IDENTIFICACIN Y RECUENTO

DE COLONIAS Y TCNICAS DE
ANLISIS DE AGUA
INTRODUCCIN:
Segn la norma nacional para agua potable la tcnica debe ser
determinada por unidades formadoras de colonias UFC.
La unidad formadora de colonias (abreviadamente, UFC) es una
unidad de medida empleada en la cuantificacin de
microorganismos, es decir, el nmero de bacterias o clulas fngicas
viables en una muestra semislida slida. La viabilidad se define
como la habilidad de multiplicarse por fisin binaria en condiciones
controladas. Por lo tanto, en el recuento de UFC de un cultivo de
microorganismos solo se consideran tanto clulas vivas como
muertas. Dentro de un cultivo de clulas, una colonia debe presentar
un crecimiento significativo, aunque en el recuento de colonias no
es posible saber si una colonia surgi de una o varias clulas.
Las UFC son el nmero mnimo de clulas separables sobre la
superficie o dentro de un medio de agar semislido, que da lugar al
desarrollo de una colonia visible del orden de decenas de millones
de clulas descendientes.
Las UFC se miden de unidades de volumen (UFC/ml).
La tcnica se basa en contar las unidades formadoras de
colonias o UFC generados en medio de cultivos slidos despus de
un cierto tiempo de incubacin a la temperatura adecuada.
OBJETIVOS:
Determinar la concentracin de bacterias viables
(entendidas como unidades formadoras de colonias en
una muestra.
 MATERIALES Y Agar MacConkey
SUSTANCIAS QUMICAS:
Tubos de ensayo

Algodn
Cajas de Petri con agar

Asa y aguja inocular Masking tape

Agar Endo Muestra mixta

 MARCO TERICO:

MTODO RECUENTO EN PLACA

Es un mtodo de recuento de clulas viables ( Clula viable es aquella
capaz de dividirse y originar descendencia). Se encuentran las clulas de
una muestra que son capaces de formar colonias cuando se inoculan en
un medio de cultivo slido adecuado.

Hay dos modalidades de siembra:

1. En superficie (siembra por extensin): Un volumen de la muestra

(0,1 ml) se coloca sobre la superficie de la placa que contiene el
medio y se extiende con ayuda de un asa de extensin
2. En profundidad (siembra por vertido en placa): La muestra se
mezcla con el medio de cultivo y se vierte en la placa estril.
Permite inocular volmenes mayores de la muestra.
En la mayoria de los casos antes de realizar la siembra las muestras tienen que
diluirse (diluciones seriadas)
Una vez inoculadas, las placas se incuben a la temperatura adecuada y
cuando aparecen, se cuentan las colonias.
Normalmente, una clula origina una colonia, pero con el fin de evitar
errores a la hora de dar el resultado se suele hablar de Unidades Formadoras
de Colonias (UFC), en lugar de clulas.
El resultado se expresa como UFC/ml
PROCEDIMIENTO:
1. Determinar la muestra a ser analizada
2. Preparamos 6 tubos con agua destilada cada uno con 9 ml.
3. Inoculamos 1ml de muestra en el primer tubo de ensayo y agitamos

4. Inoculamos 1ml de muestra en el segundo tubo tomando la muestra del

primer tubo y asi sucesivamente hasta el tubo nmero 6

5. En este procedimiento se realizan diluciones seriadas de la muestra y se

inoculan pequeos volmenes conocidos (1ml), de cada una de las diluciones,
en placas de Petri conteniendo un medio slido adecuado estril y se extiende
con una varilla de vidrio ( mtodo de siembra en placa por extensin o
diseminacin) o en placas de Petri estriles a las cuales se les adiciona un
medio slido fundido y se mezclan bien (mtodo de siembra por
incorporacin o de vertido en placa).
6. Luego se incuban en las condiciones ptimas hasta que aparezcan las
colonias correspondientes.

7. Usualmente el numero de clulas viables se determina como unidades

formadoras de colonias (UFC). Para realizar el recuento se seleccionan las
placas de la que contengan entre 25 y 250 colonias.
 FILTRACIN DE MEMBRANA
Para la deteccin de coliformes totales y coliformes fecales (E.coli) es
utilizado el mtodo de filtracin por membrana, el cual es un mtodo
altamente reproducible, puede usarse para analizar volmenes de
muestra relativamente grande y se obtienen resultados en menor tiempo
que con el NMP. Sin embargo, no puede aplicarse a cualquier tipo de
muestra y tiene sus limitaciones tambin se encuentra entre los mtodos
standards.
Fundamento del mtodo filtracin por membrana:

La muestra de agua se hace pasar mediante vaco por un filtro de

celulosa de 0.45 micras de tamao de poro, para que queden retenidas
en l, las bacterias de tipo coliformes y las mesofilas. El filtro es colocado
en un medio de cultivo especfico para lo que se desea determinar en la
muestra (coliformes totales, coliformes fecales y microorganismos
mesfilos), incubando a 35 grados centgrados ms o menos dos grados
durante 18 a 20 horas.

Caractersticas del filtro de membrana:

Se debe utilizar filtro de membrana con un dimetro de poro que

permita una completa retencin de las bacterias coliformes. Se debe
tener en cuenta que estos filtros estn libres de qumicos susceptibles a
inhibir el crecimiento y desarrollo bacteriano, que posean una velocidad
de filtracin satisfactoria.

Ventajas y desventajas del mtodo de filtracin por membrana:

El mtodo de filtracin por membrana es un mtodo gil y poco

dispendioso. La lectura de resultados se da en un mejor tiempo (24
horas) a comparacin del mtodo NMP, adems se puede utilizar en
pruebas de campo, empleando accesorios adecuados, el anlisis se
dificulta en muestras de aguas muy turbias o con abundante carga
bacteriana. Este inconveniente es posible remediarlo, haciendo
diluciones de la muestra o haciendo inculos muy pequeos de acuerdo
con el tipo de muestra a analizar
PROCEDIMIENTO:
1. Colocar una membrana filtrante estril, bajo condiciones aspticas,
sobre el centro del portafiltro, usando pinzas estriles.

2. Ensamblar el equipo, colocando el dispositivo de filtracin y

asegurando con una pinza.

3. Verter 100 ml de la muestra de agua, en el portafiltro y proceder a

filtrar.
4. Remover la parte superior del portafiltro, y con una pinza estril
transferir la membrana a la placa de Petri que contiene el medio de
cultivo correspondiente al microorganismo que se va a identificar:
Coliformes en agar endo.

5. Al colocar la membrana, evitar la formacin de burbujas entre sta y el

medio de cultivo.
6. Contar las colonias en las membrana. Expresar los resultados como
unidades formadoras de colonias (UFC) por ml a por 100 ml de agua,
considerando el volumen filtrado y el factor de dilucin.

Se contabilizo 134 colonias

 CUESTIONARIO

En qu tipo de agua se utiliza para su anlisis la tcnica de

filtro de membrana en el Per?

Este mtodo se utiliza para medir la calidad sanitaria

del agua potable.
Se aplica a agua clorada o agua naturales de muy baja
contaminacin y sin turbidez.

Segn el anlisis realizado, mencione si el agua de

Pasco es considerado potable y por qu?
 CONCLUSIN

En esta prctica aprendimos a

identificar las colonias a travs de
recuento de colonias y filtracin por
membrana.
Determinamos la concentracin de
bacterias viables (entendidas como
unidades formadoras de colonias) en
una muestra.
Y as aprendimos a reconocer cuando
es agua potable y cuando no. Ya que
es vital saber eso ya que el recurso que
ms utilizamos nosotros es el agua.