Vous êtes sur la page 1sur 8

GRASAS Y ACEITES,

61 (2),
ABRIL-JUNIO,175-182, 2010,
ISSN: 0017-3495
DOI: 10.3989/gya.087609

Modelado de un reactor tubular de lipasas inmovilizadas para la produccin de


glicerol y cidos grasos a partir de aceites

Por Sebastin Oddone,b Mariano Grassellia y Anah Cuellasa,*

a
Universidad Nacional de Quilmes Roque Senz Pea 352 Bernal . B1876BXD. Bs. As. Argentina
b
Instituto de Tecnologa, Facultad de Ingeniera y Ciencias Exactas, Universidad Argentina de la
Empresa, Lima 717, C1073AAO. Ciudad Autnoma de Bs. As. Argentina.
(*Autor para la correspondencia: acuellas@unq.edu.ar)

RESUMEN computationally. The obtained results allow for optimizing


both the operative variables and the economic aspects of
Modelado de un reactor tubular de lipasas inmovili- industrial processes.
zadas para la produccin de glicerol y cidos grasos a
partir de aceites. KEYWORDS: Bioreactor Immobilization Lipase
Modeling Oils Simulation.
Los avances en el diseo de biorreactores en la industria
de grasas y aceites permiten realizar la hidrlisis de triglicri-
dos en condiciones suaves, mejorando la productividad y
evitando la formacin de subproductos indeseables. En el 1. INTRODUCCIN
presente trabajo se desarrolla un modelo matemtico que
describe la actividad hidroltica de un reactor tubular con lipa- La investigacin bsica y aplicada dirigida a la
sas inmovilizadas para la produccin de cidos grasos a par- manufactura a escala industrial de productos deri-
tir de aceites comerciales. Se aplico el mtodo numrico de vados de lpidos se ha apoyado en el excedente de
Runge Kutta de alto orden, considerando que no hay acumu-
grasas y aceites de los pases ms desarrollados.
lacin de sustrato en la superficie de la membrana, donde se
encuentra la enzima. Adems se analizaron distintas ecua- Los avances cientficos-tecnolgicos en el rea,
ciones de velocidad de reaccin basadas en la cintica de han permitido sustituir procesos qumicos, que re-
Michaelis-Menten y en un mecanismo de ping-pong bi-bi. quieren alto consumo de energa, por procesos en-
Los datos experimentales en sistemas discontinuos forman zimticos que emplean condiciones suaves de re-
la base del desarrollo del modelo matemtico, empleado pa- accin y presentan adems mayor actividad y
ra simular el proceso computacionalmente. Los resultados especificidad (Arrollo, 1998; Maroto et al., 2001;
obtenidos permitiran optimizar las variables operativas y los
aspectos econmicos del proceso industrial. Schmid et al., 2001; Ramachandran et al., 2002;
Cuellas, 2005).
PALABRAS CLAVE: Aceites Bioreactor Inmoviliza- Las lipasas (EC 3.1.1.3) se encuentran amplia-
cin Lipasa Modelado Simulacin. mente distribuidas en la naturaleza y pueden catali-
zar una amplia gama de reacciones qumicas, mu-
chas de las cuales constituyen un importante
SUMMARY
potencial tecnolgico en industrias alimenticias,
Modeling of an immobilized lipase tubular reactor for farmacuticas y de detergentes. La hidrlisis rever-
the production of glycerol and fatty acids from oils. sible de triglicridos originando cidos grasos y gli-
cerol es una de las aplicaciones ms importante.
Advances in the design of a bioreactor in the fats and Esta reaccin tiene lugar a travs de pasos inter-
oils industry have permitted the hydrolysis of triglycerides medios que dan lugar a la formacin de diglicridos
in mild conditions and improved productivity while avoiding y monoglicridos (Jaeger y Reetz, 1998; Nardini et
the formation of unwanted byproducts. The present work
develops a mathematical model that describes the hydrolytic
al., 2000; Jaeger y Eggert, 2002; Shamel et al.,
activity of a tubular reactor with immobilized lipases for the 2007; Illanes, 2008).
production of glycerol and fatty acids from the oil trade. Runge Si bien se cuenta con una extensa bibliografa
Kuttas numerical method of high order has been applied, sobre la hidrlisis de grasas y aceites, aun no se
considering that there is no accumulation of the substratum ha descrito un modelo que prediga las velocidades
in the surface of the membrane, where the enzyme is. At the de hidrlisis en forma adecuada. Sin embargo, en
same time, different equations based on the kinetic model
of Michaelis Mentens and the Ping-Pong bi-bi mechanism
general, distintos estudios aseguran que el modelo
were examined. Experimental data in discontinuous systems cintico de ping-pong bi-bi, se ajusta para descri-
are the basis for the development of the quantitative bir la accin cataltica de las lipasas independien-
mathematical model that was used to simulate the process temente de la reaccin considerada (figura 1)

