa en tubo de ensayo.
4. Colocar tres gotas en una sola lamina portaobjetos.
5. Con ayuda de la lanceta, contando cada 30 segundos determinar la formacin
del hilo de fibrina.
RETRACCION DE COAGULO

OBJETIVO

Obtencion de la cantidad de fibrina formada y su retraccin adems se mide el


numero y la funcin de las plaquetas

MARCO TEORICO
Evaluacin de la funcin plaquetaria y de la estructura de la fibrina en la induccin de la
retraccin del cogulo; es un parmetro de coagulacin utilizado para investigar la
posibilidad de enfermedad de Glanzmann.

La retraccin del cogulo depende de sobre todo de la funcin normal de las plaquetas,
una protena contrctil presente en la membrana de las plaquetas (tromboestenina), el
magnesio, el ATP y la piruvato kinasa. Este tambin est influenciado por el nivel del
hematocrito y la estructura y concentracin del fibringeno. La trombocitopenia y
tromboastenia se caracterizan por un cogulo friable con aumento en la cantidad de
suero liberado y disminucin de la cantidad de suero expresado. Con
hipofribrinogenemia, el cogulo es pequeo, firme y demuestra un aumento en escape
de g.rojos. Con el aumento de la fibrinolsis, el cogulo es suave e irregular con aumento
en el escape clulas rojas. En la coagulacin intravascular diseminada, el cogulo es
pequeo y * con aumento en el % de escape celular. En la disfibrinogenemia congnita
el cogulo es de tamao normal pero con el % de escape celular aumentado. El
recubrimiento de las plaquetas con paraprotenas (como en la macroglobulinemia) la
retraccin del cogulo es pobre. En la tromboastenia (enfermedad de Glanzmann) es
una condicin hemorrgica con recuento de plaquetas normal pero con tiempo de
sangra prolongado, retraccin del cogulo marcadamente disminuda y con anormal
agregacin y adhesin plaquetaria. La retraccin del cogulo defectuosa puede reflejar
una falla en la activacin del ADP de la actina en la membrana plaquetaria. Una
disminucin en la cantidad de glicoprotenas IIb y IIIa de la membrana se acepta como
la caracterstica de anormalidad de la membrana en la tromboastenia de Glanzmann.
Los procedimientos de retraccin del cogulo han sido ampliamente reemplazados por
las pruebas de agregacin plaquetaria, adhesin plaquetaria y estudios de liberacin
plaquetaria. Existen instrumentos que han sido desarrollados que miden el desarrollo
de la fuerza durante la retraccin del cogulo. La fuerza generada es traducida en un
cambio de voltaje que es grabado. De esta manera el efecto sobre la retraccin del
cogulo en la funcin de las plaquetas y la estructura de la fibrina puede ser cuantificada.
Este instrumento puede alargar la vida de los estudios sobre la retraccin del cogulo
seguido por los parmetros de cuantificacin de la retraccin de manera ms especfica
y reproducible. La disfuncin cualitativa de las plaquetas puede as ser caracterizada en
parte por la medicin de la retraccin del cogulo funcionalemente anormal. La
aplicacin en la prctica clnica deber esperar los resultados de los estudios de los
pacientes. Esto ha demostrado que los parmetros de la retraccin del cogulo
dependen de la temperatura con una inhibicin total a 15C.

Rango de referencia:
Volumen de coagulo = 50 60% Suero retenido en el coagulo = 0-20% liberado = 40-
50% escape celular.

MATERIAL Y EQUIPO
Equipo para extraccin de sangre venosa.
Gradillas para tubos
Tubos de ensayo con tapa rosca
Incubadora

PROCEDIMIENTO
1. Se extraen 15 ml de sangre en un tubo de ensayo.
2. Rotulamos el tubo
3. Se coloca en la incubadora a 37C durante 24 horas para que se forme el
coagulo.
4. Pasado el tiempo sealado se observa si el coagulo esta total o parcialmente
desprendido de las paredes del tubo de ensayo.
VALORES NORMALES: 48 64%

RECUENTO PLAQUETARIO

OBJETIVO:
Obtencion por el mtodo indirecto, el numero de plaquetas por mm3 de sangre.

MARCO TEORICO:
Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo
hemosttico del cuerpo. Son cuerpecillos hialinos que miden de 2-4 de bordes
irregulares, pero pueden tener forma esfrica u ovalada, carecen de nucleo y
son muy frgiles. Proviene de una celula gigante que mide 50-100 de dimetro
llamada megacariocito.
Una de las principales funciones de las plaquetas es participar en los
mecanismos de la hemostasia (Hemo = sangre, stasis = detencin)
adhirindose entre ellas y a las paredes de los vasos sanguneos lesionados,
para formar asi el trombo plaquetario o tapon hemostasico.

El recuento de plaquetas (PLT o PLQ) consiste en la determinacin del nmero de


trombocitos en un volumen determinado de sangre (generalmente, en 1 mm3).

El recuento de plaquetas puede realizarse, de una forma aproximada, contando los


trombocitos presentes en varios campos de una extensin sangunea observada
microscpicamente. Sin embargo, tambien se puede llevar a cabo un recuento de
plaquetas ms exacto, mediante el empleo de una cmara de recuento o, mejor an,
con contadores electrnicos de clulas.