175
SEBASTIN ODDONE, MARIANO GRASSELLI Y ANAH CUELLAS

(Cleaned, 1963; Torres et al., 2007; Chew, et al., 1998; D Olivera et al., 2002; Fernndez-Lorente et
2008). al., 2006).
El auge en el empleo de enzimas industrialmen- El objetivo del presente trabajo, consiste en de-
te, ha permitido desarrollar tcnicas de inmoviliza- sarrollar un modelo que permita predecir el com-
cin enzimtica que permiten la reutilizacin, mejo- portamiento de un reactor continuo de Lipasa B de
ra la estabilidad y facilita el desarrollo de procesos Candida antrtica inmovilizada con actividad hidro-
continuos. A pesar de estos beneficios, no siempre ltica para la obtencin de cidos grasos y glicerol.
es factible trabajar con una enzima inmovilizada. Para tal fin se han obtenido derivados inmoviliza-
La aplicacin de esta tecnologa depende de distin- dos en polietileno de alta densidad activado previa-
tos factores como: la eleccin del mtodo de inmo- mente con glutaraldehdo y se ha evaluado su acti-
vilizacin y del soporte; las condiciones de opera- vidad en reacciones discontinuas utilizando como
cin; el tiempo de vida til del catalizador; el cambio sustrato aceite de girasol comercial. A partir de es-
de escala y el control del desarrollo microbiano du- tos ensayos se obtuvieron los parmetros cinticos
rante el proceso (Malcata et al., 1990; Paiva et al., del proceso. Los resultados obtenidos, permitiran
2000; Maroto et al., 2001; Schmid et al., 2001; optimizar tanto las variables operativas como los
Cuellas, 2005; Moreno Safra y Perea Villamil, aspectos econmicos de procesos industriales
2008).
Las lipasas han sido inmovilizadas por diferen-
tes mtodos: adsorcin, entrecruzamiento, unin 2. MATERIALES Y MTODOS
covalente y atrapamiento fsico, utilizando como
soporte tanto materiales orgnicos, como inorgni- 2.1. Materiales y equipamiento
cos. Sin embargo los protocolos que involucran
tcnicas mixtas, confieren mayor estabilidad y re- Reactivos
sistencia al biocatalizador. En general, estos proce-
dimientos consisten en inmovilizar las lipasas en Lipasa B de C. antartica de Novozyme (5000 U/ml).
una resina de intercambio inico o un soporte poli- Aceite puro de girasol comercial marca Cauelas,
mrico utilizando un reactivo de cross-linking co- origen Argentina. Polietileno de alta densidad sin-
mo, dialdehdos, diiminosteres, diisocianatos, sa- terizado de 50% de porosidad y 70 m promedio
les de bisdiazonio y diaminas. Estos reactivos de dimetro de poro. Glutaraldehdo Sigma. Acido
bifuncionales favorecen la unin tanto con el sopor- oleico aportado generosamente por la empresa
te como con la enzima (Balco et al., 1996; Arroyo, Chr Hansen Argentina SAIC. El resto de los reacti-
vos y solventes empleados en las diferentes tcni-
cas fueron de grado analtico.
G
k1 Equipos
E-OH E-OH-G
k-1 El estudio se llevo a cabo en base a un reactor
de acrlico, que contiene un tubo de polietileno de
FA FA G alta densidad que acta como soporte de la enzi-
k-p kp ma. La porosidad de este material es del 50% y el
dimetro promedio de los poros es 70 m. Las me-
k4 k4 didas de este tubo son: 6 cm de longitud, 12.7 mm
de dimetro externo y 4 mm de dimetro interno. El
E-FA-LG rea de intercambio efectiva es 0.1 m2/g y la capa-
E-OH-FA cidad del reactor es 7 ml aproximadamente.
k-2 k2
2.2. Metodologa
kQ k-Q
H2O LG LG
Los ensayos experimentales se realizaron por
triplicado y el error experimental no sobrepaso en
k-3
ningn caso el 10 %.
E-FA-H2O E-FA
k3

H2O Inmovilizacin de la lipasa

E-OH: Enzima libre Para obtener el derivado enzimtico se recurri


E-FA: Interrmediario enzimtico acilado a un protocolo mixto de inmovilizacin. En primer
G: Fraccin de Glicerol lugar, el polietileno se puso en contacto 24 hs con
LG: Glicerol
*: Asociacin una solucin de glutaraldehdo al 10%. Al cabo de
-: Unin covalente este perodo de tiempo, el soporte fue lavado con
Figura 1
buffer fosfato pH 7 e incubando por 24 hs en una
Representacin esquemtica del mecanismo ping-pong solucin al 50% de la enzima. Finalmente, el exce-
bi-bi para la hidrlisis de grasas y aceites. dente de enzimas fue eliminado con un enjuague

176 GRASAS Y ACEITES, 61 (2), ABRIL-JUNIO, 175-182, 2010, ISSN: 0017-3495, DOI: 10.3989/gya.087609
MODELADO DE UN REACTOR TUBULAR DE LIPASAS INMOVILIZADAS PARA LA PRODUCCIN

con buffer fosfato. La determinacin de la protena et al., 2007; Torres et al., 2007; Chew et al., 2008;
inmovilizada se realiz por diferencia entre el con- Al-Zuhair et al., 2009).
tenido total de protena en la solucin enzimtica Como el nmero de parmetros requeridos por
inicial y la protena final soluble una vez terminado el mecanismo Ping Pong bi bi en su forma general
el proceso de inmovilizacin. La protena en la so- es grande, es muy posible que ocurra una sobre-
lucin enzimtica fue determinada mediante el m- parametrizacin. Es decir, el nmero de parme-
todo de Bradford (1976) utilizando albmina de tros del modelo es mayor que el nmero de grados
suero bovino como estndar. de libertad del mismo. Para evitar esto se han apli-
cado algunas simplificaciones. Asumiendo que
existe un paso limitante en la reaccin, se pueden
Evaluacin de la actividad hidroltica plantear dos posibilidades:
El grado de hidrlisis del aceite se llev a cabo 1) Que el paso limitante de la reaccin sea la
mediante la tcnica colorimtrica de Lowry y Tins- deacilacin (mecanismo A).
ley (1976). Este mtodo consiste en colocar un vo- 2) Que el paso limitante de la reaccin sea la
lumen de muestra a determinar en un recipiente, acilacin (mecanismo B).
agregar 5 ml de benceno y agitar hasta disolver la
muestra. Luego, se agrega 1 ml de reactivo I (solu- Estos mecanismos se pueden ver en una forma
cin acuosa de acetato de cobre al 5% filtrado, sencilla como diagramas de King Altman (Figura 2).
Las expresiones de velocidad basadas en los
ajustando a pH 6.0-6.2 con piridina) y se agita en
mecanismos propuestos son:
vortex durante 2 minutos. A continuacin, se centri-
fuga 5 minutos a velocidad mxima. Por ltimo, se Mecanismo A
mide espectrofotomtricamente la fase superior a
Vmax,f [G]
715 nm. rv,hid,A  (1)
Para obtener la concentracin de cidos grasos Km,G  [G]
[% v/v] se realiz una curva patrn con cido oleico
puro. Kp
.
E FP
K-p[P][Q]_O
Constantes cinticas
Los parmetros cinticos fueron calculados por
regresin no lineal, a partir de datos experimentales k-1
determinados en un reactor batch con agitacin.
K1[G] Mecanismo A

2.3. Desarrollo del modelo matemtico


E
k3 k1[G]
Para caracterizar al biorreactor, se propone
analizar el comportamiento de diferentes modelos k-3[Q] k-1
cinticos sobre una serie de datos experimentales . .
EQ EG
obtenidos en un reactor discontinuo.
k-2[P]-0 k-p
Para el desarrollo del modelo se tuvieron en
cuenta los siguientes aportes: k2 kp
a) La velocidad de reaccin de hidrlisis. FP
Mecanismo B
b) La velocidad de prdida de la actividad de la
enzima inmovilizada. k4 E
c) Balances de materia macroscpicos. k1[G]

d) Mecanismo de la hidrlisis enzimtica


k-4 [Q] k-1
La reaccin catalizada por la lipasa puede ser EQ EG
vista como la produccin de un residuo alcohol y
un cido graso libre a partir de cada molcula de
glicrido.
En cuanto a la velocidad de reaccin, se aplica- kO k-O k-p kp
ron mecanismos ping-pong bi-bi. En todos los ca-
sos la concentracin de sustrato se representa co-
mo la concentracin molar de puentes steres FW FP
accesibles [G]. Este tipo de modelo cintico, similar k-3 k-2 [P]
al mecanismo de hidrlisis de la quimiotripsina,
provee un ajuste adecuado de los datos experi- k 3[ W ]
k2
mentales en la accin cataltica de las lipasas (Cle- F Mecanismo C
land, 1963; Garca, 1992; Malcata, 1990; Malcata Figura 2
et al., 1992a; Paiva et al., 2000; Ramachandra et Diagramas de King Altman correspondientes a formas
al., 2002; Torres et al., 2003; Segel, 1993; Shamel simplificadas del mecanismo Ping Pong Bi Bi.

GRASAS Y ACEITES, 61 (2), ABRIL-JUNIO, 175-182, 2010, ISSN: 0017-3495, DOI: 10.3989/gya.087609 177
SEBASTIN ODDONE, MARIANO GRASSELLI Y ANAH CUELLAS

Mecanismo B continuo; de esta forma es posible predecir el com-


portamiento de dicho biorreactor. El modelo pro-
Vmax,f
[G] puesto para la reaccin en un equipo continuo es el
Km,G siguiente:
rv,hid,B  (2)
[G] [G0]  [G]
1  d [G] F1 F2 a(t)
Km,G Ki,Q  [G0]  [G]  rv,hid, (6)
dt V V a0
Por su parte, el modelo completo Ping Pong bi bi o
Mecanismo C se puede expresar de la siguiente forma donde F1 es el flujo de entrada, F2 es el flujo de sa-
lida y V es el volumen del equipo.
(Vmax,f Vmax,r [W ]) [G ] Definiendo al tiempo de residencia, tr, como el
rv,hid,C  (3)
(Vmax,r Km,G [W ])  (Vmax,r Km,W  Vmax,r [W ])[G ]  X  Y cociente entre el volumen del equipo y el flujo de
donde entrada o de salida, y asumiendo que las corrien-
tes de alimentacin y de descarga son iguales, en-
X ( Vmax,f Km,Q
Keq