El recuento de plaquetas practicadol mediante el examen de un frotis sanguneo


permite, adems, el estudio de la morfologa de los trombocitos.

MATERIALES Y EQUIPO
Microscopio
Portaobjetos
Material biolgico: sangre venosa o capilar
Reactivos: colorante Wright o Giemsa y aceite de inmersion

PROCEDIMIENTO:

1. Preparar un frotis sanguneo inmediatamente despus de haber obtenido la


muestra biolgica y dejar secar a temperatura ambiente.
2. Teir con colorante Wright.
3. Contar el numero de plaquetas por 1000 eritrocitos.
GRUPO SANGUINEO

OBJETIVOS:
Demostrar la reaccion antigeno-anticuerpo en antigenos de superficie
(aglutinacion).
Identificar los antigenos de superficie del sistema ABO (Lands-Teiner) en los
eritrocitos humanos mediante el uso de antisueros para determinar el grupo
sanguineo.

MARCO TEORICO

SISTEMA ABO

Nuestra sangre est compuesta por una porcin lquida llamada plasma y una parte
slida que contiene clulas sanguneas, nombradas hemates, leucocitos y plaquetas.
En promedio, el 55% de la sangre es lquida y el 45% est formado por clulas.

Los glbulos rojos contienen algo de protena en su superficie que se llaman antgenos
o aglutingenos. Son los antgenos que recibieron los nombres A, B, AB y O. La
incompatibilidad entre las sangres se presenta cuando existen diferencias entre las
protenas presentes en las superficies de los glbulos rojos del donante y receptor.

De hecho, solamente hay 2 tipos de antgenos, que son el A y B:

Si un individuo tiene los antgenos A en la superficie de sus glbulos rojos,


su sangre se clasifica como grupo A.
Si un individuo tiene los antgenos B en la superficie de sus glbulos rojos,
su sangre se clasifica como grupo B.
Si un individuo tiene antgenos A y antgenos B en la superficie de sus
glbulos rojos, su sangre se clasifica como grupo AB.
Si un individuo no tiene ni el antgeno A y ni el antgeno B en la superficie de
sus glbulos rojos, la sangre se clasifica como grupo O (o grupo cero).

La incompatibilidad sangunea se produce por la presencia de anticuerpos o aglutininas


en la sangre, que sigue la siguiente lgica:
Un individuo con glbulos rojos que presentan los antgenos A en la superficie
(grupo sanguneo A) tiene anticuerpos contra los glbulos rojos con
antgenos B. por lo tanto, cualquier sangre que contiene antgenos B ser
rechazada.
Un individuo con glbulos rojos que presentan los antgenos B en la superficie
(grupo sanguneo B) tiene anticuerpos contra los glbulos rojos con
antgenos A. por lo tanto, cualquier sangre que contiene antgenos A ser
rechazada.
Un individuo con glbulos rojos que presentan antgenos A y B en la
superficie (grupo sanguneo AB) no tiene anticuerpos contra glbulos rojos
con antgenos B ni contra glbulos rojos con antgenos A. Como no hay
anticuerpos, todos los grupos de sangre pueden ser transfundidos.
Un individuo con glbulos rojos que no presentan ni antgenos A
ni antgenos B en la superficie (grupo sanguneo O) tiene anticuerpos contra
los glbulos rojos con antgenos A y contra glbulos rojos con antgenos B.
Por lo tanto, cualquier sangre que contiene antgenos A o B ser rechazada.
Esto significa que esto individuo solamente puede recibir sangre grupo O.

SISTEMA RH

El sistema Rh sigue la misma lgica del sistema ABO. El antgeno Rh, tambin llamado
antgeno D, puede o no puede estar presente en las membranas de las hemates. Si
est presente, el paciente se clasifica como Rh positivo. Pacientes positivos Rh no
tienen anticuerpos contra el antgeno Rh.

Por otro lado, si el paciente no expresar el antgeno Rh en las membranas de los


glbulos rojos, se clasifica como Rh negativo. Pacientes Rh negativos tambin no tienen
anticuerpos contra el antgeno Rh, pero pueden desarrollarlos si se exponen a la sangre
Rh+.

MATERIALES:

Lamina portaobjetos.
Muestra de sangre capilar
Reactivos: suero anti-A, suero anti-B, factor Rh

PROCEDIMIENTO

1. Limpiar la zona de puncin con una torunda de alcohol


2. Realizamos la puncin con la lanceta
3. Depositamos con cuidado tres gotas de sangre en la placa.
4. Colocamos una gota de los reactivos en cada gota de sangre: suero anti-A,
suero anti-B y factor Rh.
5. Mezclamos cada gota con palillos de madera
6. Observamos aglutinacin .
BIBLIOGRAFIA:

GUYTON, C.G. and HALL, J.E. Tratado de Fisiologa Mdica. 11


Edicin. Elsevier, 2006.
Ganong W. 2006. Fisiologa mdica. Ed. El Manual Moderno. Mxico.
Cervera P., Clapes J. y Rigolfas R. 2004.
HarrisonMedicina from McGraw-Hill Medical. Harrison Principios
de Medicina Interna, 19e. Medical updates.
Robbins LS, Cotran SR, Kumar V. Patologa Estructural y Funcional. 3a
ed. Mxico: Interamericana; 1987