Vmax,f Km,P
Keq

Vmax,r Km,Q
Ki,Q )
[W ] ([G0]  [G]) tonces:
1 F1 F2
y   (7)
tr V V
Vmax,f Km,Q Vmax,f
Y [G]([G0]  [G])  ([G0]  [G])2 y la ecuacin (6) se puede escribir como:
Keq Ki,Q Keq
d [G] 1
[G0] representa la concentracin inicial de puentes s-  ([G0]  [G])  rv,hid ekdt (8)
teres accesibles para la hidrlisis, [G] es la concentra- dt tr
cin molar de las molculas de glicridos en las proxi- Integrando esta ecuacin, con condicin inicial
midades de la lipasa inmovilizada (0  [G]  [G0]). t  0 [G]  [G]i y reemplazando con las expre-
rv,hid,i son las velocidades de reaccin correspondien- siones de velocidad, se puede obtener la variacin
tes a cada modelo i. El resto son parmetros caracte- de la corriente de salida con el tiempo, es decir,
rsticos de los modelos cinticos, velocidades mxi- que cantidad de producto se forma en el interior del
mas, constantes de saturacin, inhibicin, etc. reactor en funcin del tiempo.
Los estudios de simulacin computacional, se
Prdida de la actividad enzimtica llevaron a cabo mediante el toolbox Simulink del
software Matlab.
La prdida de la actividad enzimtica con el pa-
so del tiempo es un aspecto importante del mode-
lado de procesos catalizados por enzimas. Con el 3. RESULTADOS Y DISCUSIN
objetivo de modelar el sistema, se puede asumir
que las prdidas de activacin en el proceso ocu- 3.1. Proceso de inmovilizacin
rren en un solo paso que es caracterizado por una
expresin de velocidad de primer orden: La obtencin del derivado enzimtico se realizo
a partir de la inmovilizacin de la enzima lipasa B
a  a0ekdt (4) de C. antartica en una membrana de polietileno ac-
donde a es la actividad de la enzima en el tiempo, tivado previamente con glutaraldehdo. Este proce-
a0 es la actividad inicial de la enzima y kd es la dimiento mixto de inmovilizacin permite obtener
constante de desactivacin de la enzima. de forma sencilla biocatalizadores con alta activi-
dad, estabilidad y resistencia. Trabajos previos rea-
lizados en distintos soportes coinciden que el em-
Modelo de la reaccin en un reactor Batch pleo de gluaraldehdo como agente bifuncional
mejora la estabilidad de los derivados sin afectar la
Para obtener los parmetros presentados ante- actividad enzimtica, aumenta la versatilidad y am-
riormente, se utiliz un reactor Batch (en las mis- plia la aplicacin de las enzimas inmovilizadas en
mas condiciones de trabajo utilizadas para la reac- distintos procedimientos. (Gray et al., 1990; Ferrei-
cin en continuo). La ecuacin que se propone en ra et al., 1998; Arroyo et al., 1995; Migneault 2004;
este trabajo para describir el comportamiento del Alonso et al., 2005; Betancor, 2006; Mateo et al.,
reactor discontinuo es la siguiente:
2007).
d [G] a(t) Si bien se dispone de diferentes metodologas
 rv,hid (5) para la inmovilizacin de lipasas, estas presentan
dt a0
dificultades en su aplicacin. Por ejemplo la tcnica
donde rv,hid es reemplazado por cada uno de los de absorcin en membranas, caracterizado por su
modelos propuestos. simplicidad y bajo costo, es de poca aplicabilidad
debido a la prdida enzimtica. Por otro lado los
Modelo de la reaccin en un reactor continuo procesos de inclusin en membrana, presentan
problemas de transferencia de masa disminuyendo
Los parmetros cinticos obtenidos en sistemas la accesibilidad de los reactivos al sitio activo de la
discontinuos, se incorporan a un modelo de reactor enzima. Por ultimo la unin covalente provoca ge-

178 GRASAS Y ACEITES, 61 (2), ABRIL-JUNIO, 175-182, 2010, ISSN: 0017-3495, DOI: 10.3989/gya.087609
MODELADO DE UN REACTOR TUBULAR DE LIPASAS INMOVILIZADAS PARA LA PRODUCCIN

neralmente, cambios conformacionales que le con- Para ello se llevaron a cabo determinaciones
fiere rigidez a la estructura tridimensional de la en- experimentales de hidrlisis en sistemas disconti-
zima. De esta forma la estrategia mixta de nuos (o batch). Se presentan los resultados obteni-
inmovilizacin utilizada en el trabajo, no solo re- dos en la Tabla 1.
suelve los problemas de prdida enzimtica y dis- Los datos que figuran en la tabla 1 fueron ajus-
minucin de actividad sino que representa la op- tados a los modelos dinmicos que involucran los
cin ms viable para el empleo de lipasas aportes antes mencionados. Por ejemplo, la ecua-
inmovilizadas en procesos industriales (Balcao et cin diferencial que describe la evolucin de la con-
al., 1996; Fernandez-Lorente et al., 2006, Hilal et centracin de steres libres y teniendo en cuenta el
al., 2006). modelo cintico A, quedara expresada de la si-
Por otro lado, el empleo de una solucin enzi- guiente manera:
mtica al 50%, permite la retencin de una canti-
d [G ]
dad de agua por parte de la membrana de polietile-  A1 [G ]ekdt (8)
no suficiente para favorecer la formacin de una dt
interfase agua aceite en el medio de reaccin. Es- Ecuaciones similares se pueden obtener para los
tudios enzimolgicos previos demuestran que las modelos B y C.
lipasas presentan una estructura peculiar en torno A continuacin se realizaron los anlisis de re-
al sitio activo, conocida como tapadera. En siste- gresin no lineal para obtener los parmetros aso-
mas homogneos se encuentra en una conforma- ciados a cada modelo. En todos los casos se aplic
cin cerrada, con el centro activo bloqueado, sin el algoritmo de Levemberg-Marquardt.
embargo en interface la tapadera se abre, provo- En relacin a los mtodos de estimacin, exis-
cando un cambio total en la superficie del centro ten varias alternativas:
activo, favoreciendo la interaccin entre la enzima
y el sustrato. (Arroyo et al., 1993; Svendsen, 2000; a) Linealizar la ecuacin de partida, si es posi-
Fernandez-Lorente et al., 2006; Illanes et al., ble, y luego aplicar un mtodo de regresin
2008). Teniendo en cuenta que las grasas y acei- lineal.
tes constituyen el sustrato natural en la reaccin de b) Aplicar un mtodo de regresin no lineal di-
hidrlisis, este aspecto es de vital importancia, ya recto, en caso que se determinen experi-
que simplifica el proceso de up stream y disminuye mentalmente las velocidades.
los riesgos de contaminacin durante el transcurso c) Integrar analticamente la ecuacin diferen-
de la reaccin. cial en caso que se determinen experimen-
talmente las concentraciones y luego efec-
tuar regresin lineal o no lineal.
3.2. Modelado del proceso d) Integrar numricamente la ecuacin diferen-
cial en caso que se determinen experimen-
En primer lugar y a los efectos de simplificar los talmente las concentraciones y luego efec-
modelos de las ecuaciones 1, 2, y 3, se ha llevado a tuar regresin lineal o no lineal. (Torres et
cabo una reparametrizacin y normalizacin de los al., 2007; Al-Zuhair 2008; Chew et al., 2008).
parmetros (Malcata et al., 1992a, Malcata et al., Estas expresiones integradas para el mode-
1992 b, Malcata et al., 1992 c). La normalizacin es lo A, se exponen en la Tabla 2.
necesaria para evitar comportamiento numrico e) Determinar parmetros en forma indepen-
inestable y para reducir el nmero total de parme- diente, utilizando diferentes rangos de datos
tros. Los resultados de esta serie de operaciones para cada uno (los rangos de mayor sensibi-
matemticas son las siguientes formas simplificadas lidad).
de las expresiones de velocidad para la reaccin de
hidrlisis para los tres modelos (A, B, C):
Tabla 1
Modelo A Determinacin experimental de la produccin
de cidos grasos libres en ensayos discontinuos
rv,hid,A  A,1 [G] (5) utilizando la enzima Lipasa B de C. antartica
inmovilizada en polietileno
Modelo B
Concentracin de cidos
B,1 [G] Tiempo [min] grasos [%v/v]
rv,hid,B  (6)
1 + B,2 [G]
0 0.073
Modelo C 3 0.869
6 0.989
C,1 [G] 9 1.819
rv,hid,C  (7)
1 + C,2 [G] + C,3 [G]2 12 2.045
Estos modelos, en combinacin con la cintica 15 2.102
de inactivacin de la enzima y los balances de ma- 18 2.161
sa sern aplicados para obtener una estimacin de 21 2.363
los parmetros involucrados. 24 2.447

GRASAS Y ACEITES, 61 (2), ABRIL-JUNIO, 175-182, 2010, ISSN: 0017-3495, DOI: 10.3989/gya.087609 179
SEBASTIN ODDONE, MARIANO GRASSELLI Y ANAH CUELLAS

Si bien la alternativa (a) emplea algoritmos de Tabla 4


regresin que son muy simples en esencia, la Valores de los parmetros del modelo A
aproximacin lineal implica incertidumbres en la
Valor del parmetro
estimacin asociadas a la propagacin de errores
(con intervalo de confianza
experimentales, dando lugar a resultados errneos.
Parmetro del 95%)
Para mostrar este efecto, se realizaron simula-
ciones de regresin con varianza conocida, dando A,1[1/s] 0.1770 0.0475
como resultado un error muy superior en la alterna- kd[1/s] 6.7105 2.7525
tiva lineal en contrapartida a la alternativa (d), no li-
neal con integracin numrica (Tabla 3). Por tal
motivo, la alternativa de regresin (d) fue la em- gura 3 se puede observa el ajuste del modelo a los
pleada en este trabajo. datos experimentales.
Realizando un anlisis sobre las condiciones de Estos resultados permiten tomar decisiones so-
inicializacin del mtodo, se pudo observar que los bre las variables operativas, incluyendo caudales
modelos B y C (ecuaciones 2 y 3) son fuertemente de entrada y salida, para lograr una productividad
dependientes de la inicializacin. Esto significa que ptima en sistemas batch y continuos.
si se varan los valores de inicio de bsqueda del Una vez que fueron obtenidos los parmetros
algoritmo de optimizacin, los parmetros encon- utilizando alguno de los mtodos planteados, se re-
trados al final del procedimiento son distintos. Este emplaza su valor en la ecuacin para el reactor
comportamiento se debe que al utilizar los modelos continuo y resolviendo la ecuacin diferencial, (en
B y C, el sistema presenta mayor cantidad de par- este caso se utiliz el mtodo de Runge Kutta de
metros que grados de libertad. Por lo tanto, estos alto orden), se obtiene la variacin del sustrato o
modelos no resultan adecuados para la obtencin producto en el tiempo (Torres et al., 2007; Al-Zu-
de las constantes cinticas de la reaccin. hair, 2008; Chew et al., 2008).
Por otro lado, en el modelo A (ecuacin 1), el Las Figuras 4 y 5, representan respectivamente
algoritmo de clculo siempre converge en el mismo las variaciones del sustrato y el producto en fun-
valor del parmetro, independientemente del valor cin del tiempo. La integracin de las curvas de es-
de inicio de optimizacin. Por lo tanto, los modelos tos grficos suministra informacin sobre: Rendi-
B y C fueron descartados y solo se utiliz el modelo miento, Productividad y Tiempo de vida medio del
A en el anlisis. Los valores de los parmetros pa- reactor. En el sistema de reaccin estudiado, pue-
ra el modelo A se muestran en la Tabla 4 y en la fi- de observarse que el tiempo de vida medio del
reactor aumenta a medida que aumenta el tiempo
de residencia. Por otro lado, la produccin de ci-
Tabla 2 dos grasos decrece a medida que se acorta el
Expresiones integradas para el modelo A en tiempo de residencia del sustrato en el biorreactor.
operacin Batch Definiendo al tiempo de residencia, como el co-
ciente entre el volumen y el flujo de entrada del
Tipo de ecuacin Expresin integrada
sustrato, podemos afirmar que la velocidad de flujo
A,1
Explcita [G]  [G0] exp ( kd
(exp(kdt)  1) ) controla el tiempo de residencia del aceite en el
reactor, lo que a su vez controla el nivel de hidrli-
1
Implcita t
kd
ln ( ( ) )
kd
A,1
ln
[G]
[G0]
 1)

Tabla 3
Comparacin de los errores de estimacin para
las alternativas a (mtodo de regresin lineal)
y d (mtodo no lineal con integracin numrica),
para dos varianzas diferentes
Varianza: 0.01
Lineal No lineal (Integr. Numrica)
a b
Error x Error param Error x Error param
6.33% 45.7% 6.68% 18.9%
Varianza: 0.001
Lineal No lineal (Integr. Numrica)
Error x Error param Error x Error param
0.72% 5.97% 0.655% 2.2% Figura 3
a. Error promedio en los datos experimentales generados Representacin grfica del ajuste del modelo A con los datos
numricamente (n = 15). experimentales obtenidos en sistemas batch con la enzima
b. Error promedio en el valor estimado de los parmetros. inmovilizada.

180 GRASAS Y ACEITES, 61 (2), ABRIL-JUNIO, 175-182, 2010, ISSN: 0017-3495, DOI: 10.3989/gya.087609
MODELADO DE UN REACTOR TUBULAR DE LIPASAS INMOVILIZADAS PARA LA PRODUCCIN

derivados constituyeron la base para el desarrollo


de un modelo matemtico cuantitativo, que puede
utilizarse para simular el proceso y optimizar tanto
las variables operativas como los aspectos econ-
micos. Los resultados de la simulacin computacio-
nal, indican que la conversin lograda por el siste-
ma, depende de distintos factores como el tiempo
de residencia del sustrato en el reactor y la activi-
dad de la lipasa inmovilizada. Los resultados obte-
nidos en este trabajo representan un aporte impor-
tante para el desarrollo de procesos enzimticos
continuos en la Industria de Grasas y Aceites.

Figura 4
Comparacion del porcentage de utilizacion del sustrato (% v/v) AGRADECIMIENTOS
en un reactor tubular de lipasas inmovilizadas en rgimen
continuo, a diferentes tiempos de residencia. A la Universidad Nacional de Quilmes, por el
apoyo econmico brindado para el desarrollo del
trabajo.

REFERENCIAS

Alonso N, Lopez-Gallego F, Betancor L, Hidalgo A, Ma-


teo C, Guisan JM. 2005. Immobilization and stabiliza-
tion of glutaryl acylase on aminated sepabeads sup-
ports by the glutaraldehyde crosslinking method. J.
Mol. Catal B: Enzym. 35, 57-61.
Al-Zuhair S, Ramachandran KB, Hasan M. 2008. Effect
of enzyme molecules covering of oil-water interfacial
area on the kinetic of oil hydrolysis. Chemical Engi-
neering Journal. 139, 540-548.
Figura 5 Al-Zuhair S, Dowaidar A, Kamal H. 2009. Dynamic mod-
Comparacion de la produccion de cidos grasos libres (% v/v) eling of biodiesel production from simulated waste co-
en un reactor tubular de lipasas inmovilizadas en rgimen oking oil using immobilized lipase. Biochemical Engi-
continuo, a diferentes tiempos de residencia. neering Journal. 44, 256-262.
Arroyo M, Moreno JM, Sinisterra JV. 1993. Immobilization,
Stabilization of lipase from Candida rugosa on different
hydroxilic supports. J. Mol. Catal. 83, 261-71.
sis. Este comportamiento ha sido evidenciado pre- Arroyo M, Moreno JM, Sinisterra JV. 1995. Alteration of
viamente en distintos trabajos cientficos que em- the activity and selectivity of immobilized lipases by
plean reactores con lipasas inmovilizadas en the effect of the amount of water in the organic medi-
regmenes continuos. (Jackson et al., 1997; Lauda- um. Journal of Molecular Catalysis A: Chemical. 97,
ni et al., 2007; H-Kittikun et al., 2008;). Estas expe- 195-201
riencias han demostrado que el tiempo de residen- Arroyo M. 1998. Inmovilizacin de enzimas: Fundamen-
cia gobierna el tiempo de contacto entre la enzima tos, Mtodos y Aplicaciones. Ars Pharmaceutica. 39,
y el sustrato. De esta forma a menor caudal, se re- 23-39.
Balco V, Paiva A, Malcata X. 1996. Bioreactors with
gistran los mximos valores de formacin del pro- immobilized lipases: State of the art. Enzyme and Mi-
ducto deseado. Por otro lado el escalado de estos crobial Technology. 18,392-416.
procesos ha registrado una productividad hasta 11 Betancor L, Lpez-Gallego F, Hidalgo A, Alonso-Morales N,
veces mayor que en escala de laboratorio. Estas Dellamora-Ortiz G, Mateo C. 2006. Different mecha-
evidencias sugieren que el reactor tubular de lipa- nisms of protein immobilization on glutaraldehyde acti-
sas inmovilizadas utilizado en el presente trabajo, vated supports: effect of support activation and immobi-
adems de posibilitar la automatizacin y el control lization conditions. Enzyme Microb Technol. 39, 877-82.
del proceso, permitira el escalado para el empleo Bradford M. 1976. A rapid and sensitive method for the
industrial. quantification of microgram quantities of protein uti-
lizing the principle of protein-dye binding. Analytical
Biochemistry. 72, 248-254.
Cleland WW. 1963. Kinetics of enzyme-catalyzed reac-
4. CONCLUSIONES tions with two or more substrates or products. Bio-
chim. Biophys. Acta. 67, 104-137.
La tcnica de inmovilizacin empleada y la elec- Cuellas A. 2005. Aspectos generales, en Estudio de un
cin del soporte, permitieron la obtencin de bioca- reactor con enzimas inmovilizadas para el procesa-
talizadores estables, que posibilitan el diseo de un miento de suero de quesera. Tesis de magster. Uni-
reactor enzimtico de fcil manejo y control. Los versidad Nacional del Litoral. Santa Fe, Argentina.
datos experimentales obtenidos a partir de estos 12-28.

GRASAS Y ACEITES, 61 (2), ABRIL-JUNIO, 175-182, 2010, ISSN: 0017-3495, DOI: 10.3989/gya.087609 181
SEBASTIN ODDONE, MARIANO GRASSELLI Y ANAH CUELLAS

Chew YH, Chua LS, Cheng KK, Sarmidi MR, Aziz RA, Malcata FX, Garcia HS, Hill CG, Amundson CH. 1992.
Lee Ch. 2008. Kinetic study on the hydrolysis of palm Hydrolysis of butteroil by immobilized lipase using a
olein using immobilized lipase. Biochemical Engi- hollow-fiber reactor: part I. Lipase adsorption studies.
neering Journal. 39, 516-520. Biotechnol Bioeng. 39, 647-657.
De Oliveira P, Alves G, de Castro H. 2002. Immobiliza- Malcata FX, Hill CG. Jr., Amundson CH. 1992. Hydroly-
tion studies and catalytic properties of microbial lipa- sis of butteroil by immobilized lipase using a hollow-
se onto styrene-divinylbenxene copolymer. Biochemi- fiber reactor. Part II. Uniresponse kinetic studies. Bio-
cal Engineering Journal. 5, 36-71. technol. Bioeng. 39, 984-1001.
Fernandez-Lorente G, Palomo J, Mateo C, Munilla R, Or- Malcata FX, Hill CG. Jr., Amundson C.H. 1992. Hydroly-
tizC, Cabrera Z, Guisn J, Fernandez-Lafuente R. sis of butteroil by immobilised lipase using a hollow-
2006. Glutaraldehyde Cross-Linking of Lipases Ad- fibre reactor. Part III. Multiresponse kinetic studies.
sorbed on Aminated Supports in the Presence of De- Biotechnol. Bioeng. 39, 1002-1012.
tergents Leads to Improved Performance. Biomacro- Maroto B, Camusso C, Zaritzky N. 2001. Estudio cintico
molecules. 7, 2610-2615. de la reaccin de hidrlisis de lecitina de soja pura en
Ferreira LM, Rocha JM, Andrade ME, Gil MH. 1998. polvo con fosfolipasa A2 inmovilizada. Grasas y Acei-
Preparation and characterization of polyethylene tes. 52, 33-37.
based graft copolymers, applications in the immobili- Mateo M, Palomo JM, Fernandez-Lorente G, Guisan JM,
zation of enzymes. Radiat. Phys. Chera. 52, 207-212. Fernandez-Lafuente R. 2007. Improvement of en-
Garcia HS, Malcata FX, Hill CG, Amundson CH. 1992. zyme activity, stability and selectivity via immobiliza-
Use of Candida rugosa lipase immobilized in a spiral tion techniques. Enzyme and Microbial Technology.
wound membrane reactor for the hydrolysis of milkfat. 40, 1451-1463.
Enzyme Microb Technol. 14, 535-45. Migneault I. (2004). Glutaraldehyde: behavior in aqueous
Gray C, Narang J, Barker S. 1990. Immobilization of li- solution, reaction with proteins, and application to en-
pase from Candida cylindraceae and its use in the zyme crosslinking. Biotechniques. 37, 790-802.
synthesis of menthol esters by transesterification. En- Moreno Safra N, Perea Villamil A. 2008. Produccin de
zyme and Microbial Technology. 12, 800-7. lpidos estructurados por transesterificacin enzimti-
H-Kittikun A, Kaewthong W, Cheirsilp B. 2008. Continu- ca del aceite de soja y aceite de palmiste en reactor
ous production of monoacylglycerols from palm olein de lecho empacado. Grasas y Aceites. 59, 337-345.
in packed-bed reactor with immobilized lipase PS. Nardini M, Lang D, Liebeton K, Jaeger K, Dijkstra B.
Biochemical Engineering Journal. 40, 116-120. 2000. Crystal structure of Pseudomonas aeruginosa
Hilal N, Kochkodan V, Nigmatullin R, Goncharuk V, Al- lipase in the open conformation. The prototype for fa-
Khatib. 2006. Lipase-immobilized biocatalytic mem- mily L1 of bacterial lipases. Journal of Biological
branes for enzymatic esterification: Comparison of Chemistry. 275, 31219-31225.
various approaches to membrane preparation. Jour- Paiva A, Balcao V, Malcata FX. 2000. Kinetics and mech-
nal of Membrane Science. 268, 198-207 anisms of reactions catalyzed by immobilized lipases.
Illanes A, lvarez L, lvaro G. 2008. Chemoselective Enzyme and Microbial Technology. 27, 187-204
transesterification of wood steroles by lipases. Rev. Ramachandra M, Bhat J, y Muniswaran P. 2002. Hydro-
Colomb. Biotecnol. 10, 17-35. lysis of Oils by Using Immobilized Lipase Enzyme: A
Jaeger K-E, Reetz MT. 1998. Microbial lipases form ver- Review. Biotechnol. Bioprocess Eng. 7, 57-66.
satile tools for biotechnology. Trends Biotechnol. 16, Segel IH. 1993. Enzyme kinetics - behavior and analysis
396-403. of rapid equilibrium and steady-state enzyme sys-
Jaeger K-E, Eggert T. 2002. Lipases for biotechnology. tems. New York, U.S.A. Wiley.
Protein Technologies and Commercial Enzymes. Shamel M, Ramachandran KB, Hasan M, Al-Zuhair S.
390-397. 2007. Hydrolysis of palm and olive oils by immobi-
Jackson MA, King JW. 1997. Lipase-catalyzed glyceroly- lized lipase using hollow fiber reactor. Biochemical
sis of soybean oil in supercritical carbon dioxide. J. Engineering Journal. 34, 228-235.
Am. Oil Chem. Soc. 74, 103-106. Shmid A, Dordick JS, Hauer B, Kiener A, Wubbolts M,
Laudani ChG, Habulin M, Kneza Z, Della Porta, Rever- Witholt B. 2001. Industrial biocatalysis today and to-
chon E. 2007. Immobilized lipase mediated long- morrow. Nature 409, 258-268.
chain fatty acid esterification in dense carbon dioxide: Svendsen A. 2000. Lipase protein engineering. Biochim
bench-scale packed-bed reactor study. Journal of Su- Biophys Act. 1543, 223-238.
percritical Fluids. 41, 74-81 Torres CF, Moeljadi M, Hill Jr. CG. 2003. Lipase-cata-
Lowry R, Tinsley I. 1976. Rapid colorimetric determina- lyzed ethanolysis of fish oils: multi-response kinetics.
tion of free fatty acids. Journal of the American Oils Biotechnol. Bioeng. 83, 274-281.
Chemists Society. 53, 470-472. Torres CF, Tor AM, Fornari T, Seorns JF, Reglero G.
Malcata FX, Reyes HR, Garcia HS, Hill CG, Amundson 2007. Ethanolysis of a waste material from olive oil
CH. 1990. Immobilized Lipase Reactors for Modifica- distillation catalyzed by three different commercial li-
tion of Fats and Oils- A Review. J. Am. Oil Chem. pases: A kinetic study. Biochemical Engineering Jour-
Soc. 67, 890-910. nal. 34, 165-171.
Malcata FX, Reyes H, Garca H, Hill CG. Jr., Amundson
CH. 1992. Kinetics and mechanisms of reactions cat-
alysed by immobilized lipases. Enzyme and Microbial Recibido: 4/8/09
Technology. 14, 426-446 Aceptado: 29/10/09

182 GRASAS Y ACEITES, 61 (2), ABRIL-JUNIO, 175-182, 2010, ISSN: 0017-3495, DOI: 10.3989/gya.087609

All in-text references underlined in blue are linked to publications on ResearchGate, letting you access and read them immediately.